发酵罐灭菌验证方案(英)

The Northeast

Biomanufacturing Center & Collaborative Validation Protocol-Fermentation Vessel Sterilization

Subject: Validation Protocol for sterilization of BioFlow 110 3 Liter Bioreactor.

Document #: VP001

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Effective Date: January 1, 2006

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T. Burkett_____________________

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1. Scope: This document covers validation of the fermentation vessel sterilization process as described in SOP 004 –Preparation of BioFlow 110 3 liter fermentation vessel. Validation of the bioreactor sterilization procedure is conducted in order to provide documented evidence that the process described in SOP P004 will effectively sterilize growth media contained in the New Brunswick Scientific BioFlow 110 3 liter fermentation vessel and kill any microorganisms inadvertently introduced into the fermentation vessel during the preparation of media and the vessel.

2. Definitions:

2.1 NBS – New Brunswick Scientific

2.2 CFU -Colony Forming Units

2.3 CFU/ml – Clolony Forming Units per milliliter

2.3 rGFP – Recombinant Green Fluorescent Protein

2.4 D.I. H2O – Deionized water

2.5LB – Luria Bertani media

2.6 ml(s) – Milliliter(s) (10-3 Liters)

2.7 O.D.600– Optical Density at 600 nanometers

2.8 μl – microliter (10-6 Liters )

2.9 Bioreactor / fermentation vessel are used interchangeably through-out this

protocol.

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3. References:

3.1.1Guide to Operations: BioFlow 110 Modular Benchtop Fermentor Manual # M1273

0054 Revision E

3.1.2Guide to Operations: AMSCO Eagle Series Autoclave Model 3011 Revision

4.1

3.1.3SOP P001 - Cleaning of NBS Bioflow 110 BioFlow 110 Modular Benchtop

Fermentor 3 Liter vessel.

3.1.4SOP P004 –Preparation of NEB BioFlow 110 Modular Benchtop Fermentor 3 Liter

vessel.

3.1.5SOP P005 – Collection of In-process samples from NEB BioFlow 110 Modular

Benchtop Fermentor 3 Liter vessel.

3.1.6SOP Q001 – Determination of the number of viable bacterial cells through serial

dilution and growth on Luria-Bertani media.

3.1.7SOP Q002 - Gram Staining.

3.1.8SOP P006 – Preparation of Luria - Bertani liquid media.

3.1.9SOP P008 – Determination of the Optical Density of a bacterial culture

4. Reagents:

4.170% Isopropyl alcohol

4.2Sample collection vials

4.3LB liquid media

4.4Bacillus subtilus culture

4.5 Culture tubes, inoculating loops, bunsen burners.

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5. Responsibility:

5.1 It is the responsibility of all personnel validating the performance of th e

equipment covered by this validation plan to read and understand the

validation plan.

5.2 It is the responsibility of the Quality Control Laboratory to perform the viable

cell counts on pre and post autoclaved material described in this validation

plan.

5.3 It is the responsibility of the validation department to supervise the described

validation exercises in accordance with the validation schedule, in response to

replacement or modification to autoclaves used for the purpose of sterilizing

fermentation vessels, or, in response to modification or replacement of SOP

P002, P003, or P004.

06发酵罐验证方案-0

目录 1 概述及基本情况 (2) 2 目的 (2) 3 范围 (2) 4 职责 (2) 4.1 验证小组 (2) 4.2 设备部 (3) 4.3 质量保证部 (3) 4.4 生产技术部 (3) 5 验证实施 (3) 5.1 预确认 (3) 5.2 安装确认 (4) 5.3 运行确认 (6) 5.4 性能确认 (6) 5.5 再验证与验证周期 (7) 6 漏项与偏差 (7) 7 验证的结论 (7) 8 验证最终分析与评价 (7) 9 附表 (7)

1 概述 该设备为，可用于制药、食品、化工行业的发酵工艺操作。 基本情况如下： 设备编号： 名称： 型号： 生产厂家： 出厂日期： 供货厂家： 到货日期： 使用部门： 工作间： 设备负责人： 维修服务： 2 目的 确定设备的技术指标、型号和设计规范要求。 对设备安装过程进行检查，安装后进行试运行，以证明设备能够达到设计要求及规定的技术指标。 在确认设备能够达到设计要求或规定的技术指标的前提下，进行模拟生产，证明其能够满足生产操作需要，而且符合工艺要求。 3 范围 本规程适用于发酵罐的验证管理。本方案包括预确认(DQ)、安装确认（IQ）、运行确认（OQ）、性能确认（PQ）。 4 职责 4.1 验证小组 4.1.1 负责验证方案的审批。 4.1.2 负责验证的协调工作，以保证本验证方案规定项目的顺利实施。

4.1.3 负责验证数据及结果的审核。 4.1.4 负责验证报告的审批。 4.1.5 负责发放验证证书。 4.2 设备部 4.2.1 负责验证方案的起草、设计及实施。 4.2.2 负责提供本设备的详细资料及相关SOP。4.2.3 负责提供设备的计量器具校验的详细情况。 4.3质量保证部 4.3.1 负责验证方案相关的检验及结果分析报告。 4.3.2 负责数据的选择与评价。 4.4 生产技术部 协助以上部门进行本设备的验证 5 验证实施 5.1 预确认：根据发酵罐的要求，进行设备选型。 5.2 安装确认

发酵罐使用注意事项

发酵罐使用注意事项： 1)在操作工程中严格遵循发酵罐使用说明书进行操作，不得私自更改操作规范。 2)罐体灭菌前务必检查其中液面高度，要求所有的电极都没于液面以下。 3)打开发酵罐电源前务必检查冷却水、压缩空气是否已打开，温度探头是否已插入槽中，否则会烧坏加热电路。 4)发酵过程中一定要保持工作台的清洁，用过的培养瓶及其它物品及时清理，因故溅出的酸碱液或水应立即擦干。 5)对罐体安装，拆卸和灭菌时要特别小心pH电极和罐体的易损又昂贵部件；谨防锐利零部件造成人身损伤；谨防高温烫伤。 6)必须确保所有单件设备能正常运行时使用本系统。 7) 在空消及实消时，尽量排空管道内冷凝水，防止其进入夹层对罐体造成损伤。 8)在实消过程中，夹套通蒸汽预热时，必须控制进汽压力在设备的工作压力范围内(不应超过0.15MPa)，否则会引起发酵罐的损坏。 9)在空消及实消时，一定要排尽发酵罐夹套内的余水。否则可能会导致发酵罐内筒体压扁，造成设备损坏;在实消时，还会造成冷凝水过多导致培养液被稀释，从而无法达到工艺要求。 10)在空消、实消结束后冷却过程中，严禁发酵罐内产生负压，以免造成污染，甚至损坏设备。 11)在发酵过程中，罐压应维持在0.2～0.3bar之间，以免引起污染。 12)在各操作过程中，必须保持空气管道中的压力大于发酵罐的罐压，否则会引起发酵罐中的液体倒流进入过滤器中，堵塞过滤器滤芯或使过滤器失效。 13)在空消过程中，及时打开底阀向罐内进入蒸汽，防止空消过程中因内壁干燥损伤罐体。 14)发酵罐在日常清洁过程中应双人进行，发酵罐盖再升起或下降过程中严谨将身体任何部位置于发酵罐盖下方，防止因设备失灵造成人身损伤。 15)如果遇到自己解决不了的问题请直接与公司售后服务部门联系。请勿强行拆卸或维修。

软袋灭菌工艺验证

0.9%氯化钠注射液(100ml软袋) 灭菌工艺验证报告 验证工艺0.9%氯化钠注射液(100ml软袋)灭菌工艺验证车间输液 3 线 验证方案制订： 部门姓名日期品管部 验证方案审核： 部门姓名日期研发部 生产部 品管部 验证方案批准：日期： 验证结果审核： 部门姓名日期研发部 生产部 品管部 验证结果批准：日期：

1．概述 为了改善输液软袋外部的洁净度，本品种采取了双袋灭菌工艺。内袋灌注 药液后，再进行套外袋，内袋和外袋共同进行灭菌，避免了内袋和输液塞与外界 环境的接触，给患者增加了安全感，也方便了医务人员，双袋输液进入手术室内 即可使用。 本品为临床上常用的输液品种。用于各种原因所致的失水，包括低渗性、等 渗性和高渗性失水；高渗性非酮症糖尿病昏迷，应用等渗或低渗氯化钠可纠正失 水和高渗状态；低氯性代谢性碱中毒等。 本公司按最终灭菌药品的工艺进行生产。鉴于本品化学性能稳定，故采用115℃、35分钟的灭菌温度进行灭菌（Fo≥12），现将灭菌情况报告如下。 灭菌釜的型号：PSMD7280 生产厂家：山东新华医疗器械股份有限公司 本公司设备编号： 灭菌釜的结构： PSMD型大输液水浴灭菌器为圆形筒体结构，灭菌室最高可承受0.27MPa压力。筒体材料为8mm厚耐酸不锈钢，支座材料为碳钢板Q235B。水浴灭菌器将 蒸汽通过热交换器间接加热纯化水，并以循环喷淋方式对输液瓶进行加热灭菌，灭菌结束后，冷却水通过热交换器冷却纯化水，对输液瓶进行冷却，使产品温度 降到60℃左右。 通常将待灭菌的产品放置在不锈钢架子里，软袋每车为18层，每层30袋，装载后用车子推入灭菌机内。100ml软袋产品装载12车(约6480袋/批)。 灭菌柜采用计算机与程序逻辑控制器（PLC）进行自动化控制。灭菌程序中 的主要参数，如灭菌加热速率、压力、温度、时间及冷却速率都可根据不同产品 的要求设定。温度控制系统使用Pt 100探头6只。一个探头测定循环水入口处的 温度，另一个探头测量循环水出口处的温度，其余4个探头直接插入瓶内测定瓶 内温度，与计算机控制系统相连，用于灭菌温度控制，只有当4个瓶内探头中的 3只达到设定温度时，才开始记录灭菌时间。另一个探头用来测定腔室内的压力，并通过压缩空气来调节控制腔室内部压力。 灭菌步骤：装车，进纯化水、升温(热交换循环)、保温(灭菌)、排气及冷却 等阶段。 2. 测试方法 2-1热电偶校正： 2-1-1 校正器材： 名称型号厂商检测单位有效期 二等标准水银温度计 50～100℃，棒式 100～150℃，棒式 常州南方仪表有限公司 无锡计量 测试中心

医疗器械产品辐照灭菌剂量验证方案与报告

XXXXX公司 建立医用产品灭菌剂量验证报告 送检单位：公司日期：年月日

目录 序言 (2) 试验前准备工作 (2) 方法 (3) 实施容 (4) 结果 (5) 结论 (6) 附注 (6) 参考资料 (6) 初始污染菌检测规 (7) 确定灭菌剂量 (9) 无菌检查 (10)

序言 本实验是对医用产品公司的一次性医疗用品进行了辐射灭菌剂量设定和验证。实验原理是基于ISO11137-2：2006的方法，即先对辐照前产品的初始污染菌进行测定，然后选择验证剂量。再用验证剂量对产品进行辐照，并测定辐照后存活微生物的样品件数，以此来确定所确定的验证剂量能够满足10-6的灭菌保证水平。本实验从年月日开始至年月日结束。 试验前准备工作 一、样品 1样品：医用产品，三个批号： 生产企业：公司。 2器具及试剂 2.1器材 试管容量瓶三角烧瓶 酒精灯灭菌剪刀、镊子灭菌平皿（9cm） 75％乙醇棉灭菌刻度吸管(1ml、5ml) 紫外可见分光光度计立式压力蒸汽灭菌器电热鼓风干燥箱 酸度计恒温培养箱电热恒温水浴锅 生化培养箱电热恒温干燥箱 2.2培养基及试剂： a)流体硫乙醇酸盐培养基 b)改良马丁培养基 c)营养琼脂培养基 2.3稀释液、冲洗液及其制备方法 a)质量浓度为9g/L的无菌氯化钠溶液 b)0.1％蛋白胨水溶液取蛋白胨1.0g，加水1000ml，微温溶解，滤清，调节pH值至7.1± 0.2，分装，灭菌。 c)pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液取磷酸二氢钾3.56g、磷酸氢二钠7.23g、氯化钠4.30g、蛋

白胨1.0g，加水1000ml，微温溶解，滤清，分装，灭菌。 二、实验前准备 2.1培养基要求： 用于培养需（厌）气菌和真菌的培养基的制备、培养基灵敏度检查及其他各项要求应符合《中国药典（二部）》附录中《无菌检查法》的规定。 培养基使用按中国药典方生产的符合规定的脱水培养基。制备后采用验证合格的灭菌程序灭菌。制备好的培养基保存在2～25℃、避光的环境。 2.2器具灭菌：与供试液接触的所有器具应采用可靠方法灭菌，置压力蒸气灭菌器121℃30min，或置电热干燥箱160℃2h。 2.3无菌室要求：无菌室操作台局部符合洁净度100级单向流空气区域要求。无菌室在消毒处理完毕后，检查空气中的菌落数，方法如下：取直径约90mm培养皿数支，无菌操作注入融化的营养琼脂培养基约20mL，在30℃～35℃培养48h证明无菌后，取3只培养皿在无菌室操作台或超净工作台平均位置打开上盖，暴露30min后盖好，置30℃～35℃培养48h后取出检查，3只培养皿上生长的菌落数平均不得超过1个。 无菌试验过程中检查空气中的菌落数，方法同上。在试验开始进行时打开平皿盖，至试验结束盖好照上法培养，符合上述要求。 2.4阳性对照： 选择金黄色葡萄球菌为对照菌，接种金黄色葡萄球菌的新鲜培养物至营养琼脂培养基中，23～28℃培养24～48小时，将上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数小于100cfu的菌悬液。阳性对照试验的菌液制备方法验证试验，加菌量小于100cfu，供试品用量同供试品无菌检查每份培养基接种的样品量。阳性对照管培养48～72小时应生长良好。 2.5阴性对照： 取相同稀释液、冲洗液同上法操作，作为阴性对照。阴性对照不得有菌生长。

发酵罐的正确使用与清洗

发酵罐的正确使用与清洗 一、正确使用发酵罐 发酵罐灭菌之后，就可以用来培养细菌了。 1.接上pH电极的插头, 接通底部冷却水管和空气出口处的冷凝器上的冷却水管, 将各硅酮管置于相应的蠕动泵上。 2.把搅拌马达置于搅抖联动装置上。 3.把光标调到“Temperature”档,设定一个合适的温度。 4.校正溶氧电极的满刻度。 1)利用光标将搅拌速度调至最大转速，一般为800 r/min,把通气量调节到1.0 L Air/L medium/min(1VVM)。 2)调到calibration界面，光标调至溶氧处，“span”档,设定读数为100，反复调节几次，直至稳定至100，转至menu界面。 5.其他参数设定。把光标调到Agit档，设定最小值为200 r/min。把光标调到DO档,设定参数为合适的值, 调整为与溶氧偶联检测。把光标调到Agit档，设定最大值为800 r/min;把光标调到pH档,设定参数为7.0，调整为自动检测;接上酸(碱)瓶，并打开自动检测系统。 6.接种：发酵罐的接种就是将蘸满乙醇的棉花球缠在接种口外套上, 点燃火焰以前将接种口的盖子旋松。然后点燃发酵罐上的棉花球, 取掉盖子, 立即在火焰中加入各组分培养基和种子液。最后将盖子浸泡在乙醇中, 接种后, 用摄子将盖子准确放回原位, 旋紧。 7.打开记录实验过程的专用软件。 8.发酵过程中，每隔两小时记录溶氧、转速、测定OD600，取样品5 mL储存进行各种分析检测。 认真的对照上面的步奏进行，发酵缸的操作就顺利完成了。 二、发酵罐的清洗的注意事项 发酵罐的清洗是非常重要的，但是很多人不太会，不但没有清洗干净，反而可能导致更恶劣的后果。

2019年度验证计划

2018年度验证计划 编号：VMP-001-2018 **************有限公司

目录

1.概述............................................................................................ 错误!未定义书签。 确认/验证方针..................................................................... 错误!未定义书签。 指导原则 .............................................................................. 错误!未定义书签。 参考文件 .............................................................................. 错误!未定义书签。 2.目的............................................................................................ 错误!未定义书签。 3.组织机构及职责........................................................................ 错误!未定义书签。 验证组织机构....................................................................... 错误!未定义书签。 验证职责 .............................................................................. 错误!未定义书签。 4.简介............................................................................................ 错误!未定义书签。 厂房、设施和设备简介 ....................................................... 错误!未定义书签。 工艺简介 .............................................................................. 错误!未定义书签。 品种目录 .............................................................................. 错误!未定义书签。 5.风险评估.................................................................................... 错误!未定义书签。 6.验证计划.................................................................................... 错误!未定义书签。 1.概述 确认/验证方针 为了确保影响产品质量的关键要素，包括厂房设施、生产设备、生产工艺、分析方法等符合GMP规定的要求，保证患者的用药安全。因此，本公司特制订如下情况需进行验证： 所有新的关键方法、规程、工艺及新的关键系统、设备在投入使用前应经

世界发酵罐

德国贝朗发酵罐 德国贝朗（Biostat B）为结构紧凑、罐体可高压灭菌、有数字检测和控制单元的台式发酵罐、基本设置有一般发酵过程所必需的所有探头和附件，其罐体工作体积分别为2立升、5立升或10立升，并有2立升和5立升气升式罐体可选择。 适用于科研和生产。它的主机部分和数字控制单元集于一箱体，以缩小占用的试验台操作面。标准化数字控制单元的控制参数包括温度、搅拌转速、PH、溶氧、泡沫和液面水平。Biostat B还内设可编程序蠕动泵四台、图线记录仪六通道)联接系统、串行(RS232)打印端面和串行主计算机联接系统。若用于细胞培养，Biostat B可提供低剪切桨式搅拌器，旋转滤器(Spinfiler)和无气泡通气系统，以及中空纤维培养系统(强化元件)。 Biostat B随时可联接上可供选择的各种气体混和系统。体积尺寸(长×高×宽mm)：主机箱365×536×450，搅拌驱动装置(含支架)和罐体B2305×580×270/B5355×685×330/B10425×930×390。 美国NBS发酵罐 作为国际上著名的生物反应器生产厂家，NEW BRUNSWICK SCIENTIFIC CO., INC.是唯一能够向客户提供全面的微生物培养、植物细胞培养和动物细胞培养技术支持的公司，可向广大用户提供从实验室到中试和生产用的微生物、动物细胞、植物细胞培养的个系列发酵罐系统。公司本部拥有自己独立的细胞培养实验室和微生物发酵实验室，同时可向客户提供设备使用技术和培养技术的服务。 BioFlo 110型：是一种模块化的、组合式的高效微生物/细胞反应器，一台主控制器可以控制最多4套反应罐体同时工作，并可按实际需要提供微生物、动物细胞、植物细胞培养。罐体总体积范围：1.3L、3L、7.5L、14L、 BioFlo 310型：配置完善的标准型微生物/细胞反应器，可配备微生物反应罐体或细胞反应罐体，其控制系统相应的内置微生物培养和细胞培养二套不同的控制软件，合理的搅拌桨和罐体形状设计使得系统的传氧速率在350mMO2/L/Hr以上。对植物细胞培养，可配备相应的光照系统。罐体总体积范围：2.2L、5L、7.5L、14L BioFlo 410型：可在位灭菌微生物/细胞反应器，自带蒸汽发生装置，磁力驱动搅拌，不易染菌，升温/降温快速，适用于温度诱导型培养，大型彩色触摸控制屏，可显示各数据、及时值及趋势，并能模拟放大结果。罐体总体积范围：7L、14L、19.5L BioFlo 5000型：移动式中试微生物/细胞反应器，采用开放式框架结构，管道布局合理，维修简便，设计符合GMP标准。罐体总体积范围：40L、80L、120L BioFlo Pro型：工业用微生物/细胞反应器，是为满足工业生产要求而设计，符合GMP标准，结构简单合理，控制稳 定可靠，数据采集方便，PLC控制方式，扩展性强，其所有控制元件均采用工业通用配件，采购容易，更换维修方便，并可按照用户的使用要求定制。罐体总体积范围： 75L、150L、300L、500L、1000L、1500L 瑞士比欧发酵罐

辐照灭菌确认方案

辐照灭菌确认方案 Document number：WTWYT-WYWY-BTGTT-YTTYU-2018GT

#####有限公司 研发部 # # # 辐 照 灭 菌 确 认 方 案 验证方案审批表一、验证方案拟订表 二、验证方案审核

三、验证方案批准 批准人（签名）：批准日期：年月日方案执行日期：年月日 四、验证执行小组成员 目录 1.主要内容和适用范围 2.辐照剂量测定 2.1原理 2.2选择SAL和获得产品样品 2.3测定初始污染菌 2.3.1初始污染菌的计算 2.3.2初始污染菌的测定 2.3.3校正系数的测定 2.3.4产品释出物的检验 2.4建立验证剂量 2.5完成验证剂量实验 2.6建立灭菌剂量

3.辐照灭菌加工确认 4.验证总结报告书 ####辐照灭菌确认方案 1．主要内容和适用范围 本文对于###的灭菌确认过程做了详细描述，确认的内容包括辐照剂量的设定及辐照加工确认。本方案制定的目的在于证实产品辐照符合ISO11137-2006的要求，灭菌后的产品能达到10-6的无菌保证水平。 2．辐照灭菌剂量设定 原理 验证的原理是基于ISO11137方法，即先对辐照前产品的初始污染菌进行测定，然后选择验证剂量。再用验证剂量对产品进行辐照，并测定存活微生物的样品件数，以此来确定最低灭菌剂量（SAL=10-6）。 选择SAL和获得产品样品 该产品的SAL选定为10-6，收集常规生产的标准包装产品，于灭菌前对三个批号进行随机抽样，每批至少抽取10个样品，其中取样比例（SIP）为1。 测定初始污染菌 测定至少30个样品单元的每件样品的初始污染菌并计算， a)三批中的每一批的平均的单元产品初始污染菌（批平均），和 b)所有的单元产品平均初始污染菌（总平均初始污染菌）。 ISO11137-2006或GB/T18280-2007中，测定至少30个样品单元的每件样品的初始微污染菌并计算：批平均值和总平均值。当初始污染菌较低（如小于10）；允许集中检测单独一批中10个单元产品来确定批平均初始污染菌。 将三批产品的每批平均初始污染菌与总平均初始污染菌比较，确定是否有一批平均值是总平均值的两倍或两倍以上。 确定初始污染菌测定中是否提供了校正因子，建立测定校正因子的方法。 初始污染菌测定 测定依据：ISO11737-1：1995

发酵罐发酵设备GMP验收性能确认PQ文件

BIOSTATDL-50型发酵罐验证方案

目录 1、概述.......................................................................................................... 错误!未定义书签。 2、验证目的.................................................................................................. 错误!未定义书签。 3、验证范围 (3) 4、验证合格标准 (5) 5、验证人员及职责 (6) 6、验证时间安排 (6) 7、验证前准备 (6) 8、验证 (6) 9、偏差处理与变更 (6) 10、验证结果 (8) 11、验证结果分析 (8) 12、评价及建议 (8) 13、验证结论 (9) 14、再验证周期 (9) 15、相关文件 (9) 16、附件 (9)

1、概述 BIOSTATDL-50型发酵罐是德国B.Braun.Biotechinternational公司生产，是药品原液生产中的菌体发酵工序采用的发酵罐。介绍设备的构造说 本设备为微生物的生长和一系列生化反应提供最适环境的场所。通入无菌空气，保证纯种发酵，通过调节空气流量和压力可以保证发酵罐的正压环境和微生物对溶氧的要求，微生物最适生长环境可通过控制温度、酸碱度、搅拌转速，溶解氧等参数来实现。通过对微生物生长环境的控制，最终得到最大量的目的产物。本发酵罐用于车间菌体的发酵 设备的参数 2、验证目的 根据GMP要求，每年应对本设备进行验证，以证明本设备各项功能符合设计要求，各项性能指标能满足我公司产品的生产需求和产品质量要求。 此生物反应器是用于微生物扩大培养和目的产物表达的密封性设备，如果罐体内不在生产使用前消毒灭菌完全，非生产用微生物会在良好的营养条件下竞争目的工程菌的生长，从而影响正常工程菌的生长和目的蛋白的表达。在进行纯培养之前，其内容物即培养基必须保证无菌，因此在发酵罐投入使用前，对其灭菌效果进行验证。 3、验证范围

灭菌剂量设定验证方案

上海晟实医疗器械科技有限公司 灭菌剂量设定验证方案 2013年7月 编制：技术部审核：批准：日期：2013年7月日期：日期：

上海晟实医疗器械科技有限公司 灭菌剂量设定验证方案 一、灭菌剂量设定的目的 依据ISO11137-2:2006的VDmax25方法对我司的钴铬钼及钛合金材质的产品实施辐照灭菌过程，建立灭菌剂量，并验证灭菌剂量。 二、验证小组成员及设备的认可 1、验证小组成员权利及职责 2、相关设备的认可 所有相关设备的使用必须经过校准或检定。 三、验证实施方案 1、生物负载实验方法 生物负载数据采用经过回收率校正的平板计数结果。平板计数的方法采用《中华人民共和国药典》2010版的附录微生物限度检查法（详见文件《微生物限度检查法》。 2、建立灭菌剂量VDmax25的方法

依据ISO11137-2：2006中的条款9的VDmax25方法建立灭尽剂量，至少需要样品53件。取样方法是首先随机抽取连续3批常规生产的产品作为样品，每批13件，再从抽取的样品中的每批中取3件，3批共9件用于样品回收率实验；其余的30件样品做生物负载检测，得到的平均生物负载为最终用于确定验证剂量的结果。用最终生物负载结果查ISO11137-2：2006的表9，得相应的验证剂量VDmax（-1）法，用此次验证剂量辐照与以上3批抽样产品连续生产的10件样品，分别用经过验证的无菌试样方法进行无菌试验，观察实验结果，并记录阳性数。如果阳性数未超过1个，则25 KGy的灭菌剂量得到验证。 3、无菌试验 无菌试验应符合ISO11737-2:2006(《Sterilization of medical devices-Microbiological methods-Part2 Test of sterility performed in the validation of a sterilization process》)的要求，无菌试验所用的方法应经过验证试验的验证，具体实施按照文件《无菌检验》操作。 4、剂量设定实验结果判定 对用验证剂量辐照过的10 件产品做无菌实验，依照 ISO11137-2:2006 条款9.2.6 判断无菌实验是否被接受，无菌试验的阳性数量不大于1个，无菌实验成功，即：验证剂量被接受，证实25kGy 能够满足10-6 的无菌保证水平。当无菌实验的阳性结果高于1个，实

发酵罐验证方案

BIOSTATDL-50型发酵罐验证方案

目录 1、概述....................................................................................................... 错误！未定义书签。 2、验证目的............................................................................................... 错误！未定义书签。 3、验证范围 (3) 4、验证合格标准 (5) 5、验证人员及职责 (6) 6、验证时间安排 (6) 7、验证前准备 (6) 8、验证 (6) 9、偏差处理与变更 (6) 10、验证结果 (8) 11、验证结果分析 (8) 12、评价及建议 (8) 13、验证结论 (9) 14、再验证周期 (9) 15、相关文件 (9) 16、附件 (9)

1、概述 BIOSTATDL-50型发酵罐是德国B.Braun.Biotechinternational公司生产，是药品原液生产中的菌体发酵工序采用的发酵罐。介绍设备的构造说 本设备为微生物的生长和一系列生化反应提供最适环境的场所。通入无菌空气，保证纯种发酵，通过调节空气流量和压力可以保证发酵罐的正压环境和微生物对溶氧的要求，微生物最适生长环境可通过控制温度、酸碱度、搅拌转速，溶解氧等参数来实现。通过对微生物生长环境的控制，最终得到最大量的目的产物。本发酵罐用于车间菌体的发酵 设备的参数 2、验证目的 根据GMP要求，每年应对本设备进行验证，以证明本设备各项功能符合设计要求，各项性能指标能满足我公司产品的生产需求和产品质量要求。 此生物反应器是用于微生物扩大培养和目的产物表达的密封性设备，如果罐体内不在生产使用前消毒灭菌完全，非生产用微生物会在良好的营养条件下竞争目的工程菌的生长，从而影响正常工程菌的生长和目的蛋白的表达。在进行纯培养之前，其内容物即培养基必须保证无菌，因此在发酵罐投入使用前，对其灭菌效果进行验证。 3、验证范围

灭菌确认方案

环氧乙烷灭菌器确认方案

1、验证目的 产品介绍 本次验证的目的为： （1）环氧乙烷灭菌器及灭菌工艺验证，确认目前的灭菌设备及灭菌工艺符合产品的要求。 （2）对产品灭菌工艺进行周期验证确认，确认灭菌常规控制相关文件。 （3）环氧乙烷灭菌的半周期验证 （4）环氧乙烷灭菌后的环氧乙烷残留量验证。 2、验证依据 GB 18279-2000医疗器械环氧乙烷灭菌确认和常规控制 GB 15980-1995一次性使用医疗用品卫生标准 GB 18282-2000医疗保健产品灭菌化学指示物 GB 18281.1-2000环氧乙烷灭菌用生物指示物 GB/T 19633-2005最终灭菌医疗器械的包装 GB/T 14233.1-2008医用输液、输血、注射器具检验方法第1部分：化学分析方法 GB/T 14233.2-2005医用输液、输血、注射器具检验方法第2部分：生物学试验方法 3、验证小组及其职责 3．1验证小组 组员： 3.2 职责 3.2.1 验证小组 （1）负责验证方案的审批。 （2）负责验证的协调工作，以确保本验证方案规定项目的顺利实施。 （3）负责验证数据及结果的审核。 （4）负责验证报告的审批。 （5）负责发放验证证书。 （6）负责再验证周期的确认。 3.2.2 开发部

（1）负责拟订验证方案，起草验证报告，报验证领导小组。 （2）负责根据验证实验结果，修订相应操作规程。 （3）负责拟订再验证周期 3.2.3质控部 （1）负责验证所需的试剂、试液等的准备。 （2）负责验证所需仪器、仪表、量具的校正。 （3）负责取样及对样品的检验。 （4）负责搜集各项验证、试验记录，并对试验结果进行分析。 3.2.4生产部 （1）负责验证所需的标准品、样品等的准备。 （2）负责组织对验证前验证实施参与人员的培训。 （3）负责验证过程中的清洗操作。 4 验证内容 4.1 验证前的准备 4.1.1 检查确认验证所需文件是否完整且为现行版本。 所需验证的文件：环氧乙烷灭菌工艺、超声波清洗声机操作规程 验证方式：核查文件，完成后填写相应记录。 验证人员： 4.1.2检查确认验证所需仪器仪表是否经校验合格并在效期内。 所需仪器仪表：天平、压力传感器、温湿度传感器、压力表。 验证方式：核查仪器仪表校证记录，完成后填写相应记录。 验证人员： 4.1.3环氧乙烷灭菌验证人员资格验证 所需验证的文件：环氧乙烷灭菌操作人员培训记录、环氧乙烷灭菌操作人员上岗证。 验证方式：核查文件，完成后填写相应记录。 验证人员：

辐照灭菌验证确认方案说明

辐照灭菌 验证确认方案 编号： . 版次： 起草人：日期： . 审核人：日期： . 批准人：日期： .

目录 1概述 2目的 3验证人员 4验证进度 5验证方案内容 5.1资料档案确认 5.2设备检查确认 5.2.1安装确认与运行确认 5.2.2辐照单位相关资质证件（附件一） 5.2.3辐照单位相关信息、银行账号（附件二） 5.3性能确认 5.3.1目的 5.3.2内包装材料材质确认 5.3.3灭菌剂量确认（附件三） 5.3.4 产品装载模式的确认 5.3.5产品剂量分布图（附件四） 5.3.6检测项目及标准 5.4灭菌效果测试 5.5异常情况处理程序 5.6第三方检验、检验报告（附件五） 6再验证周期 7验证总结及方案批准 7.1验证总结 7.2验证结果审核 7.3方案批准 8 GB 18280 – 2000 idt ISO11137:1995《医疗保健产品灭菌确认和常规控制要求辐照灭菌》（附件六） 9老化试验方案、试验记录（附件七） 10再验证记录(附件八)

1概述 辐照灭菌与其他主要灭菌方式对比所存在的优点 常见术语和定义 1）钴 60：钴59的同位素,半衰期约为5.27年。 2）半衰期：放射性原子核的数量因衰变而减少为初始值一半所需的时间。 3）放射性活度：一定量的放射性核素在一定时间间隔内发生的核衰变数除以该时间间隔叫做放射性活度。在国际单位制中，放射性活度的单位为贝可勒尔，简称贝可，符号为Bq，1Bq 等于放射性核素在１秒钟内有１个原子核发生衰变，即1Bq=１次衰变/秒。早期的放射性活

度单位叫居里（Ci），1Ci=3.7×1010Bq。 4）吸收剂量：传输到物质单位质量上的辐射能的量。衡量吸收剂量的单位是Gray(戈瑞)，1Gray就是1千克的物质吸收1焦耳的能量。以前衡量吸收剂量使用的单位是rad (拉德) ，取名于"radiation absorbed dose”。1戈瑞= 100 拉德。 5）无菌保证水平 (SAL) ：灭菌后单元产品上存在微生物的概率。例如SAL为10-6 的含义是100万个产品里有一个产品被污染。 6）D-10值：将同源微生物总数杀灭90%所需的辐照剂量 (kGy)。 7）不均匀度：同批产品在辐照容器中的最大吸收剂量与最小吸收剂量之比值，即U=Dmax/Dmin，亦称剂量均匀性。 8）最低辐照吸收剂量：在辐照容器内，传输到最低剂量位置上物质的单位质量上的辐射能量。9）最高辐照吸收剂量：在辐照容器内，传输到最高剂量位置上物质的单位质量上的辐射能量。10）生物负载：一件产品上活微生物的总数。 11）剂量计：对辐射有可重复出现、可测量的响应的器件或系统，可用于测量给定材料中的吸收剂量。 12）微生物限度标准：由相关法规和或生产工艺标准规定的具体量化标准。合格产品的微生物负载，在保质期限内，不得高于微生物限度标准。 13）初始微生物指标：进行灭菌（杀菌）之前，产品的微生物负载。 14）照否标签：一种粘贴式标签，接受足够的伽玛射线时会改变颜色，从而将已经辐照的产品与未辐照产品区分开。照否标签分为两种量程（灵敏度）：4～10kGy，辐照后颜色由绿色变为紫色；＞10kGy，辐照后颜色由黄色变为红色。 15）消毒：杀灭或消除产品上的病原微生物，使之达到无害化的处理过程。 16）灭菌：经确认使产品无活微生物的加工。（在灭菌加工中，微生物的死亡规律用指数函数表示。因此，任何单件产品上微生物的存在可以用概率表示。概率可以减少到非常低的数目，

化工单位发酵罐制作安装施工方案

化工单位发酵罐制作安 装施工方案 Standardization of sany group #QS8QHH-HHGX8Q8-GNHHJ8-HHMHGN#

一、编制说明： 1．1 本工程为宿州中粮生物化学有限公司酒精装置优化提升设备、管道及钢结构安装工程，2台1200m3发酵罐现场制作安装，为确保工程安全、优质、高效，特编制此方案。 1．2 此方案中对施工准备、施工程序、施工方法和技术要求、质量标准、施工质量、安全保证措施、冬雨季施工措施等均作了详细地说明。 二、编制依据： 2．1 《钢制焊接常压容器》JG/T4735-1997； 2．2 《工业设备、管道焊接工程施工验收规范》GB50235-97； 2．3 宿州中粮生物化学有限公司发酵罐制作施工图； 2．4 焊接结构技术要求（HG20583-1998）； 2．5 焊缝射线探伤标准（JB4735-97）。 2．6《石油化工立式圆筒形钢制焊接储罐设计规范》（SH3046-92）。 2．7《立式圆筒形钢制焊接贮罐施工及验收规范》（GB50128-2005）。 2．8《钢制压力容器焊接规程》（JB/4709-2000）。 三、工程概况： 3．12台1200m3发酵罐是酒精装置优化提升设备、管道及钢结构安装工程中的重要设备，为立式圆柱体上封头下锥底裙座设备。它主要由裙座、下锥底、筒体、上封头、接管等附件组成，发酵罐本体材料为Q235B。 3．2 设备实物工作量如下表：

四、施工准备： 4．1 技术准备 4．1．1 组织有关人员对图纸进行会审，及时发现并解决图纸中存在的问题。 4．1．2 施工方案已经审批，并对施工人员进行技术交底和技术培训，明确施工方法/施工程序及质量标准要求。 4．1．3 审查原材料质量证明书，组织材料验收、清点，现场的原材料应对其规格、数量、质量进行检查。 4．1．4 确认焊工资格，凡参加发酵罐制作施工的焊工，必须持劳动部门颁发的且钢材组别、焊接方法和焊接位置与实际工程相一致的焊接资格证，否则不得上岗。 4．2 施工现场准备 4．2．1 施工用的水、电、气可满足需要，并能保证连续施工。 4．2．2 设备基础及预埋件已完成，施工区域空间满足设备预制条件。 4．2．3 施工所需材料供应到75%以上。 4．2．4 施工所需工、机具已齐全，并处于完好状态。 五、施工方法的选择： 采用群桅杆倒链多点倒装施工法，即在发酵罐基础环板φ=直径单台对称均布12根高3m的金属桅杆（φ219×6的无缝钢管，材料利用甲方材料制作）焊接在发酵罐基础环板上，桅杆两侧焊接拉撑（∠75×75×10）并焊在发酵罐基础环板上，每根桅杆的顶部配一个10T的倒链作为起吊工具，每次起吊的高度稍高于带板宽度。罐壁吊点设在距壁板上口1/3位置处。上部带板首先组装，同时将连接其上的角钢圈装好。吊时，由12人同时操

环氧乙烷灭菌工艺验证实施指南

目录 第一章验证的目的和意义 (1) 一、验证的目的 (1) 二、验证的理由 (2) 三、验证的分类 (3) 四、验证的范围 (4) 五、验证的程序 (5) 六、验证的组织机构 (5) 七、验证方案的制定 (6) 八、验证的实施 (7) 九、验证结果的审批 (8) 第二章环氧乙烷灭菌验证的基本概念 (9) 一、生物 (9) 二、细菌 (9) 三、产品初始污染菌要求 (9) 四、消毒 (11) 五、灭菌 (11) 六、生物指示物 (11) 七、化学指示物 (12) 八、环氧乙烷 (12) 九、环氧乙烷灭菌机理 (13) 十、环氧乙烷残留量 (14) 十一、灭菌周期 (14) 十二、环氧乙烷灭菌验证 (14) 十三、D 值 (14) 十四、参数放行 (14) 十五、产品放行 (14) 十六、半周期法 (14) 第三章环氧乙烷灭菌验证的内容、方法、步骤 (16) 一、验证前准备......... (16) 二、安装验证 (18) 三、运行验证 (19) 四、物理性能验证 (20) 五、微生物性能验证 (21) 附录：验证相关表单目录 (32)

第一章验证的目的和意义 一、验证的目的 每个生产企业在为生存和市场竞争的需要中，都应考虑采用以低的成本费用生产出满足规定要求，并有一定质量水准的产品的方法。验证是通过检查和提供客观证据表明规定要求已经满足的认可（GB/T6583-1994 idt ISO8402:1994），是企业优化生产工艺的一个好的途径。验证的目的就是为生产过程制订必要的参数，使其处于受控状态，以达到预期的要求。 传统的质量管理是建立在质量检验基础上的，而现代的质量管理是建立在质量保证基础上的。批量生产的产品通过抽样检验是不能保证每件产品全部达到技术要求的，由此，质量保证的理念开始逐步引起人们的重视。“把质量建立在生产过程中”，以及提前对原材料、过程中产品进行控制，这些都喻示人们首先要对原材料和生产工艺进行验证，以确保最终产品的质量。 目前，世界上大多数国家都在医疗器械行业中实行质量保证体系规范，在ISO9001或ISO13485标准的要素中都提出了相关的基本要求。对无菌医疗器械生产企业来说，在硬件方面，涉及到环境、厂房、设备、人员等内容，在软件方面涉及到工艺、卫生、检验、验证、管理等内容。其目的是为了有效控制生产过程，保证产品质量，满足顾客要求。 当一个新建或改建无菌医疗器械洁净厂房完工后，或完成一项新产品的设计开发后，或编制一项新的工艺方案后，或确定选用新的材料后，下一步工作就是需要进行验证和确认： 1.厂房是否达到了设计要求； 2.设备的安装布局是否满足无菌医疗器械的生产； 3.研制开发的新产品是否满足法律法规和预期用途，是否进行了风险分析并将风险降低到可接受的范围； 4.编制的工艺能否保证产品质量； 5.选用的新材料是否对环境或人体产生新的危害。 对所有医疗器械生产企业来说，验证的主要目的可概括为： 1.为产品质量提供了可靠的保证； 2.为降低产品风险，提高安全性，满足预期用途提供了充分的证据； 3.为减少生产过程中的不合格品，提高经济效益打下了坚实的基础； 4.为减少顾客投诉，创立企业品牌，扩大市场占有率提供了可行的机会； 5.为符合法律法规要求，接受政府部门的监督检查，接受第二方或第三方质量认证提供了可证实性的文件资料。

发酵罐灭菌验证方案(英)

The Northeast Biomanufacturing Center & Collaborative Validation Protocol-Fermentation Vessel Sterilization Subject: Validation Protocol for sterilization of BioFlow 110 3 Liter Bioreactor. Document #: VP001 Revison:0.0 Effective Date: January 1, 2006 Page 1 of 6 Prepared By: T. Burkett_____________________ Name / Signature / Date Reviewed By:______________________ Name / Signature / Date Approved By:______________________ Name / Signature / Date 1. Scope: This document covers validation of the fermentation vessel sterilization process as described in SOP 004 –Preparation of BioFlow 110 3 liter fermentation vessel. Validation of the bioreactor sterilization procedure is conducted in order to provide documented evidence that the process described in SOP P004 will effectively sterilize growth media contained in the New Brunswick Scientific BioFlow 110 3 liter fermentation vessel and kill any microorganisms inadvertently introduced into the fermentation vessel during the preparation of media and the vessel. 2. Definitions: 2.1 NBS – New Brunswick Scientific 2.2 CFU -Colony Forming Units 2.3 CFU/ml – Clolony Forming Units per milliliter 2.3 rGFP – Recombinant Green Fluorescent Protein 2.4 D.I. H2O – Deionized water 2.5LB – Luria Bertani media 2.6 ml(s) – Milliliter(s) (10-3 Liters) 2.7 O.D.600– Optical Density at 600 nanometers 2.8 μl – microliter (10-6 Liters ) 2.9 Bioreactor / fermentation vessel are used interchangeably through-out this protocol. _________________________________End of page 1______________________________ The Northeast Biomanufacturing Center & Collaborative Validation Plan-Fermentation Vessel Sterilization Subject: Validation Protocol for sterilization of BioFlow 110 3 Liter Bioreactor. Document #: VP001 Revison:0.0 Effective Date: January 1, 2006 Page 2 of 6 3. References: