试验步骤--土壤氮的测定
试验步骤
目录
1、土壤pH 值的测定 (2)
2、土壤温湿度的测定 (3)
3、土壤有机质的测定 (3)
4、全氮的测定 (3)
5、无机氮（铵态氮、硝态氮）的测定 (4)
6、可溶性有机氮 (4)
7、微生物生物量氮的测定 (4)
8、土壤酶活性的测定 (5)
【1】土壤脲酶测定 (5)
【2】蛋白酶活性的测定 (7)
【3】硝酸还原酶 (8)
【4】亚硝酸还原酶 (9)
【5】羟胺还原酶 (10)
1、土壤pH值的测定
用电位法测定土壤 pH值，水与土之比为 2.5：1。测定步骤如下：
1.待测液的制备：称取通过2mm筛孔的风干土样10g于50m1高型烧杯中，加入25ml无二氧化碳的水或 1.0mol/L氯化钾溶液（酸性土壤测定用）或 0.01mol/L氯化钙溶液（中性、石灰性或碱性土测定用）。枯枝落叶层或泥炭层样品称5g，加水或盐溶液50ml。用玻璃棒剧烈搅动1-2min，静止30min，此时应避免空气中氨或挥发性酸的影响。
2.仪器校正：（以雷磁25型酸度计为例）
①接通电源，按仪器要求预热。量程开关层指向7-10或7-14档。
②装上已在蒸馏水中浸泡24h的指示电极——玻璃电极及参比电极——甘汞电极。
③校正。
a．将选择开关置于“pH”档位置。
b．将两电极插入装有标准缓冲液（如待测液为近中性，用pH6.86标准缓冲液；待测液为碱性，用 pH9.18标准缓冲液；待测液为酸性，用 pH4.01标准缓冲液）烧杯中。
c．温度补偿器尖头旋钮应指于待测液的温度位置。
d．将量程开关置于“7-0”档，或“7-14”档。
e．调零点调节器，使指针在pH 7位置。
f．按下读数开关，调节定位调节器，使指针指在标准缓冲液pH值位置。
g．放开读数开关，指针应在7处，如有变动，则调节零点调节器至7处，用蒸馏水冲洗电极。
3.测定
①用滤纸将附于电极上的剩余溶液吸干。
②将甘汞电极插在上部清液中，玻璃电极插入土壤悬液中，检查零位。
③按下读数开关，指针所指即为溶液的pH值。如指针在0-7的左端，可改选7-14的位置。一个待测液至少要重复测两次，取其平均值。
④测定完毕后，放开读数开关。冲洗电极，将所有按钮复原，拔去电源，取下电极，将玻璃电极浸入蒸馏水中，甘汞电极盖好塞子和套子后可装人盒内。
2、土壤温湿度的测定
对4种林型5cm、10cm、20cm、30cm深处的土壤温度T
5、T
10
、T
20
、T
30
以及土壤湿度W
1
、
W 2、W
3
、W
4
，设置1h测定一次。
3、土壤有机质的测定
称0.25g风干土，包在锡纸中，用TOC测定。
4、全氮的测定
采用AA3连续流动分析仪测定土壤全氮的含量。测定步骤如下：
1、消煮：
称取通过60号筛的风干土土壤样品0.5g左右(精确到0.000 1 g)，加入5 ml浓硫酸和1.85 g混合催化剂。如果用100 ml 刻度消煮管消解土壤样品，定容后可取上清液直接上机测定。（混合催化剂：硫酸钾-硫酸铜-硒按照100:10:1的质量比配置，均匀混合后研磨，通过80号筛，贮于瓶中）。
注：60号筛的筛孔直径是0.25mm；
全自动消解仪一般是150度消化60分钟，250度60分钟，400度120分钟。
2、上机
3、结果计算
式中：——土壤全氮的质量分数，%；
——上机测试结果，mg ·L-1；
V ——定容体积，mL ；
10-3——将mL 换算成L 的系数；
10-3——将mg 换算成g 的系数；
100——换算成百分含量； ——土壤质量，g 。
5、无机氮（铵态氮、硝态氮）的测定
1、称10g （精确到0.01g ）过2 mm 筛孔新鲜土样于250 mL 广口瓶内，加入1 mol/L 氯化钾100 ml （74.5g 氯化钾加去离子水定容到1L ），塞紧瓶塞，至于振荡器上室温震荡1小时（200-250r/min ）。定性滤纸过滤，滤液于24小时内分析，否则将滤液贮存于冰箱备用。
2、上机
3、结果计算
1000
10100c )(3
???=-m N ω
式中：)(N ω——土壤中某无机氮的质量分数，mg ·kg-1；
c ——上机测试结果，mg ·L-1；
100——氯化钾体积，mL ；
10-3——将mL 换算成L 的系数； 1000——换算成每kg 土含量； m ——土壤质量，g 。
6、可溶性有机氮
TOC 测浸提未熏蒸的土壤得可溶性总氮、铵态氮、硝态氮。 可溶性有机氮=可溶性总氮-可溶性无机氮（铵态氮+硝态氮）
7、微生物生物量氮的测定
使用氯仿熏蒸浸提-淹水培养法测定。测定步骤如下：
100
1010c )(3
-3-????=m V N ）（ω)(N ωc m
一、试剂配制
1 去乙醇氯仿的配制：在通风櫉中，量取100 ml氯仿至500ml的分液漏斗中，加入200ml 的去离子水（氯仿:去离子水=1:2），加塞，上下振荡10下，打开塞子放气，而后加塞再振荡10下，反复3次，将分液漏斗置于铁架台上，静止溶液分层，打开分液漏斗下端的阀，将下层溶液（即氯仿）放入200 ml的烧杯中，将剩余的溶液倒入水槽，用自来水冲洗。再将烧杯中的氯仿倒入分液漏斗中，反复3次。将纯化后的氯仿倒入棕色瓶中，加入无水CaCl
2
10g，置于低温（4℃）、暗处保存。
注：氯仿具有致癌作用，必须在通风櫉中进行操作。普通氯仿试剂一般含有少量乙醇作为稳定
剂，使用前需除去。纯化后的氯仿加入无水CaCl
2
，以除去氯仿中的水分。
2 0.5 mol/L K
2SO
4
溶液：称取K
2
SO
4
87.13g溶解于去离子水中，搅拌溶解（可加热），定
容至1 L。
二、操作步骤
1. 熏蒸试验：称取20.00 g的过2 mm筛的新鲜土样（如土壤湿度过大，只能借助镊子挑初土壤样品的动、植物残体等杂物，排除其对结果的影响），放入100 ml 的烧杯中，置于真空干燥器中，并放置盛有60 ml左右的去乙醇氯仿烧杯3-5个，烧杯内放入少量的沸石，真空干燥器底部加入少量水和稀碱(1 mol/L NaOH)。盖好盖子，用少量凡士林密封干燥器，用真空泵抽成真空，真空度控制在-0.07Mpa以下，使氯仿沸腾，并持续2-5 min，先关闭真空干燥器的阀门，再关闭真空泵。将真空干燥器放入25 ℃的培养箱中，保持24 h 。熏蒸结束打开干燥器阀门时应听到空气进入的声音，否则为熏蒸不彻底，应重做。培养结束后，取出氯仿（氯仿倒回贮存瓶，可再次使用），反复抽真空（-0.07Mpa；5-6次，每次3min），直到土壤无氯仿味为止。每次抽真空后，最好完全打开干燥器，以加速去除氯仿的速度。
2. 空白试验：熏蒸的同时，另称取等量的土壤，不熏蒸，作为对照土壤，直接浸提。
3. 0.5 mol/L K
2SO
4
溶液浸提：处理后的土壤加入0.5 mol/L K
2
SO
4
溶液40 ml（水:土=2:1,
有文献说明此比例提取的微生物碳浓度大，测定结果的变异系数小（林启美,吴玉光,刘焕龙.熏蒸法测定土壤微生物量碳的改进. 生态学杂志 1999,18(2):63-66.）) ，振荡30 min (25℃，200 r/min)后迅速用中速定量滤纸过滤，滤液立即测定或放入-18℃下保存。注意：提前液保存时间过长（>20h）会导致测定结果下降。低温（-18℃）下保存的土壤提取液，解冻后会出
现一些白色沉淀（CaSO
4或K
2
SO
4
结晶），对测定结果没有影响，不必除去，但取样前应充分摇
匀。
8、土壤酶活性的测定
测定与土壤氮素相关的酶活性：【1】土壤脲酶测定
苯酚-次氯酸钠比色法测定土壤脲酶活性
1分析、方法及原理
（1）分析意义
脲酶广泛存在于土壤中，是研究得比较深入的一种酶。脲酶酶促产物——氨是植物氮源之一。尿素氮肥水解与脲酶密切相关。有机肥料中也有游离脲酶存在。同时，脲酶与土壤其他因子(有机质含量、微生物数量)有关。研究土壤脲酶转化尿素的作用及其调控技术，对提高尿素氨肥利用率有重要意义。
（2）方法选择及原理
脲酶是一种专性较强的酶，它能酶促尿素水解生成氨、二氧化碳和水。Rotini(1935)首先提出研究测定土壤脲酶。测定脲酶的方法有很大发展，常用的方法是比色法。
比色法:本法以尿素为基质，根据脲酶酶促产物一氨在碱性介质中，①与奈氏试剂作用生成黄色的碘化双汞铵。该生成物数量与氨量相关。
②与苯酚一一次氯酸钠作用(在碱性溶液中及在亚硝基铁氰化钠催化剂存在下)生成蓝色的靛酚。该生成物数量与氨浓度成正比。
反应式如下:
NH
3+NaOClNH
2
Cl + NaOH
NH
2Cl+ C
6
H
5
OH + NaOHNH
2
C
6
H
4
OH+NaCl+H
2
O
NH
2C
6
H
4
OH+ NaOClNHC
6
H
4
O+ NaCl+H
2
O
NHC
6H
4
O+NaOClOC
8
H
4
NCl+ NaOH
OC
8H
4
NCl+ C
6
H
5
OH+ 2NaOHOC
6
H
4
NC
6
H
4
ONa （靛酚）+ NaCl+H
2
O
此法的结果精确性较高，重现性较好。
【1 方法原理
脲酶存在于大多数细菌、真菌和高等植物内。它是一种酰胺酶作用是极为专性的，它仅能水解尿素，水解的最终产物是氨、二氧化碳和水。土壤脲酶活性与土壤的微生物数量、有机物质含量、全氮和速效磷含量呈正相关。根际土壤脲酶活性较高，中性土壤脲酶活性大于碱性土壤，所以人们常用土壤脲酶活性表征土壤氮素的状况。
土壤中脲酶活性的测定是以尿素为基质经酶促反应后测定生成的氨量，也可以通过测定为水解的尿素量来求得。本方法以尿素为基质，根据酶促产物氨在强碱性介质与苯酚——次氯酸钠的作用生成蓝色的靛酚，其颜色深浅与溶液中的NH
4
+-N含量成正比，进而分析脲酶活性。】
2 试剂和材料
（1）甲苯分析纯。
（2） 10%尿素:称取10g尿素，用水溶至100ml。
（3）柠檬酸盐缓冲液(pH6.7)：
取184g柠檬酸溶于300ml蒸馏水中，另取147.5g氢氧化钾溶于适量蒸馏水中，再将二种溶液合并，加蒸馏水至950ml左右,用1 mol/L NaOH将pH调至6.7,最后用蒸馏水定容到1000ml。
（4）苯酚钠溶液(1.35 mo/L)：
称62.5g苯酚溶于少量无水乙醇中，加2ml甲醇和18.5ml丙酮，然后用无水乙醇稀释至100ml (A溶液)，保存于冰箱中。称27g NaOH溶于100 ml水中(B溶液)，保存在冰箱中。使用前，取A、B两种溶液各20 ml混合，用蒸馏水稀释至100 ml备用.
（5）次氯酸钠溶液:
用水稀释试剂，至活性氯的浓度为0.9%，溶液稳定。 (根据分析纯原有活性氯含量而定) （6）氮的标准溶液:
精确称取0.4717g硫酸铵溶于水并稀释至1000ml,得到1 ml含有0.1 mg氮的标准液。
3 分析步骤
标准曲线的测定：
将标准溶液稀释10倍(吸取10 ml标准液定容至100 mI)制成氮的工作液(0.01mg/ml)。从其中分别吸收0、1、3、5、7、9、11、13ml移至50 ml容量瓶，然后加蒸馏水至20 ml,再加入4 ml苯酚钠溶液，充分混合。紧接着加入3 ml次氯酸钠，随加随摇匀，放置20 min后显色，用蒸馏水稀释至刻度。1 h内将显色液在可见分光光度计上于波长578nm处比色，以1cm 比色皿进行比色测定，以试剂空白为参比。然后以氮工作浓度为横坐标，吸光值为纵坐标，绘制标准曲线。
测定步骤：
称取5g风干土，置于50 ml三角瓶中，加1 ml甲苯，轻轻摇匀，15 min后加10 ml 10%尿素溶液和20 ml柠檬酸盐缓冲液（pH6.7），并摇匀。然后放入37℃恒温箱中，培养24 h。培养结束后过滤，取3ml滤液加入50 ml容量瓶中，然后加蒸馏水至20 ml,再加入4 ml苯酚钠溶液，充分混合。紧接着加入3 ml次氯酸钠，随加随摇匀，放置20 min后显色，用蒸馏水稀释至刻度。溶液呈靛酚的蓝色（在1 h内保持稳定）。1 h内将显色液在分光光度计上于578 nm波长处进行比色。
4结果计算
--N的质量（mg）表示土壤脲酶活性（Ure）
以24小时后1g土壤中NH
3
Ure＝a·2
－－N质量（mg）；
式中：a为由标准曲线求得的NH
3
2为换算成1g土的系数。
【2】蛋白酶活性的测定
1.分析意义
蛋白酶参与土壤中存在的氨基酸、蛋白质以及其他含蛋白质氮的有机化合物的转化。它们的水解产物是高等植物的氮源之一。土壤蛋白酶在剖面中的分布与蔗糖酶相似，酶活性随剖面深度而减弱。并与土壤有机质含量、氮素及其他土壤性质有关。
2.方法选择与原理
蛋白酶能酶促蛋白物质水解成肽，肽进一步水解成氨基酸。
测定土壤蛋白酶常用的方法是比色法，根据蛋白酶酶促蛋白质产物一氨基酸与某些物质
(如铜盐蓝色络合物或茚三酮等)生成带颜色络合物。依溶液颜色深浅程度与氨基酸含量的关系，求出氨基酸量，以表示蛋白酶活性。比色法要求获得透明的滤液，故悬液离心( 6000转/min)效果较好，否则影响测定结果。
3试剂配制
(1) 1%酪素溶液：用pH7.4的0.2M磷酸盐缓冲液配制。
(2) 0.1N硫酸。
(3) 20%硫酸钠。
(4) 2%茚三酮液：2g 茚三酮溶于100ml丙酮。
(5)甲苯。
(6)甘氨酸标准榕液:
取0.1g甘氨酸溶于水中，定容1L，则得1ml含0.02mg氨基氮的标准溶液。再稀释10倍制成工作液。
标准曲线的绘制:
分别吸取工作液1、3、5、7、9、11ml移于50ml容量瓶中，加1ml茚三酮(注)，冲洗瓶颈后在沸水浴上加热10min,将获得的着色溶液用蒸馏水稀释至刻度。在分光光度计上于500nm 波长处比色测定颜色深度。以光密度为纵坐标，以氨基氮浓度为横坐标，绘制曲线。
4操作步骤
称4g风干土，置于50ml三角瓶中，加20ml1%酪素液和1ml甲苯，小心振荡后用木塞盖紧，在30℃恒温箱中培养24h。培养结束后，于混合物中加2ml 0.1N硫酸和12ml20%硫酸钠液，以沉淀蛋白质，然后离心15min(6000转/min)。取上清液2ml,置于50ml容量瓶中，加1ml 茚三酮(注)，冲洗瓶颈后在沸水浴上加热10min,将获得的着色溶液用蒸馏水稀释至刻度。在分光光度计上于500nm波长处比色测定颜色深度。
每个土样均要做无基质对照，以除掉土壤原来含有的氨基氮而引起的误差。整个试验要做无土壤对照。
5结果计算
蛋白酶活性，以24h后1g土壤中氨基氮的质量（mg）表示。
Ure=a·5
式中：a为从标准曲线求得氨基氮质量（mg）；
5为换算成1g土的系数。
（注）：茚三酮比色法测蛋白酶，也可以由无水乙醇作沉淀剂。
方法如下：培养结束后，过滤培养物，取5m1滤液，加20ml无水乙醇，以沉淀未经水解的基质。摇动后，静止5min后再过滤。吸1--2m1滤液，置于50ml容量瓶中，加1m12%茚三酮液，加热着色，稀释至刻度，然后比色测定。
【3】硝酸还原酶
1分析意义
硝酸盐还原酶和亚硝酸还原酶能酶促土壤硝态氮还原成氨。测定这些酶可了解土壤氮素转化中脱氨作用强度。硝酸还原酶还参与土壤中铁的还原作用。
2方法原理
土壤中硝酸盐在硝酸盐还原酶、亚硝酸还原酶和羟胺还原酶作用下转化成氨。反应式如
下:NO
3-NO
2
-NH
2
OHNH
4
+
在存在氢的供体时及厌气条件下，测定反应前后硝酸态氮与酚二磺酸作用的蓝色反应差数，
用于表示硝酸还原酶活性(蓝色物质颜色深度与硝酸态氮量相关)。
3试剂配制
(1) 1%KNO
3
溶液。
(2) 1%葡萄糖。
(3) CaCO
3
。
(4)铝钾矾饱和溶液。
(5)酚二磺酸:
取3g重蒸酚与37g (20.1ml)浓H
2SO
4
混合，在沸水浴上回流加热6h即成。
(6) 10% NaOH。
(7) KNO
3
标准溶液:
精确称取16.3052g重结晶KNO
3溶于蒸馏水中并稀释至1L (1ml含10mgNO
3
--N)。使用前，
将标准液再进行稀释(1ml含0.1mgNO
3
--N)。
标准曲线绘制:
吸取50mlKNO
3
标准溶液，置于瓷皿中，在沸水浴上蒸干，残渣用2ml酚二磺酸处理10min。
再加15ml蒸馏水，定容500ml(1ml含0.01mgNO
3
--N)。吸取此溶液5-40ml于50ml容量瓶中，用10%NaOH调至微黄色，定容后在分光光度计上于400——500nm处进行比色。以光密度值为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。
4操作步骤
取1g土壤置于100ml减压三角瓶中，加20mgCaCO
3和1ml 1%KNO
3
。仔细混合后，加1ml
葡萄糖(作为氢的供体)。将此混合液抽气3min,稍摇荡三角瓶，置于30℃恒温箱中培养24h。
培养结束后，加50ml水、1ml铝钾矾液。取20ml液移于瓷皿上蒸干。加1ml酚二磺酸处理10min,加15ml水，再加10%NaOH调至碱性。将着色液转至50ml容量瓶中，定容、比色(波长为400——500nm)。
用灭菌土壤(180℃加热3h)作对照。
5结果计算
硝酸还原酶的活性，以24h后，10g土壤中被还原的NO
3
—N的质量（mg）表示。
【4】亚硝酸还原酶
1方法原理
通过亚硝酸盐与Tpucc试剂反应，测定酶促反应前后NO
3
--N的变化量，用以表示亚硝酸还原酶活性。
2试剂配制
(1) 0.5%NaNO
2
溶液。
(2) 1%葡萄糖。
(3) CaCO
3
。
(4)铝钾矾饱和溶液。
(5) Tpucc试剂:
用比重为1.04的醋酸分别配制0.1%α-萘胺溶液(a)和0.5%对-氨基苯磺酸溶液(b)，用前将等体积(a)、(b)液混合即成。
(6)亚硝酸钠标准溶液:
准确称取0.1500gNaNO
2
溶于1ml蒸馏水中。使用前稀释100倍配制成工作液(1ml 含
0.001mgNO
2
)。
标准曲线绘制：
取工作液1——10ml移于50ml容量瓶中，加4mlTpucc试剂。15min后定容比色测定(波长为550——600nm)。以光密度值为纵坐标，浓度为横坐标绘制标准曲线。
3操作步骤
称1g土壤置于100ml减压瓶中。加20mgCaCO
3，仔细混合。加入1ml0.5%NaNO
2
溶液和1ml
1%葡萄糖溶液(作为氢的供体)。将此混合液抽气3min,稍摇荡三角瓶，置于30℃恒温箱中培养24h。用灭菌(180℃,3h)土壤加2 ml水作为对照，同时作试剂空白对照(不加土壤，其余同样品处理)。实验设3次重复。培养结束后，往瓶中加入50ml蒸馏水和2ml铝钾矾饱和试剂，并将悬液用致密滤纸过滤，吸取1ml滤液移于50ml容量瓶中，加5ml蒸馏水和4mlTpucc试剂，显色后定容，比色。
4结果计算
亚硝酸还原酶活性，以24h后，10g土壤中被还原的NO
2
-N的质量（mg）表示。
【5】羟胺还原酶
1方法原理
羟胺还原酶可将土壤氮代谢过程中形成的中间产物羟胺还原成氨。
通过羟胺与醋酸酐、氯化铁的生色反应，计算羟胺与土壤作用后剩余的未被还原的量，用于表示羟胺还原酶活性。
2试剂配制
(1) 0.5%NH
2
OH·HCl水溶液（盐酸羟胺）。
(2) CaCO
3
。
(3) 1%葡萄糖。
(4)铝钾矾饱和溶液。
(5)醋酸酐。
(6) 1M（1mol/L） FeCl
3
。
(7)羟胺的标准溶液:
准确称取2.1046gNH
2
OH·HC1溶于1L水中(1ml 含1mg羟胺)。再将此溶液稀释10倍(1ml 含0.1mg羟胺)。
标准曲线绘制:
取不同浓度的标准溶液 10ml移于50ml容量瓶中，加0.5ml醋酸酐和0.4ml 1M FeCl
3
溶液，仔细摇匀后定容。在分光光度计上于600nm处比色测定。以光密度值为纵坐标，浓度为横坐标绘制标准曲线。
3操作步骤
取1g土壤置于100ml减压瓶中。加20mgCaCO
3,混合后加1ml 0.5%NH
2
OH·HCI溶液和1ml1%
葡萄糖溶液(作为氢的供体)。将此混合液在10-12 mmHg的压力下抽气3min（抽出瓶中空气），将瓶仔细摇荡后置于30℃恒温箱中培养24h。用灭菌(180℃,3h)土壤加2 ml水作为对照，同时作试剂空白对照(不加土壤，其余同样品处理)。实验设3次重复。培养结束后，往瓶中加入50ml蒸馏水和2ml铝钾矾饱和试剂，并将悬液用致密滤纸过滤，吸取滤液10ml移于50ml容量瓶中，加0.5ml醋酸酐和0.4ml 1M FeCl
3
溶液，仔细摇匀后定容。在分光光度计上于600nm 处比色测定。
4结果计算
羟胺还原酶活性，以24h后10g土壤中被还原的羟胺的质量（mg）表示。
浓硫酸5ml
（硫酸钾：硫酸铜：硒=100：10：1）1.85g
氯化钾74.5g-1L（100ml）
无水氯化钙10g
硫酸钾87.13g-1L（40ml）
氢氧化钠1mol/L
甲苯分析纯1ml
尿素10g-100ml（10ml）
柠檬酸184g
氢氧化钾147.5g（柠檬酸+氢氧化钾-1L）（20ml）
氢氧化钠1mol/L
苯酚62.5g
无水乙醇
甲醇2ml
丙酮18.5ml（苯酚+甲醇+丙酮+无水乙醇-100ml）（20ml）（4ml）
氢氧化钠27g-100ml（20ml）
次氯酸钠（用水把浓度调到0.9%）3ml
硫酸铵0.4717g-1L
磷酸盐缓冲液0.2mol/L（20ml）【pH=7.4时，0.2M磷酸二氢钠液（27.8g/L）取19ml；0.2M磷酸氢二钠液(53.65g/L)取81ml；混均即得】
硫酸0.1mol/L（20ml）
硫酸钠20%（12ml）
茚三酮2g（1ml）
丙酮100ml
甘氨酸0.1g-1L
硝酸钾16.3052g-1L /（1ml 1%）
葡萄糖1ml+1ml+1ml【1%：1g葡萄糖-100ml】
碳酸钙20mg+20mg+20mg
铝钾矾饱和溶液1ml+2ml+2ml
重蒸酚3g
浓硫酸37g/20.1ml
氢氧化钠
亚硝酸钠0.1500g-1ml /（1ml 0.5%）
醋酸
α-萘胺溶液
对-氨基苯磺酸溶液（对氨基苯磺酸－α－萘胺试液：取无水对氨基苯磺酸0.5g,加醋酸150ml溶解后，另取盐酸－α－萘胺0.1g，加醋酸150ml使溶解，将两液混合，即得。本液久置显粉红色，用时可加锌粉脱色。）盐酸羟胺2.1046g-1L /（1ml 0.5%）
醋酸酐0.5ml
氯化铁0.4ml 1mol/L
土壤水解性氮测定4
土壤水解性氮的测定 (碱解扩散法) 1 方法原理 在扩散皿中，土壤于碱性条件下水解，使易水解态氮转化为NH 3，扩散后为H 3B03所吸收。H 3B03吸收液中的NH 3再用标准酸滴定，由此计算碱解氮的含量。 2 仪器设备 恒温培养箱；扩散皿；滴定管；移液器等 3 试剂配制 3.1 1mol ·L -1 Na0H 溶液：40.0克Na0H （三级）溶于水，冷却后，定容至1升。 3.2 2%H 3B03指示剂： 20g 纯 H 3B03加水700毫升稍稍加热溶解之，冷却后，转移至1000毫升容量瓶中，加入200ml95%乙醇和20毫升混合指示剂（0.066克溴甲酚绿和0.033克甲基红于玛瑙研钵中，加入少 量95%乙醇，研磨至指示剂全部溶解后，用95%乙醇定容至100毫升），然后用0.05 mol ·L -1 NaOH 或 0.05 mol ·L -1 HCL 调节溶液至紫红色（葡萄酒色，PH 值为4.5），最后加水至1000毫升，摇匀，贮于 塑料瓶中备用。 3.3 0.005 mol ·L -1 H 2S04标准溶液：先配制0.1 mol ·L -1 H 2S04溶液（每升水中注入2.67ml 浓硫酸）， 取上述0.1 mol ·L -1 H 2S04 50ml 定容到1000ml （稀释20倍）。 3.4 碱性胶液：阿拉伯胶40.0g 和水50ml 在烧杯中热温至70～80℃，搅拌促进溶解，约1小时后放冷。加入20ml 甘油和20ml 饱和碳酸钾水溶液，搅拌、放冷。离心除去泡沫和不溶物，上清液贮于具塞玻璃瓶中备用。 3.操作步骤 称取风干土(过1mm 筛)2.00克，均匀铺在扩散皿外室，水平的轻轻旋转扩散皿，使样品铺平。 在扩散皿的内室中加入2%的H 3B03指示剂 2m1，然后在皿的外室边缘上涂上碱性胶液，盖上毛玻璃，旋转至完全粘合。再慢慢转开毛玻璃的一边，使扩散皿露出一条小缝，从毛玻璃狭缝处迅速加入10m1 1 mol ·L -1 的Na0H 溶液，立即盖严，用橡皮筋圈紧。随后放入40士1℃恒温箱中，碱解扩散24士0.5小时后取出（可以观察到内室应为蓝色），内室吸收液中的NH 3用0.005M 或0.0025M H 2S04滴定，终点由蓝绿色转变至红紫色，记下所用去的标准酸量（毫升）。同时进行空白试验。并做土壤含水量。 4.结果计算： 水解氮（mg ·kg -1 ）=m N V V 3 0100.14)(???- 式中： N ——H 2SO 4标准溶液的浓度； V ——样品测定时用去H 2SO 4标准溶液的体积（ml ）； V 0——空白试验时用去H 2SO 4标准溶液的体积（ml ）； 14.0——N 的当量（mg ）； 103——改换为mg ·kg -1的因数。 m ——烘干样品质量（g ） 两次平行测定结果允许误差为5 mg ·kg -1。 注意： 1. 由于碱性胶液的碱性很强，在涂胶液和洗涤扩散皿时，必须特别细心，以防污染内室，造成错误。 2. 滴定时要用小玻璃棒小心搅动吸收液，切不可摇动扩散皿。 3. 本方法不包括硝态氮。
土壤硝态氮的测定
土壤硝态氮的测定
土壤硝态氮的测定 A 紫外分光光度法 1、方法提要 土壤浸出液中的NO3-，在紫外分光光度计波长210nm 处有较高吸光度，而浸出液中的其它物质，除OH-、CO32-、HCO3-、NO2-和有机质等外，吸光度均很小。将浸出液加酸中和酸化，即可消除OH-、CO32-、HCO3-的干扰。NO2-一般含量极少，也很容易消除。因此，用校正因数法消除有机质的干扰后，即可用紫外分光光度法直接测定NO3-的含量。 待测液酸化后，分别在210nm和275nm处测定吸光度。A210是NO3-和以有机质为主的杂质的吸光度；A275只是有机质的吸光度，因为NO3-在275nm处已无吸收。但有机质在275nm处的吸光度比在210nm处的吸光度要小R倍，故将A275校正为有机质在210nm处应有的吸光度后，从A210中减去，即得NO3-在210nm处的吸光度(△A)。 2、适用范围 本方法适用于各类土壤硝态氮含量的测定。 3、主要仪器设备 3.1紫外—可见分光光度计； 3.2石英比色皿； 3.3往复式或旋转式振荡机，满足180r/min±20r/min的振荡频率或达到相同效果； 3.4塑料瓶：200mL。 4、试剂
4.1H2SO4溶液(1：9)：取10mL浓硫酸缓缓加入90mL 水中。 4.2氯化钙浸提剂[c(CaCl2)=0.01mol·L-1]：称取2.2g氯化钙(CaCl2·6H2O，化学纯)溶于水中，稀释至1L。 4.3 硝态氮标准贮备液[ρ(N)=100mg·L-1]：准确称取0.7217g经105~110℃烘2h的硝酸钾(KNO3，优级纯)溶于水，定容至1L，存放于冰箱中。 4.4硝态氮标准溶液[ρ(N)=10mg·L-1]：测定当天吸到10.00mL硝态氮标准贮备液于100mL容量瓶中用水定容。 5、操作步骤 称取10.00g土壤样品放入200mL塑料瓶中，加入50mL 氯化钙浸提剂，盖严瓶盖，摇匀，在振荡机上于20℃~25℃振荡30min(180r/min±20r/min)，干过滤。 吸取25.00mL待测液于50mL三角瓶中，加1.00mL1：9 H2SO4溶液酸化，摇匀。用滴管将此液装入1cm光径的石英比色槽中，分别在210nm和275nm处测读吸光值(A210和A275)，以酸化的浸提剂调节仪器零点。以NO3-的吸光值(△A)通过标准曲线求得测定液中硝态氮含量。空白测定除不加试样外，其余均同样品测定。 NO3-的吸光值(△A)可由下式求得： △A= A210- A275×R 式中R为校正因数，是土壤浸出液中杂质(主要是有机质)在210nm和275nm处的吸光度的比值。其确定方法为：A210是波长210nm处浸出液中NO3-的吸收值(A210硝)与
土壤速效氮磷钾、有机质测定方法
土壤水解性氮的测定(碱解扩散法) 土壤水解性氮，包括矿质态氮和有机态氮中比较易于分解的部分。其测定结果与作物氮素吸收有较好的相关性。测定土壤中水解性氮的变化动态，能及时了解土壤肥力，指导施肥。 测定原理 在密封的扩散皿中，用1.8mol/L氢氧化钠(NaOH)溶液水解土壤样品，在恒温条件下使有效氮碱解转化为氨气状态，并不断地扩散逸出，由硼酸(H3BO3)吸收，再用标准盐酸滴定，计算出土壤水解性氮的含量。旱地土壤硝态氮含量较高，需加硫酸亚铁使之还原成铵态氮。由于硫酸亚铁本身会中和部分氢氧化钠，故需提高碱的浓度(1.8mol/L，使碱保持1.2mol/L的浓度)。水稻土壤中硝态氮含量极微，可以省去加硫酸亚铁，直接用1.2mol/L氢氧化钠水解。 操作步骤 1.称取通过18号筛(孔径1mm)风干样品2g(精确到0.001g)和1g硫酸亚铁粉剂，均匀铺在扩散皿外室内，水平地轻轻旋转扩散皿，使样品铺平。(水稻土样品则不必加硫酸亚铁。) 2.用吸管吸取2%硼酸溶液2ml，加入扩散皿内室，并滴加1滴定氮混合指示剂，然后在皿的外室边缘涂上特制胶水，盖上毛玻璃，并旋转数次，以便毛玻璃与皿边完全粘合，再慢慢转开毛玻璃的一边，使扩散皿露出一条狭缝，迅速用移液管加入10ml1.8mol/L氢氧化钠于皿的外室(水稻土样品则加入10ml1.2mol/L氢氧化钠)，立即用毛玻璃盖严。 3.水平轻轻旋转扩散皿，使碱溶液与土壤充分混合均匀，用橡皮筋固定，贴上标签，随后放入40℃恒温箱中。24小时后取出，再以0.01mol/LHCl标准溶液用微量滴定管滴定内室所吸收的氮量，溶液由蓝色滴至微红色为终点，记下盐酸用量毫升数V。同时要做空白试验，滴定所用盐酸量为V0。 结果计算 水解性氮(mg/100g土)= N×(V-V0)×14／样品重×100 式中： N—标准盐酸的摩尔浓度； V—滴定样品时所用去的盐酸的毫升数； V0—空白试验所消耗的标准盐酸的毫升数；
实验7土壤硝态氮的紫外分光光度法.doc
实验土壤硝态氮的紫外分光光度法 根层土壤中硝态氮的含量与植物生长发育有着密切的关系，其测定结果可 为合理施肥，肥料规划和估产提供依据。 一 .目的要求 了解紫外 / 可见分光光度计的基本结构，掌握用波长选择消除干扰组分的 测定技术，用校正因数法测定土壤硝态氮的含量。 二 .方法原理 用氯化钠溶液提取土壤硝态氮，于紫外分光光度计上分别测量其210 和 275 纳米的吸光度，前者是硝酸根和以有机质为主的杂质的吸收值，后者是以有机 质为主的杂质的吸收。 因为 275 纳米处硝酸根已无吸收，而有机质在 275 纳米处的吸收值是 210 纳 米处的 f 倍，故可将 A275 校正为有机质在 210 纳米处的干扰吸收，从 A210 中减去，即得硝酸根在 210 纳米处得真实吸收值，再利用标准曲线法求得土壤中硝态氮 得含量。 三 .器皿与试剂 1.紫外、可见分光光度计和xx 比色皿。 2.50 毫升容量瓶 10 个， 100 和 250 毫升锥形瓶各 4 个，漏斗 4 个，普通试 管 4 支， 50 毫升胖肚吸管 1 支， 5、10 毫升和 2 毫升刻度吸管各一只，滴管 2 支。 3.氯化钠溶液 1mol/L: 称取氯化钠 58.44 克溶于 400 毫升水中，转入 1 升容量瓶中，稀释至刻度。 4.硝态氮标准溶液100μ g/ml: 称取于 105℃烘制 2 小时得硝酸钾 0.3609 克溶于水，转移至 500 毫升容量瓶中，用水定容。临用时再稀释至 20μg/ml。
5.硫酸溶液， 10％（ V/V） 四 .测定步骤 1.待测液制备 称取 10.00 克风干土样于 250 毫升锥形瓶中，加入50 毫升 1 mol/L 的氯化钠溶液，加塞振荡30 分钟，过滤于干净干燥的100 毫升锥形瓶中，初液弃去。同时做试剂空白。 2.标准曲线绘制与测定 吸取 20μg/ml硝态氮标准溶液0. 00、0. 50、1. 00、2. 00、3. 00、4.00 毫升分别置入 50 毫升容量瓶中，用水定容至刻度后，再加入 2 毫升 10％硫酸溶液，摇匀。浓度分别为 0. 00、 0. 20、0. 40、0. 80、1.20 和 1.60 μ g/ml。以零浓度标液作参比，于 210 米处测定标准系列的吸光度，绘制标准曲线或建立回归方程。 去土壤浸体液和试剂空白液各 10 毫升入试管中，加入 0.8 毫升 10％硫酸，摇匀。以试剂空白作参比，分别于 210 纳米和 275 纳米处测定吸光度，不要每
土壤水解氮测定方法
土壤水解性氮的测定（碱解一扩散法） 方法及步骤 1. 称取过2 mm 筛孔的风干土样1.00g （精确到0.01g ），均匀地平铺于扩散皿外室，轻轻水平旋转扩散皿，在扩散皿的外室内加1g 锌硫酸亚铁还原剂平铺于土样上（若沼泽土、潜育土壤不需加还原剂）。同时做两个试剂空白试验。 2. 加3ml 2％硼酸指示剂于扩散皿内室。 3. 在扩散皿外室边缘上方涂碱性胶液，盖好毛玻璃（毛面在下）与皿边完全粘合。 4. 慢慢转开毛玻璃，使扩散皿的一边露出一条狭缝或一小孔，从缺口用注射器迅速加入10ml 1.8mol/L 氢氧化钠溶液，立即盖严。 5. 水平地轻轻转动扩散皿，使溶液与土样充分混合，然后小心地用橡皮套二根交叉成十字形圈紧，使毛玻璃固定。放入40℃恒温箱中保温24h ，在此期间应间歇地水平轻轻转动3次。 6. 用0.01mol/L 盐酸标准溶液滴定内室硼酸中吸收的氨量，边滴定边用细玻棒搅动内室溶液，颜色由蓝变红，即达终点。 计算方法 水解性氮（mg ／kg ）=100014)(0???-烘干土质量 C V V 水解性氮（μg/g ）= 水解性氮（mg ／kg ） 式中：V ——滴定待测液用去的盐酸标准溶液体积（ml ）； V 0——滴定试剂空白，试验用去盐酸标准液体积（ml ）； C ——盐酸标准液浓度（mol ／L ）； 14——氮原子的摩尔质量（mg ／m mol ）； 1000——换算为mg ／kg 换算系数。 药品配制 1. 1.8 mol/L 氢氧化钠溶液：称取7 2.0 g 氢氧化钠（NaOH ，分析纯），溶解于蒸馏水中稀释至1L 。 2. 锌一硫酸亚铁还原剂：称50.0g 磨细并通过0.25 mm 筛孔的硫酸亚铁（FeSO 4·7 H 2O 化学纯）及10.0g 锌粉（化学纯）混匀，贮于棕色瓶中。 3. 碱性胶液：称40 g 阿拉伯胶粉和50 ml 蒸馏水在烧怀中混合调匀，加热60—80℃，搅拌促溶，冷却。加入20ml 甘油和20ml 饱和碳酸钾水溶液，搅匀、冷却。离心除去泡沫和不溶物，将清液贮于玻璃瓶中备用。 4. 0.01mol/L 盐酸标准溶液：可将 0.02 mol/L 盐酸标准溶液稀释1倍，然后，用0.002mol ／L 2 1Na 2B 4O 7标准溶液标定。 5. 2%（m ／V ）硼酸溶液：称取硼酸（H 3BO 3，分析纯）20g ，用热蒸馏水（约60℃）溶解，冷却后稀释至1L 。使用前每100 ml 硼酸溶液中加入2ml 定氮混合指示剂，以稀氢氧化钠或稀盐酸调节溶液至紫红色（葡萄酒色），此时，溶液的pH 为4.5。即为硼酸一指示剂混合液。 6. 甲基红一溴甲酚绿定氮混合指示剂：称取0.066 g （或0.1g ）甲基红和0.099g （或0.5g ）溴甲酚绿于玛瑙研钵中研细，溶于100ml 95％乙醇中。其变色范围pH4.4（红）一5.4（蓝）。 7. 0.02 mol/L 盐酸标准溶液：取浓盐酸（比重 1.19）1.67 ml ，用蒸馏水稀释至1L ，
土壤各种氮的测定
土壤铵态氮的测定 2 mol·L-1KCl浸提—蒸馏法 1方法原理用2mol·L-1KCl浸提土壤，把吸附在土壤胶体上的NH4+及水溶性NH4+浸提出来。取一份浸出液在半微量定氮蒸馏器中加MgO（MgO是弱碱，有防止浸出液中酰铵有机氮水解的可能）蒸馏。蒸出的氨以H3BO3吸收，用标准酸溶液滴定，计算土壤中的NH4+—N含量。 2主要仪器振荡器、半微量定氮蒸馏器、半微量滴定管（5mL）。 3试剂 （1）20g·L -1硼酸—指示剂。20gH3BO3（化学纯）溶于1L水中，每升H3BO3 溶液中加入甲基红—溴甲酚绿混合指示剂5mL并用稀酸或稀 碱调节至微紫红色，此时该溶液的pH为4.8。指示剂用前与硼酸混 合，此试剂宜现配，不宜放。 （2）0.005 mol·L-11/2H2SO4标准液。量取H2SO4（化学纯）2.83mL，加蒸馏水稀释至5000mL，然后用标准碱或硼酸标定之，此为 0.0200 mol·L-1 (1/2H2SO4)标准溶液，再将此标准液准确地稀释4倍， 即得0.005mol·L-11/2H2SO4标准液（注1）。 （3）2 mol·L-1KCl溶液称KCl（化学纯）14901g溶解于1L水中。 （4）120g·L–1MgO悬浊液 MgO12g经500～600℃灼烧2h，冷却，放入100mL水中摇匀。 4操作步骤
取新鲜土样10.0g（注2），放入100mL三角瓶中，加入2mol·L-1KCl 溶液50.0mL。用橡皮塞塞紧，振荡30min，立即过滤于50mL三角瓶中（如果土壤NH4+—N含量低，可将液土比改为2.5:1）。 吸取滤液25.0mL（含NH4+—N25μg以上）放入半微量定氮蒸馏器中，用少量水冲洗，先把盛有20g·L–1硼酸溶液5mL的三角瓶放在冷凝管下，然后再加120g·L–1 MgO悬浊液10mL于蒸馏室蒸馏，待蒸出液达30～40mL 时（约10min）停止蒸馏，用少量水冲洗冷凝管，取下三角瓶，用 0.005mol·L-11/2H2SO4标准液滴至紫红色为终点，同时做空白试验。 5结果计算 土壤中铵态氮NH4+—（N）含量（mg·kg-1） = 式中：c——0.005mol·L-11/2H2SO4标准溶液浓度； V——样品滴定硫酸标准溶液体积(mL)； V0——空白滴定硫酸标准溶液体积(mL)； 14.0——氮的原子摩尔质量（g·mol-1）； ts——分取倍数；
土壤硝态氮及铵态氮的取样测定
土壤硝态氮和铵态氮的取样测定 1．田间取样与保存 根据小区面积，随机选2～3个样点，采样地点应避开边行以及头尾。在行间取样，以30cm为一层，取样深度可以是0-90cm或0-210cm或更深，分层取样，等层混合。新鲜土样须田间将土壤样品立即放入冰盒，没有冰盒者应将土样放置阴凉处，避免阳光直接照射，并尽快带回室内处理。 2．土样的处理 在田间采样后，立即将土样放置在冰盒中，低温保存。返回实验室后，如果样品数量较多，则放置于冰箱中4℃保存。也可以直接进行土样处理：土壤过3-5cm筛，测定土壤的水分含量，同时作浸提。 3．土样的浸提 称取混匀好的新鲜土壤样品24.00g，放入振荡瓶，加100 ml 1mol/L 优级纯KCl浸提液，充分混匀后放入振荡机振荡1个小时，用定性滤纸过滤（注意：国内好多滤纸含有铵态氮，需选择那些无铵滤纸）到小烧杯或胶卷盒中，留滤液约20ml备用，每批样做3个空白。若样品不能及时测定，应放入贮藏瓶中冷冻保存。 同时称取20-30 g鲜土放入铝盒中105℃下烘干测定土壤水分。剩余土样自然风干后保存。 4．土壤硝态氮、铵态氮测定 测定前先解冻贮藏瓶盒中的滤液，并保持滤液均匀（注意：解冻后的样品有时有KCl 析出，必须等KCl溶解后，液体完全均匀后再测定），上流动分析测定溶液中的铵态氮和硝态氮含量（专门的试验人员负责）。所用标准溶液必须是用1mol/L KCl浸提液配制。 有时样品浓度超出了机器的测定范围，需对样品进行稀释（注意：应以最低稀释倍数把样品测定出来，且不可放大稀释倍数，这样会引起很大误差）。 流动分析测定的是溶液中的铵态氮和硝态氮浓度，单位是mg/L，必须根据土壤样品含水量和土壤干重换算成mg N/kg。如果要换算成kg N/ha，可以通过下列公式：土壤硝态氮或铵态氮（kg N/ha）=土壤硝态氮或铵态氮（mg N/kg）* 采样层次（30cm 或20cm）* 土壤容重/ 10
铵态氮和硝态氮测定方法!!! - 副本
铵态氮测量方法（2mol?L-1KCl浸提—靛酚蓝比色法） 1）方法原理 2mol?L-1KCl溶液浸提土壤，把吸附在土壤胶体上的NH4+及水溶性NH4+浸提出来。土壤浸提液中的铵态氮在强碱性介质中与次氯酸盐和苯酚作用，生成水溶性染料靛酚蓝，溶液的颜色很稳定。在含氮0.05～0.5mol?L-1的范围内，吸光度与铵态氮含量成正比，可用比色法测定。 2）试剂 （1）2mol?L-1KCl溶液称取149.1g氯化钾（KCl，化学纯）溶于水中，稀释至1L。 （2）苯酚溶液称取苯酚（C6H5OH，化学纯）10g和硝基铁氰化钠[Na2Fe(CN)5NO2H2O]100mg稀释至1L。此试剂不稳定，须贮于棕色瓶中，在4℃冰箱中保存。 （3）次氯酸钠碱性溶液称取氢氧化钠（化学纯）10g、磷酸氢二钠（Na2HPO4?7H2O，化学纯）7.06g、磷酸钠（Na3PO4?12H2O，化学纯）31.8g和52.5g?L-1次氯酸钠(NaOCl，化学纯，即含10%有效氯的漂白粉溶液)5mL溶于水中，稀释至1L，贮于棕色瓶中，在4℃冰箱中保存。 （4）掩蔽剂将400g?L-1的酒石酸钾钠（KNaC4H4O6?4H2O，化学纯）与100g?L-1的EDTA二钠盐溶液等体积混合。每100mL 混合液中加入10 mol?L-1氢氧化钠0.5mL。
（5）2.5μg?mL –1铵态氮（NH4+—N）标准溶液称取干燥的硫酸铵[(NH4)2SO4，分析纯0.4717g溶于水中，洗入容量瓶后定容至1L，制备成含铵态氮（N）100μg?mL –1的贮存溶液；使用前将其加水稀释40倍，即配制成含铵态氮（N）2.5μg?mL –1的标准溶液备用。 3）仪器与设备：往复式振荡机、分光光度计。 4）分析步骤 （1）浸提称取相当于10.00g干土的新鲜土样（若是风干土，过10号筛）准确到0.01g，置于150mL三角瓶中，加入氯化钾溶液100mL，塞紧塞子，在振荡机上振荡1h。取出静置，待土壤—氯化钾悬浊液澄清后，吸取一定量上层清液进行分析。如果不能在24h内进行，用滤纸过滤悬浊液，将滤液储存在冰箱中备用。 （2）比色吸取土壤浸出液5mL(含NH4+—N2μg～25μg)放入50mL容量瓶中，用氯化钾溶液补充至10mL，然后加入苯酚溶液5mL和次氯酸钠碱性溶液5mL，摇匀。在20℃左右的室温下放置1h后（注1），加掩蔽剂1mL以溶解可能产生的沉淀物，然后用水定容至刻度。用1cm比色槽在625nm波长处（或红色滤光片）进行比色，读取吸光度。 （3）工作曲线分别吸取0.00、2.00、4.00、6.00、8.00、10.00mL NH4+—N标准液于50mL容量瓶中，各加10mL氯化钠溶液，
土壤水解性氮的测定
土壤水解性氮的测定 碱解扩散法 1 方法提要 旱地土壤由于土壤硝态氮含量较高，须加还原剂还原，再用1.8mol ·L -1氢氧化钠溶液处理土样，在扩散皿中，土样于碱性条件下水解，使易水解氮经碱解转化为氨态氮，由硼酸溶液吸收，以标准酸滴定，计算碱解氮的含量。对于水稻土和经常淹水的土壤，由于硝态氮含量甚微，不需加还原剂，因此氢氧化钠溶液浓度采用1.2mol ·L -1。 2 适用范围 本方法适用于各类土壤中碱解氮的测定。 3 主要仪器设备 3.1恒温培养箱（控温在60℃以内）； 3.2扩散皿（需添加扩散皿扫描图）； 3.3半微量滴定管：10mL 。 4 试剂 4.1氢氧化钠溶液[c (NaOH) =1.8mol ·L -1]：称取72.0g 氢氧化钠，溶解于水，稀释至1L ； 4.2氢氧化钠溶液[c (NaOH) =1.2mol ·L -1]：称取48.0g 氢氧化钠，溶解于水，稀释至1L ； 4.3 锌-硫酸亚铁还原剂：称取50.0g 磨细并通过0.25mm 孔径筛的硫酸亚铁（FeSO 4?7H 2O ）及10.0g 锌粉混匀，贮于棕色瓶中； 4.4 碱性胶液：称取40g 阿拉伯胶放入装有50mL 水的烧杯中，加热至70℃～80℃，搅拌促溶，约1h 后放冷。加入20mL 甘油和20mL 饱和碳酸钾水溶液，搅匀，放冷。离心除去泡沫和不溶物，将清液贮于玻璃瓶中备用； 4.5 硫酸标准溶液[c(2 1H 2SO 4) =0.01mol ·L -1]或盐酸标准溶液[c(HCl) =0.01mol ·L -1]：配制及标定见本书附录； 4.6定氮混合指示剂：称取0.5g 溴甲酚绿和0.1g 甲基红于玛瑙研钵中，加入少量95%乙醇，研磨至指示剂全部溶解后，加95%乙醇至100mL ； 4.7硼酸溶液[ρ(H 3B03) =20g ·L -1]：称取硼酸20.00g 溶于水中，稀释至1L 。每升20g ·L -1硼酸溶液中加20mL 混合指示剂，并用稀碱或稀酸调至红紫色（pH 约4.5）。此溶液放置时
土壤硝态氮的测定
土壤硝态氮的测定 A 紫外分光光度法 1、方法提要 土壤浸出液中的NO-，在紫外分光光度计波长210n m处有较高吸光度，而浸出液中的其它物质，除OH、CO2-、HCO、NO-和有机质等外，吸光度均很小。将浸出液加酸中和酸化，即可消除OH-、CO2-、HCO的干扰。NO■■—般含量极少，也很容易消除。因此，用校正因数法消除有机质的干扰后，即可用紫外分光光度法直接测定NQ「的含量。 待测液酸化后，分别在210nm和275nm处测定吸光度。阳。是NQ-和以有机质为主的杂质的吸光度；A275只是有机质的吸光度，因 为NQ-在275nm处已无吸收。但有机质在275nm处的吸光度比在210nm处的吸光度要小R倍，故将A275校正为有机质在210nm处应有的吸光度后，从A。中减去，即得NQ-在210nm处的吸光度（△A）。 2、适用范围 本方法适用于各类土壤硝态氮含量的测定。 3、主要仪器设备 紫外—可见分光光度计； 石英比色皿； 往复式或旋转式振荡机，满足180r/min ±20r/min 的振荡频率或达到相同效果； 塑料瓶：200mL。 4、试剂 溶液(1 : 9):取10mL浓硫酸缓缓加入90mL水中。
氯化钙浸提剂[c(CaCI 2)=?L-1]:称取2.2g氯化钙(CaCI? 化学纯) 溶于水中，稀释至1L。 硝态氮标准贮备液[p (N)=100mg - L-1]:准确称取0.7217g经105?110C烘2h的硝酸钾(KNQ，优级纯)溶于水，定容至1L，存放于冰箱中。 硝态氮标准溶液[p (N)=10mg - L-1]:测定当天吸到硝态氮标准贮备液于100mL容量瓶中用水定容。 5、操作步骤 称取10.00g 土壤样品放入200mL塑料瓶中，加入50mL氯化钙浸提剂，盖严瓶盖，摇匀，在振荡机上于20 °C ~25 C振荡30min(180r/min ±20r/min) ，干过滤。 吸取待测液于50mL三角瓶中，加：9 H2SQ溶液酸化，摇匀。用滴管将此液装入1cm光径的石英比色槽中，分别在210nm和275nm 处测 读吸光值(A210和A275)，以酸化的浸提剂调节仪器零点。以NQ 「 的吸光值( △A) 通过标准曲线求得测定液中硝态氮含量。空白测定除不 加试样外，其余均同样品测定。 NQ-的吸光值(△A)可由下式求得： △A= A 210- A 275 X R 式中R 为校正因数，是土壤浸出液中杂质( 主要是有机质) 在 210nm和275nm处的吸光度的比值。其确定方法为： A210是波长210nm处浸出液中NQ-的吸收值(A210硝)与杂质(主要是有机质)的吸收值(A210杂)的总和，即A210= A 210 硝+ A210 杂，得出A210 杂= A 210-
土壤中氮含量的测定分析(精)
土壤中氮含量的测定分析 核心提示：摘要：概述了土壤中氮元素的存在形式、土壤全氮、无机氮(包括铵态氮、硝态氮)水解氮、酰胺态氮的测定方法。关键词：土壤；全氮；测定方法土壤是作物氮素营养的主要来源，土壤中的氮素包括无机态氮和有机态... 摘要：概述了土壤中氮元素的存在形式、土壤全氮、无机氮(包括铵态氮、硝态氮)水解氮、酰胺态氮的测定方法。 关键词：土壤；全氮；测定方法 土壤是作物氮素营养的主要来源，土壤中的氮素包括无机态氮和有机态氮两大类，其中95%以上为有机态氮，主要包括腐殖质、蛋白质、氨基酸等。小分子的氨基酸可直接被植物吸收，有机态氮必须经过矿化作用转化为铵，才能被作物吸收，属于缓效氮。 土壤全氮中无机态氮含量不到 5%，主要是铵和硝酸盐，亚硝酸盐、氨、氮气和氮氧化物等很少。大部分铵态氮和硝态氮容易被作物直接吸收利用，属于速效氮。无机态氮包括存在于土壤溶液中的硝酸根和吸附在土壤颗粒上的铵离子，作物都能直接吸收。土壤对硝酸根的吸附很弱，所以硝酸根非常容易随水流失。在还原条件下，硝酸根在微生物的作用下可以还原为气态氮而逸出土壤，即反硝化脱氮。部分铵离子可以被粘土矿物固定而难以被作物吸收，而在碱性土壤中非常容易以氨的形式挥发掉。土壤腐殖质的合成过程中，也会利用大量无机氮素，由于腐殖质分解很慢，这些氮素的有效性很低。 土壤中的氮素主要来自施肥、生物固氮、雨水和灌溉水，后二者对土壤氮贡献很小，施肥是耕作土壤氮素的主要来源，而自然土壤的氮素主要来自生物固氮。 土壤含氮量受植被、温度、耕作、施肥等影响，一般耕地表层含氮量为0.05%～0.30%，少数肥沃的耕地、草原、林地的表层土壤含氮量在 0.50%～0.60%以上。我国土壤的含氮量，从东向西、从北向南逐渐减少。进入土壤中的各种形态的氮素，无论是化学肥料，还是有机肥料，都可以在物理、化学和生物因素的作用下进行相互转化。 1 土壤全氮的测定 1.1 开氏法 近百年来，许多科学工作者对全氮的测定方法不断改进，提出了许多新方法，主要有重铬酸钾-硫酸消化法、高氯酸-硫酸消化法、硒粉-硫酸铜-硫酸消化法。但开氏法目前仍作为一个统一的标准方法，此法容易掌握，测定结果稳定，准确率较高。 开氏法测氮的原理为：在盐类和催化剂的参与下，用浓硫酸消煮，使有机氮分解为铵态氮。碱化后蒸馏出来的氨用硼酸吸收，以酸标准溶液滴定，求出土壤全氮含量（不包括硝态氮）。含有硝态和亚硝态氮的全氮测定，在样品消
土壤硝态氮和铵态氮的测定方法
一、原理： 过滤后的样品经过一个开放的镀铜镉还原器通道后，硝酸根被还原成亚硝酸根，亚硝酸根通过磺胺处理后，与N-(1-萘基)-乙二胺二盐酸盐偶联，形成深红色的偶氮染料，然后在550nm或者520nm比色分析。 二、样品处理 土壤鲜样采取四分法处理，根据实验用量进行过筛（比目大小视样品含水量而定）。过筛后的土样，取出5g土样放入离心管，加入25ml 氯化钾提取液（2moL/L），震荡2小时后进行离心（8000 g ，15min），静置后过滤，取上清液测定。若不能及时测定，放入4℃冰箱保存。 三、试剂配制： 试剂用水：蒸馏水或去离子水。 （1）显色试剂：（棕色玻璃瓶，避光保存） 150ml水，加入25ml浓磷酸▲，冷却至室温后，加入10g磺胺，再加入0.5g N-(1-萘基)-乙二胺二盐酸盐溶解。用水定容至250ml。加入浓缩探针清洗液（表面活性剂）。 （2）氯化铵-EDTA缓冲液（ammonium chloride-EDTA）：把85g氯化铵和0.1g 乙二胺四乙酸二钠盐（EDTA-Na2）溶解 于水，定容至1L。用浓氨水▲调节PH至。 （3）硝化组件缓冲液：{用来清洗OTCR(镀铜镉还原器通道)}取100ml的氯化铵-EDTA缓冲液，稀释至1L。调节PH至。（4）2%硫酸铜： 10g 五水硫酸铜（）溶于水，定容至500ml。 （5）5mol/L盐酸： 小心慢慢加入浓盐酸▲于水中，冷却后定容至100ml。 （6）硝酸盐存储溶液(1g/L)：（溶液6个月内有效） 7.218g硝酸钾溶于水，定容至1L，加入1ml氯仿▲（防腐剂）。（7）比色管清洗液：（定容时缓慢，防止出现泡沫，室温保存,两个月内有效）取50ml比色管清洗液，加水定容至1L。 （8）进样针清洗液：（定容时缓慢，防止出现泡沫，室温保存，两个月内有效。） 取进样针清洗液，加水定容至1L。 四、测定方法： 土壤硝态氮测定采用SmartChem全自动间断化学分析仪。
土壤硝态氮铵态氮的测定
（二）土壤硝态氮的测定 1、酚二磺酸比色法 1）方法原理 土壤用饱和CaSO4 2H2O溶液浸提，在微碱性条件下蒸发至干，土壤浸提液中的NO3－—N在无水的条件下能与酚二磺酸试剂作用，生成硝基酚二磺酸。 C6H3OH(HSO3)2+HNO3→C6H2OH(HSO3)2 NO2+H2O 2，4-酚二磺酸 6-硝基酚-2，4-二磺酸 此反应必须在无水条件下才能迅速完成，反应产物在酸性介质中无色，碱化后则为稳定的黄色溶液，黄色的深浅与NO3－—N含量在一定范围内成正相关，可在400～425nm处（或用蓝色滤光片）比色测定。酚二磺酸法的灵敏度很高，可测出溶液中0.1mg?L-1 NO3－—N，测定范围为0.1～2mg?L-1。 2）主要仪器 分光光度计、水浴锅、瓷蒸发皿。 3）试剂 （1）酚二磺酸试剂： 称取白色苯酚（C6H5OH，分析纯）25.0g置于500mL三角瓶中，以150mL纯浓H2SO4溶解，再加入发烟H2SO475mL并置于沸水中加热2h，可得酚二磺酸溶液，储于棕色瓶中保存。使用时须注意其强烈的腐蚀性。如无发烟H2SO4，可用酚25.0g，加浓H2SO4225mL，沸水加热6h配成。试剂冷后可能析出结晶，用时须重新加热溶解，但不可加水，试剂必须贮于密闭的玻塞棕色瓶中，严防吸湿。 （2）10μg?mL-1 NO3－—N标准溶液： 准确称取KNO3（二级）0.7221g溶于水，定容1L，此为100μg?mL-1 NO3－—N 溶液，将此液准确稀释10倍，即为10μg?mL-1 NO3－—N标准溶液。 （3）CaSO4?2H2O（分析纯、粉状）、 （4）CaCO3（分析纯、粉状）、 （5）1:1 NH4OH、 （6）活性碳（不含NO3－），用以除去有机质的颜色。 （7）Ag2SO4（分析纯、粉状）、Ca(OH)2（分析纯、粉状）和MgCO3（分析纯、粉状），用以消除Cl-1的干扰。 4）操作步骤 （1）浸提： 称取新鲜土样（注1）50g（风干土样25g）放在500mL三角瓶中，加入CaSO4?2H2O 0.5g（注2）[凝聚剂的作用，使滤液不混浊而澄清]和250.00mL蒸馏水，盖塞后，用振荡机振荡10min。放置5 min后，将悬液的上部清液用干滤纸过滤，澄清的滤液收集地干燥洁净的三角瓶中。如果滤液因有机质而呈现颜色，可加活性碳除之（注3、4）。还有NO2-干扰和Cl干扰： （1）同时做空白。 （2）测定 吸取清液 25～50mL（含NO3－—N 20～150μg）于瓷蒸发皿中，加CaCO3约0.05g （注5）[调节pH，防止NO3－—N在酸性和中性条件下蒸干分解而损失]，在水浴上蒸干（注6），到达干燥时不应继续加热。稍冷，迅速加入酚二磺酸试剂1---2 mL，将皿旋转，使试剂接触到所有的蒸干物。静止10min使其充分作用后，加水20 mL，用玻璃棒搅拌直到蒸干物完全溶解。冷却后缓缓加入1：1 NH4OH（注7）并不断搅拌混匀，至溶液呈微碱性（溶液显黄色不再加深）再多加2mL，以保
(完整word版)土壤全氮测定方法
土壤全氮的测定—凯氏定氮法 一、目的 1、掌握土壤中全氮含量测定的方法。 2、了解测定土壤全氮的原理 二、原理 土壤中的氮大部分以有机态（蛋白质、氨基酸、腐殖质、酰胺等）存在，无 机态（NH 4+ 、NO 3 -、NO 2 -）含量极少，全氮量的多少决定于土壤腐殖质的含量。 土壤中含氮有机化合物在还原性催化剂的作用下，用浓硫酸消化分解，使其中所含的氮转化为氨，并与硫酸结合为硫酸铵。 给消化液加入过量的氢氧化钠溶液，使铵盐分解蒸馏出氨，吸收在硼酸溶液中，最后以甲基红-溴甲酚绿为指示剂，用标准盐酸滴定至粉红色为终点，根据标准盐酸的用量，求出分析样品中的含氮全量。 三、试剂： 1、混合催化剂：称取硫酸钾100g、五水硫酸铜10g、硒粉1g。均匀混合后研细。贮于瓶中。 2、比重1.84浓硫酸。 3、40%氢氧化钠：称400g氢氧化钠于烧杯中，加蒸馏水600ml，搅拌使之全部溶解。 4、2%硼酸溶液：称20g硼酸溶于1000ml水中，再加入2.5ml混合指示剂。（按体积比100:0.25加入混合指示剂） 5、混合指示剂：称取溴甲酚绿0.5g和甲基红0.1克,溶解在100ml95%的乙醇中,用稀氢氧化钠或盐酸调节使之呈淡紫色，此溶液pH应为4.5。 6、0.01的盐酸标准溶液：取比重1.19的浓盐酸0.84ml，用蒸馏水稀释至1000ml，用基准物质标定之。 四、操作步骤 1、消煮：在分析天平上准确称取通过60号筛的风干土0.5000g左右，移入干燥的凯氏瓶中，加入1.5g的还原性混合催化剂。用注射器加入4ml浓硫酸，放到通风柜内的消煮器上消煮1.5h左右。直至内容物呈清彻的淡蓝色为止。 2、蒸馏：消煮完毕后冷却。 将三角瓶置于冷凝管的承接管下，管口淹没在硼酸溶液中（三角瓶用2%的硼酸20ml作吸收剂），然后打开冷凝器中的水流，进行蒸馏。在整个蒸馏过程中注意冷凝管中水不要中断，当接受液变蓝后蒸馏5min,将冷凝管下端离开硼酸液面，再用蒸馏水冲净管外。 3、滴定：用0.01当量的盐酸标准溶液滴定至红色为止。记录所消耗的盐酸标准溶液的体积。 4、空白：除不加试样外其余步骤完全相同。 五、计算： 土壤含氮量（%）=(V-V )*N*0.014*100/W
土壤硝态氮的测定
土壤硝态氮的测定 This model paper was revised by the Standardization Office on December 10, 2020
土壤硝态氮的测定 A 紫外分光光度法 1、方法提要 土壤浸出液中的NO3-，在紫外分光光度计波长210nm处有较高吸光度，而浸出液中的其它物质，除OH-、CO32-、HCO3-、NO2-和有机质等外，吸光度均很小。将浸出液加酸中和酸化，即可消除OH-、CO32-、HCO3-的干扰。NO2-一般含量极少，也很容易消除。因此，用校正因数法消除有机质的干扰后，即可用紫外分光光度法直接测定NO3-的含量。 待测液酸化后，分别在210nm和275nm处测定吸光度。A210是NO3-和以有机质为主的杂质的吸光度；A275只是有机质的吸光度，因为NO3-在275nm处已无吸收。但有机质在275nm处的吸光度比在210nm处的吸光度要小R倍，故将A275校正为有机质在210nm处应有的吸光度后，从A210中减去，即得NO3-在210nm处的吸光度(△ A)。 2、适用范围 本方法适用于各类土壤硝态氮含量的测定。 3、主要仪器设备 紫外—可见分光光度计； 石英比色皿； 往复式或旋转式振荡机，满足180r/min±20r/min的振荡频率或达到相同效果； 塑料瓶：200mL。
4、试剂 溶液(1：9)：取10mL浓硫酸缓缓加入90mL水中。 氯化钙浸提剂[c(CaCl2)=·L-1]：称取2.2g氯化钙 (CaCl2·6H2O，化学纯)溶于水中，稀释至1L。 硝态氮标准贮备液[ρ(N)=100mg·L-1]：准确称取0.7217g 经105~110℃烘2h的硝酸钾(KNO3，优级纯)溶于水，定容至1L，存放于冰箱中。 硝态氮标准溶液[ρ(N)=10mg·L-1]：测定当天吸到硝态氮标准贮备液于100mL容量瓶中用水定容。 5、操作步骤 称取10.00g土壤样品放入200mL塑料瓶中，加入50mL氯化钙浸提剂，盖严瓶盖，摇匀，在振荡机上于20℃~25℃振荡 30min(180r/min±20r/min)，干过滤。 吸取待测液于50mL三角瓶中，加：9 H2SO4溶液酸化，摇匀。用滴管将此液装入1cm光径的石英比色槽中，分别在210nm和275nm处测读吸光值(A210和A275)，以酸化的浸提剂调节仪器零点。以NO3-的吸光值(△A)通过标准曲线求得测定液中硝态氮含量。空白测定除不加试样外，其余均同样品测定。 NO3-的吸光值(△A)可由下式求得： △A= A210- A275×R 式中R为校正因数，是土壤浸出液中杂质(主要是有机质)在210nm和275nm处的吸光度的比值。其确定方法为： A210是波长210nm处浸出液中NO3-的吸收值(A210硝)与杂质(主要是有机质)的吸收值(A210杂)的总和，即A210= A210硝+ A210杂，得出A210
土壤硝态氮的测量-紫外法
土壤硝态氮的测量-紫外法 2018-1-17 本方法适于测定以1-2M KCl及各种浓度氯化钙、氯化钠、硫酸钠等提取的土壤硝态氮，标液用提取液配制。要求土壤提取液没有可见的颜色，土壤有机质含量小于5%， 测定范围为1-10ppmNO3-N（溶液浓度）。不能用乙酸铵、碳酸氢钠等在紫外区有强烈吸收的提取剂；测定硝态氮时，如果提取液氯离子、碳酸盐离子、氢氧根离子等较多，需要酸化处理：取2-3ml标液、滤液于塑料试管中，加1:5（硫酸：水）0.5ml，除去紫外去有吸收的CO2、OH-等的干扰。 如果需要在测定中不包含亚硝态氮，可在测定时加入氨基磺酸（FW.97.09）至其浓度达到0.5-0.8%，以掩蔽亚硝态氮的紫外吸收。 硝态氮的紫外吸收有较为明显的温度效应，样品冷冻后有明显的沉淀效应，需要使样品和标液在同一温度下平衡到室温，充分混匀再测定。 2 提取：称取鲜土10-12g（约10g干土，或者根据用户要求设定水土比，是否测定含水量等），加50ml 1M KCl提取液，25℃震荡30分钟，过滤，检查滤液颜色，没有明显可见颜色样品可进行紫外测定，对有颜色液体，要怀疑其测定精度，提高提取液KCl浓度有利于减少有机质干扰，对样品和标液加适量活性炭可减少颜色干扰。 3、500ppm NO3-N：将 1.8045 g 硝酸钾 (KNO3，F.W. 101.018)溶解到 400 mL水中,定容500 mL。避光保存。 标准曲线：以500ppm NO3-N 标液按下配制于50ml 容量瓶中，以1M KCl提取液定容。 吸取标液ml 浓度mg/L 0 0 0.1 1 0.3 3 0.5 5 0.75 7.5 4、 测定：在标液与提取液温度接近条件下，以空白调整紫外可见分光光度计基线，测定标液和样品OD220、OD275. 5、计算：以各标液OD220-OD275*2.23与标液浓度做标准曲线，计算未知浓度,*50ml/5g为土壤硝态氮含量（mg/kg）
土壤碱解氮的测定
土壤碱解氮的测定（碱解扩散法） 一、仪器与试剂 1、主要仪器 百分之一天平；滴管，恒温箱；扩散皿 2、试剂 （1）1.0mol/L NAOH溶液：称取化学纯氢氧化钠40克，用水溶解，冷却后定容至1L。（2）甲基红-溴甲酚绿混合指示剂：称取甲基红0.066克，溴甲酚绿0.099克，溶解在100ml 95%酒精中，用稀氢氧化钠或盐酸调节溶液呈紫红色。此时溶液PH值应为4.5 （3）2%硼酸溶液：称取分析纯硼酸20克，溶解于1L蒸馏水中。 （4）0.01mol/L（1/2H2SO4）标准溶液：量取密度1.84g/ml浓硫酸0.28ml，注入1L蒸馏水中，用标准硼砂溶液标定之。标定方法如下：在分析天平上准确称取硼砂Na2B4O7.10H2O 1.9071g，溶于蒸馏水中，转移至1000ml容量瓶中，用水定容，摇匀，即为0.01mol/L的标准溶液。吸取该溶液3份，各25.00ml，分别放入3个100-150ml三角瓶中，以甲基红作指示剂，用上述标准硫酸溶液滴定至由黄色变为红色为终点。设硫酸溶液用量3份重复的平均值为V毫升，则c（1/2H2SO4）=0.01×25/V （5）碱性甘油：在100ml甘油中加入固体氢氧化钠1-2克，隔一定时间后搅动一次，使其达到饱和为止（使甘油变稠2-3天后即可使用）。 二、步骤 1、准确称取通过100目筛(0.15mm)的风干土壤样品2.00克，均匀铺在扩散皿外室中，水平地轻轻转动扩散皿，使样品铺平。 2、在扩散皿（使用前在稀酸中浸泡）的内室中加入2ml 2%硼酸溶液，并加一滴混合指示剂，然后在皿的外室边缘上涂上碱性甘油，盖上毛玻璃盖并旋转，使之密合。在慢慢转动毛玻璃盖使外室的一边在毛玻璃盖小缺口处露出。 3、用移液管由小缺口处向外室加入10ml 1.0mol/L NaOH溶液，立即盖严。小心地水平转动扩散皿，使溶液与土壤充分混匀，用橡皮筋扎好，放入40℃温箱中，恒温24小时后取出，再以0.01 mol/L 1/2H2SO4标准溶液滴定硼酸溶液中所吸收的氨，溶液颜色由蓝绿变为微红色为终点。 三、结果计算 碱解氮（mg/kg土）= [c×(V-V0) ×14×1000]/m c-1/2H2SO4标准溶液的浓度，mol/L； V-滴定样品时硫酸标准溶液的用量，ml； V0-空白试验时硫酸标准溶液的用量，ml； 14-氮原子的豪摩尔质量，mg； m-土样的质量，g； 1000-换算成每千克样品中氮的毫克数的系数。
土壤硝态氮和铵态氮的测定方法
土壤硝态氮和铵态氮的测定方法 土壤硝态氮测定方法 一、原理: 过滤后的样品经过一个开放的镀铜镉还原器通道后～硝酸根被还原成亚 硝酸根～亚硝酸根通过磺胺处理后～与N-(1-萘基)-乙二胺二盐酸盐偶 联～形成深红色的偶氮染料～然后在550nm或者520nm比色分析。二、样品 处理 土壤鲜样采取四分法处理～根据实验用量进行过筛,比目大小视样 品含水量而定,。过筛后的土样～取出5g土样放入离心管～加入25ml 氯化钾提取液,2moL/L,～震荡2小时后进行离心,8000 g ～15min,～ 静置后过滤～取上清液测定。若不能及时测定～放入4?冰箱保存。三、试剂配制: 试剂用水:蒸馏水或去离子水。 (1)显色试剂:,棕色玻璃瓶～避光保存, 150ml水～加入25ml浓磷酸?～冷却至室温后～加入10g磺胺～ 再加入0.5g N-(1-萘基)-乙二胺二盐酸盐溶解。用水定容至 加入2.0ml浓缩探针清洗液,表面活性剂,。 250ml。 (2)氯化铵-EDTA缓冲液,ammonium chloride-EDTA,: 把85g氯化铵和0.1g 乙二胺四乙酸二钠盐,EDTA-Na,溶解于2 水～定容至1L。用浓氨水?调节PH至8.5。 (3)硝化组件缓冲液:{用来清洗OTCR(镀铜镉还原器通道)} 取100ml的氯化铵-EDTA缓冲液～稀释至1L。调节PH至8.5。 (4)2%硫酸铜: 10g 五水硫酸铜,CuSO.5HO,溶于水～定容至500ml。 42
(5)5mol/L盐酸: 小心慢慢加入50.69ml浓盐酸?于水中～冷却后定容至100ml。 ,6,硝酸盐存储溶液(1g/L):,溶液6个月内有效, 7.218g硝酸钾溶于水～定容至1L～加入1ml氯仿?,防腐剂,。 (7)比色管清洗液:,定容时缓慢～防止出现泡沫～室温保存,两个月 内有效,取50ml比色管清洗液～加水定容至1L。 (8)进样针清洗液:,定容时缓慢～防止出现泡沫～室温保存～两个 月内有效。, 取0.5ml进样针清洗液～加水定容至1L。 四、测定方法: 土壤硝态氮测定采用SmartChem全自动间断化学分析仪。 土壤铵态氮测定方法 一、样品处理 土壤鲜样采取四分法处理～根据实验用量进行过筛,比目大小视样品含水量而定,。过筛后的土样～取出5g放入离心管～加入25ml KCL提取液,2moL/L,～震荡2小时后进行离心,8000 g ～15min,～静置后过滤～取上清液测定。若不能及时测定～放入4?冰箱保存(最长保存期限28天)。二、试剂配制: 试剂用水:蒸馏水或去离子水。空气中存在氨～易被吸收～故试剂用水不宜久放。 (1)苯酚钠溶液:,棕色玻璃瓶～避光保存～可稳定两周, 称取8g氢氧化钠?～溶于水～待冷却到室温后～加入20.75g 苯酚?～定容至250ml。 (2)次氯酸钠溶液:(每日新鲜配制, 取25ml的安替福民,次氯酸钠溶液,?～定容至50ml。