糖酵解中间产物的鉴定实验操作步骤

糖酵解中间产物的鉴定实验操作步骤

一、实验目的

了解糖酵解过程的某一中间步骤及利用抑制剂来研究中间代谢的方法。

二、实验原理

利用碘乙酸对糖酵解过程中3-磷酸苷油醛脱氢酶的抑制作用，使3-磷酸苷油醛不再向前变化而积累。硫酸肼作为稳定剂，用来保护3-磷酸苷油醛是不自发分解。然后用2，4-二硝基苯肼与3-磷酸苷油醛在碱性条件下形成2，4-二硝基苯肼-丙糖的棕色复合物，其棕色程度与2-磷酸苷油醛含量成正比。

三、仪器原料和试剂

（1）仪器：试管（1.5×1.5cm）、吸量管（1ml、、2ml3ml）、恒温水浴、烧杯（50ml）。

（2）原料：新鲜酵母。

（3）试剂：

①2，4-二硝基苯肼：0.1g2，4-二硝基苯肼溶于水100ml 2mol/L盐酸溶液中，贮于棕色瓶中备用。

②0.56mol/L硫酸肼溶液：称取7.28g硫酸肼溶于50ml水中，这时不会全部溶解，当加入NaOH使pH达7.4时则完全溶解。此液也可用于水合肼溶液配制，可按其分子浓度稀释至0.56mol/L，此时溶液呈碱性，可用浓硫酸调pH至7.4即可。

③5%葡萄糖溶液。

④10%三氯乙酸溶液。

⑤0.75mol/LNaOH溶液。

⑥0.002mol/L碘乙酸溶液。

四、操作步骤

将各杯混合物分别倒入编号相同的发酵罐内，

酵管产生气泡的量有何不同。

（3）把发酵管中发酵液倾倒入同号小烧杯中并在2号和3号杯中按下表补加各

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微生物大题重点

微生物大题重点

微生物 1、脂肪、蛋白质、脂质三者之间是如何相互转换的？ 答：在同一细胞内，糖类、脂质、蛋白质的代谢是同时进行的，它们之间既相互联系，又相互制约，共同形成一个协调统一的过程。糖类和脂质、蛋白质之间可以相互转化，但是它们之间的转化是有条件的。 （1）.糖类转化成血糖（葡萄糖），主要用于氧化分解，过量转化为糖原，再过量转化为脂肪储存起来，也可将分解中间产物通过氨基转换作用形成氨基酸合成蛋白质； （2）脂类在机体能量供应不足的情况下，氧化分解，或转化为血糖（葡萄糖）； （3）蛋白质在机体能量供应严重不足的情况下或病变情况下，氧化分解，转化 为糖类和脂肪，或者蛋白质摄取过多也会转化为糖类和脂肪储存起来。

异养微生物可以通过对有机物进行氧化分解形成各种中间代谢产物；自养微生物则能够利用CO2和游离氮进行化能合成作用合成糖类，蛋白质和脂质等。其中在微生物体内主要是通过以糖酵解途径以及三羧酸循环为中心来完成三大物质之间的转化的。其关系图如下： 从图中可以看出，糖类物质主要是通过糖酵解途径产生一些中间产物如磷酸二羟丙酮和丙酮酸等，丙酮酸脱羧后形成乙酰CoA进入三羧酸循环。其中，各中间代谢产物经过一些列的生化反应可以形成以下转化： ①乙酰CoA可以转化成脂肪酸，磷酸二羟丙酮转化成甘油，二者结合形成脂肪。 ②三羧酸循环的中间产物如α-酮戊二酸、草酰乙酸等能够转化成谷氨酸和天冬氨酸，二者都可以进一步合成蛋白质。 ③其中，三羧酸循环中的草酰乙酸在磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶的催化下形成PEP（磷酸烯醇式丙酮酸），并通过糖酵解的逆向途径从而形成葡萄糖。 综上所述，在微生物的分解与合成代谢中，糖类，蛋白质、和脂质是通过一系列的氧化分解形成中间代谢产物进入糖酵解和三羧酸循环，进而相互转化，相互制约。

糖酵解特点

四、糖代谢概况 有氧 无氧 H 2O 及CO 2 乳酸 乳酸、氨基酸、甘油 糖原 核糖 + NADPH+H+ 磷酸戊糖途径 淀粉 消化与吸收 无氧分解（糖酵解） 糖酵解（glycolysis)是指葡萄糖在无氧条件下 分解生成乳酸并释放出能量的过程。 糖酵解的全部反应过程在胞液(cytoplasm)中进行，代谢的终产物为乳酸(lactate)，一分子葡萄糖经无氧酵解可净生成两分子ATP 。 无氧酵解的反应过程可分为活化、裂解、放能 和还原四个阶段。

酸的生醇发酵及葡萄糖的无氧分解 葡萄糖EMP + NAD CH2OH CH3 乙醇 NADH+H+ NAD+ CO2 乳酸 COOH CH(O H) C H3 CHO CH3 COOH C==O CH3 丙酮酸 1.活化(a c t i v a t i o n)-己糖磷酸酯的生成 活化阶段是指葡萄糖经磷酸化和异构反应生成1,6-二磷酸果糖(FDP)的反应过程。该过程共由三步化学反应组成。 （一）糖酵解途径 葡萄糖磷酸化 磷酸葡萄糖(G-6-P) G-6-P异构为（F-6-P） F-6-P再磷酸化为( F-1,6-BP ）......（1）......（2） (3)

ADP ATP ADP * (2 无氧酵解的活化阶段 第一阶段总结： 消耗ATP 不生成ATP 从葡萄糖开始→ 2分子ATP 从糖原开始→ 1分子ATP

.裂解（lysis)——磷酸丙糖的生 一分子F-1,6-BP 裂解为两分子可以互变的磷酸丙糖 （triose phosphate)，包括两步反应： F-1,6-BP 裂解为3-磷酸甘油醛和磷酸二羟丙酮 磷酸二羟丙酮异构为3-磷酸甘油醛 (5) (4) 第二阶段总结： 1、一分子六碳糖分解为2分子能够互变的磷酸丙糖。 2、既不消耗ATP ，也不生成ATP 。 3.放能(r e l e a s i n g e n e r g y )——丙酮酸的生成 3-磷酸甘油醛经脱氢、磷酸化、脱水及放能等 反应生成丙酮酸，包括六步反应。 3- 磷酸甘油醛脱氢并磷酸化生成1,3- 二磷酸甘油酸 1,3-,将其交给ADP 生成ATP 3-磷酸甘油酸异构为2-磷酸甘油酸 (6) ......（7） (8)

高中生物教案【实验一】 生物组织中还原糖、脂肪、蛋白质的鉴定

高中生物教案【实验一】生物组织中还原糖、脂肪、蛋白 质的鉴定 一、教学目的 初步掌握鉴定生物组织中还原糖、脂肪、蛋白质的基本方法。 二、教学建议 教材中本实验安排为验证性实验，有条件的学校可以改为探索性实验，安排在讲课之前，或与讲课同步进行。 本实验难度并不大，但内容较多，实验时间较长，因此，必须作周密安排，才能按时完成。实验中应注意以下几点。 1.增设教师演示实验。上课之前，教师应该准备好做演示实验所需的实验材料、用具、仪器和试剂等。同时，逐项完成还原糖、脂肪、蛋白质3类有机物的鉴定实验。在实验课上，将3个实验的正确结果分别展示在讲台上，并作扼要的介绍，以便使学生将自己的实验结果与教师的演示实验作比较。 2.实验中学生应分工合作。在“还原糖的鉴定”实验中，当每组两个学生中的一个制备生物组织样液时，另一个学生可以用酒精灯将水煮开，以便缩短实验的等待时间。在“脂肪的鉴定”实验中，一个学生制作临时装片时，另一个学生则可以调试显微镜。另外，在完成前两个实验时，一个学生洗刷试管、清洗玻片和整理显微镜，另一个学生则可以进行后一个实验的操作。 3.关于鉴定还原糖的实验，在加热试管中的溶液时，应该用试管夹夹住试管上部，并放入盛开水的大烧杯中加热。注意试管底部

不要接触烧杯底部，同时试管口不要朝向实验者，以免试管内溶液沸腾时冲出试管，造成烫伤。如果试管内溶液过于沸腾，可以上提试管夹，使试管底部离开大烧杯中的开水。 4.做鉴定还原糖和蛋白质的实验时，在鉴定之前，可以留出一部分样液，以便与鉴定后的样液的颜色变化作对比，这样可以增强说服力。 5.斐林试剂的甲液和乙液混合均匀后方可使用，切勿将甲液和乙液分别加入组织样液中。 三、参考资料 还原糖的鉴定原理生物组织中普遍存在的还原糖种类较多，常见的有葡萄糖、果糖、麦芽糖。它们的分子内都含有还原性基团（游离醛基或游离酮基），因此叫做还原糖。蔗糖的分子内没有游离的半缩醛羟基，因此叫做非还原性糖，不具有还原性。本实验中，用斐林试剂只能检验生物组织中还原糖存在与否公务员之家，全国公务员共同天地，而不能鉴定非还原性糖。 斐林试剂由质量浓度为0.1g／mL的氢氧化钠溶液和质量浓度为0.05g／mL的硫酸铜溶液配制而成，二者混合后，立即生成淡蓝色的Cu(OH)2沉淀。Cu(OH)2与加入的葡萄糖在加热的条件下，能够生成砖红色的Cu2O沉淀，而葡萄糖本身则氧化成葡萄糖酸。其反应式如下： CH2OH—(CHOH)4—CHO＋2Cu(OH)2→CH2OH—(CHOH)4—COOH＋Cu2O↓＋2H2O

蛋白提取步骤

提蛋白及WB得步骤 整个过程细胞或蛋白都必须放冰上 准备工作:前一天准备:借钥匙、检查细胞裂解液相关试剂就是否充足、 当天准备:洗玻璃板、开紫外,冰块、碎冰、标记１.５ｍl 离心管及0。6ｍl离心 管、细胞刮板、开低温高速离心机 细胞裂解液配制: 1ml celｌlｙsis 10ul NP－40(离心机后) 25ul 焦磷酸钠 ４0ul ＮaＦ 1ul β—甘油磷酸 2 ul Na3VO４ 1ul 蛋白酶抑制剂(用完即放回冰箱) 10ul PMＳＦ(最后加,随加随用,有毒) 细胞裂解与收集 1.观察细胞状态,并准备提蛋白:吸走培养基、用PBS洗细胞两次(倾斜贴壁加PBS,左右轻轻 摇),倾斜贴壁吸走PBS。 2.将细胞盘拿到外间冰上,加裂解液(体积网上推荐:一般1０6加0。１ml ),冰上静置１-２min。 3.刮细胞:细胞刮板每次用之前拿水涮一涮,甩干,然后从中间到外面打圈刮,再从下往上,从 上往下全面刮,(刮得时候要迅速),最后用枪吸取裂解液至离心管、 细胞破碎 4.超声波破碎细胞:准备三个小烧杯,加满冰块,三个小夹子。(超声波破碎仪得铁棒不要碰到 离心管得壁与底部) 超声波设置: 工作功率5% 工作时间３min 开机时间15s,关机时间３０s 温度０度, 报警温度1度 5.4℃、13００0r／mｉｎ,离心１5mｉn、(离心机用后一直保持打开得状态,) 蛋白保存 6.蛋白保存及分装:吸上清液至0。6ｍl离心管,涡旋、吸一半至另一个管中,涡旋。-80℃保 存。 注意事项:PMSF一定要现用现加,PMSF在水溶液中不稳定,30min内就会降解一半。样品处理超过１ｈ,补加一次。 ＢCA测定蛋白浓度 1、测空白板,选差异较小得孔。 BCA测定法波长570,Bｒacforｄ:595 2、标准蛋白得稀释(5mｇ/ul):分装1ml PBS来使用,稀释标准蛋白至0.5mg/uｌ。 取5ｕｌ标准蛋白+４5ul ＰＢS

实验六检测还原糖

实验六检测生物组织中还原糖的实验 一、教学目标 1、初步学会生物组织中还原糖的鉴定方法，领悟并能描述该实验的实验原理。 2、比较不同实验材料所做的实验结果，探索该实验的理想实验材料。 3、培养学生的动手操作能力，培养学生树立实事求是、认真严肃的的科学态度。 二、学情分析 学生在《第一节 - 细胞中的元素和化合物》的学习中，学生对糖的概念有了明确的认识，对于生物组织中哪些含糖类型，怎么鉴别还原糖还不清楚。通过本节实验教学让学生对颜色反应这一类验证实验有一个总体把握，再则让学生体会出生物学上一些典型的实验现象是要选择实验材料是关键，以及实验中要注意每一步实验方法。 三、实验原理 生物组织中普遍存在的还原糖种类较多，常见的有葡萄糖、果糖、麦芽糖。它们的分子内都含有还原性基团（游离醛基或游离酮基），因此叫做还原糖。蔗糖的分子内没有游离的半缩醛羟基，因此叫做非还原性糖，不具有还原性。本实验中，用斐林试剂只能检验生物组织中还原糖存在与否，而不能鉴定可溶性的非还原性糖。 斐林试剂由质量浓度为0.1 g／mL的氢氧化钠溶液和质量浓度为0.05g／mL的硫酸铜溶液配制而成，二者混合后，立即生成淡蓝色的Cu(OH)2沉淀。Cu(OH)2与加入的葡萄糖在加热的条件下，能够生成砖红色的Cu 2 O沉淀，而葡萄糖本身则氧化成葡萄糖酸。其反应式如下： 2NaOH+CuSO 4 Na 2 SO 4 +Cu(OH) 2 (淡蓝色沉淀) -CHO+2Cu(OH) 2-COOH+Cu 2 O(砖红色沉淀)+2H 2 O 用斐林试剂鉴定还原糖时，溶液的颜色变化过程为浅蓝色棕色砖红色(沉淀)。 本实验能利用还原糖能与斐林试剂发生颜色反应的特性，通过一系列实验检测生物组织中是否含有还原糖。

Western blot步骤实验蛋白提取及定量、相关试剂配制、电泳转膜及显色过程(全) (1)

Western blot实验蛋白提取及定量、相关试剂配制、电泳、转膜及显色过程步骤 高征 2014年6月

第一部分 细胞核蛋白与细胞浆蛋白抽提过程(碧云天试剂盒) 一、原理 在研究细胞时经常要研究细胞的不同组份，而研究得最多的两个细胞组份就是细胞核和细胞浆。分离细胞核蛋白和细胞浆蛋白，不仅可以用于研究蛋白在细胞内的定位，而且很多时候分离出来的核蛋白可以用于转录调控方面的研究，例如EMSA(也称gel shift)，footprinting等。 细胞核蛋白与细胞浆蛋白抽提试剂盒(Nuclear and Cytoplasmic Protein Extraction Kit)提供了一种比较简单、方便的从培养细胞或新鲜组织中抽提细胞核蛋白与细胞浆蛋白的方法。约90分钟就可以完成培养细胞的细胞核蛋白与细胞浆蛋白的分离。抽提得到的蛋白可以用于Western，EMSA，footprinting，报告基因检测以及酶活力测定等后续操作。 本试剂盒是通过细胞浆蛋白抽提试剂A和B，在低渗透压条件下，使细胞充分膨胀，然后破坏细胞膜，释放出细胞浆蛋白，然后通过离心得到细胞核沉淀。最后通过高盐的细胞核蛋白抽提试剂抽提得到细胞核蛋白。本试剂盒可以抽提50个样品，如果每个样品的数量为约二百万细胞或约30-50毫克组织。 二、注意事项 1.需自备PMSF。PMSF一定要在抽提试剂加入到样品中前2-3分钟内加入，以免PMSF在水溶液中很快失效。 2.抽提蛋白的所有步骤都需在冰上或4℃进行。 3.本试剂盒对于组织样品，仅适合于新鲜组织，对冻存过的组织抽提效果很差。可以抽提的组织样品数通常不足100个。 4.使用本试剂盒抽提到的细胞核蛋白与细胞浆蛋白均可直接用碧云天生产 的BCA蛋白浓度测定试剂盒(P0009/P0010/P0010S/P0011/P0012/P0012S)测定蛋白浓度。但不适合用Bradford法测定蛋白浓度。 5.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 三、使用说明 1. 准备溶液：室温融解试剂盒中的三种试剂，溶解后立即放置在冰上，混匀。取适当量的细胞浆蛋白抽提试剂A备用，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF 的最终浓度为1mM。取适当量的细胞核蛋白抽提试剂备用，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM。（蛋白酶抑制剂可酌情翻倍） 2. 对于贴壁细胞：用PBS洗一遍，用细胞刮子刮下细胞，或用EDTA溶液（0.5%

糖酵解(葡萄糖无氧分解)

糖酵解:葡萄糖在细胞液中，经无氧分解转变为乳酸并生成少量ATP的过程称之为糖酵解。糖酵解亦称EMP途径。 糖酵解的反应部位：胞浆 激酶：催化ATP分子的磷酸基（r-磷酰基）转移到底物上的酶称激酶，一般需要Mg2+或Mn2+作为辅因子。 哺乳类动物体内已发现有4种己糖激酶同工酶，分别称为Ⅰ至Ⅳ型。肝细胞中存在的是Ⅳ型，称为葡萄糖激酶。 它的特点是： ①对葡萄糖的亲和力很低 ②受激素调控 底物水平磷酸化：代谢物在氧化分解过程中通过脱氢、脱水等作用使底物分子内部能量重新分布，能量集中生成高能键，然后使ADP磷酸化生成ATP的过程。 变位酶：通常将催化分子内化学集团移位的酶。 糖酵解分为两个阶段： 第一阶段：由葡萄糖分解成丙酮酸，称之为糖酵解途径 1、葡萄糖磷酸化为6-磷酸葡萄糖（己糖激酶） （消耗1molATP，反应不可逆） 2、6-磷酸葡萄糖转变为6-磷酸果糖（磷酸葡萄糖异构酶） 3、6-磷酸果糖转变为1,6-双磷酸果糖（磷酸果糖激酶） （消耗1molATP，反应不可逆） 4、磷酸己糖裂解成2分子磷酸丙糖（醛缩酶） 5、磷酸丙糖的同分异构化（磷酸丙糖异构酶）

6、3-磷酸甘油醛氧化为1,3-二磷酸甘油酸 （3-磷酸甘油醛脱氢酶） 7、1,3-二磷酸甘油酸转变成3-磷酸甘油酸（磷酸甘油酸激酶） 8、3-磷酸甘油酸转变为2-磷酸甘油酸（磷酸甘油酸变位 （生成2molATP，反应可逆） 9、2-磷酸甘油酸转变为磷酸烯醇式丙酮酸（烯醇化酶） 10、磷酸烯醇式丙酮酸转变成丙酮酸，并通过底物水平磷酸化生成ATP（丙酮酸激酶）（生成2molATP，反应不可逆） 第二阶段由丙酮酸转变成乳酸 糖酵解的生理意义： ①在无氧或相对缺氧的条件下，为机体提供生命活动所必需的能量。 ②即使在有氧的条件下，机体有些组织也要由无氧酵解来供能，如成熟的红细胞、视网膜、肾脏髓质等。 糖酵解的特点： ⑴反应部位：胞浆，参与糖酵解各反应的酶都存在于细胞浆中。 ⑵糖酵解是一个不需氧的产能过程。 ⑶反应全过程不可逆，其中有三步不可逆的反应 方式：底物水平磷酸化 终产物乳酸的去路：释放入血，进入肝脏再进一步代谢。分解利用，乳酸循环（糖异生） 备注：除葡萄糖外，其它己糖也可转变成磷酸己糖而进入酵解途径。如：半乳糖、甘露糖、果糖。

糖酵解 三羧酸循环最全总结

在高等植物中存在着多条呼吸代谢的生化途径，这是植物在长期进化过程中，对多变环境条件适应的体现。在缺氧条件下进行酒精发酵和乳酸发酵，在有氧条件下进行三羧酸循环和戊糖磷酸途径，还有脂肪酸氧化分解的乙醛酸循环以及乙醇酸氧化途径等(图5-2)。 图5-2 植物体内主要呼吸代谢途径相互关系示意图 一、糖酵解 己糖在细胞质中分解成丙酮酸的过程，称为糖酵解（glycolysis）。整个糖酵解化学过程于1940年得到阐明。为纪念在研究这一途径中有突出贡献的三位生物化学家：G.Embden,O.Meyerhof和J.K.Parnas，又把糖酵解途径称为EmbdenMeyerhofParnas途径，简称EMP途径（EMP pathway）。糖酵解普遍存在于动物、植物、微生物的细胞中。 （一）糖酵解的化学历程 糖酵解途径（图5-3）可分为下列几个阶段：

图5-3糖酵解途径 1.己糖的活化(1～9)是糖酵解的起始阶段。己糖在己糖激酶作用下，消耗两个ATP逐步转化成果糖-1，6二磷酸(F-1，6-BP)。 如以淀粉作为底物，首先淀粉被降解为葡萄糖。淀粉降解涉及到多种酶的催化作用，其中，除淀粉磷酸化酶(starch phosphorylase)是一种葡萄糖基转移酶外，其余都是水解酶类，如α-淀粉酶(α-amylase)、β-淀粉酶(β-amylase)、脱支酶(debranching enzyme)、麦芽糖酶(maltase)等。 2.己糖裂解(10～11)即F-1，6-BP在醛缩酶作用下形成甘油醛-3-磷酸和二羟丙酮磷酸，后者在异构酶(isomerase)作用下可变为甘油醛-3-磷酸。 3.丙糖氧化(12～16)甘油醛-3-磷酸氧化脱氢形成磷酸甘油酸，产生1个ATP和1个NADH，同时释放能量。然后，磷酸甘油酸经脱水、脱磷酸形成丙酮酸，并产生1个ATP，这一过程分步完成，有烯醇化酶和丙酮酸激酶参与反应。

糖酵解三羧酸循环总结

精心整理 在高等植物中存在着多条呼吸代谢的生化途径，这是植物在长期进化过程中，对多 变环境条件适应的体现。在缺氧条件下进行酒精发酵和乳酸发酵，在有氧条件下进行三 羧酸循环和戊糖磷酸途径，还有脂肪酸氧化分解的乙醛酸循环以及乙醇酸氧化途径等 (图5-2)。 图5-2植物体内主要呼吸代谢途径相互关系示意图 （二）糖酵解的生理意义 1.糖酵解普遍存在于生物体中，是有氧呼吸和无氧呼吸途径的共同部分。 2.糖酵解的产物丙酮酸的化学性质十分活跃，可以通过各种代谢途径，生成不同的 物质（图5-4）。 图5-4丙酮酸在呼吸和物质转化中的作用 3.通过糖酵解，生物体可获得生命活动所需的部分能量。对于厌氧生物来说，糖酵 解是糖分解和获取能量的主要方式。 4.糖酵解途径中，除了由己糖激酶、磷酸果糖激酶、丙酮酸激酶等所催化的反应以 外，多数反应均可逆转，这就为糖异生作用提供了基本途径。 二、发酵作用

生物体中重要的发酵作用有酒精发酵和乳酸发酵。在酒精发酵(alcoholfermentation)过程中,糖类经过糖酵解生成丙酮酸。然后,丙酮酸先在丙酮酸脱羧酶(pyruvicaciddecarboxylase)作用下脱羧生成乙醛。 CH3COCOOH→CO2＋CH3CHO(5-5) 乙醛再在乙醇脱氢酶(alcoholdehydrogenase)的作用下，被还原为乙醇。 CH3CHO＋NADH＋H+→CH3CH2OH＋NAD+(5-6) 在缺少丙酮酸脱羧酶而含有乳酸脱氢酶(lacticaciddehydrogenase)的组织里，丙酮酸便被NADH还原为乳酸，即乳酸发酵(lactatefermentation)。 CH3COCOOH＋NADH＋H+→CH3CHOHCOOH＋NAD+(5-7) 在无氧条件下，通过酒精发酵或乳酸发酵，实现了NAD+的再生，这就使糖酵解得以继续进行。 乙酰基转移酶(dihydrolipoyltransacetylase)、二氢硫辛酸脱氢酶(dihydrolipoicaciddehydrogenase)。6种辅助因子。6种辅助因子分别是硫胺素焦磷酸(thiaminepyrophosphate,TPP)、辅酶A(coenzymeA)、硫辛酸(lipoicacid)、FAD(flavinadeninedinucleotide)、NAD+(nicotinamideadeninedinucleotide)和Mg2+。 图5-6三羧酸循环的反应过程 上述反应中从底物上脱下的氢是经FAD→FADH2传到NAD+再生成NADH＋H+。 2.反应(2)乙酰CoA在柠檬酸合成酶催化下与草酰乙酸缩合为柠檬酸，并释放CoASH，此反应为放能反应(△G°，＝-32.22kJ·mol-1)。 3.反应(3)由顺乌头酸酶催化柠檬酸脱水生成顺乌头酸，然后加水生成异柠檬酸。

实验一还原糖的鉴定教案

实验一、生物组织中还原糖的鉴定[教案] 一、课型：新授课 二、教学目标： 1、知识与技能目标 （1）掌握还原糖的鉴定方法。 （2）体验实验操作过程中的操作问题，讨论实验指导的关键。（3）培养学生分析、解决问题的能力，坚持实事求是的科学态度。 2、过程与方法 （1）通过简单演示实验，创建情景，引入新课题。 （2）通过PPT、探究学习和讨论等方法来获得信息。 （3）通过讲解、演示、PPT展示、课堂练习以及课后习题等，让学生加深对生物组织中还原糖的鉴定的理解。 3、情感态度与价值观 （1）通过学生实验和演示实验，进一步培养学生动手、观察、分析的实验能力。 （2）能将所学的知识与生活、环境、社会等实际问题相联系，并运用到生活中去，发展学习的兴趣 三、教学重、难点 （1）掌握还原糖的鉴定方法。 （2）通过实验的操作和设计培养学生的动手能力，掌握验证实验及探索实验的设计技巧，从而培养创新思维能力。

四、教具准备： 1、PPT课件。 2、实验材料：（1）实验仪器：解剖刀、研钵、漏斗、纱布、漏斗 架、烧杯、试管、试管架、酒精灯、石棉网、三脚架、试管、胶头滴管、量筒。 （2）实验材料：斐林试剂A液：0.1g/ml的NaOH 溶液、斐林试剂B液：0.05g/ml的CuSO4溶液SiO2、H2O、苹果、土豆、菠菜。 五、课时安排：1课时。 六、教学方法： 讲授法、讨论交流、练习法、问答法、演示法、多媒体辅助教学法等。 七、教学过程： 情境导入： 【老师】同学们，上课了。今天老师给大家带来了一个小魔术。 【展示】一个装有刚配好的斐林试剂的试管。 【老师】这是一种蓝色的溶液。 【展示】一个装有苹果汁的试管。 【设问】这是刚榨好的苹果汁，猜猜我要干什么？很简单，我要把苹果汁倒入蓝色溶液的试管中，那大家猜猜会有什么变化呢？ 【学生】思考回答 【老师】抽问

蛋白提取实验步骤51063

蛋白提取实验步骤： 1、细胞总蛋白提取 A、对于悬浮细胞: 离心收集细胞，每106细胞加250 ul RIPA （在使用前数分钟内加入蛋白酶抑制剂），振荡。如果需要提高蛋白浓度，可以适当减少细胞总蛋白提取试剂体积。 B、对于贴壁细胞: a、用TBS冲洗细胞2-3次。最后一次彻底吸干残留液。 b、加入适当体积的 RIPA（使用前数分内加入蛋白酶抑制剂）于培养板、瓶内3-5分钟。期间反复晃动培养板、瓶，使试剂与细胞充分接触。 c、用细胞刮刀将细胞及试剂刮下，收集到1.5ml离心管中。 C、冰浴30min，期间用移液器反复吹打，确保细胞完全裂解。 D、12000g离心5min，收集上清，即为总蛋白溶液。 2、组织蛋白提取： A、组织块用冷TBS洗涤2-3次，去除血污，剪成小块置于匀浆器。加入10倍组织体积本试剂（使用前数分钟内加入蛋白酶抑制剂）冰上彻底匀浆。如果需要提高蛋白浓度，可以适量减少该试剂体积。 B、将匀浆液转移至1.5ml离心管中，振荡。冰浴30min，期间用移液器反复吹打，确保细胞完全裂解。 C、12000g离心5min，收集上清，即为总蛋白溶液。 注意事项 1、组织尽可能新鲜，若不能及时提蛋白，组织标本应保存在-80℃冰箱，并避免反复冻融。 2、全程必须在冰上进行，避免蛋白降解。 3、蛋白酶抑制剂在水溶液中不稳定，需在RIPA使用前数分钟加入蛋白酶抑制剂。

4、裂解过程中如有溶液粘稠现象可用移液器（200μl）反复吹打， 或再加入适量裂解液以保证充分裂解。 5、总蛋白溶液不稳定（蛋白酶依旧有活性）可在-80℃短时间保 存，建议立即加入蛋白上样缓冲液变性后与-20℃保存，避免反复 冻融。 如有侵权请联系告知删除，感谢你们的配合！

实验四斐林试剂法法测定还原糖含量

一、实验目的： 掌握园艺产品中糖的测定方法。 二、实验原理 利用糖的还原性，与斐林试剂（氧化剂）中的二价铜离子还原为一价铜，进行氧化还原反应，而进行测定。非还原糖必须转化为还原糖，再进行测定。 斐林试剂中酒石酸钾钠铜是一种氧化剂，反应的终点可用次甲基蓝作指示剂，在碱性、沸腾环境下还原呈无色。根据斐林试剂完全还原所需的还原糖量，计算出样品还原糖量。 三、试剂与材料 1、斐林试剂 甲：加水溶解并定容至1000ml； 乙：346g酒石酸钾钠+100gNaOH加水溶解并定容至1000ml； 2、1%次甲基蓝，1g次甲基蓝加水溶解并定容至100ml，棕色瓶保存； 3、%标准葡萄糖，2g 105℃烘干到恒重的葡萄糖加水定容到1000ml； 4、碱式滴定管； 5、电炉，各种玻璃器皿。 四、操作方法 1、斐林试剂标定 取甲液5ml加入5ml乙液中，置于250ml三角瓶中，加入水10ml，从滴定管中加入%的标准葡萄糖若干毫升（约23ml）。（量控制在后滴定时消耗葡萄糖在－。 电炉上加热至沸，并保持微沸2分钟，加2滴1%次甲基蓝溶液，趁沸以每两秒1滴的速度继续滴加葡萄糖标准溶液，用%标准葡萄糖滴定至蓝色消失，有红棕色沉淀，溶液清亮为终点止。记录耗用的葡萄糖量为V0，必须在1min内完成。 （注意：还原的次甲基蓝易被空气中的氧氧化，恢复成原来的蓝色，所以滴定过程中必须保持溶液成沸腾状态，并且避免滴定时间过长。） 2、样品滴定预备试验 同上法取斐林试剂，加10ml样品液，摇匀于电炉上加热至沸，保持微沸2分钟，加2滴1%次甲基蓝，用%葡萄糖滴定至蓝色消失。记录耗用的葡萄糖量为V1。 3、样品滴定 同上法吸取斐林试剂加10ml样品液(预先稀释)，补加（V0-V1）ml水，并从滴定管中预先加入（V1-1）ml %葡萄糖，摇匀至电炉上加热至沸，保持2min微沸，加入2滴1%次甲基蓝，继续用葡萄糖滴定至蓝色消失。记录消耗的标准葡萄糖体积为V毫升。 五、结果计算 还原糖含量(以葡萄糖计)（g/ml)=（Vo-V)××1/10×n 式中：Vo--------斐林试剂标定值，ml V---------样品糖液测定值，ml 标准葡萄糖溶液浓度，g/ml 10--------样品糖液体积，ml n---------样品稀释倍数 六、思考题：

【实验操作】蛋白质的提取和分离实验操作

优选精品资源欢迎下载选用 实验操作 蛋白质的提取和分离一般分为四步:样品处理、粗分离、纯化和纯度鉴定。 (1)样品处理 ①红细胞的洗涤洗涤红细胞的目的:去除杂蛋白，以利于后续步骤的分离纯化。采集的血样要及时分离红细胞，分离时采用低速短时间离心，如500r/min离心2min，然后用胶头吸管吸出上层透明的黄色血浆，将下层暗红色的红细胞液体倒入烧杯，再加入五倍体积的生理盐水，缓慢搅拌10min，低速短时间离心，如此重复洗涤三次，直至上清液中没有黄色，表明红细胞已洗涤干净。洗涤次数、离心速度与离心时间十分重要。洗涤次数过少，无法除去血浆蛋白;离心速度过高和时间过长会使白细胞等一同沉淀，达不到分离的效果。 ②血红蛋白的释放将洗涤好的红细胞倒人烧杯中，加蒸馏水到原血液的体积，再加40%体积的甲苯，置于磁力搅拌器上充分搅拌10min。蒸馏水和甲苯作用:使红细胞破裂释放出血红蛋白。 ③分离血红蛋白溶液将搅拌好的混合液转移到离心管中，以20**r/min的速度离心10min后，可以明显看到试管中的液体分为4层。第1层为无色透明的甲苯层，第2层为白色薄层固体，是脂溶性物质的沉淀层，第3层是红色透明液体，这是血红蛋白的水溶液，第4层是其他杂质的暗红色沉淀物。将试管中的液体用滤纸过滤，除去脂溶性沉淀层，于分液漏斗中静置片刻后，分出下层的红色透明液体。 ④透析取lmL的血红蛋白溶液装入透析袋中，将透析袋故人盛有300mL的物质的量浓度为20mmol/L的磷酸缓冲液中(pH为7.0)，透析12h。 (2)凝胶色谱操作 ①凝胶色谱柱的制作 ②凝胶色谱柱的装填将色谱柱垂直固定在支架上。计算所用凝胶量，并称量。凝胶用蒸馏水充分溶胀后，配成凝胶悬浮液，在与色谱柱下端连接的尼龙臂打开的情况下，一次性缓慢倒入色谱柱内，装填时可轻轻敲动色谱柱，使凝胶装填均匀。色谱柱内不能有气泡存在，一旦发现有气泡，必须重装。装填完后，立即连接缓冲液洗脱瓶，在约50cm高的操作压下，用300ml的物质的量浓度为20mmol/L的磷酸缓冲液充分洗涤平衡凝胶12h，使凝胶装填紧密。 ③样品的加入和洗脱打开色谱柱下端的流出口。使柱内凝胶面上的缓冲液缓慢下降到与凝胶面平齐，关闭出口。用吸管小心地将lmL透析后的样品加到色谱柱的顶端，加样时使吸管管口沿管壁环绕移动，注意不要破坏凝胶面。加样后，打开下端出口，使样品渗入凝胶床内。等样品完全进入凝胶层后，关闭下端出口。小心加入物质的量浓度为20mmol/L 的磷酸缓冲液(pH为7.0)到适当高度，连接缓冲液洗脱瓶，打开下端出口，进行洗脱。待红色的蛋白质接近色谱柱底端时，用试管收集流出液，每5mL收集一管，连续收集。

蛋白质的提取和分离实验操作

实验操作 蛋白质的提取和分离一般分为四步:样品处理、粗分离、纯化和纯度鉴定。 (1)样品处理 ①红细胞的洗涤洗涤红细胞的目的:去除杂蛋白，以利于后续步骤的分离纯化。采集的血样要及时分离红细胞，分离时采用低速短时间离心，如500r/min离心2min，然后用胶头吸管吸出上层透明的黄色血浆，将下层暗红色的红细胞液体倒入烧杯，再加入五倍体积的生理盐水，缓慢搅拌10min，低速短时间离心，如此重复洗涤三次，直至上清液中没有黄色，表明红细胞已洗涤干净。洗涤次数、离心速度与离心时间十分重要。洗涤次数过少，无法除去血浆蛋白;离心速度过高和时间过长会使白细胞等一同沉淀，达不到分离的效果。 ②血红蛋白的释放将洗涤好的红细胞倒人烧杯中，加蒸馏水到原血液的体积，再加40%体积的甲苯，置于磁力搅拌器上充分搅拌10min。蒸馏水和甲苯作用:使红细胞破裂释放出血红蛋白。 ③分离血红蛋白溶液将搅拌好的混合液转移到离心管中，以2000r/min的速度离心10min后，可以明显看到试管中的液体分为4层。第1层为无色透明的甲苯层，第2层为白色薄层固体，是脂溶性物质的沉淀层，第3层是红色透明液体，这是血红蛋白的水溶液，第4层是其他杂质的暗红色沉淀物。将试管中的液体用滤纸过滤，除去脂溶性沉淀层，于分液漏斗中静置片刻后，分出下层的红色透明液体。 ④透析取lmL的血红蛋白溶液装入透析袋中，将透析袋故人盛有300mL的物质的量浓度为20mmol/L的磷酸缓冲液中(pH为7.0)，透析12h。 (2)凝胶色谱操作 ①凝胶色谱柱的制作 ②凝胶色谱柱的装填将色谱柱垂直固定在支架上。计算所用凝胶量，并称量。凝胶用蒸馏水充分溶胀后，配成凝胶悬浮液，在与色谱柱下端连接的尼龙臂打开的情况下，一次性缓慢倒入色谱柱内，装填时可轻轻敲动色谱柱，使凝胶装填均匀。色谱柱内不能有气泡存在，一旦发现有气泡，必须重装。装填完后，立即连接缓冲液洗脱瓶，在约50cm高的操作压下，用300ml的物质的量浓度为20mmol/L的磷酸缓冲液充分洗涤平衡凝胶12h，使凝胶装填紧密。 ③样品的加入和洗脱打开色谱柱下端的流出口。使柱内凝胶面上的缓冲液缓慢下降到与凝胶面平齐，关闭出口。用吸管小心地将lmL透析后的样品加到色谱柱的顶端，加样时使吸管管口沿管壁环绕移动，注意不要破坏凝胶面。加样后，打开下端出口，使样品渗入凝胶床内。等样品完全进入凝胶层后，关闭下端出口。小心加入物质的量浓度为20mmol/L的磷酸缓冲液(pH为7.0)到适当高度，连接缓冲液洗脱瓶，打开下端出口，进行洗脱。待红色的蛋白质接近色谱柱底端时，用试管收集流出液，每5mL收集一管，连续收集。

生物化学期末复习(简答、名词解释)

第九章糖代谢 1. 什么是物质代谢？什么是能量代谢？二者之间的关系如何？ 答：物质代谢：研究各种生理活性物质（如糖、蛋白质、脂类、核酸等）在细胞内发生酶促反应的途径及调控机理，包含旧分子的分解和新分子的合成； 能量代谢：研究光能或化学能在细胞内向生物能（ATP）转化的原理和过程，以及生命活动对能量的利用。 能量代谢和物质代谢是同一过程的两个方面，能量转化寓于物质转化过程之中，物质转化必然伴有能量转化。 2. 中间代谢：消化吸收的营养物质和体内原有的物质在一切组织和细胞中进行的各种化学变化称为中间代谢。 3. 呼吸商（respiratory quotient 简称 RQ）：指生物体在同一时间内，释放二氧化碳与吸收氧气的体积之比或摩尔数之比，即指呼吸作用所释放的 CO2 和吸收的 O2 的分子比。 4. 自养型生物：为能够利用无机物合成有机物的类型，又分为光合自养——绿色植物，和化能自养——硝化细菌等。 5. 异养型生物：不能自己合成有机物，必须依靠自养生物制造的有机物生存。 6. 简述活体内实验及其意义。 答：1）用整体生物材料或高等动物离体器官或微生物细胞群体进行中间代谢实验研究称为活体内实验，用“in vivo”表示。2）活体内实验结果代表生物体在正常生理条件下，在神经、体液等调节机制下的整体代谢情况，比较接近生物体的实际。 7. 活体外实验：用从生物体分离出来的组织切片，组织匀浆或体外培养的细胞、细胞器及细胞抽提物进行中间代谢实验研究称为活体外实验，用“in vitro”表示。 8. 简述代谢途径的探讨方法 答：1）代谢平衡实验；2）代谢障碍实验（代谢途径阻断实验）；3）使用抗代谢物；4）代谢物标记追踪实验；5）测定特征性酶；6）核磁共振波谱法。 9. 简述糖的生理功能 答：1）作为生物体的结构成分；2）作为生物体内的主要能源物质；3）在体内转变为其他物质；4）作为细胞识别的信息分子。 10. 糖的分解途径有哪些？ 答：糖酵解、糖的有氧氧化、磷酸戊糖途径 11. 简述血糖中糖的来源？ 答：食物中多糖的消化吸收；乳酸、氨基酸、甘油等物质的糖异生；自身糖原的降解。12. 糖酵解：是将葡萄糖转变成乳酸并同时生成 ATP 的一系列反应，是一切有机体中都存在的葡萄糖降解途径。 13. 简述糖酵解的过程 答：1）己糖磷酸酯的生成：葡萄糖→果糖-1,6-二磷酸2）丙糖磷酸的生成（磷酸己糖的裂解）：果糖-1,6-二磷酸→2 分子磷酸丙糖3）丙酮酸的生成：甘油醛-3-磷酸→丙酮酸4）乳酸的生成：丙酮酸→乳酸 14. 简述糖酵解的特征 答：1）反应部位在胞液2）不需氧的产能过程（底物水平磷酸化） 1 G→ 2 ATP，Gn（G）→ 3 ATP 3）终产物乳酸：释放入血，进入肝脏代谢；分解利用；乳酸循环。 4）有 3 步不可逆反应

糖酵解

山东大学实验报告2013年5月19 日 姓名陈少坤系年级 2011级生科2班同组者张劲松 科目生化实验题目肌糖原酵解 一、实验目的 1. 学习鉴定糖酵解作用的原理和方法。 2. 了解酵解作用在糖代谢过程中的地位及生理意义。 3. 了解有关组织代谢实验应注意的一些问题 二、实验原理 在动物、植物、微生物等许多生物机体内，糖的无氧分解几乎都按完全相同的过程进行。本实验以动物肌肉组织中肌糖元的酵解过程为例。 肌糖元的酵解作用，即肌糖元在缺氧的条件下，经过一系列的酶促反应，最后转变成乳酸的过程。肌肉组织中的肌糖元首先磷酸化，经过己糖磷 酸酯、丙糖磷酸酯、甘油磷酸酯、丙酮酸等一系列中间产物，最后生成 乳酸。该过程可综合成下列反应式： 1/n(C6H10O5)n+H O 2CH3CHOHCOOH 2 肌糖元的酵解作用是糖类供给能量的一种方式。当机体突然需要大量的能量，而又供氧不足（如剧烈运动时），则糖元的酵解作用可暂时满足 能量消耗的需要。在有氧条件下，组织内糖元的酵解作用受到抑制，而 有氧氧化则为糖代谢的主要途径。 糖元酵解作用的实验，一般使用肌肉糜或肌肉提取液。在用肌肉糜时，必须在无氧条件下进行；而用肌肉提取液，则可在有氧条件下进行。 因为催化酵解作用的酶系统全部存在于肌肉提取液中，而催化呼吸作用 （即三羧酸循环和氧化呼吸链）的酶系统，则集中在线粒体中。 糖元或淀粉的酵解作用，可由乳酸的生成来观测。在除去蛋白质与糖后，乳酸可以与硫酸共热便成乙醛，后者再与对羟基联苯反应生成紫 罗兰色物质，根据颜色的显现加以鉴定。该法比较灵敏，每毫升溶液含1 ——5ug乳酸即给出明显的颜色反应。若有大量糖类和蛋白质等杂质存 在，则严重干扰测定，因此实验中应尽量除尽这些物质。另外，测定时 所用的仪器应严格地洗干净。 三、实验用品 试剂 1. 材料：鸡或兔的肌肉糜。 2. 试剂： 1) 0.067mol/L磷酸缓冲液(pH7.4)； 2) 对羟基联苯试剂：称取对羟基联苯1．5g溶于100mL 0.5％NaOH中，配成1．5％的溶液。若对经基联苯颜色较深，应用丙酮或无水乙醇重结晶，放置

蛋白提取实验步骤

蛋白提取实验步骤: 1、细胞总蛋白提取 A对于悬浮细胞：离心收集细胞，每106细胞加250 Ul RlPA （在使用前数分钟内加入蛋白酶抑制剂），振荡。如果需要提高 蛋白浓度，可以适当减少细胞总蛋白提取试剂体积。 B对于贴壁细胞： a用TBS冲洗细胞2-3次。最后一次彻底吸干残留液。 b加入适当体积的RIPA （使用前数分内加入蛋白酶抑制剂）于培养板、瓶内3-5分钟。期间反复晃动培养板、瓶，使试剂与细胞充分接触。 c、用细胞刮刀将细胞及试剂刮下，收集到1.5ml离心管中。C冰浴30min，期间用移液器反复吹打，确保细胞完全裂解。 D 12000g离心5min,收集上清，即为总蛋白溶液。 2、组织蛋白提取： A组织块用冷TBS洗涤2-3次，去除血污，剪成小块置于匀浆器。加入10倍组织体积本试剂（使用前数分钟内加入蛋白酶抑制剂）冰上彻底匀浆。如果需要提高蛋白浓度，可以适量减少该试剂体积。 B将匀浆液转移至1.5ml离心管中，振荡。冰浴30min,期间用移液器反复吹打，确保细胞完全裂解。 C 12000g离心5min,收集上清，即为总蛋白溶液。 1、组织尽可能新鲜，若不能及时提蛋白，组织标本应保存在-80 C 冰箱，并避免反复冻融。 2、全程必须在冰上进行，避免蛋白降解。 3、蛋白酶抑制剂在水溶液中不稳定，需在RIPA使用前数分钟加入蛋白酶抑制剂。 4、裂解过程中如有溶液粘稠现象可用移液器（200 μ l ）反复吹打，或再加

入适量裂解液以保证充分裂解。 5、总蛋白溶液不稳定（蛋白酶依旧有活性）可在-80 C短时间保存，建议立即加入蛋白上样缓冲液变性后与-20 C保存，避免反复精品佳作，安心下载，放心使用冻融。

蛋白提取及WB步骤

Western blot 实验 1）蛋白裂解液的配制: Urea（7 M）4.2 g，Thiourea（2 M）1.52 g，CHAPS（4% W/V）0.4 g，DTT （1% W/V）0.1 g，ddH2O加至10 ml，1 ml/管分装-20℃保存备用；1 ml分装的裂解液中用前加入Cocktail（1% V/V）10 μl，混匀后于冰上放置备用。 我们用的是国产的碧云天的全蛋白提取试剂盒 2）蛋白样品制备 （1）取组织，称重，按照W:V = 1:6的比例加入蛋白裂解液； （2）用匀浆器对组织进行匀浆，匀成糊状。 （3）4 ℃，冰上放置30min，每10 min振荡一次； （4）4 ℃，12000 g 离心30 min，吸上清，分装置于-70 ℃待用。 3）蛋白浓度测定（Bradford法） 试剂配制： 考马斯亮蓝染色液：考马斯亮蓝G250 0.05 g，95%乙醇25 ml，H3PO4 50 ml，ddH2O加至500 ml，过滤后储存于4 ℃。 牛血清白蛋白（BSA）：1 mg/ml 步骤：按下列体系配置溶液，混匀后，静置5 min后，测OD值（波长595 nm），将OD值输入Excel进行数据处理，计算出相关系数，当相关系数>0.99才具有可信度。取待测标本，正确设置reference，取适量标本，进行浓度测定。 管号BSA（1 mg/ml）0.9% NaCl/0.1 M PBS 考染液 0 0 200 μl 1 ml 1 5 195 μl 1 ml 2 10 190 μl 1 ml 3 15 185 μl 1 ml 4 20 180 μl 1 ml 5 25 175 μl 1 ml 我们用的是国产碧云天的BCA蛋白浓度测定试剂盒。 4）聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE） （1）凝胶制备： 30.8%丙烯酰胺：丙烯酰胺30 g，甲叉双丙烯酰胺0.8 g，ddH2O加至100 ml，

实验五食品中还原糖的测定

实验五食品中还原糖的测定

实验八食品(炼乳)中还原糖含量的测定

一、实验目的 1、了解食品中还原糖的含量； 2、学习直接滴定法测定还原糖的原理，并掌握其定糖方法。 3、通过对实验结果的分析，了解影响测定准确性的因素。 二、原理， 食品中的还原糖主要指具有还原性的葡萄糖、果糖、戊糖、乳糖、麦芽糖等，还原糖之所以具有还原性，是由于其分子中含有游离醛基(-CHO)或酮基(>C=O)。 测定还原糖的经典化学方法都是以其能被多种试剂氧化为基础的。在这些方法中，以各种根据碱性酒石酸铜溶液氧化作用改进方法的应用最广。本实验就是采用使用碱性酒石酸铜作为氧化剂的直接滴定法。 碱性酒石酸铜溶液A、B二液等体积混合时生成的天蓝色Cu(OH)2沉淀后，立即与酒石酸钾钠起反应生成深蓝色的酒石酸钾钠铜络合物。此络合物与还原糖共热时，二价铜即被还原糖还原为一价的红色氧化亚铜沉淀，氧化亚铜沉淀与亚

铁氰化钾反应，生成可溶性化合物，达到终点时，稍微过量的还原糖将蓝色的次甲基蓝还原成无色，溶液呈淡黄色而指示滴定终点，根据还原糖标准溶液标定碱性酒石酸铜溶液相当于还原糖的质量，以及测定样品液所消耗的体积，计算还原糖含量。反应式如下： CuSO4＋2NaOH→Cu(OH)2↓＋Na2SO4 COOK COOK ││ CHOH CHO │＋Cu(OH)2→│ Cu＋2H2O CHOH CHO ││ COONa COONa COOK COOK │ CHO COOH │ CHO ││ CHOH │ Cu＋(CHOH)4 →(CHOH)4 ＋│＋Cu2O↓ CHO ││ CHOH │ CH2OH CH2OH │ COONa COONa

糖酵解中间产物磷酸丙糖鉴定实验课的研究性教学

龙源期刊网 https://www.wendangku.net/doc/55589815.html, 糖酵解中间产物磷酸丙糖鉴定实验课的研究性教学 作者：杨生妹魏万红陈云 来源：《教育教学论坛》2016年第51期 摘要：本文研究以学生为主体，促进学生自主学习的教学方式，设计新的实验方案，使学生更细致地观察实验现象，深入了解实验原理，巩固已学基本知识，拓展背景知识。 关键词：糖酵解；磷酸丙糖鉴定；研究性教学 中图分类号：G642.0 文献标志码：A 文章编号：1674-9324（2016）51-0265-02 糖酵解途是存在于所有生物体中的非常保守的代谢途径，因而该途径成为动态生物化学部分最重要的教学内容。与此相匹配的实验课教学内容糖酵解中间产物磷酸丙糖的鉴定，因为涉及到有机化学课程中糖的颜色反应、生物化学课程酶的活性中心、必需基团、抑制剂及蛋白质变性剂等内容而成为一个操作相对容易但涉及面很多的实验。因此选定此实验内容作为研究性教学，既可以巩固很多已学的基础知识，也有利于开阔新的视野。现将该实验课研究性教学的过程、特点、意义及学生收获总结如下。 一、教学过程及特点 1.选定实验内容，学生分派任务。因为研究性教学强调调动学生的主观能动性[1]，所有学生所做的实验相同，但分别负责不同实验结果及原理的介绍及解释。 2.进行新的实验设计，细化实验现象，深化实验原理。在原先的讲义中[2]，实验共分三个组（表，原1、原2及原3）。实验步骤为：取干酵母粉约2g于烧杯中，加10ml去离子水，用玻棒搅匀，使其成为混悬液，并严格依次添加试剂（表）。充分反应后，用2，4-二硝基苯肼使丙糖显色。 在本次教学过程中，实验进行了新的分组（表，新1-5）。从表中可以看出，新的实验设计比原先多了两个组，其实就是将原先的第一组（原1）分成了三个组（新1、新2及新3）。新4同原2，新5同原3。 3.在实验结束后，每组派代表进行汇报，所有同学进行讨论。 二、教学意义及学生收获 1.拓展背景知识，了解研究意义。汇报阶段，第一组代表回顾糖酵解途径的发现史、讲解糖酵解的关键步骤。由于所选教科书的内容及课时数限定[3]、在理论课上，学生们无缘学习