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复方光明胶囊对大鼠视网膜光损伤中Bax_bcl_2影响的实验研究

复方光明胶囊对大鼠视网膜光损伤中Bax_bcl_2影响的实验研究
复方光明胶囊对大鼠视网膜光损伤中Bax_bcl_2影响的实验研究

Journal of Kunming Medical University 昆明医科大学学报2012,(12):15~17

复方光明胶囊对大鼠视网膜光损伤中Bax、bcl-2影响的实验研究

彭华1),马珊1),王维绮2),卜文超1),董玉1),马素红1

)(1)云南省中医医院,云南昆明650021;2)昆明医科大学附属口腔医院,云南昆明650031)

[摘要]目的观察复方光明胶囊对实验性大鼠视网膜光损伤后Bax、bcl-2的影响.方法SD大鼠30只

(60只眼),随机分为高、中、低剂量组,模型组和正常组,每组6只(12只眼).造模前7d给药,连续灌胃2

周.除正常组以外各组实验用大鼠距角膜(150±3)mm照射,使大鼠眼在接受手术显微镜水平位时照度为(22000±

1000)Lux,30min的持续光照射.光照后继续给药1周,观察各组视网膜感光细胞中Bax、bcl-2表达差异.结

果模型组较正常组bcl-2表达减弱、Bax表达增强(P<0.05),高、中、低剂量组较模型组bcl-2表达增强、

Bax表达减弱(P<0.05).结论

手术显微镜视网膜光损伤动物模型造模成功,复方光明胶囊各剂量组对视网膜光损伤后有保护作用,其中高、中剂量组有较为明显的优势.

[关键词]复方光明胶囊;视网膜光损伤;Bax;bcl-2

[中图分类号]R961[文献标识码]A[文章编号]1003-4706(2012)12-0015-04

EffectofCompoundLightCapsuleontheExpressionofBax

andbcl-2inRetinaofRatswithRetinalLightInjury

PENGHua1),MAShan1),WANGWei-qi2),PUWen-chao1),DONGYu1),MASu-hong1

)(1)Yunnan Provincal Hospital of Traditional Chinese Medicine ,Kunming Yunnnan 650032;2)The Affiliated Stomatology Hospital of Kunming Medical University ,Kunming Yunnan 650031,China )

[Abstract ]ObjectiveToobservetheeffectofCompoundLightCapsuleontheexpressionofBax,bcl-2inretinaofratswithretinallightinjury.Methods30SDrats(60eyes)weredividedintohighdosegroup,middledosegroup,lowdosegroup,shamgroup,andnormalgroupinrandom,6SDrats(12eyes)ineachgroup.RatsweregivenintragastricadministrationofCompoundLightCapsule7daysbeforemodelingfor2weeks.Experimentalratsineachgroupwereexposedtothelight150±3mmawayfromthecornerexceptthenormalgroup.Theilluminationofeyesinthehorizontalpositionofoperationmicroscopewas22000±1000lux,andlightexposurelastedfor30minutes.RatsweregivenCompoundLightCapsuleforanother1weekafterexposuetothelight,thentheexpressionofBaxandbcl-2inratsineachgroupwereobserved.ResultsComparedwiththenormalgroup,

theexpressionlevelsofbcl-2decreasedandtheexpressionlevelsofBaxincreasedinshamgroup(

P<0.05).Theexpressionlevelsofbcl-2increasedandtheexpressionlevelsofBaxdecreasedinhigh,mediumandlow-dosegroup(P<<0.05).ConclusionsTheestablishmentoftheretinallightinjurymodelissuccessfulbytheuseoftheoperatingmicroscope.EachdoseofCompoundLightCapsulesshowsaprotectiveeffectonretinallightinjury,andhighdosehasthebestefficacy.

[Ke y words ]Compoundlightcapsule;Retinallightinjury;Bax;bcl-2

[基金项目]云南省科技厅自然科学研究基金资助项目(2009ZC153M);云南省教育厅科研基金资助项目(09Y0237)[作者简介]彭华(1967~),男,云南楚雄市人,医学学士,主任医师,主要从事眼科临床工作.随着眼科光学诊疗器械的日益增多,过强的

光源导致的视网膜损伤不断见诸报道.认识其发

病机制和防治方法,对于减少医源性光损伤是大有益处的.云南省中医医院复方光明胶囊具有活血化瘀、软坚散结、通络明目作用,本实验拟通过实验性光损伤动物模型的建立,给予该药物进

CN 53-1221/R

[初一生物]_实验报告:探究光对鼠妇分布的影响

实验报告:探究光对鼠妇分布的影响 通过探究光对鼠妇分布的影响,体会环境因素对生物生命活动的影响,掌握探究问题的一般方法。 一、提出问题:鼠妇通常生活在花盆下、石块下等阴暗环境中,光对它们的分布有影响吗? 二、作出假设:鼠妇适于生活在阴暗的环境中,光会影响鼠妇的分布。 三、制定计划: 1、原理:鼠妇随机分布在湿度、温度等条件都相同的环境中,一边有光照一边处在黑暗中,光照侧和黑暗机时即为对照,通过对照、看光是如何影响鼠妇分布的。 2、材料用具:每个小组10只鼠妇,湿士、花铲、自制纸盒、黑纸等。 3、实验步骤:A、在自制硬纸盒(长30厘米、宽15厘米、高5厘米)内放上一层湿土,以中线为界,一侧用黑纸包好,形成黑暗环境。B、将10只鼠妇放入以上装置,两侧的中央放同样数目的鼠妇,(或将10只鼠妇全放于装置的中央)静置2分钟。C、每分钟统计一次明亮处和阴暗处的鼠妇数目,统计10次。注意!实验方案中只设一个变量因素(如:是否有光照),每个变量因素应设对照组。 四、实施计划:按照上述实验方案做实验。实验过程中要仔细观察,认真记录。 六:表达和交流:把自己的实验结果与其他组的同学交流,看是否结论一致。思考与讨论: 1、这个实验中有哪些因素对鼠妇有影响?你如保证实验结果的不同只能是由你确定的变量(光)引起的?[答:除光以外,湿度、温度、土壤环境等都影响着鼠妇分布。为保证实验结果的准确性,在实验组与对照组中,除设置阴暗和明亮对照以外,两组的其他条件均相同。] 2、为什么要用10只鼠妇做实验?只用1只鼠妇做实验行吗?[答:用10只做可减少误差,而用一只做时由于偶然因素增加,误差增大。] 3、为什么要计算各组的平均值?[答:减小误差,提高实验结果的准确性。]

大鼠视网膜神经细胞的原代培养(译文)

大鼠视网膜神经细胞的原代培养 摘要 目的:在前人建立的方法上优化SD 大鼠视网膜神经细胞体外培养的技术和方法,为后续研究提供实验基础。 方法:使用胰酶消化法分离新生1 ~ 3d SD 大鼠视网膜神经细胞,以DMEM/F12 为培养基体外培养,免疫组织化学染色的方法进行鉴定。 结果:观察光镜下培养的细胞贴壁生长,部分细胞伸出突起,且有些突起相互连接。免疫细胞化学染色显示,培养的细胞大多数抗神经元特异性烯醇化酶(NSE) 抗体反应阳性。结论:视网膜神经细胞体外培养成功为进一步进行视网膜疾病的研究创造了条件。 关键词:细胞培养; 视网膜神经元; 胰蛋白酶消化法; 神经元特异性烯醇化酶 引言 一个世纪前,从青蛙身上剥离的神经管片段仍能在生理液中维持几天的活性,使得越来越多的神经纤维得到的实时观测以来,体外培养技术已经广泛的应用于生物技术领域。【1】在没有了完整动物的复杂性,体外培养的方法可以大大提高对视网膜的基本属性和环境的适应性的了解。在体外系统中,这个界定的实验条件可以很容易设定和维持。这提供了一个稳定的辅助药理学和分子操纵的平衡,同时保持了完整的组织复杂表型特征。在这里我们根据一些成功方法报告探讨一下大鼠视网膜神经细胞的原代培养技术。【2-3】 材料与方法 动物:实验中使用的所有SD大鼠幼崽均是从青岛实验动物中心根据眼科和视觉研究中动物的ARVO声明,同时保留了出生后1-3SD大鼠的相对温度和湿度条件下获得的SD大鼠幼崽 材料:DMEM/F12培养液和胎牛血清购自Gibco公司(美国),兔抗大鼠神经元特异性烯醇化酶(NSE)单克隆抗体,兔抗大鼠神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)多克隆抗体,羊抗兔IgG 和HRP-链霉亲和素购自中山Goldbridge生物技术有限公司(北京,中国)。所有其他试剂均为Sigma公司(圣路易斯,密苏里州,美国)。 方法: 预涂层的聚-D-赖氨酸组织培养皿为了使视网膜神经细胞,紧贴组织培养皿,聚-D-赖氨酸添加到被预先放置盖玻片的24孔板的孔中。10分钟后,去除聚-D-赖氨酸,凝固聚-D-赖氨酸孔用无菌蒸馏水冲洗三次,在37℃培养箱隔夜干燥,然后立即使用该板块。 视网膜剥离 1-3天后处死前被麻醉的SD大鼠被转移到Hank,s平衡盐溶液。在无菌条件的光学显微镜下,用注射器的针头刺穿角膜的边缘来打开SD大鼠的每只眼睛。然后用剪刀和镊子剪开针口,小心取出眼睛前部的眼角膜。移除眼球和大部分晶状体后,剩下的两个松散的联结组织和视网膜色素上皮细胞层,轻轻地剥离开来,用镊子轻轻捏开,从而完全取出视网膜视神经组织。 视网膜的分离和培养在37℃下将视网膜放在0.125%的胰蛋白酶溶液中消化15分钟。消化时间结束后,去除消化液,将组织移入Dulbecco's改良Eagle培养基:含10%胎牛血清及营养成分混合的F-12(DMEM/F12培养液),过400目细胞筛,1500rpm离心5分钟,弃上清,将细胞悬浮在含10%胎牛血清的DMEM/F12培养液中研磨。用血球计数板检查细胞密度,并把细胞接种在细胞密度为1.0×106个/cm2的涂有聚-D-赖氨酸(0.1mg/ml)的24孔板中,放在37℃,CO2浓度为5%的加湿培养箱中培养。培养的视网膜细胞也可能生长于盖玻片内的这些小孔之中。在接种细胞后24小时,将5-溴-2'-脱氧尿苷(20μg /ml)加入培养基抑制非神经细胞。

缺氧缺血性脑损伤(HIE)小鼠模型详细步骤及说明

缺氧缺血性脑损伤(HIE)小鼠模型详细步骤及说明原型物种人 来源低氧导致的脑损伤 模式动物品系SPF级Balb/c 小鼠,雄性,6~8周 实验分组随机分组:对照组,模型组,阳性药物组和药物组,每组15只实验周期4~6w 建模方法将实验动物置于可视恒压舱内,并持续注入流量为5L/min的低氧气体(8%O2及92%N2),每次90min。每周干预1~3次,干预周期为3周。 应用疾病模型 模型评价 Morris水迷宫实验所有组别,于12周龄时,进行Morris水迷宫试验,试验分为定位航行实验和空间探索实验。 1. 定位航行实验:小鼠连续接受5天的训练,每天4次,每次时间间隔 30min,记录下小鼠从4个入水点和入水并找到平台所需要的时间,即逃避潜伏期。4次潜伏期的平均成绩作为当日的最终结果进入到最后统计。 2. 空间探索实验:实验的第6天,撤去平台,从距离平台的最远端入水后,将小鼠放入水中,记录下30s内小鼠的游泳轨迹,并观察分析小鼠在目标象限的停留时间,以及它的穿越平台的次数。

行为学结束后,将各组小鼠摘取全脑,冰上剥去小脑,放入4%多聚甲醛中固定,用于病理学检测。 1. 免疫组化染色 观察海马区和皮层去Aβ淀粉样斑块染色情况。光学显微镜下,计数6个视野下每组小鼠同一部位的阳性斑块数量,作统计分析。 2. Thiolain S染色 石蜡白片用Tholain S荧光染料染色,染色检测海马区以及皮层区Aβ淀粉样斑块(绿色荧光)的表达。荧光显微镜下,计数6个视野下每组小鼠同一部位的阳性斑块数量,作统计分析。 应用SPSS软件进行统计分析,计量资料以均数±标准差(x ±s)表示,采用t检验,组间比较采用单因素方差分析,P<0.05表示有显著差异。

鼠妇实验报告调查表

鼠妇实验报告调查表 篇一:探究光对鼠妇生活的影响实验报告单 探究光对鼠妇生活的影响实验报告单 学生姓名:李建元实验日期:实验目的: 本实验是要使学生了解鼠妇选择生存环境的行为,并培养学生观察、记录及设计简单实验的能力。探究过程:学习内容→教师引导→学生探究→设计意图引入提问:哪些同学找到鼠妇? 同学们都是在哪些地方找到鼠妇的?鼠妇为什么会跑呢?鼠妇怕什么学生交流鼠妇的生活环境,纷纷作答:花盆底下、草丛里等。鼠妇的生活环境变化了。 鼠妇的反应很灵敏,刚刚看到,它就很快跑走了。 学生思考交流:怕人、怕光……学生通过亲手捉鼠妇的过程切身体会鼠妇的生活环境认识到鼠妇的生活会受外界环境的影响。 探究的一般步骤:提出问题→作出假设→制定计划→实施计划→得出结论→表达交流材料用具: 鼠妇(每组10只,5人一组)、铁盘、玻璃板、纸板或书、纸盒,湿土。提出问题: 提出的问题是:光会影响鼠妇的生活吗?作出假设:根据采集鼠妇时所观察到的鼠妇的生活环境,你提出的

假设是什么?你作出这个假设的依据是什么?制定并实施计划:实验装置的设计: (一)在铁盘内放一些湿土,以横轴中线为界,一侧盖上玻璃板,另一侧盖上纸板或书,在盘内形成阴暗和明亮两种环境。湿度和温度等其他条件都相同。(二)将相同数目的鼠妇放入实验装置,静置2分钟。 (四)计算全班各组的平均值: 经计算,全班各组的平均值是:明亮处只,黑暗处只。分析结果,得出结论 你们小组的实验结果和假设一致吗?根据实验现象,你们的结论是什么?表达与交流: 各小组进行交流,说明各小组观察到现象。讨论与思考 1、这个实验中有哪些因素对鼠妇有影响?你如保证实验结果的不同只能是由你确定的变量(光)引起的? 2、为什么要用10只鼠妇做实验?只用1只鼠妇做实验行吗? 3. 为什么要计算全班各组的平均值? 4. 计算5次实验的平均值,与你的第一次的结论一致吗?评价策略 通过实验获得一个明确的实验结论,这对于初次接触探究实验的学生是非常重要的──尽管新课程提倡的探究活动“重过程”,但初次接触探究实验,“结果”也同样重要。

对于视网膜脱落的法医学鉴定

对于视网膜脱落的鉴定一例 关键词:鉴定视网膜脱离法医学 视网膜的特殊结构是临床上视网膜剥离的解剖学基础,当眼球遇到外力的打击和眼压过高时,易发生视网膜脱离。视网膜脱离在法医学鉴定中较多见,然而,在法医学界有一种被称为“临界型因果关系”特殊的视网膜脱离,在鉴定过程中并不多见,易于引起争议,给鉴定带来了一定的困难。笔者在鉴定过程中遇到1例,现就视网膜脱离成因进行分析如下。 临床资料: 患者,男,28岁,汉族。于2006年2月28日被他人徒手致伤右眼,受伤当时感右眼疼痛、畏光、流泪,眼前漂浮物,视物不清,并逐渐加重。于2006年3月2日入住某医院,经检查,该患者右眼睑皮下瘀血、水肿,睑球结膜出血,角膜擦挫伤,右眼视力为数指~10 cm,左眼视力0.09,右眼玻璃体混浊(++),眼底大量出血,未能窥见视网膜,经治疗后,见10点钟处距齿缘裂孔视网膜水肿,视乳头边界清楚,颞侧及下方视网膜波及黄斑区血管迂曲其上,黄斑病变。诊断为:(1)右眼外伤性孔源性视网膜脱离;(2)双眼高度近视;(3)双眼屈光不正。右眼经行巩膜外环扎+冷凝+垫压+放液术治疗后,病情好转出院。于2006年4月25日进行法医学鉴定,伤者自诉,自幼双眼视远物不清楚,经矫正后,能看清事物,但伤后至今,右眼已盲。临床法医学检查见:伤者右眼裂稍窄,睑球结膜充血,角膜透明,瞳孔较左眼稍大,对光反射迟钝,前房深浅可见,玻璃体混浊(++),豹纹状眼底,视网膜轻度萎缩,视网膜下新生毛细血管形成,弧形斑,黄斑病变,眼球活动自如,视力指数~80 cm,左眼视力0.09,矫正视力0.1,玻璃体轻度混浊,视网膜见轻度萎缩,双眼其他视功能明显受到影响,其余检查未见损伤异常。 讨论: 从伤者的自诉资料、伤后的眼科病历资料及临床法医学检验资料可证明:他的高度近视是一种恶性的遗传眼病,存在着严重的眼底视网膜病变,双眼底视网膜呈高度近视改变,玻璃体混浊、液化。事实证明[1],伤者双眼的病理性高度近视本身就是网脱的危险因素,即使没有发生外伤,他的视网膜也极易引起孔源性视网膜脱离并致盲。 视网膜又称眼球内膜,为眼球壁的最内层,可分为外层的色素上皮层和内层的神经细胞层,两层间有潜在的间隙,这一结构是临床上视网膜剥离的解剖学基础,遇有外力和眼内压过高时,易于剥离,即视网膜脱离;同时眼底结构复杂,供血较为特殊[2],当眼部血管受到损伤时易出现视网膜变性。 孔源性视网膜脱离是发生在视网膜裂孔形成的基础上,液化的玻璃体经裂孔进入视网膜感觉层(RPE)与色素上皮层之间,形成视网膜脱离。多见于高度近视眼和眼外伤后。眼底病理性病变、无晶状体眼和人工晶状体(LOL)眼,1眼有视网膜脱离(RD)或有家族史也是高危因素。 病理高度近视眼系指近视眼-6D以上(俗称600度),多数系常染色体隐性遗传疾病,除屈光不正外多伴有其他组织病理性改变,眼底和眼轴改变较为明显。在我国人群中患病率很高,约为1%[3]。病理性高度近视眼易于发生视网膜脱离,在外力打击下,视网膜脱

大鼠视神经切断后视网膜Muller细胞及小胶质细胞变化特点

大鼠视神经切断后视网膜Muller 细胞及小胶质细胞变化特点 唐茂丹1),陈家波1),孙永芳1),童世琼1),武丽红2),吴春云2 )(1)昆明医学院05级临床医学(眼视光学专业);2)组织胚胎学教研室,云南昆明 650031) [摘要]目的观察视网膜M uller 细胞和小胶质细胞在大鼠视神经切断后的变化特点.方法应用大鼠视 神经完全横断模型,随机分为术后1d 、3d 、7d 、14d 4个损伤组和假手术组( 每组n =5);分别用M uller 细胞和小胶质细胞特异性标记物谷氨酰胺合成酶(GS )和OX-42,进行免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结(SP )法染色,以显示视网膜M uller 细胞和小胶质细胞的变化.结果在视神经切断后,大鼠视网膜M uller 细胞GS 阳性产物立即增粗、深染,并与周围细胞紧密联系在一起,3d 达高峰,14d 明显减弱;小胶质细胞OX-42的阳性产物表达在视神经切断后7d 明显增强,14d 达高峰.结论 视神经切断后大鼠视网膜 M uller 细胞反应性增生,小胶质细胞被激活,但反应高峰晚于M uller 细胞,其作用有待进一步研究. [关键词]视神经切断;M uller 细胞;小胶质细胞;大鼠 [中图分类号]R774;R779.12[文献标识码]A [文章编号]1003-4706(2010)01-0001-05 Immunohist ochemical St udy of Muller Cells and Micr oglia Cells Responses t o Opt ic Ner ve Tr ansect ion in Rat s TANG Mao -dan 1),CHEN Jia -bo 1),SUN Yong -fang 1),TONG Shi -qiong 1) , WU Li -hong 2),WU Chun -yun 2 ) (1)2005Year of Clinical Medicine (Ophthalmology and Optometry );2)Dept.of Histology and Embryology ,Kunming Medical University ,Kunming Yunnan 650031,China ) [Abstract ]Objective To study features of the retinal M uller cells and microglia cells in rats after optic nerve transection .Methods We built the optic nerve transection model which was randomly divided into five groups :four injury groups (n =5in each group :the 1,3,7,and 14day groups post optic nerve injury ),control group (n =5).Then we observed the changes of M uller cells and glial cells which is immunohistochemically streptavidin-perosidase stainned by using anti-GS (glutamine synthetase )and anti-OX-42antibody (amoeba-like glial cell line-specific marker ).Results The expression of (GS )-immunoreaction (GS-IR )increased significantly compared to the control group .The most significant change occurred in the 3-day group .the expression of GS-IR had a descending tendency in the 7-day and 14-day groups compared to the 3-day group .And immunoreaction of 0X-42increased significantly compared to the control group ,at day 7post-axotomy were markedly expressed ,and in 14day group reached the peak .Conclusions Rat retinal M uller cells are reactive gliosis after optic nerve transection and have roles of protecting the retinal neurons and repairing the injury retina ;The response of microglial cell are the same as M uller cells basically with the exception 昆明医学院学报2010,(1):1~4Journal of Kunming Medical University CN 53-1049/R [基金项目]国家自然科学基金资助项目(30760093) [作者简介]唐茂丹(1985~),女,云南昆明市人,在读本科生,昆明医学院2005级临床医学(眼视光学专业).[通讯作者]吴春云.E-mail:wuchunyunkm@https://www.wendangku.net/doc/497221855.html,

光对鼠妇生活的影响实验报告[1]

光对鼠妇生活的影响试验报告 班级:组别:实验时间: 提出问题:光会影响鼠妇的生活吗 作出假设:光会影响鼠妇的生活 验证过程: 1.实验设计:给鼠妇提供阴暗和明亮两种环境,观察鼠妇对环境选择 2.实验材料:涂成黑色的培养皿,鼠妇(10只),盖板 3.注意事项 (1)每次学生实验完毕,要及时清点鼠妇数量,以防个别鼠妇“假死”或钻在土壤中因干燥而死。 (2)在实验室或家庭中放置鼠妇时,要防止容器周围其他动物(如老鼠、蟑螂等)的危害。 (3)每次换土时,最好保留一部分原来的土壤;对换出去的土壤要细心检查,以免因个别鼠妇“假死”或个体较小而丢掉。 (4)土壤中水分不宜过多,保持湿润即可。 (5)若在比较冷的环境中准备实验,可在盛有鼠妇的容器旁边或下面,放置暖水袋或盛有60~70 ℃热水的矿泉水瓶。 (6)温度:鼠妇在20~25 ℃之间生活较正常。若是在冬季或温度低于20 ℃时,要将盛有鼠妇的容器放在温暖的地方如暖气旁边。经常注意温度和湿度的变化。 (7) 食物:因鼠妇的口器是咀嚼式口器,喜欢吃腐烂的植物等。将白菜叶或其他青菜的叶片洗干净后,整片对折放入容器内的土壤上。由于鼠妇喜欢潮湿、黑暗的环境,所以常见鼠妇钻、伏在折叠的菜叶下面取食。1~2天后,可见到菜叶上有取食后留下的若干小洞。2~3天后,换上新的菜叶。 (8) 收集:在本实验进行前一周左右,教师告诉学生做好收集鼠妇的准备。若温度在25 ℃左右,在房前屋后的石块、瓦砾下面,花盆里,花坛内均可以找到;若温度低于25 ℃,选择温暖的花窖、家庭的下水道旁边、居住在平房条件的厨房地砖下面或菜窖内进行收集。提醒学生收集后,要注意在容器内装一些湿土且保持通风。 (9) 容器: 在收集鼠妇的过程中,精心地保护、饲养,是保证实验顺利进行的关键。在实验室使用的1 000毫升的塑料烧杯(用废弃的罐头瓶也可)内铺放一些经过筛选后的松软的土壤,适当喷洒或每天滴入1~2次清水(手摸土壤有湿润感即可,若水滴入过多,土壤形成泥块或泥浆,个别小鼠妇或活动慢的鼠妇易死亡)。每隔2~3天换一次土。每个容器(1 000毫升烧杯)内宜放入25~30只鼠妇,若密度过大,鼠妇容易死亡。在烧杯口用纱布遮盖,保证充足的空气,同时用橡皮圈套住纱布,防止鼠妇逃脱。 4.实验装置:用盖板盖住培养皿的二分之一,另外二分之一接受灯光照射,使培养 皿的一半处于,另一半处于 . 得出结论:支持假设,

大鼠视网膜神经节细胞培养

大鼠视网膜神经节细胞培养步骤及配方 1.成年SD大鼠摘除眼球,取出视网膜组织。 2.在木瓜蛋白酶中37o C,孵育25分钟 木瓜蛋白酶溶液配制:木瓜蛋白酶34个单位/ml(或2mg/ml) DL-半胱氨酸3.3mM(或0.4mg/ml) BSA 0.4mg/ml 溶解于Neurobasal medium中 3.RGC培养基漂洗3次 RGC培养基配制:Penicillin 100单位/ml Streptomycin 100ug/ml Pyruvate 1mM(无) Glutamine 2mM Insulin 5ug/ml Transferring 100ug/ml BSA 100ug/ml Progesterone 60ng/ml Putrescine 16ug/ml Thyroxine 40ng/ml Tri-iodothyronine 40ng/ml(无) BDNF 50ng/ml CNTF 10ng/ml bFGF 10ng/ml froskolin 5um(无?) fetal calf serum 1% 培养基:neurobasal/B27 各浓缩液配制:penicillin: 10000单位/ml (每100ml培养基加入1ml) Streptomycin 10mg/ml (每100ml培养基加入1ml) Glutamine(分子量:146.15) 29.23mg/ml或200mM (每100ml培养基加入1ml) Insulin 5mg/ml (每100ml培养基加入100ul) Transferring 10mg/ml (每100ml培养基加入1ml) BSA 10mg/ml (每100ml培养基加入1ml) Progesterone 600ug/ml (每100ml培养基加入10ul) Putrescine 1.6mg/ml (每100ml培养基加入1ml) Thyroxine 400ug/ml (每100ml培养基加入10ul) BDNF 500ug/ml (每100ml培养基加入10ul) CNTF 100ug/ml (每100ml培养基加入10ul)

教案探究光对鼠妇的影响

第一单元第二章 第2节生物学研究的基本方法 第二课时探究影响鼠妇分布的环境因素 【教学目标】 知识目标:体验探究的一般过程,学习控制实验变量和设计对照实验。 情感目标:形成爱护实验动物的情感,能够认真观察和记录,并与小组其他同学合作和交流。 能力目标:体验完整的探究过程;学会分析对照实验,能够找出实验变量;以及能够排除某些因素对实验产生的误差。 【教学重点】 体验探究的一般过程,学习控制实验变量和设计对照实验。 【教学难点】 形成爱护实验动物的情感,能够认真观察和记录,并与小组其他同学合作和交流 【教学准备】 准备相关实验器材 【教学过程】 一、创设情境,导入新课 回忆捕捉鼠妇的场景以及观看事先拍摄好的视频。 问:当掀开花盆下、石块下或其他地方寻找鼠妇时,鼠妇的反应如何? 二、小组合作,实验探究 1、根据鼠妇四处逃窜的现象,提出问题:光对鼠妇的生活有影响吗? [讲解]:通过实验探究问题。这个实验的名称:探究光对鼠妇生活的影响。 2、根据已有的经验以及观察,作出假设:光对鼠妇的生活有影响。 3、制定实验计划。 请同学们根据讨论提纲,进行讨论: ①这个实验我们要探究的是什么问题? ②实验探究时需要用到哪些材料用具?(思考如何使用) ③实验时,应该在实验盒中给鼠妇提供哪两种不同的环境? 除了光照不同以外,其它条件是否应该保持一样?(**怎样才能保持一样?) ④往实验盒中放置鼠妇时应该放在什么位置?(*一 定要这样做吗?为什么?) ⑤.最后明确该实验应如何操作?实验过程中应注意哪些问题? ⑥.明确分工: A.组长(主持讨论每个问题,做好分工) B.讨论内容记录员(简单记录讨论结果,准备大组发言) C.记录实验数据

光损伤大鼠视网膜TNF

光损伤大鼠视网膜TNF 【摘要】目的:观察光损伤大鼠视网膜肿瘤坏死因子(tnf)-α表达变化的规律,及预先使用米诺环素(minocycline,mc)对其分泌表达的影响,探讨视网膜光损伤的损伤机制和防治措施。方法:54只sd大鼠,随机分为光照对照组、光照实验组、正常对照组,前两组再各分为光照后6h、3d、7d、14d组,每组各6只大鼠(12只眼)。光照前90min,光照实验组大鼠mc灌胃(45mg/kg),光照对照组大鼠等量pbs液灌胃。分别于预定时间点取眼球,左眼石蜡包埋、he染色、tnf-α免疫组化染色,计算机图像分析软件(image-pro plus,ipp)测量视网膜外核层(outer nuclear layer,onl)厚度。右眼球摘除后即刻完整取出视网膜,匀浆后取上清液,elisa法测定tnf-α的吸光度(o.d)值并计算出tnf-α浓度。spss 行统计分析。结果:1,正常对照大鼠视网膜形态正常,tnf-α未见阳性染色,elisa定量仅含微量。2,光照对照组视网膜6h即出现病理改变,3d和7d进行性加重,14d略有减轻。视网膜tnf-a 阳性表达6h开始增加,3d显著增加,7d减少,14d进一步减少,elisa定量结果和免疫组化结果相平行。各时间点onl厚度、tnf-a 表达量和正常对照组相比,p值均0.05。tnf-a表达量均较光照对照组同一时间点为少,两两比较p值均p0.05。结论:本实验首次研究了光损伤大鼠视网膜tnf-α定位和定量的表达变化,及预先使用米诺环素对tnf-α表达变化和视网膜病理损伤的影响,结论如下:1.光损伤时过度表达的tnf-α参与并加重了视网膜光损伤。

疾病动物模型

疾病动物模型 1 复制方法和应用 动物疾病模型的复制,是用人为的方法,使动物在一定的致病因素(物理的、化学的、生物的)作用下,造成动物组织、器官或全身一定损害,出现某些类似人类疾病的功能、代谢、形态结构方面的变化或各种疾病,通过这种手段来研究人类疾病的发生、发展规律,为研究人类疾病的预防、治疗(包括新药物试用)提供理论依据。所以动物疾病模型的复制,在医学科学研究中占有十分重要的地位。 目前我国生物医学科学研究中,动物疾病模型主要用于三个方面:即实验生物学、实验病理学和实验治疗学(新药筛选亦属于实验治疗学范畴)。由于研究目的不同,对于疾病模型的要求也有所区别。如实验病理学,它着重于研究用某种特定方法复制出某些疾病。整个疾病复制过程,就是它的研究内容,目的是通过疾病的复制去探讨疾病的病因学和发病原。而实验治疗学则完全不同,疾病的复制仅是它研究的开始,因为它的主要目的是为了阐明在该病的发生发展过程中,某些治疗措施或药物的疗效如何。 诱发性动物模型的复制方法不外是用生物的、物理的、化学的和各种环境因子作用于动物而产生。 生物学因素包括细菌、病毒、寄生虫、细胞、生物毒素、激素等各种致病原,通过接种而使正常动物发生疾病。如接种细菌、病毒于敏感动物使其产生各种传染病。目前已知的150余种人畜共患病提供了极有意义的传染病材料。从流行病学、病理学或并发症等不同角度研究,首先要充分了解动物与人在疾病易感性和临床表现等方面的同异处。例如轮状病毒可引起婴儿急性坏死性肠类,犬感染轮状病毒后的表现只是亚临床的。然而严重威胁幼犬的肠道病毒是细小病毒,而人对细小病毒则并不易感。 物理因素是多方面的。例如在机械力作用下产生各种外伤性脑损伤、骨折等模型,气压变动复制高空病、潜水病;温度改变产生各种烧伤和冻伤;放射线照射可复制各型放射病,引起免疫功能抑制或诱发Spragae-Dawley系大鼠乳腺癌;闪光刺激诱发癫痫模型;噪音刺激引起听源性高血压及改变行为记忆功能等。复制各种模型时必须严格考虑不同对象应采用的不同的刺激强度、频率和作用时间,即按设计要求摸索有关实验条件。例如用扩张的气囊在颅内加压制作急性颅内压增高症动物模型时,应该按不同压力梯度通过几小时逐步加压,待脑的顺应性发生改变后才出现临床“脑缺血-脑水肿”的恶性循环。盲目加压会急速发生脑疝死亡,不可能复制出脑水肿对机体代偿和失代偿的病理生理过程,这样的模型会丧失或缺乏临床研究的价值。

糖尿病大鼠视网膜早期病变中PDGF(一)

糖尿病大鼠视网膜早期病变中PDGF(一) 作者:刘丽娟,李茂欣,汤旭磊,高林,朱任之 【关键词】糖尿病视网膜病变ExpressionofPDGFBinretinaofratswithearlystagediabeticretinopathy 【Abstract】AIM:ToobservetheexpressionofplateletderivedgrowthfactorBchain(PDGFB)mRNAintheretinaofdia beticratsattheearlystageofdiabeticretinopathy.METHODS:Atotalof60healthyadultmaleWistarratsw ererandomlydividedintocontrolanddiabeticgroups.Streptozotocin(60mg/kg)wasinjectedintothetailveintoinducediabetesin35ratsindiabeticgroup,while25ratsincontrolgroupw eretreatedwiththesamevolumeofcitricacidbuffersolution.Onthe3rddayafterinjection,theratswhos eurineglucosewasmorethan++andfastingbloodglucose≥16.7mmol/Lwerechosena slaboratoryobjec ts.Attheendof1st,2ndand3rdmonths,6ratsinbothgroupswererandomlysacrificedandtheretinaswer edissectedandtotalRNAwasisolatedforthedetectionofmRNAforPDGFBbysemiquantitativereversetr anscriptionpolymerasechainreaction(RTPCR).Theretinasoftheotherratsinbothgroupsweretakenan dpreparedastheultrathinandobservedbytransmissionelectronmicroscope.RESULTS:ThelevelsofmR NAencodingPDGFBintheretinasofdiabeticratsweresignificantlyhigherthanthoseincontrolsateachob servedtimepoint (P0.05orP0.01attheendof1stand3rdmonth).Obviousultrastructuraldamages,whichwereinrelati ontothecourseofdiabetes,couldbeseenintheretinasofdiabeticrats.CONCLUSION:Diabetesupregulat esPDGFBmRNAlevelsintheretinasofdiabeticratsinatimedependentmanner. 【Keywords】diabeticretinopathy;pericyte;plateletderivedgrowthfactorBchain;RTPCR 【摘要】目的:探讨血小板源生长因子B(PDGFB)mRNA表达水平在糖尿病(DM)大鼠视网膜中的变化规律及其作用.方法:雄性Wistar大鼠60只,随机分为正常对照组(25只)与造模组(35只).造模组以链脲佐菌素(STZ)尾iv,3d后测定血糖≥16.7mmol/L,尿糖以上者定为DM大鼠.分别于造模成功后1,2,3mo末各组随机取6只大鼠,采用半定量逆转录聚合酶链反应(RTPCR)方法检测PDGFBmRNA在大鼠视网膜中的表达水平;电镜观察DM大鼠视网膜超微结构的改变.结果:随着病程的延长,视网膜中PDGFBmRNA表达水平在DM组明显升高,与正常对照组相比于造模后1mo末时即差异具有统计学意义(P<0.05),3mo 末时差异显著(P0.01);DM大鼠视网膜超微结构的损害随病程进展逐渐加重.结论:PDGFBmRNA在视网膜中的表达水平随DM病程进展逐步升高. 【关键词】糖尿病视网膜病变;周细胞;血小板源生长因子B;逆转录聚合酶链反应 0引言 视网膜周细胞的渐进性功能丧失及死亡为糖尿病(diabetesmelitus,DM)视网膜病变(diabeticretinopathy,DR)的早期典型病理特征.周细胞对于保持微血管形态与功能的完整都有重要作用,缺乏周细胞将导致内皮细胞增生及血管形态异常〔1〕,并且促使DR进展〔2〕.血小板源生长因子B(plateletderivedgrowthfactorB,PDGFB)是周细胞最重要的生长因子,与周细胞表达的受体PDGFRβ结合维持着周细胞的密度和数量.PDGFB可以显著减少因缺血缺氧导致的周细胞死亡、减少缺氧对体外培养的视网膜微血管的损害〔3〕.因此,探讨PDGFB 在早期DR中表达的变化规律及其作用,可为DR的早期检测、防治提供理论依据. 1材料和方法 1.1材料 雄性Wistar大鼠60只,体质量(200±20)g,由兰州军区总医院实验动物中心提供;链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)(美国Alexis公司);Trizol(BBI产品);罗氏血糖仪及试纸条;PDGFB 的引物为:5'CGCTCCTTTGATGACCTTC3',5'GCACTCGGCGATTACGG3'(长177bp),βactin

《探究光对鼠妇生活的影响》教案

《探究光对鼠妇生活的影响》教案 一教材分析 本节课的主要目的是让学生了解探究的一般过程,并且体会控制实验变量和设置对照实验的重要性。教师不要直接告诉学生探究的每一个步骤,可以根据实例引导学生积极地思考。例如,教师可以指导学生根据捕捉鼠妇时所观察到的鼠妇的生活环境,引导学生提出问题;围绕提出的问题,教师引导学生根据已有的知识和经验作出假设;制定计划是探究的重要环节,教师可以帮助学生学会正确控制变量和合理地设置对照实验。为了使学生充分理解非生物因素对生物的影响,教师可以引导学生进一步探究湿度、温度等因素对生物的影响,但由于学生初次接触探究实验,要注意控制探究的条件。表达和交流是学生总结和反思探究的过程,展示探究成果的重要环节,教师可以通过一定的方式鼓励学生正确表达其探究结果,并与其他同学充分交流。 二教学目标 1、知识目标 体验探究的一般过程,学习控制实验变量和设计对照实验。 2、能力目标 培养学生的设计对照实验能力和合作能力。能够认真观察和记录。 3、情感目标 在探究光对鼠妇生活的影响的过程中,培养学生严谨的科学态度,并形成爱护实验。 三、教学方法 探究性实验法、观察法、提问法、讨论法等动物的情感。 学法指导:由于这是学生第一次尝试探究,所以应注意对学生探究步骤的掌握,使学生明确必须设置对照,并且只能有一个变量。 四、教具准备: 各小组准备鼠妇10~16只,湿土,纸盒,纸板,玻璃板(或透明本夹),表,笔,一份实验报告用表。 课时安排:1课时 五、教学过程设计 引入: 师:这节课我们就来探究非生物因素对生物的影响。 师:各小组同学都收集了很多的鼠妇,大家是在哪里找到这么多鼠妇的? 生:花盆下…… 师:你了解鼠妇吗?你想探究关于鼠妇的什么问题? 生:…… 师:这节课我们重点探究光对鼠妇生活的影响,鼠妇怕光,喜欢生活在阴暗的环境中,根据鼠妇的生活环境,你提出的问题是什么? 生:提出问题:…… 师:那么下一步请作出假设。(注意:假设的提出不是凭空臆造的,而是根据生

探究“光对鼠妇生活的影响”实验报告-何武

“探究”实验报告单 名称探究“光对鼠妇生活的影响”年级7上学科生物学编号类型探究编写鲜小荣提交时间 实验内容 材料用具10只鼠妇、湿土、铁盘(或塑料盘、纸盒)、纸板、玻璃板 方法步骤提出 问题 光会影响鼠妇的分布吗? 作出 假设 鼠妇适于生活在阴暗的环境中,光会影响鼠妇的分布。 作出假设的依据:在比较阴暗的地方看到了鼠妇,而在明亮的地方没有看到。 制定 计划 实验思路:设计明暗不同但是相通的两种环境,各放入等量的鼠妇若干只,过一段时间后,看哪边的鼠妇多。如果暗环境中鼠妇多,则说明假设可能是正确的。 实验装置:在铁盘内铺上一层湿土,以横轴中线为界,一侧盖上纸板,一侧盖上玻璃板。这样两侧就形成了阴暗和明亮两种环境。 实施 计划 1.以小组为单位进行实验。在两侧中央各放入5只鼠妇。静置2分钟。 2.每分钟统计一次明亮处和阴暗处的鼠妇数目,统计10次。将统计的结果填写入下表中。 时间(分钟) 环境 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 明亮 阴暗 分析 结果 得出 结论 你们小组的实验结果与假设一致吗?你们的结论是什么? 表达 和 交流 向全班同学汇报你们小组的探究过程和结果。计算出全班各组第10次数据的平均值。对全班平均值进行分析得出的结论,与你们小组的结论一致吗?如果不一致,请分析原因。 讨论 ①这个实验所探究的非生物因素是什么?还有哪些因素对该动物有影响? ②如何保证实验动物出现的变化只能是由于实验要探究的因素引起的? ③为什么要用多只鼠妇做实验?只用1只鼠妇做实验行吗? ④为什么要计算全班各组的平均值? 注意事项做完实验后,将鼠妇放回适合它们生存的自然环境中。

探究光对鼠妇生活的影响

探究光对鼠妇生活的影响 一、发现问题:经常在花盆下、湿土中等阴暗的地方看到鼠妇,见到光它就会立刻爬 走。 二、提出问题:光会影响鼠妇的生活吗 三、作出假设:鼠妇喜欢生活在阴暗潮湿的地方。 四、制定计划: 材料用具:秒表、纸盒子、10只鼠妇、相机、记录表、笔。 1.先抓10只鼠妇(潮湿虫)。 2.准备一只长形的纸盒子,将盖子剪掉一半,创造一个明亮和阴暗的对比环境。 3.将10只鼠妇同时放在明亮与阴暗交界的地方,先把他们圈住,同时开始实验。 4.观察并记录(用相机拍照和在表记录中记录)鼠妇在第2至11分钟时鼠妇向两边运动的情况。 五、实验过程: — 第一次实验 时间明亮(只)阴暗(只)实验中的拍照记录 2m37 3m3# 7 4m28 5m28

2 7m19 8m19 19 % 9m 10m010 11m010;Array第二次实验 时间明亮(只)阴暗(只)试验中的拍照记录 2m37

4m28 5m28 ~ 6m 19 7m010 8m010! 9m010 10m010

9 第三次实验 时间明亮(只)阴暗(只)试验中的拍照记录2m28 》 3m 19 4m28 5m19》 6m010 7m19

10 9m010 10m010 11m( 10 实验完毕计算平均数量(四舍五入到个位) 时间2m3m4m5m6m7m? 9m10m11m 8m 91010阴暗第一次:778889~ 9 10109第二次:71088910# 10 101010第三次:8989109- 10 101010平均数:798899' 10 100明亮第一次:332221、 1 001第二次:302210` 第三次:2121010000 平均数:3122110000六、实验分析:

光对鼠妇生活的影响实验报告

光对鼠妇生活的影响探究报告 设计人:刘凤杰审稿人:颜静 班级:组别:实验时间: 背景资料 鼠妇又称“潮虫”,在南方也叫“西瓜虫”、“团子虫”,属无脊椎动物节肢动物门甲壳纲潮虫亚目。鼠妇的种类较多,它们身体大多呈长卵形,成体长9—15毫米,背腹扁平十分显著,呈灰褐色、灰蓝色;常能卷曲成团,是草食的陆栖类群,口器是咀嚼式口器,为甲壳动物中唯一完全适应于陆地生活的动物,从海边一直到海拔5000米左右的高地都有它们的分布。第一触角短小,后7对胸肢变成步足。但它们都需生活在潮湿、温暖以及有遮蔽的场所,昼伏夜出,具负趋光性。不像昆虫和蜘蛛那样高度适应于陆地上生活,在我国大多数地区都有分布,在田间,主要为害黄瓜、西红柿、油菜等常见的种类有潮虫科、鼠妇科、球鼠妇科等代表动物。 .注意事项 1. 收集:在本实验进行前一周左右,就要做好收集鼠妇的准备。若温度在25 ℃左右,在房前屋后的石块、瓦砾下面,花盆里,花坛内均可以找到;若温度低于25 ℃,选择温暖的花窖、家庭的下水道旁边、居住在平房条件的厨房地砖下面或菜窖内进行收集。收集后,要注意在容器内装一些湿土且保持通风。 2.容器: 在收集鼠妇的过程中,精心地保护、饲养,是保证实验顺利进行的关键。用塑料瓶(把矿泉水瓶颈部较细的部分去掉或用废弃的罐头瓶也可)内铺放一些经过筛选后的松软的土壤,适当喷洒或每天滴入1~2次清水(手摸土壤有湿润感即可,若水滴入过多,土壤形成泥块或泥浆,个别小鼠妇或活动慢的鼠妇易死亡)。每隔2~3天换一次土。每个容器内宜放入25~30只鼠妇,若密度过大,鼠妇容易死亡。在瓶口用纱布遮盖,保证充足的空气,同时用橡皮圈套住纱布,防止鼠妇逃脱。 实验目的:1. 体验探究的一般过程,模仿控制变量和设计对照实验。 2.能够认真观察和记录,并与小组其他同学合作和交流。 实验材料:鼠妇(每组10只)、湿土、铁盘(或塑料盒、纸盒)、纸板、玻璃板 探究过程: 1.提出问题:________________________________________? (根据采集鼠妇时所观察到得鼠妇得生活环境提出问题) 2.作出假设:__________________________________________? 3.制定计划 根据所做的假设,设计一个简易的对照试验来验证所做的假设。注意在设计探究中,尽量使要验证的条件是可变的,其他条件则是不变的(控制变量)。这个实验的变量是——————。 实验装置的设计: 在纸盒内铺上一层湿沙土,以横轴中线为界,一侧盖上纸板,另一侧盖上玻璃板。这样在盒内就形成了和两种环境。

探究光对鼠妇生活的影响教学设计

《探究光对鼠妇生活的影响》教学设计 一、设计思路: “探究光对鼠妇生活的影响” 是初中生物课中的第一个探究实验,学生之前没有科学 探究的基础,只有让学生掌握了实验的研究方法后,对于后面的探究活动才能用已学会的方 法、技能进行探究,进而将探究活动作为获得新知识的一种学习方式,这对于发展学生的科 学探究能力具有非常重要的作用。基于此,我先让学生了解科学探究的一般方法,然后再帮 助学生设计探究方案,引导学生尝试控制实验变量和设置对照实验,体会实验变量的控制和 对照实验的设置,并把重点放在对实验结果的分析上,目的是帮助学生认识环境对生物的影 响,理解环境与生物的关系,并通过本节课的实验让学生了解科学探究的方法,培养学生实 验探究的能力,学习生物学的兴趣,养成相互合作的意识,这样让学生在感性上对科学探究 有个认识,为后面上升到理性的学习做好铺垫。 二、实验教学分析: 容分析: 本节课是人教版七年级生物第一单元第二章第二节“环境对生物的影响”中的探究实 验。进入初中,学生对生物学还不甚了解,所以这节课的成败会直接影响到学生学习生物学 的兴趣,对学生形成正确的生物学观点,从整体上认识生物与环境的关系,都有着极其重要 的作用。根据课程目标,在活动中激发学生的兴趣,让学生体会、感悟生物与环境的关系, 并有保护环境、尊重生命、关爱动物的教育。有意识地渗透生物与环境的关系。探究“影响 鼠妇生活的环境因素”既是本节课的重点又是本节课的难点,目的在于让学生了解探究的一 般过程,体会控制实验变量和设置对照实验的重要性。作为教材中的第一个实验,对于好奇 心极强的七年级学生来说无疑是爱上生物学的一个关键点,也是激发学生探索欲望的最佳契 机。 学情分析: 七年级学生刚开始接触生物学这门学科,所以教师要把教学的重心和主要任务放在培养 学生对生物学的兴趣上。七年级学生的认知水平还处在一个感性认识阶段,教师在教学过程 中可以采用课外实践活动来激发学生的兴趣,并且在课堂教学中多注重师生互动的环节和启

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