黄嘌呤氧化酶法测定抗氧化能力

黄嘌呤氧化酶法测定抗

氧化能力

集团文件版本号：（M928-T898-M248-WU2669-I2896-DQ586-M1988）

发酵过程产物形成的测定(SOD活性的测定)

一、实验目的

1、了解SOD活性测定的原理

2、学习黄嘌呤氧化酶法测定SOD活性

二、实验原理

原理：黄嘌呤氧化酶催化黄嘌呤产生超氧阴离子自由基，后者氧化羟胺成亚硝酸盐，亚硝酸盐在对氨基苯磺酸与甲萘胺作用下呈现紫红色，用可见光分光光度计测其吸光度。当被测样品中含SOD时，则对超氧阴离子自由基有专一性抑止作用，使可形成的亚硝酸盐减少，比色时测定管的吸光度值低于空白管的吸光度值，通过公式计算可求出被测样品中SOD 的活力。操作步骤：如表2-1。

三、实验试剂

硫酸盐缓冲液，盐酸羟胺，黄嘌呤，黄嘌呤氧化酶，醋酸等。

四、实验步骤

试剂测定管对照管

0.550.55

75mmol/L 磷酸盐缓冲液

（pH7.8）

待测样品（ml）A(取样量)0

0.1mol/L 盐酸羟胺溶液0.050.05

75mmol/L 黄嘌呤溶液0.050.05

0.037U/L 黄嘌呤氧化酶0.050.05

双蒸水0.2－A0.2

用漩涡振荡器充分混匀，置37℃恒温水浴30min。

显色剂（ml）11

总体积1.9ml ，混匀，室温放置10min ，蒸馏水调零，测A530

五、计算方法

计算公式：每毫升反应液中SOD 抑止率达50％时对应的SOD 量为一个SOD 活力单位（U ），待测样品中的SOD 活力由下式计算：

SOD 抑制率（％）＝（A2-A1）/A2×100%

SOD 活力（U/ml ）＝（A2-A1）/A2×100%÷50％×反应体系的稀释倍数×样本测试前的稀释倍数 式中：A1:测定管的吸光值；A2:空白管的吸光值 六、注意事项：

1.试管要洗干净，在测定微量样品时尤为重要。

2.要做空白管，并且放在所有测试管的中间做，取平均值。 常用试剂

（1）诱导剂：分别配制 IPTG 100μmol/mL ； CuSO 4·5H 2O 250μm/mL ； ZnSO 4 100μm/mL 。分别于0.22μm 滤膜过滤除菌。

（2）稀释菌体所用0.02mol/L pH7.4 PBS 缓冲液： 8.5gNaCl ，0.2gKCl ，Na 2HPO 4·12H 2O ，3.628g ，0.27gKH 2PO 4，定容至1000ml 。

（3）SOD 活性测定

①75mmol/L 磷酸盐缓冲液（pH7.8）母液配制：A ：0.15mol/L K 2HPO 4 配置：准确称取17.115g K 2HPO 4·3H 2O 溶于500mL 蒸馏水中。B ：0.15mol/L KH 2PO 4 配置：准确称取2.041g KH 2PO 4 溶于100mL 蒸馏水中。取母液A 91.5mL 与母液B8.5mL 充分混合后，用水稀释至终体积200mL ，用酸或碱调pH 至7.8。

②0.1mol/L 盐酸羟胺溶液（要求新鲜配置）准确称取6.949g 盐酸羟胺溶解于1ml 蒸馏水中。

③75mmol/L 黄嘌呤溶液（要求新鲜配置）准确称取11.41g 黄嘌呤溶于1mlNaOH 稀释液中。NaOH 备用液：称0.8gNaOH 溶于50ml 水中，使用时稀释3 倍为0.133mol/LNaOH 稀释液。

④0.037U/L 黄嘌呤氧化酶溶液（要求新鲜配置，避光）

⑤显色剂配制（避光保存）：

A: 量取冰醋酸172.5ml 于500ml 棕色瓶中，称取0.2g 甲萘胺加入冰醋酸中。

B：称取2g 对氨基苯磺酸溶于100ml 蒸馏水中(对氨基苯磺酸不易溶解，在棕色瓶里用超声波处理，水温60－70℃)。

C：待对氨基苯磺酸完全溶解后与冰醋酸混合，加蒸馏水至终体积500ml。

总抗氧化能力检测试剂盒(FRAP法)

总抗氧化能力检测试剂盒(FRAP法) 产品编号产品名称包装 S0116 总抗氧化能力检测试剂盒(FRAP法) 100次 产品简介： 总抗氧化能力检测试剂盒(FRAP法)，即Total Antioxidant Capacity Assay Kit with FRAP method，简称T-AOC Assay Kit，是一种采用Ferric Reducing Ability of Plasma (FRAP)方法，可以对血浆、血清、唾液、尿液等各种体液，细胞或组织等裂解液、植物或中草药抽提液、或各种抗氧化物(antioxidant)溶液的总抗氧化能力进行检测的试剂盒。 活性氧(Reactive oxygen species, ROS)主要包括羟基自由基、超氧自由基和过氧化氢。在细胞或组织的正常生理代谢过程中会产生活性氧，同时一些环境因子例如紫外照射、γ射线照射、吸烟、环境污染等也可以诱导活性氧的产生。活性氧产生后，可以导致细胞内脂、蛋白和DNA等的氧化损伤，诱发氧化应激(Oxidative stress)，继而导致各种肿瘤、动脉粥样硬化、风湿性关节炎、糖尿病、肝损伤、以及中枢神经系统疾病等。 机体中存在多种抗氧化物，包括抗氧化大分子、抗氧化小分子和酶等，可以清除体内产生的各种活性氧，以阻止活性氧诱导的氧化应激(oxidative stress)的产生。一个体系内的各种抗氧化大分子、抗氧化小分子和酶的总的水平即体现了该体系内的总抗氧化能力。因此测定血浆、血清、尿液、唾液等各种体液，细胞或组织等裂解液中的总抗氧化能力具有非常重要的生物学意义。 植物或中草药抽提液、或各种抗氧化物溶液的总抗氧化能力的检测可以用于检测各种溶液的抗氧化能力的强弱，可以用于筛选强抗氧化能力的药物。 FRAP法测定总抗氧化能力的原理是酸性条件下抗氧化物可以还原Ferric-tripyridyltriazine (Fe3+-TPTZ)产生蓝色的Fe2+-TPTZ，随后在593nm测定蓝色的Fe2+-TPTZ即可获得样品中的总抗氧化能力。由于反应在酸性条件下进行，可以抑制内源性的一些干扰因素。并且由于血浆等样品中的铁离子或亚铁离子的总浓度通常低于10μM，因此血浆等样品中的铁离子或亚铁离子不会显著干扰FRAP法的检测反应。由于反应体系中的铁离子或亚铁离子是和TPTZ螯合的，样品本身含有的少量金属离子螯合剂通常也不会显著影响检测反应。 Antioxidant Fe3+-TPTZ ——————> Fe2+-TPTZ (蓝色) 提供了抗氧化物Trolox作为对照。Trolox是一种维生素E的类似物，水溶性较好，抗氧化能力和维生素E相近。 本试剂盒方便快捷，加入待测样品后3-5分钟即可进行吸光度测定，通常10-20个样品可以在十多分钟内检测完毕。 本试剂盒可以检测100个样品。 包装清单： 产品编号产品名称包装 S0116-1 TPTZ稀释液 15ml S0116-2 TPTZ溶液 1.5ml S0116-3 检测缓冲液 1.5ml S0116-4 FeSO4·7H2O 200mg S0116-5 Trolox溶液 (10mM) 0.1ml —说明书1份 保存条件： -20℃保存，一年有效。其中S0116-2 TPTZ溶液，S0116-3 检测缓冲液和S0116-5 Trolox溶液 (10mM)需避光保存。 注意事项： 在酸性条件下呈蓝色或接近蓝色的试剂会对本试剂盒的检测产生干扰，需尽量避免。 如果样品中含有外加的较高浓度的铁盐或亚铁盐，会干扰测定。但血浆、血清、细胞或组织裂解液等样品中含有的微量的铁盐或亚铁盐不会干扰测定。 样品中不能添加DTT、巯基乙醇等影响氧化还原反应的物质，也不宜添加Tween、Triton和NP-40等去垢剂。 测定时需可以测定A593的酶标仪一台(测585-605nm也可以)或可以测定微量样品的分光光度计一台。 TPTZ对人体有刺激性，请注意适当防护。 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

抗氧化实验方法

1还原力的测定 样品2ml加到2ml 0.2mol/L磷酸盐缓冲液（pH6.6）和2ml 1%的铁氰化钾溶液的混合液中。混合物在50℃保温20min，然后在反应混合物中加入2ml 10%的TCA，混合后以3000rpm 离心10min，取上清液2ml与2ml蒸馏水以及0.4ml 0.1%氯化铁在反应试管中反应，10min 后测定其在700nm处的吸光值。吸光值越大表明还原力越强。 注意：建议蛋白浓度以5mg/ml左右变化，例如2.5，5之类变化。但具体情况应根据吸光值大小而定。 0.2mol/L pH6.6的磷酸盐缓冲液的配制见附表。 铁氰化钾溶液应盛装在棕色瓶中。 比色皿的用法：可见光(>400nm)用玻璃比色皿（即没有标字母或者标G的比色皿），紫外光时（<400nm）用石英比色皿（即标Q字比色皿）。 2 DPPH自由基清除活性的测定 将1.5ml样品液添加到1.5ml含0.1 mmol/L DPPH的95％乙醇中，混合，振荡，在 室温下放置30min，然后在波长517nm处检测（Ai）。清除率计算公式为： 空白为1.5 ml 95%的乙醇加入1.5 ml蒸馏水调零。 式中：Ac——对照为1.5 ml DPPH溶液加上1.5 ml蒸馏水在517nm处的吸光值；Aj——1.5ml样品液加上1.5 ml 95%的乙醇在517nm处的吸光值； Ai——1.5ml样品液加上1.5 ml DPPH溶液在517nm处的吸光值； 注意：建议酶解液蛋白浓度以2mg/ml 左右变化，如0.5,1,2,2.5之类变化，但是具体情况应视清除率而定，最终结果应有清除率大于50%和小于50%的情况。 DPPH样品有毒，需戴口罩和手套进行操作。而且DPPH试剂很昂贵，用时注意节约。0.1m mol/L DPPH 乙醇溶液的配制：准确称取0.00395gDPPH，用95%的乙醇溶液溶解并定容到100ml。 3 在卵黄磷脂体系中抗氧化能力的测定 以卵黄脂蛋白为底物的LPO模型反应体系包括:体积比为1:25稀释的卵黄悬液(卵黄用等体积的pH7.45，0.lmol/LPBS配成，使用前磁力搅拌10min)0.2 mL、一定浓度的样品溶液0.lmL、25m moll/LFeSO4溶液0.2mL，用PBS缓冲液补足至2.0mL。对照管除不加样液外其他试剂同前。将上述2种试管同时置37℃恒温水浴锅中保温培养1h。取出后，加入20%TCA0.5mL，静置10 min后，与对照管于3500r/min离心10min，取2.0mL上清液，分别加入质量分数为0.8%硫代巴比妥酸(TBA)溶液1.0mL，加塞于100℃水浴15min，取出冷却。空白管以2.0mLPBS溶液代替，在532nm下测定吸光度，样品对卵黄脂蛋白LPO的抑制率表示为: SA(%)=(Ac一AS)/A C×100 式中:Ac一不加样品的吸光度 As一加入样品的吸光度 注意：卵黄溶液不用时应放置冰箱保存。 酶解液蛋白浓度以5mg/ml左右调整，但具体应视清除率大小而定，对酶解液蛋白浓度

黄嘌呤氧化酶法优化大鼠血清SOD测定条件的探讨

第29卷第3期佛山科学技术学院学报(自然科学版)V o l.29N o.3　2011年5月　Jou rnal of Fo shan U n iversity(N atu ral Science Editi on)M ay2011 文章编号:100820171(2011)0320065203 黄嘌呤氧化酶法优化大鼠血清SOD 测定条件的探讨 翁闪凡,张晓林 (佛山科学技术学院检药系,广东佛山528000) 摘要:目的　优化黄嘌呤氧化酶法测定大鼠血清SOD实验条件。方法　采用黄嘌呤氧化酶法,探讨其加样量、方法重复性、显色稳定性、试剂稳定性及样品稳定性等最佳因素。结果　黄嘌呤氧化酶法测定大鼠血清SOD最佳加样量为5Λl,其测定变异系数CV<1%,显色前后20m in吸光度比较(P>0.05);新配试剂与配制3个月试剂做测定,吸光度比较(P<0.01);新鲜标本和4°C放置48h标本进行测定,吸光度比较(P<0.01)。结论　黄嘌呤氧化酶法测定大鼠血清SOD最佳加样量为5Λl,该法重复性好,显色稳定,测定试剂必须新鲜配制,标本必须新鲜制备。 关键词:黄嘌呤氧化酶法;SOD;测定 中图分类号:R446.112 文献标志码:A 自由基作为引起机体组织细胞损伤的重要因素,引起多种疾病发生、发展,日趋受到国内外医学界的认可及重视。超氧化物阴离子是人类机体内重要的自由基,对机体有很大的损伤作用,超氧化物歧化酶(Sup erox ide dis m u tase,SOD)是广泛存在于各类生物体内的酸性金属酶,催化生物体内超氧自由基(O-2)发生歧化反应,是机体内O-2的天然消除剂,对机体细胞起保护作用。近年来对抗氧化的动物实验研究越来越多,因此建立SOD活性的测定方法,并对其进行方法学探讨显得尤为重要。目前,SOD活性测定主要有黄嘌呤氧化酶法、邻苯三酚自氧化法、羟胺发色法、四氮唑蓝(NB T)显色法、化学发光法[1],笔者主要对黄嘌呤氧化酶法测定大鼠血清SOD进行方法学探讨。 SOD测定试剂盒(南京建成生物工程研究所提供,批号:20100107);722分光光度计;微量加样器;吸嘴;试管。 1　实验原理 通过黄嘌呤及黄嘌呤氧化酶反应系统产生的超氧阴离子自由基(O-2),后者氧化羟胺形成亚硝酸盐,在显色剂的作用下呈现紫红色,用可见分光光度计检测其吸光度。当被测样品中含SOD时,则对超氧阴离子自由基(O-2)有专一性抑制作用,使形成的亚硝酸盐减少,比色时测定管的吸光度值低于对照管的吸光度值,通过公式计算可求出被测样品中的SOD活力。 2　实验方法及结果 2.1　加样量 2.1.1　方法 取大鼠新鲜血清20例,将加样量分为3Λl、4Λl、5Λl、6Λl4组,根据说明书中提供的抑制率参考范围 收稿日期:2011203229 基金项目:广东省自然科学基金资助项目(7010421) 作者简介:翁闪凡(19752),女,广东佛山人,佛山科学技术学院讲师。

药典三部版通则细菌内毒素检查法

药典三部版通则细菌内 毒素检查法 标准化工作室编码[XX968T-XX89628-XJ668-XT689N]

1143 细菌内毒素检查法 本法系利用鲎试剂来检测或量化由革兰阴性菌产生的细菌内毒素，以判断供试品中细菌内毒素的限量是否符合规定的一种方法。 细菌内毒素检查包括两种方法，即凝胶法和光度测定法，后者包括浊度法和显色基质法。供试品检测时，可使用其中任何一种方法进行试验。当测定结果有争议时，除另有规定外，以凝胶限度试验结果为准。 本试验操作过程应防止内毒素的污染。 细菌内毒素的量用内毒素单位（EU）表示，1EU与1个内毒素国际单位（IU）相当。 细菌内毒素国家标准品系自大肠埃希菌提取精制而成，用于标定、复核、仲裁鲎试剂灵敏度、标定细菌内毒素工作标准品的效价，干扰试验及检查法中编号B和C溶液的制备、凝胶法中鲎试剂灵敏度复核试验、光度测定法中标准曲线可靠性试验。 细菌内毒素工作标准品系以细菌内毒素国家标准品为基准标定其效价，用于干扰试验及检查法中编号B和C溶液的制备、凝胶法中鲎试剂灵敏度复核试验、光度测定法中标准曲线可靠性试验。 细菌内毒素检查用水应符合灭菌注射用水标准，其内毒素含量小于 0.015EU/ml（用于凝胶法）或0.005EU/ml（用于光度测定法），且对内毒素试验无干扰作用。 试验所用的器皿需经处理，以去除可能存在的外源性内毒素。耐热器皿常用干热灭菌法（250℃、30分钟以上）去除，也可采用其他确证不干扰细菌内毒素检查的适宜方法。若使用塑料器皿，如微孔板和与微量加样器配套的吸头等，应选用标明无内毒素并且对试验无干扰的器具。 供试品溶液的制备某些供试品需进行复溶、稀释或在水性溶液中浸提制成供试品溶液。必要时，可调节被测溶液（或其稀释液）的pH值，一般供试品溶液和鲎试剂混合后溶液的pH值在6.0～8.0的范围内为宜，可使用适宜的酸、碱溶液或缓冲溶液调节pH值。酸或碱溶液须用细菌内毒素检查用水在已去除内毒素的容器中配制。缓冲液必须经过验证不含内毒素和干扰因子。 内毒素限值的确定药品、生物制品的细菌内毒素限值（L）一般按以下公式确定： L=K/M 式中 L为供试品的细菌内毒素限值，一般以EU/ml、EU/mg或EU/U（活性单位）表示； K为人每千克体重每小时最大可接受的内毒素剂量，以EU/（kg·h）表示，注射剂K=5 EU/（kg·h），放射性药品注射剂K=2.5 EU/ （kg·h），鞘内用注射剂K=0.2 EU/（kg·h）； M为人用每千克体重每小时的最大供试品剂量，以ml/（kg·h）、mg/（kg·h）或U/（kg·h）表示，人均体重按60kg计算，人体表面积 按1.62㎡计算。注射时间若不足1小时，按1小时计算。供试品每 平方米体表面积剂量乘以0.027即可转换为每千克体重剂量（M）。

ORAC法测定虾青素抗氧化能力实验

ORAC法测定虾青素抗氧化能力实验 1.实验目的 1.1 了解多功能酶标仪的应用范围和基本结构及其操作方法 1.2 掌握ORAC法测定虾青素抗氧化能力实验原理 2 实验原理： 2.1 仪器基本原理 酶标仪实际上就是一台变相的专用光电比色计或分光光度计。光源灯发出的光波经过滤光片或单色器变成一束单色光，进入塑料微孔极中的待测标本，该单色光一部分被标本吸收，另一部分则透过标本照射到光电检测器上。光电检测器将透射过待测标本后强弱不同的光信号转换成相应的电信号，电信号经前置放大、对数放大、模数转换等处理后，送入微处理器进行数据处理，转换成相应的浓度，最后由显示器和打印机输出结果。 2.2 ORAC实验原理 ORAC是氧自由基吸收能力（oxygen radical absorbance capacity）的缩写，也被称为抗氧化能力指数，ORAC分析法中的自由基主要来源于偶氮化合物2，2'-偶氮-双-（2-脒基丙烷）氯化二氢[2，2'-azobis（2-amidinopropane）dihydrochloride，AAPH]热分解产生的过氧化氢自由基，也可以是芬顿( Fenton) 反应过程中产生的羟自由基，以荧光素钠（sodium flourescein，FL）为荧光探针，观察自由基与荧光探针作用后，探针荧光强度的衰退过程，以水溶性维生素E类似物( 6-hydro-2，5，7，8-tetramethylchroman-2-carboxylic acid，Trolox) 作为抗氧化标准物质，检测体系中各种抗氧化剂延缓探针荧光强度衰退的能力，以此评价抗氧化剂的抗氧化能力。 3 仪器及试剂 3.1 仪器及配件 Enspire 多功能酶标仪，96孔荧光板 3.2 试剂 3.2.1 磷酸盐缓冲液的制备：精密量取适量磷酸，以高纯水稀释得到75 mmol/L 磷酸溶液；称取8.56 g磷酸氢二钾以高纯水500mL溶解，以磷酸溶液调pH 7.4，即得75 mmol/L pH 7.4的磷酸盐缓冲液。 3.2.2 AAPH溶液的制备：精密称取AAPH 207mg，以磷酸盐缓冲液溶解并定容至5 mL量瓶，即得浓度为153 mmol/L的AAPH溶液。 3.2.3 FL溶液的制备：精密称取FL 40 mg，以磷酸盐缓冲液溶解，制成4125 mmol/L的FL 溶液，记为FL母液a。精密吸取FL母液a 50uL置50 mL量瓶中，以上述缓冲液定容至刻度，记为FL母液b；FL母液a，b均于4℃冷藏。实验时精密吸取FL母液b500uL置25 mL 量瓶中，以上述缓冲液定容至刻度，即得8*10-5mmol/L的稀释液。 3.2.4 样品溶液的制备：精密称取虾青素样品适量，以甲醇溶解，配制成1mg/mL的化合物母液，继而以缓冲液稀释制成10，50，100ug/mL的化合物溶液。 4 实验内容 4.1 样品量效曲线的确定：精密吸取FL稀释液100uL于96孔荧光板中，随后加入不同浓度样品溶液50uL振荡5 min，37℃温育10min后迅速加入AAPH液50uL启动反应。以激发波长485 nm，发射波长535 nm进行测定并记录荧光值，反应过程中每隔1.5min测定一次荧光值（记为Fn）。以测定时间为横坐标，荧光值为纵坐标绘制不同浓度虾青素荧光衰变曲线。

抗氧化活性测定方法的比较

抗氧化活性测定方法的比较 人体衰老和多种疾病均与自由基有关，寻找天然抗氧化剂具有重要意义。黄酮、多糖、多肽、酚类等生物活性成分均具有抗氧化活性，抗氧化活性的筛选方法可分为体外和体内2种测试体系。 体外：抗氧化活性可以用在特定条件下，样品对检测体系中自由基的清除能力、抗油脂过氧化能力及样品的还原能力、总抗氧化能力等来衡量和表征。常用的方法有羟基自由基（·OH）清除能力法、1,1-二苯基苦基苯肼（DPPH法）、2,2-联氮基-双-(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二氨盐（ABTS 法）、超氧阴离子自由基法（O2-·）、邻苯三酚自氧化法、β-胡萝卜素漂白法、硫代巴比妥酸法、铁离子还原能力测定（FRAP法）、总酚测定法、ORAC法等方法。体内：主要有DNA氧化损伤法、蛋白质氧化损伤法、线粒体氧化损伤法。 其中DPPH法和ABTS法操作较简单便捷，不需要特殊的检测设备，只在需固定时间下记下其紫外分光光度测量值后计算其自由基清除率，缺点是不同物质具有组成和结构的差异，与DPPH·、ABTS+·的反应速率不同，反应到达平衡的时间不同，将反应时间固定在某一值时，可能对抗氧化剂的抗氧化性评价带来错误的判断，且DPPH自由基会和其他自由基发生反应。邻苯三酚自氧化法缺点是检测波长、缓冲液的组成及ｐＨ值、邻苯三酚浓度等关键测定条件存在

着较大差异。β-胡萝卜素漂白法的缺点是β-胡萝卜素本身有抗氧化活性，对样品活性的测定结果有影响。FRAP法主要用于食品业，优点是简单易操作、可以重复，缺点是无法测定硫醇化合物的还原能力。ORAC法是国际上通用的评价食品氧化的标准方法，缺点是仪器成分较复杂，检测成本较高。 目前普遍使用的体外抗氧化活性指标一般都采用分光光度法，使用分光光度计测量各种颜色成分含量的变化。分光光度法操作较简单、便捷，不需要特殊的检测设备，只在需固定时间下记下其紫外-可见分光光度测量值后计算其活性大小，具有成本低、效率高、样品量少等优点。分光光度法缺点是会受到样本自身颜色和浑浊度的影响和限制，颜色深的样品测得的数据误差大，甚至得到错误的结果；不同物质组成和结构存在差异，与各种自由基的反应速率不同，反应到达平衡的时间不同，将反应时间固定在某一值时，可能对抗氧化剂的抗氧化性评价带来错误的判断。外界环境因素对实验结果也存在一定程度的影响，有些抗氧化活性实验在冬天低温时不易成功，测得的数据往往没有规律。 我觉得在测定样品的抗氧化活性时，各种方法都有自己的优缺点，要根据需测物质来决定用什么方法，比如DPPH 法的自由基选择性强，不和只有一个羟基的芳香酸、无羟基的类黄酮反应，这类物质需用其他方法测定。若对检测结果

黄嘌呤氧化酶(xanthione oxidase, XOD)试剂盒说明书

货号：QS1402 规格：50管/48样黄嘌呤氧化酶（xanthione oxidase,XOD）试剂盒说明书 紫外分光光度法 正式测定前务必取 2-3个预期差异较大的样本做预测定 测定意义： XOD（EC 1.17.3.2）催化黄嘌呤氧化生成尿酸和超氧阴离子，是活性氧主要来源之一；同时也是核苷酸代谢的关键酶之一。XOD主要分布于哺乳动物的心，肺，肝脏等组织中，当肝功能受损时，XOD大量释放到血清中，对肝损害的诊断具有特异性的意义。 测定原理： XOD催化黄嘌呤产生尿酸，尿酸在290nm下有特征吸收峰。 自备实验用品及仪器： 紫外分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1mL石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。 试剂组成和配制： 提取液：60mL×1瓶，4℃保存； 试剂一：60mL×1瓶，4℃保存； 试剂二：粉剂×4瓶，4℃保存。 粗酶液提取： 1、细菌、细胞或组织样品的制备： 细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。 组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。 2、血清（浆）样品：直接检测。 操作步骤： 1、分光光度计预热30min以上，调节波长至290nm，蒸馏水调零。 2、XOD检测工作液的配制：用时在每瓶试剂二中加入15mL试剂一，充分混匀，现配现用； 3、测定前将XOD检测工作液37℃(哺乳动物)或25℃（其它物种）水浴10min。 4、取1mLXOD检测工作液于1mL石英比色皿中，再加入35μL样本，混匀，室温下立即测定290nm下的初始吸光值A1和1min后的吸光值A2，计算ΔA＝A2-A1。 XOD活性计算： 1、血清（浆）XOD计算： 单位的定义：每毫升血清（浆）每分钟催化产生1nmol 尿酸定义为一个酶活力单位。 XOD（nmol/min/mL）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷V样÷T=2424×ΔA 2、组织、细菌或细胞中XOD计算： （1）按样本蛋白浓度计算： 单位的定义：每mg组织蛋白每分钟催化产生1nmol 尿酸定义为一个酶活力单位。 第1页，共2页

小鼠总抗氧化能力的测定

小鼠总抗氧化能力的测定 刘小美宋菊敏 （2006-10-24） 一、原理 机体中有许多抗氧化物质，能使Fe3＋还原成Fe2＋，后者可与菲啉类物质形成稳固的络合物，通过比色可测出其抗氧化能力的高低。 二、目的 1．掌握总抗氧化能力的测定方法。 2．观察血虚小鼠模型总抗氧化能力的变化。 3．观察中药对血虚小鼠模型总抗氧化能力的影响。 三、材料和方法 1．试剂：总抗氧化能力测定试剂盒（南京建成生物工程研究所） 2．材料：EF管（1.5ml）120支，一次性试管（10ml）60支，移液器（P20ul、P100ul 、P1000ul）各2把及配套枪头各200支，玻璃比色皿（3ml，1cm光径）4只，温浴箱，分光光度计，漩涡混匀器1台，普通离心机大管、小管各1台，试剂瓶（125ml）1个，烧杯（150ml）2个，吸管（10ml）2支，吸球1支，量筒（200ml）1个，标签纸2张。 3．测定方法 （1）样本处理：取全血3500转/分离心15分钟得血清待测。 （2）试剂盒组成及配制：（50T） 试剂一：液体60ml×2瓶，40C保存。 试剂二：粉剂×2支，用时每支加双蒸水至120ml，室温保存。 试剂三：黄色贮备液10ml×1瓶，避光冷藏保存。贮备液得稀释液60ml×1瓶。 试剂三应用液的配制：临用前取贮备液以稀释液稀释，比例为1：19。需多少配制多少。 试剂四：溶液24ml×1瓶 试剂五：溶液24ml×1瓶，室温保存（天冷时会凝固，每次测试前适当加温以加速溶解，直至透明方可使用）。——测组织中总抗氧化能力时用到，测血清时不用。 处测各管吸光度。（370C时，每分钟每毫升血清使反应体系的吸光度（OD）值每增加0.01时，为一个总抗氧化能力单位）。 4）计算： 总抗氧化能力（单位/毫升血清）＝（测定管OD-对照管OD）÷0.01÷30×19 四、注意事项 1．室温放置10分钟后必须立即测定吸光度，否则吸光度会增加。 2．实验试剂用量较少，所以加量一定要仔细、准确。 3．每次加样后都必须在漩涡器上充分混匀。 4．难吸难打的试剂必须做到慢吸慢打。 五．思考题 1．小鼠血虚模型总抗氧化能力会出现什么样的变化？为什么会出现这样的变化？ 2．怎样用本实验的结果解释模型动物的某些主要症状？ 1

抗氧化性方法

取0.2mL 甲醇，加入0.3 mL样品溶液（浓度50-800ug/mL ,甲醇配制），混匀，加入2.5mL 75uM DPPH（甲醇溶解）溶液，室温放置30min ,于517nm处测吸光值。 清除率=[A0-（A-A b）/A0]×100% A0：不加入样品，DPPH吸光值（对照） A：样品和DPPH吸光值 A b：样品，不加DPPH吸光值 2 O2-· PMS吩嗪硫酸甲酯 NADH 烟酰胺腺嘌呤二核苷酸 NBT氯化硝基四氮唑蓝 0.1mL 样品溶液，加入1mL 16 mM Tris-HCl (pH 8.0)---78uM NADH, 1mL 16 mM Tris-HCl (pH 8.0)- --10uM PMS ，1mL 16 mM Tris-HCl (pH 8.0)- --50uM NBT, 25min保温5 min后于560 nm 处吸 光值。清除率=（1-A 样品/A 对照 ）×100%。 3 邻苯三酚自氧化 0.1mL 样品溶液，加入2.8mL 0.05M Tris-HCl (pH 8.0)---1mM EDTA,加入0.2mL 6mM 邻苯三酚。室温迅速振摇，于325nm处每30s 测吸光值至4min。 清除率=（1-样品斜率/对照斜率）×100% 4 FRAP reagent： 10体积300 mmol/L pH3.6醋酸缓冲液,1体积10 mmol/L TPTZ---40 mmol/L HCl 溶液，1体积20mmol/L FeCl3. 1.5mL 新配制FRAP reagent加热至37℃,于593 nm处测空白吸光值。然后加入50uL 样品溶液和150uL去离子水。8min后测吸光值。 FRAP值=A样品-A空白 2.1 清除羟基自由基（HPLC法） 2.1.1色谱条件 色谱柱：Angilent HC-C18柱（(4.6×250mm，5um); 流动相：甲醇：0.1% H3PO4=30:70;流速： 1ml/min;柱温：35℃；紫外检测波长：254nm;进样量：20ul。

辣根过氧化物酶分光光度法测定 黄嘌呤氧化酶的活性

辣根过氧化物酶分光光度法测定黄嘌呤氧化酶的活性 李忠琴1 许小平2 杨海麟1 王武#1 1 （江南大学工业生物技术教育部重点实验室，无锡214036） 2（福州大学化学化工学院，福州350002） 摘 要 研究了以辣根过氧化物酶-苯酚-4-氨基安替比林反应显色新体系，检测黄嘌呤氧化酶（XOD ）活力的新方法。确定该酶活性测定的最佳条件为：辣根过氧化物酶（HRP ）7000U /L ，4-氨基安替比林（AAP ）1mmol /L ，苯酚（PA ）6mmol /L ，黄嘌呤（XAN ）1mmol /L 溶于50mmol /L Tris-CL 缓冲液（pH 8.4）；反应温度为37℃，保温时间为20min ；检测波长为508nm 。本方法测定XOD 酶活的线性范围为5.0～100.0U /L ，线性关系良好（r =0.9992），检出限为1.3U /L 。该方法操作简单易行，测定结果准确可靠。可有效应用于普通实验室和临床常规生化检测。 关键词 黄嘌呤氧化酶，辣根过氧化物酶，酶的活力测定，分光光度法 2005-08-30收稿；2005-12-05接受 本文系福建省自然科学基金（No.C0410006）和工业生物技术教育部重点实验室基金（No.KLIB-KF200502）资助项目 1 引 言 黄嘌呤氧化酶（xanthine oxidase ，XOD ，EC 1. 2. 3.22）是一种钼羟类胞质缀合酶。主要用于痛风、 心肌梗塞和细胞损伤后次黄嘌呤和黄嘌呤水平的检测［1～3］ 。目前测定黄嘌呤氧化酶活力主要采用NBT /MTS-PMS 比色法、紫外分光光度法、电化学法及放射化学法［4～8］等方法。但比色法形成的显色物 溶解度低，PMS 对XOD 活性有一定的抑制，且NBT 、MTS 和PMS 试剂昂贵。紫外分光光度法中黄嘌呤和尿酸的紫外吸收波长较接近，直接进行紫外检测，干扰严重。其余两种方法操作繁琐，仪器设备要求 高而难于推广。本实验根据辣根过氧化物酶（horseradish peroxidase ，HRP ）［9］和黄嘌呤氧化酶的反应特 性，提出了用XOD 偶联辣根过氧化物酶，直接测定黄嘌呤氧化酶活力的新方法。 2 实验部分 2.1 仪器和试剂 U-300型紫外-可见分光光度仪（日本日立公司）；H.H.S 11-2R 恒温水浴锅（上海医疗器械五厂）；高速冷冻离心机（日本Hitachi CR22G 型）。0.67U /mg 黄嘌呤氧化酶（Sigma 公司）；250U /mg 辣根过氧化物酶（上海双向西巴斯科技有限公司）；4-氨基安替比林（AR ，华东师范大学化工厂）；苯酚（AR ，国药集团上海化学试剂公司）；黄嘌呤（99%，Fluka ）；Tris （BR ，国药集团化学试剂有限公司）；HCL （AR ，国药集团上海化学试剂公司）；叠氮钠（BR ，厦门新隆达试剂有限公司）。2.2 实验方法 配制反应显色液：4-氨基安替比林（4-Aminoantipyrine ，AAP ），1mmol /L ；苯酚（phenic acid ，PA ），6mmol /L ；Tris-HCL 缓冲液，50mmol /L ；叠氮钠，0.02%；辣根过氧化物酶（horseradish peroxidase ，HRP ），7000U /L 。在具塞试管中，依次加入3mL 反应显色液，黄嘌呤（xanthine ，XAN ）溶液100μL ，黄 嘌呤氧化酶（XOD ）酶液50μL 。混匀，在37℃下加热20min ，煮沸5min 终止反应。以不加XOD 反应体系作为参比，测定UV-Vis 谱。2.3 样品处理 Arthrobacter g-X 菌株液体发酵48h 后，在10000r /min 转速下离心15min ，收集细胞。再将其悬浮于50mmol /L Tris-HCL 缓冲液（pH 7.5）中，采用250W 超声处理15min 。然后用12000r /min 转速离心10min ，取其上清液测定酶活。 第34卷2006年6月 分析化学（FENXI HUAXUE ） 研究简报Chinese Journal of Analytical Chemistry 第6期821～824

细菌内毒素检查标准操作规程

细菌内毒素检查标准操作规程 1 简述 1.1 本规范适用于中国药典2005年版附录中细菌内毒素检查法一凝胶法和光度测定法。后者包括浊度法和显色基质法。供试品检测时，可使用其中任何一种方法进行实验。当 测定结果有争议时，除另有规定外，以凝胶法结果为准。 1.2 供试品细菌毒素限值的确定。 （一）药典中有规定的，按供试品各论中规定限值； （二）尚无标准规定的，按以下公式确定供试品内毒素限值： L=K/M 式中 L为供试品的细菌内毒素限值，以EU/ml、EU/mg、EU/U表示。 K为按规定的给药途径，人用每公斤体重每小时最大可接受的内毒素剂量，以EU/kg/h表示。其中注射剂，K=5EU/kg/h；放射性药品注射剂，K=2.5EU/kg/h；鞘内用注射剂， K=0.2EU/kg/h。 M为人用每公斤体重每小时的最大供试品剂量，以ml/kg/h、ml/kg/h、U/kg/h表示。药品人用最大剂量可参阅国家批准的药品说明书和《临床用药须知》等权威著作，中国人 均体重按60kg计算，注射时间小于1小时的按1小时计。按人用剂量计算限值时，如遇特殊情况，可根据生产和临床用实际情况做必要调整，但需说明理由。 1.3 供试品最大有效稀释倍数的确定 供试品的最大有效稀释倍数（MV D）按下式计算： MV D=C?L/λ L为供试品的细菌内毒素限值；C为供试品溶液的浓度。当L以EU/ml表示时，C等于1.0ml/ml；当L的单位以EU/mg或EU/U表示时，C为供试品制备成溶液后的浓度，单位为mg/ml 或U/ml。如供试品为注射用无菌粉末或原料药，则MV D取1，可计算供试品的最小有效稀释浓度C: λ/L。

抗氧化剂抗氧化活性的测定方法

1.抗氧化剂是指在低浓度下能有效延缓或阻止底物氧化的物质。被氧化的底物包括蛋白质、脂质、糖和DNA。 2.初始型抗氧化剂(AH)可通过与脂质自由基L.、过氧自由基LOO.或烷氧自由基LO.反应抑制脂质氧化链反应。 L.+ AH--- LH + A. LOO.+ AH--- LOOH + A. LO.+ AH--- LOH + A. 抗氧化剂自由基A.也能与过氧自由基、烷氧自由基反应从而终止脂质氧化反应。 LOO.+ A.---LOOA LO.+ A.---LOA 次级型抗氧化剂可通过各种机理延缓脂质氧化,如螯合过渡金属、给初始型抗氧化剂补充氢、清除氧以及使活性物质失活等。 抗氧化剂的活性分为在生物体外(如食品中)的活性和在生物体内的活性。本文综述了体外测定抗氧化剂抗氧化活性的方法,不包括在生物体中测定生物活性的方法。 3.评价或表征抗氧化活性的方法为了说明在特定条件下被测物抑制底物氧化的效力或清除自由基的能力 实际测定时至少要说明在测试条件下被测物是抗氧化剂还是促氧化剂;在指定浓度下比较不同测试材料(如被测物与标准抗氧化剂或添加有被测物的测试体系与空白体系)对底物的作用。 评价或表征抗氧化活性的方法有: (1)在指定的时间测量氧化产物或官能团的浓度或吸光度值;( 2)测量反应的速率;

( 3)测量诱导期(延滞期)或氧化达到一定程度所需的时间;( 4)测量速度的积分(即动力学曲线下的面积) ; ( 5)测量被测物产生与标准抗氧化剂相当作用的浓度。4.参数 4.1诱导期( induction period) 诱导期tIND(也叫延滞期, lag period)常定义为化学反应的速度。诱导期是一个相当不确定的值,受检测方法、使用仪器的灵敏性以及一些其他因素的影响。对于脂质氧化,诱导期通常是指链增长阶段动力学曲线的切线和时间轴的交点。 4.2抑制率( percentag e of inhibition)和IC50 抑制率和IC50 (抗氧化剂提供50%抑制作用时的浓度,也可用EC50表示的)常用来表征抗氧化能力。它们不仅与被测抗氧化剂的反应性能和氧化的底物有关,而且受其他因素的影响,如脂质氧化链反应的长度和抑制速率等。此外,用IC50表征抗氧化剂 的活性与比较活性的时间点有关。只有在其他参数相同的情况下,在某一研究中测得的抑制率和IC50才可以与另一研究中测得的值进行直接比较。TEC50是指抗氧化剂提供50%抑制作用所需的时间,也常用来表征抗氧化活性 5.对测定方法的要求 测定抗氧化剂抗氧化活性的方法应满足如下要 求: ( 1)能说明测试体系中发生的反应,并能用明确的动力学图解描述;( 2)测试要有再现性; ( 3)测试效率要足够高; ( 4)方法要相对简单; ( 5)能连续检测; ( 6)应使用与体内或食品有关的活性自由基;

抗氧化功能评价方法

附件1： 抗氧化功能评价方法 试验项目、试验原则及结果判定 Items, Principles and Result Assessment 1 试验项目 1.1 动物实验 1.1.1 体重 1.1.2 脂质氧化产物：丙二醛或血清8-表氢氧异前列腺素（8-Isoprostane） 1.1.3 蛋白质氧化产物：蛋白质羰基 1.1.4 抗氧化酶：超氧化物歧化酶或谷胱甘肽过氧化物酶 1.1.5 抗氧化物质：还原性谷胱甘肽 1.2 人体试食试验 1.2.1 脂质氧化产物：丙二醛或血清8-表氢氧异前列腺素（8-Isoprostane） 1.2.2 超氧化物歧化酶 1.2.3 谷胱甘肽过氧化物酶 2 试验原则 2.1 动物实验和人体试食试验所列的指标均为必测项目。 2.2 脂质氧化产物指标中丙二醛和血清8-表氢氧异前列腺素任选其一进行指标测定，动物实验抗氧化酶指标中超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶任选其一进行指标测定。 2.3 氧化损伤模型动物和老龄动物任选其一进行生化指标测定。 2.4 在进行人体试食试验时，应对受试样品的食用安全性作进一步的观察。 3 结果判定 3.1 动物实验：脂质氧化产物、蛋白质氧化产物、抗氧化酶、抗氧化物质四项指标中三项阳性，可判定该受试样品抗氧化功能动物实验结果阳性。 3.2 人体试食试验：脂质氧化产物、超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶三项指标中二项阳性，且对机体健康无影响，可判定该受试样品具有抗氧化功能的作用。

抗氧化功能检验方法 Method for the Assessment of Antioxidative Function 1 动物实验 1.1 实验动物 选用10月龄以上老龄大鼠或8月龄以上老龄小鼠，也可用氧化损伤模型鼠。单一性别，小鼠每组10－15只，大鼠8－12只。 1.2 剂量分组及受试样品给予时间 实验设三个剂量组和一个溶剂对照组，以人体推荐量的10倍（小鼠）或5倍（大鼠）为其中的一个剂量组，另设两个剂量组，高剂量一般不超过30倍，必要时设阳性对照组、空白对照组。受试样品给予时间30天，必要时可延长至45天。 1.3 实验方法 1.3.1 老龄动物 选用10月龄以上大鼠或8月龄以上小鼠，按血中MDA水平分组，随机分为1个溶剂对照组和3个受试样品剂量组。3个剂量组给予不同浓度受试样品，对照组给予同体积溶剂，实验结束时处死动物测脂质氧化产物含量、蛋白质羰基含量、还原性谷胱甘肽含量、抗氧化酶活力。 1.3.2 D－半乳糖氧化损伤模型 1.3. 2.1原理 D-半乳糖供给过量，超常产生活性氧，打破了受控于遗传模式的活性氧产生与消除的平衡状态，引起过氧化效应。 1.3. 2.2造模方法 选25-30g健康成年小鼠，除空白对照组外，其余动物用D-半乳糖40mg－1.2g/kg BW 颈背部皮下注射或腹腔注射造模，注射量为0.1mL/10g，每日1次，连续造模6周，取血测MDA，按MDA水平分组。随机分为1个模型对照组和3个受试样品剂量组，3个剂量组经口给予不同浓度受试样品，模型对照组给予同体积溶剂，在给受试样品的同时，模型对照组和各剂量组继续给予相同剂量D-半乳糖颈背部皮下或腹腔注射，实验结束处死动物测脂质氧化产物含量、蛋白质羰基含量、还原性谷胱甘肽含量、抗氧化酶活力。 1.3.3 乙醇氧化损伤模型 1.3.3.1原理

药典三部(2015版)-通则-1143细菌内毒素检查法

药典三部(2015版)-通则-1143细菌内毒素检查法

1143 细菌内毒素检查法 本法系利用鲎试剂来检测或量化由革兰阴性菌产生的细菌内毒素，以判断供试品中细菌内毒素的限量是否符合规定的一种方法。 细菌内毒素检查包括两种方法，即凝胶法和光度测定法，后者包括浊度法和显色基质法。供试品检测时，可使用其中任何一种方法进行试验。当测定结果有争议时，除另有规定外，以凝胶限度试验结果为准。 本试验操作过程应防止内毒素的污染。 细菌内毒素的量用内毒素单位（EU）表示，1EU与1个内毒素国际单位（IU）相当。 细菌内毒素国家标准品系自大肠埃希菌提取精制而成，用于标定、复核、仲裁鲎试剂灵敏度、标定细菌内毒素工作标准品的效价，干扰试验及检查法中编号B和C溶液的制备、凝胶法中鲎试剂灵敏度复核试验、光度测定法中标准曲线可靠性试验。 细菌内毒素工作标准品系以细菌内毒素国家标准品为基准标定其效价，用于干扰试验及检查法中编号B和C溶液的制备、凝胶法中鲎试剂灵敏度复核试验、光度测定法中标准曲线可靠性试验。 细菌内毒素检查用水应符合灭菌注射用水标准，其内毒素含量小于0.015EU/ml（用于凝胶法）或0.005EU/ml（用于光度测定法），且对内毒素试验无干扰作用。 试验所用的器皿需经处理，以去除可能存在的外源性内毒素。耐热器皿常用干热灭菌法（250℃、30分钟以上）去除，也可采用其他确证不干扰细菌内毒素检查的适宜方法。若使用塑料器皿，如微孔板和与微量加样器配套的吸头等，应选用标明无内毒素并且对试验无干扰的器具。 供试品溶液的制备某些供试品需进行复溶、稀释或在水性溶液中浸提制成供试品溶液。必要时，可调节被测溶液（或其稀释液）的pH值，一般供试品溶液和鲎试剂混合后溶液的pH值在6.0～8.0的范围内为宜，可使用适宜的酸、碱溶液或缓冲溶液调节pH值。酸或碱溶液须用细菌内毒素检查用水在已去除内毒素的容器中配制。缓冲液必须经过验证不含内毒素和干扰因子。 内毒素限值的确定药品、生物制品的细菌内毒素限值（L）一般按以下公

抗氧化活性测定方法

抗氧化方法 一、Determination of Superoxide Anion Scavenging Ability（超氧阴离子清除能 力） 1、determined by a CL method in the pyrogallol-luminol system on a BPCL Ultra-weak luminescence analyzer。（焦性没食子酸-发光胺，荧光检 测） 2、步骤：10μL sample (不同浓度) + 50 μL焦棓酸(6.25*10-4 mol/L) + 0.94 mL of a mixture containing luminol (0.05 mol/L) and carbonate buffer (pH 10.2) （发光胺用pH 10.2碳酸盐缓冲液配成0.05 mol/L） 3、Hi-V, 800; Kv, -1; the spectral range of CL（波长范围）180-800 nm; 温 度：30 ° C.总时间：300S，每2S读数一次。 4、对照：不加样品（样品用水代替）。空白不加焦棓酸（用来调零）。 二、Determination of Scavenging Ability on Hydroxide Radicals（羟基自由基清除能力） 1、CuSO4-Phen-Vc-H2O2 CL system（1 mL体系） 2、50 μL of sample solution （样品液）+ 50 μL of a 1.0 mmol/L CuSO4 solution （CuSO4 溶液）+ 50 μL of a 1 mmol/L 1,10-phenanthroline solution（邻二氮菲溶液）+ 700 μL of a 0.05mol/L borate buffer (pH 9.0) （硼酸缓冲液）+ 100 μL of a 1 mmol/L ascorbate solution + 50 μL of a 0.15% H2O2 solution 3、总时间400S，间隔3S。Hi-V, 800; Kv, -1; the spectral range of CL（波长范围）180-800 nm; 温度：30 ° C. 4、阳性对照：不加样品（样品用水代替）。空白不加H2O2（用来调零）。 三、Determination of Scavenging Effect on Hydrogen Peroxide（过氧化氢清除 能力） 1、luminol-H2O2 system

植物总抗氧化能力(TAC)比色法(ABTS)定量检测试剂盒

植物总抗氧化能力（TAC）比色法（ABTS）定量检测试剂盒产品说明书（中文版）
主要用途
植物总抗氧化能力 （TAC） 比色法 （ABTS） 定量检测试剂盒是一种旨在通过过硫酸钾的参与， 使染料 ABTS 氧化，在抗氧化剂的存在下，通过分光光度仪，观察其峰值下降的变化，来定量检测对应于标准水溶性生 育酚 Trolox 的总抗氧化能力，即抑制氧化等值浓度的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功 实验证明的。适用于各种体液包括血浆、血清、尿液、脑脊液、唾液、精液等各种体液的总抗氧化能力检 测。产品严格无菌，即到即用，操作简易，性能稳定。b5E2RGbCb5E2RGbC
技术背景
超氧自由基阴离子（superoxide radical；O2-） 、过氧化氢（hydrogen peroxide；H2O2） 、羟自由基或氢氧基 （hydroxyl radical；OH-） 、过氧化基（peroxyl radical；ROO-） 、氢过氧自由基（hydroperoxyl；HOO） 、烷 氧自由基（alcoxyl radical） 、氮氧基（nitric Oxide；NO-） 、过氧亚硝基阴离子（peroxynitrite anion；ONOO-） 次氯酸（hypochlorous acid；HOCl） 、半醌自由基（semiquinone radical） 、单线态氧气（singlet oxygen）等 细胞内活性氧族（Reactive Oxygen Species；ROS）的产生和增多，将导致细胞衰老或凋亡，甚而导致诸如 冠心病、风湿性关节炎、肿瘤、退行性病变等各种病理状况。在生物系统内，通过抗氧化酶例如超氧化物 歧化酶、过氧化氢酶和谷胱甘肽过氧化物酶等，大分子，例如白蛋白、铜蓝蛋白（ceruloplasmin；CER） 、 铁蛋白（ferritin）和抗氧化因子，例如生育醇、类胡萝卜素、抗坏血酸、还原性谷胱甘肽和尿酸胆红素 （bilirubin）等，产生抗氧化能力，即捕获自由基的能力，达到消除或降低ROS的损害。通过过硫酸钾 （potassium persulfate）氧化2,2’-连氮-双（3-乙基苯并噻唑-6-磺酸） （2,2'-Azino-bis(3-ethylbenzthiazoline6-sulfonic acid)，diammonium salt；ABTS）产生的ABTS自由基，衡量体系中抗氧化剂捕获自由基或者消耗 抗氧化剂的能力，在分光光度仪（730nm波长）的帮助下，观察其峰值下降的变化，并与标准化抗氧化剂 水溶性生育酚Trolox对照。p1EanqFDp1EanqFD
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