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第三章细胞生物学研究方法总结

第三章细胞生物学研究方法

第一节细胞形态结构的观察方法

分辨率：肉眼0.2mm 光镜0.2μm 电镜0.2nm

一、光学显微镜技术（light microscopy ）

（一）普通复式光学显微镜技术

a ．光学放大系统：目镜和物镜

光镜照明系统：光源、折光镜和聚光镜，有时另加各种滤光片

组成机械和支架系统

b ．分辨率D ：分开两个质点间的最小距离。 0．61 λ 其中： λ为光源波长

D ＝ α为物镜镜口张角

N ·sin α/2 N 为介质折射率

c.普通光镜样品制备：固定（如甲醛）、包埋（如石蜡）、切片（约5μm ）、染色

（二）荧光显微镜技术（fluorescence microscopy 光镜水平对特异蛋白定性定位）

1． FM 包括免疫荧光技术和荧光素直接标记技术

2．不同荧光素的激发光波长范围不同，所以同一样品可以同时用两种以上荧光

素标记。荧光显微镜中只有激发荧光可以成像。

（三）激光共焦点扫描显微镜技术（laser scanning confocal microscopy ）

1．特点：瞬间只用很小一部分光照明，保证只有来自焦平面的光成像，成像清晰

分辨率比普通荧光显微镜提高1.4－1.7倍。

通过改变焦平面位置可以观察较厚样品的内部构造，进行三维重构。

2．共焦点是指物镜和聚光镜同时聚焦到同一小点。

（四）相差和微分干涉显微镜技术

1．相差显微镜（phase-contrast microscopy ）

光线通过不同密度物质产生相位差，相差显微镜将其变成振幅差。它与普通光镜的不同是其物镜后有一块“相差板”，夸大了不同密度造成的相位差。

2．微分干涉显微镜（differential －interference microscopy ）——用的是平面偏振光光经棱镜折射成两束，通过样品相邻部位，再经棱镜汇合，使样品厚度上的微小差别转化为明暗区别，使样品产生很强的立体感。

二、电子显微镜技术（electron microscope ）

（一）电子显微镜基本知识

1．与光镜的基本区别：电子束作光源、电磁透镜聚焦、镜筒高真空、荧光屏等成像

2．分辨本领与有效放大倍数：分辨率0.2nm ，比肉眼放大

分辨本领指电镜处于最佳状态下的分辨率。实际情况中，分辨率受样品限制。

3．电子显微镜电子束照明系统：电子枪、聚光镜

基本构造成像系统：物镜、中间镜、投影镜等

真空系统：用两级真空泵不断抽气

记录系统：荧光屏或感光胶片成像

（二）主要电镜制样技术介绍

制样要求：①要求样品很薄（数十纳米） ②要求保持精细结构

1．超薄切片技术

①固定：保持样品形态结构，甚至超微和分子水平上结构。

固定剂：常用饿酸（OsO 4）和戊二醛等，另外有物理方法如高频微波。

②脱水

③包埋：使样品中各种细微结构得到支撑，使切片连续完整并有足够强度。

包埋剂常用环氧树脂。

④切片：厚度40-50nm，通过样品杆的金属热膨胀或机械伸缩来控制。

切片刀：玻璃或钻石刀，常用玻璃刀。切片置于覆有支持膜的载网上。

⑤染色：用重金属盐染色。如锇酸染脂肪、铅盐染蛋白质、醋酸铀染核酸等。

通过电子束振幅的改变只能得到黑白图像。还可以与其他技术结合。

2．负染色技术（negative staining）

用的是重金属盐，如磷钨酸或醋酸双氧铀，载网上铺上重金属盐，衬托出样品。

3．冷冻断裂和冷冻蚀刻电镜技术

冷冻断裂：快速低温冷冻样品（液氮或液氦中），然后样品在其结构相对脆弱的部位断裂。用另一些方法增强效果。

冷冻蚀刻（freeze etching）：主要用来观察膜断裂面的蛋白颗粒和膜表面结构，不需包埋也不需固定。冷冻深度蚀刻技术（quick freeze deep etching）4．电镜三维重构技术

基本步骤：对生物样品在电镜中的不同倾角下拍照，得到的电镜图片再经变换处理形成复合物三维结构的电子密度图。低温电镜技术、玻璃态、结构生物学。

5．扫描电镜技术（scanning electron microscope，SEM）

主要用来观察样品表面的形貌特征，用CO2临界点干燥法解决表面张力问题。

扫描电镜景深长，成像具有强烈的立体感。分辨本领可达0.7nm 。

三、扫描隧道显微镜（scanning tunneling microscope，STM）

利用量子力学中的隧道效应观测物质表面的形貌。

主要装置：XYZ三个方向扫描的压电陶瓷、逼近装置、电子学反馈控制系统和数据采集、处理、显示系统。

主要特点：①原子原子尺度的高分辨本领，侧分辨率0.1-0.2nm,纵分辨率0.001nm

②可以在真空、大气、液体等多种条件下工作。③非破坏性测量。

原子力显微镜（atomic force microscope）等十余种扫描探针显微镜。

第二节细胞组分的分析方法

一、用超速离心技术分离细胞器与生物大分子及其复合物

差速离心（differential centrifugation）：利用不同的离心速度所产生的不同离心力，

将各种亚细胞组分和各种颗粒分开。

密度梯度离心：将要分离的组分铺放在含有密度逐渐增加的、形成密度梯度的、高

溶解性的、惰性物质溶液表面进行离心，形成不同的沉降带。

二、细胞内核酸、蛋白质、酶、糖类与脂质等的显示方法

利用显色剂与被检物质的特殊基团反应显色来判断。

DNA：福尔根（Feulgen）反应特异显示DNA分布。

多糖：PAS反应（即醛基与希夫schiff试剂反应呈紫红色）

脂肪酸：四氧化饿（结果呈黑色）、苏丹Ⅲ（深红色）、苏丹黑

蛋白质：很多检测方法，如米伦（Millon）反应（红色沉淀）、重氮反应、“－SH”

酶：大多数固定剂对酶有钝化作用，定性研究时，保持酶活性，与适宜底物温育。

三、特异蛋白抗原的定位与定性

胞内蛋白定位：免疫荧光与免疫电镜

蛋白质体外分析定性：免疫印迹和放射免疫沉淀。

（一）免疫荧光技术（immunofluorescence technique）

定义：将免疫学方法与荧光标记技术相结合来研究特异蛋白抗原在体内分布的方法。

主要包括：荧光抗体的制备、标本的处理、免疫染色和观察记录等过程。

一个概念：免疫酶标记技术（即以酶代替荧光素与抗体偶连）。

（二）免疫电镜技术

该技术同样用抗原抗体反应的原理，能有效提高样品分辨率，在超微结构水平上研

究特异蛋白抗原的定位。

免疫电镜技术可分为：免疫铁蛋白技术、免疫酶技术与免疫胶体金技术

四、细胞内特异核酸序列的定位与定性

采用原位杂交技术（in situ hybridization ）：用标记的核酸探针确定特殊核苷酸序列。光镜下原位杂交：放射性同位素或荧光素标记探针

电镜下原位杂交：生物素标记探针，检测通过抗生物素抗体上的胶体金颗粒。五、利用放射性标记技术研究生物大分子在细胞内的合成动态

1．放射自显影技术：利用放射性同位素的电离辐射对乳胶的感光作用，对细胞内生

物大分子进行定性、定位与半定量研究的一种细胞化学技术。

2．这一技术的独具特征：对细胞内生物大分子的动态研究和追踪（pulse －chase ）

3．两个主要步骤：①同位素标记的生物大分子前体的掺入②胞内同位素位置显示

4．不同的放射性同位素及其选择（P64）

5．显微放射自显影的基本步骤：标记（持续或脉冲）制片敷胶（3

－10μm ）曝光显影和定影显微镜下观察

6．电镜放射自显影技术：与显微自显影不同的是样品制备与敷胶的要求更为严格。。。

六、定量细胞化学分析技术

（一）显微分光光度测定技术（microspectrophotometry ）

该技术利用细胞内某些物质或物质经染色后对特异光谱的吸收对其进行定量测定。

包括：紫外光显微分光光度测定法和可见光显微分光光度法。

以上方法各自的原理（P65）

（二）流式细胞仪（flow cytometry ） P65底

第三节细胞培养、细胞工程与显微操作技术

一、细胞培养（分原核生物细胞、真核单生物细胞、植物与动物细胞以及病毒的培养）

（一）动物细胞培养

1．原代细胞（primary culture cell ）：从有机体取出后立即培养的细胞。

传代细胞（subculture cell ）：适应在体外培养条件下持续传代培养的细胞。

2．原代培养步骤：组织块胰酶或胶原酶与EDTA 良好的培养环

境中（有小牛血清）转动培养

3．单层细胞培养：分散呈圆球形的细胞一经贴壁就迅速铺展并开始有丝分裂，

逐渐形成细胞单层，成为单层细胞（single layer cell ）。

4． 10代 40－50代无限制

原代细胞细胞株（cell strain ）细胞系（cell line ）

几个有名的细胞系：Hela 细胞系、BHK21（baby hamster kidney ）细胞系、CHO

（chinese hamster ovary ）细胞系。

5．体外培养细胞的形态：成纤维样细胞（fibroblast like cell ）、上皮样细胞

6．悬浮方法培养：某些传代细胞。这一方法的优点：同时获得大量细胞。

（三）植物细胞培养（分单倍体细胞培养和原生质体培养）

单倍体细胞培养 ①小孢子胚状体单倍体植株

主要用花药 ②愈伤组织诱导分化出芽和根，最终长成植株。

原生质体培养：①用纤维素酶去壁为原生质体，无菌培养、诱导分化为植株。

用植物体细胞②不同植物原生质体融合，由此获得体细胞杂交的植株。

（四）非细胞体系在细胞生物学研究中的作用（P67－68）

非细胞体系：来源于细胞，而不具有完整的细胞结构，但包含了进行正常生物学反应所需的物质（如功能系统和酶反应体系等）组成的体系。

二、细胞工程（cell engineering）

主要技术：细胞培养、细胞分化的定向诱导、细胞融合和显微注射等。

（一）细胞融合与细胞杂交技术

1．细胞融合定义：两个或多个细胞融合成一个双核或多核细胞的现象。

2．动物细胞融合：灭活的病毒（如仙台病毒）或化学物质（如聚乙二醇）介导植物细胞融合：要先用纤维素酶除去纤维素壁。

3．电融合技术（electrofusion method）：低压交流电场中聚集，高压电脉冲下融合。

4．同核融合细胞（homokaryon）：基因型相同的细胞融合，同步有丝分裂产生有

大核的单核子细胞，称为融合核细胞（synkaryon）。

异核融合细胞（heterokaryon）：基因型不同的种内或种间细胞融合

（二）单克隆抗体技术（monoclonal antibody）

1．基本原理：将B淋巴细胞和肿瘤细胞融合成杂交瘤细胞，该细胞具有两种亲本细胞的特性，一方面可以分泌抗体，另一方面可以无限增殖。

2．该技术的优点：可以用不纯的抗原分子制备纯一的单克隆抗体。因为产生特

异抗体的杂交瘤细胞株可以被分离。

（三）细胞拆合与显微操作技术（P70-71）

1．细胞拆合：把核和质分离开来，然后把不同来源的细胞质和细胞核相互配合，形成核质杂交细胞。

物理法：用机械方法去核或短波光把细胞核去掉或使之失活，然后用微

管吸取其他细胞的核，注入去核的细胞质中，组成新的杂交细胞。

分类化学法：用松胞素B处理细胞，使细胞排核，再离心将细胞分拆为核体

和胞质体两部分，由于核体外包有一层细胞膜和少量胞质，因而在

PEG或仙台病毒的介导下，核体同另一胞质体融合，形成重组细

胞。

2．纤维操作技术（micromanipulation）

即在显微镜下，用显微操作装置对细胞进行解剖和微量注射（microinjection）的

技术。

医用细胞生物学知识点

医用细胞生物学知识点细胞生物学 (cell biology )：细胞生物学是以细胞为研究对象，经历了从显微水平到亚显微和分子水平的发展过程，成为今天在分子层次上研究细胞精细结构和生命活动规律的学科。医学细胞生物学 (medical cell biology)：医学细胞生物学以揭示人体各种细胞在生理和病理过程中的生命活动规律为目的，期望能对人体各种疾病的发病机制予以深入阐明，为疾病的诊断、治疗和预防提供理论依据和策略。对细胞概念理解的五个角度： ①细胞是构成有机体的基本单位； ②细胞是代谢与功能的基本单位； ③ 细胞是有机体生长与发育的基础； ④细胞是遗传的基本单位； ⑤没有细胞就没有完整的生命。生物界划分的三个类型：原核细胞、古核细胞和真核细胞。原核细胞与真核细胞的比较： p13 表 2-1 生物大分子：是由有机小分子构成的，大约有 3000种，分子量从 10000到 1000000。核酸 (nucleic acid ) 的基本单位 :核苷酸。核苷酸：核苷的戊糖羟基与磷酸形成酯键，即成为核苷酸。 DNA 分子的双螺旋结构模型( p18图 2-8)：DNA 分子由两条相互平行而方向相反的多核苷酸链组成，即一条链中磷酸二酯键连接的核苷酸方向是 5'→3'，另一条是 3'→ 5'，两条链围绕着同一个中心轴以右手方向盘绕成双螺旋结构。基因组：细胞或生物体的一套完整的单倍体遗传物质称为基因组。动物细胞内含有的主要 RNA 种类及功能： p20 表 2-3 核酶 (ribozyme ) :核酶是具有酶活性的 RNA 分子。蛋白质 ( protein )的基本单位：氨基酸。肽键：肽键是一个氨基酸分子上的羧基与另一个氨基酸分子上的氨基经脱水缩合而成的化学键。肽 (peptide) ：氨基通过肽键而连接成的化合物称为肽。蛋白质分子的二级结构： α -螺旋， β-片层。酶 (enzyme)：酶是由生物体细胞产生的具有催化剂作用的蛋白质。酶的特性：高催化效率，高度专一性，高度不稳定性。光学显微镜的种类：普通光学显微镜，荧光显微镜，相差显微镜，暗视野显微镜，共聚焦激光扫描显微镜。细胞培养：细胞培养是指细胞在体外的培养技术，即无菌条件下，从机体中取出组织或细胞，模拟机体内正常生理状态下生存的基本条件，让它在培养器皿中继续生存、生长和繁殖的方法。细胞膜 (cell membrane ):细胞膜是包围在细胞质表面的一层薄膜，又称质膜 ( plasma membrane ) 生物膜 ( biomembrane ):目前把质膜和细胞内膜系统总称为生物膜。细胞膜的组成：主要由脂类、蛋白质和糖类组成磷脂 (phospholipid)可分为两类：甘油磷脂由于磷脂分子具有亲水头和疏水尾，故称为膜蛋白可分为三种基本类型：膜内在蛋白蛋白 (lipid anchored protein) 。细胞外被 ( cell coat )：在大多数真核细胞表面有富含糖类的周缘区，称为细胞外被或糖萼。细胞外被的基本功能：保护细胞抵御各种物理、化学性损伤，如消化道、呼吸道等上皮细胞的细胞外被有助于润滑、防止机械损伤，保护黏膜上皮不受消化酶的作用。 1． 2． 3． 4． 5． 6． 7． 8． 9． 10． 11 ． 12 ． 13 ． 14 ． 15 ． 16 ． 17 ． 18 ． 19． 20． 21 ． 22 ． 23 ． 24 ． 25 ． 26． 27． 28． (phosphoglycerides )和鞘磷脂 (sphingomyelin,SM) 。两亲性分子或兼性分子。 intrinsic protein )、膜外在蛋白 (extrinsic

细胞生物学常用研究方法

Southern杂交: 是体外分析特异DNA序列的方法，操作时先用限制性内切酶将核DNA或线粒体DNA切成DNA片段，经凝胶电泳分离后，转移到醋酸纤维薄膜上，再用探针杂交，通过放射自显影，即可辨认出与探针互补的特殊核苷序列。将RNA转移到薄膜上，用探针杂交，则称为Northern杂交。 RNAi技术: 是指在进化过程中高度保守的、由双链RNA（double-stranded RNA，dsRNA）诱发的、同源mRNA高效特异性降解的现象。由于使用RNAi技术可以特异性剔除或关闭特定基因的表达，所以该技术已被广泛用于探索基因功能和传染性疾病及恶性肿瘤的基因治疗领域。可以利用siRNA或siRNA表达载体快速、经济、简便的以序列特异方式剔除目的基因表达，所以现在已经成为探索基因功能的重要研究手段。 Southern杂交一般利用琼脂糖凝胶电泳分离经限制性内切酶消化的DNA片段，将胶上的DNA变性并在原位将单链DNA片段转移至尼龙膜或其他固相支持物上，经干烤或者紫外线照射固定，再与相对应结构的标记探针进行杂交，用放射自显影或酶反应显色，从而检测特定DNA分子的含量]。扫描电镜技术：是用一束极细的电子束扫描样品，在样品表面激发出次级电子，次级电子的多少与样品表面结构有关，次级电子由探测器收集，信号经放大用来调制荧光屏上电子束的强度，显示出与电子束同步的扫描图像。细胞显微分光光度计：用来描述薄膜、涂层厚度超过1微米的物件的光学性能的显微技术。免疫荧光技术：将免疫学方法(抗原抗体特异结合)与荧光标记技术结合起来研究特异蛋白抗原在细胞内分布的方法。由于荧光素所发的荧光可在荧光显微镜下检出，从而可对抗原进行细胞定位。电镜超薄切片技术：超薄切片是为电镜观察提供极薄的切片样品的专门技术。用当代较好的超薄切片机，大多数生物材料，如果固定、包埋处理得合适，可以切成50-100微米的超薄切片。 Northern印迹杂交（Northern blot）。这是一种将RNA从琼脂糖凝胶中转印到硝酸纤维素膜上的方法。放射自显影技术：放射自显影技术是利用放射性同位素的电离辐射对乳胶（含AgBr或AgCl）的感光作用，对细胞内生物大分子进行定性、定位与半定量研究的一种细胞化学技术。放射自显影技术（radioautography；autoradiography）用于研究标记化合物在机体、组织和细胞中的分布、定位、排出以及合成、更新、作用机理、作用部位等等。其原理是将放射性同位素（如14C和3H）标记的化合物导入生物体内，经过一段时间后，将标本制成切片或涂片，涂上卤化银乳胶，经一定时间的放射性曝光，组织中的放射性即可使乳胶感光。核磁共振技术：可以直接研究溶液和活细胞中相对分子质量较小(20，000 道尔顿以下)的蛋白质、核酸以及其它分子的结构，而不损伤细胞。 DNA序列分析：在获得一个基因序列后，需要对其进行生物信息学分析，从中尽量发掘信

细胞生物学知识点总结

细胞生物学知识点总结导读：细胞生物学知识点总结细胞通讯的方式（1）细胞通过分泌化学信号进行细胞间通讯，这是多细胞生物普遍采用的通讯方式。（2）细胞间接触依赖性的通讯，指细胞间直接接触，通过与质膜结合的信号分子影响其它细胞。（3）动物相邻细胞间形成间隙连接以及植物细胞间通过胞间连丝使细胞间相互沟通，通过交换小分子来实现代谢耦联或电耦联。细胞分泌化学信号可长距离或短距离发挥作用，其作用方式分为：（1）内分泌，由内分泌细胞分泌信号分子到血液中，通过血液循环运送到体内各个部位，作用于靶细胞。（2）旁分泌，细胞通过分泌局部化学介质到细胞外液中，经过局部扩散作用于邻近靶细胞。在多细胞生物中调节发育的许多生长因子往往是通过旁分泌起作用的。此外，旁分泌方式对创伤或感染组织刺激细胞增殖以恢复功能也具有重要意义。（3）自分泌，细胞对自身分泌的物质产生反应。自分泌信号常存在于病理条件下，如肿细胞合成并释放生长因子刺激自身，导致肿瘤细胞的'持续增殖。（4）通过化学突触传递神经信号，当神经元接受刺激后，神经信号以动作电位的形式沿轴突快速传递至神经末梢，电压门控的Ca2+

通道将电信号转换为化学信号。通过胞外信号介导的细胞通讯步骤（1）产生信号的细胞合成并释放信号分子。（2）运送信号分子至靶细胞。（3）信号分子与靶细胞受体特异性结合并导致受体激活。（4）活化受体启动胞内一种或多种信号转导途径。（5）引发细胞功能、代谢或发育的改变。（6）信号的解除并导致细胞反应终止。核被膜所具有的功能一方面，核被膜构成了核、质之间的天然选择性屏障，将细胞分成核与质两大结构与功能区域，使得DNA复制、RNA转录与加工在核内进行，而蛋白质翻译则局限在细胞质中。这样既避免了核质问彼此相互干扰，使细胞的生命活动秩序更加井然，同时还能保护核内的DNA分子免受损伤。另一方面，核被膜调控细胞核内外的物质交换和信息交流。核被膜并不是完全封闭的，核质之间进行着频繁的物质交换与信息交流。这些物质交换与信息交流主要是通过核被膜上的核孔复合体进行的。核被膜的结构组成及特点（1）核被膜由内外两层平行但不连续的单位膜构成。面向核质的一层膜被称作内（层）核膜，而面向胞质的另一层膜称为外（层）核膜。两层膜厚度相同，约为7。5 nm。两层膜之间有20～40nm的

医学细胞生物学复习(带答案)

细胞衰老与死亡 1．衰老细胞的特征之一是常常出现下列哪种结构的固缩 A．核仁B．细胞核 C．染色体 D．脂褐质 E．线粒体 2．小鼠成纤维细胞体外培养平均分裂次数为 A．25 次B．50 次 C．100 次 D．140 次 E．12 次 3．细胞凋亡与细胞坏死最主要的区别是后者出现 A．细胞核肿胀 B．内质网扩张 C．细胞变形D．炎症反应 E．细胞质变形 4．细胞凋亡指的是 A．细胞因增龄而导致的正常死亡 B．细胞因损伤而导致的死亡 C．机体细胞程序性的自杀死亡 D．机体细胞非程序性的自杀死亡 E．细胞因衰老而导致死亡 5．下列哪项不属细胞衰老的特征 A．原生质减少，细胞形状改变 B．细胞膜磷脂含量下降，胆固醇含量上升C．线粒体数目减少，核膜皱襞D．脂褐素减少，细胞代谢能力下降 E．核明显变化为核固缩，常染色体减少 6．迅速判断细胞是否死亡的方法是 A．形态学改变 B．功能状态检测 C．繁殖能力测定D．活性染色法 E．内部结构观察 7．机体中寿命最长的细胞是 A．红细胞 B．表皮细胞 C．白细胞 D．上皮细胞E．神经细胞

细胞的统一性与多样性 1. 肠上皮细胞由肠腔吸收葡萄糖，是属于 A.单纯扩散 B.易化扩散 C.主动转运 D.入胞作用 E.吞噬 2. 在一般生理情况下，每分解一分子ATP，钠泵转运可使 A. 2个Na＋移出膜外 B. 2个K＋移入膜内 C. 2个Na＋移出膜外，同时有2个K＋移入膜内 D. 3个Na＋移出膜外，同时有2个K＋移入膜内 E. 2个Na＋移出膜外，同时有3个K＋移入膜内小分子的跨膜运输 1.肠上皮细胞由肠腔吸收葡萄糖，是属于 A. 单纯扩散 B. 易化扩散 C. 主动转运 D. 入胞作用 E. 吞噬核糖体 1.多聚核糖体是指 A．细胞中有两个以上的核糖体集中成一团 B．一条mRNA 串连多个核糖体的结构组合 C．细胞中两个以上的核糖体聚集成簇状或菊花状结构D．rRNA 的聚合体 E．附着在内质网上的核糖体

细胞生物学实验社会实践报告

建立一个动物细胞培养室与植物细胞培养室所需的条件与社会价值无菌环境是细胞离体培养的最基本条件，所以构建一个细胞培养室需要保证工作环境不受微生物和其他有害物质污染，并且干燥无烟尘。细胞培养室的设计原则一般是无菌操作区设在室内较少走动的内侧,常规操作和封闭培养于一室,而洗刷消毒在另一室。一、基础实验室配置 ⑴消毒间：消毒间主要为了处理实验器材以及实验材料，营造一个无菌的试验环境，一般消毒间会配备超净实验台、高压灭菌锅、排风灭火设备、细菌过滤设备、干热消毒柜、电炉、酸缸等。 ⑵无菌操作间：一般由缓冲间和操作间两部分组成。缓冲间在外侧，多用于实验之前的准备，例如：更衣，准备实验材料，处理实验数据等，可放置电冰箱,冷藏器及消毒好的无菌物品等。操作间放置净化工作台及二氧化碳培养箱,离心机,倒置显微镜等。工作人员进入操作间一定要消毒并更衣。（3）培养基配制间：主要用于配置细胞培养所用的培养基。主要包括冰箱、天平、微波炉、pH计、培养基分装器、药品柜、器械柜、抽气泵、电炉、各种规格的培养瓶、培养皿、移液管、烧杯、量筒、容量瓶、储藏瓶等。（4）培养室：用于培养细胞，放置以接种的培养基等。为了控制培养室的温度和光照时间及其强度，培养室的房间不要窗户，但应当留一个通气窗，并安上排气扇。室内温度由空调控制，光照由日光灯控制。天花板和内墙最好用塑料钢板装修，地面用水磨石或瓷砖铺

设，一般要分两间，一为光照培养室，一为暗培养室。培养室外应有一预备间或走廊。培养室应配有培养架、转床、摇床、光照培养箱、生化培养箱、自动控时器等。（5）洗涤间：主要用于清洗实验之后的用具。除配置水槽外，还需配置洗液皿、落水架、干燥箱、柜子、超声波清洗器等，有需求的还可以配置洗瓶机。以上基础设施若实验室条件不够，可将消毒间，培养基配制间，洗涤间合并一起，但注意实验室卫生以及仪器摆放，房间要保持清洁，明亮。二、辅助实验室细胞学鉴定室：其功能是对培养材料进行细胞学鉴定和研究。要求清洁、明亮、干燥，使各种光学仪器不受潮湿和灰尘污染。应配置各种显微镜、照相系统等。生化分析室：在以培养细胞产物为主要目的的实验室中，应建立相应的分析化验实验室，以便于对培养物的有效成分随时进行取样检查。离心机、酶联免疫检测仪、天平、PCR仪等。温室：用于试管苗的锻炼和移植，为试管苗提供满足生长的适宜环境条件。常用设备有：温室、弥雾装置、荫棚、移栽床、钵、盆、基质等（用于植物细胞培养室）。实验器材汇总：

医学细胞生物学知识点归纳

线粒体： 1.呼吸链（电子传递链）Respiratory chain一系列能够可逆地接受和释放H+和e-的化学物质所组成的酶体系在线粒体内膜上有序地排列成互相关联的链状。 2.化学渗透假说（氧化磷酸化偶联机制）：线粒体内膜上的呼吸链起质子泵的作用，利用高能电子传递过程中释放的能量将H+泵出内膜外，造成内膜内外的一个H+梯度（严格地讲是离子的电化学梯度），A TP合酶再利用这个电化学梯度来合成A TP。 3.电子载体:在电子传递过程中与释放的电子结合并将电子传递下去的物质称为电子载体。参与传递的电子载体有四种∶黄素蛋白、细胞色素、铁硫蛋白和辅酶Q，在这四类电子载体中，除了辅酶Q以外，接受和提供电子的氧化还原中心都是与蛋白相连的辅基。 4.阈值效应：突变所产生的效应取决于该细胞中野生型和突变型线粒体DNA的比例，只有突变型DNA达到一定数量（阈值）才足以引起细胞的功能障碍，这种现象称为阈值效应。 5.导向序列：将游离核糖体上合成的蛋白质的N-端信号称为导向信号，或导向序列，由于这一段序列是氨基酸组成的肽，所以又称为转运肽。 6.信号序列：将膜结合核糖体上合成的蛋白质的N-端的序列称为信号序列，将组成该序列的肽称为信号肽。 7.共翻译转运：膜结合核糖体上合成的蛋白质通过定位信号，一边翻译，一边进入内质网，由于这种转运定位是在蛋白质翻译的同时进行的，故称为共翻译转运。 8.蛋白质分选：在膜结合核糖体上合成的蛋白质通过信号肽，经过连续的膜系统转运分选才能到达最终的目的地，这一过程又称为蛋白质分选。核糖体： 1.原核生物mRNA中与核糖体16S rRNA结合的序列称为SD序列(SD sequence) 。 2.核酶：将具有酶功能的RNA称为核酶。 3.N-端规则(N-end rule): 每一种蛋白质都有寿命特征，称为半衰期(half-life)。研究发现多肽链N-端特异的氨基酸与半衰期相关，称为N-端规则。 4.泛素介导途径：蛋白酶体对蛋白质的降解通过泛素(ubiquitin)介导,故称为泛素降解途径。蛋白酶体对蛋白质的降解作用分为两个过程:一是对被降解的蛋白质进行标记,由泛素完成;二是蛋白酶解作用,由蛋白酶体催化。细胞核： 1.核内膜：有特有的蛋白成份（如核纤层蛋白B受体），膜的内表面有一层网络状纤维蛋白质，即核纤层（nuclear lamina），可支持核膜。核外膜：靠向细胞质的一层，是内质网的一部分，胞质面附有核糖体核周隙：内、外膜之间有宽20~40nm的腔隙，与粗面内质网腔相通核孔复合体：内、外膜融合处，物质运输的通道核纤层：内核膜内表面的纤维网络，支持核膜，并与染色质、核骨架相连。 2.核孔复合体：是细胞核内外膜融合形成的小孔，直径约为70 nm，是细胞核与细胞质间物质交换的通道。 3.核孔蛋白：参与构成核孔的蛋白质，可能在经核孔的主动运输中发挥作用。核运输受体：参与物质通过核孔的主动运输。核周蛋白: 是一类与核孔选择性运输有关的蛋白家族，相当于受体蛋白。 5.输入蛋白：核定位信号的受体蛋白, 存在于胞质溶胶中, 可与核定位信号结合, 帮助核蛋白进入细胞核。输出蛋白：存在于细胞核中识别并与输出信号结合的蛋白质, 帮助核内物质通过核孔复合

细胞生物学复习总结

Chapter 2 Cell membrane 1.简述细胞膜的特性。 1）不对称性：细胞膜的两侧具有不同的组成，包括三种成分的不对称性和维持膜功能的方向性。膜脂分布不对称：脂质双分子层两边组成不同；膜蛋白不对称：膜蛋白不对称分布，膜蛋白的不同定向；膜糖的不对称：膜糖分布朝向胞外。 2）膜的流动性：膜成分处于不断运动中，是保证膜功能的重要条件，包括膜脂流动性与膜蛋白流动性. 2.试述不同类型膜蛋白的特点。 1）膜内在蛋白：部分或全部镶嵌在细胞膜中或内外两侧；以非极性、疏水性氨基酸与脂双分子层的非极性疏水区相互作用而结合在质膜上；分子中具有一个或多个富含疏水性氨基酸的疏水区，多呈α螺旋；在膜上可单次穿膜或多次穿膜。 2）膜周边蛋白质：分布于膜的外表面；通过非共价键与膜脂极性头部结合；通过与膜内在蛋白亲水部分相互作用间接与膜结合。 3.何为离子通道蛋白？在胞膜物质运输中该类蛋白有何作用？概念：大多都与离子的转运有关，通道蛋白也称为离子通道。作用：具有离子选择性，只允许一定体积和电荷的离子通过；转运速率高，离子通道转运离子的速率极快，比载体蛋白所介导的最快转运速率高1 000倍；介导的物质跨膜运输是被动运输，使物质从高浓度向低浓度运输,不需要细胞提供能量. 4.举例说明离子泵在主动运输中的作用。 (答题要点：什么是离子泵，钠钾泵的组成及作用过程) 离子泵实际上就是膜上的一种ATP酶，实现离子或小分子逆浓度或电化学梯度的跨膜运动，是直接利用水解ATP提供能量的主动运输。 Na+-K+-ATP酶由大小两个亚基组成，大亚基是一个多次跨膜的膜整合蛋白，具有ATP酶活性，为催化亚单位。其中，大亚基在其胞质面有一个ATP结合点和三个高亲和的Na+结合点，在膜的外表面有两个高亲和K+结合点和一个K+结合点。钠钾泵的作用是通过ATP驱动的泵构型改变来完成的。首先由Na+结合到胞质面的结合点，刺激ATP水解，使泵磷酸化，引起蛋白质构型改变，暴露Na+结合点面向细胞外，使Na+释放到细胞外；于此同时也将K+结合点朝向细胞外表面，结合胞外K+后引起泵去磷酸化，导致蛋白质的构型再次发生变化，将K+结合点朝向细胞质面，然后释放K+至胞质溶胶内，蛋白构型恢复原状。钠钾泵每秒钟可发生1000次构象变化，每个循环消耗1个ATP分子，泵出3个Na+和泵入2个K+。 5.试述细胞连接的主要类型及特点。紧密连接：无间隙，点状对合结构。其作用是封闭细胞间隙：阻止物质从细胞之间通过，保证转运方向性。锚定连接：粘着连接：带状、15-20nｍ缝隙、内有丝状物质.与微丝相连．桥粒连接：纽扣状、胞质内侧圆盘型斑；中间纤维附着。间隙连接：1.5-2nm间隙，中有规则排列的横颗粒；最普遍的细胞连接的方式。 6.试述细胞黏连分子的类型及特点。类型：钙黏素，免疫球蛋白超家族，整合素，选择素。 1）钙粘素：属同亲性依赖Ca2+的细胞粘连糖蛋白，介导依赖Ca2+的细胞粘着和从ECM到细胞质传递信号；分类有，E-钙黏蛋白、N-钙黏蛋白、P-钙黏蛋白；钙黏素介导细胞间钙依赖同亲性粘着。钙黏素的细胞部分通过接头蛋白和肌动蛋白纤维相连。 2）免疫球蛋白超家族的CAM：分子结构中具有与免疫球蛋白类似的结构域的CAM超家族；

华师细胞生物学简答题(个人复习总结)

1、何谓成熟促进因子（MPF）?包括哪些主要成分？如何证明某一细胞提取液含有MPF？成熟促进因子是指M期细胞中存在的促进细胞分裂的因子，是由两个不同亚基组成的异质二聚体，其一为调节亚基，有周期蛋白组成；其二为催化亚基，是丝氨酸/苏氨酸型蛋白激酶，其活性有懒于周期蛋白，故称为周期依赖性蛋白激酶。可以通过蛙卵细胞质移植实验证实MPF。成熟蛙卵细胞的细胞质可以诱导未成熟的蛙卵细胞提前进入成熟期。 2、简述微管、微丝和中间纤维的主要异同点？（顺序为微管、微丝、中间纤维）直径：22nm、7nm、10nm；基本构件：α、β—微管蛋白，肌动蛋白，中间纤维丝蛋白；相对分子量（乘10的3次）：50，43，40~200；结构：13根原丝围成的α—螺旋中空管状，双股α—螺旋，多级螺旋；极性：有，有，无；单体蛋白库：有，有，无；踏车现象：有，有，无；特异性药物：秋水仙素、长春花碱，细胞松弛素B、鬼笔环肽，无；运动相关蛋白：驱动蛋白、动力蛋白，肌球蛋白，无；主要功能：细胞运动、胞内运输、支持作用，变形运动、形状维持、胞质环流、胞质分裂环的桶状结构，骨架作用、细胞连接、信息传递；细胞分裂：纺锤体，无，包围纺锤体。 3、为什么将内质网比喻“开放的监狱”？ KDEL信号序列为内质网驻守信号，如果内质网驻守蛋白被错误的包装进了COPII，并运输到顺面高尔基体，高尔基体膜上存在KDEL识别受体，能识别错误运输来的内质网驻守蛋白，并形成COP I小泡，将内质网驻守蛋白运输返回内质网。 4、在研究工作中分离得到一个与动物减数分裂直接相关的基因A，如果想由此获得该基因的单克隆抗体，请简要叙述实验方案及其实验原理。英国科学家Milstein和Kohler因提出单克隆抗体而获得1984年诺贝尔生理学或医学奖。它是将产生抗体的单个B淋巴细胞同肿瘤细胞杂交，获得既能产生抗体又能无线增值的杂种细胞，并一次生产抗体的技术。其原理是：B淋巴细胞能够产生抗体，但在体外不能进行无限分裂；而肿瘤细胞虽然可以在体外进行无限传代，但不能产生抗体。将这两种细胞融合后得到的杂交瘤细胞具有两种亲本细胞的特性。实验方案：a、表达基因A的蛋白，免疫小老鼠，获得免疫的淋巴细胞；b、将经过免疫的小老鼠的淋巴细胞与Hela细胞融合；c、利用选择培养基对融合细胞进行培养筛选，只有真正融合的细胞才能继续生长；d、融合细胞的培养，抗体的纯化。 5、微管是体内膜泡运输的导轨，请分析体内膜泡定向运输的机制？微管是有极性的，微管的马达蛋白（动力蛋白和驱动蛋白）运输小泡也是单向的。动力蛋白向微管的负极运输小泡，驱动蛋白向微管的正极运输小泡。，另外，起始膜泡上有V-SNARE，靶膜上有T-SNARE。V-SNARE与T-SNARE选择性识别并定向融合。这两种因素共同导致了膜泡的定向运输。 6、简述细胞周期蛋白B的结构特点和动态调控机制？

细胞生物学部分总结

细胞生物学 1. 细胞生物学是从细胞的显微、亚显微、和分子三个水平对细胞的各种生命活动开展研的学科。 2. 细胞生物学发展的几个主要阶段：a细胞的发现与细胞学说的创立：细胞学说——一切生物，从单细胞生物到高等动物和植物均由细胞组成，细胞是生物形态结构和功能活动的基本单位。b光学显微镜下细胞的研究(19世纪中叶到20世纪初期）。C实验细胞学阶段（20世纪初期到20世纪中叶）——光镜+实验。D亚显微结构与分子水平的细胞生物学：1933年第一台电子显微镜。 3. 细胞：细胞是生命活动的基本单位1.细胞是构成有机体的基本单位2.细胞具有独立完整的代谢体系，是代谢与功能的基本单位3.细胞是有机体生长与发育的基本单位4细胞是遗传的基本单位，具有遗传的全能性5.没有细胞就没有完整的生命 4. 真核细胞的结构特点：1.脂质和蛋白质成分为基础的膜相结构体系——生物膜系统2.以核酸—蛋白质为主要成分的遗传信息表达体系——遗传信息表达系统 3.由特异蛋白质分子构成的细胞骨架体系——细胞骨架系统4.核糖体与细胞质溶胶。 5. 6. 内共生起源说：真核细胞是由原始厌氧菌的后代吞入了需氧菌逐步演化而来，进而使真核细胞能够在氧气充足的地球上生存下来。 7. 细胞膜：是包围在细胞质表面的一层薄膜，又称质膜。由脂类蛋白质糖类组成。 8. 骨骼肌收缩：1.动作电位的产生，每一肌纤维上都有神经分支分布，神经冲动是神经细胞向外释放乙酰胆碱，乙酰胆碱与细胞膜上受体结合，使肌细胞去极化并传至肌质网。2.Ca2+的释放，肌质网去极化后将钙离子释放到肌浆中。3.原肌球蛋白移位，在肌动蛋白细丝上，被原肌球蛋白占据的结合部位暴露出来，暴露的部位可与肌球蛋白分子头部结合。4.肌动蛋

细胞生物学重点总结

细胞生物学重点总结 Document number：NOCG-YUNOO-BUYTT-UU986-1986UT

细胞生物学期末复习资料整理第一章：1、细胞生物学cell biology：是研究细胞基本生命活动规律的科学，是在显微、亚显微和分子水平上，以研究细胞结构与功能，细胞增殖、分化、衰老与凋亡，细胞信号传递，真核细胞基因表达与调控，细胞起源与进化等为主要内容的一门学科。P2 1、什么叫细胞生物学试论述细胞生物学研究的主要内容。P3-5 答:细胞生物学是研究细胞基本生命活动规律的科学,它是在三个水平(显微、亚显微与分子水平)上，以研究细胞的结构与功能、细胞增殖、细胞分化、细胞衰老开发商地亡、细胞信号传递、真核细胞基因表达与调控、细胞起源与进化等为主要内容的一门科学。细胞生物学的主要研究内容主要包括两个大方面：细胞结构与功能、细胞重要生命活动。涵盖九个方面的内容：⑴细胞核、染色体以及基因表达的研究；⑵ 生物膜与细胞器的研究；⑶细胞骨架体系的研究；⑷细胞增殖及其调控；⑸细胞分化及其调控；⑹细胞的衰老与凋亡；⑺细胞的起源与进化；⑻细胞工程； ⑼细胞信号转导。 2、试论述当前细胞生物学研究最集中的领域。 P5-6 答：当前细胞生物学研究主要集中在以下四个领域：⑴细胞信号转导；⑵细胞增殖调控；⑶细胞衰老、凋亡及其调控；⑷基因组与后基因组学研究。人类亟待通过以上四个方面的研究，阐明当今主要威胁人类的四大疾病：癌症、心血管疾病、艾滋病和肝炎等传染病的发病机制，并采取有效措施达到治疗的目的。 3.细胞学说(cell theory) p9 细胞学说是1838～1839年间由德国的植物学家施莱登和动物学家施旺所提出, 直到1858年才较完善。它是关于生物有机体组成的学说，主要内容有： ①细胞是有机体，一切动植物都是由单细胞发育而来，即生物是由细胞和细胞的产物所组成； ②所有细胞在结构和组成上基本相似； ③新细胞是由已存在的细胞分裂而来； ④生物的疾病是因为其细胞机能失常。 4、细胞学发展的经典时期 P10 ⑴原生质理论的提出；⑵细胞分裂的研究；⑶重要细胞器的发现。第二章：试论述原核细胞与真核细胞最根本的区别。 P35-37 答：原核细胞与真核细胞最根本的区别在于：①生物膜系统的分化与演变：真核细胞以生物膜分化为基础，分化为结构更精细、功能更专一的基本单位—— 细胞器，使细胞内部结构与职能的分工是真核细胞区别于原核细胞的重要标志；②遗传信息量与遗传装置的扩增与复杂化：由于真核细胞结构与功能的复

细胞生物学研究方法

一、章（节、目）授课计划第页

二、课时教学内容第技术的进步在一门学科的建立与发展过程中起着巨大的作用。没有显微镜的发明就没有细胞的发现，更不会有细胞学说的建立，没有电子显微技术及其分子生物学技术的结合，就不会有细胞生物学今天的发展。细胞生物学研究方法：一般来说，凡是用来解决细胞生物学问题所采用的方法，都属于细胞生物学研究方法。当前细胞生物学研究中常用到的方法有: 核酸和蛋白质成分的分析和序列测定、研究特异DNA、RNA常用的southern杂交、Northwre杂交及蛋白质免疫印迹技术、基因打靶技术等等。第一节细胞形态结构的观察方法一、有关显微镜的一些概念（1）分辨率（resolution）：指分辨物体最小间隔的能力。光学显微镜的分辨率 R=λ/N．sin（α/2）．其中λ为入射光线波长； N =介质折射率；空气中N =1 α=物镜镜口角（样品对物镜镜口的张角）。（2）放大倍数（magnification）：是指眼睛看到像的大小与对应标本大小的比值。它指的是长度的比值而不是面积的比值。例：放大倍数为100×，指的是长度是1μm的标本，放大后像的长度是 100μm，要是以面积计算，则放大了10,000倍。显微镜的总放大倍数等于物镜和目镜放大倍数的乘积。（3）有效放大倍数（effective magnification）：物镜的数值孔径（NA）决定了显微镜有效放大倍数。有效放大倍数，就是人眼能够分辨的d′与物镜的 d间的比值，即不使人眼看到假像的最小放大倍数： M=d′/d 二、显微镜的分类现代显微镜可以分为两大类：一类是光学显微镜，另一类是非光学

(完整版)细胞生物学学习心得

细胞生物学学习体会通过网络课程学习,有幸聆听到王金发教授对《细胞生物学》课程的讲授，使我不仅学到了细胞生物学专业新的知识与研究技术、方法,而且在教学方面也受益非浅。下面就我的学习谈一些体会。一、全面学习了细胞生物学的专业知识《细胞生物学》是一门包容量大、发展迅速的学科。内容涉及生物膜的结构与功能；内膜系统区室化形成及各种细胞器的结构与功能；细胞信号转导；细胞核、染色体以及基因表达；细胞骨架体系；细胞增殖及其调控；细胞分化、癌变及其调控；细胞的衰老与程序性死亡；细胞的起源与进化；细胞工程技术等多个方面。 (一)对细胞生物学的专业知识有了更深的认识。 1、细胞通讯方面记得第一次听王老师的课就是讲授细胞的通讯，在多细胞生物中，细胞不是孤立存在的，而是生活在细胞社会中，它们必须协调一致，才能维持机体的正常生理机能，它们的协调是通过细胞通讯来完成的。细胞通讯是通过信号分子与受体的识别，从而在靶细胞内产生一系列反应的过程。信号分子有第一信使和第二信使之分，第二信使位于细胞内，由第一信使与受体识别后最先在胞内产生的，它主要与细胞内受体作用，所以受体也可分为表面受体和胞内受体。信号分子与受体的识别作用具有特异性。细胞信号传递所发生的反应有快速反应和慢速反应。快速反应是信号分子与受体作用后直接引起细胞内的一系列代谢反应；慢速反应则需要引起基因表达，再表现出各种代谢反应。细胞通讯过程是个复杂的过程，一个细胞的周围有上百种不同的信号分子，细胞要对这些信号分子进行分析，做出正确的反应。信号转换的研究在近年很热门，但进展缓慢，主要是因为信号转换的复杂性，不同信号的组合产生的效应是不一样的。 2、蛋白质的合成和分选机理蛋白质的合成是在核糖体上，有两种合成体系，一种是在细胞质中游离的核糖体上，另一种是在膜旁核糖体上合成，它们合成的蛋白质将分布到不同的部

医学细胞生物学总复习提纲

细胞生物总复习提纲特别提醒：每道题都有答题限制时间，若时间到了没有主动点提交，系统都会自动提交更新为下一道（系统会默认提交测试者点选得答案，若无点选则无答案），不能回瞧，所以要在注意时间得前提下认真思考作答。一．主要题型 1.英译汉5道，合计5分（一些重点章节得重点单词，不考汉译英）； 2.问答题2个（以细胞膜、内膜系统、细胞核、细胞周期、细胞凋亡等章节内容为主，2题分别为12分与8分，合计20分）； 3.实验图片题10道，合计15分。（电镜图片及光镜图片。电镜图片以实验手册后面得图片为主；光镜图片以实验课做过瞧过得重点结构为主）； 4.选择题：单选60道，合计54分，多选6道，合计6分。以上四项卷面满分合计100分，折算率90％后为90分； 5.平时3次实验到勤及实验报告平均分折算率10％后为 10分。二．重点章节第4、5、8、13章。就是出问答题最有可能得章节。三．主要内容

第一章 1、细胞生物学发展史中得里程碑式事件（每个阶段1－2件事）； 2、基本概念：医学细胞生物学（英文）。第二章 1、细胞得形状要结合有关实例来记忆影响细胞形态得几个方面因素，请瞧教材 2、最小得细胞 3、真核细胞得结构 4、真核细胞与原核细胞得区别 5、分子基础记忆氨基酸，核苷酸（基团及分类，化学键） 6、蛋白质掌握1,2级结构；DNA,RNA得基本结构特点与类型 7、英文：原核细胞、真核细胞、膜相结构、非膜相结构、氨基酸、蛋白质、核酸、核苷酸第三章 1、光学显微镜与电学显微镜得主要特点及其主要差别 2．分辨率，分辨力得概念理解 3、最高分辨率，最大放大倍数 4、老师PPT上有光镜及电镜标本制作厚薄及特殊要求。 5、荧光显微镜得光源，相差显微镜及暗视野显微镜得主要得适用标本、优点。 6、细胞培养技术关注细胞融合得概念，诱导融合方法手段，成功得例子

细胞生物学实验课知识点总结

细胞生物学实验课知识点总结一.细胞基本结构（basic conformation of cells） 1.洋葱表皮细胞 ①实验材料：洋葱鳞片叶内表皮 ②步骤：撕取一层内表皮、展开置于载玻片上、滴加伊红染液、盖上盖玻片、吸取多余染液、观察 ③注意事项：盖玻片放置方法：将盖玻片一端以45度角接触载玻片，另一段缓缓放下（目的：使装片内的气泡尽可能少） 2.人口腔上皮细胞 ①实验步骤：滴加生理盐水于载玻片、牙签刮取口腔内壁、刮取物与生理盐水相混合、盖上盖玻片、滴加甲苯胺蓝、染色5min、洗去浮色（生理盐水）、观察 ②注意事项：刮取口腔：先用第一支牙签将口腔内壁的某一区域挂净，然后用另一支牙签在同一区域刮取口腔上皮； 3.血涂片 ①实验材料：新鲜蟾蜍血 ②实验步骤：滴加蟾蜍血细胞悬液、铺平液体、风干、观察 ③注意事项：制取血细胞悬液：先在试管内加入柠檬酸钠，然后加入新鲜鼠血液（采血方法：摘眼球法）滴加与铺平液体：在载玻片上靠近一端边缘而不是正中央的部位滴加；用另一载玻片以45度角接触液体（确保接触后液体在第二块载玻片接触端的后侧，以免磨碎细胞）后向另一段一次性地、缓慢地平推以展开液体（切忌反复平推，以免磨碎细胞） 4.骨骼肌纤维

①实验材料：蟾蜍腿部肌纤维 ②实验步骤：取材、摘取肌束、展开置于载玻片上、滴加生理盐水、盖上盖玻片、观察 5.蟾蜍精子 ①实验材料：蟾蜍精子（睾丸） ②实验步骤：剪取睾丸、置于生理盐水中、剪碎睾丸、滴加精子混悬液、盖上盖玻片、观察 ③注意事项：蟾蜍睾丸位于下腹部二.细胞器基本形态（basic shape and fine structure of organelles） 1.线粒体活体染色 ①染液：詹纳斯绿B是线粒体专一活性染色剂，呈碱性，具有脂溶性，能穿过细胞膜进入细胞，结合到线粒体内膜上，其上的细胞色素氧化酶可使詹纳斯绿保持氧化状态而呈蓝色 ②实验材料：洋葱鳞片叶内表皮 ③实验步骤：撕取一层内表皮、展开置于载玻片上、滴加一滴詹纳斯绿B、染色15min、盖上盖玻片、洗去浮色（生理盐水）、观察三.细胞化学（cell chemistry） 1.多糖（淀粉） ①实验材料：马铃薯块茎切片 ②试剂：I-KI溶液 ③注意事项：马铃薯切片时刀片应单方向一次性切到底 ④结果：蓝紫色椭圆形颗粒 2.酸性蛋白与碱性蛋白 ①实验材料：新鲜蟾蜍血

医学细胞生物学要点

1.电镜与光镜的主要区别？什么叫显微镜分辨率？光学显微镜是以可见光为照明源，将微小的物体形成放大影像的光学仪器；而电子显微镜则是以电子束为照明源，通过电子流对样品的透射或反射及电磁透镜的多级放大后在荧光屏上成像的大型仪器。显微镜分辨率：分辨率或称分辨力是指在人眼明视距离处，能够清楚地分辨被检物体细微结构最小间隔的能力。 2.电镜主要分哪二类？透视和扫描 3.流式细胞术在科学研究中的应用?目前该技术广泛应用于生物大分子物质的定量，细胞周期分析，细胞表面抗原表达，细胞因子的检测，活细胞分类纯化等领域。 4.配制培养基时调节pH值的目的是什么？因为有的培养物对生长环境PH值要求高，有的则要求低,不同培养物的最适生长pH不同 5.细胞传代培养的目的是什么？传代培养是组织培养常规保种方法之一。也是几乎所有细胞生物学实验的基础。当细胞在培养瓶中长满后就需要将其稀释分种成多瓶，细胞才能继续生长。这一过程就叫传代。传代培养可获得大量细胞供实验所需。 6.蛋白质电泳的种类及特点?蛋白质电泳（一般指SDS-PAGE）一般使用的都是聚丙烯酰胺凝胶电泳，电泳的驱动力靠与蛋白质结合的SDS上所携带的负电荷。特点：分辨力高和固相免疫测定特异性高，敏感等 7.核酸杂交技术的分类?根据杂交对象的不同可分为：DNA与DNA；RNA与DNA另外：Western blot,根据杂交对象位置的不同可分为：固相杂交,液相杂交,原位杂交。 8.聚合酶链式反应PCR的实施步骤是什么？1.DNA变性（90℃-96℃）：双链DNA模板在热作用下，氢键断裂，形成单链DNA2.退火（25℃-65℃）：系统温度降低，引物与DNA模板结合，形成局部双链。3.延伸（70℃-75℃）：在Taq酶（在72℃左右，活性最佳）的作用下，以dNTP为原料，从引物的5′端→3′端延伸，合成与模板互补的DNA链。4.还有就是体外快速DNA复制 9.细胞膜的基本特征是什么？细胞膜把细胞包裹起来，使细胞能够保持相对的稳定性,维持正常的生命活动。此外，细胞所必需的养分的吸收和代谢产物的排出都要通过细胞膜。所以，细胞膜的这种选择性的让某些分子进入或排出细胞的特性，叫做选择渗透性。这是细胞膜最基本的一种功能。如果细胞丧失了这种功能，细胞就会死亡.。细胞膜除了通过选择性渗透来调节和控制细胞内，外的物质交换外，还能以"胞吞"和"胞吐"的方式，帮助细胞从外界环境中摄取液体小滴和捕获食物颗粒，供应细胞在生命活动中对营养物质的需求。细胞膜也能接收外界信号的刺激使细胞做出反应,从而调节细胞的生命活动。细胞膜不单是细胞的物理屏障，也是在细胞生命活动中有复杂功能的重要结构。 10.细胞膜上膜脂和膜蛋白的种类？膜脂有磷脂，糖脂，胆固醇,膜蛋白有膜内在蛋白（整合膜蛋白）（2）膜外在蛋白（周边膜蛋白）（3）脂锚定蛋白（连接蛋白） 11.简述真核细胞中小分子和大分子的跨膜运输途径和主要特点?（1）小分子和离子（需载体蛋白，通道蛋白）被动运输（简单扩散和易化扩散）顺浓度梯度主动运输（消耗能量），（2）大分子物质胞吞胞吐（消耗能量） 12.载体蛋白和通道蛋白在物质跨膜运输中的作用？通道蛋白只参与被动运输，载体蛋白既参与主动运输又参与被动运输，（1）通道蛋白：在蛋白质中心形成一个亲水性的通道，使特定溶质穿越。被动运输②载体蛋白：通过蛋白质发生可逆的构象变化进行物质运输。主动或被动； 13.胞饮作用和吞噬作用的区别？一、吞噬作用，细胞内吞较大的固体颗粒物质，如细菌、细胞碎片等，称为吞噬作用。吞噬现象是原生动物获取营养物质的主要方式，在后生动物中亦存在吞噬现象。如：在哺乳动物中，中性颗粒白细胞和巨噬细胞具有极强的吞噬能