安徽省部分地区致病性大肠杆菌耐药性分析_阮祥春
收稿日期: 2012-10-29
作者简介: 阮祥春，男，实验师。E-mail ：rxc@https://www.wendangku.net/doc/58607537.html,
* 通信作者: 曾明华，男，副教授。E-mail ：zmhzmh@https://www.wendangku.net/doc/58607537.html,
安徽农业大学学报, 2013, 40(3): 430-433 Journal of Anhui Agricultural University 网络出版时间：2013-4-26 15:37:18
[URL] https://www.wendangku.net/doc/58607537.html,/kcms/detail/34.1162.S.20130426.1537.021.html
安徽省部分地区致病性大肠杆菌耐药性分析
阮祥春，曾明华*，黄媛媛，孟艳静，李 琳，李 郁
(安徽农业大学动物科技学院，合肥 230036)
摘 要：为了研究临床大肠杆菌对药物的敏感性，从安徽省部分地区病料中分离得到75株致病性大肠杆菌，经分离、纯化、增殖，制成5×107 CFU·mL -1的菌液，采用K-B 法开展了对13种药物的敏感性试验。结果显示，分离株对氨苄西林、阿莫西林、多粘菌素B 耐药菌高达70%以上，对恩诺沙星、氟苯尼考、氧氟沙星、头孢曲松、头孢噻肟的耐药菌株在30%以上，而对阿米卡星、头孢唑肟高度敏感。本试验为临床大肠杆菌病防治有一定意义。
关键词：大肠杆菌；药敏；耐药；抑菌圈
中图分类号：S852.61 文献标识码：A 文章编号：1672?352X (2013)03?0430?04
Drug sensitivity of Esherichia coli in some districts of Anhui Province
RUAN Xiang-chun, ZENG Ming-hua, HUANG Yuan-yuan, MENG Yan-jing, LI Lin, LI Yu
(School of Animal Science and Technology, Anhui Agricultural University, Hefei 230036)
Abstract: In order to investigate drug sensitivity of pathogenic Escherichia coli from animal clinics,75 pa-thogenic Escherichia coli isolates were obtained from 117 samples from 15 districts of Anhui Province. The bac-teria liquid was prepared in the concentration of 5×107 CFU·mL -1 after isolation, purification and proliferation, to analyze its sensitive to 13 drugs by K-B method. The inhibition zones were determined after overnight cultivation. The results showed that the rates of drug resistant strains were above 70% to ampicillin, amoxicillin and poly-myxin B, above 30% to enrofloxacin, florfenicol, ofloxacin, ceftriaxone and cefotaxime, and sensitive to amikacin and ceftizoxime. The investigation demonstrated that it is necessary for rational use of antimicrobial agents for the control of colibacillosis in pigs and chickens.
Key words: Escherichia coli ; drug sensitivity; resistance; inhibition zone
大肠杆菌病是由大肠埃希氏菌(Escherchia coli )
的某些血清型菌株所引起的一类疾病的总称。本试
验采集安徽蚌埠、淮南、肥西、绩溪、亳州、滁州、明光、五河、庐江、肥东、金寨、全椒、凤台、合
肥、长丰地区疑似大肠杆菌病的鸡、猪病料117份，进行药敏试验，试图了解当地耐药谱型等特点，为
安徽省合理应用抗菌药物防治畜禽大肠杆菌病提供
科学依据。
1 材料与方法
1.1 材料 1.1.1 病料来源 病料来源于安徽各养殖场及养殖户送检的疑似大肠杆菌发病的鸡与猪的病料。
1.1.2 培养基 营养琼脂、营养肉汤、麦康凯、伊红美兰琼脂均购于北京奥博星生物科技有限公司。 1.1.3 药敏试纸 阿米卡星、大观霉素、头孢唑肟、恩诺沙星、氟苯尼考、庆大霉素、氧氟沙星、头孢
曲松、头孢他啶、头孢噻肟、氨苄西林、阿莫西林、多粘菌素B 药敏试纸片，微量生化发酵管均购自杭
州天和微生物试剂有限公司。 1.2 方法 1.2.1 病原菌的分离纯化及生化试验 取疑似患大肠杆菌的病料，无菌操作接种于伊红美兰琼脂平板
上，置37 ℃培养18～24 h ，挑出黑色带金属光泽
菌落，反复纯化后，穿刺接种三糖铁培养基中进行初步的生化反应鉴定。 三糖铁试验中，通过对S
/H /2产酸底面斜面观察，结果
40卷3期
阮祥春等: 安徽省部分地区致病性大肠杆菌耐药性分析 431
为-
(-)/A(K)/A +为符合大肠杆菌特点，其中A=产酸（黄
色），K=产碱（红色），+阳性，-阴性，（）偶尔可见的反应。
1.2.2 常规生化鉴定 符合大肠杆菌特点的进一步进行常规12项生化反应鉴定。
1.2.3 药敏试验 对鉴定为致病性大肠杆菌菌株进行增殖培养18 h 后，收集并制成5×107 CFU·mL -1
大肠杆菌菌液[1-2]。采用K-B 法开展试验。具体操作如下：用移液器吸取100 μL 的菌液，菌液均匀涂布平皿培养基上，贴上药敏纸片后将平皿培养基置于37℃温箱中培养18 h 后，观察并测量抑菌圈大小。13种药物判断标准参考美国临床实验室标准委员会（NCCLS ）药敏纸片扩散法规（见表1），并统计耐药菌株百分率[3-4]。
表 1 药敏纸片的种类及判定标准抑菌圈直径
Table 1 Categories of sensitivity slips and judgement standard of inhibition zone diameter
药物编号 Drug No. 药物 Drug name 纸片浓度/μg Drug amount in slip 中介度/mm Mesomerism grade
1 阿米卡星（AN ） 30 15～16
2 大观霉素（SPT ） 100 15～16
3 头孢唑肟（CZA ） 30 14～20
4 恩诺沙星（ENR ）
5 16～20 5 氟苯尼考（FLR ） 75 17～19
6 庆大霉素（GM ） 10 13～14
7 氧氟沙星（OFX ） 5 14～1
8 8 头孢曲松（CRO ） 30 14～20
9 头孢他啶（CAZ ） 30 14～20 10 头孢噻肟（CTX ） 30 14～20 11 氨苄西林（AMP ） 10 19～25 12 阿莫西林（AMX ） 10 14～16 13 多粘菌素B （PB ） 300 16～23 注：抑菌圈高于中介度判为敏感，低于中介度为耐药,在中间的为中度敏感。
Note: The strains with inhibition zone diameters bigger than the mesomerism are judged as drug-sensitivity, smaller than the mesomerism are judged as drug-resistance, and those in the middle are considered as medium sensitivity.
2 结果与分析
2.1 耐药性试验
对75株分离菌用13种抗菌药进行药敏试验，结果见表2。由表2可以看出，分离的大肠杆菌对各类抗菌药敏感性有较大差异。本研究分离获得的
大肠杆菌菌株耐药性强，耐药谱广，对所有试验药物均存在耐药菌株，其中对恩诺沙星、氟苯尼考、氧氟沙星、头孢曲松、头孢噻肟药物的耐药菌株在30%以上，对氨苄西林、阿莫西林耐药菌株比例在70%以上,对多粘菌素B 则高达100%，而对阿米卡星、头孢唑肟菌株呈高度敏感。
表 2 75株大肠杆菌耐药性试验统计
Table 2 Statistics of drug resistance of 75 E.coli strains
药物编号 Drug No. 敏感株数 Sensitivity strain 中敏株数 Middle sensitivity strain
耐药率/% Drug-resistance rate
1 69 1 6.67
2 56 6 17.3
3 3 53 15 9.33
4 40 10 33.33
5 45 1 38.67
6 55 6 18.6
7 7 44 5 34.67
8 27 11 49.33
9 15 38 29.33 10 17 15 57.33 11 1 2 96.00 12 1 2 96.00 13 0 0
100
432安 徽 农 业 大 学 学 报2013年
表 3 75株大肠杆菌耐药表型分析
Table 3 Analysis of 40 resistant phenotypes of 75 E.coli strains
编号 No.
菌株号
Strains No.
耐药表型
Drug-resistant phenotype
耐药种数
Drug-resistant No.
1 48 PB 1
2 4
3 AMX-PB 2
3 17、27、30、44、46 AMP-AMX-PB 3
4 33 SZA-SAZ-PB 3
5 42 FLR-AMX-PB 3
6 3、50、69 CRO-AMP-AMX-PB 4
7 7 FLR-CAZ-AMX-PB 4
8 9 FLR-AMP-AMX-PB 4
9 19、29 CAZ-AMP-AMX-PB 4
10 22、40、45、58、59 CTX-AMP-AMX-PB 4
11 25、26、31 CZA-AMP-AMX-PB 4
12 41 ENR-AMP-AMX-PB 4
13 20、47 CAZ-CTX-AMP-AMX-PB 5
14 21、23、24、36、51、52、53 CRO-CTX-AMP-AMX-PB 5
15 34、54、55、56、57 SAZ-CTX-AMP-AMX-PB 5
16 2 FLR-CRO-CTX-AMP-AMX-PB 6
17 13 ENR-FLR-OFX-AMP-AMX-PB 6
18 15、35 SPT-FLR-GM-AMP-AMX-PB 6
19 16 SPT-ENR-FLR-AMP-AMX-PB 6
20 18、38 CRO-CAZ-CTX-AMP-AMX-PB 6
21 32 SPT-GM-OFX-AMP-AMX-PB 6
22 37 FLR-CAZ-CTX-AMP-AMX-PB 6
23 39 SZA-CRO-CAZ-AP-AMX-PB 6
24 63 ENR-GM-OFX-AMP-AMX-PPB 6
25 70 ENR-OFX-CRO-AMP-AMX-PB 6
26 4、11 ENR-FLR-GM-OFX-AMP-AMX-PB 7
27 12、14 SPT-ENR-FLR-OFX-AMP-AMX-PB 7
28 28 FLR-GM-OFX-CTX-AMP-AMX-PB 7
29 49 ENR-OFX-CRO-CTX-AMP-AMX-PB 7
30 73、75 SPT-ENR-GM-OFX-AMP-AMX-PB 7
31 1 SPT-FLR-OFX-CRO-CTX-AMP-AMX-PB 8
32 5、6、8 ENR-FLR-OFX-CRO-CTX-AMP-MX-PB 8
33 62 AN-SPT-GM-CRO-CTX-AMP-AMX-PB 8
34 67 SPT-SZA-ENR-OFX-CRO-AMP-AMX-PB 8
35 71 FLR-GM-OFX-CRO-CTX-AMP-AMX-PB 8
36 74 ENR-FLR-CRO-SAZ-CTX-AMP-AMX-PB 8
37 61、68 ENR-FLR-GM-OFX-CRO-CTX-AMP-AMX-PB 9
38 72 SPT-ENR-FLR-GM-OFX-CRO-CTX-AMP-AMX-PB 10
39 10、60、65 AN-SPT-ENR-FLR-GM-OFX-CRO-CAZ-CTX-AMP-AMX-PB 12
40 64、66 AN-SZA-ENR-FLR-GM-OFX-CRO-SAZ-CTX-AMP-AMX-PB 12
2.2耐药表型分析
所分离的75株大肠杆菌中存在40个耐药表型见表3所示。
2.3多重耐药性细菌分析
对75株大肠杆菌进行了多重耐药情况分析，结果见图1所示。
由图1可知，耐4、5、6种抗菌素的所占的比例较大，分别占到21.33%、18.67%和16.00%，耐3、
40卷3期阮祥春等: 安徽省部分地区致病性大肠杆菌耐药性分析433
7、8种抗菌素的居中，分别占到9.33%、10.67%和10.67%，耐1、2、9及10的较少。但值得注意的是，耐12种抗菌素的有5株，占到6.67%，已经出现了超强的耐药性。
图 1 75株大肠杆菌多重耐药情况
Figure 1 The information of multidrug resistance to 75 E.coli strains
3 讨论
大肠杆菌耐药性发生的普遍原因主要是不合理使用抗菌药,不能在正确诊断疾病的基础上给药，很少有人在做药敏试验后再选择敏感的抗菌药物,从而滥用抗菌药物,这种滥用主要表现在不能有效地掌握用药品种、剂量、疗程和用药时机等。目前我国猪、鸡大肠杆菌耐药严重，应根据病原选择合适的药物治疗,不可盲目用药。应分离病原并开展药敏试验, 以针对性地选择药物,从而减少或延缓细菌耐药性的产生[5-6]。
本试验测试的13种抗菌药中耐药率达到70%以上的有3种，建议这3种抗菌药暂停使用；耐药率在30%～70%之间有5种，包括兽用的氟苯尼考，说明临床在广泛使用该药后，已经产生了较大的耐药性，在选用时应考虑作为次选药物；耐药率在30%以下的药物有5种，为阿米卡星、大观霉素、头孢唑肟、庆大霉素、头孢他啶，但使用时应注意方法，尽管这5种药物应用时间不长，但从生化分析结果中可看出，耐药性已开始出现。
对此75株大肠杆菌所作的13种抗菌药敏试验结果表明,75株大肠杆菌对13种抗菌药物均表现出不同程度的耐药性, 这可能与近年来长期大剂量使用这些药物有密切关系, 因此在临床用药或在饲料中添加药物时要注意, 尽量不要长期使用某几种药物, 应针对性选用敏感药物, 还应考虑采用联合用药、交叉用药或轮换用药等方法。另外由于大肠杆菌耐药菌株的大量出现, 许多昔日有效的药物渐无效或低效, 所以应停止使用已普遍产生耐药性、临床上已明显无效的药物, 选用目前应用较少、经药敏试验证明对大肠杆菌敏感或高敏的药物方能取得良好效果。另外还应采取综合防治措施, 加强饲养管理, 投药与应用大肠杆菌多价疫苗相结合, 能起到良好的防治效果[7-8]。
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