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东华大学研究生复试资料(分子和生物化工)

1、一个标准的分子生物学实验室应该具备哪些硬件和软件?

答:一个标准的分子生物学实验室应包含以下部分:

实验室(24-25℃)、仪器分析室(精密光学)、离心机室、细胞培养室、放射性核素操作室、冷室(4℃-8℃)、暗室(自显影、32P、蛋白)、消毒室、洗涤室、水处理室、恒温室(16℃,37℃)、动物饲养室等。

2、离心机都有哪些?划分依据?

答、普通离心机:最大转速为6000r/min、最大离心力为6000g

高速离心机:最大转速为25000r/min、最大离心力为89000g

超速离心机:最大转速为90000r/min、最大离心力为694000g

离心机分类依据:

高速离心机是指转速高达20000到25000r/min,主要用于生物大分子的微量操作。超速离心机以其能超过500000g(75000r/min,r=8cm)的离心力。

普通离心机转速在6000r/min,最大离心力6000g。

3、实验室常规的仪器设备?

答:温度控制系统:应该具备不同温控级别的冰箱,其中最常使用的有:4℃,-20℃,-80℃冰箱;37℃温箱;烤箱;100℃水浴摇床;水的净化装置;消毒设备;计量系统:常用的电子天平等,可调式微量移液器等、PH计、紫外可见分光光度计;其他设备:微波炉,真空加热干燥箱,电泳凝胶干燥器,凝胶呈像系统等。

4、核酸纯化的试剂有哪些?都有什么作用,原理是是么?如何辨别酚是否能使用?不能使用的原因是什么?加入八羟基喹啉的作用是什么?β-巯基乙醇的作用又是什么?水饱和酚和TE饱和酚分别用在提取什么核酸上?酚怎么保存?答:

①核酸纯化过程中涉及到的主要试剂:酚,氯仿,异无醇。

酚:可有效地变性蛋白质,但是不能完全抑制RNA酶活性,而且酚能溶解10-15%的水,从而能溶解一部分poly(A)RNA。

氯仿:变性蛋白质,能加速有机相与液相分层,去除植物色素和蔗糖。

异无醇:异戊醇可以降低表面张力,减少在去除蛋白质过程中产生的泡末,另外,异戊醇有助于分相,使离心后的上层含DNA的水相、中间的变性蛋白相及下层有机溶剂相维持稳定,最后用氯仿处理,是去除核酸溶液中的迹量酚。用乙醚处理,可去除迹量氯仿。

③酚如果无色透明可以使用,变色(结晶曾现粉红色或黄色)则不可以使用。因为:酚已经被氧化而成醌、二酸,酚氧化物可破坏核酸的磷酸二酯键,并引起DNA链的交联。

⑤加入八羟基喹啉的作用:减少酚的氧化;提供颜色指示(黄色), 使酚抽提时分层界面易于鉴别, 同时也指示酚的储存时间与质量;抑制RNA酶的活力;螯合金属离子并抑制DNA酶作用。

⑥β-巯基乙醇:是还原剂减少酚被氧化。

⑦水饱和酚用在提RNA;

TE饱和酚用在DN A。

⑧蒸馏酚要装入棕色试剂瓶中,4℃保存一个月。

乙醇的作用:核酸盐可被一些有机溶剂沉淀,通过沉淀可浓缩核酸, 加乙醇的目

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