实验四 制备细胞膜的方法

实验四 制备细胞膜的方法

实验目的：
1．体验用哺乳动物红细胞制备细胞膜的基本方法。
2．使用高倍显微镜观察制备细胞膜过程中细胞的变化。


操作指南
1．材料 新鲜的哺乳动物血液
2．用具 离心机，离心管，滴管，显微镜，载玻片，盖玻片，吸水纸，小烧杯。
3．试剂 柠檬酸钠或肝素（抗凝剂），生理盐水（质量分数为0．9%的NaCl溶液），蒸馏水或清水。


4．操作要点


准备一定量的新鲜的哺乳动物血液，如羊血或猪血，在冰箱中静置一昼夜。用滴管将上清液吸去。再吸取1 mL的沉淀物，放入离心管中，加入生理盐水2 mL，在2 000 r/min条件下离心5 min。去除上清液，在沉淀中再加入生理盐水2 mL，再离心一次，去除上清液，留沉淀备用。以上操作的目的是洗去血浆成分，避免血浆对血细胞的缓冲作用，从而使红细胞的溶血现象更加明显。

学生的实验操作如下。

（1）取一个5 mL的小烧杯，加入生理盐水2～3 mL。
（2）用滴管在沉淀的下层吸取一小滴血细胞，滴入小烧杯的生理盐水中，以达到稀释红细胞的目的，以免观察时，由于细胞密度太大，影响观察效果。

（3）取另一个滴管，在小烧杯中轻轻搅拌，然后吸取少量的血细胞稀释液，在载玻片的中央滴很小的一滴，加盖玻片。

（4）先在低倍镜下观察红细胞的正常形态，可见其边缘完整发亮。

（5）在盖玻片的一侧加一滴蒸馏水或清水，在另一侧非常小心地用吸水纸慢慢地吸引，防止把红细胞全部吸入吸水纸中而影响观察。边加水边观察，注意红细胞的形态变化。红细胞会随着水流向一侧漂移，观察时注意移动玻片。红细胞体积逐渐变大，变得非常鼓胀，在视野中可以找到少数胀破的红细胞，它们已失去完整发亮的边缘，变成弥散状。

5．需要注意的几个问题

（1）制作临时装片时，红细胞必须稀释，而且取红细胞的量要少。

（2）在高倍镜下观察，待观察清晰时，在盖玻片的一侧滴加蒸馏水，同时在另一侧用吸水纸吸引。上述操作均在载物台上进行，并随时调整镜筒高度，持续观察细胞的变化。在盖玻片一侧滴加蒸馏水的量要少，不能让盖玻片处于漂浮状态；同时在另一侧用吸水纸吸引时要小心，不要将血细胞吸走。


（3）要想取得好的观察效果，所用显微镜的放大倍数应在400倍以上。

（4）操作中要认真观察才能看到连续的变化过程。