FFJ-5的体外抗肿瘤活性及其机制的研究
目录
摘要........................................................................................................................................... I Abstract .................................................................................................................................... III 第一章引言 (1)
第二章FFJ-5的体外抗肿瘤活性研究 (7)
2.1 实验材料 (7)
2.1.1 细胞株 (7)
2.1.2 主要仪器 (7)
2.1.3 药品和试剂 (8)
2.1.4 试剂配置方法 (9)
2.1.5 药品配置方法 (9)
2.2 实验方法 (10)
2.2.1 细胞培养 (10)
2.2.2 MTT法检测细胞生长活力 (10)
2.2.3 流式细胞术检测细胞周期 (11)
2.2.4 Hoechst33342/PI双染法检测细胞凋亡 (11)
2.2.5 统计学分析 (12)
2.3 实验结果 (12)
2.3.1 FFJ-5抑制肿瘤细胞生长 (12)
2.3.2 FFJ-5阻滞细胞周期抑制肿瘤细胞增殖 (15)
2.3.3 FFJ-5诱导肿瘤细胞凋亡 (16)
2.4 讨论 (18)
2.5 小结 (19)
第三章FFJ-5对EGFR-Akt-PKM2信号通路影响 (21)
3.1 实验材料 (21)
3.1.1 细胞株 (21)
3.1.2 主要仪器 (21)
V
3.1.3 药品和试剂 (22)
3.1.4 试剂配置方法 (23)
3.1.5 药品配置方法 (25)
3.2 实验方法 (25)
3.2.1 细胞培养 (25)
3.2.2 ATP检测 (25)
3.2.3 细胞内pH检测 (26)
3.2.4 罗丹明123检测线粒体膜电位 (27)
3.2.5 Western blot检测蛋白表达 (27)
3.2.6 统计学分析 (28)
3.3 实验结果 (28)
3.3.1 FFJ-5降低肿瘤细胞内EGFR/Akt蛋白表达及活性 (28)
3.3.2 FFJ-5降低肿瘤细胞内PKM2蛋白的表达 (29)
3.3.3 FFJ-5降低肿瘤细胞ATP的水平 (30)
3.3.4 FFJ-5降低肿瘤细胞内的pH (31)
3.3.5 FFJ-5降低肿瘤细胞线粒体膜电位诱导细胞凋亡 (33)
3.3.6 FFJ-5调控凋亡蛋白表达 (35)
3.4 讨论 (36)
3.5 小结 (38)
参考文献 (39)
附录 (45)
致谢 (47)
攻读硕士学位期间发表的学术论文 (49)
VI
引言
1
第一章引言
癌症是由异常细胞不受控制的持续性增殖和扩散而引起的严重威害人类健康的一
大类疾病[1]，包括100多种相关疾病。其特征之一是异常细胞迅速产生，其生长远远超过正常细胞的生长界限，并能够向机体临近部位和其他器官侵袭、转移，从而引起机体的病变，甚至危及生命。在世界范围内，癌症已经被世界卫生组织列入人类重大的公共卫生问题。2014年世界卫生组织关于癌症的调查报告指出：由于环境污染等因素影响，癌症严重威胁人们的健康，是全球病人的一个主要死亡原因，在2012年内共造成世界范围内约820万人死亡，并且估计，最近几十年内每年癌症确诊病例数将会有大幅度提高。预计将由2012年的1400万左右，到2030年上升至2200万[2]。根据美国癌症协会最新的调查报告显示，预计在2016年一年内, 美国将新增1,685,210例癌症患者，其中约595,690例面临着死亡[3]。在美国癌症已经成为导致病人死亡的第二大因素，并且在未来几年内将取代心脏疾病成为引发死亡的主要因素[4]。
由于我国处于经济社会的高速发展时期，许多诱发癌症的因素影响着人们的身体，因此癌症的防治形势也十分严峻，有调查显示，在我国癌症的发病率和死亡率也很高。平均每年新发现约310万癌症患者病例，因癌症死亡达到200万。据中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会调查结果显示，我国癌症的发病率在最近20年逐步升高，且呈现逐步上升的趋势[5]。2016年1月，CA-Cancer J Clin 发布了《2015年中国癌症数据统计》。赫捷院士的研究结果显示，2015年内我国预计共有429.2万新发现肿瘤病例，其中约281.4万癌症病例面临着死亡威胁。我国癌症患者所患癌症种类多样，以肺癌发病率最高，并且肺癌的死亡率居各种类肿瘤之首。除此之外，乳腺癌、胃癌以及肝癌也被列为高发肿瘤类型，是常见诊断的肿瘤类型[6]。中国现在已经是老龄化社会，随着我国老龄化进程的加快，我国癌症的发病率、死亡率还会继续上升。由于这些原因，癌症无论对国家、社会还是个人，都将造成沉重的负担，影响社会稳定和经济发展。因此，了解癌症的发生机制、寻找有效的抗肿瘤药物刻不容缓。
癌症是恶性肿瘤发展的结果[7]。恶性肿瘤的形成原因目前尚未完全研究清楚，主流的观点认为，癌症源自一个突变的单细胞，一个正常细胞，转变为一个肿瘤细胞，进而发展成为恶性肿瘤，这个转变需要经历许多过程[8]。这些变化是由内部因素和外部因素