固相微萃取

固相微萃取

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固相微萃取是在固相萃取基础上发展起来的一种新的萃取分离技术，与液—液萃取和固相萃取相比，具有操作时间短，样品量小，无需萃取溶剂，适于分析挥发性与非挥发性物质，重现性好等优点。很多研究结果表明，在样品中加入适当的内标进行定量分析时，其重现性和精密度都非常好。固相微萃取装置外型如一只微量进样器，由手柄（holder）和萃取头或纤维头（fiber）两部分构成，萃取头是一根1㎝长，涂有不同吸附剂的熔融纤维，接在不锈钢丝上，外套细不锈钢管（保护石英纤维不被折断），纤维头在钢管内可伸缩或进出，细不锈钢管可穿透橡胶或塑料垫片进行取样或进样。手柄用于安装或固定萃取头，可永远使用（图3—24）

固相微萃取关键在于选择不石英纤维上的涂层（吸附剂），要使目标化合物能吸附在涂层上，而干扰化合物和溶剂不吸附，一般是：目标化合物是非极性时选择非极性涂层；目标化合物是极性时选择极性涂层。
固相微萃取的采样方法是将固相微萃取针管（不锈钢套管）穿过样品瓶密封垫，插入样品瓶中。然后推出萃取头，将萃取头浸入样品（浸入方式）或置于样品上部空间（顶空方式），进行萃取。萃取时间大约2—30分钟，以达到目标化合物吸附平衡为准。最后缩回萃取头，将针管拔出（图3—25）。
固相微萃取可用于气相色谱，也可用于液相色谱（图3—25）。用于GC时，是将固相微萃取针管（不锈钢套管）插入GC进样口，推手柄杆，伸出纤维头，使用进样口的高温热解吸目标化合物，解吸后被载气带入色谱柱。用于HPLC时，是将固相微萃取针管（不锈钢套管）插入固相微萃取/HPLC接口解吸池，然后再利用HPLC的流动相通过解吸池洗脱目标化合物，并将目标化合物带入色谱柱。

五． 固相萃取的应用
固相萃取主要用于复杂样品中微量或痕量目标化合物的分离和富集。例如，生物体液（如血液，尿等）中药物及其代谢产物的分析，食品中有效成分或有害成分的分析，环保水样中各种污染物（可挥发性有机物和半挥发性有机物）的分析都可使用固相萃取将目标化合物分离出来，并加以富集，然后进行色谱分析。下面举两个具体分析实例加以说明。
1． 血浆中苯并二氮杂草类药物（安定）的测定
使用6ml的固相萃取柱，柱内填加500㎎C18吸附剂。用5ml甲醇活化，然后再用5ml水淋洗

。将1ml 0.1M醋酸钠加入4ml血浆中，充分混合后倒入萃取柱内，抽滤。然后加入3ml水，抽滤30秒。再将固相萃取柱在1000~1500rpm离心机上离心5分钟。用3ml丙酮洗脱，收集洗脱液，将洗脱液在氮气流下缓缓加热（<45℃）至干燥。用200μl甲醇溶解残渣，进样20μl，进行HPLC分析。
HPLC条件： 柱子: ODS-3 5μm 150×4.6mm
流动相:乙腈/甲醇/5mMKH2PO4(15/30/55）
流速: 2ml/min
柱温: 40℃
检测器: UV254
实验结果见图3—26和表3—5
2． 水中多环芳烃（PAHS）的测定
使用6ml固相萃取柱，柱内填加500mgC18吸附剂，用5ml二氯甲烷活化, 然后再用5ml甲醇和5ml水重复一次。加2ml异丙醇到20ml水样中（10%异丙醇含量）， 混合后倒入固相萃取柱，流速不得大于10ml/min。用3ml甲醇/水（50/50）淋洗，抽真空30秒，再将固相萃取柱在1000~1500rpm离心机上离心5分钟。用3ml二氯甲烷洗脱，收集洗脱液。将洗脱液在干燥氮气流下浓缩到50~200μl，浓缩时样品不要加热，以免造成小分子多环芳烃的丢失。加二氯甲烷至总体积为200μl，进样20μl，进行GC分析。
GC条件： 柱DB-5 30m×0.25mmID 0.25μ 载气：氮气 线速度为35cm/秒 (65℃)
程序升温：65℃停留1分钟后以25℃/分的升温速率升至140℃，然后以10℃/分的升温速
率升至290℃，在290℃停留25分钟。进样：275℃ 不分流进样，吹扫45秒
检测器：FID 300℃ 尾吹氮气30ml/分 实验结果见图3—27和表3—6