SELEX法筛选鼻咽癌核酸适配子的研究

·基础研究·SELEX法筛选鼻咽癌核酸适配子的研究

陈文学1，2，张焜和1，邹学森1，陈岳青1，李金高2

（1江西省肿瘤医院，南昌330000；2南昌大学第一附属医院）

摘要：目的建立鼻咽癌细胞核酸适配子库，为鼻咽癌的分子诊断、生物治疗奠定基础。方法体外合成长度为78个核苷酸的随机DNA文库，采用SELEX技术，以正常鼻咽上皮细胞为靶标进行消减筛选，以EB病毒阳性低分化鼻咽癌细胞为靶标进行10轮筛选。采用流式细胞仪检测判断核酸适配子库的特异性和亲合力，Clustal X软件分析适配子序列。结果流式细胞仪检测显示亚文库与靶细胞的结合能力随筛选轮数的增加荧光强度增强。

聚类分析显示适配子可以分为3个家族，1、2家族具有保守序列。结论EB病毒阳性鼻咽癌细胞适配子库初步建立成功，可筛选到具有较高亲和力和特异性的核酸适配子；本研究为鼻咽癌的分子诊断、生物治疗奠定了基础。

关键词：指数式富集的配体系统进化技术；鼻咽肿瘤，鼻咽癌；适配子

中图分类号：R739．6文献标志码：A文章编号：1002-266X（2012）23-0031-03

Study on selection of DNA aptamers to nasopharyngeal carcinoma cell by SELEX

CHEN Wen-xue1，ZHANG Kun-he，ZOU Xue-sen，CHEN Yue-qing，LI Jin-gao

（1Jiangxi Provincial Tumor Hospital，Nanchang330000，P．R．China）

Abstract：Objective To establish nasopharyngeal carcinoma（NPC）nucleic acid aptamer library for laying the foun-dation of NPC molecular diagnosis and biological treatment．Methods An in vitro synthesized78mer random DNA library was subjected to subtractive selection against normal nasopharynx epithelial cell and10rounds of selection against NPC cells by SELEX．Binding of the aptamer pools to NPC cells was visualized by flow cytometry technique．The aptamer se-quences was analyzed by clustal X．Results The subpools binding against NPC cells increased along with selection rounds．Aptamers were divided into three families by clustering analysis，and motifs were identified in1，2families by a-lignment．Conclutions We successfully established EB virus positive NPC aptamer pool，which can separate high affinity and specificity aptamers．This study lays the foundation of NPC molecular diagnosis and biological treatment．Key words：systematic evolution of ligands by exponential enrichment；nasopharyngeal carcinoma，nasopharyngeal cancer；aptamer

鼻咽癌早期症状不明显，多数患者发现时已为中晚期。寻找早期诊断的生物标志物是目前研究重点。适配子是近年来公认的在疾病诊断和分子治疗中非常有应用前景的分子探针。1990年Tuerk 等［1］报道了指数式富集的配体系统进化（Systematic evolution of ligands by exponential enrichment，SEL-EX）技术，其是一项新的组合化学技术，利用体外化学合成随机寡核苷酸文库与靶分子相互作用，从中筛选出与靶分子特异结合的寡核苷酸，即核酸适配子。2010年3月，我们采用消减SELEX技术和细胞SELEX技术筛选鼻咽癌细胞核酸适配子，并对其结

基金项目：江西省卫生厅课题资助项目（20081116）。

作者简介：陈文学（1975－），女，博士在读，研究方向：肿瘤分子诊断。E-mail：wenxuechen@yahoo．com．cn 构进行了初步分析，旨在建立鼻咽癌细胞核酸适配子库，为鼻咽癌的分子诊断、生物治疗提供新思路。1材料与方法

1．1材料用于SELEX筛选的DNA随机文库由上海生物工程技术有限公司合成。文库两端为固定序列，中间为40个碱基的随机序列。PCR扩增所用的引物由Primer5．0软件设计，上游引物5'标记FITC荧光标记。引物序列如下：上游引物（B1）序列：5'-FITC-ACCGACCGTGCTGGACTCT-3'，下游引物（B2）序列：5'-CGCAACGCTCGCTCATACT-3'。正常鼻咽上皮细胞株（NP69）及EB病毒阳性低分化鼻咽癌细胞株（C666）由中山大学附属肿瘤防治中心曾木圣教授赠送。无血清培养基keratinocyte-SFM、1640培养基购自Gibco公司；胎牛血清购自杭州四季青公司；Dulbecco's磷酸盐缓冲液，酵母tR-

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山东医药2012年第52卷第23期

2021届高考生物一轮复习知识点讲解专题1-4 核酸、糖类和脂质【含答案】

2021届高考生物一轮复习知识点讲解专题1-4 核酸、糖类和脂质 【考情分析】 1.概述糖类有多种类型，它们既是细胞的重要结构成分，又是生命活动的主要能源物质 2．举例说出不同种类的脂质对维持细胞结构和功能有重要作用 3．概述核酸由核苷酸聚合而成，是储存与传递遗传信息的生物大分子 【核心素养分析】 1.生命观念：核酸、糖类、脂质的结构与其功能的适应。 2.科学思维：比较DNA 与RNA 的异同；糖类和脂质的分类和作用。 3.社会责任：注意饮食，养成良好的生活习惯。 【重点知识梳理】 知识点一 核酸的组成、结构与功能 1．核酸的结构层次 2．DNA 和RNA 的组成成分比较 (1)相同成分：含氮碱基A 、G 、C 和磷酸。 (2)不同成分? ???? DNA ：脱氧核糖、胸腺嘧啶 RNA ：核糖、尿嘧啶 【特别提醒】ATP 、核苷酸、DNA 、RNA 中“A”的辨析

3．核酸的功能与分布 (1) (2) 4．生物大分子以碳链为骨架 生物大分子(多聚体) 基本单位(单体) 多糖单糖 蛋白质氨基酸 核酸核苷酸 【归纳总结】 (1)同种生物不同细胞中DNA一般相同，由于基因的选择性表达，mRNA不完全相同，蛋白质种类和含量也不完全相同。 (2)核酸与蛋白质在不同生物体中具有物种的特异性，因而可以从分子水平上，通过分析核酸、蛋白质的相似程度来推断物种亲缘关系的远近。 (3)RNA作为遗传物质的前提是生物体内不存在DNA。当RNA作为遗传物质时，由于RNA单链结构不稳定，容易发生突变。生物体内的少数RNA具有催化功能。 【知识拓展】 1．核酸与蛋白质的比较 项目 核酸 蛋白质DNA RNA 元素C、H、O、N、P C、H、O、N等组成单位核苷酸氨基酸 形成场所 主要在细胞核 中复制产生 主要在细胞 核中转录生成 核糖体 检测试剂甲基绿(绿色) 吡罗红(红色) 双缩脲试剂(紫色)

耳鼻喉――精品课程上的病例分析题

1.阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合症 患者，男，42岁。因睡时打鼾10年，加重伴憋气1年入院。患者10年前始出现睡时打鼾，一直未行处理，近1年来患者睡时打鼾症状明显加重，鼾声响，严重影响他人休息，伴有呼吸暂停情况，每晚约有30～40呼吸暂停,每次持续30～60秒,晨起头痛，全身乏力，白天嗜睡，记忆力明显下降，2年前患者体检时发现血压偏高，血压：150～10～110mmHg,一直口服降压药物治疗。体格检查： 身高： 1.72m,体重：95Kg,体温： 37.6℃,脉搏80次/分，呼吸20次/分，血压：15mmHg,神志清楚，语言含糊，对答切题，眼球运动正常，双侧瞳孔等大等圆，对光反射存在。 心、肺、腹检查正常。生理反射存在，病理反射未引出。既往无特殊病史。耳鼻喉科检查： 双侧扁桃体Ⅱ度肿大，无充血，双侧舌腭弓、咽腭弓及咽侧索肥厚，悬雍垂肥大，鼻中隔居中，双下鼻甲肥大。 问题 1．写出你的初步诊断，其诊断标准是什么？ 2．治疗原则？q 答： 1．阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合症。多导睡眠图（PSG）是诊断的多标准，PSG检查每夜7小时睡眠过程中呼吸暂停及低通气反复发作30次以上，或呼吸暂停和低通气指数≥5次/小时。 2．治疗原则： （1）保守治疗：

调整睡眠姿势，尽量采用侧卧；减肥；鼻腔持续正压通气；应用口器治疗。 （2）手术治疗；腭咽成形术。 2.急性会厌炎 患者，男，27岁。咽痛伴发热2天。患者2天前因受凉后出现咽痛不适，吞咽时咽痛加剧，伴有发热，体温波动在38～39℃,口服抗生素治疗，症状无缓解，1天前患者咽痛明显加重，伴有呼吸不畅。体格检查： 体温： 39.0℃,脉搏86次/分，呼吸23次/分，血压：1mmHg,急性痛苦面容，神志清楚，语言含糊，口内似含物，呼吸音粗糙，吸气时可见有三凹征。对答切题，眼球运动正常，双侧瞳孔等大等圆，对光反射存在。心、肺、腹检查正常。生理反射存在，病理反射未引出。既往无特殊病史。耳鼻喉科检查： 咽部黏膜轻度充血，双侧扁桃体Ⅱ度肿大，表面未见脓点，间接喉镜检查示： 会厌肿大呈球形，充血，声门无法窥清。 问题 1．写出你的初步诊断，其病因主要是什么？ 2．治疗原则？ 答： 1．急性会厌炎。病因： 感染；变态反应；邻近器官的急性炎症；继发会厌感染。 2． （1）抗感染治疗；

鼻咽癌转移到骨常见的治疗方案

鼻咽癌是头颈部常见的一种恶性肿瘤，其好发于40~50岁人群，男性发病率约为女性的2~3倍。我国是鼻咽癌的高发国家，而且由于其早期症状不典型，不少患者发现病情的时候已经出现了转移，如常见的骨转移，一旦出现骨转移，很多患者往往不知道该怎么办，那么鼻咽癌骨转移应该怎么治疗呢？ 鼻咽癌骨转移在鼻咽癌患者中发生率算是比较大的，而且一般来说它的转移部位多以脊椎骨、盆骨和肋骨为最多见，其次为肩胛骨、肱骨、股骨、颅骨等。大多数病例为全身多发性骨转移，单发性转移较少见。 一般来说当鼻咽癌发生骨转移说明病情到晚期了，是很难完全治愈的。主要就是限制、抑制肿瘤的进展、改善生存质量、提高生存时限。鼻咽癌骨转移一般是不建议手术治疗，放化疗和中医药治疗就成为很多患者的选择，可能很多患者在放化疗之后症状会有所缓解，患者生活质量会有所提高，但是放化疗往往“敌我不分”，在杀伤肿瘤细胞的同时对正常细胞也会造成伤害，导致治疗的不能顺利进行，因此在放化疗的时候一定要配合中医药进行治疗，能起到增效减毒的作用，帮助患者更好的治疗疾病。 鼻咽癌骨转移中医治疗也是比较常见的，中医治疗具有很强的整体观念，注重的是整体的调理，不仅能控制原发癌肿，还能控制转移病灶，全面抑制癌细胞，控制病情，改善生存质量，延长生存期方面有很明显的效果。使很多被判死刑的患者获得了较长的生存期。 临床上，在中医治癌领域，独树一帜的“三联平衡疗法”具有不错的患者口碑，治疗效果不仅得到了患者及家属的认可；更是誉享国际，得到了国内外诸多知名肿瘤专家的称赞。该疗法是由出身于袁氏中医世家，第八代传人，拥有三十余载临床抗癌实战经验的袁希福教授，创立的中医药疗法。 该疗法还具有不手术、不放化疗、不住院、无痛苦、无风险、无毒副反应，花费少，在家治疗，饮食起居，家庭护理，功能锻炼均方便，环境熟悉，可以与周围邻居交流走动，心理无压力，若有问题可以直接与医生通电话联系。 通过一则真实的案例一起来了解一下 杨城子（化名），鼻咽癌低分化鳞癌合并淋巴结及双肺转移，男，57岁，安徽省和县人。2009年10月份出现涕中带血，2010年8月病情加重，10月份在南京军区总医院检查确诊为鼻咽癌，后做化疗6个疗程，做放疗33个疗程，2011年6月在301医院发现肺部转移，经放化疗治疗后于2011年7月18日来诊，郑州希福中医肿瘤医院以“三联平衡疗法”中药治疗，8月3日，头晕、乏力、畏寒等症状减轻，身体一般情况改善;持续服药至今，病人以往症状均明显改善，复查左肺转移灶消退，病人要求继续服药以巩固疗效。 鼻咽癌骨转移病情是非常严重的，所以建议治疗鼻咽癌骨转移要到正规的医院进行诊治，针对患者具体的病情，体质来给予有针对性的治疗方案，如是患者体质差的，则最好是选择中医中药来治疗，这样才能更好的抑制病情。

核酸、糖类和脂质

第4讲 遗传信息的携带者——核酸 考纲要求 1.核酸的结构和功能(Ⅱ) 2.糖类、脂质的种类和作用(Ⅱ) 3.观察DNA 、RNA 考点一 核酸的结构和功能 考点突破 功能(P26)：细胞内 的物质。在生物体的 中具有极其重要的作用。 2、“观察DNA 和RNA 在细胞中的分布”实验【P26】 （1）实验原理（记忆） ① 和 对DNA 、RNA 的亲和力不同。__________使DNA 呈绿色；_____使RNA 呈红色。 ②利用甲基绿、吡罗红 染色剂将细胞染色，可以显示DNA 和RNA 在细胞上的分布。 ③盐酸的作用：能够改变 ， 同时使染色体中的 与蛋白质分离，有利于 与染色剂结合。 （2） 结果 结论 【易错警示】 观察DNA 和RNA 在细胞分布实验中的4个注意问题 (1)选材：. 该实验能否选用绿色植物的叶肉细胞？ 不能，绿色植物叶肉细胞含叶绿体，其中含有的色素会遮盖实验出现的颜色， 能否用哺乳动物的红细胞作为实验材料，因为红细胞没有细胞核，无法观察DNA 和RNA 的分布。 (2)缓水流冲洗目的：防止载玻片上的细胞被冲走。 (3)几种试剂在实验中的作用 ①0.9%的NaCl 溶液(生理盐水)：保持口腔上皮细胞正常形态。 ②8%的盐酸：a.改变细胞膜的通透性，加速染色剂 进入细胞； b.使染色质中DNA 与蛋白质分离，有利于DNA 与染色剂结合。 ③蒸馏水：a.配制染色剂；b.冲洗载玻片。 ④吡罗红甲基绿染液：混合使用，且现用现配。

(4)DNA 和RNA 在细胞核和细胞质中均有分布，只是量的不同，故结论中强调“主要”而不能说“只”存在于细胞核或细胞质中 考点突破 (1)比较DNA 和RNA 在组成上的区别： DNA 特有的结构： ；②RNA 特有的结构： （2）如果用A 、T 、U 三种碱基参与构成核苷酸，能构成几种核苷酸？ （3）.DNA 、RNA 、蛋白质的水解产物和代谢产物 （4）.核酸控制蛋白质的合成错 【警示】细胞多样性的原因分析 不同生物细胞多样性的根本原因是DNA 分子的多样性； 而同一生物细胞多样性的根本原因是基因的选择性表 达(转录形成的mRNA 不同)。上述两种情况下细胞多样性的直接原因均是蛋白质分子 的多样性。 【特别提示】要鉴别染色体的主要成分，需要 试剂 例1、在DNA 分子的一条链中，连接两个相邻碱基A 和T 的化学结构是（ ） A 、脱氧核糖—磷酸—脱氧核糖 B 、核糖—磷酸—核糖 C 、磷酸—脱氧核糖—磷酸 D 、氢键 例2、(2010·江苏生物，1)下列关于核酸的叙述中，正确的是 ( )

DNA核酸适配体合作协议书【模板】

DNA核酸适配体合作协议书 甲方：我方 乙方：合作方 本协议甲方和乙方就靶标名称？？？？ DNA核酸适配体的相关合作达成共识，双方本着平等自愿、互惠互利原则，就结成长期合作关系，经友好协商达成以下合作意向。 一、合作总则 为特异性结合靶标名称？的单链DNA核酸适配体更好的进行应用，双方同意建立合作关系，甲方负责提供特异性结合靶标名称？的核酸适配体序列，乙方在此基础上开展应用方面的实验研究。 二、责任和义务 1.甲方责任和义务 1.1甲方承诺提供给乙方的数据以及实验条件真实可靠。提供的数据包含OX40?? 特异 性核酸适配体筛选方法和亲和力测试方法，亲和力数据，核酸适配体序列信息等（附 件一）。 1.2根据乙方的实际情况和要求，乙方在研究过程中，如果遇到了需要甲方提供该适配 体相关信息的地方，甲方应积极配合乙方，共同制定具体实施方案和安排，以促进 项目的顺利进行。 1.3在项目进行过程，未经乙方同意，甲方不得自行公开本合同中乙方基于甲方的核酸 适配体序列取得的研究进展，但不包括双方合作前甲方已得到该核酸适配体的信息。 1.4甲方应当保证其交付给乙方的研究开发成果和样品不侵犯任何第三人的合法权益， 如因甲方提供的研发成果及样品等导致乙方遭受任何索赔、指控时，甲方应承担相 应法律责任并承担乙方由此受到的损失。 1.5甲方不得限制乙方就甲方提供的核酸适配体所获得的研究成果发表研究论文或申 请专利。 2.乙方责任和义务 2.1乙方应尽力推进课题的实施，实验过程中应与甲方及时沟通研究进展。 2.2未经甲方同意，乙方不得公开本合同中甲方使用的实验方法和数据，不得公开甲方 提供的核酸适配体序列。乙方在以甲方提供的核酸适配体为基础，获得的研究成果 发表第一篇论文或申请第一项专利前，应征得甲方许可。

粘附素核酸适配体及其筛选方法和应用的制作技术

本技术公开了一种黏附素适配体及筛选该黏附素适配体的方法，本技术以幽门螺杆菌基因组DNA为模板，扩增得到其黏附素基因，将得到的基因与表达载体连接获得筛选靶标，再将筛选靶标与随机单链ssDNA文库孵育，SELEX筛选，PCR扩增文库，然后经多轮筛选得到黏附素核酸适配体。本技术还公开了该黏附素适配体在制备幽门螺杆菌的检测试剂盒以及制备幽门螺杆菌免疫药物中的应用。本技术的黏附素核酸适配体具有较高的亲和力与特异性，分子量小、渗透性强，相对现有技术能够更直观的反应机体感染Hp的状况。 技术要求 1.一种黏附素核酸适配体，其特征在于，所述核酸适配体的核苷酸序列含有SEQ IDNO.1所示的核苷酸序列；或含有以下任意一种核苷酸序列：与SEQ ID NO.1限定的核苷酸序列同源性在60％以上、与SEQ ID NO.1限定的核苷酸序列进行杂交的序列、SEQ ID NO.1限定的核苷酸序列转录的RNA序列。 2.根据权利要求1所述的黏附素核酸适配体，其特征在于，所述核酸适配体的核苷酸序列被甲基化、巯基化、磷酸化、氨基化或同位素化。 3.根据权利要求1或2所述的黏附素核酸适配体，其特征在于，所述核酸适配体的核苷酸序列上连接有荧光物质、治疗性物质、放射性物质、生物素、地高辛、纳米发光材料或酶标记。 4.一种权利要求1所述的核酸适配体的的筛选方法，其特征在于，包括以下步骤： (1)以幽门螺杆菌基因组DNA为模板，PCR扩增得到幽门螺杆菌黏附素(Hpa A)基因； (2)将得到的基因与表达载体Pet28a质粒经酶切后连接，连接产物转入大肠杆菌E.coli BL21菌株并诱导表达，裂解细菌，纯化，获得的重组粘附素Hpa A即为筛选靶标； (3)将步骤(2)得到的黏附素Hpa A与ssDNA文库进行孵育，收集与筛选靶标结合的ssDNA； (4)将得到的ssDNA进行PCR扩增，得到dsDNA； (5)得到的dsDNA与pUC19质粒经酶切后连接，并转入大肠杆菌E.coli DH5α菌株； (6)选取阳性克隆测序，并验证阳性克隆扩增得到的ssDNA与Hpa A的结合力，得到核酸适配体。 5.如权利要求4所述的筛选方法，其特征在于，步骤(1)中Hpa A引物序列为： F:5’-CGGATCCTGCAGCCCGCATATTATTG-3’； R:5’-CAAGCTTTCGGTTTCTTTTGCCTTTT-3’。 6.如权利要求4所述的筛选方法，其特征在于，步骤(3)中，ssDNA文库包括序列： 5’-CGGATCCATCCAGAGTGACGCAGCA-N45-TGGACACGGTGGCTTAGT-3’； 引物P1：5’-CGGATCCATCCAGAGTGACGCAGCA-3’； 引物P2：5’-GAAGCTTACTAAGCCACCGTGTCCA-3’。 7.如权利要求4所述的筛选方法，其特征在于，步骤(3)中，将纯化的粘附素Hpa A包被于聚苯乙烯微孔中，然后将合成的ssDNA文库溶于筛选缓冲液投入其中，洗下结合的ssDNA作为下一轮的模板；第五轮后以空白孔为负向筛选介质。 8.权利要求1-3任意一项所述的黏附素核酸适配体或其衍生物在制备检测幽门螺杆菌的试剂盒、分子探针或靶向介质中的应用。

高亲和力修饰适配体筛选X-Aptamer试剂盒I-生工生物工程

高亲和力修X-Aptame 用户手册 美国AM 生物生工生物工程上海市松电话电传 和力修饰适配体筛选 tamer 试剂盒说明书I 手册（2018年3月8日） 生物技术有限公司 中国服务部 物工程（上海）股份有限公司 海市松江区香闵路698号 : 021-5707 2012 : 021-5707 2170 S a n g o n B i o t e c h

试剂盒说明书目录 1. 筛选试剂盒产品介绍 2. 筛选试剂盒产品内容或组成 3. 存储条件 4. 自备材料 5. 试剂制备 6. 操作步骤 7. 操作步骤概要 试剂盒产品使用的局限性 A. 本试剂盒产品仅供科学研究使用。 B. 高亲和力修饰适配体筛选的成功是由多种因素共同影响的，其中最主要的是靶的性质和筛选过程中靶 （例如靶蛋白质，或小分子）与寡核苷酸的正确操作处理。 C. 本试剂盒不适用线性的，没有结构的小肽或小分子，没有功能基的小分子。蛋白靶表面大部分为负电荷 的氨基酸，如果有需求，欢迎和我们的中国和美国的科学家团队讨论沟通。 D. 小分子固定在载体上，利用我们的试剂盒进行筛选，不容易获得适配体。 E. 新用户在使用试剂盒前，希望认真阅读使用说明书，如有疑问，请和我们讨论，我们会分享我们的知识 和经验，助你成功。 S a n g o n B i o t e c h

1. 筛选试剂盒产品介绍 高亲和力修饰适配体是含有修饰过的寡异性的结合。它与传统的核酸适配体筛选有新颖的化学修饰的核苷酸。这些新颖的化学了筛选的效率。这些新颖的化学修饰涵盖了二美国AM 生物公司开发的高亲和力修饰有效工具。这一试剂盒通过一轮筛选和结合并且可以对多个靶标进行平行筛选，极大地计的生产的微球库，库容一般有为109个微球轮筛选富集的靶标适配体从微球上释放出来修饰的适配体序列通过PCR 扩增，再通过二AM 的云端智能软件导出修饰的适配体核酸序标而设计的。最多可同时平行筛选五个靶标 2. 筛选试剂盒产品内容或组成 2.1 微球库（干装）：1个4毫升玻璃瓶 微球库包括约109个微球，微球重复数为微球库可供五个靶标平行筛选。 【注】：请参照步骤6.6.1 用户必须包含2.2 正向引物（编号：K-FP ）：1个1.5 mL K-FP 序列: 5’-CAG GGG ACG CAC C 【注】：下面7个反应管的PCR 检测都用2.3 带编号的反向引物：7个1.5 mL 塑料K-RP-06, & K-RP-07） 过的寡核苷酸，能与特定的蛋白质或小分子靶标进行高亲筛选有很大的不同，它的文库是经过计算机设计的，学修饰增强了核苷酸与靶标的亲合力和适配体的盖了二硫代磷酸酯骨架修饰、正电修饰及氨基酸修饰的图一 力修饰适配体筛选试剂盒提供了一种快速筛选高亲和力修和结合就能筛选出与蛋白质或小分子靶标结合的含有修饰地提高了筛选效率。该试剂盒包括一种美国AM 生物，通过磁性粒子的磁性控制来筛选高亲力的修饰放，再通过二轮与靶标特异性结合并洗脱，来排除二代测序方法得到洗脱产物中适配体的序列及丰度核酸序列并提供给客户。这个试剂盒是专为可溶性蛋白。 复数104~105个。 须包1号管！用户最好同时包含1号和7号管。 5 mL 塑料EP 管 AC CAA GG-3 测都这一个正向引物，而反向引物与下列步骤EP 管（编号：K-RP-01, K-RP-02, K-RP-03, K-RP 行高亲和力和强特 并包含了一系列的稳定性，并增加饰的碱基等 (图一)。 和力修饰适配体的有修饰的适配体，生物公司特别设 的修饰的适配体。一“假阳性”适配体。 及丰度，并通过美国性蛋白质或小分子靶2.3序号对应 RP-04, K-RP-05, S a n g o n B i o t e c h

鼻咽癌复发最佳治疗方案

鼻咽癌是一种发生于鼻咽腔或上咽喉部的癌症，是非常常见的一种癌症，因此在生活中大家也要警惕，减少鼻咽癌的发生。临床上鼻咽癌之所以难治，就在于鼻咽癌的复发性，一旦出现复发，会比上次要难治，对于患者来说，选择一个恰当的治疗方案是比较重要的，下面一起来看一下。 鼻咽癌复发临床治疗比原发性鼻咽癌治疗要困难，患者经过一次治疗后体质难免有所下降，因此再考虑复发性鼻咽癌的治疗方法时应慎重考虑。理论上，复发性鼻咽癌的治疗方法临床还是优选手术治疗，但大多数鼻咽癌复发患者同时伴有病灶的转移，手术切除往往不理想，还会再次复发，多是采用放化疗和中医药治疗。 鼻咽癌复发的治疗方法中的放化疗是常规治疗手段，放化疗常用于复发性鼻咽癌体质较弱无法耐受二次手术切除的患者，可有效控制局部症状，提高肿瘤局部控制率，但由于放化疗本身具有较强烈的毒副反应，身体素质差的复发性鼻咽癌患者或会产生耐药性或无法耐受而导致病情加重，人体免疫力受到严重创伤，因此临床对于复发性鼻咽癌的放化疗方案应谨慎执行，若患者出现身体上的不适或无法耐受等情况应及时更改放化疗方案或终止放化疗方案，以尽可能避免病情加重，造成过度治疗现象。 中医治疗也是鼻咽癌复发常见的治疗方案，中医药治疗不只是局限在缩小肿块、消灭肿瘤细胞本身，更是从调整人体脏腑功能相协调的全身情况来考虑。通过调节人体的阴阳气血和脏腑经络的生理功能，去除了肿瘤发生的土壤环境，从而改善症状，提高生存质量，提高机体免疲功能，达到抑制肿瘤发展、缓解病情、延长生存期的目的。 相对于放化疗的毒副作用，中医药治疗鼻咽癌复发比较温和，采用天然的中草药，痛苦小、风险低、无毒副反应，而且可以在家治疗，饮食起居，家庭护理，功能锻炼均方便，环境熟悉，可以与周围邻居交流走动，这种家庭化、人性化的环境有利于康复，患者易于接受。 近些年，随着中医药的不断发展，中医药在治疗癌症上也取得了不错的成效，帮助了不少患者减少了痛苦，延长了生命。如临床上，以安全，无毒副作用，费用低，无痛苦，疗效显著受到患者和家属的好评的中医三联平衡疗法。 该疗法治疗注重从患者整体入手，采用天然中草药，通过对不同病人，病因病机的辩证治疗，起到“培元固本”“化痰散结”“排毒减毒”的功效，从而减轻病人痛苦，延长病人生命的效果。 总之，鼻咽癌复发选择哪种方案，这也需要患者自身情况，选择合适的治疗方案，放化疗虽然是常见的治疗方案，但是副作用较大，使用的时候一定要联合中医药治疗，能起到增效减毒的作用，对于复发的鼻咽癌患者来说，中医药治疗，全面调理，控制病情，改善症状，延长患者的生存期。

高中生物复习第4讲核酸、糖类和脂质

第4讲核酸、糖类和脂质 测控导航表 知识点题号 1.糖类、脂质的种类和功能1,2,3,4 2.核酸的种类、分布和功能5,6,7,8 3.观察DNA和RNA在细胞中的分布9,10 4.综合考查11,12,13,14,15 一、选择题 1.(2019·山东菏泽月考)下列有关糖类的叙述,正确的是( C ) A.生物组织中的糖类都可用斐林试剂检测 B.相同质量的糖类中储存的能量比脂肪多 C.细胞膜表面的糖类可与蛋白质或脂质结合 D.蓝藻细胞中糖类是通过化能合成作用合成 解析:还原糖才可以用斐林试剂检测;脂肪的C、H比例比葡萄糖的含量高,同质量的脂肪比糖类含能量多;细胞膜表面含有糖蛋白和糖脂;蓝藻能进行光合作用,合成糖类。 2.下列关于糖类的叙述,正确的是( B ) A.葡萄糖、果糖、半乳糖都是还原糖,但元素组成不同 B.淀粉、糖原、纤维素都是由葡萄糖聚合而成的多糖 C.蔗糖、麦芽糖、乳糖都可与斐林试剂反应生成砖红色沉淀 D.蔗糖是淀粉的水解产物之一,麦芽糖是纤维素的水解产物之一

解析:葡萄糖、果糖、半乳糖都是单糖,都具有还原性,而糖类的元素组成只有C、H、O三种,A项错误。糖原、纤维素和淀粉都是多糖,三者的基本单位都是葡萄糖,B项正确。蔗糖、麦芽糖、乳糖都是二糖,但是蔗糖没有还原性,不能与斐林试剂反应生成砖红色沉淀,C项错误。蔗糖不是淀粉的水解产物之一,麦芽糖不是纤维素的水解产物之一,D项错误。 3.(2017·海南卷)关于哺乳动物体内脂质与糖类的叙述,错误的是( B ) A.固醇在动物体内可转化成性激素 B.C、H、O、P是构成脂质和糖原的元素 C.脂肪与糖原都是细胞内储存能量的物质 D.胆固醇是细胞膜的组分,也参与血脂运输 解析:固醇在动物体内可转化成性激素;脂质包括脂肪、固醇和磷脂,其中脂肪、固醇由C、H、O三种元素构成,磷脂由C、H、O、N、P五种元素构成,糖类由C、H、O三种元素构成;脂肪与糖原都是细胞内储存能量的物质;胆固醇是细胞膜的组分,也参与血脂运输。 4.(2018·福建泉州模拟)如图是油菜种子在发育和萌发过程中糖类 和脂肪的变化曲线。下列分析正确的是( C ) A.干重相等的可溶性糖和脂肪,所储存的能量大致相同

适配体筛选方法研究进展

适配体筛选方法研究进展 王巍 贾凌云* (大连理工大学环境与生命学院生物科学与工程系,大连116023) 摘 要 利用指数富集配体进化技术(SELEX )可获得与目标靶具有特异性结合能力的适配体(寡核苷酸)。经过近20年的研究,适配体被证实可在科研及临床应用中部分取代抗体,是有很大发展前景的技术领域。适 配体技术发展的关键在于对目标靶具有高选择性吸附能力的适配体的筛选和获得。十几年来,以提高筛选效 率和效果为目标的适配体筛选技术不断改进,产生了如消减筛选、复合靶筛选、基因组筛选、毛细管筛选等新 方法,推动了这一技术的发展。本文对现有适配体筛选方法进行了系统的评述。 关键词 适配体,指数富集配体进化技术,筛选方法,评述 2008-09-08收稿;2008-10-26接受 本文系国家自然科学基金(N o .20435020)资助项目 *E-m ai:l l y j 81@dlut https://www.wendangku.net/doc/4e9339574.html, 1 引 言 适配体的概念在1990年由Tuer k 等[1]首次提出,是指利用指数富集的配体进化技术(syste m atic evo l u tion o f li g ands by exponentia l enr i c hm en,t SELEX )从特定的寡核苷酸库中筛选出对目标靶有特异性相互作用的寡核苷酸(DNA 或RNA )。与传统的抗体相比,适配体具有以下特点和优势:(1)对目标靶分子具有与抗体相当甚至更高的亲和性;(2)可以大量、快速的在体外合成,制备方法更为简单快捷; (3)可以针对不同种类的目标靶进行筛选,包括生物毒性的分子以及只具有半抗原性的分子,拓宽了其应用范围;(4)稳定性优于抗体,利于储存。基于适配体的上述优良特性,其在疾病检测、药物研发、临床治疗、分析化学、蛋白质组学以及基因表达调控机理研究等多个领域都有着良好的应用前景。目前,限制适配体技术应用的瓶颈问题仍是适配体的有效筛选技术。希望通过本篇对现存适配体筛选方法的分析与评述,为进一步解决适配体筛选技术中存在的不足提供参考。 2 适配体筛选的总体策略 适配体筛选主要包括以下步骤:(1)确立筛选方法。根据研究目的确定研究对象,明确所获得适配体应具有的特性,以便以此为依据设计具体的筛选方法;(2)建立筛选文库。根据设计的筛选方法建立用于筛选的具有足够数量和适宜长度的RNA 或DNA 组合文库;(3)实施具体筛选策略。根据确立的筛选方法,利用固定化或自由态的目标靶从RNA 或DNA 组合文库中筛选出符合预期目标的适配体。 在步骤(1)中,首先需要根据适配体的用途确定筛选出的适配体应具有的特性。如用于医疗检测目的,为避免假阳性,要求适配体对疾病标志物具有高度的选择性。在筛选过程中就需要尽可能地排除相似物所带来的干扰。若用于生物物质的分离,为增加普适性,则希望作为亲和配基的适配体对一类结构相似的物质具有较好亲和性,在该过程中需要利用多个相似物的目标靶进行反复筛选。在步骤(2)中,为了使筛选过程中获得的寡核苷酸链能够扩增以便反复筛选,RNA 库或DNA 库中的分子均须在两端加上一定长度的引物。影响筛选效果的因素包括随机区域寡核苷酸的类型、长度以及引物区域核苷酸长度。寡核苷酸的长短不仅直接影响到库容,也影响到构象的多样性。实验证实,长度在20~80个寡核苷酸较适于适配体的筛选。此时,初始筛选库中含有超过1010 种分子,理论上包含寡核苷酸能够形成的全部构象。虽然随着寡核苷酸长度的增加,其构像的丰富程度增加,理论上有利于适配体的筛选,但实际上也不尽然。如一种凝血酶适配体只有15个寡核苷酸,虽然筛选伊始使用的寡核苷酸库的随机第37卷 2009年3月 分析化学(FENX I HUAXU E) 评述与进展Ch i nese Journal o fA na l y tica lChe m istry 第3期454~460

【CN110111849A】一种基于高性能计算平台的核酸适配体计算机辅助筛选方法及核酸适配体【专利】

(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910379241.4 (22)申请日 2019.05.08 (71)申请人 北京市计算中心 地址 100094 北京市东城区东四南大街249 号 申请人 北京理工大学 (72)发明人 刘彤　屈锋　裴智勇　刘书霞　 陆晓娟　刘满姣　袁寒玉　杨杰　 (51)Int.Cl. G16B 50/00(2019.01) G16B 30/00(2019.01) (54)发明名称一种基于高性能计算平台的核酸适配体计算机辅助筛选方法及核酸适配体(57)摘要本发明提供了一种基于高性能计算平台的核酸适配体计算机辅助筛选方法，涉及分子生物学检测技术领域，根据匹配原则查询筛选平台集成的数据库系统中是否有与目标蛋白匹配的蛋白结构，如果有则作为受体模板，如果没有则进行同源构建，通过分子动力学模拟和分子对接筛选得到初选的核酸适配体，最为核酸适配体候选物，具有高效、快捷、准确率高的特点。该筛选方法可与“湿法”实验结合，减少“湿法”实验次数，节省实验成本，提高筛选成功率。通过计算机辅助模拟分析得到适配过程中蛋白质与核酸分子间化学反应机理等信息，并将数据在终端进行展示，并在揭示相应生物材料与核酸分子间可能的相互作用机理方面提供数据支撑，因此具有重要 的研究意义和使用价值。权利要求书2页 说明书11页 附图2页CN 110111849 A 2019.08.09 C N 110111849 A

权　利　要　求　书1/2页CN 110111849 A 1.一种基于高性能计算平台的核酸适配体计算机辅助筛选方法，其特征在于，包括： 步骤一，对数据库进行筛选，筛选出具有蛋白A相应结构的蛋白质数据库和核酸数据库，蛋白A为目标蛋白； 步骤二，对经过第一步筛选后的数据库进行下载，并对所述经过第一步筛选后的所述数据库中的数据进行数据处理，所述经过第一步筛选后的数据库和经过第一步筛选后的所述数据库中的数据存储录入筛选平台数据库系统中； 步骤三，搭建核酸适配体计算生物学筛选平台进行核酸适配体筛选； 包括：蛋白体系的构建： 所述蛋白体系的构建包括： S01：根据匹配原则查询所述筛选平台数据库系统中是否有与所述蛋白A匹配的蛋白结构： 如果所述筛选平台数据库系统中具有与所述蛋白A匹配的蛋白结构，则下载所述蛋白结构作为受体模板； 如果所述筛选平台数据库系统中没有与所述蛋白A匹配的蛋白结构，则进行同源构建； S02：根据所述受体模板或所述同源构建方法构建A蛋白三维结构； S03：对所述蛋白A进行分子动力学模拟，获得A蛋白稳定结构； S04：将所述蛋白A稳定结构与所述筛选平台数据库系统中的核酸分子进行对接；判断所述蛋白A稳定结构与所述核酸分子是否对接成功： 如果对接成功，则所述核酸分子为初选核酸适配体。 2.根据权利要求1所述的基于高性能计算平台的核酸适配体计算机辅助筛选方法，其特征在于，步骤二中所述数据处理包括：对经过所述第一步筛选后的所述数据库需求数据，从后台下载，对所述需求数据进行统一整合形成存储数据，存储录入筛选平台中数据库系统中。 3.根据权利要求2所述的基于高性能计算平台的核酸适配体计算机辅助筛选方法，其特征在于，所述存储数据包含蛋白的三维晶体结构序列信息、名称信息，将所述存储数据录入相应的后台数据库表格中，用以后续的存取、调用和删减操作。 4.根据权利要求1所述的基于高性能计算平台的核酸适配体计算机辅助筛选方法，其特征在于，所述S01步骤中是在所述筛选平台数据库系统中的所述蛋白质数据库进行查询；所述S04步骤中是与所述筛选平台数据库系统中的所述核酸数据库中的核酸分子进行对接。 5.根据权利要求1所述的基于高性能计算平台的核酸适配体计算机辅助筛选方法，其特征在于，所述S03步骤中所述分子动力学模拟过程包括： S0301：构建所述蛋白A格式文件； S0302：选择与所述蛋白A格式文件合适的力场文件； S0303：提交所述蛋白A格式文件与所述力场文件，进行计算。 6.根据权利要求1所述的基于高性能计算平台的核酸适配体计算机辅助筛选方法，其特征在于，所述S04步骤中所述核酸分子对接过程包括：安装分子对接软件； 还包括： S0401：构建与所述蛋白A进行分子对接的格式文件； 2

毛细管电泳在核酸适配体研究及核酸适配体筛选中的应用

收稿:2008年8月,收修改稿:2008年9月 　3国家自然科学基金项目(N o.20875009)和国家重点基础研究发展规划(973)项目(N o.2007C B914101)资助33C orresponding author e 2mail :qu fengqu @https://www.wendangku.net/doc/4e9339574.html, 毛细管电泳在核酸适配体研究及核酸 适配体筛选中的应用 3 屈　锋 133 　刘　允1　任肖敏1　赵新颖2　张经华 2 (1.北京理工大学生命科学与技术学院　北京100081;2.北京市理化分析测试中心　北京100089) 摘　要　核酸适配体是指通过指数富集配体系统进化(SE LEX )技术从随机寡核苷酸文库中筛选得到的 高亲和性与特异性的寡核苷酸序列配体。毛细管电泳是高效、快速、低成本的微量分离分析技术。应用毛细管电泳高效、快速筛选核酸适配体是近几年出现的新方法。本文介绍了核酸适配体筛选过程中的主要分离方法如亲和色谱、醋酸纤维素膜、凝胶电泳和磁性分离等方法,并对近年来毛细管电泳在核酸适配体中的亲和作用研究以及用于核酸适配体筛选(CE 2SE LEX )的主要方法(ECEE M ,NECEE M ,N on 2SE LEX 和三者比较)和研究进展进行了综述。 关键词　核酸适配体　毛细管电泳　核酸适配体筛选中图分类号:O65718;Q524　文献标识码:A 文章编号:10052281X (2009)07Π821576207 Application of C apillary E lectrophoresis in Aptamers Study and Aptamers Sieving Q üFeng 133 　Liu Yun 1 　Ren Xiaomin 1 　Zhao Xinying 2 　Zhang Jinghua 2 (1.School of Life Science &T echnology ,Beijing Institute of T echnology ,Beijing 100081,China ; 2.Beijing Center for Physical and Chemical Analysis ,Beijing 100089,China ) Abstract Aptamers ,DNA or RNA olig onucleotides obtains by systematic ev olution of ligands by exponential enrichment (SE LEX )from a random olig onucleotide library ,which exhibit high affinity and specificity to a wide variety of targets.Capillary electrophoresis ,a micro 2separation method with advantages of high performance ,high speed and low cost ,has been applied in aptamers sieving in recent years.This article introduces the separation methods in aptamers sieving process such as affinity chromatography ,nitrocellulose filter ,gel electrophoresis ,magnetic bead separation and s o on.The aptamer affinity interaction studied by capillary electrophoresis ,the methods of CE 2SE LEX (ECEE M ,NECEE M ,N on 2SE LEX and com paris on of them )in aptamer sieving and advances of CE 2SE LEX are reviewed. K ey w ords aptamers ;capillary electrophoresis ;aptamer sieving Contents 1　Introduction 2　Separation methods in SE LEX 3　Studied of aptamers affinity interaction by capillary electrophoresis 4　Capillary electrophoresis methods in aptamers sieving 411　NECEE M 412　ECEE M 413　N on 2SE LEX 414　C om paris on of NECEE M ,ECEE M and N on 2SE LEX 5　Application of CE in aptamers sieving 6　Prospects 第21卷第7Π8期2009年8月 化　学　进　展 PROG RESS I N CHE MISTRY V ol.21N o.7Π8 　Aug.,2009

鼻咽癌病例

鼻咽癌病例： 1、吴志勇，男，出生年月：1976年12月22日，住院年龄26岁，住院号0616914，住院 时间：2002年12月28日－2003年1月10日。 患者2个月前无明显诱因出现反复右鼻出血，每次量不多，可自止，近3－4天，吸鼻有涕中带血，门诊鼻咽纤维喉镜检查发现鼻咽肿物。发病以来，有鼻塞，无头痛、嗅觉障碍、视力下降、耳鸣、复视等。体查：鼻咽部顶后壁可见结节状肿物，表面光滑，色淡红，覆有较多脓性分泌物，全身淋巴结无肿大。1月3日行鼻内镜下鼻咽肿物活检术，病理报告：鼻咽未分化型非角化性癌。 2、冯耀棠，男，出生年月：1954年4月2日，住院年龄48岁，住院号：0619584，住院时 间：2003年2月24日－2003年3月6日。 患者10月前无明显诱因出现说话含糊不清，咽部有异物感，并伴有左侧肢体不适，跛行，当地医院检查“未见明显异常”。2个月前患者无意中发现左颈部肿物，颈部肿物无红肿热痛，逐渐增大，伴左眼视力下降，无复视，我院门诊检查发现鼻咽肿物。起病以来，无头痛鼻塞，无耳鸣涕血，无声嘶咽痛。鼻内镜下见鼻咽左侧壁膨隆，表面尚光滑。2月28日行鼻咽部肿物活检术，3天后病理回复：鼻咽低分化鳞癌。免疫组化示：鼻咽未分化型非角化性癌。 3、蔡润波，男，出生年月：1981年6月4日，住院年龄23岁，住院时间：2004年11月 26日－2004年12月2日，住院号：0659245。 患者4个月前无明显诱因出现右耳闷塞感，渐听力下降，伴间歇性耳鸣，在当地医院诊断：分泌性中耳炎，并行鼓膜穿刺抽液，但患者症状仍反复发作，鼻内镜检查发现鼻咽部新生物。发病以来，无涕中带血，无头痛，无复视及视力下降。体查：鼻咽部右顶见一新生物，表面光滑，充血，大小约1×2cm大小，堵塞右侧咽鼓管。11月29日行鼻内镜下鼻咽肿物活检术，12月1日病理示未分化非角化性癌。

早期鼻咽癌的治疗方法

早期鼻咽癌的治疗方法 鼻咽癌的治疗方法的选择是根据鼻咽癌本身的生物学行为来决定的，鼻咽癌一旦得了以后生长比较迅速，因为鼻咽癌常常都是低分化或者分化差的癌，这类肿瘤第一生长快，第二细胞的恶性程度高，而对射线比较敏感。 目前对于鼻咽癌的治疗手段首选是放射治疗，早期的鼻咽癌单纯放射治疗的五年生存率可以达到80%。随着一些新的技术手段的应用，对于中晚期的鼻咽癌，用适形调强的放疗，这是放射治疗一个新的技术，还有做同步放化疗，在放疗的同时应用化疗使放射的敏感性提高，这样使得一些中晚期的鼻咽癌患者也得到有效的根治。鼻咽癌治疗之后的五年生存率在十年前大概是在56%左右，现在经过新的技术的引进还有一些新的药物的使用，鼻咽癌的疗效五年生存率达到70%以上。 哪些鼻咽癌患者适合进行手术？ 鼻咽癌经过放疗可以使患者长期生存，早期可以达到根治的效果，但是它跟全身任何肿瘤一样有局部复发的可能。临床上叫鼻咽癌放疗失败后再处理，在以前没有更好的手术技巧和手术手段选择的情况下，都是采用继续做放疗，一程放疗之后肿瘤复发再继续做二程、三程的放化疗。射线累计对于人体的影响是不可修复的，所以放射的治疗剂量也是有限的，而且超剂量的放疗，放射对人引起的损害甚至可以致人死亡。 我们国家早在上世纪60年代初外科进行过一些干预，放疗失败以后或者放疗以后复发的病人在没有办法的情况下，经过选择做了一部分外科手术发现治疗效果很好，以后随着科学技术的发展，比如抗生素的应用、先进医疗器械的采用、手术方法的改进，这样我们扩大了手术适应症的范围，经过选择以后有相当一批放疗以后复发的病人经过手术治疗达到根治的效果。 鼻咽部属于人的面部中间，手术会不会留下疤痕？鼻咽癌手术会不会对人的容貌产生大的影响？ 通过目前手术方式的改进，鼻咽癌治疗有不同的手术方式，对于早期的病变可以采取比较小的手术，甚至可以只在口腔里面做。这样的话，病人手术以后对他没有任何影响。还有一些鼻咽内窥镜的应用，使得比较早期比较局限的鼻咽癌不用开刀只在内窥镜里面切掉或者用

遗传信息的携带者——核酸 知识点总结与重难点

遗传信息的携带者——核酸 细胞中的糖类和脂质 知识点一 核酸的组成、结构与功能 1．核酸的结构层次 2．DNA 和RNA 的组成成分比较 (1)相同成分：含氮碱基A 、G 、C 和磷酸。 (2)不同成分? ???? DNA ：脱氧核糖、胸腺嘧啶 RNA ：核糖、尿嘧啶 【特别提醒】A TP 、核苷酸、DNA 、RNA 中“A”的辨析 3．核酸的功能与分布 (1) (2) 4．生物大分子以碳链为骨架

【归纳总结】 (1)同种生物不同细胞中DNA一般相同，由于基因的选择性表达，mRNA不完全相同，蛋白质种类和含量也不完全相同。 (2)核酸与蛋白质在不同生物体中具有物种的特异性，因而可以从分子水平上，通过分析核酸、蛋白质的相似程度来推断物种亲缘关系的远近。 (3)RNA作为遗传物质的前提是生物体内不存在DNA。当RNA作为遗传物质时，由于RNA单链结构不稳定，容易发生突变。生物体内的少数RNA具有催化功能。 【知识拓展】 1．核酸与蛋白质的比较 2.DNA多样性、蛋白质多样性和生物多样性的关系 3．核DNA、mRNA、蛋白质的“相同”与“不同”

知识点二糖类、脂质的种类和作用1．细胞中的糖类 (1)组成元素：仅由C、H、O元素构成。 (2)种类和功能 2．细胞中的脂质 3．糖类和脂质的比较

知识点三观察DNA和RNA在细胞中的分布 1．实验原理 (1)DNA主要分布在细胞核中，RNA大部分存在于细胞质中。 (2)甲基绿和吡罗红对DNA、RNA的亲和力不同。利用甲基绿、吡罗红混合染色剂将细胞染色，可显示DNA 和RNA在细胞中的分布情况。DNA＋甲基绿→绿色；RNA＋吡罗红→红色。 (3)盐酸作用：改变细胞膜的通透性→加速染色剂进入细胞；使染色质中的DNA与蛋白质分离→有利于DNA 与染色剂结合。 2．实验步骤

基于核酸适配体化学发光检测新技术(精)

基于核酸适配体化学发光检测新技术 核酸适配体是近年来发展起来的一类经体外人工合成筛选出的单链寡核苷酸,能高效、特异性地结合各种生物目标分子,故它的出现为化学生物学界和生物医学界提供了一种新的高效快速识别的研究平台。目前生物分子检测通常采用抗原抗体特异相互作用识别模式,但由于受到抗体易失活、制备时间较长等因素的影响,在一定程度上限制了抗体检测技术的广泛应用。相比之下,核酸适配体自身稳定性好、制备合成相对简单、快速、易获得、易功能化修饰与标记,且在生物传感器设计中应用灵活等优点,近几年在生物分析检测方面备受关注。目前已经成为临床诊断、环境监测、药学研究等许多领域中的研究热点。化学发光(CL)分析法具有不需光源,避免了杂散光的干扰,仪器设备简单、操作简便,具有极高的灵敏度,较宽的检测范围,可实现全自动化等特点,正逐渐成为分析检测中极为有用的工具,随着与众多学科交叉研究和应用领域的扩展,目前已成功地应用在药学、生物学、分子生物学、临床医学和环境学等诸多领域。在本论文中,我们采用化学发光分析法,利用核酸适配体对目标分子的高分辨识别,发展了多种具有创新意义的化学发光适配体生物传感器,也实现了同一份样品中双组分的同时检测。整个论文由以下五部分构成:第一章:绪论本绪论由两节构成,第一节介绍了核酸适配体技术检测生物分子的研究进展,包括了三部分。第一部分中简单介绍了核酸适配体的制备、特点、优势以及在分析领域中的应用;第二部分中介绍了基于核酸适配体识别模式的单组分检测技术的研究进展及其意义,主要内容包括:光检测、电化学检测以及其他检测方法,并列举了近年来分析领域中的部分典型示例;第三部分中介绍了基于核酸适配体识别模式的多组分检测技术的研究进展及其意义,也列举了近年来它们在该分析领域中的部分典型示例。第二节阐述了化学发光多组分酶检测研究进展以及本课题研究的目的、意义、主要研究内容以及创新之处,即核酸适配体在化学发光领域中应用与展望。第二章:基于核酸适配体的化学发光无标记检测腺苷的新技术由于目标分子在适配体上精确的结合位点与构象变化通常并不十分清楚,直接导致合适标记核酸适配体存在一定的难度,因此,适配体的无标记型检测技术已成为近年来的研究热点,尤其在生物检测、环境监控等领域无标记简单快速检测具有非常重要的意义。本章以腺苷为研究对象,采用羧基修饰的磁性微球作为分离载体,基于3,4,5-三甲氧基苯甲酰甲醛(TMPG)与鸟嘌呤(G)碱基之间的瞬时化学发光衍生反应,实现了生物小分子腺苷的无标记检测。本章包括以下两种腺苷检测原理的设计,具体实验步骤如下:(1)活化磁性微球,固定捕获探针序列;(2)方法A:一定量的适配体先与不同量的腺苷特异性结合,随后剩余的自由腺苷适配体与捕获探针序列在磁性微球表面进行杂交反应,从而连接在磁性微球上;方法B:适配体先与捕获探针序列进行杂交反应,随后加入不同量的腺苷,导致部分适配体序列脱离磁性微球表面,与溶液中腺苷形成复合物;(3)磁性分离后,TMPG直接检测结合在磁性微球表面的适配体中G碱基产生的CL信号,进行腺苷间接定量。结果表明:该两种方法均具有准确可靠、重现性和选择性好的特点。第一种方法的最低腺苷检测限为8×10~(-8)M,腺苷浓度在4×10~(-7)-1×10_(-5)M范围内,CL 信号呈线性增加(R~2=0.9852);第二种方法的腺苷浓度在4×10~(- 2)5×10(_5)M范围内,CL信号呈线性增加(R~=0.9764)。综合而言:本章发展的无标记检测生物小分子腺苷的CL新技术,具有简单,快速,灵敏度高等特点,有望在临床诊断、药学研究以及环境监测等领域发挥作用。第三章:基于核酸适配体