枯草杆菌摇瓶发酵生产α-淀粉酶实验方案
枯草芽孢杆菌产α-淀粉酶发酵试验
一、实验原理
以枯草芽孢杆菌（BacilusSubtilisBF—7658）为实验菌株，通过种子扩大培养，选出生长力旺盛的菌株进行液体摇瓶发酵。通过测定不同发酵时间生产的酶活，来初步估计发酵最佳时期和终点。
淀粉酶是能够分解淀粉糖苷键的一类酶的总称，包括α-淀粉酶、β-淀粉酶、糖化酶和异淀粉酶。芽孢杆菌主要用来产生α-淀粉酶和异淀粉酶，其中α-淀粉酶又称淀粉1，4-糊精酶，能够切开淀粉链内部的α-1，4-糖苷键，将淀粉水解为麦芽糖、含有 6 个葡萄糖单位的寡糖和带有支链的寡糖；而异淀粉酶又称淀粉α-1，6-葡萄糖苷酶、分枝酶，此酶作用于支链淀粉分子分枝点处的α-1，6-糖苷键，将支链淀粉的整个侧链切下变成直链淀粉。通过发酵实验，我们可以以酶活为依据，初步估计发酵的最佳时期和发酵终点。
二、实验材料
（一）实验菌株：以枯草芽孢杆菌
（二）培养基：
1、种子培养液：葡萄糖1% 、胰蛋白胨：1%, 、酵母提取物：0.5%、NaCl(氯
化钠)：1%
调pH7.2 ，若配置固体培养基，则再加入1.5% 琼脂。
2、产淀粉酶发酵培养液：玉米粉 2 .0 % 、蛋白胨1 .5% 、CaCl
2
0 .02 % 、
MgSO
40 .02% 、NaCl 0 .25% 、K
2
HPO
4
0 .2% 、柠檬酸钠0 .2% 、硫酸铵0 .075% 、
Na
2HPO
4
0 .2 %
调节pH 值7 .0
（三）0.02M磷酸缓冲液（pH6.0）
（四）实验仪器
离心机、水浴锅、250mL三角瓶、试管
三、实验过程
1、分别按培养基配方配制种子培养基和发酵培养基。
2、种子斜面及种子液准备
A.挑取单菌落从平板转接于新鲜种子斜面培养基，37℃，24h作菌种（3支/组）。
B.将配好的种子培养液按每瓶50mL分装于250mL三角瓶中灭菌（ 100KPa 20min ）。
C.在无菌操作条件下，将活化的菌株接种于以上培养液中（每支斜面接两瓶），37℃ 120r／min振荡培养16h作种子液。（6瓶/组）
3、发酵培养
A、按15-20％的接种量接种于装有50mL已灭菌菌发酵培养基的250ml三角瓶中。37℃培养48h。
B、在无菌操作条件下，每4h取样2mL，测定酶活。40-48h酶活降低后结束实验。
4、发酵结束后，用显微镜检查是否染菌。
5、待测酶液的制备：
称取1g~2g酶粉(精确至0.000 1 g)或准确吸取酶液1.00 mL，用少量磷酸缓冲液充分溶解，将上清液小心倾入容量瓶中，若有剩余残渣，再加少量磷酸缓冲液充分研磨，最终样品全部移入容量瓶中，用磷酸缓冲液定容至刻度，摇匀。用四层纱布过滤，滤液待用。
注:待测中温a-淀粉酶酶液酶活力控制酶浓度在3.4 u/mL~4. 5 u/mL范围内，待测耐高温淀粉酶活力控制酶浓度在60u/mL~65u/mL范围内。
6、酶活力的测定
吸取10.0 mL可溶性淀粉溶液于试管中，加入磷酸缓冲液2.5 mL，摇匀后，置于60℃±0.2℃(耐高温α-淀粉酶制剂置于70℃±0. 2℃)恒温水浴中预热8 min；加入0.5 mL稀释好的待测酶液，立即计时，摇匀，准确反应5 min；
立即用移液管吸取1.0 mL反应液，加到预先盛有0.5 mL盐酸溶液和5.00mL 稀碘液的试管中，摇匀，并以0.5 mL盐酸溶液和5.00 mL稀碘液为空白，于660 nm波长下，用10mm比色皿迅速测定其吸光度(A)。根据吸光度查表A.1，求得测试酶液的浓度。
7、酶活力计算
（1）中温α-淀粉酶制剂的酶活力按下式计算:X1 = c× n
式中:
X
—样品的酶活力，u/mL或u/g
1
c—测试酶样浓度，u/mL或u/g
n—样品的稀释倍数（可通过反应时间和加入固定化酶的量来控制）。注：所得结果表示至整数。
允许差：平行试验相对误差不得超过5%
（2）耐高温α-淀粉酶制剂的酶活力按下式计算:X2 = c×n×16.67
式中:
X
—样品的酶活力，u/mL或u/g
2
c—测试酶样浓度，u/mL或u/g
n—样品的稀释倍数
16.67 —根据酶活力定义计算的换算系数。
注：所得结果表示至整数。
允许差：平行试验相对误差不得超过5%
淀粉酶菌株的选育、发酵工艺的研究及酶的纯化
淀粉酶菌株的选育、发酵工艺的研究和酶的纯化 摘要：淀粉酶是最早用于工业生产并且迄今仍是用途最广、产量最大的酶制剂产品之一， 为了提高淀粉酶的生产水平，首先通过淀粉培养基从土壤中筛选出产淀粉酶的活性菌株，对 菌株初步鉴定后进行紫外线诱变，筛选出产量高、性状优良的突变菌株，再用正交试验的方 法对其发酵条件进行优化，实验最后采用硫酸铵沉淀法初步纯化发酵得到的淀粉酶并对酶活 性进行了测定。 关键词：淀粉酶；分离筛选；紫外线诱变；优化；提纯 1、引言 淀粉酶是能够分解淀粉糖苷键的一类酶的总称，包括α-淀粉酶、β-淀粉酶、糖化酶和异淀粉酶，是最早用于工业生产并且迄今仍是用途最广、产量最大的酶制剂产品之一。淀粉酶种类繁多，特点各异，在造纸、印染、酿造、果汁和食品加工、医药、洗涤剂、工业副产品及废料的处理、青贮饲料及微生态制剂等多种领域具有广阔的用途。 我国是传统的农业大国，发展淀粉深加工工业是解决当前淀粉生产积压的好出路，而几乎所有淀粉深加工工业的基础都是以淀粉质原料的水解作为第一步，因此淀粉质原料的液化情况直接关系到产品后期的加工工艺和产品的质量。所以，改进淀粉液化工艺也是降低生产成本，提高产品市场竞争能力的一种重要手段。 显然，改进淀粉液化工艺首要任务就是提高淀粉酶的生产水平。 那如何提高淀粉酶的生产水平呢？我们知道，现在淀粉酶主要来源于植物和微生物，并通过发酵完成生产，因此筛选出高产、稳定的淀粉酶产生菌是淀粉酶生产的头等大事。本文试图从土壤中分离出产淀粉酶的枯草杆菌，通过紫外线诱变育种及发酵条件优化来得到高产、稳定的淀粉酶产生菌株，并对发酵得到的淀粉酶进行初步提纯，以达到加深对发酵工程上游技术中菌种选育的认识、掌握紫外线诱变育种的原理和方法、了解发酵条件对产物形成的影响、熟悉发酵条件的优化方法、掌握分光光度法测液化型淀粉酶活力的基本原理和方法、掌握初步纯化淀粉酶的方法的实验目的。 2、材料与方法 2. 1 实验材料 2．1．1 样品：贵师大综合楼附近的土壤 2．1．2 培养基和试剂：淀粉培养基、牛肉膏蛋白胨（斜面）、牛肉膏蛋白胨（液体）种子培养基、淀粉酶发酵培养基、生理盐水、碘液、2％可溶性淀粉、硫酸铵、乙酸溶液、磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液、标准糊精溶液 2．1．3 仪器设备：全自动高压灭菌锅、培养皿、恒温培养箱、超净工作台、恒温摇床、离心机、分光光度计、恒温水浴锅、移液管、PH试纸、吸耳球、玻
摇瓶与发酵(发酵人论坛)
发酵技术汇编 发酵人论坛精华荟萃 编制说明 摇瓶与发酵 论坛帖子讲解 下期内容计划
编者：细履平沙信箱：biowsxycc@https://www.wendangku.net/doc/4715167785.html, 编制说明： 首先，感谢全体发酵人网站会员发得精彩贴子，使我们能够将很多优秀的经验进行汇总、整理、提炼然后编辑成文章。我们希望通过这一整理过程，将发酵人论坛的精华与所有已经加入或意愿加入发酵行业的朋友分享，这一整理过程能够将这一个个珍珠，串成串，形成一个美丽的珍珠项链，能够将一个个知识点汇总起来，整理成册，编著成如《抗生素生产一万个为什么》一样，成为发酵从业人员的宝典。 本网站的域名为：https://www.wendangku.net/doc/4715167785.html,，欢迎大家来这里深入交流发酵相关的经验和技能。 发酵人网站由王军峰先生于2006年8月8日创建，经过8年的发展目前也初具规模，在发酵行业有了一定的影响，论坛成立后也经历风雨：有服务器的不给力，导致丢失了很多附件和数据，有黑客的攻击和水军的骚扰，也有关站备案的考验。但是还是得到了广大会员的信赖和支持，在这里我代理发酵人论坛的管理人员向支持我们的朋友说声感谢。 目前，我们的网站虽处于低谷，但是我相信，只要有长期发展的信念，只要发酵从业人员有需求，我们的网站就可以稳步发展，发酵人网站就可以为同行提供更多、更实际的技术帮助。 前几天与中国发酵工业网（https://www.wendangku.net/doc/4715167785.html,）的负责人吕望东一起讨论发酵网站的前途和管理时，他问我：目前微信，微博，QQ，手机交流越来越多，论坛是否还有必要存在？我想，现在也到了我们众多小网站选择前行还是关闭的关键点，成功总是留给有
准备的人，所以如果没有好的思路、没有创新，向前发展的路只能越走越窄。经过我们深入的讨论，决定充分发挥发酵人网站已有资源，深入挖掘论坛在期刊发行，技术交流会组织，软件使用与仪器操作培训的先天优势，引导论坛恢复良性发展的循环。 所以我们决定采取以下改进和探索： 1，与中国发酵工业网加强合作，将发酵人论坛的广告业务交由吕望东先生来负责。发酵人论坛将通过整合发酵行业网站，结合线上，线下活动，给有贡献会员和版主提供更多的才华施展舞台，让会员与论坛共同发展。 2，发酵人论坛会定期对会员发的精华贴进行整理，然后发行《发酵技术汇编》电子月刊，以便发酵人论坛和中国发酵工业网的忠实用户共同分享。 3，定期组织会员见面会，我们计划每次只针对某一专项问题进行系统性讲座和讨论，从而扩大论坛的影响。讲座只会象征性的收费，以便付给主讲一些补贴和用于场地使用费。比如我们可以用2天时间，培训design expert 的详细用法，使一个不善于进行试验设计和数据处理的人员，快速掌握这些技能。 4，我们将招聘更多有经验的会员当版主，调动整个论坛的学术气氛，当然我们会热忱欢迎广大朋友为我们提供更多建议和指导。 本次内容作为网站知识汇总的第一期：摇瓶试验与发酵。
黑曲霉发酵生产α-淀粉酶微生物实验报告
黑曲霉发酵生产α-淀粉酶 前言： α-淀粉酶能随机地作用于淀粉的非还原端，生成麦芽糖、麦芽三糖、糊精等还原糖，所得产物的还原性末端葡萄糖单位碳原子为α构型，同时该酶能使淀粉浆的粘度下降，因此又称为液化酶。耐酸性α-淀粉酶是在酸性条件下水解淀粉的酶类，其最适pH在4.0左右。自从日本研究者Y asujiMinoda等人用黑曲霉生产耐酸性α-淀粉酶以来，各国都对耐酸性α-淀粉酶进行了研究。 通过黑曲霉发酵生产α-淀粉酶的实验过程，熟悉发酵罐的构造和使用方法。初步了解发酵生产的原理和常规发酵参数的检测方法。整个实验按照“菌种的培养空消实消接种发酵放罐”的发酵过程进行。在整个发酵的过程中，每隔6h取一次发酵液样品检测其pH值、酶活、残糖量及生物量四个生理指标。最后将所测数据进行整理、分析，可以得出整个发酵过程各物质的生成和消耗的变化规律以及如何调整培养条件来提高发酵生产的效率，对大工业生产具有重要的指导意义。 正文： 一、实验目的 1．了解发酵罐的几大系统组成，即空气系统、蒸汽系统、补料系统、进出料系统、温度系统、在线控制系统。 2．掌握发酵罐空消的具体方法及步骤 3．掌握发酵罐进料及实消的具体方法及步骤 4．掌握发酵罐各系统的控制操作方法 二、实验原理 1.蒸汽系统： 蒸汽发生器：主要用于灭菌，分为自动加水和手动加水两种方式。 2.温度系统： (1) 夹套升温：蒸汽通入夹套。 (2) 夹套降温：冷水通入夹套，下进水，上出水。 (3) 发酵过程自动控温系统 3.空气系统： 空气除菌设备：空压机贮气罐油水分离器空气流量计空气过滤器发酵罐 4.补料系统：补加培养基、消泡剂、酸碱等。 5.在线控制系统
(整理)α-淀粉酶综述
α-淀粉酶综述 佚名2013-10-06 摘要：α-淀粉酶分布十分广泛，遍及微生物至高等植物。α-淀粉酶是一种十分重要的酶制剂，大量应用于粮食加工、食品工业、酿造、发酵、纺织品工业和医药行业等，是应用最为广泛的酶制剂之一。本文概述了α-淀粉酶的发现和应用发展史、分离纯化及结构的研究史、催化机制及其研究史、工业化生产和应用现状与发展趋势等。 关键词：α-淀粉酶发现应用分离纯化结构催化机制研究史发展趋势 α- 淀粉酶( α- 1,4- D- 葡萄糖- 葡萄糖苷水解酶) 普遍分布在动物、植物和微生物中, 是一种重要的淀粉水解酶。其作用于淀粉时从淀粉分子的内部随机切开α-1，4糖苷键，生成糊精和还原糖。由于产物的末端残基碳原子构型为α构型，故称α-淀粉酶。现在α-淀粉酶泛指能够从淀粉分子内部随机切开α-1，4糖苷键，起液化作用的一类酶。 1 α-淀粉酶的发现和应用史 1.1 α-淀粉酶的发现 啤酒是最古老的酒精饮料，发酵是其关键步骤，其中所包含的糖化过程就是把淀粉转化为糖。这个转化过程的机理一直都没有被弄清楚，直到淀粉的发现。 在19世纪早期，许多科学家都在研究谷物提取物中淀粉的消化机理。Nasse（1811年）发现，从生物体中提取的淀粉能过被转化为糖，而从被沸水杀死的植物细胞中提取的淀粉不能被转化为糖。Kirchhoff（1815年）做了一个巧妙的实验。他将4份的冷水加入到2份的淀粉中，并边加边搅拌。之后加入20份的沸水使其形成一层厚厚的淀粉糊。在淀粉糊还是余温的时候，加入被粉碎的麸质（或麦芽），然后在40－60°列式温度下水浴。1－2小时后发现，淀粉糊开始缓慢液化。8－10小时后，淀粉糊被转化为一种甜的溶液。之后，他将其通过过滤和蒸发浓缩得到了糖浆，品尝后发现，其和发酵液一样甜。在操作的过程中，他注明了实验过程中仅添加了非常少的麸质，并且得到的糖浆与淀粉的量成正比。此外，如果在加入麸质前加入几滴高浓度的硫磺酸，最终就没有糖生成。从这个实验中他得到结论1）麸质是一种能够使温水中的淀粉粉末转化为糖的物质。2）作为种子发芽的结果，相比种子内的物质而言，麸质能过将更多的淀粉转化为糖。至此,Kirchhoff奠定了发现谷物中一种能够将淀粉转化为糖的蛋白质的基础。
发酵原料的选择
湘祁牌微生物饲料发酵剂——发酵饲料首选品牌 发酵原料的选择https://www.wendangku.net/doc/4715167785.html,/ 发酵饲料时应选择将一些需要蒸煮的（豆渣、潲水、木薯渣、甘薯等）有轻微霉变，不能直接作饲料使用的（严重霉变的不能制作发酵饲料）粗纤维含量高，饲料本身营养可消化吸收率极低的（米糠、统糠、玉米秸秆、花生秆、黄豆秆等）饲料原料含有毒素成份，不宜直接作饲料使用的（菜饼、棉粕、芝麻饼等）抗营养因子含量较高易引起小猪营养性腹泻的（豆粕、花生饼、血粉等）上述原料经过发酵不仅可达到免蒸煮省燃料，降解脱除饲料中的抗营养因子及毒素成份，大幅度提高饲料营养的可消化吸收率，还能生成一些只用经过发酵才能生成的特殊营养成份，如微生物菌体蛋白、生物酶、有机酸、生物多肽、B族维生素及未知生长因子等特殊营养促长和保健成份，采用发酵饲料喂养畜禽，可充分利用各类粗廉副质资源，降低养殖成本，增加养殖经济效益。 各类干物质饲料发酵操作方法https://www.wendangku.net/doc/4715167785.html,/ 1. 发酵剂母料配制：玉米粉5斤、生态宝1包、食盐0.5公斤、磷酸氢钙2公斤（没 有可用石粉代替，也可不添加）将各种原料按量混拌均匀备用。注：1.2.后述所用干、湿饲料发酵量均以此母料发酵剂量设计 2.发酵饲料主料配方： 1) 米糠150公斤、菜饼（花生饼）25公斤 2) 统糠80公斤、油糠70公斤、杂饼25公斤 3) 玉米秸秆150公斤、杂饼30公斤 4) 黄豆秆、叶160公斤、杂饼20公斤 5) 花生秆、叶160公斤、杂饼20公斤 6) 干啤酒渣150公斤、麦麸30公斤 7) 米糠150公斤、杂饼30公斤 配料说明：https://www.wendangku.net/doc/4715167785.html,/ 1）各类秸秆应晒干粉碎，长期雨淋霉变的原料不可采用。 2）杂粕指菜饼、棉粕、花生饼、芝麻饼、葵籽饼等含蛋白量较高的非常规蛋白饲料原料，可任选一种，也可二至三种杂饼混合按量配料，如没有杂粕可改用等量的豆粕。 3}各类粗料之所以都有一定量的杂粕配量，是因为考虑发酵饲料的能量与蛋白营养的平衡。4）按配方配制的发酵料，在投喂时，只需在干粉料补充相应量的预混料即可作全价的饲料使用。 1.发酵操作方法：https://www.wendangku.net/doc/4715167785.html,/ 先将发酵主料倒在水泥地板上摊平，然后散入拌匀的发酵剂添加料，用拌料铲翻拌使主料与添加聊混拌均匀，随即加入130—140公斤水，边加水边翻拌，待料水充分搅拌均匀即可装入大塑料桶中（缸、池均可）装料时应逐层轻压实（不要压得太紧），料装至容器边沿抹平稍压紧用薄膜覆盖（选用无破损的厚膜，膜的长宽应超过容器边沿15公分），外用橡皮筋扎紧密封发酵2-5天后即可配料饲喂。 发酵饲料在养猪中的应用：发酵饲料宜喂15公斤以上的肉猪及20月龄后的家禽
平菇栽培技术实验报告
食用菌实验三实验报告 【实验目的】 1、学习平菇的栽培方法基本操作步骤 2、掌握平菇的栽培方法难点及关键技术 3、通过平菇的栽培实验掌握食用菌袋料栽培的一般方法和栽培管理技术。 【实验原理】 袋式栽培是目前国内应用最为普遍的一种栽培方法。按照培养料的不同处理方式，可分为生料、发酵料、熟料、发酵熟料4种袋式栽培法。与床式栽培相比，袋式栽培在封闭条件下发菌，能有效地控制杂菌污染，提高栽培成功率；菌袋可立体堆码，能大量节约做菇床和栽培架的开支。 【实验材料】 1、食用菌品种：平菇夏灰1号菌种 2、平菇配方：木屑1.5框、棉籽壳65斤、麦麸20斤、轻钙1斤、磷肥1斤。即棉籽壳60%、木屑20%、麸皮18%、轻钙1%、石灰粉1%、硫酸镁0.3%，另外加o.1%多菌灵。 3、仪器或其他用具： 75%酒精、棉球、酒精灯、接种镊子、聚丙烯塑料袋、颈圈、高压蒸气灭菌锅等。 【实验步骤】 1、菇房建设与消毒，平菇喜温，一般采用温室培养，菇房要保证具
有保温、加湿和通风便利。在菇房使用前，都要打扫干净，并进行彻底消毒火菌，主要用甲醛熏蒸法消毒（①每立方米空间用10ml甲醛，将甲醛与高锰酸钾混合后，氧化还原反应放热，产生大量甲醛蒸气，对密闭的空间进行杀菌消毒。②无菌室经甲醛熏蒸后，经24h人才能进入室内工作。③如还有刺激鼻眼的气味，应消除残余的甲醛气体。方法是用浓度25-28%的氨水，在室内熏蒸或喷雾，经10-30min，氨与空气中的甲醛结合，可消除残存的甲醛气体。 2、食用菌研究所已准备好塑料袋、堆制发酵好原料。 3、装袋灭菌，将发酵料装入塑料袋内.边装边压，松紧适度(手按略有弹性)，用木棒在培养料中打一洞，然后直接套塑料颈圈(直径 4~5cm，可用包装塑料带焊制)，外加塑料薄膜封口。料袋装好后，进行高压(O 147MPa，126℃)蒸汽灭菌。在灭菌锅内摆放时，料袋间应留钉空隙。高压灭菌时间为1.5~2h。灭菌结束后，缓慢排放蒸汽，以防料袋胀裂。 4、接种，菌种的选择至关重要，从外观看，一般选用绝对无杂菌、爬壁力强、生民健壮、洁自浓密、菌龄小的种类作菌种。接种前需按常规消毒方法对接种室进行紫外线消毒，用75%酒精对双手及接种工具和塑料袋消毒，之后用石碳酸喷雾消毒1次，最好在酒精灯火焰上方接种。接种时料内温度应低于30℃。接种过程应迅速，以防污染，接种完成后立刻封紧袋口。接种量应尽量大，尽量放满培养料袋的洞中，保证菌丝布满培养料表面，可有效防比杂菌污染。 5、菌丝培养，培养室温度以25℃为最宜，料内温度不能超过30℃。
实验报告发酵现象实验报告范文_0613
2020 实验报告发酵现象实验报告范文 _0613 EDUCATION WORD
实验报告发酵现象实验报告范文_0613 前言语料：温馨提醒，教育，就是实现上述社会功能的最重要的一个独立出来的过程。其目的，就是把之前无数个人有价值的观察、体验、思考中的精华，以浓缩、系统化、易于理解记忆掌握的方式，传递给当下的无数个人，让个人从中获益，丰富自己的人生体验，也支撑整个社会的运作和发展。 本文内容如下：【下载该文档后使用Word打开】 澄清的石灰水可以检测气体中有二氧化碳，重铬酸钾溶液遇到酒精由橙色变为灰绿色。实验操作： 1.将（100ml）40℃温水倒入锥形瓶，再用汤匙将一大勺糖及适量干酵母加进来，搅拌均匀后，将锥形瓶放在大烧杯中水浴保温温度保持在30―40℃左右。（先让酵母菌进行有氧呼吸，是酵母菌迅速繁殖，并把葡萄糖分解成二氧化碳和水。） 2.观察到酵母菌培养液有气泡产生，塞上橡胶塞（这样做既可以避免气体散失，影响后面实验效果，也为酒精的产生提供保障）。过一段时间后就可看到干瘪的气球慢慢膨胀起来了。（酵母菌的无氧呼吸） 3.将夹子打开，挤压气球，使瓶内产生的气体徐徐通过胶管导入试管内的澄清石灰水中，石灰水变浑浊了(检测气体中有二氧化碳。原理：二氧化碳遇石灰水，石灰水变浑浊)。
4.将重铬酸钾试剂分别滴在比色板的凹槽内，并分别标注1号、2号（作对照）、3号。在3号试剂上滴1滴酒精，在1号试剂上滴1滴酵母菌发酵液。发现1号和3号都由橙色变成了灰绿色。 通过上述实验，让我们对酵母菌“发酵现象”所需要的原料、条件及产生的物质都有了较直观的感受，比较容易理解课本上阐述的“酵母菌可以把葡萄糖转化为酒精和二氧化碳”等有关内容，而且印象深刻。使我们养成很好的节约意识。 1.闻到了发酵后特殊的甜酒的芳香气味。 2.详见【实验操作4】 3.澄清的石灰水变浑浊 实验一摇瓶发酵法制备糖化酶 （1）掌握摇床发酵法制备糖化酶的工艺流程及操作方法 （2）了解利用黑曲霉菌菌种发酵时的生长条件及注意事项 （3）熟练掌握实验过程中的无菌操作和培养条件的选择 菌种：黑曲霉 仪器：锥形瓶（500ml)、移液管、恒温水浴锅、秒表、50mL 比色管、牛皮纸、纱布（8层）、pH计。 药品：三水乙酸钠、冰醋酸、硫代硫酸钠、碘、氢氧化钠、硫酸、可溶性淀粉、玉米粉、豆饼粉、麸皮
摇瓶发酵优化——正交实验实验方案
摇瓶发酵优化——正交实验实验方案 实验内容：运用实验室摇瓶发酵技术，研究不同的镁盐、钾盐、钠盐及碳源用量对铜绿 假单胞菌摇瓶发酵的影响。 实验材料：铜绿假单胞菌Pseudomonas aeruginosa 仪器设备：超净工作台；高压蒸汽灭菌锅；旋转式摇床；磁力搅拌器；纯水机；三角摇 瓶；三角瓶封口膜；塑料培养瓶；1mL和5mL移液枪；酒精灯；电子天平；药匙；1000mL 烧杯；玻璃棒等。 试剂耗材：蛋白胨；牛肉膏；NaCl；NaNO3；K2HPO4;KH2PO4；MgSO4;CaCl2;KCl；NaCl；酵母粉；大豆油。 实验因素和水平：本实验研究镁盐、钾盐、钠盐及碳源用量四个因素及不同用量三个水平。 MgSO4(g/L) KCl(g/L) NaCl(g/L) 大豆油（mL）因素 水平 1 0.1 1 1 0 2 0.2 2 5 0.3 3 0.3 3 10 0.9 L9（3 4）正交表 实验数因素 MgSO4 KCl NaCl 大豆油实验结果 1 0.1 1 1 0 2 0.1 2 5 0.3 3 0.1 3 10 0.9 4 0.2 1 5 0.9 5 0.2 2 10 0 6 0.2 3 1 0.3 7 0.3 1 10 0.3
8 0.3 2 1 0.9 9 0.3 3 5 0 均值1 均值2 均值3 极差 具体实验方法： 1、种子培养基及母液的配制 种子培养基（g/L）:蛋白胨10 , 牛肉膏10 , NaCl 5, pH7.0 按种子培养基配方配制100mL培养基装入250mL三角烧瓶，塞上瓶塞。（50mL/瓶，2瓶） 母液：各1000mL，于试剂瓶中。 K2HPO4 40g/L KH2PO4 40g/L MgSO4 20h/L CaCl2 1g//L KCl 10g/L 共9个实验，为简便起见，只做2个平行，共18个摇瓶，每个摇瓶装液量30mL，共540mL，考虑到分装时的损耗，可以配600mL含共有成分的培养基。 2、器具及种子培养基高压蒸汽灭菌 培养皿、接种针和移液管用报纸包好，和配好的种子培养基一起高压蒸汽灭菌，121℃，20min. 3、菌种的活化 将种子培养基分装于塑料培养瓶中，将铜绿假单胞菌从冰箱中取出，在超净工作台上，用接种针接种于种子培养基中，使其活化。 4、按预定方案配制培养基 发酵培养基（g/L）:NaNO3 2.5, K2HPO4 4, KH2PO4 4, MgSO4 0.2, CaCl2 0.1 ,KCl 1, NaCl 1, 酵母粉1，炸货油5%，pH6.5 按发酵培养基的配方，结合正交表，配制相应的发酵培养基各200mL，然后分装于150mL
实验室平菇栽培法 实验报告
实验报告 实验名称实验室平菇栽培法班组 姓名学号日期 成绩教师签名 一、实验目的 1.掌握平菇基本栽培方法及其原理。 2.掌握平菇栽培中器械和培养基的灭菌方法及原理，如高压蒸汽灭菌法、干热灭菌、灼烧灭菌和紫外灯灭菌法等。 3.了解食用菌母种扩大繁殖生产的基本原理,掌握斜面母种的接种和培养方法。 4.掌握平菇栽培中原种、栽培种培养基的制备方法。 5.培养学生自行设计出菇的方案。 二、基本原理 1.平菇是木质腐生菌，生长发育所需各种营养物质均从木屑、棉籽壳、稻草等培养料中获得。平菇生长周期短，从播种到第一批采收一般为30天到40天，栽培方法简便，成功率高。本实验在实验室条件下，用袋装方法出菇。 2.食用菌生产中，培养基、器皿及接种工具的消毒灭菌，是防止杂菌污染，提高食用菌产量的关键措施，灭菌和消毒法主要有物理方法（高温灭菌和紫外线灭菌）、化学灭菌法。 干热灭菌是在保持恒温的电烘箱中进行的,适用于各种耐热的玻璃器皿、棉塞、滤纸、以及不能与蒸汽充分接触的液体的灭菌.一般
在160摄氏度持续1.5—2小时,就可达到灭菌的目的.灼烧灭菌可直接在酒精灯外火焰灼烧灭菌,酒精灯所用的酒精浓度要在百分之95 以上. 紫外灯灭菌是接种室(箱)最常用的方法之一,每次在使用前开灯20—30分钟.紫外线可导致细胞内核酸和酶发生变化而使细胞死亡,还可使空气中氧气产生臭氧,臭氧也具有杀菌作用.因其透射力差只 适用于空气及物体表面的灭菌,有效距离为1.5—2米,以1.2米内为最好. 3.食用菌母种培养基和分离菌种时用斜面培养基，适用于一般食用菌的母种分离与培养用的培养基是马铃薯葡萄糖琼脂培养基（即PDA培养基），配成后用加压蒸汽灭菌法对培养基进行灭菌。 4.食用菌菌种生产一般按母种——原种——栽培种进行。母种数量少，要进行试管移接扩大培养才能进行生产。 5.原种由母种繁殖而成，由原种扩大培养成栽培种。原种和栽培种生产一般包括配料——装瓶（袋）——灭菌——接种——培养等流程。一般用瓶装或塑料袋装，灭菌压力和时间相应延长。 三、实验器材 1.材料：马铃薯、葡萄糖（或蔗糖）、磷酸二氢钾、硫酸镁、琼脂、75%乙醇溶液、麦粒、棉籽壳、石膏粉、碳酸钙、麦麸 2.器具：锥形瓶、棉塞、超净工作台、烧杯、量筒、漏斗、天平、铁架台、纱布、药匙、PH实纸、接种铲、酒精灯、聚丙烯塑料袋、小试管、牛皮纸、高压蒸汽灭菌锅等
a-淀粉酶发酵的生产工艺
武汉轻工大学 设计α-淀粉酶的发酵生产工艺 系部食品科学与工程学院 专业粮食工程 班级粮工1002 姓名郑开旭 学号100107502 指导教师易阳 2013年6月9日
设计α-淀粉酶发酵的生产工艺 摘要:α-淀粉酶广泛分布于动物、植物和微生物中，能水解淀粉产生糊精、麦芽糖、低聚糖和葡萄糖等，是工业生产中应用最为广泛的酶制剂之一。目前，α- 淀粉酶已广泛应用于变性淀粉及淀粉糖、焙烤工业、啤酒酿造、酒精工业、发酵以及纺织等许多行业。本次设计的淀粉酶发酵，分别以玉米粉为碳源，以豆饼为氮源，以BF-7658枯草芽孢杆菌为生产菌种,同时做出了生产工艺流程图，详细的介绍了α-淀粉酶的生产工艺。 关键词：α-淀粉酶；工艺设计；发酵 正文: α-淀粉酶的生产工艺 1 α-淀粉酶的生产方法 1.1生产方法的选择 枯草杆菌BF7658是我国应用广泛的液化型α-淀粉酶菌种，国内普遍采用深层发酵法生产工业粗酶。我们从BF7658出发，用紫外光及化学药品反复交替诱变，选育适用于固体发酵的新菌体BF7658—1。该菌为短杆状，革兰氏阳性，两端钝园，在肉汁表面可生成菌膜，在培养基上菌落呈乳白色，表面光滑、湿润、略有光泽，用碘液试之，菌落周围呈透明圈。 ?固体培养枯草杆菌BF7658—1生产α-淀粉酶 将菌种接种于马铃薯琼脂斜面，37℃培养三天，然后转接到种子液体培养基上（豆饼粉、玉米粉、酵母膏、蛋白胨火碱、水等），摇瓶培养一定时间，当菌体进入对数生长期时，以0. 5%接种量接入固体培养基（麸皮、米糠、豆饼粉、火碱、水；ph=7左右，常压汽蒸一小时，冷却到38～40℃）在厚层通风制曲箱内，通风保持37～42℃，培养48小时出曲风干。 麸曲用1％食盐水3～4倍浸泡，3小时后过滤，调节滤液pH=8，加硫酸铵溶液沉淀酶，经离心，用浓酒精洗涤脱水，40℃烘干、磨粉即为成品。 ?深层发酵法生产α-淀粉酶
发酵大实验实验报告
2010级发酵大实验（1） 实验报告 任课老师： 姓名： 专业：生物技术 班级： 学号： 日期：2013年6月
实验报告 一、目的要求： 了解筛菌的基本操作，包括：培养基配制，灭菌，接种，涂板，摇菌，紫外分光光度计的使用等。 二、实验材料 1、菌种来源：英语公园葡萄树下土壤和生物学院院楼门口土样。 2、培养基： （1）淀粉液体培养基：可溶性淀粉1%、蛋白胨1% 、葡萄糖0. 5%、NaCl 0. 5%、牛肉膏0. 5% （2）淀粉固体培养基: 可溶性淀粉1%、蛋白胨1% 、葡萄糖0. 5%、NaCl 0. 5%、牛肉膏0. 5%、琼脂粉1.5% 。 3、器皿：试管，量筒，烧杯，移液管，培养皿，洗耳球，玻璃棒，酒精灯，接菌环，三角瓶，玻璃棒等。 4、仪器：高压蒸汽灭菌锅，水浴锅，恒温培养箱，摇床，天平、紫外可见分光光度计等。 5、试剂：1%碘液、1M NaOH、DNS、pH 5.6 0.05M 乙酸/乙酸钠缓冲液、1%淀粉溶液、1mg/mL的麦芽糖，结晶紫溶液。 6、其他：封口膜、纱布，棉花，试管架等。 三、实验步骤： 1、初筛： （1）配制培养基：按照上述培养基成分及数量称取各物质，放入三角瓶中，加水到100ml，包扎。和包扎好的试管、移液管、涂布器、培养皿等一起放入灭菌锅中121℃高压灭菌20min。然后干燥后使用。 （2）倒平板：把培养基置于无菌工作台上，待冷却到55℃左右后，倒入灭菌后的平板中，每个平板中约15-20ml，之后待冷却凝固。 （3）菌悬液制备：我们组分别从英语公园的葡萄树下和生物学院院楼门口采集土样，各称取10g，放入装有90mL无菌水的三角瓶中，震荡20min后静置5min。（4）浓度稀释：在无菌试验台上进行浓度梯度稀释,把土样摇匀，从中吸取1ml 置于事先灭好菌的试管中，再加入9 ml无菌水，再从该试管中吸取1ml土样置
虾青素摇瓶发酵条件的研究
用。此外,菌体高密度培养与产酶之间的关系还需进一步探索。 参考文献: [1]李晶,赵晓祥,沙长青,等1甲醇酵母基因表达系统的研究进展,生物工程进展.1999,19(2). [2]M.R omanos.Current opinion in Biotechnology ,1995,6∶527 -533. [3]J.M.G regg ,T.S.Vedvick ,W.C.Raschke.Biotechnology.1993,11∶905-910. [4]宋钢,官孝群,宋后燕1人微小纤溶酶原基因在甲醇营养型酵母中的表达.生物工程学,1999,15(2). [5]Clare ,J.J ,et al.G ene ,1991,105∶205-212. [6]C ouderc ,R.,et al.Agric.Bio1.Chem.1980,44∶2279-2289. [7]郑常文,刘惠侠1米曲霉植酸酶的分离纯化及性质研究.四川大学学报(自然科学版),1993,30(2). [8]赵见麟,金其荣1元花果曲霉(NRR L 3135)与黑曲霉(AS N70)植酸酶产酶条件的研究1食品与发酵工业,1996,3. [9]Shiel T.R ,W are J H.Suvey of m icrooganisms for the production of extracellular phytase.App1.M icrobiol.,1968,9. [10]Han Y W ,et al.Phosphatase production by A spetgillus ficu 2um.J.Industr.M icrobiol.,1987,2. Studies on high density culture conditions of producing -phytase Pichia pastoris combined strain Y U Xue -bing ,H UANGLu -qiang ,ZHE NG Y i ,SHI Qiao -qin ,W U S ong -gang (Bioengineering Institute ,Fujian N ormal University ,Fuzhou 350007,Chian ) Abstract :The high -density culture conditions of a combined strain of producing -phytase Pichia pas 2toris were studied ,including the effect of various carbon s ources ,yeast powder 015%,(NH 4)2S O 4,K H 2PO 4on this strain.The results are as follows :glycero 14%,powder 015%,(NH 4)2S O 4018%,K 2HPO 4011%,K H 2PO 4016%.On the basis of the experiments ,the other factors such as optimal tem perature ,pH etc.were als o mentioned. K ey w ords :Pichia pastoris ;phytase ;high -density 收稿日期:1999-06-02 中图分类号:Q935 文献标识码:A 文章编号:1004-311X (2000)03-0029-06 虾青素摇瓶发酵条件的研究 吕玉华1,金征宇2,徐学明2 (11上海市饲料质量监督检验站,上海201106;21无锡轻工大学,江苏 无锡214036) 摘 要:通过对P.rhodozyma 4-26的虾青素摇瓶发酵条件包括接种比、通气量和温度等,以及培养基主 要组分的优化,得到最优培养基及培养条件。在此条件下发酵72h ,虾青素量可达13145μg/ml 或1465μg/ gC DW ,较优化前提高1148倍。 关键词:虾青素;法夫酵母;发酵;优化 虾青素是一种重要的类胡萝卜素添加剂,具有独特的着色功能和重要的生理功能,在饲料、食品、化妆品及医药等领域中有着广阔的应用前景。目前主要有化学合成、从甲 壳类提取以及发酵等方法生产[1] 。本文主要对虾青素摇瓶发酵的接种量、通气量和温度等及培养基各主要组分进行研究,以求得一个比较优化的发酵工艺条件。 1 材料与方法 111 菌种:本实验室保藏的法夫酵母(Phaf 2 fia rhodozyma )4-26。112 培养基 培养基A :葡萄糖10g/L ,酵母膏3g/L ,蛋白胨5g/L ,麦芽汁(10°Bx )3g/L 。 培养基B (发酵培养基):葡萄糖20g/L 、(NH 4)2S O 42g/L 、K H 2PO 41g/L 、MgS O 4?7H 2O015g/L 、CaCl 2?H 2O011g/L 、酵母膏2g/L 。113 培养条件:装液量25ml/250ml 摇瓶,接种量8%,转速220r/min ,温度22℃,培养时间2d ～3d 。 第10卷第3期2000年6月 生 物 技 术BI OTECH NO LOGY V ol.10,N o.3 Jun ,2000
实验室平菇栽培法实验报告
实验报告实验名称实验室平菇栽培法班组 姓名学号日期 成绩教师签名 一、实验目的 1.掌握平菇基本栽培方法及其原理。 2.掌握平菇栽培中器械和培养基的灭菌方法及原理，如高压蒸汽灭菌法、干热灭菌、灼烧灭菌和紫外灯灭菌法等。 3.了解食用菌母种扩大繁殖生产的基本原理,掌握斜面母种的接种和培养方法。 4.掌握平菇栽培中原种、栽培种培养基的制备方法。 5.培养学生自行设计出菇的方案。 二、基本原理 1.平菇是木质腐生菌，生长发育所需各种营养物质均从木屑、棉籽壳、稻草等培养料中获得。平菇生长周期短，从播种到第一批采收一般为30天到40天，栽培方法简便，成功率高。本实验在实验室条件下，用袋装方法出菇。 2.食用菌生产中，培养基、器皿及接种工具的消毒灭菌，是防止杂菌污染，提高食用菌产量的关键措施，灭菌和消毒法主要有物理方法（高温灭菌和紫外线灭菌）、化学灭菌法。 干热灭菌是在保持恒温的电烘箱中进行的,适用于各种耐热的玻璃器皿、棉塞、滤纸、以及不能与蒸汽充分接触的液体的灭菌.一般在160摄氏度持续—2小时,就可达到灭菌的目的.灼烧灭菌可直接在酒精灯外火焰灼烧
灭菌,酒精灯所用的酒精浓度要在百分之95以上. 紫外灯灭菌是接种室(箱)最常用的方法之一,每次在使用前开灯20—30分钟.紫外线可导致细胞内核酸和酶发生变化而使细胞死亡,还可使空气中 氧气产生臭氧,臭氧也具有杀菌作用.因其透射力差只适用于空气及物体表 面的灭菌,有效距离为—2米,以米内为最好. 3.食用菌母种培养基和分离菌种时用斜面培养基，适用于一般食用菌的母种分离与培养用的培养基是马铃薯葡萄糖琼脂培养基（即PDA培养基），配成后用加压蒸汽灭菌法对培养基进行灭菌。 4.食用菌菌种生产一般按母种——原种——栽培种进行。母种数量少，要进行试管移接扩大培养才能进行生产。 5.原种由母种繁殖而成，由原种扩大培养成栽培种。原种和栽培种生产一般包括配料——装瓶（袋）——灭菌——接种——培养等流程。一般用瓶装或塑料袋装，灭菌压力和时间相应延长。 三、实验器材 1.材料：马铃薯、葡萄糖（或蔗糖）、磷酸二氢钾、硫酸镁、琼脂、75%乙醇溶液、麦粒、棉籽壳、石膏粉、碳酸钙、麦麸 2.器具：锥形瓶、棉塞、超净工作台、烧杯、量筒、漏斗、天平、铁架台、纱布、药匙、PH实纸、接种铲、酒精灯、聚丙烯塑料袋、小试管、牛皮纸、高压蒸汽灭菌锅等 四、实验过程 1、10月7日 ①准备干净的一只试管和一个锥形瓶，贴上标签并制作两个与试管和锥形瓶
枯草杆菌摇瓶发酵生产α-淀粉酶实验方案
枯草芽孢杆菌产α-淀粉酶发酵试验 一、实验原理 以枯草芽孢杆菌（BacilusSubtilisBF—7658）为实验菌株，通过种子扩大培养，选出生长力旺盛的菌株进行液体摇瓶发酵。通过测定不同发酵时间生产的酶活，来初步估计发酵最佳时期和终点。 淀粉酶是能够分解淀粉糖苷键的一类酶的总称，包括α-淀粉酶、β-淀粉酶、糖化酶和异淀粉酶。芽孢杆菌主要用来产生α-淀粉酶和异淀粉酶，其中α-淀粉酶又称淀粉1，4-糊精酶，能够切开淀粉链内部的α-1，4-糖苷键，将淀粉水解为麦芽糖、含有 6 个葡萄糖单位的寡糖和带有支链的寡糖；而异淀粉酶又称淀粉α-1，6-葡萄糖苷酶、分枝酶，此酶作用于支链淀粉分子分枝点处的α-1，6-糖苷键，将支链淀粉的整个侧链切下变成直链淀粉。通过发酵实验，我们可以以酶活为依据，初步估计发酵的最佳时期和发酵终点。 二、实验材料 （一）实验菌株：以枯草芽孢杆菌 （二）培养基： 1、种子培养液：葡萄糖1% 、胰蛋白胨：1%, 、酵母提取物：0.5%、NaCl(氯 化钠)：1% 调pH7.2 ，若配置固体培养基，则再加入1.5% 琼脂。 2、产淀粉酶发酵培养液：玉米粉 2 .0 % 、蛋白胨1 .5% 、CaCl 2 0 .02 % 、 MgSO 40 .02% 、NaCl 0 .25% 、K 2 HPO 4 0 .2% 、柠檬酸钠0 .2% 、硫酸铵0 .075% 、 Na 2HPO 4 0 .2 % 调节pH 值7 .0 （三）0.02M磷酸缓冲液（pH6.0） （四）实验仪器 离心机、水浴锅、250mL三角瓶、试管 三、实验过程 1、分别按培养基配方配制种子培养基和发酵培养基。 2、种子斜面及种子液准备 A.挑取单菌落从平板转接于新鲜种子斜面培养基，37℃，24h作菌种（3支/组）。 B.将配好的种子培养液按每瓶50mL分装于250mL三角瓶中灭菌（ 100KPa 20min ）。 C.在无菌操作条件下，将活化的菌株接种于以上培养液中（每支斜面接两瓶），37℃ 120r／min振荡培养16h作种子液。（6瓶/组） 3、发酵培养 A、按15-20％的接种量接种于装有50mL已灭菌菌发酵培养基的250ml三角瓶中。37℃培养48h。 B、在无菌操作条件下，每4h取样2mL，测定酶活。40-48h酶活降低后结束实验。 4、发酵结束后，用显微镜检查是否染菌。 5、待测酶液的制备： 称取1g~2g酶粉(精确至0.000 1 g)或准确吸取酶液1.00 mL，用少量磷酸缓冲液充分溶解，将上清液小心倾入容量瓶中，若有剩余残渣，再加少量磷酸缓冲液充分研磨，最终样品全部移入容量瓶中，用磷酸缓冲液定容至刻度，摇匀。用四层纱布过滤，滤液待用。
中药炮制实验报告
篇一：中药炮制毕业实验报告 实验报告 实习时间： 实习地点： 指导老师： 实习课目： 实习主要内容：清炒、炙法的炮制方法 实验一清炒法 一、实验目的 (1)了解清炒的目的和意义。 (2)掌握炒黄、炒焦和炒炭的基本方法和质量标准。 (3)掌握三种炒法的不同火候，炒后药性的变化及炒炭“存性”的总义。 二、实验原理 炒分清炒和加辅料炒两种。根据妙的火候不同，清炒又分为炒黄、炒焦和炒炭。炒黄多用“文火”，炒焦多用“中火，炒炭多用“武火”。炒制的目的是为了改变药性，提高疗效，降低毒性和减少副代用，矫味、矫臭以及便于制剂等等。 三、实验内容 1．炒黄酸枣仁、王不留行、牵牛子、冬瓜子、薏苡仁。 2．炒焦山楂、槟榔、麦芽、栀子。 3．炒炭蒲黄、槐米、荆芥。 四、实验器材 炉子、铁锅、铁铲、瓷盆、筛子、温度计、天平、竹匾等。 五、实验方法 （一）炒黄 1．酸枣仁取净酸枣仁，称重，置热锅内，用文火炒至鼓起微有爆裂声，颜色微变深，并嗅到药香气时，出锅放凉，称重。 成品性状：本品呈紫红色，鼓起，有裂纹，无焦斑，手捻种皮易脱落。具香气。 2．王不留行取净王不留行，称重，置热锅内，用中火加热，不断翻炒至大部分爆成白花，迅速出锅放凉，称重。 成品性状：本品炒后种皮炸裂，80％以上爆成白花，体轻质脆。 3．牵牛子取净牵牛子，称重，置热锅内，用文火加热，不断翻炒至鼓起，有炸裂声，并逸出香气，取出放凉，称重。用时捣碎。 成品性状：本品炒后色泽加深，鼓起，有裂隙，微具香气。 4．冬瓜子取净冬瓜子，称重，置热锅内，用文火加热，炒至表面略呈黄白色稍有焦斑，香气逸出时，取出放凉，称重。用时捣碎。 成品性状：本品炒后呈黄白色，鼓起，有裂口，微有焦斑。具香气。 5．薏苡仁取净薏苡仁，称重，置热锅内，用文火加热，炒至微黄色，鼓起，微有香气时，取出放凉。称重。 成品性状：本晶呈黄色，略具焦斑，有香气。(二)炒焦 1．山楂取净山楂，称重，分档置热锅内，先用中火后用武火加热，不断翻炒至表面 焦褐色，内部焦黄色，有焦香气逸出时，取出放凉。筛去碎屑，称重。 成品性状：本品表面呈焦褐色，具焦斑，内部焦黄色。具焦香气，酸味减弱。 2．槟榔取净槟榔片，称重，分档，置热锅内，用文火加热，不断翻炒至焦黄色， 焦斑，取出放凉。筛去碎屑，称重。
摇瓶与发酵
第一节：摇瓶与发酵 之所以选择摇瓶作为第一节，主要原因是我对它有深厚的感情，本科时进行植物细胞培养时使用的是摇瓶，研究生课题设计多数时间也在使用摇瓶，进入企业种子培养，验证很多情况都是使用摇瓶。虽然简单，但它的确是我们一个非常好用的工具，不仅研究过程要应用，生产过程也离不开，它的用途多种多样。不仅用于种子制备，种子的测试，原料的测试，培养基的优化，发酵过程的优化，能够伴随整个发酵过程。 摇瓶虽然简单，但是要想得到有价值的结论，基本原则不能抛弃，细节也要掌握，毕竟细节决定成败。 首先我们讨论装量问题。因为没有理论上的规定发酵时摇瓶的装量是多少，所以大家装得一定也不一样。那么多少合适呢？我不知道有没有下限，但是肯定会有一个上限，总不能装满吧！因为装量越多，在一定转动的情况下，溶氧会越少，相对蒸发量就越低，出现异常的概率就会变大，而且单位发酵液分配的动力也可能会降低。 装量少也不行，因为放罐后要检测，体积总得要够各项检测用吧。在这里我给一个提示：按照一般经验，发酵液和摇瓶的体积比例为10%-20%。其实在这里强调了空气，其实也要考虑其他物质的混合，比如：摇床的作用也会使细胞分泌出来的成份快速在整个发酵液中混匀。 我们在摇瓶上进行研究的目的是为了未来能够在发酵罐上进行放大，那么摇瓶如何与发酵罐进行比较呢？现在比较流行计算流体力学，如果有人能够用计算流体力学模拟摇瓶和发酵罐空气，营养，动力等情况的分配，便可以优化摇瓶中培养基体积的多少，使摇瓶与发酵罐的参数更接近一些，为以后的放大提供更接近的数据。 提到装量，相信很多人做过试验进行过优化。我自己也做过。一开始没有仔细考虑，只是想优化一个最适的加量，能够使发酵单位最高。开始的时候，由于没有考虑，挥发量的变化，所以最后得出装量越少发酵越好的结论。显然与发酵罐是不相符合的，生产需要的是产量而不是发酵单位。 我们设计试验的目的不能够偏离实际。做试验设计之前，我们一定要能够确定我们的试验目的是什么，我们需要的是一个稳定的菌种还是一个可能高产但是质量不稳定的菌种，我们是要筛选到发酵单位高还是产量高的工艺或培养基。相信大家最终的目的是一样的，但是由于没有生产指导或者没有经验，一开始我们往往会犯错误，搞不清楚我们目的。
食品发酵与酿造工艺学实验
发酵工艺学实验内容 实验一红曲的生产（4学时） 一、实验目的要求 1、了解红曲色素的特点。 2、学习红曲生产的工艺技术。掌握红曲酱腐乳酿造工艺及控制要求。 二、实验原理 红曲霉是我国用来生产红曲色素的传统菌种，该菌产生的红曲色素由于安全性高，热稳定性强，色泽鲜亮已得到广泛的应用。以大米或其他粮食作物为原料的红曲霉培养物称红曲。红曲有杀菌和抑菌作用，将红曲应用在调味品生产中或鱼、肉腌制中，具有防腐作用。红曲霉的菌丝有横隔、多核。在麦芽汁琼脂培养基上，生成先白色后红色的扩展性菌落，子囊孢子数目甚多，一般不产生分生孢子，常用液体培养作扩大菌种。 三、实验材料与试剂 1、菌种紫红曲霉(Monascus sp.) 2、培养基 斜面培养基配方：7.2 g麦芽糖、可溶性淀粉5 g、蛋白胨3 g、冰醋酸0.2 mL、琼脂2~3g、水100 mL。 种子培养基配方：可溶性淀粉3 g、硝酸钠0.3 g、黄豆粉0.5 g、水100 mL。 发酵培养基配方：大米500 g、红曲霉0.5 g、冰醋酸（95%）1.5 g, 水适量。 3、仪器摇床、超净工作台、三角瓶、无菌水试管、灭菌锅、恒温培养箱等。 四、实验操作步骤 1、培养基的配制：按培养基的配方，配制斜面、液体、发酵培养基，并灭菌冷 却备用。 2、斜面菌种活化：用接种环挑取冰箱保存的红曲霉菌种一环，在新鲜斜面上划 线，于30 ℃培养箱内培养4～7 d，长满红色孢子为宜。 3、种子培养液的扩大培养：用接种针挑取1～3环活化的红曲霉于液体试管或 三角瓶中，30 ℃摇床培养3～5 d，菌丝球生长小而密。 4、三角瓶固体发酵：将扩大培养的液体种子接种于发酵培养基中，拌匀后于 30 ℃培养，每1 d 摇散菌丝，直至大米变成红色为止。 思考作业： 1、红曲有何功能？ 2、红曲制作过程中应注意的事项？
淀粉酶类的生产
淀粉酶类的生产 淀粉酶属于水解酶类，是催化淀粉（包括糖原，糊精）中糖苷键水解的一类酶的统称。它是研究较多，生产最早，产量最大和应用最广泛的一种酶。几乎占整个总产量的50％以上。根据淀粉酶对淀粉的作用方式不同，淀粉酶可分为四种主要类型，即a-淀粉酶，β-淀粉酶，葡萄糖淀粉酶和异淀粉酶。此外，还有一些应用不是很广泛，生产量不大的淀粉酶，如环状糊精生成酶，及α-葡萄糖苷酶等。 表5—1 淀粉酶的分类 E.C编号系统名称常用名作用特性存在 E.C. 3.2.1.1 α-1，4葡聚糖- 4-葡聚糖水解酶 α-淀粉酶，液化 酶，淀粉-1，4- 糊精酶，内断型 淀粉酶 不规则地分解淀粉 糖原类物质的α-1 4糖苷键 唾液，胰脏，麦芽， 霉菌，细菌 E.C. 3.2.1.2α-1，4葡聚糖- 4-麦芽糖水解酶 Β-淀粉酶，淀粉 -1，4-麦芽糖苷 酶，外断型淀粉 酶 从非还原性末端 以麦芽糖为单位 顺次分解淀粉， 糖原类物质的α -1，4糖苷键 甘薯，大豆，大 麦，麦芽等高等 植物以及细菌等 微生物 E.C. 3.2.1.3α-1，4葡聚糖葡 萄糖水解酶 糖化型淀粉酶， 糖化酶，葡萄糖 淀粉酶，淀粉-1， 4-葡萄糖苷酶， 淀粉葡萄糖苷酶 从非还原性末端 以葡萄糖为单位 顺次分解淀粉， 糖元类物质的α -1，4糖苷键 霉菌，细菌，酵 母等 E.C. 3.2.1.9支链淀粉6-葡聚 糖水解酶 异淀粉酶，淀粉 -1，6-糊精酶， R-酶，茁酶多糖 酶，脱支酶 分解支链淀粉， 糖元类物质的α -1，6糖苷键 植物，酵母，细 菌 淀粉酶的种类不同，对直链淀粉和支链淀粉的作用方式也不一样。各种不同的淀粉酶对淀粉的作用有各自的专一性。 淀粉是自然界中分布极广的碳水化合物，它是由葡萄糖基相连接聚合而成的，根据连接方式不同一般可将其分为直链淀粉和支链淀粉两种。直链淀粉的葡萄糖基几乎都是以α-1，4键相互连接成的直连，聚合度为100—6000个葡萄糖单位不等，最近研究认为直链淀粉分子中也有极少量的分枝结构存在。支链淀粉则较复杂，除有较多的α-1，4键连接外，还在分子内有α-1，6键连接成树枝状，聚合度也比直链淀粉高。