常用pGEX载体图谱
Rosetta系列的表达菌株可以提供T7 RNA聚合酶，它能表达PET系列载体上的外源基因。。。pGEX系列载体上的外源基因不需要T7 RNA聚合酶，普通的大肠杆菌经IPTG诱导即可表达
Tac启动子是一组由Lac和trp启动子人工构建的杂合启动子，受Lac阻遏蛋白的负调节，它的启动能力比Lac和trp都强。其中Tac 1是由Trp启动子的－35区加上一个合成的46 bp DNA片段(包括Pribnow 盒)和Lac操纵基因构成，Tac 12是由Trp的启动子-35区和Lac 启动子的-10区，加上Lac操纵子中的操纵基因部分和SD序列融合而成
蛋白标签：
pGEX4T1载体基本信息
出品公司: GE
别名: pGEX-4T-1, pGEX4T1, pGEX 4T 1
质粒类型: 大肠杆菌蛋白表达载体
表达水平: 高拷贝
启动子: Tac
克隆方法: 多克隆位点，限制性内切酶
载体大小: 4969 bp
5' 测序引物及序列: pGEX5': GGGCTGGCAAGCCACGTTTGGTG
3' 测序引物及序列: pGEX3': CCGGGAGCTGCATGTGTCAGAGG
载体标签: N-GST
载体抗性: Ampicillin 氨苄
备注: 复制子是pMB1
产品目录号: 27-4580-01
稳定性: 瞬时表达 Transient
组成型: 诱导表达
病毒/非病毒: 非病毒
pGEX4T1载体质粒图谱和多克隆位点信息
原核生物DNA复制起始点，是DNA链上独特的具有起始DNA复制功能的碱基序列。大肠杆菌的复制起
pGEX4T1载体简介
pGEX4T1载体序列
LOCUS pGEX-4T-1 4969 bp DNA circular SYN DEFINITION pGEX-4T-1
ACCESSION
KEYWORDS
SOURCE
ORGANISM other sequences; artificial sequences; vectors. COMMENT This file is created by Vector NTI
https://www.wendangku.net/doc/4f9835719.html,/
COMMENT VNTAUTHORNAME|https://www.wendangku.net/doc/4f9835719.html,|
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..4969
/organism="pGEX-4T-1"
/mol_type="other DNA"
promoter 184..212
/label="tac_promoter"
misc_feature 224..246
/label="M13_pUC_rev_primer"
gene 258..977
/label="GST (variant)"
/gene="GST (variant)"
CDS 258..977
/label="ORF frame 3"
/label="pGEX_3_primer"
promoter 1307..1335
/label="AmpR_promoter"
gene 1377..2237
/label="Ampicillin"
/gene="Ampicillin"
CDS 1377..2237
/label="ORF frame 3"
rep_origin 2392..3011
/label="pBR322_origin"
misc_feature 3309..4400
/label="lacI"
CDS 3441..4400
/label="ORF frame 3"
promoter 4449..4478
/label="lac_promoter"
misc_feature 4492..4514
/label="M13_pUC_rev_primer" promoter 4513..4531
/label="M13_reverse_primer" CDS 4523..81
/label="ORF frame 2"
misc_feature 4540..4695
/label="lacZ_a"
/label="M13_forward20_primer"
misc_feature complement(4552..4574)
/label="M13_pUC_fwd_primer"
pGEX4T2载体基本信息
出品公司: GE
别名: pGEX-4T-2, pGEX4T2, pGEX 4T 2 质粒类型: 大肠杆菌蛋白表达载体
表达水平: 高拷贝
启动子: Tac
克隆方法: 多克隆位点，限制性内切酶
载体大小: 4970 bp
5' 测序引物及序列: pGEX5': GGGCTGGCAAGCCACGTTTGGTG 3' 测序引物及序列: pGEX3': CCGGGAGCTGCATGTGTCAGAGG 载体标签: N-GST
载体抗性: Ampicillin 氨苄
备注: 复制子是pMB1
产品目录号: 27-4581-01
稳定性: 瞬时表达 Transient
组成型: 诱导表达
病毒/非病毒: 非病毒
pGEX4T2载体质粒图谱和多克隆位点信息
pGEX4T2载体简介
pGEX4T2载体序列
LOCUS pGEX-4T-2 4970 bp DNA circular SYN DEFINITION pGEX-4T-2
ACCESSION
KEYWORDS
SOURCE
ORGANISM other sequences; artificial sequences; vectors. COMMENT This file is created by Vector NTI
https://www.wendangku.net/doc/4f9835719.html,/
COMMENT VNTAUTHORNAME|https://www.wendangku.net/doc/4f9835719.html,|
FEATURES Location/Qualifiers
/organism="pGEX-4T-2"
/mol_type="other DNA"
promoter 184..212
/label="tac_promoter"
misc_feature 224..246
/label="M13_pUC_rev_primer" gene 258..978
/label="GST (variant)"
/gene="GST (variant)"
CDS 258..974
/label="ORF frame 3"
misc_feature complement(1020..1042)
/label="pGEX_3_primer"
promoter 1308..1336
/label="AmpR_promoter"
gene 1378..2238
/label="Ampicillin"
/gene="Ampicillin"
CDS 1378..2238
/label="ORF frame 1"
rep_origin 2393..3012
/label="pBR322_origin"
misc_feature 3310..4401
/label="lacI"
/label="ORF frame 1"
promoter 4450..4479
/label="lac_promoter"
misc_feature 4493..4515
/label="M13_pUC_rev_primer"
promoter 4514..4532
/label="M13_reverse_primer"
CDS 4524..81
/label="ORF frame 3"
misc_feature 4541..4696
/label="lacZ_a"
promoter complement(4544..4560)
/label="M13_forward20_primer" misc_feature complement(4553..4575)
/label="M13_pUC_fwd_primer" pGEX4T3载体质粒图谱和多克隆位点信息
pGEX4T3载体简介
pGEX4T3载体序列
LOCUS pGEX-4T-3 4968 bp DNA circular SYN DEFINITION pGEX-4T-3
ACCESSION
KEYWORDS
SOURCE
ORGANISM other sequences; artificial sequences; vectors. COMMENT This file is created by Vector NTI
https://www.wendangku.net/doc/4f9835719.html,/
COMMENT VNTAUTHORNAME|https://www.wendangku.net/doc/4f9835719.html,|
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..4968
/mol_type="other DNA"
promoter 184..212
/label="tac_promoter"
misc_feature 224..246
/label="M13_pUC_rev_primer" gene 258..976
/label="GST (variant)"
/gene="GST (variant)"
CDS 258..980
/label="ORF frame 3"
misc_feature complement(1018..1040)
/label="pGEX_3_primer"
promoter 1306..1334
/label="AmpR_promoter"
gene 1376..2236
/label="Ampicillin"
/gene="Ampicillin"
CDS 1376..2236
/label="ORF frame 2"
rep_origin 2391..3010
/label="pBR322_origin"
misc_feature 3308..4399
/label="lacI"
CDS 3440..4399
promoter 4448..4477
/label="lac_promoter"
misc_feature 4491..4513
/label="M13_pUC_rev_primer"
promoter 4512..4530
/label="M13_reverse_primer"
CDS 4522..81
/label="ORF frame 1"
misc_feature 4539..4694
/label="lacZ_a"
promoter complement(4542..4558)
/label="M13_forward20_primer"
misc_feature complement(4551..4573)
/label="M13_pUC_fwd_primer"
pGEX6P1载体基本信息
出品公司: GE
别名: pGEX-6P-1, pGEX6P1, pGEX 6P 1 质粒类型: 大肠杆菌蛋白表达载体
表达水平: 高拷贝
启动子: Tac
克隆方法: 多克隆位点，限制性内切酶
载体大小: 4984 bp
5' 测序引物及序列: pGEX5': GGGCTGGCAAGCCACGTTTGGTG 3' 测序引物及序列: pGEX3': CCGGGAGCTGCATGTGTCAGAGG 载体标签: N-GST
载体抗性: Ampicillin 氨苄
备注: 复制子是pMB1
产品目录号: 27-4597-01
稳定性: 瞬时表达 Transient
组成型: 诱导表达
病毒/非病毒: 非病毒
pGEX6P1载体质粒图谱和多克隆位点信息
pGEX6P1载体简介
pGEX6P1载体序列
LOCUS pGEX-6P-1 4984 bp DNA circular SYN DEFINITION pGEX-6P-1
ACCESSION
KEYWORDS
SOURCE
ORGANISM other sequences; artificial sequences; vectors. COMMENT This file is created by Vector NTI
https://www.wendangku.net/doc/4f9835719.html,/
COMMENT VNTAUTHORNAME|https://www.wendangku.net/doc/4f9835719.html,|
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..4984
/organism="pGEX-6P-1"
/mol_type="other DNA"
promoter 184..212
/label="tac_promoter"
misc_feature 224..246
/label="M13_pUC_rev_primer"
gene 258..992
/label="GST"
/gene="GST"
CDS 258..992
/label="ORF frame 3"
misc_feature 918..938
/label="precision"
misc_feature complement(1034..1056)
/label="pGEX_3_primer"
promoter 1322..1350
/label="AmpR_promoter"
gene 1392..2252
/label="Ampicillin"
/gene="Ampicillin"
CDS 1392..2252
/label="ORF frame 3"
rep_origin 2407..3026
/label="pBR322_origin"
misc_feature 3324..4415
/label="lacI"
CDS 3456..4415
/label="ORF frame 3"
promoter 4464..4493
/label="lac_promoter"
misc_feature 4507..4529
/label="M13_pUC_rev_primer"
promoter 4528..4546
/label="M13_reverse_primer"
CDS 4538..81
/label="ORF frame 2"
misc_feature 4555..4710
/label="lacZ_a"
promoter complement(4558..4574)
/label="M13_forward20_primer" misc_feature complement(4567..4589)
/label="M13_pUC_fwd_primer"
pET28a载体基本信息
出品公司: EMD Biosciences (Novagen)
别名: pET28a, pet 28a, pET-28a(+) 质粒类型: 大肠杆菌蛋白表达
表达水平: 高
克隆方法: 多克隆位点，限制性内切酶
载体大小: 5369 bp
5' 测序引物及序列: T7: 5'-TAATACGACTCACTATAGGG-3' 3' 测序引物序列: T7t: 5'-GCTAGTTATTGCTCAGCGG-3' 载体标签: N-His, N-Thrombin, N-T7, C-His
载体抗性: 卡那
备注: N端含有Thrombin蛋白酶切位点; pET28a, b, c 的差异仅仅存在于多克隆位点处。
产品目录号: 69864-3
稳定性: 瞬时表达 Transient
组成型: 组成型 Constitutive 病毒/非病毒: 非病毒
pET28a载体质粒图谱和多克隆位点信息
pET28a载体简介
pET-28a-c(+)载体带有一个N端的His/Thrombin/T7蛋白标签，同时含有一个可以选择的C端His 标签。pET28a载体的单一的多克隆位点见上面的环状质粒图谱。注意：载体序列是以pBR322质粒的编码规矩进行编码的，所以T7蛋白表达区在质粒图谱上面是反向的。
T7 RNA聚合酶启动的克隆和表达区域在质粒图谱中也被标注了出来。质粒的F1复制子是被定向的，所以在T7噬菌体聚合酶的作用下，包含有蛋白编码序列的病毒粒子能够产生，并启动蛋白表达，同时蛋白表达将被T7终止子序列(Cat. No. 69337-3)的作用下终止蛋白翻译。
pET30a载体基本信息
出品公司: EMD Biosciences (Novagen)
别名: pET30a, pet 30a
质粒类型: 大肠杆菌蛋白表达
表达水平: 高
克隆方法: 多克隆位点，限制性内切酶
载体大小: 5422 bp
5' 测序引物及序列: T7: 5'-TAATACGACTCACTATAGGG-3'
3' 测序引物序列: T7t: 5'-GCTAGTTATTGCTCAGCGG-3' 载体标签: N-His, N-S, N-Thrombin, N-EK, C-His
载体抗性: 卡那
备注: pET30a, b, c的差异只存在于多克隆位点，其他位点不存在。
产品目录号: 69909-3
稳定性: 瞬时表达
组成型: 组成型
病毒/非病毒: 非病毒pET30a载体质粒图谱和多克隆位点信息
维真生物-如何阅读基因载体图谱
如何阅读基因载体图谱 基因载体是基因工程的核心，也是基因治疗中强有力的生物工具，我们先来认识和阅读载体图谱吧。 一、载体分类及载体组成元件 载体分类 1、按属性分类：病毒载体和非病毒载体 病毒载体是一种常见的分子生物学工具，可将遗传物质带入细胞，原理是利用病毒具有传送其基因组进入目的细胞，进行感染的分子机制。可发生于完整活体或是细胞培养中。可应用于基础研究、基因疗法或疫苗。用于基因治疗和疫苗的病毒载体应具备以下基本条件： （1）携带外源基因并能包装成病毒颗粒； （2）介导外源基因的转移和表达； （3）对人体不致病； （4）在环境中不会引起增殖和传播。 非病毒载体一般是指质粒DNA。 2、按进入受体细胞的类型分类：原核载体、真核载体、穿梭载体（含原核和真核2个复制子，能在原核和真核细胞中复制，并可以在真核细胞中有效表达）。 3、按功能分类：克隆载体、表达载体 克隆载体：具有克隆载体的基本元件（Ori，Ampr，MCS等），可以携带DNA片段或外源基因进入受体细胞并克隆和大量扩增DNA片段（外源基因）的载体。 表达载体：克隆载体中加入一些与表达调控（具有转录/翻译所必需的DNA顺序）有关的元件即成为表达载体。 载体组成元件 1、复制起始位点Ori：即控制复制起始的位点。Ori的箭头指复制方向，其他元件标注的箭头多指转录方向（正向）。 2、抗生素抗性基因：可以便于加以检测，如Amp+ ，Kan+ （1）Ampr：水解β-内酰胺环，解除氨苄的毒性。
（2）tetr ：可以阻止四环素进入细胞。 （3）camr：生成氯霉素羟乙酰基衍生物，使之失去毒性。 （4）neor（kanr）：氨基糖苷磷酸转移酶，使G418（卡那霉素衍生物）失活。 （5）hygr：使潮霉素β失活。 3、多克隆位点：MCS克隆携带外源基因片段，它具有多个限制酶的单一切点，便于外源基因的插入。如果在这些位点外有外源基因的插入，会导致某种标志基因的失活，便于筛选。决定能不能放目的基因以及如何放置目的基因。还要再看外源DNA插入片段大小。质粒一般只能容纳小于10kb的外源DNA片段。一般来说，外源DNA片段越长，越难插入，越不稳定，转化效率越低。 4、P/E：启动子/增强子 5、Terms：终止信号 6、加poly（A）信号：可以起到稳定mRNA作用 示例阅读载体： pENTER载体 1）human ORF + pENTER载体 2） CMV启动子，T7启动子 3） ORF的C端融合了Flag和His tag 4) 多克隆位点，常用AsisI 和 MluI(人源基因上不常见的)
如何阅读分析质粒图谱
如何阅读分析质粒图谱 日期：2012-04-18来源：未知作者：xilu点击：次 如何阅读分析质粒图谱 载体主要有病毒和非病毒两大类,其中质粒DNA是一种新的非病毒转基因载体。 一个合格质粒的组成要素 1. 复制起始位点Ori即控制复制起始的位点。原核生物DNA分子中只有一个复制起始点。而真核生物DNA分子有多个复制起始位点。 2. 抗生素抗性基因可以便于加以检测，如Amp+ ,Kan+ 3. 多克隆位点MCS 克隆携带外源基因片段 4. P/E 启动子/增强子 5. Terms 终止信号 6. 加poly(A)信号可以起到稳定mRNA作用 如何阅读质粒图谱 第一步：首先看Ori的位置，了解质粒的类型(原核/真核/穿梭质粒) 所谓穿梭质粒是指一类人工构建的具有两种不同复制起点和选择标记，因而可以在两种不同类群宿主中存活和复制的质粒载体。此概念不仅用于不同的微生物菌群之间，也可以推广到真核生物表达载体的构建，如用于枯草的pBE2、酵母的pPIC9K、哺乳动物表达载体pMT2 和用于植物细胞的Ti 质粒。这些穿梭质粒不仅可以在大肠杆菌中复制扩增，也可以在相应的枯草、酵母、动物或植物细胞中扩增和表达。这样利于对质粒的分子生物学操作和大量制备。 第二步：再看筛选标记，如抗性，决定使用什么筛选标记。 1. Ampr水解β-内酰胺环，解除氨苄的毒性。 2. tetr可以阻止四环素进入细胞。 3. camr生成氯霉素羟乙酰基衍生物，使之失去毒性。
4. neor(kanr) 氨基糖苷磷酸转移酶使G418(长那霉素衍生物)失活 5. hygr使潮霉素β失活。 第三步：看多克隆位点(MCS)。它具有多个限制酶的单一切点。便于外源基因的插入。如果在这些位点外有外源基因的插入，会导致某种标志基因的失活，而便于筛选。决定能不能放目的基因以及如何放置目的基因。 第四步：再看外源DNA插入片段大小。质粒一般只能容纳小于10Kb的外源DNA片段。一般来说，外源DNA片段越长，越难插入，越不稳定，转化效率越低。 第五步：是否含有表达系统元件，即启动子-核糖体结合位点-克隆位点-转录终止信号。这是用来区别克隆载体与表达载体。克隆载体中加入一些与表达调控有关的元件即成为表达载体。选用那种载体，还是要以实验目的为准绳。 启动子-核糖体结合位点-克隆位点-转录终止信号
如何阅读质粒图谱(更新版本)
如何阅读质粒图谱 最近由于实验需要,需要查阅载体图谱,到园子里搜罗一番,发现虽然有人问载体图谱阅读的问题,也有前辈回答,但都不详细,借自己也在琢磨这个问题的机会,将我学到的东西整理一下,于 大家分享。 载体主要有病毒和非病毒两大类,其中质粒DNA是一种新的非病毒转基因载体。 一个合格质粒的组成要素 #复制起始位点Oril 即控制复制起始的位点。原核生物DNA分子中只有一个复制起始点。而真核生物DNA分子有多个复制起始位点。 ＃抗生素抗性基因可以便于加以检测，如Amp+l ,Kan+ ＃多克隆位点MCS 克隆携带外源基因片段l ＃P/E 启动子/增强子l ＃Termsl 终止信号 ＃加poly（A）信号l 可以起到稳定mRNA作用 二、如何阅读质粒图谱 第一步：首先看Ori的位置，了解质粒的类型（原核/真核/穿梭质粒） 第二步：再看筛选标记，如抗性，决定使用什么筛选标记。 （1）Ampr 水解β－内酰胺环，解除氨苄的毒性。 （2）tetr 可以阻止四环素进入细胞。 （3）camr 生成氯霉素羟乙酰基衍生物，使之失去毒性。 （4）neor（kanr）氨基糖苷磷酸转移酶使G418（卡那霉素衍生物）失活 （5）hygr 使潮霉素β失活。 第三步：看多克隆位点（MCS）。它具有多个限制酶的单一切点。便于外源基因的插入。如果在这些位点外有外源基因的插入，会导致某种标志基因的失活，而便于筛选。决定能不能放目的基因以及如何放置目的基因。 第四步：再看外源DNA插入片段大小。质粒一般只能容纳小于10Kb的外源DNA片段。一般来说，外源DNA片段越长，越难插入，越不稳定，转化效率越低。 第五步：是否含有表达系统元件，即启动子－核糖体结合位点－克隆位点－转录终止信号。这是用来区别克隆载体与表达载体。克隆载体中加入一些与表达调控有关的元件即成为表达载体。选用那种载体，还是要以实验目的为准绳。 启动子－核糖体结合位点－克隆位点－转录终止信号 ＃启动子－促进DNA转录的DNA顺序，这个DNA区域常在基因或操纵子编码顺序的上游，是DNA分子上可以与RNApol特异性结合并使之开始转录的部位，但启动子本身不被转录。 ＃增强子/沉默子－为真核基因组（包括真核病毒基因组）中的一种具有增强邻近基因转录过程的调控顺序。其作用与增强子所在的位置或方向无关。即在所调控基因上游或下游均可发挥作用。/沉默子－负增强子，负调控序列。 ＃核糖体结合位点/起始密码/SD序列（Rbs/AGU/SDs）：mRNA有核糖体的两个结合位点，对于原核而言是AUG（起始密码）和SD序列。l ＃转录终止顺序（终止子）/翻译终止密码子：结构基因的最后一个外显子中有一个AATAAA的保守序列，此位点down－stream有一段GT或T富丰区，这2部分共同构成poly（A）加尾信号。
质粒图谱的阅读方法
---------------------------------------------------------------最新资料推荐------------------------------------------------------ 质粒图谱的阅读方法 质粒图谱的阅读方法载体主要有病毒和非病毒两大类,其中质粒 DNA 是一种新的非病毒转基因载体。 一、一个合格质粒的组成要素 a. 复制起始位点 Ori 即控制复制起始的位点。 原核生物 DNA分子中只有一个复制起始点。 而真核生物 DNA分子有多个复制起始位点。 b. 抗生素抗性基因可以便于加以检测，如 Amp+ ,Kan+ c. 多克隆位点 MCS 克隆携带外源基因片段 d. P/E 启动子/增强子 e. Terms 终止信号 f. 加 poly（A）信号可以起到稳定 mRNA 作用二、如何阅读质粒图谱第一步： 首先看 Ori 的位置，了解质粒的类型（原核/真核/穿梭质粒）。 第二步： 再看筛选标记，如抗性，决定使用什么筛选标记。 （1） Ampr 水解－内酰胺环，解除氨苄的毒性。 （2） tetr 可以阻止四环素进入细胞。 （3） camr 生成氯霉素羟乙酰基衍生物，使之失去毒性。 （4） neor（kanr）氨基糖苷磷酸转移酶使 G418（长那霉素衍生物）失活（5） hygr 使潮霉素失活。 第三步： 1 / 6
看多克隆位点（MCS）。 它具有多个限制酶的单一切点。 便于外源基因的插入。 如果在这些位点外有外源基因的插入，会导致某种标志基因的失活，而便于筛选。 决定能不能放目的基因以及如何放置目的基因。 第四步： 再看外源 DNA 插入片段大小。 质粒一般只能容纳小于 10Kb 的外源 DNA 片段。 一般来说，外源DNA 片段越长，越难插入，越不稳定，转化效率越低。 第五步： 是否含有表达系统元件，即启动子－核糖体结合位点－克隆位点－转录终止信号。 这是用来区别克隆载体与表达载体。 克隆载体中加入一些与表达调控有关的元件即成为表达载体。 选用那种载体，还是要以实验目的为准绳。 启动子－核糖体结合位点－克隆位点－转录终止信号 a. 启动子－促进 DNA 转录的 DNA 顺序，这个 DNA 区域常在基因或操纵子编码顺序的上游，是 DNA 分子上可以与 RNApol 特异性结合并使之开始转录的部位，但启动子本身不被转录。 b. 增强子/沉默子－为真核基因组（包括真核病毒基因组）
表达载体的构建方法及步骤
表达载体的构建方法及步骤 一、载体的选择及如何阅读质粒图谱 目前，载体主要有病毒和非病毒两大类,其中质粒DNA 是一种新的非病毒转基因载体。 一个合格质粒的组成要素： （1）复制起始位点Ori 即控制复制起始的位点。原核生物DNA 分子中只有一个复制起始点。而 真核生物DNA 分子有多个复制起始位点。 （2）抗生素抗性基因可以便于加以检测，如Amp+ ,Kan+ （3）多克隆位点MCS 克隆携带外源基因片段 （4）P/E 启动子/增强子 （5）Terms 终止信号 （6）加poly（A）信号可以起到稳定mRNA 作用 选择载体主要依据构建的目的，同时要考虑载体中应有合适的限制酶切位点。如果构建的目 的是要表达一个特定的基因，则要选择合适的表达载体。 载体选择主要考虑下述3点： 【1】构建DNA 重组体的目的，克隆扩增/基因表达，选择合适的克隆载体/表达载体。 【2】.载体的类型： （1）克隆载体的克隆能力－据克隆片段大小（大选大，小选小）。如<10kb 选
质粒。 （2）表达载体据受体细胞类型－原核/真核/穿梭，E.coli/哺乳类细胞表达载体。（3）对原核表达载体应该注意：选择合适的启动子及相应的受体菌，用于表达真核蛋白质时注意克服4个困难和阅读框错位；表达天然蛋白质或融合蛋白作为相应载体的参考。 【3】载体MCS 中的酶切位点数与组成方向因载体不同而异，适应目的基因与载体易于链接，不能产生阅读框架错位。 综上所述，选用质粒（最常用）做载体的5点要求： （1）选分子量小的质粒，即小载体（1－1.5kb）→不易损坏，在细菌里面拷贝数也多（也有大载 体）； （2）一般使用松弛型质粒在细菌里扩增不受约束，一般10个以上的拷贝，而严谨型质粒<10个。 （3）必需具备一个以上的酶切位点，有选择的余地； （4）必需有易检测的标记，多是抗生素的抗性基因，不特指多位Ampr（试一试）。 （5）满足自己的实验需求，是否需要包装病毒，是否需要加入荧光标记，是否需要加入标签蛋白，是否需要真核抗性（如Puro、G418）等等。 无论选用哪种载体，首先都要获得载体分子，然后采用适当的限制酶将载体DNA 进行切割，获得线性载体分子，以便于与目的基因片段进行连接。 如何阅读质粒图谱 第一步：首先看Ori 的位置，了解质粒的类型（原核/真核/穿梭质粒）
常用pGEX载体图谱
Rosetta系列的表达菌株可以提供T7 RNA聚合酶，它能表达PET系列载体上的外源基因。。。pGEX系列载体上的外源基因不需要T7 RNA聚合酶，普通的大肠杆菌经IPTG诱导即可表达 Tac启动子是一组由Lac和trp启动子人工构建的杂合启动子，受Lac阻遏蛋白的负调节，它的启动能力比Lac和trp都强。其中Tac 1是由Trp启动子的－35区加上一个合成的46 bp DNA片段(包括Pribnow 盒)和Lac操纵基因构成，Tac 12是由Trp的启动子-35区和Lac 启动子的-10区，加上Lac操纵子中的操纵基因部分和SD序列融合而成 蛋白标签：
pGEX4T1载体基本信息 出品公司: GE 别名: pGEX-4T-1, pGEX4T1, pGEX 4T 1 质粒类型: 大肠杆菌蛋白表达载体 表达水平: 高拷贝 启动子: Tac 克隆方法: 多克隆位点，限制性内切酶 载体大小: 4969 bp 5' 测序引物及序列: pGEX5': GGGCTGGCAAGCCACGTTTGGTG 3' 测序引物及序列: pGEX3': CCGGGAGCTGCATGTGTCAGAGG 载体标签: N-GST 载体抗性: Ampicillin 氨苄 备注: 复制子是pMB1 产品目录号: 27-4580-01 稳定性: 瞬时表达 Transient 组成型: 诱导表达 病毒/非病毒: 非病毒 pGEX4T1载体质粒图谱和多克隆位点信息 原核生物DNA复制起始点，是DNA链上独特的具有起始DNA复制功能的碱基序列。大肠杆菌的复制起
pGEX4T1载体简介 pGEX4T1载体序列 LOCUS pGEX-4T-1 4969 bp DNA circular SYN DEFINITION pGEX-4T-1 ACCESSION KEYWORDS SOURCE ORGANISM other sequences; artificial sequences; vectors. COMMENT This file is created by Vector NTI https://www.wendangku.net/doc/4f9835719.html,/ COMMENT VNTAUTHORNAME|https://www.wendangku.net/doc/4f9835719.html,| FEATURES Location/Qualifiers source 1..4969 /organism="pGEX-4T-1" /mol_type="other DNA" promoter 184..212 /label="tac_promoter" misc_feature 224..246 /label="M13_pUC_rev_primer" gene 258..977 /label="GST (variant)" /gene="GST (variant)" CDS 258..977 /label="ORF frame 3"
如何阅读分析质粒图谱
基因酷质粒图谱https://www.wendangku.net/doc/4f9835719.html,/bbs/forum-38-1.html，收藏了将近800种质粒的图谱及相关信息 特向大家推荐，介绍及使用方法见： https://www.wendangku.net/doc/4f9835719.html,/bbs/thread-417-1-1.html 质粒图谱信息 一.九种表达载体 Pllp-OmpA, pllp-STII, pMBP-P, pMBP-C, pET-GST, pET-Trx, pET-His, pET-CKS, pET-DsbA 二.克隆载体 pTZ19R DNA pUC57 DNA PMD18T PQE30 pUC18 pUC19 pTrcHisA pTrxFus pRSET-A pRSET-B pVAX1 PBR322 pbv220 pBluescript II KS (+) L4440 pCAMBIA-1301 pMAL-p2X pGD926 三.PET系列表达载体 Protein Expression ? Prokaryotic Expression ? pET Dsb Fusion Systems 39b and 40b Protein Expression ? Prokaryotic Expression ? pET Expression System 33b Protein Expression ? Prokaryotic Expression ? pET Expression Systems Protein Expression ? Prokaryotic Expression ? pET Expression Systems plus Competent Cells Protein Expression ? Prokaryotic Expression ? pET GST Fusion Systems 41 and 42 Protein Expression ? Prokaryotic Expression ? pET NusA Fusion Systems 43.1 and 44 Protein Expression ? Prokaryotic Expression ? pET Vector DNA Protein Purification ? Purification Systems ? Strep?Tactin Resins and Purification Kits 四.PGEX系列表达载体
pcDNA3.1质粒图谱
pcDNA?3.1(+) pcDNA?3.1(–) Catalog nos. V790-20 and V795-20 Version K 10November2010 28-0104 User Manual
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Table of Contents Important Information (v) Accessory Products (vi) Methods (1) Overview (1) Cloning into pcDNA?3.1 (2) Transfection (6) Creating Stable Cell Lines (7) Appendix (10) pcDNA?3.1 Vectors (10) pcDNA?3.1/CAT (12) Technical Support (13) Purchaser Notification (13) References (15) iii
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Important Information pcDNA? Vectors This manual is supplied with the following products. Product Catalog no. pcDNA?3.1(+) Vector V790-20 pcDNA?3.1(–) Vector V795-20 Shipping and Storage Vectors are shipped on wet ice. Upon receipt, store at –20°C. Contents The pcDNA?3.1 vector components pcDNA?3.1 are listed below: Item Concentration Volume pcDNA?3.1 Vector pcDNA?3.1(+) or pcDNA?3.1(–)20 μg at 0.5 μg/μl, in TE buffer, pH 8.0 (10 mM Tris-HCl, 1 mM EDTA, pH 8.0) 40 μl Control Plasmid pcDNA?3.1/CAT 20 μg at 0.5 μg/μl, in TE buffer, pH 8.0 (10 mM Tris-HCl, 1 mM EDTA, pH 8.0) 40 μl Product Qualification The Certificate of Analysis provides detailed quality control information for each product. Certificates of Analysis are available on our website. Go to https://www.wendangku.net/doc/4f9835719.html,/support and search for the Certificate of Analysis by product lot number, which is printed on the box. v
质粒图谱大全
（转载） 一.九种表达载体 Pllp-OmpA, pllp-STII, pMBP-P, pMBP-C, pET-GST, pET-Trx, pET-His, pET-CKS, pET-DsbA 二.克隆载体 pTZ19RDNA pUC57DNA PMD18T PQE30 pUC18 pUC19 pTrcHisA pTrxFus pRSET-A pRSET-B pVAX1 PBR322 pbv220 pBluescriptIIKS( ) L4440 pCAMBIA-1301 pMAL-p2X pGD926 三.PET系列表达载体 ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETDsbFusionSystems39band40b ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETExpressionSystem33b ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETExpressionSystems ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETExpressionSystemsplusCompetentCells ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETGSTFusionSystems41and42 ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETNusAFusionSystems43.1and44 ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETVectorDNA ProteinPurification?PurificationSystems?Strep?TactinResinsandPurificationKits 四.PGEX系列表达载体 TEcoR?pGEX-1I/BAP
PCMV-HA 载体图谱
Plasmid 16336: pCMV-HA GCNF Plasmid 16336: pCMV-HA GCNF Gene/insert name: GCNF Insert size (bp): Unknown Gene/insert aliases: Nr6a1, RTR, Gcnf, NCNF, 1700113M01Rik Species of gene(s): M. musculus (mouse) Fusion proteins or tags: HA Terminal: N terminal on backbone Vector backbone: pCMV-HA (Search Vectorpedia) Backbone manufacturer: Clontech Type of vector: Mammalian expression Backbone size (bp): 3800 Cloning site 5': EcoRI Site destroyed during cloning: No Cloning site 3': XhoI Site destroyed during cloning: No 5' Sequencing primer: CMV-F (List of Sequencing Primers) Bacteria resistance: Ampicillin High or low copy: High Copy Grow in standard E. coli @ 37C: Yes Sequence: View sequence Plasmid Provided In: DH5a Principal Investigator: Austin Cooney Terms and Licenses: MTA Addgene has sequenced a portion of this plasmid for verification. Click here for the sequencing result. Article: Orphan nuclear receptor GCNF is required for the repression of pluripotency genes during retinoic acid-induced embryonic stem cell differentiation. Gu P et al. (Mol Cell Biol. 2005 Oct . 25(19):8507-19. Pubmed) 附件
如何阅读分析质粒图谱
如何阅读分析质粒图谱 标签: 图谱质粒阅读2009-09-01 14:12 载体主要有病毒和非病毒两大类,其中质粒DNA是一种新的非病毒转基因载体。 一、一个合格质粒的组成要素 复制起始位点Ori?即控制复制起始的位点。原核生物DNA分子中只有一个复制起始点。而真核生物DNA分子有多个复制起始位点。 抗生素抗性基因可以便于加以检测，如Amp+? ,Kan+ 多?克隆位点MCS 克隆携带外源基因片段 P/E?启动子/增强子 Terms 终止信号? 加poly（A）信号?可以起到稳定mRNA作用 二、如何阅读质粒图谱 第一步：首先看Ori的位置，了解质粒的类型（原核/真核/穿梭质粒） 第二步：再看筛选标记，如抗性，决定使用什么筛选标记。 （1）Ampr 水解β－内酰胺环，解除氨苄的毒性。 （2）tetr 可以阻止四环素进入细胞。 （3）camr 生成氯霉素羟乙酰基衍生物，使之失去毒性。 （4）neor（kanr）氨基糖苷磷酸转移酶使G418（长那霉素衍生物）失活 （5）hygr 使潮霉素β失活。 第三步：看多克隆位点（MCS）。它具有多个限制酶的单一切点。便于外源基因的插入。如果在这些位点外有外源基因的插入，会导致某种标志基因的失活，而便于筛选。决定能不能放目的基因以及如何放置目的基因。
第四步：再看外源DNA插入片段大小。质粒一般只能容纳小于10Kb的外源DNA 片段。一般来说，外源DNA片段越长，越难插入，越不稳定，转化效率越低。第五步：是否含有表达系统元件，即启动子－核糖体结合位点－克隆位点－转录终止信号。这是用来区别克隆载体与表达载体。克隆载体中加入一些与表达调控有关的元件即成为表达载体。选用那种载体，还是要以实验目的为准绳。 启动子－核糖体结合位点－克隆位点－转录终止信号 启动子－促进DNA转录的DNA顺序，这个DNA区域常在基因或操纵子编码顺序的上游，是DNA分子上可以与RNApol特异性结合并使之开始转录的部位，但启动子本身不被转录。? 增强子/沉默子－为真核?基因组（包括真核病毒基因组）中的一种具有增强邻近基因转录过程的调控顺序。其作用与增强子所在的位置或方向无关。即在所调控基因上游或下游均可发挥作用。/沉默子－负增强子，负调控序列。 核糖体结合位点/起始密码/SD序列（Rbs/AGU/SDs）：mRNA有核糖体的两个结合位点，对于原核而言是AUG（起始密码）和SD序列。? 转录终止顺序（终止子）/翻译终止密码子：结构基因的最后一个外显子中有一个AATAAA的保守序列，此位点down－stream有一段GT或T富丰区，这2部分共同构成poly（A）加尾信号。结构基因的最后一个外显子中有一个AATAAA 的保守序列，此位点down－stream有一段GT或T富丰区，这2部分共同构成poly（A）加尾信号。? 回答有人之前提出的一个问题：为什么质粒图谱上有的箭头顺时针有的箭头逆时针，那其实是代表两条DNA链，即质粒是环状双链DNA，它的启动子等在其中一条链上，而它的抗性基因在另一条链上. 三、介绍一下关于载体的知识（虽然课本上都有写）
载体图谱
载体主要有病毒和非病毒两大类,其中质粒DNA是一种新的非病毒转基因载体。 一、一个合格质粒的组成要素 复制起始位点Oriλ即控制复制起始的位点。原核生物DNA分子中只有一个复制起始点。而真核生物DNA 分子有多个复制起始位点。 抗生素抗性基因可以便于加以检测，如Amp+λ ,Kan+ 多克隆位点MCS 克隆携带外源基因片段λ P/E 启动子/增强子λ Termsλ终止信号 加poly（A）信号λ可以起到稳定mRNA作用 二、如何阅读质粒图谱 第一步：首先看Ori的位置，了解质粒的类型（原核/真核/穿梭质粒） 第二步：再看筛选标记，如抗性，决定使用什么筛选标记。 （1）Ampr 水解β－内酰胺环，解除氨苄的毒性。 （2）tetr 可以阻止四环素进入细胞。 （3）camr 生成氯霉素羟乙酰基衍生物，使之失去毒性。 （4）neor（kanr）氨基糖苷磷酸转移酶使G418（长那霉素衍生物）失活 （5）hygr 使潮霉素β失活。 第三步：看多克隆位点（MCS）。它具有多个限制酶的单一切点。便于外源基因的插入。如果在这些位点外有外源基因的插入，会导致某种标志基因的失活，而便于筛选。决定能不能放目的基因以及如何放置目的基因。 第四步：再看外源DNA插入片段大小。质粒一般只能容纳小于10Kb的外源DNA片段。一般来说，外源DNA片段越长，越难插入，越不稳定，转化效率越低。 第五步：是否含有表达系统元件，即启动子－核糖体结合位点－克隆位点－转录终止信号。这是用来区别克隆载体与表达载体。克隆载体中加入一些与表达调控有关的元件即成为表达载体。选用那种载体，还是要以实验目的为准绳。 启动子－核糖体结合位点－克隆位点－转录终止信号 启动子－促进DNA转录的DNA顺序，这个DNA区域常在基因或操纵子编码顺序的上游，是DNA分子上可以与RNApol特异性结合并使之开始转录的部位，但启动子本身不被转录。λ 增强子/沉默子－为真核基因组（包括真核病毒基因组）中的一种具有增强邻近基因转录过程的调控顺序。其作用与增强子所在的位置或方向无关。即在所调控基因上游或下游均可发挥作用。/沉默子－负增强子，负调控序列。λ 核糖体结合位点/起始密码/SD序列（Rbs/AGU/SDs）：mRNA有核糖体的两个结合位点，对于原核而言是AUG（起始密码）和SD序列。λ 转录终止顺序（终止子）/翻译终止密码子：结构基因的最后一个外显子中有一个AATAAA的保守序列，此位点down－stream有一段GT或T富丰区，这2部分共同构成poly（A）加尾信号。结构基因的最后一个外显子中有一个AATAAA的保守序列，此位点down－stream有一段GT或T富丰区，这2部分共同构成poly（A）加尾信号。λ 回答有人之前提出的一个问题：为什么质粒图谱上有的箭头顺时针有的箭头逆时针，那其实是代表两条DNA 链，即质粒是环状双链DNA，它的启动子等在其中一条链上，而它的抗性基因在另一条链上. 三、介绍一下关于载体的知识（虽然课本上都有写） 1. 什么是载体