Calcium phosphate nanoparticles are associated with inorganic
Calcium phosphate nanoparticles are associated with inorganic phosphate-induced osteogenic differentiation of rat bone marrow stromal
cells
Xiao-rong Chen 1,Jing Bai 1,Shuai-jun Yuan,Cai-xia Yu,Jian Huang ?,Tian-lan Zhang,Kui Wang
Department of Chemical Biology,School of Pharmaceutical Sciences,Peking University Health Science Center,38Xueyuan Road,Beijing 100191,PR China
a r t i c l e i n f o Article history:
Received 12January 2015
Received in revised form 15June 2015Accepted 19June 2015
Available online 22June 2015Keywords:
Inorganic phosphate
Calcium phosphate nanoparticles Physicochemical properties Bone marrow stromal cells Osteogenic differentiation
a b s t r a c t
In the present study,we demonstrated that calcium phosphate (CaP)nanoparticles formed in cell culture media were implicated in the process of high inorganic phosphate (Pi)mediated osteogenic differentia-tion of rat bone marrow stromal cells (BMSCs).Exposure of BMSCs in vitro to high Pi-containing media reduced alkaline phosphatase (ALP)activity and the expressions of osteoblast-speci?c genes.The sedi-ments of CaP nanoparticles were observed at the cell surface and some of them were concomitantly found inside cells at high Pi concentration.In addition,treatment the cells with pyrophosphate (PPi),an inhibitor of calcium crystal formation,abrogated the ALP activity induced by high Pi,suggesting the contribution of CaP nanoparticles.Moreover,for isolated CaP nanoparticles,there was a trend of conver-sion from amorphous calcium phosphate to hydroxyapatite with elevated Pi.The particle size of CaP increased and the surface morphology changed from spherical to irregular due to increased concentra-tions of serum proteins incorporated into CaP nanoparticles.The study demonstrated that those physic-ochemical properties of CaP nanoparticles played an important role in modulating BMSCs differentiation.Furthermore,the addition of Pi in the osteogenic media resulted in a dose-dependent increase in matrix mineralization,while treatment of the cells with PPi suppressed Pi-induced calcium deposition.The ?nd-ings indicated that calcium deposition in the matrix partly came from the spontaneous precipitation of CaP nanoparticles.
ó2015Elsevier Ireland Ltd.All rights reserved.
1.Introduction
Inorganic phosphate (Pi)plays an essential role in diverse bio-logical processes,including energy metabolism,cell signaling,nucleic acid synthesis,membrane function and bone mineraliza-tion [1].As the second most abundant mineral ion found in the human body,Pi is not only a prerequisite for normal hydroxyap-atite formation,it is also integral to osteoblast function during the differentiation process in vitro [2].Increasing evidences indi-cate that adequate control of Pi homeostasis is crucial for bone mineralization [3,4].A number of disease states,such as end-stage renal disease,hyperparathyroidism,multiple myeloma,oncogenic osteomalacia,cause changes in serum and cellular phos-phate levels,which result in bone impairment and in?uence the aging process and lifespan [5,6].Despite the considerable progress that have been made to understand the responses to the elevated Pi in skeletal biology,but the mechanisms governing this need for further investigation.
It is often stated that the ionic product of calcium and phos-phate in many biological ?uids including blood has always exceeded the solubility product for hydroxyapatite or other cal-cium phosphates,but precipitates do not take place spontaneously under physiologic conditions.Several in vitro and in vivo studies proved the existence of different types of calci?cation inhibitor in serum,which prevent the formation and buildup of insoluble minerals [7,8].Given these considerations,serum must still be regarded as a ‘metastable’calcium and Pi solution,and an imbal-ance between calci?cation inhibitors and promoters could be a key mechanism toward ongoing unwanted precipitation [9].Recent in vivo and in vitro investigations support the formation of mineral-organic nanoparticles in pathologic situations like chronic kidney disease [10,11].It is possible that calcium phos-phate (CaP)particles will generate once the concentration of the ions exceed the solubility product of the relevant phase in the extracellular milieu,and that these particles then in?uence cell function.
https://www.wendangku.net/doc/547527291.html,/10.1016/j.cbi.2015.06.027
0009-2797/ó2015Elsevier Ireland Ltd.All rights reserved.
?Corresponding author.
E-mail address:jhuang@https://www.wendangku.net/doc/547527291.html, (J.Huang).1
Contributed equally to this article.
Bone marrow stromal cells(BMSCs)are the most common source of osteoprogenitor cells and play an essential role in bone formation and remodeling.Therefore,investigating the physico-chemical properties of CaP nanoparticles and their possible inter-actions with BMSCs will likely broaden our understanding of high Pi-related bone impairment in vivo.In this study,the concen-tration of Pi was based on that used in the literature[5,12,13].Our results indicated that CaP nanoparticles formed in culture media were associated with the process of high Pi mediated osteogenic differentiation BMSCs and the physicochemical properties of CaP
nanoparticles played an important role in modulating the biologi-cal response of BMSCs.
2.Materials and methods
2.1.BMSCs cell isolation and culturing
BMSCs were isolated and
reported by Barbash[14].All
bone marrow collection were
of Peking University.Bone marrow
and femurs with DMEM.The
trifuged,and the supernatant was
tains0.916mM of Pi,supplemented
(FBS)and1%
three and seven were used for all
For the induction of osteogenic
tured in differentiation media
acid,and100nM dexamethasone.
phosphate buffer(1M Na2HPO4
NaH2PO4)were added into the
tions of2.0,4.0,6.0,8.0and10.0
imental groups involving the
osteogenic media containing
added.On each media change,fresh
fresh media.
2.2.Differentiation of BMSCs
Alkaline phosphatase(ALP)
of osteoblastic development of the
differentiation media for up to7
times with PBS,lysed with1%
trifuged.Supernatants were
were normalized to protein content
protein assay.
BMSCs in24-well plates were
for14and21days,respectively.
assessed by a modi?ed Wada
mineralization was detected by
matrix was observed and recorded
microscope.
2.3.Real-time quantitative
Total RNA was extracted using
described by the manufacturer’s
extracted RNA was determined
tometer.300ng total RNA was
cDNA by PrimeScript?RT
core-binding factor a1(Runx2),
tin(OPN),collagen I alpha I
Table1.qRT-PCR analysis was
Sequence Detection System
Prime-Script?PCR(TaKaRa).Each three biological replicates.Each gene expression level was normal-ized to18S mRNA content.Relative quanti?cation was calculated with the2àDD Ct method[16].
Table1
Primers for real time PCR analysis.
Target Forward Reverse
COL1A1CCAGCTGACCTTCCTGCGCC CGGTGTGACTCGTGCAGCCA
BSP CCGGCCACGCTACTTTCTT TGGACTGGAAACCGTTTCAGA OPN GACTGGCAGTGGTTTGCTTTTGCC TGGGTCAGGCTTCAGCCAAGTG Runx2AGATGGGACTGTGGTTACCG GGACCGTCCACTGTCACTTT
18S GACCGGCGCAAGACGAACCA GCATCGCCAGTCGGCATCGT
1.Effect of Pi on BMSCs differentiation.(A)ALP activity of rat BMSCs.Data
presented as the quantities of the total ALP activity normalized to total protein;(B)The mRNA expression in8mM Pi treated BMSCs cultures determined by Real-time q-PCR analyses.Values are means±SD.*P<0.05versus corresponding control group.
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embedded in Spur resin by slow in?ltration in baths of graded resin series in ethanol(1:2,1:1,2:1,and twice with pure resin) and polymerization at70°C overnight.Finally,the samples were cut into ultrathin pieces with a microtome and stained with uranyl acetate on the grid.Sections were then observed with a Hitachi S-5200?eld emission TEM.
Energy-dispersive X-ray spectroscopy analysis(EDX)was per-formed using a Hitachi S-5200?eld emission SEM equipped with EDX spectroscopy(ISIS,Link Analytical,Oxford Instruments).
2.5.Preparation and characterization of calcium phosphate nanoparticles
All experiments were done in DMEM supplemented with5% FBS and1%penicillin/streptomycin and treated with various con-centrations of Pi.The samples were incubated at37°C and5% CO2for3days,followed by centrifugation16,000g for60min at 4°C.The supernatant was decanted,and the precipitate was washed with neutral pH,0.01M Tris buffer,and lyophilized.The residue was assayed as described below.
The particle-size of CaP nanoparticles in culture media was in100%ethanol followed by sonication for10min.Then some microliters of samples were taken out with a pipet and depositing it onto a silicon substrate.The?uid was sucked up with a?lter paper and the samples were air-dried.
The mineral-associated proteins were extracted twice with 0.50M EDTA at4°C for a total of48h.The protein content was determined by the bicinchoninic acid protein assay kit(Pierce) with bovine serum albumin as a standard.Calcium concentrations were measured from mineral-dissolving,hydrochloric acid extracts of calcium phosphate residue using a calcium kit.The protein expression was normalized to total calcium content in the residue.
2.6.Statistics
Data are expressed as mean±standard deviation.Statistical sig-ni?cance was estimated by the Student’s t-test and a paired t-test. Signi?cance was de?ned as P-value of P<0.05.
3.Results
3.1.Cell differentiation
on matrix mineralization.(A)Quantitative calcium deposition in the matrix.Data are presented as calcium normalized to total protein.
SD.*P<0.05versus the corresponding control group.(B)Alizarin red staining of BMSCs.
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cultures,as shown in Fig.2A.Elevated Pi promoted calcium deposition on day14and21.By means of Alizarin Red S staining, intensity of the staining increased in a dose-dependent manner (Fig.2B).
3.2.Deposition and cellular uptake of CaP nanoparticles concentration at4mM.However,no CaP-like particles were observed in cells incubated in vehicle culture medium alone (Fig.3B).
3.3.PPi prevention of ALP activity and calcium deposition
BMSCs in the presence of4mM and8mM Pi-containing culture media.(A)Representative SEM of a single BMSC after incubation
fetal bovine serum for3days at37°C,respectively.Scale bar10l m.(B)Representative TEM of BMSCs after incubation without
bovine serum for3days at37°C,respectively.Arrows demonstrate nanoparticle positions.Scale bar0.5l m.(C)Representative that they consist of mostly calcium,phosphorous,and oxygen.
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were nanometer range in diameter.The average diameters of the particles are progressively increased from 86.5±2.8,161.0±1.6,162.0±0.1to 178.5±3.7nm with elevated Pi concentrations from 4,6,8to 10mM,respectively.
XRD pattern showed that only a broad peak at around 2h =20–35°could be observed for CaP nanoparticles formed at 4mM Pi concentration,which hinted at the presence of amorphous calcium phosphate (ACP).However,the peak positions (2h )around 26.1°and 32.1°appeared with elevated Pi,which correspond to the (002)and the merged (211),(300),(202)re?ections of hydroxya-patite (HAP),respectively (Fig.5A).
The SAXS patterns collected at various Pi concentrations pre-sented as log (J )versus log (q )in Fig.5B,where J and q are the scat-tering intensity and the scattering vector,respectively.Each curve in Fig.5B showed a linear region in the range of q =0.2–0.6nm àhttps://www.wendangku.net/doc/547527291.html,ing the inclination of the lines,we calculated fractal dimension (df).Fig.5C showed that df increased with ele-vated Pi.
The surface morphology of nanoparticles observed by SEM showed,at low Pi concentration,that most of the particles isolated after the experiments were smooth spherical particles,while at high Pi concentration most of the particles were interconnected by proteinacousic ?bers,and they exhibit irregular surfaces (Fig.5D).
Biochemical analysis showed the presence of serum proteins coprecipitated with CaP nanoparticles,and indicated that the relative amount of those proteins progressively increased with ele-vated Pi levels (Fig.5E).4.Discussion
Elevation in serum Pi is associated with an increased calcium–phosphorous product and an attendant risk of CaP nanoparticles generation [9,10].Employing XRD,SAXS,SEM and particle-size analyses,we demonstrated that high Pi had a signi?cant in?uence on crystallinity,particle size,and surface morphology of CaP nanoparticles,and the resulting nanoparticles played an important role in modulating BMSCs osteogenic differentiation.
In a ?rst set of experiments,we showed that exposure of BMSCs to high Pi concentration reduced ALP activity and the expression of osteoblast-speci?c genes of Runx2,BSP,OPN,and COL1A1.This ?nding was previously observed by others in osteoblasts [12,17,18],chondrocytes [19]and smooth muscle cells [20].Multiple studies have illustrated the important role of calcium in mediating Pi effects on osteoblast and chondrocyte differentiation [21,22].Therefore,it is necessary to determine whether CaP crys-tals are indeed implicated in this process.This hypothesis was sup-ported by SEM and TEM results:the sediments of CaP nanoparticles were observed on the surface of BMSCs and some nanoparticles concomitantly entered into cells (Fig.3).In addition,treatment of the cells with PPi,an inhibitor of CaP precipitates,abrogated Pi-dependent ALP decreases.These data suggested that CaP nanoparticles played a pivotal role in mediating the biological response of BMSCs to elevated Pi in culture media.
Previous in vitro experiments provided evidence that the degree of crystallinity of calcium phosphates in?uenced osteoblas-tic differentiation.Higher crystallinity has been shown to be unfa-vorable for cell differentiation [23–25].In this study,XRD results illustrated that there was a trend of conversion from the amor-phous calcium phosphate to hydroxyapatite with elevated Pi.df data from SAXS has always been interpreted as being indicative of the compactness of the inner structure of the particle.Some lit-eratures also demonstrated that df of ACP aggregates with a loose internal structure had a low value,while that of crystalline
calcium
Fig.4.Pi-induced BMSCs differentiation is inhibited by extracellular pyrophos-phate (PPi)in culture medium.(A)Dose–response effect of PPi on ALP activity of rat BMSCs.Cultured BMSCs were treated with medium containing 8mM Pi with increasing concentrations of PPi for 7days.Data are presented as the quantities the total ALP activity normalized to total protein;Values are mean ±SD;*P <0.05versus the corresponding control group,#P <0.05versus high Pi group (8mM Pi);(B)ALP activity of rat BMSCs with increasing concentrations of Pi and a constant PPi (10l M).Data are presented as the quantities of the total ALP activity normalized total protein;(C)Effect of 10l M PPi on Pi-induced matrix mineralization.Data are presented as calcium normalized to total protein.Values are mean ±SD;*P <0.05versus the corresponding control group.
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phosphate with a compact structure had a high value [26,27].This study showed that df increased with elevated Pi,suggesting a rel-ative increase in the degree of crystallinity in CaP nanoparticles,which corresponded with the aforementioned XRD data.Herein,the result implied that the crystallization of CaP nanoparticles,was partially responsible for the decreases in osteoblastic differen-tiation in high Pi situation.
Besides the crystallinity,the result further proposed that the particle size and the surface morphology of CaP nanoparticles also affect cell behavior.In the present experiments,the particle size of CaP nanoparticles formed in DMEM solutions are progressively increased with elevated Pi.TEM micrograph of BMSCs showed,for Pi concentration at 8mM,that the amount of CaP nanoparticles accumulated within cells was a little more than that for Pi concen-tration at 4mM.Recent studies suggested that small particles escaped more easily from endosomes of cells after internalization,while large particles aggregated within cells,thus bringing harm to the normal metabolism of cells [28,29].Similarly,the present study re?ected the fact that the decrease of the cell’s differentiation with elevated Pi was partly attributed to particle size of CaP nanoparti-cles.In addition,the surface morphology observed by SEM showed that most of the particles were roughness and irregular at high Pi concentration (Fig.5D).The signi?cant difference for surface mor-phology of nanoparticles could be mainly ascribed to the content of serum proteins coprecipitated with CaP nanoparticles,which pro-gressively increased with elevated Pi levels.As interacted
with
5.Physicochemical properties of CaP nanoparticles.(A)Representative synchrotron XRD patterns of CaP nanoparticles.(B)Representative SAXS pro?les of nanoparticles presented as log (J )versus log (q ).(C)Fractal dimension plotted against Pi concentration.(D)Representative SEM micrographs of CaP nanoparticles.Scale nm.(E)The contents of proteins coprecipitated with CaP nanoparticles.Data are presented as the quantities of the protein extracts normalized to the calcium mineral.Values are mean ±SD;*P <0.05versus Pi concentration at 4mM.
cells,it is reasonable to suggest that a roughness surface making them easier for attachment and uptake by BMSCs[30].
Matrix mineralization has always been assessed as an indicator of later stage of differentiation.Prolonged exposure to high Pi con-centration increased calcium deposition in a dose-dependent man-ner.The methodology employed to determine mineralization in BMSCs,alizarin red staining and calcium deposition measurement, may not distinguish between passive and cell-mediated active mineralization.In addition,mineralization is tightly regulated by several mineral-related proteins.Collagen provides the structural framework for mineral deposition,while BSP and OPN are the major non-collagenous proteins of the extracellular matrix and intimately associated with the mineral phase.In this study,high Pi treatment exhibited down-regulated the expression of those mineral-regulating genes.Further,calcium deposition data did not correlate well with ALP activity and meanwhile,high Pi induced calcium deposition was prevented by PPi,an inhibitor of calcium crystal formation.Our?ndings suggested that matrix min-eralization detected partly come from the spontaneous precipita-tion of CaP nanoparticles in response to elevated Pi in DMEM solutions.Similarly,Villa-Bellosta et al.also indicated hydroxyap-atite formation during vascular smooth muscle calci?cation under hyperphosphatemic conditions was a passive process that did not depend on any direct cellular activity[10].
In summary,here we demonstrated,for the?rst time that CaP nanoparticles formed in culture media were implicated in the pro-cess of high Pi-mediated decrease of osteoblastic differentiation of BMSCs.And the physicochemical properties of CaP nanoparticles played an important role in modulating the biological response of BMSCs.Moreover,matrix mineralization in high-Pi media might partly come from the spontaneous precipitation of CaP nanoparti-cles.This study will contribute to clarify the role of elevated serum Pi on bone impairs.
Con?ict of Interest
The authors report no con?icts of interest.
Transparency Document
The Transparency document associated with this article can be found in the online version.
Acknowledgments
This work was supported by National Natural Science Foundation of China for Young(Grant No.21101008)and the pro-vision of beam time by the Shanghai Synchrotron Radiation Facility at BL14B1and the Beijing Synchrotron Radiation Facility at4B9A. References
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X.-r.Chen et al./Chemico-Biological Interactions238(2015)111–117117
丙酸钙的制备[1]
化学与化学工程学院 设计实验报告 姓名文万强李银旭学号20113942 20113918 专业化学工程与工艺班级11级工艺2班 同组设计人员 实验课程名称有机化学实验 设计实验名称鸡蛋壳制备丙酸钙 实验日期2012-05-15 批阅日期 成绩教师签名 化学与化学工程学院
鸡蛋壳制备丙酸钙 摘要 本实验是一种探究利用鸡蛋壳制备丙酸钙简单的方法，随着人民生活水平的提高和食品工业的发展, 鸡蛋的消耗量大幅度增加，但是大量蛋壳却被废弃,因此如何利用这些废弃资源将其变废为宝就成为当今“绿色化学”的走向，而丙酸钙是近几年发展起来的一种新型食品加剂,其毒性远低于我国广泛应用的苯甲酸钠,被认为是食品的正常成分,也是人体内代谢的中间产物加之又较山梨酸钾便宜得多,故可在食品中较多地添加,可延长食品保鲜期,防止食物中毒。丙酸钙不仅对人体无毒、无副作用, 而且还有抑制产生黄曲霉素的作用, 其防腐作用良好, 可广泛用于面包、糕点等食品的防腐，在人的饮食结构中添加少量的丙酸钙可以减少肝癌的发病率。起抑制作用的是丙酸，且丙酸为人体代谢产物之一，不会对人体造成危害。因此，此研究也成了当今热点的研究方向，我们探究这方面也主要是围绕在前人的基础上就如何利用不同的方式，以便能使产率达到最优。 设计（或研究）的依据与意义 近几年来, 随着人民生活水平的提高和食品工业的发展, 鸡蛋的消耗量大幅度增加。由于人们仅利用了可食的蛋清和蛋黄部分, 而大量蛋壳却被废弃, 特别是蛋粉厂和蛋类制品加工厂, 每天都要产生成吨的蛋壳, 对环境造成很大污染。据联合国粮农组织统计，2003年我国鸡蛋总产量为2233．2万t，占世界鸡蛋总产量的40％，我国每年大约产生300万t的蛋壳垃圾。而现在随着人们的生活水平的进一步提高，鸡蛋消费也会进一步增加，必然会产生更多的鸡蛋壳垃圾，而大量的蛋壳垃圾在自然状态下很难被分解。造成了垃圾处理困难以及废弃资源的浪费。然而蛋壳中含93%的CaCO3, 1.0%的MgCO3, 2.8%的Mg3 (PO4)2 和3.2%的有机物, 如以蛋壳为主要原料, 加入丙酸生产丙酸钙, 既可节省资源, 降低成本, 又可解决蛋壳对环境所造成的污染。 丙酸钙是近几年发展起来的一种新型食品加剂,其毒性远低于我国广泛应用的苯甲酸钠,被认为是食品的正常成分,也是人体内代谢的中间产物加之又较山
石膏检测 石膏成分检测
石膏检测石膏成分检测 一：石膏（003） 石膏是单斜晶系矿物，主要化学成分是硫酸钙（CaSO4）。石膏是一种用途广泛的工业材料和建筑材料。可用于水泥缓凝剂、石膏建筑制品、模型制作、医用食品添加剂、硫酸生产、纸张填料、油漆填料等。 二：石膏的主要化学成分 CaO 32.5，SO3 46.6，H2O+ 20.9。成分变化不大。常有粘土、有机质等机械混入物。有时含SiO2、Al2O3、Fe2O3、MgO、Na2O、CO2、Cl等杂质。 三：主要检测产品 石膏粉：磷石膏粉、脱硫石膏粉、柠檬酸石膏粉和氟石膏粉 石膏板：纸面石膏板、装饰石膏板、石膏空心条板、纤维石膏板、石膏吸音板、定位点石膏板 其他：生石膏，石膏纤维，石膏线，石膏砌块等。 四：主要检测项目 含量分析：含固体含量、硫酸钙含量、不挥发物含量、其他杂质含量 成分配比 物理性质：硬度、灰分、粘度、细度、粒度、挥发分、比重、比表面积、熔点、回粘性、光泽、吸水率、凝结时间、尺寸偏差和表面质量等； 力学性能:抗拉强度、脆性、弯曲试验、拉伸试验、耐冲击性等 化学性能：耐水性、耐久性、耐酸碱性、耐腐蚀性、耐候性、耐热性等。 防火性能：耐燃烧时间、火焰传播比值、质量损失、炭化体积 其他参数：隔音性能等。 五：部分检测标准 JC/T 517-2004 粉刷石膏 GB/T 9776-2008建筑石膏 GB/T 5483-2008 天然石膏 GB/T 5484-2012 石膏化学分析方法 GB/T 9775-2008 纸面石膏板 GB/T 9776-2008 建筑石膏 GB/T 5463.3-2013 非金属矿产品词汇第3部分：石膏
科标无机检测中心可提供专业石膏检测，可依据依照ASTM、ISO、EN、JIS等国际标准和GB国家标准对石膏产品进行相关的分析测试服务。
硫酸钙的测定
FYYYWYD00127 煅石膏 硫酸钙的测定 络合滴定法 F-YY -YW-YD-00127 煅石膏－－硫酸钙的测定—络合滴定法 １ 范围 本方法采用滴定法测定煅石膏中硫酸钙的含量。 本方法适用于石膏的炮制品。 ２ 原理 供试品加稀盐酸，加热使溶解，加水稀释，加甲基红指示液，滴加氢氧化钾试液至溶液显浅黄色，继续多加使过量，加钙黄绿素指示剂少量，用乙二胺四醋酸二钠滴定液滴定，至溶液的黄绿色荧光消失，并显橙色。计算含水硫酸钙的量。 ３ 试剂 （除特殊注明外均为分析纯试剂） ３．１水（新沸放置至室温） ３．２稀盐酸 取盐酸２３４ｍＬ，加水稀释至１０００ｍＬ。 ３．３氢氧化钾试液 取氢氧化钾６．５ｇ，加水使溶解成１００ｍＬ。 ３．４甲基红指示液 取甲基红０．１ｇ，加０．０５ｍｏｌ／Ｌ氢氧化钠溶液７．４ｍＬ使溶解，再加水稀释至２００ｍＬ，变色范围ｐＨ（７．２－８．８）（红→黄）。 ３．５钙黄绿素指示剂 钙黄绿素指示剂 取钙黄绿素０．１ｇ，加氯化钾１０ｇ，研磨均匀。 ３．６铬黑 Ｔ指示剂 取铬黑 Ｔ ０．１ｇ，加氯化钠１０ｇ，研磨均匀。 ３．７乙二胺四醋酸二钠滴定液 配制：取乙二胺四醋酸二钠１９ｇ，加适量的水使溶解成１０００ｍＬ，摇匀。 标定：取于约８００℃灼烧至恒重的基准氧化锌０．１２ｇ，精密称定，加稀盐酸３ｍＬ使溶解，加水２５ｍＬ，加０．０２５％甲基红的乙醇溶液１滴，滴加氨试液至溶液显微黄色，加水２５ｍＬ与氨－氯化铵缓冲液（ｐＨ１０．０）１０ｍＬ，再加铬黑Ｔ指示剂少量，用本液滴定至溶液由紫色变为纯蓝色，并将测定的结果用空白试验校正。每１ｍＬ乙二胺四醋酸二钠滴定液（０．０５ｍｏｌ／Ｌ）相当于４．０６９ｍｇ的氧化锌。根据本液的消耗量与氧化锌的取用量，算出本液的浓度。 贮藏：置玻璃塞瓶中，避免与橡皮塞、橡皮管等接触。 ３．８基准氧化锌 ３．９ 氨－氯化铵缓冲液（ｐＨ １０．０） 取氯化铵５．４ｇ，加水２０ｍＬ溶解后，加浓氨溶液３５ｍＬ，再加水稀释至１００ｍＬ。 ４ 操作步骤 精密称取供试品细粉（全部通过五号筛－８０目，并含能通过六号筛－１００目不少于９５％的粉末）约０．１５ｇ， 置锥形瓶中，加稀盐酸１０ｍＬ，加热使溶解，加水１００ｍＬ与甲基红指示液１滴，滴加氢氧化钾试液显浅黄色，再继续多加５ｍＬ，加钙黄绿素指示剂少量，用乙二胺四醋酸二钠滴定液（０．０５ｍｏｌ／Ｌ）滴定，至溶液的黄绿色荧光消失，并显橙色。每１ｍＬ乙二胺四醋酸二钠滴定液（０．０５ｍｏｌ／Ｌ）相当于８．６０８ｍｇ的含水硫酸钙（ＣａＳＯ４?２Ｈ２Ｏ）。 中国分析网
山梨酸苯甲酸实验报告
酱油中山梨酸、苯甲酸含量的测定 概述：防腐剂是指能防止食品腐败、变质，抑制食品中微生物繁殖，延长食品保存期的物质，它是人类使用最悠久、最广泛的食品添加剂。 目前，我国允许使用的品种主要有苯甲酸及其钠盐、山梨酸及其钾盐、对羟基苯甲酸乙酯和丙酯、丙酸钠、丙酸钙、脱氢乙酸等。 第一部分、苯甲酸 一、实验原理：苯甲酸及苯甲酸钠在近紫外光区具有较强的吸收。通过查找资料，苯甲酸在 230nm处具有最大吸收。另一方面，它在水中具有适当的溶解度，所以，可将标样和样品处理成水溶液，采用紫外分光光度计，通过标准曲线法而实现酸性食品中苯甲酸（钠）含量的测定。 二、实验试剂及器材 试剂：无水乙醚(回收后可重复使用)、苯甲酸标准液(1mg/ml)、5%NaHCO3溶液、5%NaCL 溶液、(1+2v)盐酸溶液 器材：紫外分光光度计、125ml分液漏斗×2，铁架台一套，量筒100ml、容量瓶（100ml、50ml、）移液管（5ml×2、1ml×2）、胶头滴管、试剂瓶100ml×2、水浴锅、蒸馏回流装置一套。 三、实验步骤： 1、试剂准备：标准液：125.0mg苯甲酸+250ml无水乙醚 5%NaHCO3：5.0g NaHCO3+100mlH2O (1+2)HCl：20ml浓盐酸+40mlH2O 2、样品的处理：取酱油5.00ml于125nl分液漏斗中加入（1+2）盐酸2ml酸化，再用无水乙醚萃取三次，每次用量30ml，每次振摇1min。合并乙醚层于另一分液漏斗，用5%NaCl 溶液洗涤二次，每次5—10ml，然后蒸馏回收乙醚，用20ml、5%NaHCO3溶解、定容到100ml 容量瓶中。备用。 3、标准曲线绘制：取苯甲酸标准使用液0、0.1、0.2、0. 4、0.6、0.8ml分别置于100ml 容量瓶中，各加入5%NaHCO3溶液2ml，(1+2v)盐酸溶液2ml，加水至刻度，摇匀。放置15min,尽量让CO2逸尽。 用1cm吸收池于波长230nm处测定其吸光度。以吸光度为纵坐标，以浓度为横坐标绘制标准曲线。 4、取样品处理液5ml于100ml容量瓶中加入(1+2v)盐酸溶液2ml,摇荡以排除CO2，加水至刻度、摇匀、放置15min，与标准系列一起进行比色测定，根据测得吸光度，在标准曲线上查出其对应量，就可以计算出样品中苯甲酸（钠）的含量。 四、数据处理：
肌钙蛋白升高的临床意义(JACC)
JACC：肌钙蛋白升高临床实践意义专家共识发布 11月12日《美国心脏病学会杂志》（J Am Coll Cardiol）在线发表了“解读肌钙蛋白升高临床实践意义的专家共识”（以下简称“共识”），以指导临床医师何时进行肌钙蛋白检测以及如何解读其结果。该共识是由美国心脏病学会基金会（ACCF）与其他学会共同发布的。
临床医师首先应了解何时（及为什么）要进行（或不进行）肌钙蛋白检测。许多情况下会出现肌钙蛋白升高（图），共识为临床医师提供了解读肌钙蛋白检测结果的框架，对临床常见肌钙蛋白应用问题予以解答（表）。对诊断心肌梗死（心梗）所要求的心肌肌钙蛋白水平，共识参考了新近发布的第3版《心肌梗死全球统一定义》。共识强调需了解的最重要一点是，肌钙蛋白升高提示可能发生心肌坏死而其自身对病因无提示作用。医师应尽量明确肌钙蛋白升高的原因，其在许多情况下可提示预后，有时亦可指导治疗。随着检测手段日趋敏感，了解患者临床情况对决定是否行肌钙蛋白检测变得更加重要，综合考虑实验室检查结果与临床表现对诊断来讲很必要。
■专家观点 结合临床解读肌钙蛋白检测结果，须辨清心肌损伤病因(上海交通大学附属胸科医院方唯一李若谷) 该共识除对肌钙蛋白检查进行简要分析外，更重要的是，列举了临床中除心肌缺血外能引起肌钙蛋白升高的各类原因。 血清肌钙蛋白水平变化对于诊断心肌坏死和鉴别心肌缺血十分重要，其意义越来越受到各国专家的重视。2012年8月公布的《心肌梗死全球统一定义》最重要的就是强调血清肌钙蛋白水平的作用，将其作为诊断和鉴别诊断心梗的首要标准。目前，我国一些基层医院由于条件有限，缺乏有效的检测心肌损伤标志物的方法；同时，由于各临床中心采用的检测技术不同，其检测结果仍可能存在较大差异。肌钙蛋白的敏感性、准确性及参考值都存在较大不同。而指南所推荐的高敏肌钙蛋白检测较传统方法敏感度和特异度更高。因此，我认为如果能在我国各中心普及指南推荐的高敏肌钙蛋白检测方法、统一检测标准，对于快速识别心肌损伤将有重要临床意义，利于ACS的早期诊断和早期治疗，降低病死率，改善远期预后。 此外，随着技术发展，肌钙蛋白检测技术将越来越敏感，研究者会发现越来越多导致肌钙蛋白轻度升高的疾病。因此我认为，对临床上合并心肌缺血临床表现的患者，出现肌钙蛋白升高时应当首先考虑缺血性肌钙蛋白升高，但对无缺血症状但伴肌钙蛋白升高者，应更全面地考虑病因，是否存在非缺血原因的肌钙蛋白升高。随着肌钙蛋白检测技术及研究进展，肌钙蛋白升高提示心肌缺血的观念应被修正。 关于缺血性肌钙蛋白升高，该共识中主要分为ACS相关和非ACS相关两大类。前者主要包括不稳定心绞痛、NSTEMI及急性STEMI患者，在这类患者中，肌钙蛋白升高较肌酸激酶（CK-MB）升高对预后具有更大的预测意义。同时在治疗策略选择上，早期应用低分子量肝素或血小板糖蛋白Ⅱb/Ⅲa受体拮抗剂对肌钙蛋白升高者获益更大（GUSTO Ⅳ研究）。亦有荟萃分析指出，对肌钙蛋白升高者，早期介入干预也有良好获益。而非缺血性肌钙蛋白升高主要归于2012年重新定义的第二类心梗，即由于耗氧量增加或供氧不足造成的心肌缺血，其造成肌钙蛋白升高的根本原因也是源于心肌缺血。因此共识指出，单纯依据肌钙蛋白升高而不结合临床表现无法明确是否为ACS相关的缺血原因。 对非缺血性肌钙蛋白升高的原因，共识主要提及心力衰竭、肺栓塞、慢性肾功能不全、脓毒症及部分化学毒性相关心脏损伤。在这类疾病中，虽然肌钙蛋白升高并不具有类似其在缺血性疾病中的特异性，但对多数疾病预后都有关键作用，常预示不良转归。 就此总结，肌钙蛋白升高虽然对诊断心梗有重要参考意义，但其本质是心肌坏死造成的结果，而临床中导致心肌坏死的病因纷繁复杂。因此我认为，对肌钙蛋白升高的患者，应结合具体临床情况做出正确诊断。 心梗等多个因素致肌钙蛋白升高(解放军总医院生化科田亚平) 为促进心血管疾病临床诊治标准化，30余年前国际心脏学会联盟（ISFC）和世界卫生组织（WHO）发布了有里程碑意义的联合报告，将病史、心电图和血清酶学变化结合，明确了缺血性心脏疾病定义与诊断标准，并对急性心梗的诊断标准达成共识。但由于心电图的不确定性和心肌酶的非特异性影响了该标准的正确执行与推广应用。 自20世纪90年代起，心脏特异生物标志物肌钙蛋白被发现，并逐步在临床推广，由于其高度的心 脏特异性，在方法学稳定、无实验误差的前提下，几乎可100%反映心肌损伤和辅助诊断心梗和ACS， 因此在临床诊断时医生常忽略与病史和心电图结合。但随着研究深入和检测方法灵敏度提高，感染、炎症、 肾脏功能等对肌钙蛋白测定结果的影响渐被发现。该共识的发布对指导肌钙蛋白的临床正确应用有重要 指导意义。 通过学习该共识，我们要明确肌钙蛋白是反映心肌坏死的特异、灵敏生物标志物。但除ACS和心梗外，感染、炎症等多种可导致心肌细胞坏死的因素均可使其升高。应用该指标辅助诊断ACS和心梗时，要结合临床病史鉴别诊断，以正确解释肌钙蛋白升高的原因。此外，该共识多基于欧美人群调查资料制定，而在我国，由于生活习惯、饮食结构及人种差异均可能影响对该指标的合理应用，因此多中心临床研究及多学科合作达成更适合我国人群的专家共识十分必要。
食品防腐剂丙酸钙的制备
食品防腐剂丙酸钙的制备 实 验 报 告 班级：应101-3 指导老师：贺萍 组员：柳林清（201055501305） 王翠翠（201055501307） 柳建嵩（201055501308）
食品防腐剂丙酸钙的制备 【前言】 丙酸钙是我国近几年发展起来的一种新型食品防腐剂，它对霉菌、好气性芽孢杆菌、革兰式阴性菌有很好的杀灭作用，还可抑制黄曲霉素的产生，因而广泛用于面包、糕点和奶酪的保存剂和饲料的防腐剂。随着人民生活水平的提高和食品工业的发展，鸡蛋的消耗量大幅度增加。由于目前国内对鸡蛋壳资源的利用率还很低，人们利用了可食用部分即蛋清、蛋黄，大量鸡蛋壳被扔弃，对环境造成了很大污染。初步估计一个中等城市每月所扔弃的蛋壳总量约为50-80吨。如能充分利用，不仅可变废为宝为社会增加财富，还可减少对环境的污染。 对鸡蛋壳组成成分的分析证明：蛋壳中主要成分为CaCO 3 ，另外含有少量有机物、P、Mg、Fe及微量Si、Al、Ba等元素。 以蛋壳为基本原料制备丙酸钙的方法有两种，一种方法是将蛋壳在1050℃下煅烧2h15min，使蛋丙酸反应成丙酸钙；另一种方法是直接用蛋壳与丙酸反应制备丙酸钙。前一种方法由于需要在高温下煅烧，能耗大、成本高，而且在煅烧 过程中会产生大量C0 2 污染环境，并破坏了蛋壳的天然活性；后一种方法产率却比较低。因此以研究蛋壳为基本原料如何用直接法制备丙酸钙，提高丙酸钙产率，使其成为一种既节省能源，又降低成本，同时有利环保的工业生产方法，成为当务之急。 【实验目的】 1.了解防腐剂的相关知识清楚丙酸钙作为防腐剂的优点； 2.了解丙酸钙性质和制备原理及方法； 3. 掌握固体试样的粉碎方法，过筛要求，减压过滤及蒸发浓缩的实验方法； 4. 掌握EDTA的标定，产品纯度的测定及相关的分析方法； 5. 掌握重结晶技术。 【实验原理】 1.丙酸钙，Ca(CH 3CH 2 COO) 2 ，性状白色结晶性粉末，熔点400℃以上（分解）， 无臭或具轻微特臭。可制成一水物或三水物，为单斜板状结晶，可溶于水（1g 约溶于3mL水），微溶于甲醇、乙醇，不溶于苯及丙酮。10%水溶液pH等于7.4。
食品防腐剂碳酸钙的制备综述
食品防腐剂碳酸钙的制备综述 食品防腐剂概述 食品防腐剂是抑制物质腐败的药剂。即对以腐败物质为代谢底物的微生物的生长具有持续的抑制作用。重要的是它能在不同情况下抑制最易发生的腐败作用，特别是在一般灭菌作用不充分时仍具有持续性的效果。对纤维和木材的防腐用矿油、煤焦油、丹宁，对用甲醛、升汞、甲苯、对羟基苯甲酸丁酯、硝基糠腙衍生物或香脂类树脂。在食品中使用防腐剂受到限制，因此多靠干燥、腌制等一些物理的方法。特殊的防腐剂有乙酸等有机酸、以油酸脂为成分的植物油、芥子等特殊的精油成分。对于生物体的局部（如人体表面或消化道），可以根据具体条件采用各种防腐剂（如碘仿、水杨酸苯酯、苯胺染料或吖啶类色素等）。 我国规定使用的防腐剂有苯甲酸、山梨酸、丙酸钙等25种。 应具备的条件 1）性质较稳定：加入到食品中后在一定的时期内有效，在食品中有很好的稳定性 2）低浓度下具有较强的抑菌作用 3）本身不应具有刺激气味和异味 4）不应阻碍消化酶的作用，不应影响肠道内有益菌的作用 5）价格合理，使用较方便。 作用机理 ①能使微生物的蛋白质凝固或变性，从而干扰其生长和繁殖。 ②防腐剂对微生物细胞壁、细胞膜产生作用。由于能破坏或损伤细胞壁，或能干扰细胞壁合成的机理，致使胞内物质外泄，或影响与膜有关的呼吸链，从而具有抗微生物的作用。 ③作用于遗传物质或遗传微粒结构，进而影响到遗传物质的复制、转录、蛋白质的翻译等。 ④作用于微生物体内的酶系，抑制酶的活性，干扰其正常代谢。 种类 食品防腐剂按作用分为和。二者常因浓度、作用时间和微生物性质等的不同而不易区分。按性质也可分为有机化学防腐剂和无机化学防腐剂两类。此外还有乳酸链球菌素，是一种由乳链球菌产生、含34个的肽类抗菌素。目前世界各国所用的食品防腐剂约有30多种。食品防腐剂在被划定为第17类，有28个品种。防腐剂按来源分，有化学防腐剂和天然防腐剂两
硫酸钙含量的测定
硫酸钙含量测定 概述 钻井液中的硫酸钙含量可以用钙离子测定程序中所描述的EDTA方法测定。首先用此测定钻井液滤液和钻井液中的钙离子含量，而后可计算得到硫酸钙总量和未溶解的硫酸钙含量。 仪器和药品 1、EDTA溶液：0.01mol/L的二水合乙二胺四乙酸钠盐的标准溶液（1cm3=1000mg/LCaCO3, 1cm3=400mg/LCa2+）。 2、测钙离子用缓冲溶液：1mol/L氢氧化钠溶液。 3、钙指示剂：Calver?Ⅱ或羟基苯酚蓝。 4、冰乙酸。 5、滴定瓶：150ml烧杯。 6、刻度移液管：10ml 2支，1ml一支。 7、移液管：1ml,2ml,5ml，10ml各一支。 8、加热板（滤液有颜色时需要）。 9、掩蔽剂：体积比为1：1：2的三乙醇胺、四乙烯基戊胺和去离子水的混 合液。 10、pH试纸。 11、量筒：50ml 12、次氯酸钠溶液：5.25％次氯酸钠的去离子水溶液。注：出售的许多次氯 酸钠中含有次氯酸钙或草酸，不应使用此类药品。要确保所使用的药品 是新鲜的，因为时间久了将会变质。 13、去离子水或蒸馏水。 注：试验前应测定去离子水和次氯酸钠溶液中的钙离子含量，以便在测定样品后减去这一含量。 测定程序 1、将5ml钻井液加入到245ml去离子水中，搅拌15分钟后用标准API滤失仪过滤，只收集澄清的滤液。用10ml移液管移取10ml澄清滤液到50ml烧杯中，然后按钙离子测定程序，用EDTA滴定至终点，记录EDTA体积V1。 2、用EDTA滴定1ml 原始钻井液滤液至终点。此时消耗EDTAD的体积为V2。 3、用蒸馏器蒸馏钻井液。用液相和固相含量测定中所获得的水的体积百分数确定钻井液中水的体积分数F W。 4、计算 以Kg/m3为单位的钻井液中硫酸钙含量： = 6.80V1 C CaSO 4 以Kg/m3为单位的钻井液中未溶解的硫酸钙含量： ＝6.80V1-1.37V2F W C'CaSO 4
MM FS CNG 食品中丙酸钠 丙酸钙的测定方法
MMFSCNG0088 食品 丙酸钠 丙酸钙 气相色谱法 MM_FS_CNG_0088 食品中丙酸钠、丙酸钙的测定方法 1．适用范围 本方法适用于酱油、醋、面包和糕点中丙酸盐的测定。本方法最低检出量为面包、糕点0.05g/kg，酱油、醋0.02g/kg。 2．原理概要 样品酸化后，丙酸盐转化为丙酸，经水蒸气蒸馏，收集后直接进气相色谱，用氢火焰离子化检测器检测，与标准系列比较定量。 3．主要仪器和试剂 3.1 试剂 3.1.1 磷酸溶液：取10mL磷酸(85％)加水至100mL。 3.1.2 甲酸溶液：取1mL甲酸(99％)加水至50mL。 3.1.3 硅油。 3.1.4 丙酸标准溶液：标准储备液(10mg/mL)，准确称取250mg丙酸于25mL容量瓶中，加水至刻度。标准使用液，将储备液用水稀释成10～250μg/mL的标准系列。 3.2 仪器 3.2.1 气相色谱仪：具有氢火焰离子化检测器。 3.2.2 水蒸气蒸馏装置。 4．过程简述 4.1 提取 准确称取30g事先均匀化的样品，置于500mL蒸馏瓶中，加入100mL水，再用50mL 水冲洗容器，转移到蒸馏瓶中，加10mL磷酸溶液，2～3滴硅油，进行水蒸气蒸馏，将250mL容量瓶置于冰浴中作为吸收液装置，待蒸馏液约250mL时取出，在室温下放置30min，加水至刻度，吸取10mL该溶液于试管中，加入0.5mL甲酸溶液，混匀，供色谱测定用。 4.2 色谱条件 色谱柱：玻璃柱，内径3mm，长1m，内装80～100目 仪器条件:柱温180℃，进样口、检测器温度220℃。 气流条件：氮气 50mL/min； 氢气 50mL/min； 空气 500mL/min。 4.3 测定 取标准系列中各种浓度的标准使用液10mL，加0.5mL甲酸溶液，混匀。取5 μL 进气相色谱，测定不同浓度丙酸的峰高，根据浓度和峰高绘制标准曲线。同时进样品溶液，根据样品的峰高与标准曲线比较定量。 5．结果计算： 0001250×=m A X
肌钙蛋白升高的意义
肌钙蛋白升高的临床意义 心内科岑雪降
肌钙蛋白概述 肌钙蛋白，由T、C、I三亚基构成，和原肌球蛋肌钙蛋白由三亚基构成和原肌球蛋白一起通过调节钙离子对横纹肌动蛋白ATP酶的活性来调节肌动蛋白和肌球蛋白相互作用当心活性来调节肌动蛋白和肌球蛋白相互作用。当心肌损伤后，心肌肌钙蛋白复合物释放到血液中，4-6小时后，开始在血液中升高，升高的肌钙蛋白小时后开始在血液中升高升高的肌钙蛋白I能在血液中保持很长时间6-10天。肌钙蛋白I具有高度心肌特异性和灵敏度，所以肌钙蛋白I已有高度心肌特异性和灵敏度所以肌钙蛋白CK--MB,成为目前最理想的心肌损伤标志物超过CK
肌钙蛋白在心肌梗塞诊断中 的地位 2012年ESC/ACC/AHA/WHF发布的“第三版心肌梗死统定义强调了cTn在AMI中的核心地位，梗死统一定义”强调了中的核心地位推荐AMI的诊断必须包括cTn的升高和（或）降低，中华医学会心血管病分会也建议将cTn作为拟诊断ACS患者进行风险分层和诊断心肌梗死的优 选生化标志物
?出现早，最早可在症状发作后2小时出现，一般3-6小时; ?具有较宽的诊断窗：cTnT(5～14天)， 具有较宽的诊断窗T T(5 cTnI(4～10天)。由于在无心肌损伤时cTn 在血液中含量很低，因此也可用于minor 在液中含很低此 y g(微损伤mycardial damage(MMD，微小心肌损伤)的诊断，这是以前酶学指标所难以做到的。
?cTn c还具有判断预后的价值，对任何冠状动脉疾患病人，即便ECG或其他检查(如运动试验)阴性，只要cTn增高，应视为具 阴性只要增高应视为具有高危险性 ?在对AMI的诊断方面cTnI和cTnT无显著在的诊 异后天率预报 差异，在AMI30天死亡率的预报方面，cTnT优于cTnI.
丙酸钙的制备综述
前言：防腐剂，英语为Preservative，是指天然或合成的化学成分，用于加入食品、药品、颜料、生物标本等，以延迟微生物生长或化学变化引起的腐败从今后防腐剂的发展趋势看，天然防腐剂将成为发展主角。 一、防腐剂 防腐剂的基本名防腐剂有苯甲酸钠、山梨酸钾、脱氢乙酸钠、丙酸钙、双乙酸钠、乳酸钠、对羟基苯甲酸丙防腐剂酯、乳酸链球菌素、过氧化氢等防腐剂是用于保持食品原有品质和营养价值为目的食品添加剂，它能抑制微生物的生长繁殖，防止食品腐败变质而延长保质期。 防腐剂的防腐原理，大致有如下3种： 一是干扰微生物的酶系，破坏其正常的新陈代谢，抑制酶的活性。 二是使微生物的蛋白质凝固和变性，干扰其生存和繁殖。 三是改变细胞浆膜的渗透性，抑制其体内的酶类和代谢产物的排除，导致其失活。 谈到防腐剂，人们往往认为有害，其实在安全使用范围内，对人体是无毒副作用的。我国防腐剂使用有严格的规定，防腐剂应符合以下标准： 1.合理使用对人体无害； 2.不影响消化道菌群； 3.在消化道内可降解为食物的正常成分； 4.不影响药物抗菌素的使用； 5.对食品热处理时不产生有害成分。 我国已批准了32种使用的食物防腐剂，其中最常用的有苯甲酸钠、山梨酸钾等。苯甲酸钠的毒性比山梨酸钾强，而且在相同的酸度值下抑菌效力仅为山梨酸的1/3，因此许多国家逐渐用山梨酸钾。但因苯甲酸钠价格低廉，在我国仍普遍使用，主要用于碳酸饮料和果汁饮料。山梨酸钾抗菌力强，毒性小，可参与人体的正常代谢，转化为CO2和水。从防腐剂的发展趋势上看，以生物发酵而成的生物防腐剂，成为未来的发展趋势。复配糕点防腐剂 二．丙酸钙 丙酸钙是酸型食品防腐剂，在酸性条件下，产生游离丙酸，具有抗菌作用。其抑菌作用受环境pH值的影响，在pH值5.0时霉菌的抑制作用最佳；pH值6.0
丙酸钙的制备综述
食品防腐剂丙酸钙的制备及纯度分析综述 实验小组：06 实验班级：应131-3 指导老师：贺萍 实验人员：
研究背景 丙酸钙是近年来发展起来的一种新型的食品及饲料防腐剂，属酸性防霉剂，对霉菌、好气性芽孢杆菌和革兰氏阴性菌都具有很好的杀灭作用，可抑制黄曲霉素的产生，对人体无毒，广泛应用于面包、糕点等食品的防霉及蔬菜保鲜、植物保护等方面。目前，国内主要采用丙酸和氢氧化钙(Ca(OH)2)或碳酸钙(CaCO3，)反应制得丙酸钙。鸡蛋壳是一种宝贵的天然生物资源，与其他钙源相比，受环境污染较少，重金属含量极其痕量，是一种良好的钙源，可作为新型钙制剂的原料。目前已有不少利用鸡蛋壳生产丙酸钙的研究，这些研究均为化学方法，能耗较高。目前尚无发酵法生产丙酸钙的研究，因此进行新探索，在丙酸发酵液中直接添加鸡蛋壳粉碎、煅烧后得到的氧化钙，生产丙酸钙，以期采用发酵法以鸡蛋壳为原料生产丙酸钙，能够有效降低能耗，减少废弃蛋壳对环境造成的危害，降低丙酸钙的生产成本。 我国海岸线漫长，牡蛎、贝类等资源极为丰富，随着国内人们消费意识和健康观念的更新以及人民生活水平的迅速提高，我国牡蛎生产水平有了很大发展，牡蛎产量由1990年的8．5万吨增长2005年的382．6万吨【1】，而且随着人类的自然增长和消费水平的不断提高，这一数字还会随之而增加。但是，随着我国牡蛎养殖产量的迅速增加，如何充分高效地利用牡蛎资源，既是牡蛎产业面临的巨大机遇，也是牡蛎产业面临的一个严峻挑战。我国目前对牡蛎等贝类资源的开发主要是加工其可食用部分，在利用了可食用的部分的同时，大量的海产品壳则作为垃圾被废弃，这些废弃的海产品壳中残留的有机物在长期堆放的过程中，腐败发臭对环境造成严重污染。目前国内外对牡蛎壳等海产壳类物质的研究和利用已有陆续的报道，而将其用于制作新型防腐保鲜添加剂的报道甚少，研究工作一直处于滞后的状态。因此，经查阅大量的相关文献资料，结果表明牡蛎壳等海产壳类物质可以作为制备食品添加剂丙酸钙的绿色钙源。因此，选择以牡蛎壳为原料进行食品级添加剂丙酸钙的制备工艺研究，以期达到对牡蛎壳等海产壳类资源化利用的目的。 第一部分丙酸钙的综述 一丙酸钙的性质与特点【2】 物理性质：丙酸钙分子式：(CH3CH2COO)2Ca·(帖1)H20，丙酸钙分子量：186．23(无水盐)丙酸钙为白色结晶体、颗粒或粉末状，无臭或带轻微酸味。熔点400℃以上。对热和光稳定。有吸湿性，易溶于水，微溶于甲醇、乙醇，不溶于苯及丙酮。10％水溶液pH为7．0～9．0。 化学性质：在酸性条件下，产生游离丙酸，具有抗菌作用。对酵母菌无害，对人体无害。丙酸钙对霉菌，好气性芽胞产生菌，革兰氏阴性菌有效。在防霉的同时，还对抑制黄曲霉素的产生有特效。因此，丙酸钙被广泛用作食品、饲料防腐、水果的防霉保鲜剂。丙酸钙与其它脂肪酸一样可通过代谢作用被人体吸收利
丙酸钙制备综述
丙 酸 钙 的 合 成 综 述 姓名：李燕藏 学号：201055501414 专业：应用化学 指导老师：贺萍 学院：化学化工
丙酸钙的制备综述 一．丙酸钙简介 丙酸钙是世界卫生组织（WHO）和联合国粮农组织（FAO）批准使用的安全可靠的食品与饲料用防霉剂。丙酸钙与其它脂肪一样可以通过代谢被人畜吸收,并供给人畜必需的钙,这一优点是其它防霉剂所无法相比的,被认为GRAS. 丙酸钙是酸型食品防腐剂，在酸性条件下，产生游离丙酸，具有抗菌作用。其抑菌作用受环境pH值的影响，在pH值5.0时霉菌的抑制作用最佳；pH值6.0时抑菌能力明显降低，最小抑菌浓度为0.01%。在酸性介质（淀粉、含蛋白质和油脂物质）中对各类霉菌、革兰氏阴性杆菌或好氧芽孢杆菌有较强的抑制作用，还可以抑制黄曲霉素的产生，而对酵母菌无害，对人畜无害，无毒副作用。是食品、酿造、饲料、中药制剂诸方面的一种新型、安全、高效的食品与饲料用防霉剂。 二．丙酸钙的用途：（1）丙酸钙可用作食品及饲料的防霉剂，用于面包及糕点的保存剂。丙酸钙易于与面粉混合均匀，在作为保鲜防腐剂的同时又能提供人体必需的钙质，起到强化食品的作用。 （2）丙酸钙对霉菌和能引起面包产生粘丝物质的好气性芽孢杆菌有抑制作用，对酵母无抑制作用。 （3）在淀粉、含蛋白质和油脂物质中对霉菌、好气性芽孢产生菌、革兰氏阴性菌、黄曲霉素等有效，具有独特的防霉、防腐性质。 （4）是食品、酿造、饲料、中药制剂诸方面的一种新型、安全、高效、广谱食品与饲料用防霉剂。 （5）丙酸钙作为饲料添加剂可有效地抑制饲料发霉、延长饲料保存期，若与其他无机盐配合还可提高牲畜的食欲，提高奶牛的奶产量。丙酸钙挥发性小、耐高温、动物适应性好，适合于多种饲料使用。 （6）此外，丙酸钙也可作为牙膏，化妆品的添加剂，起到良好的防腐作用。三．丙酸钙的性质 丙酸钙Ca(CH3CH2COO)2，白色结晶性颗粒或结晶性粉末，无臭或略带丙酸臭，在湿空气中易潮解，10%水溶液pH值8~10.对热和光稳定。易溶于水，微溶于乙醇、甲醇，不溶于乙醚、丙酮和苯。在200~210℃无水盐发生相变，在330~340℃分解为碳酸钙。 四．丙酸钙的制备方法 1，间接法 工艺中，主要是以石灰石川和牡蛎壳圈为原料，经高温煅烧制成生灰CaO，再在CaO中加入一定量水，制成石灰乳，在不断搅拌下，缓慢将丙酸溶液加入，继续搅拌反应至溶液澄清，得丙酸钙溶液，过滤后将滤液加热浓缩至粘稠状，在
心肌肌钙蛋白的正常值及其临床意义
心肌肌钙蛋白的正常值及其临床意义 发表者：薛一涛(访问人次：10727) 肌钙蛋白是肌肉收缩的调节蛋白。心肌肌钙蛋白（cTn）是由三种不同基因的亚基组成：心肌肌钙蛋白T（cTnT）、心肌肌钙蛋白I（cTn I）和肌钙蛋白C（TnC）。目前，用于ACS实验室诊断的是cTnT和cTnI。 肌钙蛋白T（TnT）分子量为 37KD，是原肌球蛋白结合亚基。有三种亚型：骨骼肌肌钙蛋白T（sTnT）包括快骨骼肌型和慢骨骼肌型，此外还有心肌型。心肌肌钙蛋白T（cTnT）的大部分是以C-T-I的复合物形式存在于细丝上，6%—8%以游离的形式存在于心肌细胞浆中。因cTnT与骨骼肌TnT的基因编码不同，骨骼肌中无cTnT的表达。cTnT相对于两种骨骼肌亚型有40%的不同源性。cTnT 分子稳定、亲水、特异性抗原决定簇的反应性好。目前所用的单克隆抗体为对心 肌特异的捕捉抗体和标记抗体。 TnI（肌钙蛋白I）存在三种亚型：骨骼肌肌钙蛋白I（sTnI）中存在快骨骼肌型和慢骨骼肌型，它们具有相似的分子量（20KD），但二者之间的氨基酸序列约存在40%的差异；第三种为心肌型。心肌肌钙蛋白I（cTnI）与骨骼肌型的氨基酸序列也存在40%的差异。但人的eTnI氨基末端比sTnI多31个amino acid，使其molecular weight达到22KD，这种独特的顺序使之具有较高的心肌特异性，有助于制备相应的单克隆。cTn是以cTnI-C-T复合物和游离cTnI形式存在于心肌细胞中，心肌损伤时释放到血循环中后，cTnI-C-T可进一步分解为c TnI-C复合物和游离cTnI。故血循环中除cTnI C-T、游离cTnI外还有cTnI-C，而且cTnI-C是其在血液中的主要形式。其代谢产物由肾脏排出体外。 TnC分子量为18KD，是Ca2+结合亚基，每个分子结合2个Ca2+。心肌和骨 骼肌的TnC结构相同。 由于cTnT和cTnI与骨骼肌中的异质体分别由不同基因编码，具有不同的氨基酸顺序，有独特的抗原性，故它们的特异性要明显优于CK—MB同工酶。 心肌以外的肌肉组织出现损伤或疾病时，CK和CK-MB可能会升高，而c TnT和cTnI则不会超过其临界值。由于它们在正常血清中含量极微，在AMI时明显增高，且增高倍数一般都超过总CK和CK-MB的变化。 cTnT和cTnI由于分子量小，发病后游离的cTn从心肌细胞浆内迅速释放人血，血中浓度迅速升高，其时间和CK—MB相当或稍早。虽然肌钙蛋白半寿期很短（cTnT 2小时，游离cTnI的半寿期据报道为2h～5d不等），但其从肌原纤维上降解的过程持续时间很长，可在血中保持较长时间的升高，故它兼有C K-MB升高较早和LD1诊断时间窗长的优点。故目前cTn已有逐渐取代酶学指标 的趋势。 参考值： cTnT0.1ng／ml 以下均为贝克曼Access化学发光分析系统的数据，不同厂家的试剂其诊断 界值不同。
丙酸钙的制备实验报告
食品防腐剂丙酸钙的制备 一、实验目的 1、通过查阅文献、综述文献，了解食品防腐剂丙酸钙的制备方法及原理； 2、掌握从样品采集、烘干、试样研磨、过筛、混匀和缩分等样品处理过程； 3、通过丙酸钙的制备，综合掌握搅拌反应、真空抽滤、除杂脱色、蒸发浓缩、 洗涤烘干、高温焙烧等操作； 4、对产品进行纯度检测、杂质分析等训练； 5、巩固合成基本操作、滴定分析基本操作，学会用科学的思维来观察分析问 题和解决问题，学会以科学论文形式提交实验报告。 二、实验原理
丙酸钙是一种酸性食品防腐剂，广泛应用于面包、西点、酱油及水果等食品的防腐保鲜，对霉菌、好气型芽孢杆菌、革兰氏阴性菌等食品工业菌类有很好的杀灭作用，还可抑制黄曲霉素的产生，其防腐作用良好，且无毒、安全。丙酸钙不仅可以延长食品的保质期，而且可以在体内水解成丙酸和钙离子，其中丙酸是牛奶和牛羊肉中的常见脂肪酸成分，钙离子有补钙的作用，它们都可以作为用那个样物质被人体吸收，这一优点是其他防霉剂所无法相比的。 丙酸钙Ca(CH3CH2COO)2，性状白色结晶性粉末，熔点400℃以上（分解），无臭或具轻微特臭。可制成一水物或三水物，为单斜板状结晶，可溶于水（1g 约溶于3mL水），微溶于甲醇、乙醇，不溶于苯及丙酮。10%水溶液pH等于7.4。对热和光稳定。在200~210℃无水盐发生相变，在330~340℃分解为碳酸钙。随着人们生活水平的提高和食品工业的发展，大量含有钙源的生活废弃物如蛋壳、贝壳，动物骨类等会造成环境污染。利用这些生活废弃物来生产丙酸钙可以起到变废为宝。利用经过物理粉碎的贝壳粉和丙酸钙反应其反应的方程式是： CaCO 3+2CH 3 CH 2 COOH=Ca(CH3CH2COO) 2 +H 2 O+CO 2 然后经过一系列的减压过滤，蒸馏等 过程进行分离即可得到产物丙酸钙。 随着人们生活水平的提高和食品工业的发展，大量含有钙源的生活废弃物，如蛋壳、贝壳、动物骨头类等会造成环境污染。利用这些生活废弃物来生产丙酸 钙可以起到变废为宝。以蛋壳为例，其中含有约93%CaCO 3、1.0%MgCO 3 、2.8%MgHPO 4 及3.2%有机物，有害元素含量极微，主要杂质元素是镁，处理成本较低，容易制得合格产品。 利用CaCO 3制Ca(CH 3 CH 2 COO) 2 的反应方程式为 CaCO 3+2 CH 3 CH 2 COOH= Ca(CH 3 CH 2 COO) 2 +CO 2 +H 2 O 在经过一系列的过滤、加热浓缩、减压抽滤等操作就可以得到产物丙酸钙。 产品验纯是利用EDTA与钙离子结合形成配合物来滴定测得Ca2+浓度进而求得丙酸钙的量。为避免镁离子等的干扰，用1%NaOH将PH调至12。 三、实验仪器及设备 仪器：烧杯（250ml，50ml），玻璃棒，量筒（100ml，10ml），碱滴定管一支，容量瓶两个（100ml），表面皿，锥形瓶（250ml），移液管（25ml），石棉网,烘箱，滤纸，粉碎机，水泵，布氏漏斗，抽滤瓶，电炉，分析天平，筛子，玻璃珠，布氏漏斗，水浴锅。 试剂：钙指示剂，10%氢氧化钠，0.02mol/LEDTA，去离子水,1:1盐酸 原料：丙酸，扇贝壳
硫酸钙测定3
测定含量 方法名称：硫酸钙---硫酸钙的测定---络合滴定法 应用范围：本方法采用滴定法测定硫酸钙的含量。 本方法适用于硫酸钙。 方法原理：供试品加稀盐酸10mL与水100mL，振摇使溶解，在搅拌下精密加乙二胺四醋酸二钠滴定液（0.05mol/L）20mL，摇匀，加氢氧化钠溶液（1→5）15mL与紫脲酸铵指示剂0.2～0.3g，继以乙二胺四醋酸二钠滴定液（0.05mol/L）滴定至溶液由桃红色变为紫色，计算硫酸钙的含量。 试剂： 稀盐酸 紫脲酸铵指示剂 乙二胺四醋酸二钠滴定液（0.05mol/L） 基准氧化锌 水 氢氧化钠溶液（1→5） 锌滴定液（0.05mol/L） 试样制备：
1.稀盐酸 取盐酸234 mL加水稀释至1000mL。 2.紫脲酸铵指示剂 取紫脲酸铵0.1g，加氯化钠使成20g，研细。 3.乙二胺四醋酸二钠滴定液（0.05mol/L） 取乙二胺四醋酸二钠19g，加适量的水使溶解成1000mL，摇匀。 标定：取于约800℃灼烧至恒重的基准氧化锌0.12g，精密称定，加稀盐酸3mL使溶解，加水25mL，加0.025%甲基红的乙醇溶液1滴，滴加氨试液至溶液显微黄色，加水25mL与氨-氯化铵缓冲液（pH10.0）10mL，再加铬黑T指示剂少量，用本液滴定至溶液由紫色变为纯蓝色，并将滴定的结果用空白试验校正。每1mL乙二胺四醋酸二钠滴定液（0.05mol/L）相当于4.069mg的氧化锌。根据本液的消耗量与氧化锌的取用量，算出本液的浓度。 贮藏：置玻璃塞瓶中，避免与橡皮塞、橡皮管等接触。 4.锌滴定液（0.05mol/L） 配制：取硫酸锌15g（相当于锌约3.3g）加稀盐酸10mL与水适量是溶解成1000mL，摇匀。 标定：精密量取本液25mL，加0.025%甲基红的乙醇溶液1滴，滴
高敏肌钙蛋白升高的临床意义
中华检验医学杂志?2014-10-13?? 作者：张真路周新 肌钙蛋白升高意味着什么？首选答案肯定是急性心肌梗死（AMI）!前几年这样回答没问题，现在由于“高敏感肌钙蛋白”的出现，这样回答就不准确了。着名的检验医学专家Alan Wu教授在2013年6月的一次讲座幻灯片中引用了一张“三车追尾车祸现场”照片，很形象地讲述了高敏感肌钙蛋白检测目前所出现的局面。 跑在最前面的车代表检验科，最后面的车代表急诊科，中间受夹击的车代表心内科。也就是说，检验科使用“高敏感肌钙蛋白检测试剂”检测出许多“阳性”患者，急诊科通过肌钙蛋白检测的“阴/阳性”以排除/诊断AMI，而心内科则由于肌钙蛋白“阳性”而不恰当地收了一些“不该收”的患者准确地讲，这些患者本身身体存在病变，但不能因为只要是肌钙蛋白升高就一律收心内科。 造成以上结果的原因，关键还是交流不够。临床医生对高敏肌钙蛋白新知识的学习了解不够；检验科主动走入临床的宣传交流不够。再加上还有一些检验科的质量存在问题，不能时刻保证结果的精确和可控等。 这些问题几年前在欧洲已出现过，美国食品和药物管理局（FDA）马上要批准其投入临床，也会遇到这些问题。但美国人在正式使用前做了许多工作，形成一些“共识”，最主要的目的是：要先让临床医生知道如何最佳地应用及对结果进行科学合理的解释。 在我国，许多医院已使用高敏肌钙蛋白检测试剂有4年了，遇到了越来越多的问题。如何规避一些问题，如何统一认识？我们认为，检验与临床应该加强学习、交流，借鉴欧美经验，避免走弯路或回头路，尽快形成共识。 一、了解高敏肌钙蛋白检测的生物化学背景 1．肌钙蛋白的生物化学 首先要明确的是，“高敏肌钙蛋白”是检测实验特性的反映（即检测敏感性的提高），而非反映心脏肌钙蛋白的新形式。大多数“高敏”试剂只是加大样本检测量，标记抗体检测浓度的增加，降低缓冲液本底信号及反应时间延长等方面做了优化改进。 改进的结果是检测敏感性有了10倍的提高，胞浆内6%-8%游离肌钙蛋白的释放就能检出。由于试剂校准物是大肠埃希菌人类cTnT重组体，cTnT第5代试剂校准物与第4代不完全相同，所以同一样本检测的结果会不同，如第4代hs-cTnT临界值（cut-off）值为
食品防腐剂丙酸钙的制备
食品防腐剂丙酸钙的制备
应化实验:食品防腐剂丙酸钙的制备 班级:应 101-3 指导老师:贺萍 组员:柳林清(201055501305) 王翠翠(201055501307) 柳建嵩(201055501308) 应化实验:食品防腐剂丙酸钙的制备 食品防腐剂丙酸钙的制备 【前言】 丙酸钙是我国近几年发展起来的一种新型食品防腐剂，它对霉菌、好气性芽孢杆 菌、革兰式阴性菌有很好的杀灭作用，还可抑制黄曲霉素的产生，因而广泛用于面 包、糕点和奶酪的保存剂和饲料的防腐剂。随着人民生活水平的提高和食品工业的发 展， 鸡蛋的消耗量大幅度增加。由于目前国内对鸡蛋壳资源的利用率还很低， 人们 利用了可食用部分即蛋清、蛋黄，大量鸡蛋壳被扔弃，对环境造成了很大污染。初步 估计一个中等城市每月所扔弃的蛋壳总量约为 50-80 吨。如能充分利用， 不仅可变废 为宝为社会增加财富， 还可减少对环境的污染。
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对鸡蛋壳组成成分的分析证明: 蛋壳中主要成分为 CaCO， 另外含有少量 3 有机物、P、Mg、Fe 及微量 Si、Al、Ba 等元素。 以蛋壳为基本原料制备丙酸钙的方法有两种，一种方法是将蛋壳在 1050?下煅烧 2h15min，使蛋丙酸反应成丙酸钙;另一种方法是直接用蛋壳与丙酸反应制备丙酸钙。
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前一种方法由于需要在高温下煅烧，能耗大、成本高，而且在煅烧过程中会产生大量 C0 污染环境，并破坏了蛋壳的天然活性;后一种方法产率却 2p1EanqFDPw 比较低。因此以研究蛋壳为基本原料如何用直接法制备丙酸钙，提高丙酸钙产 率，使其成为一种既节省能源，又降低成本，同时有利环保的工业生产方法，成为当 务之急。
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【实验目的】 1.了解防腐剂的相关知识清楚丙酸钙作为防腐剂的优点; 2.了解丙酸钙性质和制备原理及方法; 3. 掌握固体试样的粉碎方法，过筛要求，减压过滤及蒸发浓缩的实验方法; 4. 掌握 EDTA 的标定，产品纯度的测定及相关的分析方法; 5. 掌握重结晶技术。 【实验原理】 1.丙酸钙，Ca(CHCHCOO)，性状白色结晶性粉末，熔点 400?以上(分解)，322 无臭或具轻微特臭。可制成一水物或三水物，为单斜板状结晶，可溶于水(1g 约 溶于 3mL 水)，微溶于甲醇、乙醇，不溶于苯及丙酮。10%水溶液 pH 等于 7.4。RTCrpUDGiT 应化实验:食品防腐剂丙酸钙的制备 对热和光稳定。在 200210?无水盐发生相变，在 330340?分解为碳酸钙。 ~~ 2.与其它食品防腐添加剂相比，丙酸钙具有以下优点: 1)有效钙含量高、溶解性能好，防腐保鲜的同时还具备补钙作用。 2)丙酸钙不仅可以延长食品的保质期，而且它还可以通过代谢作用被人体吸收， 这是其它防腐剂无法比拟的。 3)丙酸钙水溶性好，溶解速度快，溶液清澈透明。
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