termsheet解析要点
Termsheet的概念与结构
Termsheet的定义
Termsheet，又称意向书，或框架性协议，指合同双方在缔结正式协议前就协商程序本身或就未来合同的内容所达成的各种约定。
Termsheet法律效力
对于意向书不能一概的认为无法律约束力或者是有法律约束力，通常按的实际需要而定。因此，律师往往会在意向书中规定意向书本身或具体条款具有何种法律约束力。一般会赋予程序性条款法律约束力，实体性条款则不具有法律约束力。程序性条款是指那些直接关涉缔约过程但不在未来合同中反映出来的内容。实体性条款是指那些未来将成为正式合同条款的内容。实践中有的意向书甚至包括了未来合同的全部条款。
Termsheet的结构：一般性条款；估值条款；投资者权利条款；投资者保护条款。一般性条款：定义条款、锁定条款、排他性条款、不公开条款、保密条款、有效期限、费用条款、争端解决、提供资料和信息条款、进度条款。
估值条款：初始估值及投资金额、股权比例、估值调整。
投资者权利条款：新股发行优先认购权、最优惠投资者、增资权、反稀释、创始人及管理层股锁定、股息红利分配权、优先受让权/共售权、表决权、清算优先权、知情权／检查权、赎回权、放弃股权的特别权利、拖带权/领售协议
投资者保护条款:股东会特别决议事项、不行使某些法定权利、董事会及专业委员会、管理团队组建的参与、员工股票期权、高层管理团队的重大变化、关键人员保险、不离职／不竞争条款、员工知识产权协议、投资者上市安排的责任、关
于引入新股东、陈述和保证、投资资金使用、违约行为、主要管理人员费用限制、交割先决条件。
（一）一般性条款
1、定义条款
2、程序性条款
（1）排他性条款（独家协商）
协议各方不得与其他任何第三方就本合同涉及的领域或类似领域上合作。
（2）保密条款
本次投资过程中任何一方所获悉的其他方的资料，如该等资料尚未公开发表，则应视为机密资料，并负有保密义务。
（3）费用条款
该条款规定并购过程中产生的各项费用的分担方式或者原则。
（4）提供资料和信息条款
该条款要求卖万及目标公司向买方提供其所需的企业资料及信息尤其是未向公众公开的资料，以利于买方了解目标公司。
（5）锁定条款
在意向书有效期内，买方可依约定价格购买目标公司部分股票或股权。潜在买方由于担心卖方先发制人，而使自己无法完成完全并购目标公司的目的，于是订立此一条款。
（6）不公开条款
该条款要求并购任何一方在共同公开宣布并购前，未经对方同意不得向任何特定或不特定的第三人泄露有关并购事项的资料或信息，除非法律有强制公开的规
定。
（7）有效期限
本备忘录自签字之日起至年月日止有效，若届时双方还未正式签署投资协议，本备忘录自动失效，相关各方届时另有约定的除外。
（8）争端解决
本协议和最终文件均应受中国法律管轄和解释，如有争议，任何一方可将争议提交中国国际经济贸易仲裁委员会进行仲裁该仲裁裁决为终局裁决，对各方均具有约束力。
（9）进度条款
（二）估值条款
1、初始估值具体条款（投资额）
一般是规定转让或增资价格股权比例增资前后估值等问题。
2、估值调整（对赌条款）
（1）定义：即“估值调整机制”或“对赌条款”，是指投资者与融资者对于企业未来经营绩效的不确定性，暂不争议，而是约定：根据运
营的实际绩效调整企业的估值，从而重新划定双方的利润边界对赌协议产生的根源在于企业未来盈利能力的不确定性。“对赌协议”本质上是一种财务工具，是带有附加条件的价值评估方式，也是一种高风险、高收益的期权激励方式。
（2）目的：为了尽可能地实现投资交易的合理和公平，通过一种直接跟利益挂钩的激励与惩罚机制，刺烟始股东或管理层为公司创造更好业绩，带来更大回报；激发公司超常规的快速增长，短期来看，可以帮助公司上市退出．对赌协议并不是双方来争抢同一块既定的蛋糕，而是双方都希望把蛋糕做大，从而使自己拥有
的那一份变得更大。
（3）法律规定：对赌协议实际上是一种股东间的协议，法律上并无实质性障碍。（4）对赌的主要内容
目前国内主要是外国投资企业与国内企业签订对赌协议，与国外对赌协议不同的是，国内企业通常只采用财务绩效条款，而且一般都以单一的“净利润”为标尺，以“股权”为筹码，其区别只是条款的设计。
根据协议条款，投资方通常有三种选择：一是依据单一目标，年的净利润或税前利润指标，作为股权变化与否的条件；二是设立一系列渐进目标，每达到一个指标，股权相应发生定的变化，循序渐进；三是设定上下限，股权可依据时间和限制范围实现变化。
（5）设计对赌条款时需要注意的问题：
A、设定合理的企业估值目标
作为“动态调整评估法”来评估企业价值，这使得公司管理层更是面临着盈利能力和成长性的双重压力，要避免因对企业未来估值偏高，对风险的评估不够充分，而把对赌协议的业绩目标设定在企业能力范围之外的情况发生，否则将容易引发企业的非理性扩张，导致企业的业绩进一步恶化。在签订对赌协议时，可以在协议条款中多设计一些盈利水平之外的柔性指标作为评价标准，避免日后巨大的经营压力，
B、设定合理的对赌条件
企业情况不同，因此需要考虑不同的对赌条件，如蒙牛，永乐案是以股权和控制权相结合作为对赌条件；凯雷案是以股权对价作为对赌条件；雨润案中是以溢价回购作为对赌条件。
（6）对赌的评价：
A、解决风险不对称问题
并购投资是一种信息高度不对称的资本游戏，具有很高的风险，对赌协议本身只是金融家们设计的一种消除信息不对称引发的不确定性成本和风险的重要制衡器，一种财务工具，实际上是把并购投资中基于信息不对称性的风险转换成了对赌博弈和能否成功行权的对称性风险实现了相对的对等。
B、有效地撼接了对企业经营管理层的激励共容机制
“大赌伤身，小赌怡情”——合理利用规则，实现共赢。
（三）投资者权利条款
1、优先认购权
（1）定义：指公司发行新股时老股东可按照原有持股比例优先于其他人进行认购的权利。
（2）目的：防止稀释保留认购权利，价格合适时出价；避免引入自己反感的股东。
（3）法律规定：
有限责任公司：公司新增资本时股东有权按照实缴出资比例认缴出资，但全体股东约定不按照出资比例优先认缴出资的除外。
股份公司：对优先认股权无规定。
一般对增资的控制体现在股东大会的表决权上，从事上市前项目的投资者来说可以选择在增资时候与现有公司股东签署一份《股东协议》，约定优先认购权，这并不违反强制性规定，但拟上市企业章程如果按照《上市公司章程指引》制作，这些内容无法在章程中规定，如果违
约，则可能要求股东承担违约责任，而无法实现认定交易无效的效果，善意第三方也不需要承担任何责任。
（4）具体条款规定：
在公司实施合格发行上市或出售之前，公司若增资（包括公司发行普通股可转换货券等代表公司权益的证券）同等价格条件下投资者有优先购买权，且该优先购买权优先于原股东，但以下情况不适用本条款：公司员工持股计划或期权计划；或合格发行上市。
2、认股权
（1）定义：是指投资人在未来确定时间按照一定价格购入一定数量公司股份的权利。即目标公司赋予投资人一项购入公司股份的期权，投资人可以凭借购股权在未来确定时点按照预先设定的价格购买一定数量的公司股份。
（2）目的：锁定一部分未来利益；实际即是一种获利手段，又是一种风险控制手段，投资人把较大的投资额拆分为两部分，后一部分审慎判断后可以投入也可以放弃，所以可以表现为有条件的分期出资。
（3）法律规定：
对认股权没有规定。因此可以通过股东之间约定实现目的．法律上需要解决两个问题：股东通过增资决议，同意按照投资人提出的价格和数量进行增资；其他股东放弃优先购买权。
（4）具体条款：
投资者可以再行以人民币万元追加投资获得增资权行使后公司％的股权，（享有与本意向书中投资者享有的各项股东权利，这些股份的购买价应根据本意向书规定的业绩调整条款和反稀释条款进行调整）。该增资权的行使不应
附带任何实质性条件，可以在交割后的任何时间行使，直至交割后的年，或合格发行上市或出售，以较早者为准。
3、创始人股、管理层股锁定
（1）定义：指投资人要求创始人或管理层所持的公司股权或股份必须在一定时期内锁定，不得特让。
（2）目的：把创始人锁定在公司，防止其套现后轻视公司利益锁定管理层和创始人可以在公司上市后，起到支撑股价作用，
（3）法律规定：
有限责任公司：
股东之间可以相互转让其全部或者部分股权，股东向股东以外的人转让股权应当经其他股东过半数同意，……公司章程对股权转让另有规定的，从其规定。
股份公司：
发起人持有的本公司股份，自公司成立之日起1年内不得转让，公司公开发行股份前已已发行的股份，自公司股票在证券交易所上市交易之日起一年内不得转让，董事、监事、高级管理人员在任职期间每月转让的股份不得超过其所持有本公司股份的25％，所持本公司股份自公司股票上市交易之日起一年内不得特让。公司章程可以对公司董事、监事、高级管理人员转让其所持有的本公司股份作出其他限制性规定，因此可以借助这一条款在章程中对股权转让条款作出其他限定。
（4）具体条款
合格发行上市或出售完成前，原股东及创始人、公司管理层成员及其直系亲属（若有），未经投资者书面同意不得以任何形式出售其所持有的公司任何形式
的股权，并且不得将该等股权用于任何形式的质押、担保或出借。
4、优先受让权/共售权
优先受让权
（1）定义：是指公司股东对外转让股权时，在同等条件下，原股东具有优先受让的权利。
（2）目的：保留一次出价的机会；防止不愿意见到的股东轻易进入公司。（3）法律规定：
有限责任公司：
经股东同意转让的股权，在同等条件下，其他股东有优先购买权，两个以上股东主张行使优先购买权的，协商确定各自购买比例，协商不成的，按照转让时各自的出资比例行使优先购买权，公司章程对股权转让另行规定的，从其规定。设计时注意要点：对内对外转让股权都需要投资者同意，且投资者具有优先购买权。
股份公司：股东持有的股份可以依法特让（即自由转让股份原则）
此系强制性规定，股东约定只有对内效力。
共售权
（1）定义：指普通股股东如欲转让股票，优先权股东有权按出资比例以普通股形式和同价优先出售给买方。
（2）目的：在创始股东想跑的时候有个跟着跑的机会；多一个退出的机会，可及早表现一部分。
（3）法律规定：
有限贡任公司：
公司章程可以对股权转让作出特别约定。（工商章程标准化问题）
股份公司：
股东之间约定，共售权只能是股东之间的债务性义务，如果违反约定，只能承担违约责任。
具体条款：
若经投资者同意，原股东计划向任何第三方出售其全部或部分持有股权，则应赋予投资者如下权利：
（i）以计划出售的同样条件购买股权的优先受让权，以及
（ii）以拟受让人提出的同样条款共同售卖股权的共同出售权。
除法律有禁止性规定外，投资者股权的转让不受限制，如果法律有规定，要求投资者股权的转让受其他胶东的优先受让权限制或其他限制，其它股东问意预先给予投资者股权的转让法律所要求的同意或豁免优先受让权及其他任何限制。
5、清算优先权
（1）定义：是指投资人在公司清算或结束业务时有权优先于普通股股东获得每股倍于原始购买价格的回报以及宣布但尚未发放的股息。
（2）目的：在公司做的较差情况下，即使走到清算地步，仍然可以获得一个过得去的回报，旱涝保收（但注意是否拿得出现金或资产支付）；保证投资人在公司在视为清算情况下可以获得一个校为理想的回报。
（3）法律规定：
清算分配顺序：清算费用、职工工资、社会保险费用和法定补偿金、税款、普通债务、股东（按出资比例），“有限责任公司按照股东的出资比例分配，股份公司按照股东持有的股份比例分配”，并未留下设计的空间。
（4）具体条款：
如果公司因任何原因导致清算、解散或结束营业，则投资者有权要求先于所有其他股东，包括但不限于原股东、管理层股东，优先获得分配和清偿，其金额等于投资者投资额的％，加上公司已公布分配方案但还未执行的红利，若公司发生兼并或/及合并而致使公司原股东不再拥有绝对多数的投票权，或者公司出售全部或部分主要资产，都将被认为发生公司清算、解散或关闭，并因此而适用该清算优先权条款，但以下两种情况除外：
如果在交割日之后的12个月内，如果公司发生前述兼并及／或合并等交易行为并使得：a）公司基于该交易的价值高于公司发生交易之前最新一次公司价值的倍；或b）公司基于该交易的价值使得投资者的投资收益率达到％，则投资者行使清算优先权的价格应以a）或b）的高者为计算基准：如果在交割日之后的12个月之后，如果公司发生前述兼并及／或合并等交易行为并使得：a）公司基于该交易的价值高于公司发生交易之前最新一次公司价值的倍；或b）公司基于该交易的价值使得投资者的投资收益率达到％则投资者行使清算优先权的价格应以，）或b）的高者为计算基准。6、赎回权
（1）定义：指投资人在一定条件下要求公司按照发行价加溢价赎回其持有的股权，即在公司业绩达不到期望值时，或在其他情况下，投资者有权要求退股，收回初期的股本投入，并获得一定的溢价。
（2）目的：保留一个退出的通道；创始股东的要求。
（3）法律规定：
赎回主体为公司
有限责任公司：可以回购的情形
对股东会决议投反对票的股东可以请求股东按照合理价格收购其股权；
公司连续五年不向股东分配利润，而公司该五年连续盈利，且符合本法规定的分配利润条件的；
公司合并分立转让主要财产的；
章程规定的营业期限届满或章程规定的其他解散事由出现，股东会决议修改章程使公司存续的。
股份公司：可以回购公司股份的情形
减资；与持有公司股份公司合并；奖励给本公司职工；对股东大会作出的合并分立决议持异议，要求公司收购其股份。
问题：减资程序的复杂性；返还的资金和资产额度不确定性；
如要求一个固定回报，则与共负盈亏的原则不符，造成固定回报条款（保底条款）。
赎回主体为大股东或第三方
可特换为一个股权转让交易，在股东协议中规定。
注意违约责任的规定和可执行性，如现金不够怎么办？（如果不能回购，可以由第三方以低价收购回购方的股权）
（4）具体条款
当下列1）-3）情况出现时，投资者有权要求公司及/或原股东赎回投资者所持全部或部分股权，赎回价格为按照%的年复合收益率计算的价格，或投资者所持股份代表的股权的价格的较高者（另有约定者除外）：
（1）公司未能于投资完成日后年内实现合格发行上市或出售；
（2）公司或原股东或公司管理层发生约定的违约行为；
（3）若公司在满足中国A股或其他双方认可的证券交易所发行上市条件的情况下，而原股东不赞成公司进行首次公开发行。
7、拖带权（强制随售权），
（1）定义：是指强制原有股东卖出股份的权利，如果被投资企业在一个约定的期限内没有上市，或事先约定的随售条件成就，投资人有权要求原股东和自己一起向第三方转让股份，原有股东必须按照投资人与第三方谈好的价格和条件按与投资人在被投资企业中的股份比例向第三方转让股份，
（2）目的：退出的一种方式（通过转卖公司）；将少数股权出售转变为控股权出售，取得控股权溢价；掌握了转卖公司的权利，获得较高投资回报；有这种权利，保持对股东的压力，要求其听从自己的建议；
（3）法律规定：是股东之间就处置股权行为进行的一种特别约定，可以自由处置自己的财产，因此约定在股东协议中应属于有效。
要点：如何保障约定的可执行性？如果违约难以证实损失？
（4）具体条款：
如公司未能于投资完成日后年内实现合袼发行上市或出售如投资者同意出售全部或部分股份给第三方并且每股收购价格不低于，则投资者股东有权要求其他股东，其他股东也有义务按照相同的条款和条件出售他们的股份（全部或按相同比例）给第三方，如果有股东不愿意出售，那么这些股东应该以不低于第三方的价格和条款购买其他股东的股份。
8、最优惠投资者
具体条款规定：
本次私募完成后至公司完成合格发行上市或出售之前，公司若向新的投资人发行新的任何级别或类别的股权类证券，新的投资人所享有的任何比本次投资者所享有的更为优惠的条件或保护类条款，本次投资者均全部自动享有。
9、反稀释条款
（1）定义：又称转换价格调整机制，是指如果公司在后期融资中的价值评估低于优先股投资者的股份购买价格，这一条款将向上调整优先股股东的股份数量（或在公司中的股份比例），
(2）目的:能够激励公司以更高的价格进行后续融资，否则防稀释条款会损害投资者股东的利益；投资人果没有防稀释条款保护，他们可能会被“淘汰”出局。（3）法律规定：若公司增发股权类证券且增发时公司的估值低于投资者股权对应的公司估值，则投资者有权从公司或原股东无偿（或以象征性价格）取得额外股权，或以法律不禁止的任何其他方式调整其股权比例，以反映公司的新估值。
10、优先分红权：
（1）定义：是指优先股股东享有的在公司宣告分派股息时，优先股股东有权优先取得投资额％的股息的权利。
（2）目的：限制分红；投资者保障；可以先收回部分投资。
（3）法律规定：
有限责任公司：
全体股东按照实缴出资比例分取红利，但全体股东约定不按照出资比例分红的除外；
股份公司：
股份公司章程规定不按照持股比例分配的除外；
（4）需要注意的问题：
注意我国法律未规定可以设置优先劣后顺序分红。但可以利用过股东协议约定和公司章程设计：利用“约定”这一规定：思路：约定分派股息的比例未超过投资额的一定比例时，创始股东的分配比例为0，超过这一比例时，各万再按照投资比例进行分配。
注意回购请求权：
公司法第75条有下列情形之一的，对股东会该项决议投反对票的股东可以请求公司按照合理的价格收购其股权：（1）公司连续五年不向股东分配利润，而公司该五年连续盈利，并且符合本法规定的分配利润条件的。
固定分红问题：公司无法实现固定分红，保底条款
解决方法：可以要求大股东补足。
11、知情权/检查权
（1）定义：又称为信息权，是指投资人股东对公司的财务等情况和信息了解和获取的权利，PE中的知情权，比公司法下的知情权要求更为严格和全面。（2）目的：对公司经营情况和财务情况保持一种知情和获取的渠道；而且是投资人控制投资风险的一项重要措施。
（3）法律规定：
有限责任公司：
股东有权查阅、复制公司章程、股东会会议记录、董事会会议决议、监事会会议决议和财务会计报告。股东可以要求查阅公司会计账簿（公司有权拒绝）（不包括复制）。
股份公司：
股东有权查阅公司章程、股东名册、公司债券存根、股东大会会议记录、董事会会议决议、监事会会议决议、财务会计报告，对公司的经营提出建议或者质询。
（4）需要注意的问题：公司法规定的股东知情权范围是相当有限的，无法满足投资人需求，经营计划和预算方案等核心信息都不包括在内，因此可以将更广泛的知情权规定在增资协议中。
（5）具体条款：
于合格发行及上市之前，投资者及其委派的董事，有权实时了解公司运营方面的各种信息及相关材料，并有权对公司的管理提出一定的建议。通常情况下，公司需定时及不定时向投资者提供如下信息及材料：
每一月度结束后的30天内提供上一月度的资产负债表，损益表；
季度的资产负债表，损益表，现金流量表，财务状况说明书及其它附表等财务会计报表；
每一财年结束后45天内提供本财年的财务报表；3个月内提供经审计的本财年财务报表；
在每一财年结束前30日内，提供下一财年的年度预算及公司运营计划投资者希望知道的，与投资者利益相关的其它一切公司运营及财务方面的信息。
同时，投资者有权在认为合适的时候检查公司的财务运作情况，包括但不限于查阅会计凭证帐薄等单据和凭证，以及查阅财务系统，公司应积极配合，由此产生的相关费用由投资者承担。
12、股东会表决权
（1）定义：表决权是指股东在股东会上就表决事项作决定时，表示赞成或反对
的权利，即公司法中规定的参与重大决策权和选择管理者的权利。
（2）目的：可以由被动否决权变为控制权，可以通过一些管理层不愿意执行的东西。
（3）法律规定：
有限责任公司：
股东会会议由股东按照出资比例行使表决权；但是公司章程另有规定的除外；
股份公司：同股同权、表决权委托。
（4）具体条款：
股东会会议表决，不按照出资比例行使表决权，投资者享有％的表决权，股东享有％的表决权。
13、放弃股权的特别权利
（1）定义：投资者有权按自己判断在交割之后的任何时候放弃其所持有的股权的全部或部分特别权利和利益。
（2）具体条款：若公司申请普通股在投资者同意的证券交易市场公开上市且与承销机构达成确定的包销协议，且上市前公司估值至少在人民币亿元，且上市融资规模至少人民币亿元，或任何等同上述情况，则投资者自动放弃除信息权、上市注册权之外的其他特别权利。
（四）投资者保护条款
1、股东会特别决议事项
（1）定义：是指投资人出于对自身作为小股东利益的保护，而在股东会层面，要求对公司重大事项的否决权，表现为一种否定权，即常说的被动否决权或反向
决定权。
（2）目的：防止控股股东权利滥用，损害公司及投资人的利益；重大事项及自身利益相关事项参与和控制的权利；控制风险。
（3）法律规定：
有限责任公司：
股东会的议事方式和表决程序，除本法有规定的外，由公司章程规定，股东会会议作出修改公司章程、增加或者减少注册资本的决议，以及公司合并、分立、解散或者变更公司形式的决议，必须经代表三分之二以上表决权的股东通过。
股份公司：
股东出席股东大会会议，所持每一股份有一表决权。但是公司持有的本公司股份没有表决权。股东大会作出决议，必须经出席会议的股东所持表决权过半数通过。但是，股东大会作出修改公司章程、增加或者减少注册资本的决议、以及公司合并、分立、解散或者变更公司形式的决议，必须经出席会议的股东所持表决权的三分之二以上通过。
考虑到同股同权的规定，可能无法在章程中规定特定事项必须要搬资者股东通过的规定，但是，我们可以通过捉高表决通过票数的方式实现该等目的。（4）需要注意的问题
事项如何在股东会和董事会分工，除了规定由股东会决定的事项外，其他事项可以由章程规定分工？各个事项的通过比例？
既要保证控制，又要保证效率。
（5）具体条款
交割后至公司合格发行或上市，公司或其任何子公司进行如下活动，必须取
得持股比例至少%的股东的批准（上市时可以调整回到上市公司惯例）：对组织简章和／或章程或其他组织文件的变更或修改变更公司主营业务或经营范围；
终止、破产或清算、收购兼并、合并、合资对外股权或债券投资和担保、成立子公司和关联公司等；
超过公司净资产%的任何借贷、担保或资产出售增发股权及其他与公司股本结构有关的决定；
派发股息或者其他形式给任何股东的派发行为；
批准董事会年度业务计划和财务预算；对公司会计、财务制度的重大修改及更换审计师；业务计划和财务预算外的重大业务发展、大笔现金和资本支出及大规模举债；
制定管理层股权或期权激励方案；
关联交易；
（投资者根据尽职调查结果可能提出其他事项）
原股东承诺：签署投资协议后，在交割前，原股东及管理层应按照通常的商业惯例与原则正常经营公司，公司或其子公司从事以上活动需要投资者书面认可。
2、董事会及专业委员会
（1）法律规定
有限责任公司：
董事会表决：董事会的议事方式和表决程序，除本法有规定的外，由公司章程规定。董事会应当对所议事项的决定作出会议记录，出席会议的董亭应当在会
议记录上签名，董事会决议的表决，实行一人一票。
股份公司：
董事会会议应当由过半数的董事出席方可举行，董事会作出决议，必须经全体董事的过半数通过。董事会会议的表决，实行一人一票。
因此我们可以规定部分事项必须有投资者董事通过。
（2）具体规定
交割后，公司应该立即召开股东会重新选举董事；投资者有权向公司提名独立和非独立董事，公司董事会设5名董事，投资者占1名。
公司合格发行上市或出售前，以下事宜需公司董事会批准方可执行，且投资者委派的董事拥有一票否决权：
主营业务范围及类型的变更；
公司章程及股东协议的任何修改和变更，不影响本次私募投资者权益的事项除外；
任何可能改变股权结构或稀释股东权益的事宜，包括但不限于增资或减资、发行股票期权、回购股份等；
进入主营业务之外的新的业务领域；
进入任何投机性、套利性的业务领域；
年度预算及公司运营计划的批准及重大变更；
会计政策的变更；
超过年度财政计划100万元人民币的资本性及费用支出；
主要资产的收购、出售、转让或放弃；
公司与主要关联人士（董事、总经理高级管理人员等及其附属公司）之间的
超过10万元人民币之交易；
银行贷款；
给其他企业或个人提供的任何形式的贷款担保；
股息、红利的分配政策及执行；
同一年内超过两席的董事成员变更；
总经理的任免；
审计师的任免；
任何公司高级管理人员超过50万元的年度报酬；
公司主要管理人员及核心人员待遇的改变超过20%；
任何超过1000万元之诉讼的提起和解决；
公司被兼并、合并、清算及解散事宜。
同时，投资者有权委派一名观察员参与公司的董事会，除不具有表决权以外，与公司董事享有同样权利。
公司及原股东承诺，在交割后月内在董事会下设立战略委员会、提名与薪酬委员会和审计委员会，促使投资者提名的董事成为战略委员会成员，成为提名与薪酬委员会的成员，成为审计委员会主席。
3、员工股票期权
公司制订员工股权期权计划（“ESOP”），占投资者投资后完全稀驿后股本的％，用来激励现有和未来的管理层团队。
4、关键人员保险
公司应为由投资者和公司共同决定之高级管理人员购买以公司为受益人的关键人物保险，金额由双方协商确定。
有机质谱解析
有机质谱解析 第一章导论 第一节引言 质谱，即质量的谱图，物质的分子在高真空下，经物理作用或化学反应等途径形成带电粒子，某些带电粒了可进一步断裂。如用电子轰击有机化合物（M），使其产生离 子的过程如下： 每一离子的质量与所带电荷的比称为质荷比(m/z ,曾用m/e)。不同质荷比的离子经质量分离器一一分离后，由检测器测定每一离子的质荷比及相对强度，由此得出的谱图称为质谱 质谱分析中常用术语和缩写式如下： 游离基阳离子，奇电子离子（例如CH4） (全箭头) 电子对转移 钩）单个电子转移 α断裂αY ；与奇电子原子邻接原子的键断裂（不是它们间 的键断裂） “A”元素只有一种同位素的元素（氢也归入“A”元素）。 “A+1”元素某种元素，它只含有比最高丰度同位素高1amu 的同位素。 “A+2”元素某种元素，它含有比最高丰度同位素高2 amu的同位素。 A峰元素组成只含有最高丰度同位素的质谱峰。 A+1峰比A峰高一个质量单位的峰。 分子离子（M）失去一个电荷形成的离子，其质荷比相当于该分子的分子量。 碎片离子：分子或分子离子裂解产生的离子。包括正离子（A+）及游离基离子（A+.）。 同位素离子：元素组成中含有非最高天然丰度同位素的离子。 亚稳离子（m*）离子在质谱仪的无场漂移区中分解而形成的较低质量的离子。 质谱图上反应各离子的质荷比及丰度的峰被称为某离子峰。 基峰：谱图中丰度最高离子的峰 绝对丰度：每一离子的丰度占所有离子丰度总和的百分比，记作%∑。 相对丰度：每一离子与丰度最高离子的丰度百分比。
第二章谱图中的离子 第一节分子离子 分子离子（M+）是质谱图中最有价值的信息，它不但是测定化合物分子量的依据，而且可以推测化合物的分子式，用高分辨质谱可以直接测定化合物的分子式。 一、分子离子的形成 分子失去一个电子后形成分子离子。一般来讲，从分子中失去的电子应该是分子中束缚最弱的电子，如双键或叁键的π电子，杂原子上的非键电子。失去电子的难易顺序为： 杂原子> C = C > C —C > C —H 易难 分子离子的丰度主要取决于其稳定性和分子电离所需要的能量。易失去电子的化合物，如环状化合物，双键化合物等，其分子离子稳定，分子离子峰较强；而长碳链烷烃，支链烷烃等正与此相反。有机化合物在质谱中的分子离子稳定度有如下次序：芳香环> 共轭烯> 烯>环状化合物> 羰基化合物> 醚>酯> 胺> 酸> 醇>高度分支的烃类。
质谱数据处理
GC-MS数据处理系统 一、GC-MS数据的处理 GC-MS以其优异的分离定性特点，被广泛地应用于分析复杂混合物中的挥发性组分。然而，其质谱图会包含一些来自于离子源污染物、柱流失物、基质干扰物所产生的离子，导致定性准确性降低。在分析复杂基质中的痕量物质时，这一现象尤为突出。例如，在食品中农药多残留的分析中，为了确保各种极性的农药都有很好的回收，样本中的基质都会不可避免地被引入检测过程中，对目标化合物的质谱图产生严重的干扰。同时某些保留时间相近的化合物的质谱图也会叠加在一起，相互干扰。这些问题的存在使农药确认变得更为困难。因此，通过对质谱数据的后处理，将目标化合物的质谱图从原始谱图中提取出来，根据新建的“纯净”的质谱图对目标化合物进行确证将更有实际应用的价值。 通常提取“纯净”的质谱图的方法是扣除“本底”的方法，主要过程为从目标化合物的质谱图中减去其周围本底的质谱图。然而其效果只能去除那些相对丰度较低的本底干扰离子（例如柱流失物所产生的碎片离子）。对于丰度较高的共流出物及复杂基质干扰物的离子，扣“本底”的方法无能为力。为了能够达到更好的“净化”效果，化学计量学的方法被应用于质谱数据后处理中，通过数学计算对质谱数据进行退卷积处理，以提取“纯净”的质谱图。 这里，基于美国国家标准技术研究院(NIST)开发的一套软件AMDIS(Automated Mass Spectral Deconvolution & Identification System)，对质谱数据的处理分为三个部分： 1、噪声分析（Noise Analysis）：对数据文件的噪声进行分析，从中提取意 义的特征离子，从而排除噪音对后续工作的干扰。即从数据文件中提取 信号特征，供随后的噪声处理及阈值设定之用。 2、化学成分扫描（Component Perception）：对整个数据文件进行分析，扫 描每个化合物色谱峰以检测其模型离子（Model Peak）及其峰形。 3、谱图退卷积（Spectrum Deconvolution）：模型离子确立后，将其峰形与 其它离子进行比较，将在此时间范围内与模型离子（Model Peak）峰型
质谱介绍及质谱图的解析(来源小木虫)
质谱介绍及质谱图的解析（来源：小木虫）质谱法是将被测物质离子化，按离子的质荷比分离，测量各种离子谱峰的强度而实现分析目的的一种分析方法。质量是物质的固有特征之一，不同的物质有不同的质量谱——质谱，利用这一性质，可以进行定性分析（包括分子质量和相关结构信息）；谱峰强度也与它代表的化合物含量有关，可以用于定量分析。 质谱仪一般由四部分组成：进样系统——按电离方式的需要，将样品送入离子源的适当部位；离子源——用来使样品分子电离生成离子，并使生成的离子会聚成有一定能量和几何形状的离子束；质量分析器——利用电磁场（包括磁场、磁场和电场的组合、高频电场、和高频脉冲电场等）的作用将来自离子源的离子束中不同质荷比的离子按空间位置，时间先后或运动轨道稳定与否等形式进行分离；检测器——用来接受、检测和记录被分离后的离子信号。一般情况下，进样系统将待测物在不破坏系统真空的情况下导入离子源（10-6～10-8mmHg），离子化后由质量分析器分离再检测；计算机系统对仪器进行控制、采集和处理数据，并可将质谱图与数据库中的谱图进行比较。 一、进样系统和接口技术 将样品导入质谱仪可分为直接进样和通过接口两种方式实现。 1. 直接进样 在室温和常压下，气态或液态样品可通过一个可调喷口装置以中性流的形式导入离子源。吸附在固体上或溶解在液体中的挥发性物质可通过顶空分析器进行富集，利用吸附柱捕集，再采用程序升温的方式使之解吸，经毛细管导入质谱仪。 对于固体样品，常用进样杆直接导入。将样品置于进样杆顶部的小坩埚中，通过在离子源附近的真空环境中加热的方式导入样品，或者可通过在离子化室中将样品从一可迅速加热的金属丝上解吸或者使用激光辅助解吸的方式进行。这种方法可与电子轰击电离、化学电离以及场电离结合，适用于热稳定性差或者难挥发物的分析。 目前质谱进样系统发展较快的是多种液相色谱/质谱联用的接口技术，用以将色谱流出物导入质谱，经离子化后供质谱分析。主要技术包括各种喷雾技术（电喷雾，热喷雾和离子喷雾）；传送装置（粒子束）和粒子诱导解吸（快原子轰击）等。
质谱解析
1.质谱就是真空中，利用电子束轰击待测化学物质的分子，将该分子打散，打成一个一个的带电荷的分子离子片段，再根据质谱仪上各个分子离子片段的出峰位置和强度，最终显示出各个离子的分子量以及相应浓度。 2.最右面的峰是全分子的离子峰，是化学物质的分子失去1个质子产生的峰，最右面的分子量最大了，显然分子片段不可能比全分子的分子量大，所以最右侧峰应该是大约相对分子量的数值。 3.氧上面加上正号，不一定是失去电子，多数情况下是氧又和一个质子(H+)结合了，从而多了一个正电荷。 4.看质谱图，只要看特征峰就好了，不要每个峰都知道是什么，只有有自己想要的峰，就行了。化学物质的分子中，单纯依靠质谱来判断是否有某种化学分子存在的情况几乎不存在，更重要的是做为一种辅助监测手段。不过懂得看质谱图，利用质谱分析，还是有必要的 什么是质谱图中的分子碎片，怎么写出它们的化学式？ 不同质荷比质荷比（mass-to-charge ratio）指带电粒子的质量与所带电荷之比值。以m/e表示。是质谱分析中的一个重要参数，不同m/e值的粒子在一定的加速电压 V和一定磁场强度E下，所形成的一个弧形轨迹的半径r与m/e成正比。90年代时IUPAC规定用以表示质荷比的m/e改为m/z。更多>> 的离子经质量分析器分开后，到检测器被检测并记录下来，经计算机处理后以质谱图的形式表示出来。在质谱 图中，横坐标表示离子的质荷比（m/z）值，从左到右质荷比的值增大，对于带有单 电荷的离子，横坐标表示的数值即为离子的质量；纵坐标表示离子流的强度，通常用 相对强度来表示，即把最强的离子流强度定为100%，其它离子流的强度以其百分数 表示，有时也以所有被记录离子的总离子流强度作为100%，各种离子以其所占的百 分数来表示。编辑本段质谱中主要离子峰从有机化合物的质谱图中可以看到许 多离子峰.这些峰的m/z和相对强度取决于分子结构,并与仪器类型,实验条件有关.质谱
ms仪器参数解读
仪器参数解读：气质联用参数全解析总结篇 1.质量范围不同对检测样品有什么不同吗?单电荷和多电荷在描述质量范围上有什么不同吗? A:质量范围越小，所得的信号越强。B:质量范围不同应用领域不同，比如高质量范围仪器的可用于多肽蛋白质等大分子的测定，而低质量范围的就不能够了。单电荷和多电荷是对离子源而言的，带多电荷可以理解为在一定程度上降低了质荷比，可使原本超出检测质量范围的离子质荷比减低，落入检测范围内。C:质量范围越大检测样品的种类越多，但在设置时可以根据自己的需要设置质量范围。比如：常规的样品检测设置50-350就ok，你如果设置到1000，就浪费了扫描。对蛋白质多肽类就需要高质量端，或者液质才能解决。 2.质量准确性怎么理解?越小越好吧? A：即测定质量与理论质量值的接近程度，质量精度越小，说明测定准确度越高，如高分辨要求质量精度小于10ppm 3.灵敏度的描述都是以具体的样品来说明吗?其他样品能行吗?利血平是行业公认的检测样品吗? A：得用实际样品说明，一般需给出测试条件，如检测样品，检测峰，分辨率和信噪比。 4.分辨率的大小对样品检测的影响有多大?小于0.5和小于0.7的差别有大? A：分辨率指质谱对相邻质荷比峰的分离能力，国际上有两种定义，10%谷和50%谷，即相邻质荷比峰谷的重叠部分与峰高的比值为10%或50%。对同位素的测定和化合物结构解析有较大意义。0.5和0.7都不能很好的分辨出同位素离子吧。 5.扫描速率有的是15000，有的是6000，相差如此之大对图谱是否影响很大呢? A：只知道扫描速率快频率高在色谱质谱联用中对峰较窄的物质有利，能避免漏信息，不知道具体对信号强度影响大不大。 B:加入要测定的质量范围是300，则扫描速率如果是15000，15000/300=50, 即每秒钟最多可扫描50次，扫描速率如果是6000，6000/300=20, 即每秒钟最多可扫描20次显然每秒钟最多可扫描50次比每秒钟最多可扫描20次的图谱的质量要好。 6.真空度是什么意思啊?代表的是仪器的哪个部分啊? A:“真空度”顾名思义就是真空的程度。所谓“真空”，是指在给定的空间内，压强低于101325帕斯卡(也即一个标准大气压强约101KPa)的气体状态。 在GC-MS中，有二个部分对真空有要求，离子源要求10-3到10-5之间;质量分析器需达到10-6 B:真空腔内的气压的一种表示，质谱的离子源部分。真空越好，响应越高 C：离子源、质量分析器、检测器是需要高度抽真空的，原理是以免气体分子与飞行中的离子发生碰撞使离子产生能量的变化，改变离子飞行轨迹，表现在真空度高能降低本底噪音和记忆效应，从而能一定程度提高灵敏度。 7.普库检索是个什么功能?我们能用的到吗? A:方便定性分离得到的色谱峰，计算机可自动在谱库内搜索与样品谱图相似的谱图，给出结果; 对于已知化合物定性十分方便，尤其对质谱裂解掌握不好的情况下，使用很方便;但是有一个缺点，谱库内的化合物数量有限，因此也不是万能的。 B：貌似很多公司都有自己的标准图库，对于高分辨质谱也有标准谱库，对未知结构的化合物，由高分辨质谱得到其精确分子量，输入谱库可方便查的其可能的化合物分子式。 C:检测出物质的特征峰的谱图以后，可以通过普库检索看其匹配度检索是否是该物质。 版友提出问题及相关解答汇总： 8.气质联用接口与液质有什么不同，是否需要设置特别的参数? A:气质联用接口作用：
质谱分析方法要点解析
质谱分析方法解析 质谱仪种类很多，不同类型的质谱仪主要差别在于离子源。离子源的不同决定了对被测样品的不同要求，同时，所得信息也不同。质谱仪的分辨率同样十分重要，高分辨质谱仪可给出化合物的组成式，对于未知物定性至关重要。因此，在进行质谱分析前，要根据样品状况和分析要求选择合适的质谱仪。 目前，有机质谱仪主要有两大类： 气相色谱-质谱联用仪与液相色谱-质谱联用仪，现就这两类仪器的分析方法叙述如下： GC-MS分析条件的选择 在GC-MS分析中，色谱的分离与质谱数据的采集同时进行，为了使每个组分都得到分离和鉴定，必须设备合适的色谱和质谱分析条件： 色谱条件包括色谱柱类型（填充柱或毛细管柱），固定液种类，汽化温度，载气流量，分流比，温升程序等。 设置原则是： 一般情况下均使用毛细管柱，极性样品使用极性毛细管柱，非极性样品采用非极性毛细管柱，未知样品可先用中等极性毛细管柱，试用后再调整。当然，如果有文献可以参考，就采用文
献所用条件。 质谱条件包括： 电离电压，电子电流，扫描速度，质量范围，这些都要根据样品情况进行设定。为了保护灯绿和倍增器，在设定质谱条件时，还要设置溶剂去除时间，使溶剂峰通过离子源之后再打开灯绿和倍增器。在所有的条件确定之后，将样品用微量注射器注入进样口，同时，启动色谱与质谱，进行GC-MS分析。 GC-MS数据采集 有机混合物样品用微量注射器由色谱仪进样口注入，经色谱柱分离后进入质谱仪离子原在离子源被电离成离子。离子经质量分析器，检测器之后即成为质谱仪信号并输入计算机。样品由色谱柱不断流入离子源，离子由离子源不断进入分析器并不断得到质谱，只要没定好分析器扫描的质量范围和扫描时间，计算机就可以采集到一个个的质谱。如果没有样品进入离子源，计算机采集到的质谱各离子强度均为0。当有样品过入离子源时，计算机就采集到具有一定离子强度的质谱。并且计算机可以自动将每个质谱的所有离子强度相加。显示出总离子强度，总离子强度随时间变化的曲线就是总离子色谱图，总离子色谱图的形状和普通的色谱图是相一致的，它可以认为是是用质谱作为检测器得到的色谱图。
质谱解析流程
质谱——质谱图解析流程 未知样的质谱图解析流程 (一)解析分子离子区 (1) 标出各峰的质荷比数，尤其注意高质荷比区的峰。 (2) 识别分子离子峰。首先在高质荷比区假定分子离子峰，判断该假定分子离子峰与相邻碎片离子峰关系是否合理，然后判断其是否符合氮律。若二者均相符，可认为是分子离子峰。 (3) 分析同位素峰簇的相对强度比及峰与峰间的Dm值，判断化合物是否含有 C1、Br、S、Si等元素及F、P、I等无同位素的元素。 (4)推导分子式，计算不饱和度。由高分辨质谱仪测得的精确分子量或由同位素峰簇的相对强度计算分子式。若二者均难以实现时，则由分子离子峰丢失的碎片及主要碎片离子推导，或与其它方法配合。 (5)由分子离子峰的相对强度了解分子结构的信息。分子离子峰的相对强度由分子的结构所决定，结构稳定性大，相对强度就大。对于分子量约200的化合物，若分子离子峰为基峰或强蜂，谱图中碎片离子较少、表明该化合物是高稳定性分子，可能为芳烃或稠环化合物。例如：萘分子离子峰m/z128为基峰，蒽醌分子离子峰m/z 208也是基峰。分子离子峰弱或不出现，化合物可能为多支链烃类、醇类、酸类等。 (二)、解析碎片离子 (1) 由特征离子峰及丢失的中性碎片了解可能的结构信息。若质谱图中出现系列CnH2n+1峰，则化合物可能含长链烷基。若出现或部分出现m/z77，66，65，51，40，39等弱的碎片离子蜂，表明化合物含有苯基。若m/z91或105为基峰或强峰，表明化合物含有苄基或苯甲酰基。若质谱图中基峰或强峰出现在质荷比
的中部，而其它碎片离子峰少，则化合物可能由两部分结构较稳定，其间由容易断裂的弱键相连。 (2)综合分析以上得到的全部信息，结合分子式及不饱和度，提出化合物的可能结构。 (3)分析所推导的可能结构的裂解机理，看其是否与质谱图相符，确定其结构，并进一步解释质谱，或与标准谱图比较，或与其它谱(1HNMR、13CNMR、IR)配合，确证结构。
液相色谱质谱操作指南
1 液相色谱/质谱 LCMS-IT-TOF 操作指南 岛 津 公 司
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i LCMS-IT-TOF 的控制软件LCMSsolution 的功能非常强大，因此我们可能会产生诸如怎样才能完成某一特定分析，某一特定的操作过程是否能够为我们带来期望的结果之类的疑问。此指南将不介绍LCMSsolution 的所有功能，而是针对分析过程中用到LCMSsolution 的分析流程加以介绍。 首次应用LCMSsolution 时，此指南不但能使您了解到此软件所能提供的功能，还将能使您了解到如何运用这些功能提高您的工作效率。 这些功能的具体描述请您参考以下的操作说明。 仪器硬件的介绍，请您参考“Shimadzu High-Performance Liquid Chromatograph/Mass Spectrometer LCMS-IT-TOF Operation Manual ”（225-18046）。 仪器软件的介绍，请您参考“Shimadzu High-Performance Liquid Chromatograph/Mass Spectrometry Workstation [LabSolutions /LCMSsolution] Operation Manual ”（225-18036）。 注意 ? 2008 岛津公司。 保留所有权利。 ● 本手册的内容更改恕不另行通知，我们对说明书中所描述内容的后果不承担任何责任 ● 在撰写时，已经尽力保证本说明书内容的正确性。一旦发现任何错误或疏漏，即 使不是急需更改的小错误，我们做到了尽快更正。 ● 本说明书的版权由岛津公司所有，严禁在没有岛津公司的许可下以任何形式复制 此说明书或其中的部分内容。 ● Microsoft 和Windows 是微软公司在美国和/或其它国家的商标。本说明书中其它 公司名或产品名是各自公司的商标或注册商标。 TM 和?在本说明书中省略
质谱数据分析资源
质谱数据分析资源 1 数据库 （1）蛋白质序列数据库： https://www.wendangku.net/doc/547090811.html,/ https://www.wendangku.net/doc/547090811.html,/sites/entrez?db=Protein https://www.wendangku.net/doc/547090811.html,/IPI/IPIhelp.html （2）实验数据： https://www.wendangku.net/doc/547090811.html,/pride/startBrowse.do https://www.wendangku.net/doc/547090811.html,/OPD/ https://www.wendangku.net/doc/547090811.html,/ https://www.wendangku.net/doc/547090811.html,/data.jsp Adipose Proteome Database: http://proteome.biochem.mpg.de/adipo Organellar Map Database: http://proteome.biochem.mpg.de/ormd/ Body Fluid Database - Seminal: http://proteome.biochem.mpg.de/seminal/ Body Fluid Database - Tear: http://proteome.biochem.mpg.de/tear/ Body Fluid Database - Urinary: http://proteome.biochem.mpg.de/urine/ Red Blood Cell Database: http://proteome.biochem.mpg.de/rbc/ 2 数据分析工具 （1）蛋白质组专家系统：https://www.wendangku.net/doc/547090811.html,/tools/ 提供的工具链接： Aldente：利用PMF数据鉴定蛋白质，使用了Hough变换来处理图谱，对图谱进行再校正和异常值排除。提供单机版下载。 FindMod：利用PMF数据鉴定蛋白质中存在的修饰，考虑的修饰是Swiss-Prot数据库中包含的注释。 FindPept：利用PMF数据鉴定蛋白质，处理非特异性酶切的数据，考虑了化学修饰，翻译后修饰等因素。 GlycoMod：利用PMF数据预测蛋白质中可能发生的糖基化修饰，鉴定糖肽。 Mascot：商业化的数据库搜索软件，提供PMF搜库，PFF搜库以及混合搜库的功能，网站有大量的背景知识介绍。网址为：https://www.wendangku.net/doc/547090811.html,/。 PepMAPPER：PMF数据搜索软件。 PFMUTS：从PMF数据中寻找可能的肽段突变（1~2个）。 ProFound：基于贝叶斯模型的搜库软件。 ProteinProspector：系列搜库软件，包括MS-Fit, MS-Pattern, MS-Digest 等。 Popitam：从图谱数据中寻找未知修饰。 Phenyx：商业化串联质谱数据搜库软件。 OMSSA：开放源码的搜库软件，由NCBI提供。 PepFrag： 搜库软件。 SearchXLinks：搜索修饰、cross-linked的特殊搜库软件。 （2）系统生物学研究所：https://www.wendangku.net/doc/547090811.html,/software.php提供的连接： S E Q U E S T：https://www.wendangku.net/doc/547090811.html,/sequest/ 搜库软件SEQUEST的使用资料，十分详细。还同时提供extractms ，2to3，MS2，SQTSort，DTASelect，DaughterDB，RelEx等工具的使用说明，可以向网站维护者索要这些工具。
蛋白质质谱分析
蛋白质质谱分析研究进展作者：汪福源蛋白质质谱分析研究进展摘要：随着科学的不断发展，运用质谱法进行蛋白质的分析日益增多，本文简要综述了肽和蛋白质等生物大分子质谱分析的特点、方法及蛋白质质谱分析的原理、方式和应用，并对其发展前景作出展望。关键词：蛋白质，质谱分析，应用前言：蛋白质是生物体中含量最高，功能最重要的生物大分子，存在于所有生物细胞，约占细胞干质量的50%以上，作为生命的物质基础之一，蛋白质在催化生命体内各种反应进行、调节代谢、抵御外来物质入侵及控制遗传信息等方面都起着至关重要的作用，因此蛋白质也是生命科学中极为重要的研究对象。关于蛋白质的分析研究，一直是化学家及生物学家极为关注的问题，其研究的内容主要包括分子量测定，氨基酸鉴定，蛋白质序列分析及立体化学分析等。随着生命科学的发展，仪器分析手段的更新，尤其是质谱分析技术的不断成熟，使这一领域的研究发展迅速。自约翰.芬恩(JohnB.Fenn)和田中耕一(Koichi.Tanaka)发明了对生物大分子进行确认和结构分析的方法及发明了对生物大分子的质谱分析法以来，随着生命科学及生物技术的迅速发展，生物质谱目前已成为有机质谱中最活跃、最富生命力的前沿研究领域之一[1]。它的发展强有力地推动了人类基因组计划及其后基因组计划的提前完成和有力实施。质谱法已成为研究生物大分子特别是蛋白质研究的主要支撑技术之一，在对蛋白质结构分析的研究中占据了重要地位[2]。1．质谱分析的特点质谱分析用于蛋白质等生物活性分子的研究具有如下优点：很高的灵敏度能为亚微克级试样提供信息，能最有效地与色谱联用，适用于复杂体系中痕量物质的鉴定或结构测定，同时具有准确性、易操作性、快速性及很好的普适性。2．质谱分析的方法近年来涌现出较成功地用于生物大分子质谱分析的软电离技术主要有下列几种：1)电喷雾电离质谱；2)基质辅助激光解吸电离质谱；3)快原子轰击质谱；4)离子喷雾电离质谱； 5)大气压电离质谱。在这些软电离技术中，以前面三种近年来研究得最多，应用得也最广泛[3]。3．蛋白质的质谱分析蛋自质是一条或多条肽链以特殊方式组合的生物大分子，复杂结构主要包括以肽链为基础的肽链线型序列[称为一级结构]及由肽链卷曲折叠而形成三 维[称为二级，三级或四级]结构。目前质谱主要测定蛋自质一级结构包括分子量、肽链氨基酸排序及多肽或二硫键数目和位置。3.1蛋白质的质谱分析原理以往质谱(MS)仅用于小分子挥发物质的分析，由于新的离子化技术的出现，如介质辅助的激光解析/离子化、电喷雾离子化，各种新的质谱技术开始用于生物大分子的分析。其原理是：通过电离源将蛋白质分子转化为气相离子，然后利用质谱分析仪的电场、磁场将具有特定质量与电荷比值(M/Z值)的蛋白质离子分离开来，经过离子检测器收集分离的离子，确定离子的M/Z值，分析鉴定未知蛋白质。3.2蛋白质和肽的序列分析现代研究结果发现越来越多的小肽同蛋白质一样具有生物功能，建立具有特殊、高效的生物功能肽的肽库是现在的研究热点之一。因此需要高效率、高灵敏度的肽和蛋白质序列测定方法支持这些研究的进行。现有的肽和蛋白质测序方法包括N末端序列测定的化学方法Edman法、C末端酶解方法、C末端化学降解法等，这些方法都存在一些缺陷。例如作为肽和蛋白质序列测定标准方法的N末端氨基酸苯异硫氰酸酯(phenylisothiocyanate)PITC分析法(即Edman法，又称PTH法)，测序速度较慢(50个氨基酸残基/天)；样品用量较大(nmol级或几十pmol级)；对样品纯度要求很高；对于修饰氨基酸残基往往会错误识别，而对N末端保护的肽链则无法测序[4]。C末端化学降解测序法则由于无法找到PITC这样理想的化学探针，其发展仍面临着很大的困难。在这种背景下，质谱由于很高的灵敏度、准确性、易操作性、快速性及很好的普适性而倍受科学家的广泛注意。在质谱测序中，灵敏度及准确性随分子量增大有明显降低，所以肽的序列分析比蛋白容易许多，许多研究也都是以肽作为分析对象进行的。近年来随着电喷雾电离质谱(electrospray ionisation，ESI)及基质辅助激光解吸质谱(matrix assisted laser
质谱解析
质谱法是将被测物质离子化，按离子的质荷比分离，测量各种离子谱峰的强度而实现分析目的的一种分析方法。质量是物质的固有特征之一，不同的物质有不同的质量谱——质谱，利用这一性质，可以进行定性分析（包括分子质量和相关结构信息）；谱峰强度也与它代表的化合物含量有关，可以用于定量分析。 质谱仪一般由四部分组成： 进样系统——按电离方式的需要，将样品送入离子源的适当部位； 离子源——用来使样品分子电离生成离子，并使生成的离子会聚成有一定能量和几何形状的离子束； 质量分析器——利用电磁场（包括磁场、磁场和电场的组合、高频电场、和高频脉冲电场等）的作用将来自离子源的离子束中不同质荷比的离子按空间位置，时间先后或运动轨道稳定与否等形式进行分离； 检测器——用来接受、检测和记录被分离后的离子信号。一般情况下，进样系统将待测物在不破坏系统真空的情况下导入离子源（10-6～10-8mmHg），离子化后由质量分析器分离再检测；计算机系统对仪器进行控制、采集和处理数据，并可将质谱图与数据库中的谱图进行比较。 一、进样系统和接口技术 将样品导入质谱仪可分为直接进样和通过接口两种方式实现。 1. 直接进样 在室温和常压下，气态或液态样品可通过一个可调喷口装置以中性流的形式导入离子源。吸附在固体上或溶解在液体中的挥发性物质可通过顶空分析器进行富集，利用吸附柱捕集，再采用程序升温的方式使之解吸，经毛细管导入质谱仪。 对于固体样品，常用进样杆直接导入。将样品置于进样杆顶部的小坩埚中，通过在离子源附近的真空环境中加热的方式导入样品，或者可通过在离子化室中将样品从一可迅速加热的金属丝上解吸或者使用激光辅助解吸的方式进行。这种方法可与电子轰击电离、化学电离以及场电离结合，适用于热稳定性差或者难挥发物的分析。 质谱进样系统发展较快的是多种液相色谱/质谱联用的接口技术，用以将色谱流出物导入质谱，经离子化后供质谱分析。主要技术包括各种喷雾技术（电喷雾，热喷雾和离子喷雾）；传送装置（粒子束）和粒子诱导解吸（快原子轰击）等。 2. 电喷雾接口 带有样品的色谱流动相通过一个带有数千伏高压的针尖喷口喷出，生成带电液滴，经干燥气除去溶剂后，带电离子通过毛细管或者小孔直接进入质量分析器。传统的电喷雾接口只适用于流动相流速为1～5μl/min的体系，因此电喷雾接口主要适用于微柱液相色谱。同时由于离子可以带多电荷，使得高分子物质的质荷比落入大多数四极杆或磁质量分析器的分析范围（质荷比小于4000），从而可分析分子量高达几十万道尔顿（Da）的物质。 3. 热喷雾接口 存在于挥发性缓冲液流动相（如乙酸铵溶液）中的待测物，由细径管导入离子源，同时加热，溶剂在细径管中除去，待测物进入气相。其中性分子可以通过与气相中的缓冲液离子（如NH4+）反应，以化学电离的方式离子化，再被导入质量分析器。热喷雾接口适用的液体流量可达2ml/min，并适合于含有大量水的流动相，可用于测定各种极性化合物。由于在溶剂挥发时需要利用较高温度加热，因此待测物有可能受热分解。 4. 离子喷雾接口 在电喷雾接口基础上，利用气体辅助进行喷雾，可提高流动相流速达到1ml/min。电喷雾和离子喷雾技术中使用的流动相体系含有的缓冲液必须是挥发性的。
高分辨质谱技术参数
高分辨质谱技术参数 一．应用范围 1．适用于食品中农兽残，环境污染物，非法添加药物、营养成分等快速筛查确证以及定量检测分析工作。 2．适用于新药研发，药物杂质鉴定、代谢物鉴定、研究与疾病有关的标记物和代谢组学、脂质组学、小分子和生物大分子的相互作用、天然产物结构分析等领域。 3．适用于蛋白质组学：蛋白质组学研究中的蛋白质鉴定、翻译后修饰、生物大分子相互作用、多肽和蛋白质的定量分析。 二．设备名称：高分辨质谱仪 1．工作条件 1.1电源：230V±10%，AC(交流)，50/60Hz 1.2环境温度：15-27℃（最优：18~21℃） 1.3相对湿度：20-80% 1.4气体需求：高纯氮气，最大消耗量不大于20L/min 2．质谱部分： 2.1 离子源部分 2.1.1 独立的可加热电喷雾离子源（ESI源），集成式气路电路设计，安装离子源时即可实 现气路电路连接，自动识别，无需进行额外操作； 2.1.2喷针采用60度喷雾设计，前后，左右，上下可调，正对废液出口。雾化后，废产物 直接进入废液出口，确保离子源腔体洁净； 2.1.3 具有雾化气和辅助雾化气，进一步提高雾化效率和稳定性，具有强的雾化效果抗污染能力； 2.1.4可加热ESI源，离子源加热温度最高可达600℃，不分流的情况下采用纯水作为溶剂，流速为1μl-2000μl/min；APCI流速为50μl-2000μl/min； 2.1.5 全自动注射泵实现质谱直接进样，自动调谐和校正，可通过软件自动切换模式； 2.1.6 质谱配置软件具备实时监控并反馈喷雾稳定性功能； 2.1.7离子源腔体具有观察窗口，可以直接观察喷雾效果以及离子源腔体洁净程度； 2.2 离子传输部分 2.2.1离子传输系统必须配有金属离子传输管设计，保护分子涡轮泵，减少真空负担； 2.2.2离子传输管独立加热，最高温度可达400℃，进一步提高去溶剂效果和确保离子传输系统抗污染能力； 2.2.3具有真空隔断阀设计，在移去、清洗离子传输部件时，不需破坏真空, 待机时不需要消耗氮气； 2.3 质量分析器部分