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生物选修一微生物的培养与应用

专题2 微生物的培养与应用

课题3 分解纤维素的微生物的分离

一、基础知识回顾

1、培养基概念：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。

2、培养基种类：液体培养基和固体培养基，二者的区别是是否添加凝固剂，其中实验室中常用的凝固剂是琼脂。

3、培养基营养成分：（1）主要营养物质：碳源、氮源、水和无机盐。（2）其他条件：pH、特殊营养和氧气。

4、微生物的培养和分离过程中的无菌技术：(1)目的：获得纯净的培养物。

(2)关键：防止外来杂菌的入侵。(3)常用方法：灭菌（培养皿—干热灭菌；培养基—高压蒸汽灭菌；接种环—灼烧灭菌）和消毒（操作者灭双手—化学消毒；操作室—紫外线消毒）。

5、高压蒸汽灭菌法：压力为100 kPa，温度为121℃，灭菌时间为15~30min.

6、巴氏灭菌法，亦称低温消毒法，是由法国微生物学家巴斯德发明的低温杀菌法，是一种利用较低的温度既可杀死病菌又能保持物品中营养物质风味不变的消毒法，常常被广义地用于定义需要杀死各种病原菌的热处理方法。

7、干热灭菌法是指在干燥环境（如火焰或干热空气）进行灭菌的技术。一般有火焰灭菌法和干热空气灭菌法。适用于干燥粉末、凡士林、油脂等。

8、倒平板：待培养基冷却至50℃左右时，在酒精灯火焰附近倒平板。

9、菌落：由单个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体。

10、平板划线法：通过接种环在琼脂固体培养基的表面连续划线操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基表面。

11、稀释涂布平板法：将菌液进行一系列的梯度稀释，稀释度足够高时，聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞。为了使微生物在培养基上能够均匀分布，一般用涂布法将微生物接种在培养基上。

12、微生物的接种方法还包括斜面接种、穿刺接种等，其核心是防止杂菌污染，保证培养物的纯度。

13、平板划线操作中灼烧接种环的目的：第一次划线前：杀死接种环上原有的微生物，防止外来杂菌污染培养基；第二次及以后每次划线前：杀死上次划线后接种环上残留的菌种，使下次划线的菌种直接来源于上次划线的末端。

最后一次划线后：杀死接种环上残存的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。

14、菌种的保藏方法：（1）临时保藏法：（适合于频繁使用的菌种）先接种到试管的固体斜面培养基上培养，然后放入 4 ℃的冰箱中。（2）甘油管藏法（适合于长期保藏的菌种）转入灭菌后的甘油中，混匀后放在-20 ℃冷冻箱中保存。

15、培养基中营养物质的确定方法：

①自养型微生物所需的主要营养物质是无机物，碳源可来自大气中的CO2，氮源可由含氮无机盐提供。

②异养型微生物所需的营养物质主要是有机物，即碳源必须由含碳有机物提供，氮源也主要由有机物提供，部分异养型微生物也可以利用无机氮源。

16、选择无菌技术的原则。①考虑无菌技术的效果：灭菌的效果比消毒要好。

②考虑操作对象的承受能力：活体生物材料、操作者的手等只能采用消毒，而不能灭菌。

17、纯化大肠杆菌的两种方法的异同。①相同点：平板划线法和稀释涂布平板法都能获得单细胞菌落。②不同点：平板划线法不能对微生物计数，而稀释涂布平板法能对微生物计数。

18、微生物的生长需要碳源、氮源等营养物质，培养基中的牛肉膏、蛋白胨为微生物的生长既提供了碳源，也提供了氮源。微生物培养通常采用的培养基是固体培养基，其中的琼脂，

在培养基中起凝固剂的作用。

19、判断培养基制作与接种操作是否合格的方法：

(1)从培养基制作是否合格上判断：如果未接种的培养基在恒温箱中保温1～2 d后无菌落生长，说明培养基的制备是成功的，否则需要重新制备。

(2)从接种操作是否符合无菌要求上判断：

①如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基本一致，并符合接种菌菌落的特点，说明接种操作是符合要求的。

②如果培养基上出现了其他菌落，则说明接种过程中，无菌操作未达到要求，需要分析原因，重新操作。

20、(1)培养基一般采用高压蒸汽灭菌法灭菌。在配制培养基时，需要先调节pH，后灭菌。

(2)菌落可以通过肉眼观察，而单个细菌无法通过肉眼观察，需要借助显微镜观察。

21、统计菌落数目：（1）间接计数法：(稀释涂布平板法)样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌，通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。公式：每克样品中的菌株数= (C÷V)×M。其中：C：某稀释度下平板上生长的平均菌落数；V：涂布平板时所用的稀释液的体积(mL)；M：稀释倍数。缺点：当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。误差比实际值偏小。

（2）直接计数法(显微计数法)：利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在

显微镜下计算一定容积的样品中微生物的数量。公式：每毫升原液所含细菌

数=每小格平均细菌数×400×10 000×稀释倍数。缺点：不能区分细胞死活

。误差比实际值偏大。

22、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数：（1）筛选菌株：①寻找目的菌株的方法：根据它对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找(生物和环境是相适应的）。②实验室中微生物的筛选：方法：人为提供有利于目的菌株生长的条件，同时抑制或阻止其他微生物生长。

23、筛选尿素分解菌时使用以尿素为唯一氮源的选择培养基进行培养。

24、选择培养基：在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。

25、土壤中分解尿素的细菌的分离：(1)土壤取样：富含有机质的土壤表层土（3--8cm)。(2)样品的稀释：通常选用一定稀释范围的样品液进行培养，以保证获得菌落数在30～300、适于计数的平板。(3)接种：用稀释涂布平板法接种。（4）培养：①细菌30~37℃培养1~2天；②放线菌25~28℃培养5~7天；③霉菌25~28℃培养3~4天。(5)观察：根据菌落的特征区分微生物。(6)计数：统计菌落的数目。(7)计算：根据公式计算单位体积中的菌体数。26、分解尿素的细菌的鉴别：(1)方法：在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂培养分解尿素的细菌。

(2)原理：分解尿素的细菌→脲酶→CO(NH2)2+H2O →CO2+2NH3加入酚红指示剂变红色。

(3)实验现象及结论：①培养基变红：该种细菌能分解尿素。②培养基不变红：该种细菌不能分解尿素

27、(1)只得到1个菌落数在30～300的平板：不符合实验的重复原则，易受到偶然因素的影响。(2)得到3个或3个以上菌落数在30～300的平板：也不一定正确，如得到3个平板，菌落数分别为230、34、240，虽然菌落数均在“30～300”，但由于34与另外两个平板上的菌落数差异较大，应找出原因并重新实验。

28、（1）分解尿素细菌的培养基中葡萄糖的主要作用是为细胞生命活动提供能量，为其他有机物的合成提供原材料。

（2）分解尿素细菌的培养基中KH2PO4和Na2HPO4的作用是为细菌生长提供无机营养，

作为缓冲剂保持细菌生长过程中pH稳定。

29、无氮源的培养基可以用于培养固氮微生物，该类微生物可以利用空气中的N2作为氮源。

30、无碳源的培养基可以用于培养自养型微生物，该类微生物可以利用空气中的CO2作为碳源。

生物选修1-专题2-微生物的培养与应用导学案(高三复习)

高三生物选修1 专题2 微生物的培养与应用导学案（一）微生物的实验室培养 1. 培养基（1）概念：人们按照微生物对＿＿＿＿＿＿的不同需求，配制出供其＿＿＿＿＿＿的营养基质叫培养基。按物理性质可分为＿＿＿＿培养基和＿＿＿＿培养基。（2）营养构成：各种培养基一般都含有＿＿＿＿、＿＿＿＿＿、＿＿＿和＿＿＿＿＿＿。从细胞的化学元素组成来看，培养基中都含有这些营养成分的原因是：＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿（3）在上述主要营养物质的基础上，还要满足微生物生长对＿＿＿、＿＿＿＿＿＿＿＿以及＿＿＿＿的要求，例如：培养乳酸杆菌时需在培养基中添加＿＿＿＿＿、培养霉菌时需将培养基PH调至＿＿＿＿、培养细菌时需将PH调至＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿、培养厌氧微生物则需提供＿＿＿＿＿条件。 2. 无菌技术（1）获得纯净培养物的关键是＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿，具体操作如下： ①对实验操作的＿＿＿＿＿、操作者的＿＿＿＿和＿＿＿进行＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿。 ②将用于微生物培养的＿＿＿＿＿、＿＿＿＿＿＿和＿＿＿＿＿＿等器具进行＿＿＿＿。 ③为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿附近进行。 ④实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿相接触。（2）消毒和灭菌 ①消毒是指＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿（不包括芽孢和孢子）。日常生活中常用的方法有＿＿＿＿＿＿＿＿；不耐高温的液体用＿＿＿＿＿＿；人们也常使用（如酒精、氯气、石炭酸、煤酚皂溶液等）消毒、＿＿＿＿消毒。 ②灭菌是指＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿（包括芽孢和孢子）。常用的方法有：＿＿＿＿＿＿、＿＿＿＿＿＿、＿＿＿＿＿＿＿＿。 ③无菌技术除了防止培养物被污染外，还能＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿。 ④利用干热灭菌箱对玻璃器皿灭菌时物品不能摆得太挤，避免＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿。 ⑤物品装入高压蒸汽灭菌锅灭菌后，要首先打开排气阀，煮沸并排除锅内冷空气，其目的是＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿；随后关闭排气阀继续加热，气压升至＿＿＿＿，温度为＿＿＿＿＿，并维持＿＿＿＿＿min；最后切断热源，使温度自然降温，气压务必降至＿＿＿时打开锅盖，其目的是防止＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿ 3.实验操作（1）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 ①基本操作步骤：＿＿＿→＿＿＿＿→＿＿＿＿→调pH→＿＿＿＿→＿＿＿＿＿＿＿。 ②相关问题：a.在制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的称量操作中，动作要迅速，原因是防止＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿ b.溶化操作中需要不断用玻璃棒搅拌的目的是＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿ c.牛肉膏和蛋白胨主要为微生物提供的营养物质有：＿＿＿、＿＿＿＿＿和＿＿＿＿＿。

人教版高中生物选修一专题二《微生物的培养与应用》知识点归纳

专题二微生物的培养与应用课题一微生物的实验室培养 ·培养基：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质，是进行微生物培养的物质基础。 ·培养基按照物理性质可分为液体培养基半固体培养基和固体培养基。在液体培养基中加入凝固剂琼脂（是从红藻中提取的一种多糖，在配制培养基中用作凝固剂）后，制成琼脂固体培养基。微生物在固体培养基表面生长，可以形成肉眼可见的菌落。根据菌落的特征可以判断是哪一种菌。液体培养基应用于工业或生活生产，固体培养基应用于微生物的分离和鉴定，半固体培养基则常用于观察微生物的运动及菌种保藏等。 ·按照成分培养基可分为人工合成培养基和天然培养基。合成培养基是用成分已知的化学物质配制而成，其中成分的种类比例明确，常用于微生物的分离鉴定。天然培养基是用化学成分不明的天然物质配制而成，常用于实际工业生产。 ·按照培养基的用途，可将培养基分为选择培养基和鉴定培养基。选择培养基是指在培养基中加入某种化学物质，以抑制不需要的微生物生长，促进所需要的微生物的生长。鉴别培养基是根据微生物的特点，在培养基中加入某种指示剂或化学药品配制而成的，用以鉴别不同类别的微生物。 ·培养基的化学成分包括水、无机盐、碳源、氮源、生长因子等。 ·碳源：能为微生物的代谢提供碳元素的物质。如CO2、NaHCO3等无机碳源；糖类、石油、花生粉饼等有机碳源。异养微生物只能利用有机碳源。单质碳不能作为碳源。 ·氮源：能为微生物的代谢提供氮元素的物质。如N2、NH3、NO3-、NH4+（无机氮源）蛋白质、氨基酸、尿素、牛肉膏、蛋白胨（有机氮源）等。只有固氮微生物才能利用N2。 ·培养基还要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。例如，培养乳酸杆菌时需要在培养基中添加维生素，培养霉菌时须将培养基的pH调至酸性，培养细菌是需要将pH调至中性或微碱性，培养厌氧型微生物是则需要提供无氧的条件 ·无菌技术·获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵，要注意以下几个方面： ①对实验操作的空间、操作者的衣着和手，进行清洁和消毒。 ②将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌。 ③为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行。 ④实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。

微生物培养方法

微生物的培养方法实验目的：学习掌握无菌操作技术；学习接种方法；学习常用的分离、纯化菌种的方法。一、接种将微生物接到适于它生长繁殖的人工培养基上或活的生物体内的过程叫做接种。１、接种工具和方法在实验室用得最多的接种工具是接种环、接种针。由于接种要求或方法的不同，接种针的针尖部常做成不同的形状，有刀形、耙形等之分。有时滴管、吸管也可作为接种工具进行液体接种。在固体培养基表面要将菌液均匀涂布时，需要用到涂布棒。（图1）图1 接种和分离工具 1．接种针 2.接种环 3.接种钩 4.5.玻璃涂棒 6.接种圈 7.接种锄 8.小解剖刀常用的接种方法有以下几种：１）划线接种这是最常用的接种方法。即在固体培养基表面作来回直线形的移动，就可达到接种的作用。常用的接种工具有接种环，接种针等。在斜面接种和平板划线中就常用此法。２）三点接种在研究霉菌形态时常用此法。此法即把少量的微生物接种在平板表面上，成等边三角形的三点，让它各自独立形成菌落后，来观察、研究它们的形态。除三点外，也有一点或多点进行接种的。３）穿刺接种在保藏厌氧菌种或研究微生物的动力时常采用此法。做穿刺接种时，用的接种工具是接种针。用的培养基一般是半固体培养基。它的做法是：用接种针蘸取少量的菌种，沿半固体培养基中心向管底作直线穿刺，如某细菌具有鞭毛而能运动，则在穿刺线周围能够生长。

４）浇混接种该法是将待接的微生物先放入培养皿中，然后再倒入冷却至45°C左右的固体培养基，迅速轻轻摇匀，这样菌液就达到稀释的目的。待平板凝固之后，置合适温度下培养，就可长出单个的微生物菌落。５）涂布接种与浇混接种略有不同，就是先倒好平板，让其凝固，然后再将菌液倒入平板上面，迅速用涂布棒在表面作来回左右的涂布，让菌液均匀分布，就可长出单个的微生物的菌落。６）液体接种从固体培养基中将菌洗下，倒入液体培养基中，或者从液体培养物中，用移液管将菌液接至液体培养基中，或从液体培养物中将菌液移至固体培养基中，都可称为液体接种。７）注射接种该法是用注射的方法将待接的微生物转接至活的生物体内，如人或其它动物中，常见的疫苗预防接种，就是用注射接种，接入人体，来预防某些疾病。８）活体接种活体接种是专门用于培养病毒或其它病原微生物的一种方法，因为病毒必须接种于活的生物体内才能生长繁殖。所用的活体可以是整个动物；也可以是某个离体活组织，例如猴肾等；也可以是发育的鸡胚。接种的方式是注射，也可以是拌料喂养。２、无菌操作培养基经高压灭菌后，用经过灭菌的工具（如接种针和吸管等）在无菌条件下接种含菌材料（如样品、菌苔或菌悬液等）于培养基上，这个过程叫做无菌接种操作。在实验室检验中的各种接种必须是无菌操作。实验台面不论是什么材料，一律要求光滑、水平。光滑是便于用消毒剂擦洗；水平是倒琼脂培养基时利于培养皿内平板的厚度保持一致。在实验台上方，空气流动应缓慢，杂菌应尽量减少，其周围杂菌也应越少越好。为此，必须清扫室内，关闭实验室的门窗，并用消毒剂进行空气消毒处理，尽可能地减少杂菌的数量。空气中的杂菌在气流小的情况下，随着灰尘落下，所以接种时，打开培养皿的时间应尽量短。用于接种的器具必须经干热或火焰等灭菌。接种环的火焰灭菌方法：通常接种环在火焰上充分烧红（接种柄，一边转动一边慢慢地来回通过火焰三次），冷却，先接触一下培养基，待接种环冷却到室温后，方可用它来挑取含菌材料或菌体，迅速地接种到新的培养基上。（图2）然后，将接种环从柄部至环端逐渐通过火焰灭菌，复原。不要直接烧环，以免残留在接种环上的菌体爆溅而污染空间。平板接种时，通常把平板的面倾斜，把培养皿的盖打开一小部分进行接种。在向培养皿内倒培养基或接种时，试管口或瓶壁外面不要接触底皿边，试管或瓶口应倾斜一下在火焰上通过。

高中生物选修一微生物的实验室培养教案

课题1 微生物的实验室培养【课标解读】 1、知道培养基的基础知识，进行无菌技术的操作 2、进行微生物的培养【教学重难点】无菌技术的操作【教学过程】（一）引入新课 2007年7月1日，由国家标准委和卫生部联合发布的《生活饮用水卫生标准》（GB 5749-2006）强制性国家标准和13项生活饮用水卫生检验国家标准正式实施。新标准中的饮用水水质指标由原标准的35项增至106项，增加了71项。其中，微生物指标由2项增至6项，其中大肠杆菌要求每公升水中不得超过3个。你用什么办法将他们找到并准确计数？在传统发酵技术的应用中，都利用了微生物的发酵作用，其中的微生物来自于制作过程中的自然感染。而在工业化生产中，为了提高发酵的质量，需要获得优良菌种，并保持发酵菌种的纯度。这就要涉及到微生物的培养、分离、鉴别等基本技术。现在我们开始学习微生物的培养和应用专题。（二）进行新课一、基础知识 1、培养基（阅读教材） 1.1概念（略） 1.2培养基的种类 (1)形态——固体和液体培养基（琼脂） (2)成分——天然和合成培养基 (3)作用——选择和鉴别培养基思考：1、固体培养基和液体培养基你认为哪个更适合工业生产？为什么？ 2、如何区分S型细菌和R型细菌？ 3、什么是菌落？【补充】培养基的类型及其应用：（创新设计）思考：1、硝化细菌、蓝藻与酵母菌的C源和N源有不同吗？能源呢？ 2、结合细胞元素组成说明大多数培养基的组成为何有4类？一定都需要吗？ 1.4培养条件——营养物质（特殊营养物质—生长因子）、PH、氧气

思考：1、微生物的营养物质就是4类吗? 牛肉膏和蛋白胨能为微生物提供哪些营养？ 2、特殊营养物质是什么？试举一例。(介绍生长因子) 3、你能将土壤中酵母菌、硝化细菌、乳酸菌、固氮菌分离出来吗？说一说最佳方案。 4、分离菌种是否一定要选择培养基？培养乳酸杆菌时需要添加维生素，培养霉菌时需要将培养基pH调节为酸性，培养细菌时需要将pH调节为中性或微碱性。 2、无菌技术（阅读并思考回答下列问题） 2.1意义、对象 2.2消毒与灭菌的区别 2.3消毒与灭菌的方法、适用对象思考：1、什么是巴氏消毒法？灼烧灭菌和高压蒸汽灭菌特别注意什么？ 2、以下各项分别适用哪项无菌技术？简单说明理由试管口；培养基；接种操作间；葡萄酒；培养皿；接种针（环）；口罩；手；空气；饮用水 3、无菌技术除了防止培养物被污染外，还具有什么目的？二．实验操作（录像） 1、制备牛肉膏蛋白胨固体培养基程序：计算—称量—溶化—调pH—灭菌—倒平板思考：1、为何将牛肉膏连同称量纸一起放入烧杯溶化？ 2、制备过程中要调节适宜的PH值，要在哪一个环节操作？为什么？ 3、请阅读倒平板操作（P17）并回答讨论1—4 4、试管培养基常制成斜面的作用是什么？ 2、接种（4种方法） 2．1平板划线法：通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基表面。其操作步骤是： 2.1.1目的 2.1.2平板划线操作（略）思考：请回答P18讨论1—3 2．2稀释涂布平板法：将菌液进行一系列梯度稀释，并将不同稀释度菌液分别涂布到琼脂固体培养基上进行培养。当稀释倍数足够高时，即可获得单个细菌形成的标准菌落。 2.2.1目的 2.2.2系列稀释操作： ①取盛有9mL水的无菌试管6支，编号101、102、103、104、105、106。

高中生物选修一专题2微生物的培养与应用经典练习

高中生物选修一专题2微生物的培养与应用经典练习 1、（2014新课标2,39,15分）为了调查某河流的水质状况，某研究小组测定了该河流水样中的细菌含量，并进行了细菌分离等工作。回答下列问题：（1）该小组采用稀释涂布平板法检测水样中的细菌含量。在涂布接种前，随机取若干灭菌后的空白平板先行培养了一段时间，这样做的目的是；然后，将水样稀释100倍，在3个平板上用涂布法分别接入稀释液；经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为39、38和37。据此可得出每升水样中的活菌数为。（2）该小组采用平板划线法分离水样中的细菌。操作时，接种环通过灭菌，在第二次及以后的划线时，总是从上一次划线的末端开始划线。这样做的目的是。（3）示意图A和B中，表示的是用稀释涂布平板法接种培养后得到的结果。（4）该小组将得到的菌株接种到液体培养基中并混匀，一部分进行静置培养，另一部分进行振荡培养。结果发现：振荡培养的细菌比

静置培养的细菌生长速度快。分析其原因是：振荡培养能提高培养液中的含量，同时可使菌体与培养液充分接触，提高的利用率。【答案】 (1)检测培养基平板灭菌是否合格 (2)灼烧将聚集的菌体逐步稀释以便获得单个菌落 (3)B (4)溶解氧营养物质 2、（2014理综，10,11分）有机农药苯磺隆是一种除草剂，长期使用会污染环境。研究发现，苯磺隆能被土壤中某些微生物降解。分离降解苯磺隆的菌株和探索其降解机制的实验过程如图甲、乙所示。 ⑴微生物生长繁殖所需的主要营养物质有碳源、水、______________四类，该实验所用的选择培养基只能以苯磺隆作为唯一碳源，其原因是________________________________________。 ⑵与微生物培养基相比，植物组织培养的培养基常需添加生长素和________________，这些植物激素一般需要事先单独配制成___________保存备用。 ⑶纯化菌株时，通常使用的划线工具是____________。划线的某个平板培养后，第一划线区域的划线上都不间断地长满了菌，第二划线区域所划的第一条线上无菌落，其它划线上有菌落。造成划线无菌落可能的操作失误有_________________________________________。

高中生物选修一微生物的实验室培养教案(2)

普通高中课程标准实验教科书——生物选修1[ 人教版] 课题 1 微生物的实验室培养 ★课题目标（一）知识与技能了解有关培养基的基础知识；掌握培养基的制备、高压蒸汽灭菌和平板划线法等基本操作技术（二）过程与方法分析实验思路的确定和形成的原因，分析实验流程，对比前面的实验设计，归纳共性，分析差异，增加印象（三）情感、态度与价值观形成勇于实践、严谨求实的科学态度和科学精神 ★课题重点无菌技术的操作 ★课题难点无菌技术的操作 ★教学方法启发式教学 ★教学工具多媒体课件 ★教学过程（一）引入新课在传统发酵技术的应用中，都利用了微生物的发酵作用，其中的微生物来自于制作过程中的自然感染。而在工业化生产中，为了提高发酵的质量，需要获得优良菌种，并保持发酵菌种的纯度。这就要涉及到微生物的培养、分离、鉴别等基本技术。现在我们开始学习微生物的培养和应用专题。（二）进行新课 1.基础知识 1.1培养基的种类包括固体培养基和液体培养基等。〖思考1〗琼脂是从红藻中提取的多糖，在配制培养基中用作为凝固剂

【补充】培养基的类型及其应用： 1.2培养基的化学成分包括水、无机盐、碳源、氮源四类营养成分。〖思考2〗从细胞的化学元素组成来看，培养基中为什么都含有这些营养成分？ C、H、0、N、P、S是构成细胞原生质的基本元素，约占原生质总量的97%以上。【补充】碳源：如C02、糖类、脂肪酸等有机物，构成微生物的结构物质和分泌物，并提供能量。氮源：如N2、氨盐、硝酸盐、牛肉膏、蛋白胨等，主要用来合成蛋白质、核酸及含氮代谢物等。含有C、H、0、N 的化合物既可以作为碳源，又可以作为氮源，如氨基酸等。 1.3培养基除满足微生物生长的_p^、特殊营养物质和氧气等要求。【补充】生长因子：某些微生物正常生长代谢过程中必须从培养基中吸收的微量有机小分子，如某些氨基酸、碱基、维生素等。〖思考3〗牛肉膏和蛋白胨主要为微生物提供糖、维生素和有机氮等营养物质。〖思考4〗培养乳酸杆菌时需要添加维生素,培养霉菌时需要将培养基pH调节为酸性，培养细菌时需要将pH调节为中性或微碱性。活动2:阅读"无菌技术”，讨论回答下列问题： 1.4获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵—。 1.5无菌技术包括： (1)对实验操作空间、操作者的衣着和手进行清洁和消毒;

微生物学习题及答案第二章

填空题 1.动植物的研究能以体为单位进行，而对微生物的研究一般用体 2.在微生物学中，在人为规定的条件下培养、繁殖得到的微生物群体称为培养物、其中只有培养物能较好地被研究、利用和重复结果。 3.一般情况下，培养微生物的器具，在使用前必须先行，使容器中不含。 4.用培养平板进行微生物纯培养分离的方法包括、和。 5、微生物在特定培养基上生长形成的菌落或菌苔一般都具有稳定的特征，可以成为对该微生物进行、的重要依据。 6、微生物保藏的目标就是要使所保藏菌株在一段时间不、不和不 7、一般说来，采用冷冻法时，保藏温度越，保藏效果越。 8、、和是影响显微镜观察效果的3个重要因索。 9.光学显微镜能达到的最大有效放大倍数是，这时一般使用 x的目镜，和 x的物镜，并应在物镜镜头和玻片之间加。 10、采用明视野显微镜观察未经染色的标本(如活的细胞)时，光的和都没有明显的变化，因此，其形态和内部结构往往难以分辨。 11.在的照射下，发荧光的物体会在黑暗的背景下表现为光亮的有色物体，这就是荧光显微技术的原理。 12.透射电子显微镜用电子作为，因此其分辨率较光学显微镜有很大提高，但镜筒必须是环境，形成的影像也只能通过或进行观察、记录。 13.在显微镜下不同细菌的形态可以说是千差万别，丰富多彩，但就单个有机体而言，其基本形态可分为、与 3种。 14.霉菌菌体均由分支或不分支的菌丝构成。许多菌丝交织在一起，称为。在固体培养基上，部分菌丝伸入培养基内吸收养料，称为；另一部分则向空中生长，称为。有的气生菌丝发育到一定阶段，分化成。 15. 是一类缺少真正细胞壁，细胞通常无色，具有运动能力，并进行吞噬营养的单细胞真核生物。它们个体微小，大多数都需要显微镜才能看见。选择题（4个答案选1) 1.培养微生物的常用器具中，（）是专为培养微生物设计的。 (1)平皿(2)试管(3)烧瓶(4)烧杯 2.( )可用来分离培养出由科学家设计的特定环境中能生长的微生物，尽管我们并不知道什么微生物能在这种特定的环境中生长。 (1)选择平板(2)富集培养(3)稀释涂布(4)单细胞显微分离 3.下面哪一项不属于稀释倒平板法的缺点?( ) (1)菌落有时分布不够均匀 (2)热敏感菌易被烫死 (3)严格好氧菌因被固定在培养基中生长受到影响 (4)环境温度低时不易操作 4.下面哪一种方法一般不被用作传代保藏?( ） (1)琼脂斜面(2)半固体琼脂柱(3)培养平板(4)摇瓶发酵 5.冷冻真空干燥法可以长期保藏微生物的原因是微生物处于( )的环境，代谢水平大大降低。 (1)干燥、缺氧、寡营养(2)低温、干燥、缺氧 (3)低温、缺氧、寡营养(4)低温、干燥、寡营养 6.对光学显微镜观察效果影响最大的是( )。

高中生物选修一专题二：课题微生物的实验室培养学案

选修一：专题二：课题1微生物的实验室培养学案【课程目标】:了解培养基的基础知识，进行微生物培养和无菌技术的操作。【课题重点】:无菌技术的操作【课题难点】：无菌技术的操作基础知识一、培养基 1．概念：人们按照微生物对的不同需求，配制出供其的营养基质叫培养基。可分为培养基和培养基。 2．营养构成：各种培养基一般都含有、、和，此外还要满足微生物生长对、以及的要求。 3．培养乳酸杆菌时需在培养基中添加、培养霉菌时需将培养基PH调至、培养细菌时需将PH调至、培养厌氧微生物则需提供条件。〖思考1〗从细胞的化学元素组成来看，培养基中为什么都含有这些营养成分？【补充1】碳源：如CO2、糖类、脂肪酸等有机物，构成微生物的结构物质和分泌物，并提供能量。氮源：如N2、氨盐、硝酸盐、牛肉膏、蛋白胨等，主要用来合成蛋白质、核酸及含氮代谢物等。含有C、H、O、N的化合物既可以作为碳源，又可以作为氮源，如氨基酸等。二、无菌技术：阅读“无菌技术”，讨论回答下列问题： (一)获得纯净培养物的关键是，具体操作如下： 1．对实验操作的、操作者的和进行。 2．将用于微生物培养的、和等器具进行。 3．为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在附近进行。 4．实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与相接触。 (二)消毒和灭菌 1．消毒是指。常用的方法有、、消毒法。 2．灭菌是指。常用的方法有：、、灭菌。分别适用于那些用具？〖思考2〗无菌技术除了防止培养物被污染外，还具有的目的是什么？〖思考3〗利用干热灭菌箱对玻璃器皿灭菌时物品不能摆得太挤，目的是什么？

〖思考4〗物品装入高压蒸汽灭菌锅灭菌后，要首先打开排气阀，煮沸并排除锅内冷空气，其目的是；随后关闭排气阀继续加热，气压升至，温度为，并维持 min；最后切断热源，使温度自然降温，气压务必降至时打开锅盖，其目的是防止。实验操作----大肠杆菌的纯化培养：本实验所用的培养基是，本实验可分成和两个阶段进行。一制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 1制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的操作步骤是、、、、。〖思考5〗在制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的称量操作中，动作要迅速，原因是什么？溶化操作中需要不断用玻璃棒搅拌的目的是什么？〖思考6〗牛肉膏和蛋白胨主要为微生物提供什么等营养物质？ 2．倒平板：待培养基冷却至℃左右时在酒精灯火焰附近操作进行。其过程是： ①在火焰旁右手拿，左手； ②使锥形瓶的瓶口； ③左手将培养皿，右手，立刻盖上皿盖。 ④待平板冷却凝固后，将平板。〖思考7〗锥形瓶的瓶口通过火焰的目的是什么？〖思考8〗倒平板的目的是什么？〖思考9〗若皿盖和皿底之间粘有培养基，则该平板能否培养微生物？为什么？〖思考10〗配制斜面培养基作用是什么？，试管为什么要加塞棉塞？二、纯化大肠杆菌微生物接种：最常用的是法和法。另外还有穿刺接种和斜面接种等。 1．平板划线法是的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。其操作步骤是：①将在酒精灯火焰上灼烧直至。②在酒精灯火焰旁冷却接种环，并打开大肠杆菌的菌种试管的棉塞。③将菌种试管口通过火焰达到的目的。④将冷却的接种环伸入到。⑤将菌种试管口再次通过火焰后塞上棉塞。⑥将皿盖打开一条缝隙，把接种环，盖上皿盖，不要划破培养基。⑦灼烧接种环，冷却后从划线。重复上述过程，完成三、四、五区域内划线。注意不要将相连。

选修一微生物的培养高考练习题综合

选修一大题 1、（山东卷，理综，34）科学家发现家蝇体内存在一种抗菌活性蛋白，这种蛋白质具有极强的抗菌能力，受到研究者重视。 ⑴分离该抗菌蛋白可用电泳法，其原理是根据蛋白质分子的、大小及形状不同，在电场中的不同而实现分离。 ⑵可用金黄色葡萄球菌来检验该蛋白的抗菌特性。抗菌实验中所用培养基中的牛肉膏和蛋白胨主要为细菌生长提供和。 ⑶分别在加入和未加入该抗菌蛋白的培养基中接种等量菌液。培养一定时间后，比较两种培养基中菌落的，确定该蛋白质的抗菌效果。 ⑷细菌培养常用的接种方法有和。实验结束后，对使用过的培养基应进行处理。 2、（上海卷，理综，39））氯苯化合物是重要的有机化工原料，原因不易降解，会污染环境。某研究小组依照下列实验方案（图1）筛选出能高效降解氯苯的微生物SP1菌，培养基配方如表1。（1）配制Ⅱ号固体培养基时，除添加Ⅱ号液体培养基成分外，还应添加1%的____________。（2）培养基配制时，灭菌与调PH的先后顺序是____________。（3）从用途上来说，Ⅰ号培养基和Ⅱ号培养基分别属于____________培养基和____________培养基。在Ⅱ号培养基中，为SP1菌提供氮源的成分是____________。（4）在营养缺乏或环境恶劣时，SP1的菌体会变成一个圆形的休眠体，这种休眠体被称为 ____________。（5）将SP1菌接种在含不同浓度氯苯的Ⅲ号培养液中培养，得到生长曲线（如图2）。从图2可知SP1菌在____________培养条件下最早停止生长，其原因是____________。 3、有些微生物能合成纤维素酶，通过对这些微生物的研究和作用，使人们能够利用秸秆等废弃物生产酒精，用纤维素酶处理服装面料等。研究人员用化合物A、硝酸盐、磷酸盐以及微量元素配制的培养基，成功的筛选到能产生纤维素酶的微生物。分析回答问题。 (1)培养基中加入的化合物A是____________，为微生物的生长提供_____________，这种培养基属于____________培养基。 (2)为了筛选出能产生纤维素酶的微生物，向培养基中加入_____________________。 (3)在筛选出能产生纤维素酶的微生物之前，可用液体培养基培养，增加微生物的浓度。为获得纯净的菌株，常采用平板划线的方法进行接种，此过程所用的接种工具是_________________，操作时采用________灭菌的方法；还可用________的方法接种。 (4)实验结束后，使用过的培养基应该进行灭菌处理后才能倒掉，这样做的目的是______________ 4、下面是果酒和果醋制作的实验流程和某同学设计的果酒和果醋的发酵装置。根据图示回答下列问题：（1）完成图1中的实验流程。（2）冲洗的主要目的是，冲洗应特别注意不能，以防止菌种的流失。（3）图2装置中的冲气口在过程中要关闭，某同学在实验时为了密闭装置特意将瓶塞使劲塞紧，并将充气口和排气口用夹子夹紧，以便于发酵，但第二天去观察时发现瓶塞松了，他不明白其中的原因，请帮助解释说明其原因。（4）排气口在果酒发酵时排出的气体来源是。（5）若在果汁中含有醋酸菌，在果酒发酵旺盛时，醋酸菌能否将果汁中的糖发酵为醋酸？说明理由。。 5、下图是泡菜的制作及测定亚硝酸盐含量的实验流程示意图，请据图回答：（1）制作泡菜宜选用新鲜的蔬菜或其他原料，原因是。（2）制备泡菜的盐水中清水与盐的质量比约为，盐水需煮沸并冷却后才可使用，原因是。试说明盐水在泡菜制作中的作用：。（3）泡菜风味形成的关键在于的加入。（4）泡菜的制作方法不当，很容易造成泡菜变质，甚至发霉变味，试分析可能的原因：。（5）发酵过程中应定期测定亚硝酸盐的含量，原因是。 6、（10分）某同学在做微生物实验时，不小心把圆褐固氮菌和酵菌混在一起。该同学设计下面的实验，分离得纯度较高的圆褐固氮菌和酵母菌。 (1)实验原理：圆褐固氮菌是自生固氮菌，能在无氮培养条件下生长繁殖而酵母菌则不能；青霉出料口充气口排气口选挑葡萄冲洗榨汁酒精发酵果酒果醋图1 果酒、果醋制作流程图2

生物选修一微生物培养

1．(2014·全国课标Ⅰ，39)植物秸秆中的纤维素可被某些微生物分解。回答下列问题。 (1)分解秸秆中纤维素的微生物能分泌纤维素酶，该酶是由3种组分组成的复合酶，其中的葡萄糖苷酶可将________分解成________。 (2)在含纤维素的培养基中加入刚果红(CR)时，CR 可与纤维素形成________色复合物。用含有CR 的该种培养基培养纤维素分解菌时，培养基上会出现以该菌的菌落为中心的________。 (3)为从富含纤维素的土壤中分离获得纤维素分解菌的单菌落，某同学设计了甲、乙两种培据表判断，培养基甲________(填“能”或“不能”)用于分离和鉴别纤维素分解菌，原因是____________________；培养基乙________(填“能”或“不能”)用于分离和鉴别纤维素分解菌，原因是________________。 2.(2014·课标Ⅱ，39)为了调查某河流的水质状况，某研究小组测定了该河流水样中的细菌含量，并进行了细菌分离等工作。回答下列问题： (1)该小组采用稀释涂布平板法检测水样中细菌含量。在涂布接种前，随机取若干灭菌后的空白平板先行培养了一段时间，这样做的目的是_________________；然后，将1 mL 水样稀释100倍，在3个平板上用涂布法分别接入0.1 mL 稀释液；经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为39、38和37。据此可得出每升水样中的活菌数为________________。 (2)该小组采用平板划线法分离水样中的细菌，操作时，接种环通过________灭菌。在第二次及以后的划线时，总是从上一次划线的末端开始划线。这样做的目的是__________。 (3)示意图A 和B 中，________表示的是用稀释涂布平板法接种培养后得到的结果。 (4)该小组将得到的菌株接种到液体培养基中并混匀，一部分进行静置培养，另一部分进行振荡培养。结果发现：振荡培养的细菌比静置培养的细菌生长速度快。分析其原因是：振荡培养能提高培养液中________的含量，同时可使菌体与培养液充分接触，提高________的利用率。题组二其他各省市高考选萃 3．(2014·天津理综，5)MRSA 菌是一种引起皮肤感染的“超级细菌”，对青霉素等多种抗生素有抗性。为研究人母乳中新发现的蛋白质H 与青霉素组合使用对MRSA 菌生长的影响，某兴趣小组的实验设计及结果如下表。下列说法正确的是 ( ) A.B ．第2组和第3组对比表明，使用低浓度的青霉素即可杀死MRSA 菌 C ．实验还需设计用2μg/mL 青霉素做处理的对照组 D ．蛋白质H 有很强的杀菌作用，是一种新型抗生素 4．(2013·四川卷，10)由于酵母菌直接利用淀粉的能力很弱，有人将地衣芽孢杆菌的α-淀粉酶基因转入酵母菌中经筛选得到了可高效利用淀粉的工程酵母菌菌种(过程如图甲所示)。 (1)图甲中，过程①需要的酶有________。为达到筛选目的，平板内的固体培养基应以________作为唯一碳源。②、③过程需重复几次，目的是___________。 (2)某同学尝试过程③的操作，其中一个平板经培养后的菌落分布如图乙所示。该同学的接种方法是________；推测该同学接种时可能的操作失误是________。 (3)以淀粉为原料，用工程酵母菌和普通酵母菌在相同的适宜条件下密闭发酵，接种________菌的发酵罐需要先排气，其原因是___________________。 (4)用凝胶色谱法分离α-淀粉酶时，在色谱柱中移动速度较慢的蛋白质，相对分子质量较________。考点一微生物的实验室培养 2．为了从泡菜汁中筛选分离出发酵产酸速度快、亚硝酸盐降解能力强的乳酸菌，科研人员做了如下实验。请回答问题： (1)在无菌操作下，使用无菌水对泡菜汁进行________，将不同稀释度的泡菜汁涂布于添加了CaCO3的乳酸菌培养基(MRS 培养基)平板上。在适宜条件下培养后，挑取有________的菌落，继续在MRS 平板上用________法分离，得到单菌落。 (2)取分离到的乳酸菌分别接种到MRS 液体培养基中，间隔取样测定pH ，目的是筛选出________的乳酸菌。 (3)取上一步筛选出的乳酸菌接种到含有NaNO2的MRS 培养基中，培养一段时间后，用________法测定NaNO2的含量，筛选出________的菌株。 1．(2014·苏、锡、常、镇调研，32)微生物的分离和培养是现代生物工程应用中的重要环节。下图甲、乙是大肠杆菌分离和培养过程中部分操作和实验结果示意图，请据图回答有关问

高二生物选修一专题一二测试卷(含答案)

高二生物选修一专题一二测试卷学校:___________姓名：___________班级：___________考号：___________ 一、选择题（35x2=70） 1．关于果酒的制作过程，下列叙述中正确的是 A．先去烂子粒和枝梗，再用清水冲洗掉污物 B．发酵的温度维持在18～25 ℃最好 C．发酵过程中需要适时打开瓶盖放气，以防止发酵瓶破裂 D．需要不断地充入氧气 2．下列关于果酒和果醋制作的叙述，正确的是 A．在制作果酒和果醋实验中，一直保持厌氧环境 B．当氧气、糖源充足时，醋酸菌能将果汁中的糖发酵为醋酸 C．由于酵母菌的繁殖能力很强，不需对所用装置进行消毒 D．温度对酵母菌酒精发酵的影响很大，而对醋酸菌的发酵影响不大 3．对制葡萄酒和葡萄醋发酵条件的控制中，错误的是 A．葡萄汁装入发酵瓶时，要留有的空间 B．用清水冲洗葡萄除去污物，应反复多次冲洗 C．制葡萄酒的过程中，除在适宜的条件下，时间应控制在10～12d D．制葡萄醋的温度要比葡萄酒的温度高些，但时间一般控制在7～8d左右 4．下列关于果酒和果醋的制作原理、发酵过程的叙述中，错误的是 A．果酒和果醋的发酵菌种不同，但代谢类型相同 B．制作果酒和果醋时都应用体积分数为70%的酒精对发酵瓶消毒 C．变酸果酒的表面观察到的菌膜可能是醋酸菌的菌落 D．果酒和果醋的制作可用同一装置，但需控制不同发酵条件 5．下列叙述错误的是 A．酵母菌在无氧条件下利用葡萄汁产生酒精 B．醋酸菌在无氧条件下利用乙醇产生醋酸 C．泡菜腌制利用了乳酸菌的乳酸发酵 D．腐乳制作利用了毛霉等微生物的蛋白酶和脂肪 6．与醋酸发酵有关的微生物是 A．一种细菌和另一种细菌 B．丝状真菌和细菌 C．酵母和细菌 D．酵母和丝状真菌 7．下列对腐乳实验操作过程的叙述，错误的是 A．前期发酵，将笼屉中的温度控制在15～18 ℃ B．豆腐块分层摆放，逐层加盐，层数加高盐量不变 C．卤汤中的酒量应控制在12%左右 D．腌制腐乳的玻璃瓶冲洗后要用沸水消毒，装瓶后密封，瓶口通过酒精灯火焰8．某同学在制作腐乳的过程中，发现豆腐腐败变质，下列不属于其原因的是A．用盐腌制时，加盐量太少 B．用来腌制腐乳的玻璃瓶，没有用沸水消毒 C．制作卤汤时，料酒加的量较多 D．装瓶后，没有将瓶口密封 9．下列关于腐乳制作的叙述，错误的是 A．毛霉可利用其体内的酶将豆腐中的蛋白质分解成小分子肽和氨基酸

选修一微生物的培养和利用

选修一微生物的培养和利用（一）微生物实验基础知识微生物所需要的营养物质营养成分主要种类作用碳源CO 2、NaHCO 3 糖类、脂肪酸等①构成微生物的细胞物质和一些代谢产物②异养微生物的主要能源物质氮源N 2、NH 3 、铵盐、硝酸盐尿素、牛肉膏和蛋白胨构成微生物的细胞物质和一些代谢产物生长因子维生素、氨基酸、嘌呤碱和嘧啶碱等补充微生物生物必需的微量有机物其他水无机盐培养基的种类及用途划分依据种类用途物理性质固体培养基微生物的分类和鉴定半固体培养基观察微生物的运动、保存菌种液体培养基工业生产化学成分天然培养基工业生产合成培养基微生物的分类和鉴定用途选择培养基分离菌种鉴别培养基鉴别不同种类的微生物（如饮用水中大肠杆菌的鉴定）实验室条件下的无菌技术方法应用范围灭菌高压蒸气灭菌培养基、培养皿、移液管等高温灼烧接种环、玻璃刮刀等接种器具紫外或熏蒸灭菌接种室、接种箱、超净工作台过滤法消

毒酒精、次氯酸钠等化学试剂实验材料（如外植体）、工作台和器具、培养空间高温煮沸某些实验的器具获得微生物纯种的方法之一—平板划线法 1）用接种环蘸菌液后在含有固体培养基的培养皿平板上划线，则在划线的过程中菌液逐渐减少，菌体数量也逐渐减少，菌间的距离增大。在培养10-20小时后，划线末处可观察到由一个菌产生的单菌落；如果再挑取它们后，接种至含有固体培养基的试管斜面上，在斜面上划线，则每个斜面的菌群就是由一个菌产生的后代（或纯种）。 2）利用选择培养基进行分离 3）液体稀释涂布法微生物相关实验大肠杆菌的培养和分离【实验原理】【材料用具】略【实验步骤】注意：使用过的培养基及其培养物必须经过灭菌处理后才能丢弃。【思考题】 ⑴ 本实验所涉及的器材及操作需要无菌。培养基的灭菌方法是___________________,接种环的灭菌方

微生物的培养

目录实验二土壤中微生物分离纯化培养实验三菌种保藏实验四细菌形态观察及单染色实验五放线菌及霉菌形态观察实验六革兰氏染色及芽孢染色实验七酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴定实验八微生物直接计数法及测微技术实验九大肠杆菌生长曲线的测定实验十水中细菌总数的测定实验十一细菌细胞的生化反应实验实验一常用培养基的制备、灭菌与消毒一、实验目的了解培养基的配制原理；掌握配制培养基的一般方法和步骤；了解常见灭菌、清毒基本原理及方法；掌握干热天菌、高压蒸汽灭菌及过滤除菌的操作方法。二、实验原理合物。培养基的原材料可分为碳源、氮源、无机盐、生长因素和水。根据微生物的种类和实验目的不同，培养基也有不同的种类和配制方法。生长繁殖之用。

三、试剂与器材微孔滤膜过滤器、镊子等。四、实验内容 2.干热灭菌：装入待灭菌物品→升温→恒温→降温→开箱取物 3.高压蒸汽灭菌：加水→装物品→加盖→加热→排冷空气→加压→恒压→降压回零→排汽→取物→无菌检查 4.过滤除菌：组装灭菌→连接→压滤→无菌检查→清洗灭菌五、关键步骤及注意事项 1.要严格按配方配制。 2.调pH不要过头。 3.干热灭菌要注意物品不要堆放过紧，注意温度的时间控制，70oC以下放物、取物。 4.高压灭菌要注意物品不要过多，加热后排除冷空气，到时降压回零取物。 5.过滤除菌要注意各部件灭菌，压滤时，压力要适当，不可太猛太快，滤膜要注意清洗保存。实验二土壤中微生物分离纯化培养一、实验目的掌握微生物培养方法。二、实验原理从混杂的微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物的分离与纯化。释涂布平板法步骤：倒平板－制备土壤污水稀释液－涂布－培养－挑菌落；平板划线法步骤：倒平板－标记培养基名称－划线。三、试剂与器材

生物：专题2《微生物的培养与应用》教案(1)(新人教版选修1)

课题：微生物的培养与应用教学目标：（一）知识与技能了解有关培养基的基础知识；掌握培养基的制备、高压蒸汽灭菌和平板划线法等基本操作技术（二）过程与方法分析实验思路的确定和形成的原因，分析实验流程，对比前面的实验设计，归纳共性，分析差异，增加印象（三）情感、态度与价值观形成勇于实践、严谨求实的科学态度和科学精神教学重点：无菌技术的操作教学难点：无菌技术的操作教学过程：（一）引入新课在传统发酵技术的应用中，都利用了微生物的发酵作用，其中的微生物来自于制作过程中的自然感染。而在工业化生产中，为了提高发酵的质量，需要获得优良菌种，并保持发酵菌种的纯度。这就要涉及到微生物的培养、分离、鉴别等基本技术。现在我们开始学习微生物的培养和应用专题。（二）进行新课 1．基础知识 1．1 培养基的种类包括固体培养基和液体培养基等。〖思考1〗琼脂是从红藻中提取的多糖，在配制培养基中用作为凝固剂。【补充】培养基的类型及其应用： 1．2 培养基的化学成分包括水、无机盐、碳源、氮源四类营养成分。〖思考2〗从细胞的化学元素组成来看，培养基中为什么都含有这些营养成分？ C 、H 、O 、N 、P 、S 是构成细胞原生质的基本元素，约占原生质总量的97％以上。【补充】碳源：如CO2、糖类、脂肪酸等有机物，构成微生物的结构物质和分泌物，并提供能量。氮源：如N2、氨盐、硝酸盐、牛肉膏、蛋白胨等，主要用来合成蛋白质、核酸及含氮代谢物等。含有C 、H 、O 、N 的化合物既可以作为碳源，又可以作为氮源，如氨基酸等。 1．3 培养基除满足微生物生长的 pH 、特殊营养物质和氧气等要求。【补充】生长因子：某些微生物正常生长代谢过程中必须从培养基中吸收的微量有机小分子，如某些氨基酸、碱基、维生素等。〖思考3〗牛肉膏和蛋白胨主要为微生物提供糖、维生素和有机氮等营养物质。〖思考4〗培养乳酸杆菌时需要添加维生素，培养霉菌时需要将培养基pH 调节为酸性，培养细菌时需要将pH 调节为中性或微碱性。标准培养基类型配制特点主要应用物理性质固体培养基加入琼脂较多菌种分离,鉴定,计数半固体培养基加入琼脂较少菌种保存液体培养基不加入琼脂工业生产，连续培养化学组成合成培养基由已知成分配制而成，培养基成分明确菌种分类、鉴定天然培养基由天然成分配制而成，培养基成分不明确工业生，产降低成本目的用途鉴别培养基添加某种指示剂或化学药剂菌种的鉴别选择培养基添加（或缺少）某种化学成分菌种的分离

生物选修1知识点

高中生物选修一生物技术实践知识点总结一、知识归纳一、果酒和果醋的制作 1、在有氧条件下，酵母菌进行有氧呼吸，大量繁殖。C6H12O6＋6H2O＋ 6O2→6CO2＋12H2O 2、在无氧条件下，酵母菌能进行酒精发酵。C6H12O6→2C2H5OH＋2CO2 3、在葡萄酒自然发酵的过程中,起主要作用的是附着在葡萄皮表面的野生型酵母菌.在发酵过程中, 随着酒精浓度的提高,红葡萄皮的色素也进入发酵液,使葡萄酒呈现深红色.在缺氧、呈酸性的发酵液中，酵母菌可以生长繁殖，而绝大多数其他微生物都因无法适应这一环境而受到制约。4、当氧气、糖源都充足时，醋酸菌将葡萄汁中的糖分解成醋酸；当缺少糖源时，醋酸菌将乙醇变为乙醛，再将乙醛变为醋酸。 C2H5OH＋O2→CH3COOH＋H2O 5、控制发酵条件的作用①醋酸菌对氧气的含量特别敏感，当进行深层发酵时，即使只是短时间中断通入氧气，也会引起醋酸菌死亡。②醋酸菌最适生长温度为30～35℃，控制好发酵温度，使发酵时间缩短，又减少杂菌污染的机会。 6、实验流程：挑选葡萄→冲洗→榨汁→酒精发酵→果酒（→醋酸发酵→果醋） 7、酒精检验：果汁发酵后是否有酒精产生，可以用重铬酸钾来检验。在酸性条件下，重铬酸钾与酒精反应呈现灰绿色。 8、充气口是在醋酸发酵时连接充气泵进行充气用的；排气口是在酒精发酵时用来排出二氧化碳的；出料口是用来取样的。排气口要通过一个长而弯曲的胶管与瓶身相连接，其目的是防止空气中微生物的污染。开口向下的目的是有利于二氧化碳的排出。使用该装置制酒时，应该关闭充气口；制醋时，应该充气口连接气泵，输入氧气。二、腐乳的制作 1、多种微生物参与了豆腐的发酵，如青霉、酵母、曲霉、毛霉等，其中起主要作用的是毛霉。毛霉是一种丝状真菌。代谢类型是异养需氧型。生殖方式是孢子生殖。营腐生生活。 2、原理：毛霉等微生物产生的蛋白酶能将豆腐中的蛋白质分解成小分子的肽和氨基酸；脂肪酶可将脂肪水甘油和脂肪酸。 3、酿造腐乳的主要生产工序是将豆腐进行前期发酵和后期发酵。前期发酵的主要作用：1.创造条件让毛霉生长。2.使毛酶形成菌膜包住豆腐使腐乳成型。后期发酵主要是酶与微生物协同参与生化反应的过程通过各辅料与酶的缓解作用，生成腐乳香气。 4、所用豆腐的含水量为70％左右，水分过多则腐乳不易成形。 5、毛霉的生长：条件：将豆腐块平放在笼屉内，将笼屉中的控制在15～18℃，并保持一定的温度。来源：1.来自空气中的毛霉孢子，2. 直接接种优良毛霉菌种 6、加盐腌制：将长满毛霉的豆腐块分层整齐地摆放在瓶中，同时逐层加盐，随着层数的加高而增