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面粉中过氧化苯甲酰的HPLC测定法

面粉中过氧化苯甲酰的H PL C测定法黄树梁

中图分类号:R155.5+1文献标识码:B文章编号:1007-0931(2010)11-0095—02

过氧化苯甲酰(B PO)具有面粉增白和促进后

熟的作用,由其转化的苯甲酸具有防腐抑菌、延长

产品保质期的作用,因此,B PO成为面粉中普遍

使用的食品添加剂而被诸多国家许可。合理的使用

能使面粉及其制品外观宜人、口感优良,从而提高

商品的价值和市场竞争力,但过度添加B PO会危

及消费者的身体健康。我国规定B PO在面粉中的

添加限量为0.069/kg【11。测定B PO的方法很多,

文献报道有气相色谱法心。】、液相色谱法L4】、碘量

法H】、紫外分光光度法哺】、毛细管电泳法"1和化

学发光法L8J。笔者发现高效液相色谱法(G B/

T22325—2008)测定B PO时,由于使用碘化钾作

为还原剂将B PO还原成苯甲酸,而碘化钾自身被

氧化成碘,造成色谱基线信号大大提高,色谱峰严

重拖尾,甚者会覆盖待测组分苯甲酸的出峰,碘对

检测器也有很强的腐蚀性。G B/T18415—2001为

B PO的气相色谱测定方法。笔者试验用G B/

T18415—2001前处理方法,将B PO在酸性条件下

被还原成苯甲酸,挥干石油醚后用甲醇定容,高效

液相色谱法(H PL C)测定。

材料与方法

1仪器W at er s高效液相色谱仪,包括515型泵、

486紫外吸收检测器、六通阀和色谱处理工作站。

2试剂甲醇为H PLC级,醋酸铵为G R级,两

溶剂使用前用0.45Ixm滤膜过滤。冰乙酸、石油

醚、过氧化苯甲酰纯品。

3色谱试验条件流动相:0.02m oL/L醋酸铵+

甲醇(92+8,V/V);流速:0.8m L/m i n,色谱

柱:Sym m et r y C18,3.9×150m m;柱温:室温;

检测波长:230nm;进样量:10山。

4样品处理与分析准确称取试样5.009,移入

作者单位:余姚市疾病预防控制中心,浙江余姚95

具塞三角瓶中,加入30m L酸性石油醚(在500m L 石油醚中加入15m L冰乙酸),用手用力旋荡使试样分散,于30℃下恒温放置,每间隔15m i n旋荡一次。4h后样品溶液经滤纸过滤,滤液收集于瓷蒸发皿中。分数次用酸性石油醚洗涤三角瓶中残余试样。将蒸发皿中的收集液置65℃水浴挥发至干,冷却后用甲醇定容至5m L,过0.45¨m滤膜,作为试样的测定液待测。

准确称取0.10009过氧化苯甲酰纯品,用甲醇溶解并定容至100m L,制得浓度为1m g/m L过氧化苯甲酰标准浓液。再用甲醇稀释成浓度为0.0、10.0、20.0、40.0、60.0、100.0、200.0I xg/m L标准系列溶液。分别称取7份5.009不含过氧化苯甲酰和苯甲酸的面粉试样于7只具塞三角瓶中,分别准确加入上述过氧化苯甲酰标准系列溶液5.00m L,余下的操作同样品分析时的“加入30m L酸性石油醚”一样。

依次取不同浓度的标准液10.O¨L,注入液相色谱仪,以峰面积为纵坐标,以过氧化苯甲酰浓度为横坐标,绘制标准曲线。样品浓度可根据样品溶液进色谱仪后所得峰面积由标准曲线求得。若样品浓度超出标准曲线范围可适当稀释后进样。

结果与讨论

1色谱分离过氧化苯甲酰在酸陛介质中被还原成苯甲酸,色谱峰分离的实际上是苯甲酸组分,过氧化苯甲酰(苯甲酸)保留时间5.917m i n,见图1。

标准图谱(100.0斗g/m L )

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样品图谱

图1标准和样品图谱

2流动相选择流动相采用醋酸铵一甲醇体系。选择合适的比例,能很好地分离待测组分,避免使用了毒性相对较高的乙腈作为流动相组成。在醋酸铵一甲醇体系里,改变甲醇在流动相中的比例,从5%逐升至20%进行试验。发现随着甲醇在流动相中比例提高,组分保留时间缩短。当甲醇在流动相中比例为8%时,组分分离效果好且保留时间理想。故本文选择流动相为0.02m ol/L醋酸铵+甲醇(92+8,v/v),见图2。

名7

兽6

善5

霪4

3

2

1

5812151720

甲醇在流动相中比例(%)

图2甲醇比例与保留时间关系图

3波长选择参考G B/T5009.29—2003第2法,选择230nm作为检测波长测定过氧化苯甲酰(苯甲酸),具有较高灵敏度。

4比较试验用本法和G B/T18415—2001气相色谱法同时对市售的10种面粉进行B PO含量测定,经t检验,两方法差异无统计学意义(t=2,101,P>0.05),见表1。

表1两种方法测定的结果比较(g/kg)

样品号12345678910本法0.0370.020O.0570.0180.044O.0000.0380.0400.0160.051国标法O.0420.0230.0520.022O.041O.0000.032O.0390.021O.055

5线性范围和检出限在本方法选定的色谱条件下,过氧化苯甲酰在10—20%g/m L范围内具有良好的线性关系,相关系数r=0.9997。按本方法进行样品处理,当样品中被测组分峰讯号为基线噪声3倍时为仪器检出限,仪器检出限为0.3t t g/'m L。经计算,本方法的方法检出限为0.3m g/kg。

6加标回收试验和精密度试验取一已知含量的样品,加入标准,按本法重复6次测定,计算平均加标回收率及R S D,见表2。

表2方法加标回收率(g/kg,13=6)

B P O在酸性条件下被还原成苯甲酸,我们可以用苯甲酸标准溶液来代替B P O标准溶液,结果表示时再将其换算过来,换算系数为0.992。试验证明这样操作更简便,结果也符合要求。G B/TI8415—2001和G B/T22325—2008中均采用这种方法。本法采用G B/T18415—2001前处理面粉样品的方法,后作恰当的变动将原法中气相色谱法改为液相色谱法,经t检验,两者差异无统计学意义,既克服了G B/T22325—2008高效液相色谱法测定B PO时,由于碘化钾被氧化成碘而造成的色谱峰严重拖尾,覆盖住待测组分的出峰的缺陷,又为B P O的测定增加了一种简便可行的液相色谱方法。

参考文献

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(收稿13期:2010-05—14)

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