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艾滋病实验室样本登记表

附件1 初筛实验室HIV抗体检测标本登记表

艾滋病实验室样本登记表

1

附件2 河北省初筛中心实验室HIV抗体检测接收标本登记表

艾滋病实验室样本登记表

2

附件3HIV抗体检测试验记录

编号

艾滋病实验室样本登记表

实验步骤:

1.样品、试剂、酶标板条室温平衡分钟。

2.取条板条,放在板架上,撕去板条上的封条。

3.在所有板孔中加入100μL的样品稀释液,包括要做质控的板孔。

4.在确定的板孔中加入50μL的标本或质控。设3个阴性对照和1个HIV1阳性对照、

1个HIV2阳性对照。在加入标本之后加入质控,并填写加样顺序表(见下表)。

5.在微板上盖上贴膜,洗板前撕去贴膜,37℃孵育60分钟。

6.在进行孵育的过程中,准备以下试剂:

(1)洗液(1:25):浓磷酸盐缓冲液ml,加蒸馏水ml 。

(2)TMB底物液(1:1):TMB ml,尿过氧化物ml。(临用前配制)

(3)1M硫酸:取浓硫酸(98%浓硫酸相当于18M),加蒸馏水ml。

7.磷酸盐缓冲液浸泡板孔60秒,洗板机洗板,洗6次。

8.每孔加入100μL TMB底物液,不要混匀或振荡,弃去多余的TMB底物液。

9.室温℃环境中孵育30分钟,闭光显色。

10.每孔加入100μL 1M硫酸,终止反应。

11.在450nm和620nm双波长读取每孔的吸光度,并打印结果。

艾滋病实验室样本登记表

A

B

C

D

E

F

G

H

结果分析:

呈阳性反应,需复检;其余均为阴性反应。

河北省性病艾滋病预防监测中心

HIV抗体检测试验记录编号

艾滋病实验室样本登记表

实验步骤:

1.样品、试剂、酶标板条室温平衡30分钟。

2.将酶联反应板从密封袋中取出,取下条板条,放在板架上。按顺序编号,设一个空白对照孔,两个阳性对照孔,两个阴性对照孔。

3.每孔加入50μl样品稀释液,取阳性对照和阴性对照分别充分混匀后各50μl加入对照孔中,空白对照孔只加样品稀释液,其余每个孔加待检血清50μl,(要先加样品,后加对照)轻轻振荡,充分混匀。并填写加样顺序表(见表)。

4.用不干胶封片封盖反应板,置37℃温育30分钟。

5.温育期间配制洗涤液:取20×洗涤液 ml,加蒸馏水 ml。

6.撕去贴膜,用洗涤液洗5次,然后在吸水纸上拍干。

7.除空白孔外每孔加酶标抗原100μl,用不干胶片封盖反应板。37℃温育30分钟。

8. 洗板5次(同步骤6),拍干。

9.每孔加显色剂A50μl ,显色剂B50μl,轻轻振荡后置37℃暗处显色10分钟,每孔加终止剂50μl。

10.选择酶标仪450nm和620 nm双波长测定,用空白孔调零点,测定各孔的吸光度。并打印结果。

艾滋病实验室样本登记表

A

B

C

D

E

F

G

H

呈阳性反应,需复检;其余均为阴性反应。

河北省性病艾滋病预防监测中心

HIV抗体检测试验记录编号

艾滋病实验室样本登记表

实验步骤:

1.将试剂盒、样本室温平衡30分钟;

2.取条板条,固定于支架,按顺序编号,设2个空白对照,3个阴性对照和2个HIV阳性对照。空白对照孔不加样品和酶结合物,只加底物和终止液。在确定的板孔中加入100μL的标本或质控(要先加样品,后加对照)。并填写加样顺序表(见表);

3.覆盖粘胶纸,置37℃孵育60分钟;

4.按1:25的比例稀释洗涤液,取 ml洗涤液,加入 ml蒸馏水;

5.取出已孵育完毕的反应板,弃去粘胶纸,吸干板内液体;

6.将洗涤液注满每孔(约300μl/孔),吸干,反复5次,在干净纱布上将板拍干;

7.每孔加酶结合物1OOμl,取新粘胶纸覆盖反应板,置37℃孵育30分钟;

8.洗涤同步骤5、6;

9.每孔加入底物缓冲液50μl、TMB50μl,混匀,置37℃显色lO分钟;

10.加终止液50μl振荡反应板5秒钟,使之充分混匀;

11.在酶标读数仪中,取波长450nm(建议使用双波长酶标仪比色,参考波长630nm), 以空白对照孔校零,读取每孔吸收值(加终止液后,务必在15分钟内读数完毕)。

艾滋病实验室样本登记表

A

B

C

D

E

F

G

H

呈阳性反应,需复检;其余均为阴性反应。

附件4

HIV抗体检测试验记录编号

艾滋病实验室样本登记表

实验步骤:

12.样品、试剂、酶标板条室温平衡15- 30 分钟。

13.取条板条,放在板架上,撕去板条上的封条。

14.在每孔中加入100μl酶标试剂,空白孔除外。

15.在确定的板孔中加入20μl的标本或阴阳性对照,震荡混匀。设1个空白对照,3

个阴性对照和2个HIV 阳性对照,并填写加样顺序表(见下表)。

16.在微板上盖上贴膜(洗板前撕去贴膜),37℃孵育60分钟。

17.配制洗涤液,取10Ⅹ浓缩洗涤液 ml,加去离子水 ml(1:10稀释)备用。

18.磷酸盐缓冲液浸泡板孔60秒,洗板机洗板,每孔6次(程序已编号)。

19.每孔加入显色剂A、B各50μl,轻轻振荡混匀。

20.封板膜封板后37℃闭光显色30分钟。

21.每孔加入100μl终止液,轻轻振荡混匀,终止反应。

22.在450nm和620nm双波长读取每孔的吸光度,并打印结果。

艾滋病实验室样本登记表

A

B

C

D

E

F

G

H

呈阳性反应,需复检;其余均为阴性反应。

附件5

HIV抗体检测试验记录

艾滋病实验室样本登记表

20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30

次数

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艾滋病实验室样本登记表

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