根皮素对人_T细胞杀伤胃癌SGC_7901细胞的影响及机制探讨
本文受南京军区医学科技创新经费资助项目(09MA037)资助 中国人民解放军第九七医院实验科,徐州221004
作者简介:刘 刚(1984年-),男,在读硕士,主要从事肿瘤免疫治
疗方面的研究,E mail:successliugang@https://www.wendangku.net/doc/4713777393.html,;
通讯作者及指导教师:费素娟(1963年-),女,硕士,教授,硕士生导
师,主任医师,主要从事消化系肿瘤的基础与临床研究,E mai l:feisj1031@https://www.wendangku.net/doc/4713777393.html, 。
doi:10.3969/j.issn.1000 484X.2011.07.006
中医中药与免疫
根皮素对人 T 细胞杀伤胃癌SGC 7901细胞的影响及机制探讨
刘 刚 陈复兴 刘军权 吕小婷 费素娟 (徐州医学院附属医院消化内科,徐州221002)
中国图书分类号 R735.2 文献标识码 A 文章编号 1000 484X(2011)07 0602 05
[摘 要] 目的:探讨根皮素对人 T 细胞杀伤胃癌SGC 7901细胞的影响及其机制。方法:IPP 法扩增人外周血 T 细胞,不同浓度的根皮素作用于 T 细胞及胃癌SGC 7901细胞48小时后,MTT 法检测 T 细胞及SGC 7901细胞的生长曲线,FC M 检测 T 细胞PFP 及GraB 的表达;LDH 释放法检测 T 细胞对SGC 7901细胞的杀伤活性;Western blot 检测 T 细胞中Wnt3a 的表达情况。结果:IPP 作用10天后, T 细胞比例由3.12%增加到79.6%。与对照组比较,浓度2.35~18.75 g/ml 的根皮素作用后 T 细胞的增殖率显著提高(P <0.05),75 g/ml 根皮素对SGC 7901细胞生长抑制率显著提高(P <0.05),且2 35~75 g/ml 根皮素作用后的 T 细胞对SGC 7901细胞的杀伤活性明显增强(P <0.05), T 细胞中PFP 、GraB 及Wnt3a 的表达较对照组显著增加(P <0.05)。结论:根皮素能够增强 T 细胞对SGC 7901细胞的杀伤作用,其机制可能与根皮素促进 T 细胞的增殖,提高 T 细胞PFP 、GraB 表达及活化Wnt 信号通路有关。
[关键词] 根皮素; T 细胞;胃癌;杀伤活性
Explore the effect and mechanism of phloretin on T cells kill gastric cancer SGC 7901cells
LIU Gang,C HEN Fu Xing,LIU Jun Quan,L Xiao Ting ,FE I Su Juan.Department o f Gastroenterology ,the Affiliated Hospital o f Xuzhou Medical College,Xuzhou 221002,China
[Abstract] Objective:To explore the effect and mechanism of phloretin on T cells kill human gastric cancer SGC 7901cells.Meth ods: T cells were amplified from human peripheral blood cells through IPP method.After cultured with different concentrations of phloretin for 48hours,MTT method was used to test the growth curve of T cells and SGC 7901cells;FC M was used to tes t the expression of PFP and GraB of T cells;LDH release method was used to test the cell killing activity of T cells to S GC 7901cells;Western blot to test the Wnt3a expres sion of T cells.Results:After cultured with IPP for 10days, T cells increased from 3.12%to 79.6%.Compared to the control group,when the concentrati on of phloretin increased from 2.35 g/ml to 18.75 g/ml it could proliferate the T cell growth significantly (P <0.05)and phloretin at concen tration 75 g/ml could inhibit the gastr ic cancer SGC 7901cell growth significan tly(P <0.05).When the concentration in creased from 2.35 g/ml to 75 g /ml the killing activity of T cells to the SGC 7901cells enhanced significantly (P <0.05);the expression of PFP,GraB and Wnt 3a increased significantly compared to the control group (P <0.05).Conclusion:Phloretin can enhance the killing ef fect of T cells to SGC 7901cells,the mechanism may be related to the phloreti n could proliferate the T cell growth,increase the expression of PFP,GraB and activate the Wn t signaling pathway.
[Key w ords] Phloretin; T cells;Gastric cancer;Killing activity
近年来消化系恶性肿瘤发病率日趋增加,治疗方案以手术、化疗或放疗为主,但是对于失去手术机会且不能耐受放、化疗的晚期肿瘤患者,如何提高其
生存率及生活质量成为治疗的关键。随着肿瘤免疫
学的发展,肿瘤过继免疫治疗成为目前肿瘤治疗新的研究热点。 T 细胞是目前肿瘤免疫治疗中常用的细胞之一,在人体主要分布于皮肤、小肠、食道、肺和生殖器官等的上皮组织内,而在外周血T 淋巴细胞中仅占0.15%~5%。自20世纪80年代发现 T 细胞具有 受体以来,有关 T 细胞在免疫调节、肿瘤免疫监视和特异性初次免疫应答中所起的关键作用已不断地被认识[1]。根皮素(Phloretin)是存在于苹果、梨等水果及多种蔬菜汁液中的天然活性物
602 中国免疫学杂志2011年第27卷
质,其化学成分是3 (4 羟基苯基) 1 (2,4,6 三羟基苯基) 1 丙酮。研究表明根皮素能够通过抑制 型葡萄糖转运蛋白来诱导肝癌细胞凋亡[2]。为了解根皮素对免疫细胞的影响,我们在体外将根皮素作用于 T细胞,观察作用前后 T细胞功能及其相关蛋白表达的变化,探讨根皮素对人 T细胞杀伤胃癌SGC 7901细胞的影响及其可能的机制,为根皮素用于肿瘤的治疗提供实验依据。
1 材料与方法
1.1 实验材料 根皮素、四甲基偶唑蓝(MTT)、二甲亚砜(DMSO)均购自Sigma公司;人胃癌细胞株SGC 7901购自中国科学院上海细胞研究所;重组人白细胞介素2(rhI L 2)及重组人干扰素 (rhIFN )购自厦门特宝生物工程股份有限公司;异戊烯焦磷酸(Isopentenyl pyrophosphate,I PP)、RPMI1640培养基、小牛血清、胰蛋白酶均购自Gibco公司;抗人 T细胞受体(anti TCR)、颗粒酶B(Granzyme B, GraB)及穿孔素(Perforin,PFP)均购自杭州联科生物;鼠抗人Wnt3a购自Santa c ruz公司。
1.2 主要仪器 恒温C O2培养箱(Heraeuas公司);倒置显微镜(德国Wilovert公司);超净工作台(苏州净化设备厂);流式细胞仪(美国BD公司);低温离心机(eppendorf公司);垂直板电泳装置和电转移槽Bio Rad(Hercules,USA);全自动生化分析仪(Olym pusAU1000)和配套的LDH试剂盒、SEAC全自动酶免系列分析仪(北京希亚克技术有限公司)。
1.3 方法
1.3.1 人 T细胞的培养和鉴定 抽取健康人外周血100ml,分离单个核细胞,置于含小牛血清(100 ml/L)、人AB血清(50ml/L)、IPP(2 g/L)和IL 2 (100U/ml)的RPMI1640培养液中培养10天后收集细胞,抗 TC R FITC染色,FCM分析,阴性对照为FI TC标记的小鼠IgG。
1.3.2 胃癌细胞株SGC 7901的培养 将复苏后的胃癌SGC 7901细胞放入细胞培养瓶中,加入15ml 细胞培养液,在37 、5%CO2条件下培养,2~3天更换细胞培养液,细胞铺满瓶底时,使用
2.5g/L的胰蛋白酶消化脱壁。收集细胞,800r/min离心3分钟,弃去上清,生理盐水反复吹打混匀,计数后用于实验。
1.3.3 MTT法检测根皮素对人 T细胞及胃癌SGC 7901细胞生长的影响 取胃癌SGC 7901细胞和培养10天的 T细胞,分别配成1 106ml-1,接种于96孔板中,0.2ml/孔,于37 、5%C O2培养箱中培养。24小时后加入根皮素(终浓度分别为2 35、4.7、18.75、37.5、75 g/ml),设不加药物对照组,每个组设5个复孔。继续孵育48小时后每孔加入5mg/ml MTT液20 l,于37 、5%C O2培养箱中培养4小时,弃上清,加入DMSO150 l,轻轻震荡10分钟,在540nm波长酶标仪上测定各孔光密度值(OD),求其平均值后计算细胞增殖率及生长抑制率。
1.3.4 FC M检测根皮素作用48小时后 T细胞中PFP及GraB的表达 将培养10天的 T细胞加入6孔细胞培养板中,每孔3ml,培养24小时后加入不同浓度的根皮素(终浓度分别为
2.35、4.7、18.75、37.5和75 g/ml),同时设不加药物为对照组。继续孵育48小时,收集细胞,10360r/min离心5分钟。PBS洗一遍,调整细胞浓度为1 1010L-1。每管加入anti TCR FI TC20 l,避光孵育30分钟。加入100 l固定液室温避光孵育15分钟,PB S洗涤, 1500r/min离心5分钟,弃上清。每孔加100 l破膜液,100 l PFP PE抗体及GraB抗体。室温避光孵育15分钟,PBS洗涤,2000r/min离心5分钟,弃上清,PBS0.5ml重悬细胞,上机检测。
1.3.5 LD H释放法检测根皮素作用后 T细胞对胃癌SGC 7901细胞的杀伤活性 将培养10天的 T细胞加入6孔细胞培养板中,每孔3ml,培养24小时后加入不同浓度的根皮素(终浓度分别为2 35、4.7、18.75、37.5、75 g/ml)继续培养48小时,同时设不加药物为对照组。收集 T细胞及SGC 7901细胞,生理盐水洗涤,调整 T细胞及SGC 7901细胞浓度分别为2 109L-1和2 108L-1,使效靶细胞比例为10 1,混合后置于37 、5%CO2培养箱中孵育6小时,1500r/min离心10分钟,收集上清液,全自动生化分析仪340nm波长下测定吸光度值(A),每检测样本设5个复管。杀伤活性(%)=(A实验组 A效应细胞自然释放组)/(A靶细胞最大释放组 A靶细胞自然释放组) 100%。
1.3.6 Western blot检测 T细胞中Wnt3a蛋白的表达 浓度4.7、18.75及75 g/ml的根皮素与 T 细胞共同培养48小时后离心收集 T细胞,调整细胞数为1 109L-1,PBS洗涤,2000r/min离心10分钟,弃上清,加入细胞裂解液250 l,冰浴30分钟, 4 13800r/min离心10分钟,收集上清作为细胞总蛋白,Forlin酚法测蛋白浓度,按100 g/孔上样,进行凝胶电泳、转膜、封闭。分别加入一抗鼠抗人W nt3a单克隆抗体及 actin多克隆抗体(1 500稀释),4 孵育过夜,二抗为兔抗鼠多克隆抗体,(1 1000稀释),室温孵育2小时,四唑硝基蓝(NB T)/
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刘 刚等 根皮素对人 T细胞杀伤胃癌SGC 7901细胞的影响及机制探讨 第7期
5 溴 4 氯 3 吲哚基 磷酸盐(BCIP)显色,扫描条带,
I mage J软件分析灰度值,以 actin为内参表示Wnt 3a蛋白的相对表达强度。
1.4 统计学分析 所有数值均以x s表示,采用SPSS16.0统计分析软件进行分析,多个样本均数比较采用方差分析,两两比较采用Duncan法或者S N K法分析,检验水准 =0.05,P<0.05为有统计学意义。
2 结果
2.1 人 T细胞的培养及鉴定 FC M结果显示,体外培养10天后,人 T细胞的比例由培养前的3 12%增加到79.6%,结果如图1。
2.2 MTT法检测不同浓度根皮素对 T细胞及胃癌SGC 7901细胞生长的影响
2.2.1 不同浓度根皮素对 T细胞生长的影响 不同浓度的根皮素作用于 T细胞48小时后,细胞增殖情况如图2,根皮素浓度在2.35 g/ml至18.75 g/ml时, T细胞的增殖率较对照组显著增高(P<0.05),浓度18.75 g/ml时达到最高峰(63 8%),根皮素浓度超过18.75 g/ml时 T细胞的增殖率逐渐下降,Duncan法统计分析显示,与对照组比较,2.35、4.7及18.75 g/ml浓度组 T细胞的增殖率显著提高,差异有统计学意义(P<0.05), 37.5及75 g/ml组与对照组比较无显著差异(P> 0.05)。
2.2.2 不同浓度根皮素对胃癌SGC 7901细胞生长的影响 不同浓度的根皮素作用SGC 7901细胞48小时后,SGC 7901细胞的生长抑制情况见图3。根皮素浓度在2.35 g/ml至18.75 g/ml时,SGC 7901细胞的生长抑制率略有下降,根皮素浓度超过18 75 g/ml后,细胞生长抑制率随浓度增加而逐渐增加,Duncan法统计分析显示,75 g/ml组较对照组差异显著(P<0.05),其余各组与对照组比较均无显著差异(P>0.05)。
2.3 FC M检测根皮素作用 T细胞48小时后GraB 及PFP的表达结果
2.3.1 T细胞GraB的表达结果 根皮素与 T 细胞共同培养48小时后,FC M检测结果显示,根皮素作用后 T细胞GraB的阳性表达率较对照组明显上升,S N K法分析显示各浓度组与对照组比较均有统计学意义(P<0.05)。各实验组中,4.7 g/ ml组较2.35 g/ml组显著增加(P<0.05),其余各组间无显著差异,结果如图4、5。
2.
3.2 T细胞PFP的表达结果 不同浓度根皮素处理 T细胞48小时后,S N K法分析显示,各实验组 T细胞PFP的表达率均较对照组显著上升,差异均有统计学意义(P<0.05),且18.75、37.5及75 g/ml组PFP的表达率显著高于2.35 g/ml及4 7 g/ml组(P<0.05),但18.75、37.5及75 g/ml 组间及2.35、
4.7 g/ml组间比较均无显著差异(P>0.05),结果如图6、7。
2.4 LDH释放法检测 T细胞对胃癌SGC 7901细胞杀伤活性检测结果 结果显示,不同浓度根皮素
图1 培养10天前后人 T细胞FCM检测结果
Fig.1 The FCM results of T cells cultured before and after 10days
Note:A.Before cul tured;B.After cultured.
图2 不同浓度根皮素对 T细胞生长的影响(x s,n=5) Fig.2 The effect of different concentrations of phloretin on T cell growth(x s,n=5)
图3 不同浓度根皮素对SGC 7901细胞生长的影响(x s, n=5)
Fig.3 The effect of different concentrations of phloretin on SGC 7901cell growth(x s,n=5)
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图4 根皮素作用48小时后 T 细胞GraB 的表达(x s,
n =5)Fig.4
The GraB expression of T cells cultured with phloretin for 48hours(x
s,n =
5)
图5 T 细胞GraB 的FCM 检测结果Fig.5 The FC M result o f GraB in the T cells
Note:A.Control group;B.Phloretin 4.75 g/
ml.
图6 根皮素作用48小时后 T 细胞PF P 的表达(x
s,n =5)
Fig.6 The PF P expression of T cells cultured with phloretin
for 48hours(x s,n =5)
作用48小时后, T 细胞对胃癌SGC 7901细胞的杀伤活性逐渐增强(P <0.05)。随着根皮素浓度的逐渐增加, T 细胞对胃癌SGC 7901细胞的杀伤活性逐渐增强,浓度37.5 g/ml 时达最高峰(89%)。当
根皮素浓度超过37.5 g/ml 后,杀伤活性略有下降,Duncan 法统计分析显示,各实验组与对照组比较差异显著(P <0.05),且各实验组间比较差异有统计学意义(P <0.05),结果见图8。
2.5 Western blot 检测 T 细胞中Wnt3a 及 actin 的表达结果 根皮素作用48小时后 T 细胞中Wnt3a 蛋白的表达存在差异,灰度值分析结果显示,
各实验组灰度值高于对照组,且S N K 法分析显示
图7 T 细胞PFP 的FCM 检测结果Fig.7 The FCM result of PFP in the T cells
Note:A.Control group;B.Phloreti n 18.75 g/ml.
图8 根皮素作用后的 T 细胞后对胃癌SGC 7901细胞的
杀伤活性(效靶比10 1,x
s,n =5)
Fig.8 The killing activity of T cells which cultured with
phloretin to SGC 7901cells (effcet target 10 1,x
s,n =5)
图9 根皮素作用后 T 细胞Wnt3a 及 actin 的表达(x
s,n =3)
Fig.9 The expression of Wnt3a and actin in the T cells
after culture w ith phloretin(x
s,n =3)
Note:A.Control group;B.Phloreti n 75 g/ml;C.Phloreti n 18.75 g/ml;D.
Phloretin 4.7 g/ml.
较对照组差异显著(P <0.05),且各浓度组间差异显著(P <0.05),结果如图9。
3 讨论
胃癌在我国发病率较高,每年死于胃癌的患者居消化道肿瘤死亡原因的首位[3]
。如何增强患者抗肿瘤细胞免疫功能,是延长胃癌患者生存期的重要措施。免疫治疗是一种采用多种免疫细胞治疗恶性肿瘤的新技术,能提高患者免疫系统对肿瘤抗原的识别和提呈能力,具有靶向杀伤肿瘤细胞而不伤及
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正常组织,从而达到减少肿瘤复发和转移的目的,已成为继手术、放疗及化疗之后恶性肿瘤的第四种主要治疗手段。
罗辉等[4,5]的研究表明,根皮素能够抑制肝癌BEL 7402细胞的生长,且呈浓度依赖性,并且可能通过线粒体途径诱导BE L 7402细胞凋亡,此外,根皮素能通过干预与肝癌细胞侵袭力直接相关的细胞粘附、运动及侵袭等环节,抑制肿瘤细胞转移潜能。
T细胞是广泛分布于消化、呼吸系统组织内的固有免疫T细胞,除了有与 T细胞类似的一些功能特征外, T细胞还具有识别抗原不需要MHC 分子提呈、直接识别蛋白质和肽类抗原、非肽类抗原,抗原提呈功能和通过细胞因子起免疫调节作用等多种功能[6]。Campillo等[7]证实,人外周血中培养的 细胞具有较强的抗肿瘤效应。本组实验显示,不同浓度的根皮素作用于 T细胞48小时后,当根皮素浓度在2.35至18.75 g/ml范围内时, T 细胞的增殖率逐渐上升,浓度超过18.75 g/ml后 T细胞的增殖率则逐渐下降,提示适当浓度的根皮素能够促进 T细胞的增殖,为根皮素用于肿瘤的免疫治疗提供了理论依据。
PFP在T细胞诱导的靶细胞凋亡中处于中心地位,但颗粒酶才是靶细胞的真正杀伤者[8,9]。T细胞杀伤靶细胞时,首先由PFP在靶细胞膜上构筑小孔,然后颗粒酶进入靶细胞使其DNA断裂、发生凋亡[10]。迄今为止,发现有五种颗粒酶存在于人体中,分别是A、B、H、K和M[11]。其中GraB是最主要的效应分子,PFP/颗粒酶途径亦是机体抗肿瘤免疫的重要途径之一,PFP形成的穿膜孔道是使颗粒酶、颗粒溶素等能够进入靶细胞,诱导靶细胞凋亡[12]。GraB可以通过激活caspase蛋白、直接裂解靶细胞内成分和诱导线粒体凋亡通路三种方式诱导靶细胞凋亡[13 15]。我们的研究发现根皮素作用后的 T细胞中GraB及PFP的表达均较对照组明显提高(P< 0 05),支持上述观点。本组实验结果显示,浓度2 35~18.75 g/ml的根皮素能够显著提高 T细胞的增殖率(与对照组比较P<0.05),提示适当浓度的根皮素能够促进 T细胞的增殖。同时FCM检测结果显示,与对照组比较,不同浓度的根皮素(2. 35~75 g/ml)均可显著上调 T细胞中GraB及PFP的表达(P<0.05)。另外将根皮素作用后的 T细胞与胃癌SGC 7901细胞以效靶比例( T细胞 胃癌细胞)10 1混合,继续培养6小时后应用LD H释放法检测 T细胞对胃癌SGC 7901细胞的杀伤活性,结果发现,与对照组比较根皮素能够显著增强 T细胞的杀伤活性,且随着根皮素浓度的增加, T细胞对SGC 7901细胞的杀伤活性逐渐增强,以上结果提示根皮素能够增强 T细胞对胃癌SGC 7901细胞的杀伤活性,其机制可能与其促进 T细胞的增殖、上调 T细胞中GraB、PFP的表达有关。
Wnt信号通路是目前研究的热点。Wnt家族是一类分泌型的细胞信号传导蛋白,不仅可以通过复杂的信号传递通路调控胚胎的早期发育,而且对细胞的分化、增殖及生长起重要的调节作用[16]。W nt3a是Wnt家族的成员之一,Wnt3a信号蛋白可以激活经典的Wnt/ catenin信号通路。Willert等[17]所纯化的Wnt3a信号蛋白通过激活Wnt信号通路能够促使骨髓中的造血干细胞分裂和自我复制,认为W nt可能在一系列组织的自我更新中起信号作用。此外,Wnt3a能用于离体条件下长期维持造血干/祖细胞的自我更新能力并扩增其数量,主要是通过W nt3a激活Wnt信号通路,上调 catenin的表达,从而提高造血干细胞的自我更新能力[18]。我们的实验研究表明根皮素作用后 T细胞中W nt3a蛋白的表达量明显高于对照组(P<0.05),提示根皮素能够上调 T细胞中Wnt3a表达,推测Wnt信号通路在根皮素促进 T细胞的增殖中可能起着重要作用。
此外,Image J灰度值分析表明,18.75 g/ml根皮素组 T细胞Wnt3a的灰度值最大,说明该浓度根皮素作用后 T细胞中Wnt3a的表达量最高。且该浓度作用时, T细胞的增殖率达到最高峰值, T细胞对胃癌SGC 7901细胞的杀伤活性也明显提高, T细胞GraB及PFP的表达率也达到或接近最高峰值,以上结果表明浓度为18.75 g/ml根皮素为增强 T细胞对胃癌SGC 7901细胞杀伤活性的最适浓度。
综上所述,本实验结果显示,根皮素不但能够促进 T细胞的增殖,抑制胃癌SGC 7901细胞的生长,而且能够有效提高 T细胞对胃癌SGC 7901细胞的杀伤活性,其机制可能与根皮素上调 T细胞中PFP、GraB的表达有关,以上结果为根皮素应用于胃癌的免疫治疗提供了一定实验依据。
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[收稿2011201202 修回2011203209]
(编辑倪鹏)
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[收稿2011203224 修回2011204211]
(编辑张晓舟)
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黄红艳等姜黄素诱导的免疫耐受性人树突状细胞的研究第7期
过表达CCR3的人胃癌细胞株的建立
过表达CCR3的人胃癌细胞株的建立 目的建立过表达CCR3人SGC7901胃癌细胞细胞株，为后续CCR3在胃癌转移的研究奠定基础。方法分离正常人外周血单个核细胞，提取总RNA，PCR 扩增CCR3基因CDS序列，连接至质粒pEFP-N1，进行CCR3基因的克隆，构建含有CCR3基因的pEFP-N1-CCR3重组质粒。重组质粒通过脂质体转染法对人SGC7901胃癌细胞进行转染。结果Realtime-PCR及Westernblot证实CCR3基因能够在人SGC7901胃癌细胞中正确表达。结论成功建立稳定表达CCR3基因的SGC7901胃癌细胞株，为研究CCR3在胃癌细胞株转移中的机制奠定了基础。 标签：CCR3；SGC7901细胞；胃癌转移 趋化因子受体（Chemokine receptor）是表达在一些特定的细胞表面的G蛋白偶连的七跨膜域受体[1]。这些受体与细胞外的配体趋化因子结合。与特异的趋化因子结合后，趋化因子受体引发钙离子内流而产生细胞趋化反应，从而诱导细胞到生物体的特定部位。CCR3在胃癌远端迁移上到底扮演什么样的角色也未完全清楚。目前，将外源性CCR3基因转入人胃癌细胞使其过度表达未见报道。本实验尝试构建含有CCR3的重组质粒pEFP-N1-CCR3并转染至人SGC7901胃癌细胞，并检测转染后SGC7901细胞CCR3的表达情况。 1资料与方法 1.1一般资料 1.1.1质粒菌株和慢病毒包装细胞pEFP-N1慢病毒穿梭载体，psPAX2和pMD2G包装质粒，大肠杆菌DH5。人SGC7901胃癌细胞，生长培养基为高糖DMEM培养基，含10%胎牛血清。 1.1.2 主要试剂及引物Lipofectine2000转染试剂盒；T4连接酶；质粒抽提试剂盒；限制性内切酶EcoRI和BamHI；胎牛血清；CCR3一抗；辣根过氧化物酶标记山羊抗兔IgG。 1.2人SGC7901胃癌细胞的培养人SGC7901胃癌细胞常规培养于含10%胎牛血清的DMEM高糖的完全培养基中，置于37℃，5%CO2孵育箱中贴壁培养， 0.25%胰酶3d传代换液一次。 1.3 pEFP-N1-CCR3的构建及鉴定 1.3.1 CCR3的CDS序列扩增取健康人外周血，淋巴细胞分离液分离单个核细胞并抽提总总RNA，在Pubmed中的nucleotide上查询CCR3的CDS编码区并设计克隆引物，并在克隆引物中加入BglII和EcoRI酶切位点，用taq聚合酶扩增CCR3的CDS序列，
肿瘤病例分析
肿瘤病例分析 唐某,男,50岁,上腹部周期性疼痛１５年。近半年疼痛加剧,疼痛无规律、经常呕吐。两个月来,面部及手足浮肿,尿量减少,食欲差。半小时前排柏油样大便,并呕吐鲜血,突然昏迷,急诊入院、体检:消瘦,面色苍白,四肢厥冷,血压8/5Kpa,心音快而弱。双腋下及左锁骨下淋巴结肿大,质硬、化验:WＢＣ 5×１0９/Ｌ,Ｎ 0。70 ,Ｌ0.25 ,M 0。０4、入院后出血不止,血压急剧下降,抢救无效死亡。 尸检:全身水肿,两下肢及背部为甚。胸腹腔内分别有500MＬ淡黄色澄清液体、胃小弯幽门区有4CM×５CＭ×５CＭ肿块一个,质硬,表面出血坏死呈溃疡状。取肿块处胃黏膜作病理检查,镜下见局部正常胃黏膜破坏、异型细胞生长,细胞大,核大,染色深,可见不对称分裂像,腺上皮增生,腺体大小不一,排列紊乱,异型腺体已穿过黏膜肌层浸润达胃肌层及浆膜。肝大,黄色质软,油腻,镜下见肝细胞内有大小不等之圆形空泡,核被挤向一侧,无异型性,苏丹Ⅲ染色呈橘红色。肾小管上皮细胞肿大,肾小管狭窄,肾小管上皮细胞被布满针尖大小伊红色颗粒、 讨论题、 一、作出病理诊断,并按病变发展解释患者出现得各种临床表现。、 二、肝,肾发生什么病变,分析其原因。 三、患者死因就是什么? 四、结合本病例,影响恶性肿瘤患者预后得因素有哪些？ 答案:
一、病理诊断: １、慢性胃溃疡 2、胃癌伴左锁骨上及腋下淋巴结转移 3、肝脂肪变 ４、肾小管上皮细胞水肿 5、胸腹腔积水及全身浮肿 6、失血性休克 诊断依据: 1、慢性胃溃疡: 病史:上腹部疼痛15年,常在饭后１～2小时疼痛发作(饱食后溃疡病胃液中得胃酸刺激溃疡局部得神经末梢引起疼痛、) 2、胃癌伴左锁骨上及腋下淋巴结转移: 病史:近二年余疼痛无规律,近半年腹痛加剧(癌变),经常呕吐(幽门狭窄)。两个月来,面部及手足浮肿,尿量减少,食欲极差(恶病质,低蛋白血症)。半小时前排黑色柏油样大便,并呕吐鲜血(出血),突然昏倒(失血性休克)。两腋下及左锁骨上淋巴结显著肿大,质硬、(癌细胞淋巴道转移) 尸检:胃小弯幽门区有4cm×5cm×5cm肿块一个,质硬,表面出血坏死呈溃疡状。取肿块处胃粘膜作病理检查,镜下见局部正常胃粘膜破坏,异型细胞生长,细胞大,核大,染色深,可见不对称核分裂像,腺上皮增生,腺体大小不一,排列紊乱,异体已穿过粘膜肌层浸润达胃肌层及浆膜。
胃癌的发病机制及预防
胃癌的发病机制及预防 姓名：孟慧佳学号：2011013281 班级：生物工程111 正文： 胃界于食道和十二指肠之间，是消化道最宽大的部分，它的形状和位置随内容物的多寡和体位变化而改变。胃分4个部分，靠近食道的部分是贲门部，胃上部膨大部分是胃底部，自胃底部往下是胃体部，靠近十二指肠的部分叫幽门部。 在胃内壁上覆盖着一层厚约0.3-1.5毫米的胃黏膜，胃黏膜上生长着三种腺体：即贲门腺、胃底腺和幽门腺。三种腺体加起来的数量是惊人的，每天分泌的胃液的数量约有1500-2500毫升，贲门腺和幽门腺主要分泌黏液，起到保护胃黏膜的作用。胃酸的强刺激和胃蛋白酶的强消化力，都不能破坏胃黏膜，主要就是因为黏液总是先于胃酸和胃蛋白酶分泌出来，并均匀地布散到胃壁上的缘故。胃黏膜的这种巧妙的自我保护功能，是令人叹为观止的大自然的杰作之一。 胃的功能有：1．存放食物。液体食物在胃里停留时间很短，油脂性食物在胃里停留时间较长，混合性食物在胃里停留时间约4-6个小时。 2．胃蛋白酶可消化食物中的蛋白质。 3．制造内因子及吸收维生素B2。 4．胃酸可杀灭随食物进到胃里的细菌。 胃内有食物时，胃的蠕动方向是由贲门向幽门进行，当胃内容物排空后、血糖也消耗到较低水平时，胃会由幽门向贲门方向逆性蠕动，这叫饥饿蠕动，使人产生饥饿感。 胃癌介绍： 恶性肿瘤胃癌起源于胃壁最表层的粘膜上皮细胞，可发生于胃的各个部位（胃窦幽门区最多、胃底贲门区次之、胃体部略少），可侵犯胃壁的不同深度和广度。癌灶局限在粘膜内或粘膜下层的称为早期胃癌，侵犯肌层以深或有转移到胃以外区域者称为进展期胃癌。肉眼或胃镜观察胃癌有多种形态，如表浅型、肿块型、溃疡型、浸润型、溃疡癌（为慢性胃溃疡癌变）。显微镜放大观察癌细胞有多种类型（组织学分类），如腺癌（占约90%，包括乳头状腺癌、管状腺癌、粘液腺癌、印戒细胞癌）、腺鳞癌、鳞状细胞癌、未分化癌、类癌。更细微的癌细胞内部的分子结构也有很多差异，因此，虽都称为胃癌，即使肉眼和显微镜下所见类型是相同的，但个性仍有很大差异，目前并不知晓究竟有多少个性独特的胃癌。 胃癌的发病机制： 正常胃粘膜上皮细胞是由原始新生细胞（干细胞）不断分裂生长分化而来，何时生长何时死亡都是受机体控制的，不会疯狂失控生长。干细胞都有各种原癌基因和抑癌基因，绝大多数情况下原癌基因的特性不表达出来，不会形成致癌物质，因此也就不能发育成胃癌细胞。 有胃癌家族史者原癌基因可能更容易表达出来，这就是遗传的因素。除了遗传等内在因素外，还有很多外在的致癌因素，如上述高危人群面临的各种非遗传因素，也可直接诱发或长期破坏胃粘膜屏障使促癌物质更易诱发干细胞癌基因表达或基因突 变而产生致癌物，使新生不成熟的原始细胞不能分化成具有正常功能的胃粘膜上皮细胞，而是变成各种分化程度不良且生长失控的非正常细胞。 若机体的免疫监测功能正常，往往可以清除少量的异常细胞，但当长期心里状态不佳引起内分泌系统异常及免疫功能长期低下、或异常细胞由于某种未知原因逃逸了机体的免疫监测，则异常细胞最终发展成机体无法控制其生长的胃癌细胞，完成癌变过程。
胃癌治愈的案例
胃癌治愈的案例 【篇一：胃癌治愈的案例】 患者，女性，24岁，诊断：胃体大弯侧中部腺癌 iv期 (腹腔动脉周 围淋巴结、腹主动脉旁、胰十二指肠淋巴结转移)。患者一般状况评 分(0-100分之间)仅50分。 患者入院时，上腹部和腰部疼痛明显，伴有频繁恶心、、返酸，呕 吐物为黑或咖啡色液体，进食少。肿瘤标志物检查：afp 91.67ug/l，cea 2.62ug/l，ca19-9 278.5u/ml，ca125 153.7u/ml，ca15- 35.46u/ml。先给予对症及支持治疗，一方面控制症状，一方面改善 机体营养及免疫状态。患者一般状况评分升至60分以上。 患者于2007年7月6日起使用最新的靶向治疗药物——爱必妥 (c225)联合folfox4(奥沙利铂+氟尿嘧啶+亚叶酸)方案治疗。 4 周期治疗后，患者腹部和腰部疼痛消失，恶心、呕吐明显好转，进 食正常。肿瘤标志物检查：afp 1.44ug/l，cea 1.08ug/l，ca19-9 21.47u/ml，ca125 26.07u/ml，ca15-3 10.33u/ml。与治疗前相比，肿瘤标志物降至正常。治疗过程中患者出现2度骨髓抑制(或中性粒 细胞减少)和1度皮疹，对症处理后上述症状好转。 点评：患者为晚期胃癌，发现这一疾病的时候，肿瘤已经穿透胃壁，并对周围的组织和器官有了侵犯，有大的淋巴结转移；而且这位患 者仅有24岁，其发病年龄非常早；入院的时候还合并有各种并发症，包括呕血()；这些都是高危的因素，提示患者的生存预后并不好。 但医院在积极控制患者出现的相关症状，并加强了营养及免疫支持 治疗后，使患者的一般状况有所好转，获得了后续抗肿瘤治疗的机会。这一点是来之不易的。 在制定抗肿瘤治疗措施方面，医院结合患者的病情、对治疗的耐受 情况以及最新的治疗药物和方案等进行了综合的判断和分析。在疗 效已经得到肯定的治疗晚期胃癌的几种新药联合方案中，医院选择 了奥沙利铂这一相对来说副反应较小的药物。使患者在治疗过程中 免受过多化疗副反应所带来的困扰，从而对治疗更具信心。 【篇二：胃癌治愈的案例】 自从西方医学引进中国以来，在中国的医学领域成为西医垄断的首 席权威，从中央的卫生部到全国的各大医院都是以西医为独裁主导，虽然在各个省市仍然存在着中医的机构，然而中医在中国的当代医
胃癌来临前的征兆
胃癌来临前的征兆 文章目录*一、胃癌来临前的征兆1. 贫血是胃癌来临前征兆2. 上腹部不适、疼痛是胃癌来临前征兆3. 烧心和反酸是胃癌来临前征兆*二、怎样预防胃癌的发生*三、胃癌患者有哪些症状 胃癌来临前的征兆 1、贫血是胃癌来临前征兆首先是一个超级隐蔽的胃癌征兆,平时我们压根不会把它往胃病上去联想,这就是贫血。原因是有胃癌的人,肿瘤会破坏血管导致胃出血,有些人就会有呕血的症状,这是导致贫血的主要原因。那么,我们怎么判断自己是不是贫血? 一看面色,贫血的人面色发白发黄;二看眼底,贫血的人眼底发白,看不到什么红色的毛细血管;三看指甲,正常人的指甲是粉红的,贫血的人会发白,就是我们按压之后的这种白。 2、上腹部不适、疼痛是胃癌来临前征兆上腹部不适也是胃癌最常见的初发症状,主要表现为进食后有饱胀感或有烧灼感,反复发作,发作的持续时间并不长,症状也不是很剧烈,容易被人误以为是消化不良或胃炎,导致被忽视。 刚开始比较轻微,然后逐渐加重。这种疼痛感有时是隐隐作痛,有时是间歇性的钝痛。还有些患者是有节律性的疼痛(这种胃窦癌比较明显),进食或吃药后会缓解;有一些老人的痛觉神经比较迟钝,感觉不到胃痛以为只是腹胀,这种情况也需要当心。胃癌
早期的上腹部疼痛常常会被诊断为胃炎或胃溃疡,患者需要格外留心。 3、烧心和反酸是胃癌来临前征兆专家认为,烧心通常有两种起因: 一是吃得过饱,胃里盛不下这么多东西的时候会导致食物反流到食管里,导致烧心;二是经常吃甜或辣等刺激性的食物使胃酸分泌过多。 胃酸过多除了会腐蚀胃以外,如果出现胃里的东西反流到食管里,感觉到烧心反酸的时候,说明你的食管也会被胃酸腐蚀,所以长时间有烧心反酸症状的人不仅仅是胃里容易出现问题,食管也会出现一些炎症。 有些40-60岁的中老年人,在夜间或凌晨有类似心绞痛一样的胸痛症状,而且疼痛的位置在胸前区,也有可能是因为食物反流到食管,对黏膜形成刺激而产生的疼痛。所以遇到有心绞痛的患者如果检查心脏没有什么问题,要考虑去消化科检查一下,可能是胃出了问题。 怎样预防胃癌的发生1、少吃或不吃腌菜。腌菜中含有大量的亚硝酸盐和二级胺,在胃内适宜酸度或细菌的作用下,能合成亚硝胺类化合物,这类化合物是很强的致癌物质。所以食品要新
胃癌MKN45细胞培养液上清对腹膜间皮细胞损伤的实验研究_那迪
胃癌MKN45细胞培养液上清对腹膜间皮细胞损伤的实验研究 那迪，刘福囝，姜成钢，徐昊，王振宁，徐惠绵 Experimental study on destruction of gastric cancer MKN45cells culture medium to peritoneum mesothelial cells Na Di，Liu Funan，Jiang Chenggang，Xu Hao，Wang Zhenning，Xu Huimian Department of Oncology，The First Affiliated Hospital，China Medical University，Liaoning Shenyang110001，China．【Abstract】Objective:To examine the mechanism by which the gastric cancer cells lead to early peritoneal metas- tasis．Methods:HMrSV5cells were co－incubated with the supernatants of gastric cancer cells．Morphological chan- ges of HMrSV5cells were observed．The cell damage was quantitatively determined by MTT assay．The apoptosis of HMrSV5cells was observed under transmission electron microscope．Acridine orange/ethidium bromide－stained con- densed nuclei was detected by fluorescent microscopy and flow cytometry．The expressions of Bcl－2and Bax was im- munochemically evaluated．Results:Conspicuous morphological changes of apoptosis were observed in HMrSV5cells 24h after treatment with the supernatants of gastric cancer cells．The supernatants could induce apoptosis of HMrSV5 cells in a time－dependent manner．The supernatants could up－regulate the expression of Bax and suppress that of Bcl－2in HMrSV5cells．Conclusion:Gastric cancer cells can induce the apoptosis of HPMCs through supernatants in the early peritoneal metastasis．The abnormal expressions of Bcl－2and Bax may contribute to the apoptosis． 【Key words】peritoneal carcinomatosis;stomach neoplasms;mesothelial cell;apoptosis Modern Oncology2013，21(02):0235－0238 【摘要】目的：建立胃癌腹膜转移早期间皮细胞的损伤模型，探讨胃癌腹膜转移早期癌细胞对间皮细胞的损 伤与细胞凋亡的联系，以及凋亡程度与相关蛋白表达。方法：将人胃癌细胞培养液上清，与人腹膜间皮细胞 系HMrSV5共培养。观察间皮细胞形态、增殖改变，透射电镜观察细胞凋亡，流式细胞仪和荧光染色判断凋亡 比例。免疫印迹法检测凋亡相关蛋白Bcl－2和Bax表达情况。结果：接触胃癌培养液上清24h后，间皮细胞 大片脱落并出现典型凋亡表现。胃癌细胞的分泌物明显抑制间皮细胞的生长。胃癌细胞培养液上清可诱导 间皮细胞凋亡、抑制细胞增殖，呈程度－时间依赖性地抑制间皮细胞抗凋亡蛋白Bcl－2的表达；并能增加促 凋亡蛋白Bax表达。结论：胃癌细胞在腹膜转移早期可以通过其分泌物诱导间皮细胞损伤、凋亡，凋亡机制与 Bcl－2和Bax的失调有关。提示保护间皮细胞，抗间皮细胞凋亡在胃癌腹膜转移治疗中可能有一定应用价 值。 【关键词】腹膜癌转移；胃癌；间皮细胞；细胞凋亡 【中图分类号】R730．23；R735．2【文献标识码】A DOI：10．3969/j．issn．1672－4992．2013．02．04 【文章编号】1672－4992－（2013）02－0235－04 临床上腹膜转移是胃癌根治术后面临的棘手问题。腹膜为癌细胞转移提供了所需的炎性介质，在癌腹膜转移早期，由癌细胞，成纤维细胞，间皮细胞等分泌的细胞因子作用于间皮细胞，使间皮细胞在形态结构功能上发生改变，为腹膜转移提供“土壤”［1］。在对癌细胞浸润间皮组织的研究中，Buck等把癌细胞接种到间皮细胞受损的小鼠腹腔内后， 【收稿日期】2012－08－22 【修回日期】2012－09－21 【基金项目】国家自然科学基金资助项目（编号：81071956） 【作者单位】中国医科大学附属第一医院肿瘤外科，辽宁沈阳 110001 【作者简介】那迪（1982－），男，辽宁人，主治医师，博士，主要从事胃癌腹膜转移研究。E－mail：dawangmo@yahoo．cn 观察到癌细胞在受损区域迅速种植生长，而间皮细胞完好的小鼠却很少发生转移［2］。目前的研究发现，在癌细胞黏附到间皮细胞之前，间皮细胞就已经发生了改变：间皮细胞变圆或半圆形，进而细胞脱落导致间皮下结构暴露，形成裸区，癌细胞进而黏附种植［3－5］。我们认为间皮细胞的上述损伤改变与癌细胞诱导的细胞凋亡相关。基于上述假设，我们拟建立胃癌细胞黏附到间皮细胞之前所释放的细胞因子对腹膜间皮细胞的损伤模型，并检测细胞凋亡是否参与了上述损伤。 1材料与方法 1．1实验材料 试剂：FCS、DMEM、Bcl－2，Bax抗体及二抗、MTT、吖啶橙、溴乙啶（AO/EB）、PI均购自Sigma公司。细胞系：人胃癌细胞株MKN45由中国医科大学细胞生物学教研室提供。人 · 532 · 现代肿瘤医学2013年02月第21卷第2期MODERN ONCOLOGY，Feb.2013，VOL.21，NO.02
肿瘤病例分析
肿瘤病例分析 唐某,男，５0岁,上腹部周期性疼痛15年。近半年疼痛加剧,疼痛无规律。经常呕吐。两个月来，面部及手足浮肿，尿量减少，食欲差。半小时前排柏油样大便,并呕吐鲜血，突然昏迷，急诊入院。体检：消瘦，面色苍白，四肢厥冷,血压8/５Ｋｐa，心音快而弱。双腋下及左锁骨下淋巴结肿大,质硬。化验：WBC 5×109／L,Ｎ０．7０，Ｌ０．2５，Ｍ 0.04。入院后出血不止，血压急剧下降，抢救无效死亡。 尸检:全身水肿,两下肢及背部为甚。胸腹腔内分别有５00ML淡黄色澄清液体。胃小弯幽门区有4CM×5CＭ×5CＭ肿块一个，质硬,表面出血坏死呈溃疡状。取肿块处胃黏膜作病理检查，镜下见局部正常胃黏膜破坏。异型细胞生长，细胞大，核大，染色深，可见不对称分裂像，腺上皮增生,腺体大小不一，排列紊乱，异型腺体已穿过黏膜肌层浸润达胃肌层及浆膜。肝大，黄色质软，油腻，镜下见肝细胞内有大小不等之圆形空泡,核被挤向一侧,无异型性，苏丹Ⅲ染色呈橘红色。肾小管上皮细胞肿大,肾小管狭窄,肾小管上皮细胞被布满针尖大小伊红色颗粒。 讨论题． 一、作出病理诊断,并按病变发展解释患者出现的各种临床表现。、 二、肝，肾发生什么病变，分析其原因。 三、患者死因是什么? 四、结合本病例，影响恶性肿瘤患者预后的因素有哪些？
答案: 一、病理诊断: 1、慢性胃溃疡 2、胃癌伴左锁骨上及腋下淋巴结转移 ３、肝脂肪变 4、肾小管上皮细胞水肿 5、胸腹腔积水及全身浮肿 ６、失血性休克 诊断依据: 1、慢性胃溃疡: 病史:上腹部疼痛１５年,常在饭后1~2小时疼痛发作(饱食后溃疡病胃液中的胃酸刺激溃疡局部的神经末梢引起疼痛。） 2、胃癌伴左锁骨上及腋下淋巴结转移： 病史：近二年余疼痛无规律,近半年腹痛加剧(癌变)，经常呕吐(幽门狭窄)。两个月来,面部及手足浮肿，尿量减少,食欲极差(恶病质，低蛋白血症)。半小时前排黑色柏油样大便,并呕吐鲜血（出血),突然昏倒（失血性休克）。两腋下及左锁骨上淋巴结显著肿大，质硬。（癌细胞淋巴道转移） 尸检：胃小弯幽门区有4cｍ×5cm×5cm肿块一个，质硬，表面出血坏死呈溃疡状。取肿块处胃粘膜作病理检查，镜下见局部正常胃粘膜破坏，异型细胞生长,细胞大，核大，染色深，可见不对称核分裂像,
胃癌个案护理
个案护理报告 姓名：赵志琳 科室：日间病房
1例胃癌晚期化疗并发上消化道出血的护理 赵志琳 【摘要】总结 1 例胃癌晚期化疗并发上消化道出血的护理，根据患者护理难点，严密观察生命体征及病情变化。患者病情变化快，需采取及时的处理措施，保障患者生命.做好并发症的观察和护理，加强健康教育，可促进患者康复，提高患者及家属满意度。 【关键词】胃癌晚期；化疗；上消化道出血；护理 上消化道出血是常见临床病症，是指胰、胆、食管、胃及十二指肠等位于屈氏韧带以上的消化道出血[1]。常发生于35～65岁的中年男性晚期胃癌患者[2]。最常见的病因为消化性溃疡食管胃底静脉曲张、出血性胃炎和胃癌，其中胃癌占5．24％[2]。临床表现为呕血和黑便，同时还可能伴有血容量减少引起的周围循环衰竭，甚至严重时 可能导致失血性休克而危及患者生命。再发出血率约为70％，再次出血的危险期为6周内[3]。上消化道出血治疗中内科护理具有重要的作用，促进患者病情好转的关键因素是对患者做好护理和观察，这也是促使患者疾病好转和早日康复的途径之一。 1临床资料 1．1一般资料患者男，李xx，55岁，因上腹部隐痛伴吞咽梗阻感7 月余，胃镜示：胃贲门恶性肿瘤，病理：胃贲门低分化神经内分泌癌，EP方案化疗3程，此次为行第4次化疗入科。患者排除禁忌后于2015 年10月17日开始EP方案化疗.患者于10月18日凌晨1点患者无明显诱因突然出现呕鲜血及少许血凝块，量约1 500 mL，2：32再次呕出约500 mL暗红色血，神清伴头晕、乏力、口渴、冷汗等，血压73 ／41 mmHg，心率69次／min。查肝肾功能电解示尿素氮10．33 mmoL ／L，氮112 mmoL／L，白蛋白31．2g／L，查血常规示红细胞1．8
一位30岁胃癌患者自述
我今年才30岁，刚结婚没多久，就被确诊为胃癌晚期。患病前，我在上海一家计算机通信公司任销售经理。 外地生活，饮食非常不注意，工作忙起来，常常不按时吃饭，只吃些快餐食品。当我发现胃部经常不舒适时，还自恃年轻，没去医院检查。后来，每天夜里胃都会剧烈疼痛，只有靠药物才能缓解，体重在两个月内从115斤迅速下降到不足100斤。我依然没意识到问题的严重性，还沾沾自喜，觉得健身减肥终于有成果了。 直到有一次出差，在机场连续晕倒3次，我才在同事的劝说下，去了 医院。经过胃镜检查和活检，我被确诊为胃癌，浸润型腺癌，属晚期。 当时我在一家治疗肿瘤的专科医院就诊，医生通知我的亲人说，我大概只有几个月的生命了，劝我放弃实施手术，回家做保守治疗。在辗转几个医院后，终于有医院对我进行了手术治疗。治疗的过程苦不堪言。 我必须忍受化疗带来的所有毒副作用：厌食、乏力、脱发、便秘、高烧、贫血、严重肝肾损伤、心功能障碍、白细胞锐减……忍受着每天二十多个小时的输液和五六个小时的剧烈呕吐。好在因为年轻，手术后，我恢复较快，饮食也逐渐恢复了正常。前一段时间，我还和先生在电视台一档综艺节目中做了嘉宾。 我想借自己的经历告诉所有年轻人，要珍视健康，别因为年轻就忽视自己。其实正因为年轻，才更要有防癌意识，改变不良生活习惯，建立健康的生活方式。（实习生邢莉云采访整理）
胃癌，不仅仅是我国的高发癌症，就连日本韩国也是如此，而且不断地呈现了年轻化。现在得胃癌的人里头，绝大多数都是中年人，最重要的原因在于饮食不当，酗酒、长期食用腌制和熏制食品都会增加胃癌的风险。 胃癌的发病因素 1：能够引发胃癌的危险因素还是很多的，主要包括：抽烟过度、酗酒、饮食不当、精神紧张、生活无规律等，这些危险因素会将胃肠道的正常活动打乱，严重的损伤胃粘膜，从胃炎胃、溃疡等常见胃病开始，最终发展为胃癌。 2：幽门螺旋杆菌是胃癌的另一大危险因素，中国大约有60%的人会感染幽门螺旋杆菌，因此得胃癌的人也会很多，北京大学的临床肿瘤学教授还通过研究证实清除胃里的幽门螺旋杆菌感染之后，可以大大降低胃癌的发生风险大概40%。 3：腌菜、腊肉、熏鱼等腌制食物对我们来说的确都是美食，但是在这些腌制食物当中含有大量的硝酸盐和亚硝酸盐，在胃中可以转化为强烈的致癌物质。喜欢吃腌制食物的日本、中国、韩国，胃癌发病率明显高于其他国家。此外，吃饭不规律、食物过烫过硬和吃大量的红肉都会增加患胃癌的风险。 胃癌如何治疗 在确诊为胃癌之后，需要经过相关的检查，明确的对胃癌进行分期，可分为早、中、晚三期。不同期型的患者会给予不同的治疗，如果状态允许的话，首先建议手术治疗，在手术之后，再根据病人的病理分析、状态等等因素，进行对应的辅助放化疗、免疫治疗等等，对于胃癌晚期患者，建议化疗为主的治疗，当然也可以根据病人的基本情况考虑联合用药。 胃癌晚期怎么办 一旦确诊为胃癌晚期建议首先找到肿瘤专科医生就诊，他们会根据具体的状况，考虑化疗、免疫、靶向治疗等方案，也可以多种方案综合治疗，尽可能的改善患者的生活质量，
胃癌干细胞
润文宝 | 日期：2011-06-25 胃癌干细胞的研究进展 恶性肿瘤的克隆性增殖生长、维持及转移潜能取决于一群数量稀少、具有自我更新(self-renewal)潜力的细胞群体——肿瘤干细胞(Cancer stern cell，CSC)。目前肿瘤的放射和化学治疗对细胞周期活跃的肿瘤细胞具有较强的杀伤作用，但不能根除细胞周期相对沉默的肿瘤干细胞，这可能是肿瘤复发的主要原因。胃癌对人类健康危害极大。研究胃干细胞及胃癌干细胞发生、发展的分子和细胞学机制，发现相关的特异分子靶点和针对这些靶点的药物，将为胃癌相关基础研究及临床靶向治疗提供新的切人点。 一、肿瘤干细胞学说的提出 肿瘤组织与胚胎组织间具有相似性，肿瘤可能起源于胚胎样组织。肿瘤细胞与胚胎干细胞及成体干细胞间存在许多相似性。近年来提出的肿瘤干细胞学说认为，肿瘤组织中存在极少量细胞，具有无限自我更新和高度增殖能力以及多种分化潜能，能产生不同表型的肿瘤细胞，使肿瘤在体内不断扩大或转移形成新的肿瘤。1994年分离获得的人髓系白血病干细胞证明了肿瘤干细胞的客观存在，之后又相继从乳腺癌、脑肿瘤和前列腺癌组织中分离并培养出各种肿瘤干细胞，证实了实体肿瘤干细胞的存在。 二、胃干细胞、炎性反应与胃癌的发生 胃干细胞是具有自我更新和复制能力的原始细胞，属于成体干细胞，通过向祖细胞分化。进一步分化形成胃的各种腺体细胞，维持胃黏膜更新及组织内环境稳定。由于缺乏特异性标志和理想的分离纯化技术，故目前对胃干细胞的研究较少。有研究证实G蛋白偶联受体(Lgr5)表达于胃腺体底部细胞中，通过分化细胞学示踪实验发现，胃腺体细胞均来自于Lgr5阳性的细胞。另有研究通过结合转基因技术和绿色荧光蛋白示踪技术，成功示踪了数量极少的胃祖细胞，这些细胞正常情况下呈静息状态，当受到炎性刺激时，祖细胞发生对称分裂，进行数量扩增，同时还可进行不对称分裂分化为各种腺体细胞。胃干细胞受到持续的炎性刺激、自身抗体或其他因素作用时可发生肠上皮化生，此过程可能是组织细胞干细胞水平分化异常所致。胃干细胞可产生胃型和肠型细胞，胃癌表型表达的异质化反映了胃祖细胞向这两个方向分化的内在潜能。已有研究证实幽门螺杆菌通过对胃上皮干细胞的影响和作用，在慢性萎缩性胃炎向胃腺癌的转化过程中起关键作用。小鼠胃上皮祖细胞系(mGEP)能支持胃癌相关幽门螺杆菌的吸附。对感染后的mGEP进行基因芯片表达谱分析显示。mGEP代谢和信号传导路径发生改变，氨基酸代谢的免疫过氧化物酶抗体路径(IPA)表达上调，多胺合成相关的限速酶鸟氨酸脱羧酶1(Odel)表达明显上调，该酶与胃肠型化生及慢性胃炎到胃癌的转化相关；抗酶抑制剂(Azinl)的表达亦显著上调。该蛋自在人胃癌组织中高表达，并与Odcl的表达量和活性相关。慢性炎性刺激使得胃上皮干细胞发生转化进展，促进肿瘤形成和进展。有研究称肿瘤为“不可治愈的炎性反应。慢性炎性反应能
胃癌患者个案查房
胃癌患者个案查房 参加人：全体护理人员 讲课人：王璟 时间：2013-12-11 一般资料 患者吴莲英、女、58岁、诊断：胃癌，手术时间：2013-11-29，手术方式：腹腔镜下胃癌根治。 主诉：上腹部饱胀不适伴消瘦 现病史：患者入院前2月前无明显诱因出现上腹部饱胀不适，伴乏力、食欲不振，无恶心呕吐，无嗳气反酸，无腹痛黄疸，无腹泻及便秘，无胸闷气促。就诊于当地医院，行电子胃镜提示“胃癌”。为进一步诊治就诊于我科。 既往史：平素身体健康状况一般，否认高血压，否认糖尿病，否认冠心病，否认传染病史，否认手术、输血、外伤史，否认过敏史，预防接种史不详。 个人史：生于本地，否认长期外地居住史，否认疫区居留史，否认特殊化学品及放射性接触史。否认吸烟饮酒。 专科检查：上腹有轻度压痛，无反跳痛，无肌紧张。肝脏肋下无触及，胆囊肋下未触及，全腹未触及肿块，无液波震颤及振水音，移动性浊音（-），肠鸣音正常 辅助检查：胃镜：胃体Ca 病理检查：胃癌 上腹CT：胃癌腹膜转移 B超：肝、胆、胰、脾、肾未见异常 实验室检查：血红蛋白106g/L，平均红细胞体积79.9，血红蛋白含量25.7PG,血红蛋白浓度322g/L 体格检查 生命体征：T36.2 P：75次/分R:20次/分BP:110/70mmHg 一般情况：发育正常，营养中等，步入病房，表情自如，言语流利，慢性病容，神智清楚皮肤粘膜：全身皮肤及粘膜正常，无皮疹 听诊：肠鸣音正常，无气过水声 疾病相关知识 1概述 胃癌是我国常见的恶性肿瘤之一，在我国其发病率居各类肿瘤的首位。临床上以上腹痛，伴有消瘦等为主要表现。早诊断、早治疗为本病的关键，手术治疗为首选措施。 2病因和发病机制 1. 环境和饮食因素不同国家与地区发病率的明显差别说明与环境因素有关，其中最主要的是饮食因素。摄入过多的食盐、高盐的腌制食品、熏制鱼类、亚硝胺类化合物的食物是诱发胃癌的相关因素等。 2. 幽门螺杆菌感染大量研究表明，.幽门螺杆菌是胃癌发病的危险因素。幽门螺杆菌所分泌的毒素能使胃粘膜病变，从而发生癌变。 3. 遗传因素某些家庭中胃癌发病率较高。胃癌患者亲属的胃癌发病率高出于正常人四倍。一些资料表明胃癌发生于A血型的人较O血型者为多。 4. 免疫因素免疫功能低下的人胃癌发病率较高。 5. 癌前期变化所谓癌前期变化是指某些具有较强的恶变倾向的病变，这种病变如不予以处理，有可能发展为胃癌。癌前期变化包括癌前期状态与癌前期病变.
为何年轻人患胃癌的几率逐年增高
为何年轻人患胃癌的几率逐年增高？ 据调查，我国35岁以下年轻人的胃癌发病率高达6%-11%，比国外高出了三倍还多，且年轻人患上胃癌后，恶性程度较高，生存期更短。因此，专家奉劝年轻人，要改变不良的生活习惯，同时如果发现胃炎、胃息肉、胃溃疡等都应该积极治疗，这些某种程度上就是胃癌的癌前病变。 增多我国胃癌发病率占全球四成 胃癌在全世界范围是高发恶性肿瘤，在我国更是如此。十年以前胃癌发病在我国排在第一位的，这十年来由于大中城市环境污染严重，加上吸烟、汽车尾气等原因，在大中城市肺癌已经超过胃癌排在第一位，但是在农村胃癌发病率依然很高。 不过，令医生们吃惊的是，胃癌发病全世界主要集中在三个国家———中国、韩国和日本，这三个国家的胃癌加起来占全球三分之二，而我国无论是发病的绝对数和相对数都是比较多。据统计，我国胃癌的发病率占到全世界的42%左右，每年发病40万例；死亡人数超过三分之二，所以，每年因为胃癌而死亡的人数每年在30万左右。 对于高发病率的原因，专家们做过很多研究，到目前为止还未能找到确切的原因，胃癌的发病原因比较复杂，目前为止只能说有一些原因是重要的因素，比如幽门螺旋杆菌感染、不良饮食习惯等，这和我们的饮食习惯存在很大关系，比如我们喜欢吃酸菜、吃霉变的食物，这些食物里的亚硝胺含量比较高，很有可能就是导致胃癌的原因之一。 年轻只顾打拼不注意饮食 在我国胃癌患者多，更令人担忧的是，年轻人胃癌患者逐渐增多。国外文献报道，青年人胃癌占胃癌总数的2.01%，据国内多家医院报道，35岁以下年轻人的胃癌发病率已经高达6%-11%，这依然是国外的三倍多。
为什么患上胃癌的青年人群越来越多？绝大多数肿瘤，特别是胃癌主要还是环境因素造成的，环境因素造成占到80%-85%，遗传和其他因素只占到10%-15%。 年轻人常见的可能会引起胃癌的因素有：(1)不良饮食习惯；(2)经常在外就餐，(3)饭菜质量令人担忧，(4)生活不规律。 年轻人正处于奋斗创业时期，离家在外闯荡，没有组建家庭或离家远或工作需要不能按时在家就餐，每餐只能随便对付，还有的年轻人喜欢抽烟喝酒泡吧，夜生活丰富，经常喝酒喝到吐血，还有的青年人不喜欢吃新鲜蔬菜，殊不知新鲜蔬菜中的维生素C能阻断亚硝胺在体内的形成。此外，像慢性胃炎、胃溃疡、胃的异常增生，活跃的息肉这些病变可能是癌前病变，然而年轻人往往对这些疾病不在乎、不重视，未及时进行治疗。 难治年轻人胃癌恶性度高 临床上，发现的青年人胃癌多属晚期病例，预后也较差。秦叔逵称，胃癌的平均生存率晚期是6-9个月，年轻人的胃癌情况可能会更糟糕，大概活不过6个月。 首先，大部分青年人的胃癌消化道症状隐匿、不典型。他们感觉嗳气，胃部不舒服等消化不良现象，往往因为“做胃镜太痛苦”，随便吃些胃药或对症治疗。同时，一些医生对青年人胃癌警惕性也不高，片面认为年轻人很少患胃癌，没经过检查就随便下给一个“胃炎”的结论。 更为深层次的原因在于，年轻人新陈代谢旺盛、肿瘤增殖快、易于早期转移，所以恶性程度很高。据统计，在确诊的青年人胃癌中，分化最差的黏液腺癌占了50%-60%，是老年胃癌的3-6倍，这直接影响到青年人胃癌的治疗效果。 总之，青年人胃癌患者由于就诊时间晚、肿瘤恶性程度高，手术切除率仅为22%-24.6%，与中老年人相比，预后明显要差。因此，专家强调，早发现、早诊断、早治疗是降低青年人胃癌死亡率的最关键手段。
消化系统病例分析
消化系统病例分析 病例1食欲不振、呕咖啡样物、意识错乱 病例2上腹部疼痛，反酸 病例3腹痛，恶心、呕吐 病例4黏液脓血便伴腹痛 病例5黄疸、柏油样便、谵妄 病例6上腹部疼痛，黑便，呕血 病例7腹胀，黑便，呕血 病例1 食欲不振、呕咖啡样物、意识错乱 赵××，男性，56岁。 主诉食欲不振5年，呕咖啡样物1天，意识错乱5小时。 现病史近5年来常有食欲不振、厌油食。1天前患者呕咖啡样物2次，呈喷射状，含有血凝块，总量约800ml，未排黑便。5小时前烦躁不安，衣冠不整，乱扔东西，随地便溺。1小时前患者处于熟睡状态，可以唤醒，但不能正确回答问题。 既往史15年前患有乙型肝炎，经治疗后痊愈。6年前复查肝功和肝炎病毒标志，除表面抗原、核心抗体及e抗体阳性外，其余结果均正常。5年前行腹部超声检查提示肝硬化。2年前行胃镜检查提示食道静脉曲张。无长期大量饮酒史。
体格检查T 37.0℃，P 90次/分，R 18次/分，Bp 100/60mmHg。嗜睡状态，压眶反射存在。面色灰暗黝黑，巩膜黄染。可见肝掌，颈部及前胸可见数枚蜘蛛痣。心肺查体正常。腹部膨隆，肝肋下未触及，脾肋下3cm，移动性浊音阳性，肠鸣音正常。腱反射亢进及肌张力增强，扑翼样震颤（+）。 问题1该患者临床诊断有哪些疾病？ 解说①上消化道出血；②乙型肝炎后肝硬化，肝功能失代偿期；③肝性脑病三期。 问题2该患者的病史有何特点？是怎样演变的？目前发展到什么程度？ 解说根据疾病发展的时间顺序，该患者的病史有如下特点：①有明确的肝病病史：15年前患有乙型肝炎，6年前仍有表面抗原、核心抗体及e抗体阳性。②5年来出现明显的食欲不振、厌油食等消化道症状。 ③上消化道出血：呕咖啡样物约800ml，呈喷射状，含有血凝块。④5小时前有精神错乱和行为异常：烦躁不安，衣冠不整，乱扔东西，随地便溺。⑤目前处于嗜睡状态。 从以上病史特点和既往腹部彩超及胃镜结果，该患者为乙型肝炎后肝硬化、肝功能失代偿期，其并发症有上消化道出血、肝性脑病。 问题3以上体格检查有何特点，说明了什么？ 解说①该患者的生命体征基本正常，但处于嗜睡状态，说明目前有神经系统异常。②有肝病面容、肝掌、蜘蛛痣、脾大、腹水等，说明患者已经处于肝硬化失代偿期。③腱反射亢进及肌张力增强，可能是有
胃癌细胞凋亡相关基因
胃癌细胞凋亡基因 西安国医肿瘤医院研究人员通过大量的研究分析发现，胃癌细胞凋亡是有相关基因控制的，目前发现的有以下三个基因：bcl-2基因、Bax和Fas/FasL。下面来详细介绍： 1.bcl-2基因 bcl-2基因编码26kD的膜蛋白，是第一个被确认有抑制凋亡作用的基因。bcl-2基因激活、过表达可抑制细胞凋亡，从而使细胞增殖和凋亡不平衡，而且会使具有遗传改变又得不到修复的细胞免于死亡而进入细胞循环，多种遗传成分改变可导致肿瘤的发生。因此，bcl-2在肿瘤发生发展中起着重要的作用。 乳腺癌中，高表达的Bcl-2与乳腺癌细胞凋亡指数呈负相关，而且与有丝分裂指数呈正相关，提示在细胞增殖活跃期，Hcl-2阳性细胞凋亡减少，即Bcl-2过表达影响了细胞凋亡。Nakamum检测了肠型胃癌、胃腺瘤、肠化生及非化生胃黏膜，发现在肠化生中Bcl-2蛋白表达量最高(77.1%)，胃腺瘤(37.5%)和肠型胃癌(10.8%)中较低。 因而认为，Bcl-2蛋白的过表达主要是在胃癌的早期阶段起作用，使转化细胞逃避凋亡，以进一步积累其他基因的异常。Lauwers采用单克隆抗体124检测正常、伴有肠化生的萎缩性胃炎及异型增生胃黏膜，发现正常胃黏膜仅在胃小凹与腺体交接处增生的干细胞中有Bcl-2蛋白的微表达，而在肠化生黏膜的过增生区域及胃小凹表面分化不良的细胞中均可检测到Bcl-2，这些分化不良的细胞正是胃癌癌前病变的一个特征。 因此推测，胃黏膜受损后增生加快，导致一些分化不良的细胞出现，这些分化不良的细胞又因Bcl-2蛋白的过表达而逃避凋亡，呈现生长优势，细胞寿命延长，基因变异积累的机会增加，为进一步向恶性细胞转化提供了条件。 2.Bax Bax是第一个被分离到的Bcl-2家族成员之一，与Bcl-2的同源区主要集中在BH1和BH2区。Bax的功能与Bcl-2相对，可促进细胞的凋亡。Bax与Bcl-2在体内的表达呈部位互补形式。Bcl-2倾向于分布在生长细胞、增殖细胞，而Bax倾向于分布在终末分化细胞、退化细胞，在凋亡旺盛的细胞中表达更强。 国外Komatauin报道，在胃黏膜癌变的早期阶段，即已发生Bax的表达异常。
-胃癌个案护理
胃癌个案护理 胃癌是最常见的胃部恶性肿瘤，占消化系统癌肿的第一位，死亡率位居恶性肿瘤之首，我国以西北地区发病率最高，其次为华北及华东，中南、西南地区最低。可发生于任何年龄，以中老年为多见。胃癌的发病部位，以胃窦部最多见，其次为胃底贲门、胃体部。可以分为早期胃癌、进展期胃癌、晚期胃癌。 1. 病人资料 1.1 一般情况 患者xxx，女，72岁, 于2015年10月无明显诱因开始出现纳差，反酸、胸骨后烧心感，饱餐后、平躺后加重，坐起或站立时可稍有缓解；伴腹胀、呃逆，无腹痛、腹泻，无恶心、呕吐，无胸闷、气促，无便血等不适。患者起病以来，精神、睡眠一般，大便5-7天/次，均为黄色成型便，量少，小便为淡黄色，量约1000-1500ml/天，体重近1年减轻12.5kg。于2016-12-07入院。入院诊断：1、胃弥漫性病变：胃淋巴瘤？胃癌多发转移？2、盆腹腔积液（大量）3、双肾积水4、胆囊多发结石 1.2既往史 平素身体健康状况一般，自诉有高血压病史，最高血压185/85mmHg，规律药物治疗，1年前停用降压药后血压维持正常。 1.3 家族史 否认家族中有类似疾病的发生。 1.4 个人史 否认疫区、疫水接触史，否认特殊化学品及放射性物质接触史。无吸烟饮酒等不良嗜好。 2.专科检查 入院查体：T：36.8 ℃，P：88次/分，R：18次/分，BP：103/79mmHg。神志清楚，营养差，体型消瘦，左锁骨上可触及一黄豆大小淋巴结，质硬，活动度好，与周围组织无粘连，余浅表淋巴结未触及肿大。腹部隆突，未见胃肠型及蠕动波。腹壁未见静脉曲张，脐部正常。腹软，中上腹可触及大小约4*3cm条状包块，表面不规则，质硬，全腹未及压痛，无反跳痛，无肌紧张。肝脾触诊不满意。移动性浊音阳性，肠鸣音正常，未闻及腹部血管杂音。 3.辅助检查 3.1院外检查 2016-3-25xxxx医院：胃镜示：1、胃体变形狭窄皱襞僵硬查因：Ca待排；2、慢性浅表性胃炎；3、贫血胃粘膜像；病理示胃体黏膜组织呈慢性炎，固有层散在胞浆红染的细胞，免疫组化提示大部分为平滑肌细胞，仅局灶少量细胞高度疑为低分化腺癌.
胃癌细胞表面-唾液酸糖链的表达与其侵袭、
胃癌细胞表面,唾液酸糖链的表达与其与侵染、转移相关 性的研究
摘要 本设计为了研究唾液酸在胃癌发病过程中的相关作用，探讨,唾液酸糖链结构在胃癌发生中所造成的影响。设计内容主要分为两部分：,唾液酸糖链结构在不同分化程度的胃癌细胞表面的表达对胃癌细胞侵染能力相关性的研究；,唾液酸糖链结构对胃癌细胞的转移能力相关性的研究；第一部分分为两个实验设计用MAL细胞化学染色法选出阳性细胞计算出MAL胃癌细胞的阳性率和体外细胞粘附试验测得吸光度测试唾液酸跟细胞粘度的关系；第二部分通过重组基底膜实验来计数胃癌细胞的穿膜细胞数，确定,唾液酸对胃癌细胞的侵染、转移的影响。为胃癌疾病的研究和治疗提供一定的理论及实验基础。 关键词：,唾液酸；表达；胃癌细胞；侵染；转移
第一部分：文献综述 1 唾液酸 0 1.1简介 0 1.2唾液酸的生物学功能 0 2 胃癌 (1) 2.1胃癌发生的过程 (1) 2.2胃癌的侵染、转移 (1) 3 唾液酸与肿瘤作用 (2) 3.1唾液酸与恶性肿瘤 (2) 3.2唾液酸与胃癌 (3) 4凝集素 (4) 4.1简介 (4) 4.2 MAL简介 (4) 4.3 MAL对胃癌细胞表面糖链的标记 (5) 第二部分课程设计部分 1材料 (7) 1.1细胞株及细胞培养 (7) 1.2试剂 (7) 1.3试剂配制 (7) 1.4仪器设备 (8) 2方法 (9) 2.1 MAL细胞化学染色 (9) 2.2 体外细胞粘附试验 (10) 2.3 重组基底膜侵袭实验 (10) 3 设计 (11) 3.1 胃癌细胞表面,唾液酸糖链结构与其转移能力的相关性 (11) 3.2 胃癌细胞表面,唾液酸糖链结构与其侵染能力的相关性 (11)