四氯化碳腹腔注射致大鼠肝纤维化机理研究

四氯化碳腹腔注射致大鼠肝纤维化

机理研究

【摘要】目的观察四氯化碳腹腔注射制作大鼠肝纤维化模型时相关细胞因子

的变化，初步探讨四氯化碳腹腔注射致大鼠肝纤维化的机理。方法以四氯化碳腹腔注射的方法[四氯化碳 mL (用花生油1∶6稀释)/次，每周3次，共14周]制作大鼠肝纤维化模型，设立正常、溶剂对照组，检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、透明质酸(HA)、层黏连蛋白(LN)、Ⅲ型前胶原含量;ELISA法检测转化生因子ββ1)、肿瘤坏死因子α);化学法检测血清氧化亚

氮(NO)。肝行HE和Masson胶原染色，光镜下观察病改变，并按SSS计分系统进行评分。免疫组化染色观察肝组织血小板源生长因子的变化，专业像分析进行图像分析。结果与正常对照组、溶剂对照组比较，模型组血清ALT、AST、HA、LN、、NO、β1 、α明显升高

()，大鼠肝组织肝纤维化评分明显升高()，肝组织表达明显增多()。结论促进相关细胞因子的表达可能是四氯化碳腹

腔注射致大鼠肝纤维化的机理之一。

【关键词】四氯化碳;肝纤维化;细胞因子

Abstract:Objective To investigate the variation of correlated cytokine when the rat models of hepatic fibrosis were induced by intraperitoneal injection of carbon tetrachloride,and to the relevant molecular mechanism. Methods Rat models of hepatic fibrosis were made by intraperitoneal injection of carbon tetrachloride at mL(diluted 1∶6 with peanut oil),three times a week,a total of 14 weeks. The normal and dissolvent groups were prepared as controls. Serum

β1 and α were detected by ELISA method. Serum levels of NO were detected by

chemical method. HE and Masson staining were conducted in hepatic tissues to observe pathological variations. Grades of hepatic fibrosis were evaluated

histological scoring system (SSS system). Immunohistochemical staining wa

liver,and professional software for image analysis was used. Results Carbon tetrachloride could increase obviously serum levels of ALT,AST,HA,LN,and

normaland dissolvent groups. The score of hepatic fibrosis in the model group increased significantly (). Carbon tetrachloride could increase the

The correlated cytokines was increased when the rat models of hepatic fibrosis were induced by intraperitoneal injection of carbon tetrachloride.

Increasing the expression of correlated cytokines may be one of the molecular mechanisms of hepatic fibrosis in rat models induced by intraperitoneal injection of carbon tetrachloride.

Key words:carbon tetrachloride; hepatic fibrosis; cytokine

肝纤维化(hepatic fibrosis)是肝脏对各种慢性损伤的一种修复反应，其特征是以胶原为主的细胞外基质(extracellular matrix,ECM)在肝内过多沉积。在肝纤维化

的发生过程中，一系列的细胞因子被激活，在疾病的进程中发挥重要的作用。常见的细胞因子有转化生因子ββ)、血小

板源生长因子(PDGF)、肿瘤坏死因子

α)、表皮生长因子(EGF)与ROS(过氧化氢、超氧游离基)等。研究表明，相关细

胞因子的表达，可以引起肝星状细胞(hepatic stellate cell，HSC)活化，促进肝纤维化的发生发展。

四氯化碳(CCl4)腹腔注射是制作肝纤

维化模型的经典方法，在前期的系列研究中

曾多次采用该方法成功地建立大鼠肝纤维

化模型[2-8]，但有关其作用机制尚未阐明。既往的研究大多数为观察四氯化碳腹腔注

射造模的效果，国内少有对其作用机理方面的研究。本研究拟观察CCl4制作肝纤维化模型时相关细胞因子的变化，初步探讨CCl4腹腔注射致大鼠肝纤维化的机理。

1 实验材料

主要药物、试剂

CCl4，分析纯，天津市北宏试剂厂生产;食用花生油;羧甲基纤维素钠，广州器化医疗设备有限公司进口分装;ALT、AST试剂盒，北京中生北控生物科技股份有限公司生

产;HA、LN 、放射免疫分析试剂盒，上海海岩生物技术中心生产;苏木素、伊红购自美国Sigma公司;Masson三色胶原试剂盒及即用型SP超敏试剂盒均购自福州迈新生物技术开发有限公司;NO试剂盒购自南京建成生物工程研究所;大鼠β1、

αELISA试剂盒及兔抗大鼠

多克隆抗体均购自武汉博士德生物工程有

限公司。

四氯化碳诱导大鼠肝纤维化模型改良的研究_邵佳亮

收稿日期:2011-05-18 基金项目:国家自然科学基金(30760230) 作者简介:邵佳亮(1980-),男,硕士,住院医师,主要从事肝纤维化的研究。 通信作者:胡国信,副教授,E -mail:hug uo x in8228@sina.co m 。 四氯化碳诱导大鼠肝纤维化模型改良的研究 邵佳亮,万赞燕,胡国信 (南昌大学第一附属医院感染科,南昌330006) 摘要:目的 构建肝纤维化大鼠模型,并对经典四氯化碳(CCl 4)复制模型方法进行适当改进。方法 取Sprague -Daw ley(SD)大鼠40只,雌雄各半,按随机数字表法分为A 组10只、B 组14只和C 组16只。B 组给予大鼠腹腔注射40%CCl 4花生油溶液2mL kg -1,2次 周-1,同时给予普通全价饲料喂养(改良方法);A 组为正常对照组,给予等量花生油腹腔注射,2次 周-1,同时给予普通全价饲料喂养;C 组给予大鼠腹腔注射40%CCl 4花生油溶液5mL kg -1,2次 周-1,同时给予添加10%猪油及2%胆固醇的饲料喂养(经典方法)。实验第8周末处死各组剩余大鼠:采用酶联免疫吸附法检测血清肝功能(A L T 、AST 、A L B 、T P 、A/G)水平;H E 及M asson 染色观察大鼠肝组织病理学变化。结果 实验第8周B 、C 组均可见明显肝功能损害表现。B 组可见部分标本肝脏假小叶形成,达到早期肝硬化,肝细胞少量脂肪变性,死亡率28.6%。C 组均已形成明显肝硬化,弥漫性肝细胞脂肪变性,死亡率43.7%。结论 低剂量CCl 4诱导并给予普通饲料喂养可成功建立大鼠肝纤维化模型,并明显降低大鼠死亡率,提高了模型质量及实验效率。 关键词:四氯化碳;肝纤维化模型;改良;动物,实验;大鼠 中图分类号:R-332 文献标志码:A 文章编号:1000-2294(2011)07-0040-03 Improved Rat Model of Liver Fibrosis induced by CCl 4 SHAO Jia -liang,WAN Zan -yan,HU Guo -xin (Dep ar tment of I nf ectious Diseases ,the First A f f iliated H osp ital of N anchang Univ ersity , N anchang 330006,China) ABSTRACT:Objective To establish a rat m odel of liver fibrosis,and to improv e the classical CCl 4induction method.Methods Forty SD r ats (20female and 20male)w ere r ando mly divided into three gro ups.Gro up B (n =14)w as given intraperitoneal injection of 2mL kg -1of 40%CCl 4solution (a mix ture of CCl 4and peanut oil)tw ice a w eek and the feeding of no rmal complete diet.Gro up A (n =10)w as given intraperitoneal injection of 2mL kg -1of peanut oil tw ice a w eek and the feeding of nor mal com plete diet.Gro up C (n =16)w as given intr aper ito neal injec -tion of 5mL kg -1of 40%CCl 4solution tw ice a w eek and the feeding of diet containing 10%lar d and 2%cholesterol.Rats w ere killed at the end of 8w eeks,and the levels o f ser um ALT ,AST ,Alb,T P and A/G w ere determined by ELISA.The patho logical changes in liver tissue w ere ob -served by H E and M asso n staining.Results Liv er function w as damag ed apparently by CCl 4in -jectio n.Some specimens in g roup B pro duced false flo cculus and achieved the ear ly stage of liver fibro sis,w ith fatty deg ener ation in a few liver cells.A ll specimens in gr oup C had cirrhosis w ith diffuse hepatic steato sis.The m ortality w as 28.6%and 43.7%in gro up B and g roup C,respec -tively.Conclusion Liv er fibrosis can be induced by injection o f low do ses of CCl 4and feeding of norm al co mplete diet in rats.In addition,the improved m ethod can reduce the mortality and im -40南昌大学学报(医学版)2011年第51卷第7期 Jou rnal of Nanch ang University(M edical Science)2011,Vol.51No.7

实验报告-大鼠

姓名：薛桂凤学号： 实验报告（二） 一、实验目的： 1.掌握大鼠的抓取和固定。 2.掌握大鼠的编号与标记方法。 3.掌握大鼠的常用实验方法。 4.掌握大鼠的常用麻醉方法。 5.掌握大鼠的安死术。 6.掌握大鼠的釆血方法。 7.了解小鼠的采尿、粪的方法。 8.了解小鼠各种脏器标本的采集方法。 二、实验器材：SD大鼠、电子称、手套、实验托盘、固定板、烧杯、注射器（3支）、 剪刀、镊子、灌胃针头、毛细管、酒精棉球、5%水合氯醛、生理盐水 三、实验内容 1.抓取：两种方法。第一种方法：右手食指和中指夹住大鼠颈部，使其头部固定，右 手拇指及无名指分别在大鼠前爪下抓住大鼠身体。第二种方法类似单手抓取小鼠的 方法，用右手拇指及其余四指并捏住大鼠颈部背部皮肤。 2.称重：小鼠放在烧杯中称重（去除烧杯重量），记录小鼠体重210g。 3.鉴别大鼠性别：观察生殖器雄性大鼠的阴囊非常明显。 4.编号：染色法：逆毛方向涂上有色斑点，顺序由左到右，由上向下，用两种颜色 可标记99只动物。 5.给药： （1）皮下注射小于1ml/100g（俯卧固定，左手拇指和食指捏住皮肤提起，右手持针沿纵轴方向刺入皮肤，阻力消失后回抽无血注入药物，拔针）（2）皮内注射小于（麻醉后进行，先备皮）（俯卧固定，与皮肤平行刺入捏起的皮肤，阻力大，注射药物局部有皮丘后停留片刻后拔针） （3）腹腔注射（仰面固定，在腹正中线两侧腹股沟平行的位置30-45°进针，挑起皮肤和肌肉，回抽无血，注药） （4）灌胃1-2ml/100g （大鼠固定身体呈一条直线，灌胃针头顺着上颚插入咽部，先少量注药证明未入气管后继续给药） 6.釆血：尾尖釆血法、眼眶静脉丛釆血法、心脏釆血法(麻醉后) 。 7.大鼠的采尿、粪的方法 （1）少量采集：在抓取固定时受到刺激排出少量尿液和粪便 （2）长期大量采集：使用代谢笼 8.麻醉：根据大鼠体重计算麻醉药物用量5%水合氯醛按300mg/kg，给药，计算药 量为，ip 麻醉小鼠，观察小鼠麻醉期。 (1)全身麻醉的第一期（随意兴奋期）：出现运动和运动失调；35秒 (2)全身麻醉的第二期（不随意兴奋期）：是由意识完全丧失至深而规则的自动 呼吸开始时止;2分30秒 (3)全身麻醉的第三期：角膜反射由迟钝渐趋消失，翻正反射消失，疼痛反射 消失； 9.安死术：颈椎脱臼法：用左手按住动物的头部于实验台上，右手抓住尾根部，快速、 不间断地向后、略向上使劲拉，以致脊椎脱臼，脊髓与脑干断离而死亡。 10.解剖：观察大鼠的脏器解剖结构

大鼠系统解剖简述

第一章皮肤 一、皮肤由表皮、真皮和皮下组织构成。 二、皮肤腺有皮脂腺、汗腺和乳腺。 1、皮脂腺分布在毛囊周围。口角部、肛门、包皮和乳头周围有特化的皮脂腺。 2、汗腺，大鼠的汗腺只局限于足垫的皮肤。 3、乳腺 数量大鼠的乳腺共有6对，胸部3对，腹部1对，鼠蹊部2对。个别的大鼠有5对或者7对。 大小和形态随大鼠的年龄和性周期有明显的变化。 部位包埋在皮下组织中，由结缔组织隔与胸壁和腹壁松松地相连。 第二章骨 一.脊柱大鼠的脊柱由57 —61块脊椎骨组成，包括颈椎7、胸椎13、腰椎& 荐锥 4、尾锥27 —31块。锥式C7T13L6S4Cy27—31。骨性标志为第二胸椎，其棘突最高，超过其它脊椎骨。 1、颈椎和其它哺乳动物一样，恒为7块，全无肋骨相连，横突上具有横突孔，供锥动脉通过。 2、胸椎13块，椎骨的长度由前向后逐渐增加（由2毫米增加到4毫米），锥管的直径平均为3.3毫米，较颈部的锥管为狭窄。 3、腰椎6块，每块锥体的长度比较一致，约 6 —7毫米。锥管直径由前面的 4 毫米向后逐渐缩小至2毫米。 二、胸骨 共分为6节，最前一节为胸骨柄，第二到第五节称为胸骨体，最后一节为剑突，棒状的剑突后面接一盘状的剑状软骨。胸骨柄长约10毫米。 第三章肌肉系统（省略） 第四章消化系统 消化系统包括消化管及附属消化器官。消化管可分为口腔、食管、胃、小肠和大肠等部。附属消化器官有齿、舌、唾液腺、肝和胰。 第一节消化管

、口腔1、舌全长约30毫米，不具有正中系带，但是有两条侧系带。 一、食管 分为颈、胸、腹三部。成年大鼠食管的颈-胸段长度约75毫米，腹段通过膈的食管裂孔在膈后的长度约15毫米，食管外径约2毫米。 位置：食管主要是沿气管背侧走行，仅在颈部稍偏左侧。 一、胃 位置：横位于腹腔的左前部，其壁面几乎完全为肝的左叶所覆盖。 大小：胃重为体重的0.5% ,属单室胃。 形态：胃小弯朝向背前方，食管在其中部入胃。胃大弯朝向腹后方，其边缘 有双层的口袋状大网膜。贲门部外观呈半透明状，内壁有粘液腺。 三、小肠 1、十二指肠 长度：长约100毫米。 位置：从幽门发出向右后行，再折向前终于右侧。可分为降支（向右后行）、横支（水平部）、升支（向前行），它们构成一个不完全的环，包围着部分胰腺。 颜色：淡红色。 2、空肠 长度：为小肠的最长部分，大约有700—1000毫米。 位置形态：盘旋在腹腔的右方腹侧部。 3、回肠 长度：较短，约有40毫米。 位置形态：以三角形的系膜回盲褶与盲肠的末端相连，向盲肠的开口与结肠的起始部紧密相接。 二、大肠 1、盲肠 长度：是介于小肠与盲肠之间的一个大的盲囊。长约60毫米，直径约10毫米。位置：通常位于腹腔的左后部。盲肠呈锥体形，分为基部、体部和尖端。 2、结肠 长度：长约100毫米。

黑升麻提取物对去势大鼠血清性激素及相关靶器官ER表达水平的影响

目次 目次 引言 (1) 第1章实验研究 (3) 1.1 材料与方法 (3) 1.1.1 实验动物与实验药物 (3) 1.1.2 实验动物处理方法、分组及所需实验试剂和器材 (3) 1.1.3 标本收集 (4) 1.1.4 放射免疫实验所需主要试剂、仪器及实验方法 (5) 1.1.5 免疫组化实验所需主要试剂、仪器及实验步骤 (5) 1.2 结果 (8) 1.2.1 三组大鼠在不同给药周期血清E2水平的比较 (8) 1.2.2三组大鼠在不同给药周期血清FSH水平的比较 (9) 1.2.3三组大鼠在不同给药周期血清LH水平的比较 (10) 1.2.4 各组大鼠子宫组织中ER表达强度的比较 (11) 1.2.5 各组大鼠阴道壁组织中ER表达强度的比较 (14) 1.3 讨论 (15) 1.3.1 围绝经期性激素的改变 (15) 1.3.2 黑升麻提取物缓解围绝经期症状的疗效 (16) 1.3.3 黑升麻提取物的非激素样作用 (17) 1.3.4 黑升麻提取物的作用机制假说 (18) 1.3.5 黑升麻提取物的用药周期 (20) 1.3.6 展望 (21) 参考文献 (21) 第2章综述 (26) 黑升麻提取物缓解围绝经期症状的作用机制 (26) 2.1 摘要 (26) 2.2 概述 (27) 2.2.1 黑升麻提取物来自欧洲 (27) 2.2.2 引进中国 (28) - V -

华北理工大学硕士学位论文 2.3 黑升麻提取物作用机制假说 (29) 2.3.1 神经内分泌作用假说 (29) 2.3.2 选择性雌激素受体调节剂(SERM)作用机制假说 (30) 2.3.3 抗氧化作用和炎症反应作用机制假说 (30) 2.4 黑升麻提取物临床疗效的评价 (30) 2.5 黑升麻提取物在临床应用时的不良反应 (31) 2.6 黑升麻提取物临床应用的前景 (32) 参考文献 (33) 结论 (36) 致谢 (37) 导师简介 (38) 作者简介 (39) 学位论文数据集 (40) - VI -

1碘的萃取

1．蒸馏法分离的实验探究 （1）实验原理：由于I2和CCl4沸点不同，加热其混合物，沸点低的CCl4先被蒸馏出来，从而达到分离的目的（从资料查得I2熔点：114℃，沸点184℃，而CCl4沸点77℃，沸点相差107℃，可以通过蒸馏的方法把CCl4蒸馏出去，从而与碘分离。不过蒸馏时，需要水浴加热，以便及时控制温度）。 （3）实验现象：80℃水浴片刻，烧瓶中出现紫色蒸汽，锥形瓶中也开始收集到浅紫红色溶液，最终烧瓶中残留少量的碘。 1）用NaOH浓溶液反萃取法，使I2转化成碘盐进行富集。I2和CCl4的溶液中的碘在碱性条件下会发生歧化反应，所以可以用较浓氢氧化钠溶液对I2和CCl4的溶液进行反萃取，使CCl4得到回收，I2与NaOH反应后，能以盐的形式富集。这一萃取进行得十分完全。反应为：3I2＋6NaOH==5NaI＋NaIO3＋3H2O；当NaI和NaIO3富集到相当量时，使体系变成酸性介质（如加入足量的H2SO4），使其中碘元素转变成I2单质得以回收。反应为：5NaI＋NaIO3＋3H2SO4==3Na2SO4＋3I2＋3H2O。 用固体NaOH代替NaOH溶液进行反萃取，在理论上和实践上都是可行的。查得NaOH 固体的密度为2.1g/cm3，它与I2反应的产物NaI的密度为3.7g/cm3，NaIO3的密度为4.3 g/cm3，都大于CCl4的密度。而CCl4的密度为1.59g/cm3，也远远大于I－及I2的密度。这样就构成一个三相体系，即固体NaOH（及反应生成的NaI、NaIO3）在最下层，CCl4在中层，最上层为含I2的水层。当上面的水层中含有的I2时，两步萃取可以同时进行。即水层的I2进入中层的CCl4层，中层的CCl4层里的I2又与下层的NaOH反应。I2在水层和CCl4层中不再有分配平衡，加快了萃取的进度，自发生成的I2最终会转移到固体中去。将上层的水和中层的CCl4倾倒在分液漏斗中进行分液，得以回收CCl4；而下层的固体放入蒸发皿中，并滴入适量的稀H2SO4利用图2的装置进行加热处理即可得到碘。 （2）过氧化氢法。从资料上查得，碘可与过氧化氢和碳酸氢钠混合液发生反应： I2＋H2O2＋2NaHCO3 = 2NaI＋CO2↑＋O2↑ 实验1：取10mL学生实验后的碘的CCl4萃取液于大试管中，先加入20滴饱和NaHCO3，后加入30%的H2O2溶液，液体只是分层，没有其他现象。振荡后紫色逐渐变浅，并有大量气体产生，静置后CCl4仍有气泡产生。弃去上层清液，继续加入10滴饱和NaHCO3和10滴H2O2溶液振荡，颜色全部褪去。移入分液漏斗进行分液，得到纯净的CCl4，而碘转化为NaI富集。 三结果讨论 1．采用常压蒸馏方法不能很好分离碘和四氯化碳 80℃水浴片刻，烧瓶中出现紫色蒸汽，锥形瓶中也开始收集到紫色的液体。最终烧瓶中残留少量的碘，大部分的碘和四氯化碳一同被蒸出。通过对比实验，证明将碘置于烧瓶中，水浴加热到50℃时，烧瓶中已有少量的紫色蒸汽，当水浴加热到77℃时，烧瓶中已有很多紫色蒸汽。由此说明碘在77℃时较多地升华，所以在四氯化碳的沸点时，大部分的碘随着四氯化碳一起蒸出，说明常压蒸馏不能分离碘和四氯化碳。 2．减压蒸馏可以分离碘和四氯化碳 将碘和四氯化碳的混合液（2g碘溶于30mL四氯化碳中），在室温下，压力在10～15mmHg，进行减压蒸馏，约8分钟就将碘和四氯化碳分离开来。 综上所述，用蒸馏的方法来提取碘是不可采用的方法，常压蒸馏不能分离，减压蒸馏可以分离，但通常在实验室不方便操作。因此，采用化学方法（NaOH浓溶液反萃取法；过氧化氢法）来分离碘和四氯化碳具有一定的可行性。 参考文献 ［1］唐敏.碘和四氯化碳的分离实验探究［J］.化学教学，2010

四氯化碳

四氯化碳 无色、易挥发、不易燃的液体。具氯仿的微甜气味。分子量153.84，密度1.595g/cm3(20/4℃)，沸点76.8℃，蒸气压15.26kPa(25℃)，蒸气密度5.3g/L。微溶于水，可与乙醇、乙醚、氯仿及石油醚等混溶。遇火或炽热物可分解为二氧化碳、氯化氢、光气和氯气等。 目录 1理化性质 物理性质 化学性质 2作用与用途 3使用注意事项 危险性概述 急救措施 消防措施 泄漏应急处理 操作处置与储存 毒理学资料 4制备 5上游原料 6安全信息 危险品标志 安全术语 风险术语 7物质毒性 数据分析 1理化性质 物理性质 外观与性状：无色透明挥发液体，具有特殊的芳香气味。味甜。 CAS号： 56-23-5[1] 熔点(℃)：-22.6 相对密度（水=1）：1.60 沸点(℃)：76.8 相对蒸气密度（空气=1）：5.3 分子式：CCl4 分子量：153.84 饱和蒸气压(kPa)：13.33(23℃) 燃烧热(kJ/mol)：364.9 折射率 1.459-1.46 临界温度(℃)：283.2 临界压力(MPa)：4.558 水溶性： 0.8g/L (20℃)[2] 辛醇/水分配系数的对数值：2.6 20℃时与水的界面张力(mN/m)：45.0 溶解性：微溶于水，易溶于多数有机溶剂。[3] 化学性质

化学性质稳定。有愉快的气味。有毒。不燃烧。高温下可水解生成光气；还原可得氯仿。[4] 2作用与用途 曾广泛用作溶剂、灭火剂、有机物的氯化剂、香料的浸出剂、纤维的脱脂剂、粮食的蒸煮剂、药物的萃取剂、有机溶剂、织物的干洗剂，但是由于毒性的关系现在甚少使用并被限制生产[5]，很多用途也被二氯甲烷等所替代。也可用来合成氟里昂、尼龙7、尼龙9的单体；还可制三氯甲烷和药物；金属切削中用作润滑剂。[6] 3使用注意事项 危险性概述 健康危害：高浓度该品蒸气对粘膜有轻度刺激作用，对中枢神经系统有麻醉作用，对肝、肾有严重损害。急性中毒：吸入较高浓度该品蒸气，最初出现眼及上呼吸道刺激症状。随后可出现中枢神经系统抑制和胃肠道症状。较严重病例数小时或数天后出现中毒性肝肾损伤。重者甚至发生肝坏死、肝昏迷或急性肾功能衰竭。吸入极高浓度可迅速出现昏迷、抽搐，可因室颤和呼吸中枢麻痹而猝死。口服中毒肝肾损害明显。少数病例发生周围神经炎、眼球后视神经炎。皮肤直接接触可致损害。慢性中毒：神经衰弱综合征、肝肾损害、皮炎。 燃爆危险：该品不燃，有毒。[3] 急救措施 皮肤接触：脱去污染的衣着，用肥皂水和清水彻底冲洗皮肤。就医。 眼睛接触：提起眼睑，用流动清水或生理盐水冲洗。就医。 吸入：迅速脱离现场至空气新鲜处。保持呼吸道通畅。如呼吸困难，给输氧。如呼吸停止，立即进行人工呼吸。就医。 食入：饮足量温水，催吐。洗胃。就医。[3] 消防措施 危险特性：该品不会燃烧，但遇明火或高温易产生剧毒的光气和氯化氢烟雾。在潮湿的空气中逐渐分解成光气和氯化氢。 有害燃烧产物：光气、氯化物。 灭火方法：消防人员必须佩戴过滤式防毒面具（全面罩）或隔离式呼吸器、穿全身防火防毒服，在上风向灭火。 灭火剂：雾状水、二氧化碳、砂土。[3] 泄漏应急处理 应急处理：迅速撤离泄漏污染区人员至安全区，并进行隔离，严格限制出入。建议应急处理人员戴自给正压式呼吸器，穿防毒服。不要直接接触泄漏物。尽可能切断泄漏源。 小量泄漏：用活性炭或其它惰性材料吸收。 大量泄漏：构筑围堤或挖坑收容。喷雾状水冷却和稀释蒸汽，保护现场人员，但不要对泄漏点直接喷水。用泵转移至槽车或专用收集器内，回收或运至废物处理场所处置。[3] 操作处置与储存 操作注意事项：密闭操作，加强通风。操作人员必须经过专门培训，严格遵守操作规程。建议操作人员佩戴直接式防毒面具（半面罩），戴安全护目境，穿防毒物渗透工作服，戴防化学品手套。防止蒸气泄漏到工作场所空气中。避免与氧化剂、活性金属粉末接触。搬运时要轻装轻卸，防止包装及容器损坏。配备泄漏应急处理设备。倒空的容器可能残留有害物。 储存注意事项：储存于阴凉、通风的库房。远离火种、热源。库温不超过30℃，相对湿度不超过80%。保持容器密封。应与氧化剂、活性金属粉末、食用化学品分开存放，切忌混储。储区应备有泄漏应急处理设备和合适的收容材料。[3] 毒理学资料 急性毒性：LD502350mg/kg（大鼠经口）；5070mg/kg（大鼠经皮）；LC5050400mg/m?，4小时

实验大鼠取材方案

实验大鼠取材方案 [取材内容] 1.取大鼠静脉血，分离血浆、血清，-80℃保存。 2.取大鼠门静脉血，分离血清，-80℃保存。 3.取大鼠甲状腺组织，制备甲状腺电镜观察标本，其余组织液氮冰冻保存备用。 4.取大鼠胸腺组织，制备胸腺组织电镜观察标本、免疫组化观察标本，其余组织液氮冰冻 保存备用。 5.取大鼠肺组织，制备肺组织电镜观察标本、免疫组化观察标本，其余组织分装液氮冰冻 保存备用。 6.取大鼠肝脏组织，制备肝脏组织电镜观察标本、免疫组化观察标本，其余组织分装液氮 冰冻保存备用。 7.取大鼠胰腺组织，制备胰腺组织电镜观察标本、免疫组化观察标本，其余组织分装液氮 冰冻保存备用。 8.取大鼠肠系膜淋巴结组织，制备肠系膜淋巴结免疫组化观察标本，其余组织液氮冰冻保 存。 9.取大鼠胃部组织，制备胃粘膜组织电镜观察标本、免疫组化观察标本，其余组织分装液 氮冰冻保存备用。 10.取大鼠空肠组织，制备肠道粘膜组织电镜观察标本、免疫组化观察标本，其余组织分装 液氮冰冻保存备用。 11.取大鼠回肠组织，制备肠道粘膜组织电镜观察标本、免疫组化观察标本，其余组织分装 液氮冰冻保存备用。 12.取大鼠肾组织，制备左肾组织电镜观察标本、免疫组化观察标本，右肾组织液氮冰冻保 存备用。 13.取大鼠肾上腺组织，左侧制备肾上腺组织免疫组化观察标本，右侧肾上腺液氮冰冻保存 备用。 14.取大鼠睾丸组织，左侧制备电镜观察标本、免疫组化观察标本，右侧睾丸液氮冰冻保存 备有。 [试剂及药品] 戊巴比妥钠或10%水合氯醛、75%酒精、生理盐水、多聚甲醛或福尔马林液、3％戊二醛磷酸盐缓冲液(PBS0.01mol/LP pH7.4)或4％戊二醛、肝素钠、器械液（器械清洗消毒液） [器材] 备皮刀、解剖台、弯盘、组织剪、眼科剪、手术刀柄、刀片、小号弯式血管钳、蚊式血管钳、眼科镊、无损伤血管夹、聚乙烯管、三通管、丝线、培养皿、天平、一次性离心管（5ml、

碘在水和四氯化碳中分配系数的测定

实验9 碘和碘离子反应平衡常数的测定 一、实验目的及要求 1、测定碘和碘离子反应的平衡常数。 2、测定碘在四氯化碳和水中的分配系数。 3、了解温度对分配系数及平衡常数的影响 二、实验原理 碘溶于碘化物（如KI ）溶液中，主要生成I3-，形成下列平衡： KI +I 2 KI3 即 I2 +I - I-3 （7－1） 其平衡常数K （7－2） 式中a 、 (7－3) 由于在一定温度下达到平衡时，碘在四氯化碳层中的浓度和在水溶液中的浓度炎比为一常数Kd ，称为分 配系数。 （7－4） 因此，当测定了碘在四氯化碳层中的浓 度后，可通过预先测定的分配系数求出I2在KI 溶液中的浓度。即 （7－5） 而分配系数Kd 可借助于I2在CCl4和纯水中的分配来测定。 （7－6） 再分析测定KI 溶液中的总碘量 由于形成一个I3-要消耗一个I-，所以平衡时I-的浓度为： 三、仪器和药品 恒温水浴 1套 量筒100ml 、25ml 各1个 碱式滴定管25ml 1个 微量滴定管1个 移液管25ml 1支 5ml 2支 锥形瓶250ml 4支； 碘量瓶 2个 0.04mol·l-1 I2（CCl4）溶液； 0.02% I2 的水溶液； 0.0250 mol·l-1 Na2S2O3标准液； 0.5%淀粉指示剂，KI 固体。 四、实验步骤 1、控制恒温水温度约比室温高10℃，槽温误差为±0.05℃。 ()() - -+3 232I I I I c KI C c KI C 即得溶液减去溶液-- --=30I I I c c c

3、将配好的系统均匀振荡，然后置于恒温槽中恒温1小时，恒温期间应经常振荡，每个样品至少要振荡五次，如要取出水槽外振荡，每次不要超过半分钟，以免温度改变，影响结果。最后一次振荡后，须将附在水层表面的CCl4振荡下去，得两液层充分分离后，才能吸取样品进行分析。 4、在各号样品瓶中，准确吸取258ml 水溶液层样品二份，用标准Na2S2O3溶液滴定（其中1号水层用微量滴定管，2号水层用25ml 碱式滴定管），滴至淡黄色时加数滴淀粉指示剂，此时溶液呈蓝色， 继续用Na2S2O3溶液滴至蓝色刚消失. 在各号样品瓶中准确吸取5ml CCl4层样品二份（为了不让水层样品进入移液管，必须用一指头塞紧移液管上端口，直插入CCl4层中或者边向移液管吹气边通过水层插入CCl4层），放入盛有10ml 蒸馏水的锥形瓶中，加入少许固体KI ，以保证CCl4层中的I2完全提取到水层中，（充分振荡）同样用Na2S2O3标准液滴定，（1是CCl4层样品用25ml 滴定管，2号用微量滴定管）。 五、数据记录及处理 1、数据记录 将消耗Na2S2O3溶液的量列表： (1)由1号样品的数据按（7－6）式计算分配系数Kd 。 (2)由2号样品的数据计算CI2、CI3-、CI-及K 。 六、实验注意事项 1、本实验玻璃仪器要洁净干燥，移液要准确，尤其CCl4溶液较重，更要严格掌握，以免影响结果。 2、摇动锥形瓶加速平衡时，勿将溶液荡出瓶外，摇后可开塞放气，再盖严。 3、滴定终点的掌握是分析准确的关键之一，在分析水层时，用Na2S2O3滴至溶液呈淡黄色。再加入淀粉指示剂，至浅蓝色刚刚消退至无色即为终点。在分析CCl4层时，由于I2在CCl4层中不易进行H2O 层，须充分摇动且不能过早加入淀粉指示剂，终点必须以CCl4层不再有浅蓝色为准。 七、讨论 (1)由1号样品计算分配系数，实际上可按下式直接计算 式中V(CCl4)、V(H2O)分别为滴定5mlCCl4层样品及25ml (2)碘溶于碘化物溶液中时，还形成少量的I7-等离子，但因量少，实验可忽略不计。 (3)测分配系数Kd 时，为了使系统较快达到平衡，水中预先溶入超过平衡时的碘量（约0.02%），使水中的碘向CCl4层移动，达到平衡。

四氯化碳综合法制备大鼠肝硬化模型_叶春华

·论著·四氯化碳综合法制备大鼠肝硬化模型 叶春华　刘浔阳 (中南大学湘雅三医院普外科,湖南　长沙　410013) [摘要]【目的】探讨建立一种理想的大鼠肝硬化模型的复制方法并加以评价,为下一步探索肝硬化门脉 高压症治疗方法提供可靠、稳定的模型动物。【方法】90只雄性SD大鼠随机分为两组:实验组(70只)采用四 氯化碳(CCl4)+苯巴比妥钠+食用白酒进行诱导,诱导期间CCl4浓度在一定范围内逐步增加,并用食用白酒 替代医用乙醇溶液;对照组(20只)给与普通饮水和饲料,频度及剂量同实验组。同时采用一系列的检查方 法加以评估。【结果】实验组70只大鼠造模结束时,死亡9只,死亡率12.86%。实验结束时,按照成模标准, 造模成功大鼠共61只,均可观察到肝硬化结节及镜下假小叶形成,成模率87.14%。实验组门静脉压力比对 照组明显增高(P<0.05);血清总胆红素、谷丙转氨酶及谷草转氨酶较正常对照组明显升高(P<0.05),而 血清白蛋白较之正常对照组明显降低(P<0.05)。对照组20只全部存活。【结论】该方法可形成稳定的肝 硬化门脉高压症模型,可用于肝硬化门脉高压症方面的相关研究。此模型制作周期短(仅需9周),成模率高, 死亡率低,具有简便、快捷、高效的优点,适于大批量制作。 [关键词]　肝硬化,实验性;　疾病模型,动物;　大鼠;　四氯化碳 Study on Method of Inducing Hepatic Cirrhosis Model in Rats by Carbon Tetrachloride 　Y E Chun-hua,　LIU X un-yang(Department o f General Surgery,the T hird X iangy a Hosp ital,Central South University,Changsha,410013,China) [Abstract]【Objective】T o dev elo p and evalua te an ideal means to induce cir rhotic model in rats for nex t study o n live r cir rhosis with po r tal hypertension trea tment.【M ethods】N inety male SD rats we re randomly di- vided into two gr oups,T he e xperiment g roup(n=70)wa s treated with CCl4,PBS and ea table alcoho l and the co ncentra tion of CCl4and eatable alcohol were increased stage by stag e in a ce rtain range during the ex peri- ment.T he co nt rol g roup(n=20)wa s trea ted w ith common drinking w ater and animal feeds,the f requency and do se w ere the same a s the experime nt g ro up,meanwhile evalua ted by a se ries of check methods.【Results】 Af te r being induced w ith above means,the ra t mor tality of the ex periment gr oup w as12.86%,and the fo rma- tion rate of liver cir rhosis false lobe was87.14%.T he po rtal v eno us pressure of the e xperiment g roup w as higher than the co ntrol g ro up(<0.05),ST B,G PT,G O T we re higher than the co ntro l g roup,but SA B de- crea sed(P<0.05).T he contro l g r oup w as all surv iv al.【Co nclusio n】T he pro cedure is fair ly stable and relia- ble,the model is useful for resea rch in liv er cir rhosis w ith po rtal hy pe rtension.T he cy cle time of inducing cir- rhosis model is shor t the mor ta lity is low. [Key words]　liver cir rho sis,ex pe rimental;　disesase models,animal;　rats;　carbon tetr achloride [中图分类号]　R575.2　[文献标识码]　A　[文章编号]　1671-7171(2005)05-0619-04 由于病毒性肝炎、酒精性肝病等原因造成的慢性肝病和肝硬化患者有增多的趋势,近十年来有关门脉高压症的研究成为消化学界的热点。本实验通 [作者简介]　叶春华(1967-),男,湖南安乡人,博士,主治医师,主要从事肝胆外科临床工作。 [收稿日期]　2005-04-01过腹腔内注射四氯化碳(CCl4)加饮用苯巴比妥钠和食用酒精,探讨建立一种理想的肝硬化模型的方法。1　材料与方法 1.1　材料 1.1.1　实验动物　90只Sprag ue-Daw ley鼠(简称SD大鼠),全部雄性,体重180～220g,普通大鼠饲

大鼠注射

孕期暴露于LPS 对子代大鼠肾脏结构和功能的影响 LPS 是革兰氏阴性细菌细胞壁的脂多糖，常用来作为炎症免疫刺激剂模仿非特异性炎症反应。LPS 和它的受体TLR4 结合后启动一系列的磷酸化过程，促进转录因子NF-κB 进入细胞核。 在孕期暴露于LPS的模型中，孕鼠(SD大鼠)被随机分成四个组(每组8只)：对照组、 LPS组、PDTC组和LPS+PDTC组。其中LPS组动物于孕第8、10、12天给予腹腔注射LPS 0.79mg/kg，LPS+PDTC组动物在给予LPS的基础上，在孕第8~14天每天给予腹腔注射PDTC 100 mg/kg。对照组和PDTC组大鼠分别于相应时间给予生理盐水或PDTC。 动物分组：SD 成年雌雄大鼠按4:1 合笼交配，室温(24±1)℃环境下喂养。分别于合笼次日7:00 做雌鼠阴道检查，有阴道栓或阴道涂片精子呈阳性者定为妊娠0天。 孕鼠随机分为4 组，每组8 只。 对照组：在孕第8~14 天腹腔注射生理盐水0.5 ml。 LPS 组：在孕第8、10、12 天每天腹腔注射LPS 0.79 mg/kg，第9、11、13、14 天腹腔注射生理盐水。 LPS+PDTC 组：在孕第8、10、12 天每天腹腔注射LPS 0.79 mg/kg，第8~14 天 每天腹腔注射PDTC 100 mg/kg，PDTC 注射在LPS 注射后立即进行。 PDTC 组：第8~14 天每天腹腔注射PDTC 100 mg/kg。 给药时间：分别在孕期8、10、12 天上午8：00~9：00 进行腹腔注射，注射后轻揉腹部片刻，以防药液漏出 PDTC Ammonium pyrrolidinedithiocarbamate 吡咯烷二硫代氨基甲酸 1．LPS 注射液配置 用生理盐水将LPS 配制成1mg/ml 的浓度，放置4℃冰箱保存备用。

大鼠解剖图

图Ⅷ-31左心房与左心室The left atrium and left ventricle 11左心房left atrium 12左心室left ventricle 13肺动脉右支right branch of pulmonary artery 14肺静脉pulmonary vein 15前腔静脉precavalvein 16肺动脉左支left branch of pulmonary art 7tery 17后腔静脉postcaval vein 18心中静脉 middle cardiac vein 19头臂动脉brachiocephalic artery 20主动脉弓aortic arch 21乳头肌papillary muscles 22左颈总动脉left common carotid artery 23左锁骨下动脉left subclavian artery 24右前腔静脉right precaval vein 25心外膜extracardium

图Ⅷ-56前肢内侧面The anterior limb. Medial aspect

图Ⅷ-57后肢内侧面(1)The posterior limb. Medial aspect（1） 1腋神经axillary nerve 2桡神经radial nerve 3头静脉cephalic vein 4正中神经median nerve 5正中动脉median artery 6肌支muscular branch 7尺神经ulnar nerve 8臂动脉brachial artery 9胸长神经long thoracic nerve 10胸外侧动脉external thoracic artery I1颈总动脉common carotid artery 12主动脉弓aorta arch 13左心耳left auricle 14右心耳right auricle 15食管esophagus 16胸主动脉thoracic aorta 17腹壁浅动脉superficial epigastric artery 18腹壁浅静脉superficial epigastric vein 19隐动脉saphenous artery 20隐大静脉great saphenous vein

实验室常见废弃物的处理.

实验室常见废弃物的处理 尽管实验室废物数量不大,但种类较多且很复杂,仍须经过必要的处理方能排放。目前我国仅有少数实验有“三废”处理设施。随着人们环境意识的增强,今后实验室必须加强对实验室“三废”的处理。以下收集和介绍一些实验室常见废弃物的处理方法,供大家在实际工作中的参考。 1 实验室废弃物处理的一般原则 根据实验室废弃物的特点,应做到分类收集、存放,集中处理。处理方法应简单易操作,处理效率高,不需要很多投资。 少量的有毒气可通过通风设备排出室外,通风管道应有一定高度,使排出的气体空气稀释。产生的毒气量大时必须经过吸收处理,然后才能排出,如氮、硫、磷等酸性氧化物气体,可用导管通入碱液中,使其被吸收后排出。 对于某些数量较少,浓度较高的有毒有机物可于燃烧炉中供给充分的氧气使其完全燃烧,生成二氧化碳和水。对高浓度废酸、废碱液要经中和至近中性时排放。对于含有少量被测物和其它试剂的高浓度有机溶剂废液应回收再用。 用于回收的废液应分别用洁净的容器盛装,同类废液中浓度高的应集中贮存,以便于回收某些组分,浓度低的经适当处理达标即可排出。 根据废弃物的性质选择合适的容器和存放点。废液应 用密闭容器贮存,禁止混合贮存,以免发生剧烈化学反应而造成事故。容器应防渗漏,防止挥发性气体逸出而污染实验室环境。 剧毒、易燃、易爆药品的废液,其贮存应按相应规定执行。废液应避光,远离热源,以免加速废液的化学反应。贮存容器必须贴上标签,标明种类,贮存时间等,贮存时间不宜太长。 2 实验室废弃物处理方法

实验室含汞、铬、铅、镉、砷、酚、氰废液必须经处理达标才能排放,对实验室内少量废液的处理可参照以下方法进行。 2.1 含汞废弃物的处理 如不小心将汞散失在实验室里,如打碎压力计、温度表或极谱分析操作失误,将汞撒落在实验室地面、工作台上等,必须及时清除,如用滴管,毛笔或用在硝酸汞的酸性溶液中浸过的薄铜片、粗铜丝收集于烧杯中,用水覆盖。落于地面等难以收集的微小汞珠,应尽快撒上硫磺粉,使其化合成毒性较小的硫化汞后清除干净;或喷上用盐酸酸化过的1%高锰酸钾溶液(每升高锰酸钾溶液中加5ml浓盐酸,过1—2小时后再清除;或喷上20%三氯化铁的水溶液,干后再清除干净。特别应当撒出的是三氯化铁水溶液是对汞具有乳化性能并同时可将汞转化为不溶性化合物的一种非常好的去汞剂。 但金属器件(铅除外不能用三氯化铁除汞,因金属本身会受三氯化铁溶液的作用而损坏。 如果室内汞蒸汽浓度超过0.01mg/m3,可用碘净化,即将碘加热或自然升华,碘蒸汽与空气中的汞及吸附在墙壁上、地面上、天花板上及器物上的汞作用生成不易挥发的碘化汞,然后彻底清扫干净。实验中产生的含汞废气可用导管通入高锰酸钾吸收液内,经吸收后排出。 含汞废液可先调pH值至8—10,加入过量硫化钠,使其生成硫化汞沉淀,再加入硫酸亚铁作为共沉淀剂,生成的硫化铁沉淀将悬浮在水中被难以沉降的硫化汞微粒吸附而共沉淀,然后静置,分离或经离心过滤,、清液可排放,残渣可用焙烧法回收汞或制成汞盐。汞及其无机化合物最高允许排放浓度:0.05mg/L。 2.2 含铅、镉废液的处理 镉在pH高的溶液中能沉淀下来。对含铅废液的处理通常也采用混凝沉淀法、中和沉淀法。因此可向废液中加碱或石灰乳,将废液的pH值调到8~10,使废液中的

单质碘在不同溶剂中为什么颜色不同

1.单质碘在不同溶剂中为什么颜色不同？ 碘在不同溶剂中所形成溶液的颜色随相剂不同而有区别。 碘仅微溶于水，得到黄色到棕色溶液。碘易溶于有机溶剂中。如不饱和烃、液态二氧化硫、醇、酮、醚、酯和苯等溶剂中为棕色或棕红色；碘在链烃、二硫化碳、四氯化碳溶剂中呈紫色。 碘在试管中加热，得到碘蒸气是紫色的。说明碘以分子状态存在为紫色。碘在不同溶剂中显不同的颜色是由于碘的溶剂化不同。碘在非极性溶剂中，如四氯化碳中碘不发生溶剂化，溶解的碘以分子状态存在，故溶液颜色与碘蒸气颜色相同。用光谱仪试验碘溶液的颜色，紫色溶液的可见光谱在5200～5400×10－10米区域内、这是跟碘蒸气中碘分子的光谱是一致的。也说明在紫色溶液中，碘以碘分子状态存在。碘在乙醇、乙醚、水等溶剂中呈黄色、棕色或红棕色。这是因为乙醇、乙醚等溶剂能够给出电子，通常叫供体溶剂。当碘溶解时，跟这类溶剂结合，通常形成的是1：1的电荷迁移配合物，即I2……S(S代表溶 剂），这个名字是来自其相互作用的本质，即这种相互作用是电荷迁移形式，这种配合物的光谱接近于可见光，电子跃迁过程相应于一个电子由溶剂分子配（体）迁移到I2上去，它的频率随配体溶剂分子的电离能的降低而降低，因此所显的颜色随溶剂的不同而不同。(back to top) 2.卤素与水反应的情况有什么不同？ 卤素单质较难溶于水，卤素与水可能发生以下两类反应： （1）X2 + H2O = 2HX + 1/2 O2↑ （2）X2 + H2O = HX + HXO↑（X= F、Cl、Br、I） 在反应（1）中卤素作为氧化剂，水作为还原剂组成了一个氧化还原反应。该反应是由下面两个半反应组成的： X2 + 2e = 2X ① O2 + 4H + 4e = 2H2O ② 卤素与水反应的pH电势图：

大鼠和小鼠解剖图谱(照片版)

图Ⅷ-1整体骨骼侧面观The skeleton. Lateral View 图Ⅷ-2整体骨骼左前面观The skeleton. Left anterior view 1肋骨rib 2胸椎thoracic vertebra 3颈椎cervical vertebra 4颅骨cranium 5肩胛骨scapula 6肱骨hiimeius 7桡骨radius 8尺骨ulna 9掌骨metacarpal bone 10指骨digital bone 11腰椎lumbar vertebra 12髂骨ilium 13尾骨coccyx 14股骨femur 15髌骨patella 16腓骨fubula 17胫骨tibia 18跖骨metatarsal bone 19趾骨digital bone

图Ⅷ-4头骨侧面The skull. Lateral aspect

图Ⅷ-6下颌骨侧面The mandible. Lateral aspect

1枕骨occipital bone 2顶间骨interparietal bone 3矢状缝sagittal suture 4颧骨malar bone 5上颌骨maxillary bone 6前颌骨premaxillary bone 7枕外嵴external occipital creat 8顶骨parietal bone 9额骨frontal bone 10鼻骨nasal bone 11鼻间缝internasal suture 12前筛孔preethmoid pore 13蝶腭孔sphenopalatine foramen 14门齿 incisor tooth 15下颌骨mandible 16视神经孔optic foramen 17枕骨occipital bone 18茎突styloid process 19外耳道external acoustic meatus 20颞骨temporal bone 21 腭裂patoschisis 22臼齿molar tooth 23腭骨palatine bone 24翼孔pterygoid apertures 25破裂孔foramen lacerum 26枕大孔foramen magnum 27腭后孔posterior palatine foramen 28鼻后孔posterior nasal apertures 29卵圆孔foramen ovale 30鼓骨tympanic bone 31舌下神经孔hypoglossal foramen 32下颌联合mandibular symphysis 33颏孔mental foramen 34冠状突coronoid process 35下颌支ramus of mandible 36角状突process of horn 37下颌孔mandibular foramen 38翼肌窝pterygoid fossa 39髁突condylar process