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摘要建立人血浆低密度脂蛋白

人血浆低密度脂蛋白(LDL)的分离纯化及鉴定

姓名：陈龙学号：201411122311461 专业：二临医检

摘要建立人血浆低密度脂蛋白(LDL)的分离纯化与鉴定方法。用密度梯度超速离心法分离人血浆中LDL, 通过Sepharose6B 凝胶柱层析进一步纯化, 采用免疫双扩散法、SDS -PAGE 电泳法进行鉴定, 用Bradford法进行定量检测, 获得单一的蛋白条带, 此条带蛋白可与apoB-100 标准抗血清发生特异性反应, 得到高纯度LDL 8.28 mg 。本方法重复性好、可靠性高。

关键词低密度脂蛋白;密度梯度超速离心;琼脂糖凝胶6B

Abstract To develop a method for the separation , purification and identification of human low density Lipoproteins(LDL), LDL was separated by density gradient ultracentrifugation and was purified by Sepharose6B chromatography .Then the purified LDL w as analyzed by double immunodiffusion 、SDS -PAGE gel-electrophoresis and Bradford method .Result s show ed that the purified LDL displayed a specific reaction with apoB-100 antiserum .A total of 2.82 mg purified LDL was obtained in my study group. This method has a good reproducibility and reliability .These results have provided the necessary basis for the study of the successful preparation of rabbit antihuan poly clonal antibodies against apoB-100 in the future .

Key words Low density lipoprotein , Density gradient ultracent rifugation , Sepharose 6B

人血浆脂蛋白根据密度不同主要分为:乳糜微粒、极低密度脂蛋白、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白。低密度脂蛋白(Low density lipoprotein , LDL)是血浆内密度处于

【1 ,apoB -100 是LDL 中唯一的蛋白质成分, 1.019 ～ 1.063 g/ml 之间的脂蛋白】

相对分子质量为512.723 k , 主要由肝脏合成, 在血浆中的浓度为60～ 120mg/L 。本实验采用密度梯度超速离心与凝胶柱层析技术相结合的方法分离纯化得到高质量LDL 。

1 材料与方法

1.1 试剂与仪器试剂均为国产或进口的分析纯。超速离心机(Hitachi CP100WX);角转头(Hi tachi P100A T);蛋白质纯化系统(AKTA Prime GE 公司);Sepharose6B(GE 公司);核酸蛋白仪(DU800 Beckman公司);垂直电泳系统(BIO -RAD公司);人血浆、apoB -100 、apoA -Ⅰ、IgG 等抗血清(浙江中医药大学实验室提供)。

1.2 方法

1.2.1 LDL 的分离与纯化]2[

1.2.1.1密度梯度超速离心100 ml 新鲜冷冻血浆4 ℃溶解, 缓慢加入DDH2O 将密度调为1.019 g/ml , 超速离心(145 000 ×g , 10 ℃, 20 h , 转子预冷), 取下层黄色溶液用溴化钠溶液将密度调至 1.063 g/ml , 超速离心(184 900 ×g , 10 ℃, 24 h , 转子预冷), 取上层淡黄色溶液进行透析(pH 7.4 ,0.01mol/ L PBS 缓冲液,7 000 u 透析袋, 4℃), 每6 h更换1 次透析液, 更换3 次, 透析后的溶液置于40 %PEG 20 000 溶液中浓缩到适量体积(5ml 左右)。

1.2.1.2 凝胶层析将Sepharose 6B 凝胶进行装柱(XK16/70), 采用pH 7.4 、0.01 mol/L PBS 平衡3 ～ 5 个柱体积(AKTA Prime系统), 取浓缩后的样品溶液2 ～3 ml 上样, 待样品完全进入凝胶中, 用pH7.4 、0.01 mol/L PBS 进行洗脱(0.3 ml/min)、收集(1ml/管), 根据吸收峰取样进行定性定量检测。

1.2.2 LDL 的鉴定

【2首先用0.9 %生理盐水配制1.2 %的琼脂糖溶液, 加热1.2.2.1免疫双扩散法】

溶解, 待其冷却到60 ℃铺板(约2.5 mm 厚), 待琼脂冷却凝固后,用5 mm 孔径的打孔器打孔, 周围孔离中央孔的距离3 ～ 5 mm 。中央孔加抗体或抗原, 周围孔加入相应的抗原或抗体, 然后将琼脂板放入湿盒中, 置于37 ℃培养箱, 10 h后开始观察结果。

1.2.2.2 SDS -PAGE制备7.5 %的不连续胶,上样量10 μg , 开始电流设为10 mA , 待样品进入分离胶后, 将电流调至20mA ,当染料至距胶底部1 cm处, 停止电泳。考马斯亮蓝染色法染色, 拍照。

1.2.2.3 LDL含量测定取纯化得到的LDL , 采用Bradford法测定蛋白浓度, 以牛血清白蛋白作为标准蛋白, 绘制标准曲线, 根据标准曲线计算LDL的含量

2 结果

2.1 Sepharose 6B凝胶层析图谱分析经过密度梯度超速离心和凝胶层析后获得LDL的凝胶层析图谱, 收集了3 个峰的样品(第1峰:16～ 18 管;第2 峰:24 ～ 30 管;第3 峰:44 ～ 46 管)。

2.2 LDL 的定性检测分析

2.2.1免疫双扩散法为了确定LDL 在3 个峰中的分布情况, 取各峰峰尖的样品第1 峰(17 管)、第2 峰(28 管)、第3 峰(44 管)与apoB -100 标准抗血清(中间

孔)进行了免疫双扩散实验(图2), 结果显示28 管(第2 峰)与apoB -100 标准抗血清产生免疫沉淀线, 而第1 、3 峰均无沉淀线产生, 表明LDL 分布于第2 峰。为了进一步鉴定第2 峰中是否含有其他蛋白, 取第2 峰的28 管(中间孔)与IgG , apoA -Ⅰ , apob -100抗血清进行了双向免疫扩散检测(图3), 结果显示第2 峰的28管只与apoB -100 抗血清产生免疫沉淀线, 与IgG , apoA-Ⅰ抗血清则无沉淀线产生, 表明本次收集的LDL 样品(第2 峰)不含有IgG , apoA -Ⅰ。

2.2.2 SDS -PAGE从层析图谱第二峰的24 ～30 管中取样进行了SDS -PAGE 检测, 电泳图谱显示接近凝胶上部仅有一条带, 无杂带, 表明第二峰为纯LDL , 将24 ～ 30 号管中的样品进行了合并(约7 ml), 保存于-80 ℃冰箱]3[。

2.3 LDL的定量分析

标准曲线y =0.0005x , R 2 = 0.9954合并第2 个峰(24 ～ 30 管)的LDL 样品进行检测, 得到蛋白总量为2.82 mg 。（吸光度分别为0.059、0.099、0.191、0.277、0.034、0.445）

蛋白质浓度曲线

0.05

0.1

0.15

0.2

0.25

0.3

0.35

0.4

0.45

050100150200

250300蛋白质浓度（ug/ml）吸光度

3 讨论

我们对文献报道分离纯化LDL 方法进行了改良, 采用密度梯度超速离心与凝胶柱层析技术相结合得到纯度较高的LDL , 同时实验操作简便, 易于扩大试生产, 因而适用于大规模制备。本实验重复性和可靠性较为理想, 连续分离、纯化3 次, 每次的样品在SDS -PAGE 上均于同一位置呈单一条带, 且经免疫双扩散反应均呈特异沉淀反应。LDL 的稳定性较差, 在室温下容易降解, 因此在操作过程中保持低温, 保证LDL 的得率。本实验方法从100 ml 人血浆中本小组共分离纯化LDL (apoB -100)2.82 mg

参考文献

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武汉大学学报(医学版), 2002 , 23(2):169 .

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血浆脂蛋白变化的生理意义

血浆脂蛋白变化的生理意义血浆脂蛋白目前主要依据各种脂蛋白的水化密度(hydrated density)及电泳迁移率(mobility)的不同，即电泳法和超速离心法进行分类。 (一) 超速离心法超速离心法是根据各种脂蛋白在一定密度的介质中进行离心时，因漂浮速率不同而进行分离的方法。通常可将血浆脂蛋白分为乳糜微粒(chylomicron，CM)、极低密度脂蛋白(very low density lipoprotein，VLDL)、低密度脂蛋白(low density lipoprotein，LDL)和高密度脂蛋白(high density lipoprotein，HDL)等四大类。另外，除这四类脂蛋白外，还有中密度脂蛋白(intermediate density lipoprotein, IDL)的存在。 (二) 电泳法由于血浆脂蛋白表面电荷量大小不同，在电场中，其迁移速率也不同，从而将血浆脂蛋白分为乳糜微粒、β-脂蛋白、前β-脂蛋白和α-脂蛋白等四种。根据化学结构，脂蛋白电泳或超速离心对血浆脂蛋白进行分类。主要的脂蛋白有高密度脂蛋白（HDL），低密度脂蛋白（LDL），极低密度脂蛋白（VLDL）和乳糜微粒（CM）。血浆脂蛋白分析可有助于明确病因。超速离心CM VLDL LDL HDL 胆固醇主要存在于HDL和LDL中，而甘油三酯主要存在于VLDL和乳糜微粒中。不同的基因缺陷可能产生同样的脂蛋白异常，只有通过广泛的家族分析予以鉴别。 VLDL 增高多见于肥胖人卫版《动脉粥样硬化与冠心病》《动脉粥样硬化致损斑块的》糖尿病性高脂血症：糖尿病（DM）尤其是非胰岛素依赖性糖尿病（NIDDM）患者常伴有高脂血症。这类患者的血浆脂蛋白改变主要取决于血糖控制情况。肥胖、饮食中高饱和脂肪酸及高胆固醇、缺少运动、吸烟、饮酒及某些药物也是NIDDM 患者血脂异常的原因。脂蛋白糖化影响脂蛋白代谢，LDL的糖化可降低其与受体的亲和力，导致LDL清除减慢。

第四章血浆脂蛋白及其代谢紊乱

第四章血浆脂蛋白及其代谢紊乱 (Pl asma Li popr ot ei ns and Its Metabol ic Di sorder) 第一节血浆脂蛋白及其代谢脂类包括血浆脂类简称血脂总胆固醇 (TC) 游离胆固醇 (FC) 胆固醇酯 (CE) 磷脂(PL) 甘油三酯 (TG) 游离脂肪酸 (FFA) 糖酯等外源性食物脂类内源性肝合成的脂类及脂肪组织血浆脂质总量 :4.0 ～ 7.0g/L 血浆脂蛋白定义：血浆脂蛋白( lipoprotei n, LP) ：脂类难溶于水，正常血浆脂类物质与蛋白质结合成脂蛋白的形式存在。是血浆脂类的主要存在形式与运输形式. 脂类 +载脂蛋白脂蛋白血浆脂蛋白结构：大致为球形颗粒，由两大部分组成 : 即疏水性的内核和亲水性的外壳。内核由不同量的CE与 TG 组成，表层由载脂蛋白、 PL及FC组成， FC及 PL的极性基团向外露在血浆中。幻灯片 8 一、血浆脂蛋白分类：超速离心法：根据脂蛋白在一定密度的介质中漂浮速率不同而进行分离的方法。电泳法：根据不同密度的脂蛋白所含蛋白质的表面电荷不同 , 利用电泳将其分离，并与血浆蛋白质的迁移率比较以判断其部位。超速离心法与电泳法分离血浆脂蛋白的相应关系定义：脂蛋白的蛋白部分称为载脂蛋白 (apolipoprotein ， Apo) 种类：按 1972 年 Alaupovic 建议的命名方法，用英文字母顺序编码，分为ApoA、B、C、 D、 E、F、G、H、 J 等。由于氨基酸组成的差异，每一型又可分若干亚型。

功能： 1、稳定脂蛋白结构功能 2、调节与脂蛋白代谢有关酶的活性 3、识别脂蛋白受体功能四、脂蛋白受体和脂蛋白结合蛋白脂类在血液中以脂蛋白形式进行运送，并可与细胞膜上存在的特异受体相结合，被摄取进入细胞内进行代谢。迄今为止报道的受体已有很多种，主要有 LDL 受体、清道夫受体、 VLDL受体。一、低密度脂蛋白受体二、极低密度脂蛋白受体三、清道夫受体脂蛋白受体定义：脂蛋白受体是一类位于细胞膜上的糖蛋白。它能以高度的亲和方式与相应的脂蛋白配体作用 , 从而介导细胞对脂蛋白的摄取与代谢，进一步调节细胞外脂蛋白的水平。（一）、低密度脂蛋白受体（LDLR） LDL 受体（LDL receptor ， LDL-R/LDLR）亦称为 ApoB、 E受体，为 Goldstein 和 Brown于 1973年发现，并因此荣获 1985 年诺贝尔医学奖。 LDL 受体是一种多功能蛋白，由 836 个氨基酸残基组成 36 面体结构蛋白 , 分子量约 115kD, LDLR 由五种不同结构域组成。 LDL受体的组织分布肝、动脉壁平滑肌细胞、肾上腺皮质细胞、血管内皮细胞、淋巴细胞、单核细胞、巨噬细胞。各组织或细胞的 LDL 受体活性差别很大。 LDL受体识别的配体： ApoB100（※）、 ApoE （1）亲和性：其配体为 ApoB100 和 ApoE，能与含这些载脂蛋白的脂蛋白结合，故其又被称为ApoB-E 受体。 ★ ApoB48 不是其配体。（2）功能：在细胞结合、摄取和降解 LDL及其它含 ApoB100 ApoE的脂蛋白（如 VLDL、β-VLDL ）过程中起中介作用，对维持细胞和全身胆固醇平衡起重要作用。注：β-VLDL 为高胆固醇饮食引起的一种异常血浆脂蛋白。与正常VLDL比较：

血浆脂蛋白的分类根据

如对您有帮助，可购买打赏，谢谢血浆脂蛋白的分类根据导语：说起血浆脂蛋白可能很多人都不知道，也不了解，其实血浆脂蛋白就是人体内的蛋白质复合物。主要生成在小肠和肝脏的部位。血浆脂蛋白可以把胆说起血浆脂蛋白可能很多人都不知道，也不了解，其实血浆脂蛋白就是人体内的蛋白质复合物。主要生成在小肠和肝脏的部位。血浆脂蛋白可以把胆固醇等脂类运到另一个器官里，可以说是血浆脂蛋白在人体内担任着运输工的工作，血浆脂蛋白一般出现在医学名词上，下面就给大家说说关于血浆脂蛋白的分类。血浆脂蛋白是根据密度来分类的：（1）乳糜微粒(0.95g/cm3)，密度非常低，运输甘油三酯和胆固醇酯，从小肠到组织肌肉和adipose组织。（2）极低密度脂蛋白VLDL(0.95-1.006g/cm3)，在肝脏中生成，将脂类运输到组织中，当VLDL被运输到全身组织时，被分解为三酰甘油、脱辅基蛋白和磷脂，最后，VLDL被转变为低密度脂蛋白。（3）低密度脂蛋白(LDL，1.006-1.063g/cm3)，把胆固醇运输到组织，经过一系列复杂的过程，LDL与LDL受体结合并被细胞吞食。（4）高密度脂蛋白(HDL，1.063-1.210g/cm3)，也是在肝脏中生成，可能负责清除细胞膜上过量的胆固醇。当血浆中的卵磷脂：胆固醇酰基转移酶(Lecithin cholesterol acyltransferase，LCAT)将卵磷脂上的脂肪酸残基转移到胆固醇上生成胆固醇脂时，HDL将这些胆固醇脂运输到肝。肝脏将过量的胆固醇转化为胆汁酸。以上就是关于血浆脂蛋白的分类的相关内容，希望可以帮助到大家。血浆脂蛋白是蛋白质中的一部分，而且血浆脂蛋白可以运输脂类。贫血的人平时可以多吃点补血的食物。血浆脂蛋白的密度很高，所以一预防疾病常识分享，对您有帮助可购买打赏

4血浆脂蛋白及其代谢紊乱

第四章血浆脂蛋白及其代谢紊乱一、Ａ型选择题 1. 下列各种脂蛋白中，脂质含量最多的脂蛋白是（） A CM B VLDL C LDL D HDL 2. 下列各种脂蛋白中，蛋白质含量最多的脂蛋白是（） A CM B β-脂蛋白 C 前β-脂蛋白 D α-脂蛋白 3. 下列各种脂蛋白中，能够抑制纤溶酶活性的脂蛋白是（） A VLDL B LDL C HDL D Lp(a) 4. HDL中存在的主要载脂蛋白是（） A ApoA B ApoB100 C ApoC D ApoE 5. LDL中存在的主要载脂蛋白是（） A ApoA B ApoB100 C ApoC D ApoE 6. 下列哪一项是肝脏清除胆固醇的主要方式（） A 转变成类固醇 B 转变成维生素D C 在肝细胞内转变成胆汁酸 D 合成低密度脂蛋白 7. 下列关于Lp(a)叙述错误的是（） A Lp(a)是动脉粥样硬化性疾病的独立危险因子 B Lp(a)在脂蛋白电泳时属于β-脂蛋白部分 C Apo (a)与纤溶酶原具有高度同源性 D Apo (a)可从Lp(a)上脱落下来，剩下不含Apo(a)仅含ApoB100的颗粒称LDL 8. 下列哪种脂蛋白可以将肝脏合成的内源性胆固醇运转至肝外组织（） A CM B VLDL C LDL D HDL 9. 下列哪种脂蛋白参与胆固醇的逆向转运（） A CM B VLDL C LDL D HDL

10. 人群中ApoE可有几种不同的表型（） A 3种 B 4种 C 5种 D 6种二、Ｘ型选择题 1. 正常人空腹12小时后抽血做血清脂蛋白电泳，会出现哪几条电泳谱带（） A CM B β-脂蛋白 C 前β-脂蛋白 D α-脂蛋白 2. 下列哪几项是载脂蛋白的功能（） A 构成并稳定脂蛋白的结构 B 修饰并影响与脂蛋白代谢有关的酶的活性 C 作为脂蛋白受体的配体 D 参与脂蛋白代谢过程 3. ApoE具有基因多态性，常见的异构体有（） A E1 B E2 C E3 D E4 4. 下列哪几项是ApoE的生理功能（） A 是LDL受体的配体和肝细胞CM残粒受体的配体 B 具有基因多态性，与个体血脂水平及动脉粥样硬化发生发展密切相关 C 参与激活水解脂肪的酶类，参与免疫调节及神经组织的再生 D 参与胆固醇的逆向转运 5. 目前研究得最详尽的脂蛋白受体有（） A LDL受体 B VLDL受体 C HDL受体 D 清道夫受体 6. LDL受体的配体是（） A 含ApoA的脂蛋白 B 含ApoB100的脂蛋白 C 含ApoC的脂蛋白 D 含ApoE的脂蛋白 7. 下列哪些是清道夫受体的配体（） A 修饰的LDL B 某些磷脂 C 细菌脂多糖 D 多聚次黄嘌呤核苷酸

第四章血浆脂蛋白及其代谢紊乱

第四章血浆脂蛋白及其代谢紊乱 (P l a s m a L i p o p r o t e i n s a n d I t s M e t a b o l i c D i s o r d e r) 第一节血浆脂蛋白及其代谢脂类包括血浆脂类简称血脂 ●总胆固醇(TC) ●游离胆固醇(FC) ●胆固醇酯 (CE) ●磷脂(PL) ●甘油三酯(TG) ●游离脂肪酸(FFA) ●糖酯等外源性食物脂类内源性肝合成的脂类及脂肪组织血浆脂质总量:4.0～7.0g/L ●血浆脂蛋白定义：血浆脂蛋白(l i p o p r o t e i n,L P)：脂类难溶于水，正常血浆脂类物质与蛋白质结合成脂蛋白的形式存在。是血浆脂类的主要存在形式与运输形式. 脂类+载脂蛋白脂蛋白 ●血浆脂蛋白结构：大致为球形颗粒，由两大部分组成:即疏水性的内核和亲水性的外壳。内核由不同量的CE与TG组成，表层由载脂蛋白、PL及FC组成，FC及PL的极性基团向外露在血浆中。幻灯片8 ●一、血浆脂蛋白分类：超速离心法：根据脂蛋白在一定密度的介质中漂浮速率不同而进行分离的方法。电泳法：根据不同密度的脂蛋白所含蛋白质的表面电荷不同,利用电泳将其分离，并与血浆蛋白质的迁移率比较以判断其部位。超速离心法与电泳法分离血浆脂蛋白的相应关系二、血浆脂蛋白的组成和特征 CM VLDL IDL LDL HDL Lp(a) 电泳位置原点前 -和前之间 - - 前 - 主要脂质外源性TG (80-90%) 内源性TG (50-70%) 内源性TG、 CE 含Ch与CE 最多 (40-50%) PL CE、PL 主要载脂蛋白 AI、B48 CⅠ、CⅡ、 CⅢ B100、E CⅠ、CⅡ CⅢ B100 E B100 AI、AⅡ(a)，B100 合成部位小肠粘膜细胞肝细胞血浆血浆肝、肠、血浆肝细胞功能转运外源性TG 转运内源性TG 转运内源性TG、CE 转运内源性CE 逆向转运 CE 三、载脂蛋白的组成和特征 ●定义：脂蛋白的蛋白部分称为载脂蛋白(apolipoprotein，Apo)

血浆脂蛋白密度由低到高的顺序

血浆脂蛋白密度由低到高的顺序: CM-VLDL-LDL-HDL 由于脂蛋白的bai蛋白质和脂质的组成、比例不同，它们的du 颗粒大小、zhi表面电荷及密度均有差异。因此可用电泳法和超速离心法将它们分离。用电泳法后，按迁移率的快慢依次分为。α-脂蛋白、前β-脂蛋白、β-脂蛋白和位于点样原点的乳糜微粒四种。α-脂蛋白最快，CM最慢。用超速离心法，按密度高低依次分为高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)、极低密度脂蛋白(VLDL)和乳糜微粒(GM)四种。血浆脂蛋白：血浆脂蛋白：指哺乳动物血浆（尤其是人）中的脂-蛋白质复合物。血浆脂蛋白可以把脂类（三酰甘油、磷脂、胆固醇）从一个器官运输到另一个器官。分类：血浆脂蛋白是根据密度来分类的：（1）乳糜微粒(<0.95g/cm3)，密度非常低，运输甘油三酯和胆固醇酯，从小肠到组织肌肉和adipose组织。（2）极低密度脂蛋白VLDL(0.95-1.006g/cm3)，在肝脏中生成，将脂类运输到组织中，当VLDL被运输到全身组织时，被分解为三酰甘油、脱辅基蛋白和磷脂，最后，VLDL被转变为低密度脂蛋白。

（3）低密度脂蛋白(LDL，1.006-1.063g/cm3)，把胆固醇运输到组织，经过一系列复杂的过程，LDL与LDL受体结合并被细胞吞食。（4）高密度脂蛋白(HDL，1.063-1.210g/cm3)，也是在肝脏中生成，可能负责清除细胞膜上过量的胆固醇。当血浆中的卵磷脂：胆固醇酰基转移酶(Lecithin cholesterol acyltransferase,LCAT)将卵磷脂上的脂肪酸残基转移到胆固醇上生成胆固醇脂时，HDL将这些胆固醇脂运输到肝。肝脏将过量的胆固醇转化为胆汁酸。

血脂及脂蛋白的组成及代谢

血脂及脂蛋白的组成及代谢一、血脂血脂就是血浆或血清中所含的脂类。它的组成复杂,包括胆固醇(cholesterol, Ch)、三酰甘油(triglyceride, TG)、磷脂(phospholipid, PL)与游离脂肪酸(free fatty acid, FFA)等。胆固醇又分为胆固醇酯(cholesteryl ester, CE)与游离胆固醇(free cholesterol, FC)两者相加为总胆固醇(total cholesterol, TC)。血脂的来源有两个途径:(1)外源性途径:即从食物中摄取的脂类经消化道吸收进入血液;(2)内源性途径:即由肝、脂肪细胞以及其她组织合成后释放入血。血脂含量受多种因素饮食、年龄、性别、职业及代谢等的影响。二、血浆脂蛋白的分类及组成血脂在血浆中不就是以游离状态存在,而就是与血浆中的载脂蛋白(apoprotein, apo)结合,以脂蛋白(lipoprotein, LP)的形式进行转运与代谢。 (一)血浆脂蛋白的分类按超速离心法,可将脂蛋白可分为乳糜微粒(chylomicron, CM)、极低密度脂蛋白(very low density lipoprotein, VLDL)、低密度脂蛋白(low density lipoprotein, LDL)与高密度脂蛋白(high density lipoprotein, HDL)四类。此外还有中间密度脂蛋白(intermediate density lipoprotein, IDL),就是VLDL在血浆的代谢物,其组成及密度介于VLDL及LDL 之间。 (二)血浆脂蛋白的组成血浆脂蛋白主要由载脂蛋白、三酰甘油、磷脂、胆固醇及其酯组成。各类脂蛋白都含有这四类成分,但其组成比例及含量却差别很大。乳糜微粒含三酰甘油最多,达80%~95%,蛋白质最少,约1%;VLDL含三酰甘油约50%~70%,蛋白质含量约10%;LDL含胆固醇及胆固醇酯最多,约40%~50%;HDL含蛋白质最多,约50%。三、载脂蛋白血浆脂蛋白中的蛋白质部分称载脂蛋白(apoprotein, apo),迄今已从人血浆中分离出18种之多。主要有apoA、B、C、D、E等五类,其中apoA又分为apo AI、AⅡ、AⅣ;apoB 又分为B100及B48;apoC又分为CⅠ、CⅡ、CⅢ。不同的脂蛋白含不同的apo, 它们主要功能就是结合与转运脂质。此外还调节脂蛋白代谢关键酶活性,参与脂蛋白受体的识别等。如apo AI激活卵磷脂胆固醇酰基转移酶(lecithin cholesterol acyl transferase,

血浆脂蛋白密度由低到高的顺序

血浆脂蛋白密度由低到高的顺序正常血浆脂蛋白按照密度由低到高顺序的排列为 A.VLDL-IDL-LDL-HDL B.CM-VLDL-IDL-LDL C.VLDL-CM-LDL-HDL D.VLDL-LDL-IDL-HDL E.CM-VLDL-LDL-HDL 参考答案：E 血浆脂蛋白是指哺乳动物血浆（尤其是人）中的脂-蛋白质复合物。血浆脂蛋白可以把脂类（三酰甘油、磷脂、胆固醇）从一个器官运输到另一个器官，根据密度分为乳糜微粒、极低密度脂蛋白、低密度脂蛋白和高密度脂蛋白，主要有电泳法和超速离心法等分离方法。血浆脂蛋白是根据密度来分类的：（1）乳糜微粒(<0.95g/cm3)，密度非常低，运输甘油三酯和胆固醇

酯，从小肠到组织肌肉和adipose组织。（2）极低密度脂蛋白VLDL(0.95-1.006g/cm3)，在肝脏中生成，将脂类运输到组织中，当VLDL被运输到全身组织时，被分解为三酰甘油、脱辅基蛋白和磷脂，最后，VLDL被转变为低密度脂蛋白。（3）低密度脂蛋白(LDL，1.006-1.063g/cm3)，把胆固醇运输到组织，经过一系列复杂的过程，LDL与LDL受体结合并被细胞吞食。（4）高密度脂蛋白(HDL，1.063-1.210g/cm3)，也是在肝脏中生成，可能负责清除细胞膜上过量的胆固醇。当血浆中的卵磷脂：胆固醇酰基转移酶(Lecithin cholesterol acyltransferase, LCAT)将卵磷脂上的脂肪酸残基转移到胆固醇上生成胆固醇脂时，HDL将这些胆固醇脂运输到肝。肝脏将过量的胆固醇转化为胆汁酸。组成结构脂蛋白中脂质与蛋白质之间没有共价键结合，多数是通过脂质的非极性部分与蛋白质组分之间以疏水性相互作用而结合在一起。一般认为血浆脂蛋白都具有类似的结构，呈球状，在颗粒表面是极性分子，如蛋白质，磷脂，故具有亲水性；非极性分子如甘油三酯、胆固醇酯则藏于其内部。磷脂的极性部分可与蛋白质结合，非极性部分可与其它脂类结合，作为连接蛋白质和脂类的桥梁，使非水溶性的脂类固系在脂蛋白中。磷脂和胆固醇对维系脂蛋白的构型均具有重要作用。

血浆脂蛋白

实用标准文案血浆脂蛋白一．定义血浆脂质和蛋白质组成的一类大分子化合物脂质：FC,CE,PL,TG 载脂蛋白：酸性蛋白多于一般蛋白水溶性物质：功能有运输脂质，参与脂质代谢，参与某些疾病过程二．脂蛋白的分类与组成电泳法：乳糜微粒，β-脂蛋白，前β-脂蛋白，α- 脂蛋白超速离心法：即按密度分五类：

三．载脂蛋白1．1971年ABC命名法精彩文档．实用标准文案 A (AI,AII,AIII,AIV) 肝，小肠粘膜 B (B100,B48) B100-肝B48-小肠 C (CI,CII,CIII) 肝，少量在小肠 D (即AIII) E (多态性，有10多种) 肝另：分为载脂蛋白A,B,C,E,(a)五大类：

．功能2 （）维系脂蛋白的结构1 2（）修饰并影响与脂蛋白相关的酶的代谢和活性 3（）是一些酶的辅因子）作为脂蛋白受体的配体，决定与参与脂蛋白与受体的结合及其代谢过程4（例：卵磷脂胆固醇酰基转移酶LCAT- 精彩文档．实用标准文案 apoAI 激活LCAT活性，apoAII抑制LCAT活性四．脂蛋白的临床应用．目前的常规检测项目1 TC TG TC/HDL-c HDL-c LDL-c apoAI/apoB apoB apoAI 2. TC测定在肝合A70?，30ü，来源于食物，体内由酰基辅酶TC测定：包括

90% 成，提供内源性胆固醇的胆固醇的主要功能：所有细胞膜的重要组成成分1) 2)胆汁酸的唯一前体3)所有类固醇激素的前体同位素稀释质谱法决定方法：NIST 改良Abell-Kenell法参考方法：CDC 常规方法：酶法 (200mg/dl) 合适范围：<5.2mmol/L 精彩文档．实用标准文案边缘升高：5.23-5.69mmol/L (201-219mg/dl) 升高：>5.72mmol/L (220mg/dl) TC升高：高胆固醇血症和动粥硬关系密切，易引起动粥硬性心脑血管疾病，如冠心，心梗，脑卒中等，但作为诊断指标不够特异，不够敏感，只能作为评价的危险因素，预防，发病估计，治疗观察等的参考指标。原发性LDL受体缺陷所致的家族性高TC血症，混合性高脂蛋白血症继发：肾综，甲减，糖尿病，梗阻性黄疸，慢性肾衰，妊娠，胆管阻塞，避孕药 TC降低：原发性无或低β脂蛋白血症继发：肝硬化，甲亢，营养不良，严重巨细胞性贫血，急性感染，胃肠道手术，肿瘤，女性月经期

血浆脂蛋白密度由低到高的顺序

血浆脂蛋白密度从低到高的顺序是CM-VLDL-LDL-HDL。血浆脂蛋白是指哺乳动物血浆（特别是人）中的脂蛋白复合物。血浆脂蛋白可以将脂质（三酰基甘油，磷脂和胆固醇）从一个器官转运到另一个器官，并且可以根据其密度分为乳糜颗粒，极低密度脂蛋白，低密度脂蛋白和高密度脂蛋白，主要包括电泳和超速离心。血浆脂蛋白根据密度分类：（1）乳糜颗粒（<0.95g / cm3），密度很低，可将甘油三酸酯和胆固醇酯从小肠转运到组织，肌肉和脂肪组织。（2）在肝脏中产生的极低密度脂蛋白VLDL（0.95-1.006g / cm3），将脂质转运至组织，当VLDL转运至全身组织时，会分解为三酰基甘油，载脂蛋白和磷脂，最终VLDL为转化为低密度脂蛋白。（3）低密度脂蛋白（LDL，1.006-1.063g / cm3）将胆固醇转运到组织。经过一系列复杂的过程，LDL与LDL受体结合并被细胞吞噬。（4）高密度脂蛋白（HDL，1.063-1.210g / cm3）也产生于肝脏，可能是去除细胞膜上过多胆固醇的原因。当血浆中的卵磷脂：胆固醇酰基转移酶（LCAT）将卵磷脂中的脂肪酸残基转移至胆固醇以产生胆固醇脂质时，HDL会将这些胆固醇脂质转运至肝脏。肝脏将多余

的胆固醇转化为胆汁酸。（5）脂蛋白中的脂类和蛋白质之间没有共价键，但是它们中的大多数被脂类的非极性部分与蛋白质成分之间的疏水相互作用所束缚。一般认为，血浆脂蛋白在颗粒表面具有相似的结构，呈球形，并且是极性分子，例如蛋白质和磷脂，因此它们是亲水性的。非极性分子（如甘油三酸酯和胆固醇酯）隐藏在内部。磷脂的极性部分可以与蛋白质结合，而非极性部分可以与其他脂质结合，后者充当蛋白质和脂质之间的桥梁，并使不溶性脂质固定在脂蛋白中。磷脂和胆固醇在维持脂蛋白构型中都起着重要作用。因此，脂蛋白是一种以TG和CE为核心的复合物，载脂蛋白，磷脂和游离胆固醇单层覆盖在表面，从而确保了水不溶性脂质可以在血浆中正常运输。脂蛋白通常是球形的，TG是CM和VLDL的核心，而CE是LDL和HDL的核心。

血脂与血浆脂蛋白

第三节血脂与血浆脂蛋白一、血脂 ⒈定义：血浆中的脂质 ⒉组成：甘油三酯、磷脂、胆固醇及其酯以及游离脂酸。 ⒊来源 ⑴外源性——从食物中摄取 ⑵内源性——肝、脂肪细胞及其他组织合成后释放入血 ⒋组成与含量（表6－1 正常成人空腹血脂的组成及含量）* 血脂含量受膳食、年龄、性别、职业及代谢等的影响，波动范围很大。二、血浆脂蛋白的分类、组成及结构 ⒈定义：血脂与血浆中的蛋白质结合，以脂蛋白(LP)形式运输 ⒉组成：载脂蛋白、甘油三酯、磷脂与胆固醇及酯（一）载脂蛋白 ⒈定义：载脂蛋白(apo) 指血浆脂蛋白中的蛋白质部分。 ⒉种类（18种） apo A: AⅠ、AⅡ、AⅣ及AV apo B: B100、B48 apo C: CⅠ、CⅡ、CⅢ及CIV apo D apo E ⒊合成部位：由肝和小肠黏膜细胞合成的特异蛋白质

⒋功能 ①结合和转运脂质，稳定脂蛋白的结构 ②载脂蛋白可参与脂蛋白受体的识别： AⅠ识别HDL受体；B100，E 识别LDL受体 ③载脂蛋白可调节脂蛋白代谢关键酶活性： AⅠ激活LCAT (卵磷酯胆固醇脂转移酶) CⅡ激活LPL (脂蛋白脂肪酶) AⅣ辅助激活LPL CⅢ抑制LPL AⅡ激活HL (肝脂肪酶) （二）血浆脂蛋白的分类 ⒈电泳法 ⑴α－脂蛋白（α－LP） ⑵前β－脂蛋白（pre－β－LP） ⑶β－脂蛋白（β－LP） ⑷乳糜微粒（CM） ?

⒉超速离心法 ⑴乳糜微粒 ( CM) ⑵极低密度脂蛋白 (VLDL) ⑶低密度脂蛋白 (LDL) ⑷高密度脂蛋白(HDL) （三）血浆脂蛋白的性质、组成与功能（课本P71表6－2 血浆脂蛋白的性质、组成及功能）幻灯23：血浆脂蛋白的组成特点（四）血浆脂蛋白的结构 ⒈成球形，以小泡或微粒形式存在于血浆中 ⒉疏水性较强的TG及胆固醇酯位于内核 ⒊具极性及非极性基团的载脂蛋白、磷脂、游离胆固醇，以单分子层借其非极性疏水基团与内部疏水链相联系，极性基团朝外。（五）血浆脂蛋白的代谢 ⒈乳糜微粒（CM） ⑴来源小肠合成的TG和合成及apo B48 、AⅠ 吸收的磷脂、胆固醇＋AⅡ、AⅣ ⑵LPL（脂蛋白脂肪酶） ①存在于组织毛细血管内皮细胞表面 ②使CM中的TG、磷脂逐步水解，产生甘油、FA及溶血磷脂等。 ⑶CM的代谢：幻灯28 ⑷CM的生理功能：运输外源性TG及胆固醇酯。 ⒉极低密度脂蛋白（VLDL） ⑴来源 VLDL的合成以肝脏为主，小肠亦可合成少量。

血浆脂蛋白琼脂糖凝胶电泳

血浆脂蛋白琼脂糖凝胶电泳【目的】 1. 掌握血浆脂蛋白琼脂糖凝胶电泳的原理 2. 掌握电泳对血浆脂蛋白分类方法、类型 3. 了解血浆脂蛋白的性质、特点【原理】 1.琼脂糖（agarose）是经过挑选，以质地较纯的琼脂（agar）作为原料而制成的。琼脂在化学上是由琼脂糖和琼脂胶组成的复合物。琼脂胶是一含有硫酸根和羟基的多糖，它具有离子交换性质，这种性质会给电泳及凝胶过滤以不良的影响。琼脂糖是直链多糖，它由D-半乳糖和3，6-脱水-L-半乳糖的残基交替排列组成。琼脂糖主要通过氢键而形成凝胶。电泳时因凝胶含水量大（98%～99%），近似自由电泳，因为固体支持物的影响少，故电泳速度快，区带整齐。而且由于琼脂糖不含带电荷的基团，电渗影响少，是一种较好的电泳材料，分离效果好。血清中脂类物质是与血清载脂蛋白结合成水溶性的脂蛋白（lipoprotein）形式存在。各种脂蛋白中所含载脂蛋白的种类及数量不同，各种脂蛋白颗粒大小也相差很大，因此，以琼脂糖凝胶为支持物，在电场中可使各种脂蛋白颗粒分离开来。琼脂糖凝胶电泳分离血清蛋白方法简单。将血清脂蛋白用脂类染料苏丹黑（或油红等）进行预染。再将预染过的血清加样于琼脂糖凝胶板加样槽中，通电后可以看到脂蛋白向正极移动，并分离出几个区带。 2. 血清脂蛋白分类正常人血清脂蛋白可出现三条区带,从阴极到阳极依次为β-脂蛋白(最深)、前β-脂蛋白(最浅)、α-脂蛋白(比前β-脂蛋白略深些),在原点处应无乳糜微粒。有时前β-脂蛋白也显示不出来。按照电泳分类法从前往后依次为：（+）α-脂蛋白，前β-脂蛋白，β-脂蛋白和乳糜颗粒（-） 3.血清脂蛋白电泳的实质是对血清中的蛋白质进行琼脂糖电泳，并不仅仅是对脂蛋白进行的电泳，但由于苏丹黑染料只对染疏水性的脂类物质，脂蛋白中含有大量脂类，因此电泳的结果显示的只是脂蛋白染色带。脂蛋白在血清中含量及

脂蛋白代谢

教学要求掌握：脂蛋白的分类及其主要功能；脂蛋白受体、与脂蛋白代谢有关的酶类和特殊蛋白质；高脂蛋白血症的分型及血液生化特点；血脂检查前应注意的问题。熟悉：各种脂蛋白的组成与结构要点；异常脂蛋白血症的原因；血脂测定项目的合理选择。了解：载脂蛋白的种类与生理功能；脂蛋白紊乱与致动脉粥样硬化关系；血脂异常治疗目标值；血脂测定的标准化第一节血浆脂蛋白结构与受体１、乳糜微粒（chylomicron, CM）物理性质：电泳时处于点样原点化学组成：载脂蛋白1－2％： ApoB48、脂类 98－99％：TG 85－95％ CH 2-8％功能：运输外源性TG到全身各组织 2、极低密度脂蛋白 VLDL 化学组成：TG 50－70％功能：运输内源性TG的主要形式３、低密度脂蛋白（low density lipoprotein , LDL）脂类：CH 45-50% 功能：携带胆固醇由肝脏转运到全身血浆中。４、高密度脂蛋白（high density lipoprotein, HDL）化学组成：载脂蛋白45－55％ ?功能: 将肝外组织细胞表面的胆固醇摄入并酯化再转动到肝内的载体进行代谢。脂蛋白的功能 CM 主要功能是转运外源性TG及CH。 VLDL 主要功能是转运内源性TG。 LDL 主要功能是将肝合成的内源性CH转运至肝外组织。 HDL 主要功能是参与CH的逆向转运主要脂蛋白的分类和组成

脂蛋白(a)[Lp(a)] Lp(a) 是动脉粥样硬化的独立危险因素，且与血栓形成密切相关载脂蛋白(了解内容但是精品课程上有很多题！) 不同脂蛋白含不同的Apo：

血浆脂蛋白密度由低到高的顺序

血浆脂蛋白：血浆脂蛋白：指哺乳动物血浆（尤其是人）中的脂-蛋白质复合物。分类：血浆脂蛋白是根据密度来分类的：乳糜微粒(<0.95g/cm3)，密度非常低，运输甘油三酯和胆固醇酯，从小肠到组织肌肉和adipose组织。极低密度脂蛋白VLDL(0.95-1.006g/cm3)，在肝脏中生成，将脂类运输到组织中，当VLDL被运输到全身组织时，被分解为三酰甘油、脱辅基蛋白和磷脂，最后，VLDL被转变为低密度脂蛋白。低密度脂蛋白(LDL，1.006-1.063g/cm3)，把胆固醇运输到组织，经过一系列复杂的过程，LDL与LDL受体结合并被细胞吞食。高密度脂蛋白(HDL，1.063-1.210g/cm3)，也是在肝脏中生成，可能负责清除细胞膜上过量的胆固醇。当血浆中的卵磷脂：胆固醇酰基转移酶(Lecithin cholesterol acyltransferase, LCAT)将卵磷脂上的脂肪酸残基转移到胆固醇上生成胆固醇脂时，HDL将这些胆固醇脂运输到肝。肝脏将过量的胆固醇转化为胆汁酸。内部性质：脂蛋白中脂质与蛋白质之间没有共价键结合，多数是通过脂质的非极性部分与蛋白质组分之间以疏水性相互作用而结合在一起。一般认为血浆脂蛋白都具有类似的结构，呈球状，在颗粒表面是极性分子，如蛋白质，磷脂，故具有亲水性；非极性分子如甘油三酯、胆固醇酯

则藏于其内部。磷脂的极性部分可与蛋白质结合，非极性部分可与其它脂类结合，作为连接蛋白质和脂类的桥梁，使非水溶性的脂类固系在脂蛋白中。磷脂和胆固醇对维系脂蛋白的构型均具有重要作用。所以，脂蛋白是以TG及CE为内核，载脂蛋白、磷脂及游离胆固醇单分子层覆盖于表面的复合体，保证不溶于水的脂质能在水相的血浆中正常运输。脂蛋白一般呈球状，CM及VLDL主要以TG为内核，LDL及HDL则主要以CE为内核。 1.乳糜微粒cm颗粒最大，约为500nm大小，脂类含量高达98%，蛋白质含量少于2%，因此密度极低。cm分又为三种：新生cm、成熟cm与cm残粒，它们主要含有的脂类有不尽相同。cm由小肠粘膜细胞在吸收食物脂类（主要是甘油三酯）时合成，经乳糜导管，胸导管到血液。主要功能为运输外源性甘油三酯。 2.极低密度脂蛋白vldl中tg主要在肝脏利用脂肪酸和葡萄糖合成。若食物摄取过量糖或体内脂肪动用过多，均可导致血vldl增高。vldl中脂类占85%-90%，其中tg占55%，其密度也很低。vldl是运输内源性tg的主要形式。 3.低密度脂蛋白ldl的结构大致可分为三层：内层，占15%的蛋白质构成核心，被一圈磷脂分子包围；中层，非极性脂类居中，并插入内外层，与非极性部分结合；外层，85%的蛋白质构成框架，磷脂的非极性部分镶嵌在框架中，其极性部分与水溶性的蛋白质等亲水基团突入周围水相，使其脂蛋白稳定地分散于水溶液中；游离胆固醇分布于三层之中。

摘要建立人血浆低密度脂蛋白

血浆脂蛋白变化的生理意义

第四章血浆脂蛋白及其代谢紊乱

血浆脂蛋白的分类根据

4血浆脂蛋白及其代谢紊乱

第四章血浆脂蛋白及其代谢紊乱

血浆脂蛋白密度由低到高的顺序

血脂及脂蛋白的组成及代谢

血浆脂蛋白密度由低到高的顺序

血浆脂蛋白

血浆脂蛋白密度由低到高的顺序

血脂与血浆脂蛋白

血浆脂蛋白琼脂糖凝胶电泳

最新生物化学测试题及答案——血浆脂蛋白及其代谢紊乱

脂蛋白代谢

血浆脂蛋白密度由低到高的顺序