病证结合动物模型的模式探讨(一)

病证结合动物模型的模式探讨(一)

作者：吴同玉,高碧珍,林山,李宇涛,李旻,俞洁,林晴

【关键词】病证结合；动物模型；以方测证

目前有关病证结合动物模型的模式多集中于病与证的关节点上,对于其中的“病”,有考虑为西医的“病”,有认为是中医的“病”,然后再结合中医的“证”,但对中医证的模型成功与否则缺乏确切依据。笔者认为,病证结合动物模型应该是现代医学的“病”结合中医的“证”,通过“以方测证”的方式验证中医“证”的成功与否,这在目前比较切实可行。现简述如下。

1关于病证结合动物模型的模式

1.1多因素复合模型

多因素复合制作病证结合动物模型是指在中医药理论指导下,适当结合现代医学理论与实验动物科学知识,分别(或同时)采用传统中医学病因复制证候动物模型和采用现代医学病因复制疾病动物模型,使模型动物同时具有疾病与证候特征1]。如采用饥饿、疲劳、寒湿、惊恐、高脂饮食等多因素复合方法复制气虚血瘀证动物模型。此种模式考虑较全面,出发点是中医理论的指导思想,结合各种复合因素制作动物模型,但需要研究的是各种不同成因所致模型证候可能有所差别。

1.2基于西医“病”的模型动物的宏观体征观察中医的“证”

对西医疾病模型进行中医辨证以建立病证结合模型2]是指在西医疾病模型的基础上,不施加人为干预因素,在疾病模型建立过程中或建成后,观察并检测疾病模型是否具备中医证的特点(如寒热、虚实、阴阳、血瘀等),即观察疾病在形成过程中“证”的演变过程及疾病模型成立后表现的中医证型,进而确定某一特定的病证结合模型。然而,由于动物和人之间的差异性,决定了其症状体征的复杂性以及一些重要的体征指标(如舌象、脉象、肤色和情志症状等)难以在动物身上体现和模拟等一系列问题,使动物模型中体现出来的症状和体征多半不具有或不能反映中医证候的属性3]。因此,宏观体征观察到的征象很难切实运用于传统中医辨证,操作性不太强。

1.3从西医病理判断中医的证

如采用高脂高热量饲料喂养并结合小剂量链脲佐菌素(STZ)腹腔注射的方法制备实验性2型糖尿病大鼠模型,在此模型基础上再予强的松龙和肾上腺素注射制备2型糖尿病心血瘀证大鼠模型,从血脂增高、主动脉内壁下层增厚伴前期斑块和红细胞压积偏高和心血管形态学改变认为心血瘀证模型成功4]。中医的证其实质即疾病的病理,如现代医学的理化检查、病理切片等,目前即使与中医证的相关性不确定,但都在一定程度上反映了中医证的实质。血瘀证的研究目前较多,主要与机体的血液流变学、血管壁等病变密切相关,很多情况下可以作为血瘀的判断指标,但与中医其他证候(如气虚、阳虚、气滞等)相关的理化指标则说服力较小,需要进一步研究。

1.4在中医“病”的基础上建立中医的“证”

病证结合模式应该是在中医病的基础上结合中医的“证”,如在临床诊疗中,首先确定中医为何病,然后确定证候类别。如果是动物模型试验,也应该是先建立中医的“病”,然后建立中医的“证”。这种动物模型思路比较倾向于中医,但在动物模型试验方面尚有一定的困难。我们常说的中医疾病如咳嗽、黄疸、胃痛、腹痛等名称,往往是现代医学的症状。“症状(症)”是人体在疾病状态下发出的信息；“证候”是疾病在瞬间的症状总和,是信息群；“证”是由证候归纳总结出来的对疾病过程中所处阶段的病位、病性、病因和病势等的病理性概括；而“病”则是症状和证候的主体,体现疾病全过程的特点和规律。由于中医的病名很多情况下很难体现疾病的全过程和规律,因此,病证结合模型如果在中医“病”的基础上结合中医的“证”似乎略有不妥。

1.5在中医“证”的基础上建立西医的“病”

即用传统的中医理论为指导,运用中医特有的六淫、饮食、情志、劳倦等为致病因素建立符

合中医病因的证候模型,然后予以药物、手术等方法建立西医病毒模型。如以过食酸味法建立脾气虚证动物模型,并在此基础上连续灌胃2-乙基亚硝胺120d,可以建立脾虚胃癌病证结合动物模型5]。此种模型一方面继承了中医的思路,另一方面注重对现代医学疾病的认识。其实,运用传统病因致病建立证候模型,模型成立时疾病也出现了,再运用西药造疾病模型,新的证候又出现,因此,无法确保“证”的重复再现。

1.6方证对应模式

尽管可以常用方、古方、效方、名方、经方等为研究对象,综合运用当代生物学、数学、化学、物理学和信息科学等最新进展提供的新理论、新技术及新方法,研究各方剂与证候之间的对应关系,从证候与方剂的“方证对应”关系来揭示证候的实质和方剂6]。但有学者认为上述方法仍然存在问题,如温阳法、补脾气法、滋阴法等均可使阳虚的指标得到不同程度的纠正。其结果可能会出现这样一种情况,即一个辨证具有上述外观表现的动物,通过助阳药验证,得出结论为肾阳虚模型,而实际上这是一个脾阳虚模型或脾气虚模型7-8]。中医传统的经典方剂是为相应的证候类型而设,如肾阴虚运用六味地黄丸、心脾血虚运用归脾汤等,方证对应是中医诊治疾患的基础,至于复方中药的复杂成分机理亦有待于未来详细研究。

2关于病证结合中“病”的认识

目前对病证结合中“病”的认识大致有两种倾向,即大多数学者认为是现代医学的“病”,部分学者认为应该是中医的“病”。现代医学对疾病的认识较为客观、全面,能够从总体上把握疾病的特点和规律；而中医的疾病名称很多情况下与现代医学的症状名称相同,难以从整体上掌握疾病的特征。对此,笔者亦首肯应该是现代医学的“病”结合中医的“证”。现代医学对疾病的认识相比中医学更为微观,其主要是从病理变化特点上研究,而中医学主要是从宏观表象上阐述,两者侧重点不同。而要进行病证结合模型研究,应该利用已有现代医学“病”的模型结合中医的“证”较为合适。证是病变的瞬间病理特征,其本质就是与之相关的病理过程所包含的机能、代谢和形态结构的异常变化。以“病理过程与证结合”作为“中西医结合点”,是中西医结合研究思路与方法学的合理选择,并且有可能推动中西医结合在理论研究上的创新与突破9]。

银屑病药效学动物模型及其在中药新药研究中应用的思考

006111 7 栏目中药药物评价>>非临床安全性和有效性评价 标题银屑病药效学动物模型及其在中药新药研究中应用的思考 作者韩玲 部门 正文内容 审评一部韩玲 摘要：本文综述了银屑病药效学动物模型的进展，对治疗银屑病中药新药 药效学研究方面存在的问题进行了分析，提出了应结合银屑病发病机制的 研究进展完善药效学方法学研究的建议。 银屑病是一种慢性复发性皮肤病，其发病机制复杂，至今尚未明了。可能是一种具有基因遗传特性的疾病，也与感染、内分泌机能障碍、免疫功 能紊乱等有关。中医学认为以风湿毒邪内侵为标，血虚、血燥为根源，血 热、血虚、血瘀是本病的基本病机，故清热解毒、凉血、活血化瘀、祛风 除湿成为治疗本病的基本法。 银屑病的组织病理学主要表现为角质形成细胞过度增生、炎症细胞聚集和真皮乳头部血管增生扩张三大特征，从而出现角化过度、角化不全、颗 粒层消失、棘细胞层增厚等。尽管许多不同的动物模型能复制银屑病的某 个方面的病理特征，并能解释部分病因，但长期以来仍缺乏一种能够研究 所有有关的潜在因素的动物模型。即-缺乏理想的动物模型。 一、银屑病药效学动物模型 银屑病动物模型是根据银屑病的特征，人为建立的一种与之相似的模型。 有人总结了银屑病动物模型的建立过程，包括以下4个不断完善的阶段： 1．诱发性动物模型 该模型是通过工方法在动物，如豚鼠、大鼠等皮肤上诱发银屑病样增生。

其方法包括紫外线照射、化学刺激剂外涂或药物外涂、缺乏必须脂肪酸的饲料喂养等。这些方法均为过度增殖模型，可引起表皮增生加快。但这些方法仅是针对表皮损伤的一种迟发反应，持续时间较短。 如缺乏必须脂肪酸饲料喂养的大鼠模型，因缺乏必须脂肪酸，故可使大鼠皮肤逐渐出现角化过度、棘层肥厚、基底细胞有丝分裂加快，DNA合成增加等变化，表皮细胞呈慢性增生状态，与药物诱发的急性表皮增生相比，其与银屑病更为相似。 如心得安诱导银屑病动物模型，是利用心得安特有的药理作用，即心得安可阻断角阮细胞的β-肾上腺能受体而降低了细胞内cAMP水平所致。应用后可出现动物表皮角化过度、角化不全和棘层肥厚等类似银屑病的组织病理改变，其皮损并非是刺激性皮炎。黄畋[1]和Gaylarde[2]等分别用心得安成功地在豚鼠背部和耳部皮肤上制备了银屑病样皮肤模型，并发现药物可抑制其所致的表皮异常角化与增殖、角化不全等。 已有研究[3-4]发现IL-20是与银屑病密切相关的细胞因子，在体外可明显促进角质形成细胞增殖；IL-20的转基因鼠可出现皮损，其组织病理学改变与人类银屑病有相似之处；此外，IL-20受体在银屑病皮损处有高表达。有人在心得安造模的基础上，利用原位杂交等方法检测了动物皮损中IL-20 及角蛋白的K14,K16，K17表达水平的变化情况，发现正常皮肤IL-20的表达仅限于基底层，且为低表达，但模型动物皮损中基底层及棘层均有高表达，且显著高于正常组。应用IL-20反义寡核苷酸外涂皮肤后，可使其明显好转。也观察到皮损中角蛋白K14,K16表达水平明显增高。提示心得安所致的豚鼠银屑病样动物模型不仅在组织病理学，而且在分子水平上与人类银屑病皮损一致。从而在分子水平上证实了此动物模型的可行性。 上述这些方法的优点是可在短时间内复制出某些方面与银屑病相似的动物模型，方法简便、易行、重复性较好，可用于表皮增殖动力学、药物筛选等研究，但这些模型只是模拟了银屑病中的部分组织病理特征，在许多方面与诱发或自然产生的疾病毕竟存在差异。 2．裸鼠-皮损移植模型 该模型是将银屑病人皮损组织移植到裸鼠背部。其具体方法是，选择经组织学证实，2周内未经任何治疗的寻常型银屑病患者的典型皮损，麻醉后取全层皮肤，裸鼠背部麻醉后切除部分圆形皮肤至肌肉筋膜，将皮损间段缝合到移植点。因裸鼠是先天性无胸腺小鼠，其免疫缺陷，在一定情况

阿尔茨海默病动物模型研究进展

阿尔茨海默病动物模型研究进展 发表时间：2019-09-23T09:21:11.433Z 来源：《医药前沿》2019年22期作者：朱恒延郭燕君（通讯作者） [导读] 阿尔茨海默病动物模型是研究人类阿尔茨海默病发病机制和寻求治疗方法的重要工具。 (嘉兴学院医学院浙江嘉兴 314001) 【摘要】阿尔茨海默病动物模型是研究人类阿尔茨海默病发病机制和寻求治疗方法的重要工具。本文在总结近年来最新研究成果的基础上系统阐述阿尔茨海默病研究中常用的动物模型，为AD的生物性特征和预防研究提供帮助。 【关键词】阿尔茨海默病; 动物模型; 研究进展 【中图分类号】R745 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2019）22-0010-02 Research progress of animal models of Alzheimer's disease Zhu Hengyan,Guo Yanjun (communications author) Medical College of Jiaxing University, Jiaxing, Zhejiang 314001, China 【Abstract】Animal model of Alzheimer's disease is an important tool for studying the pathogenesis of human alzheimer's disease and seeking for treatment. On the basis of summarizing the latest research achievements in recent years, this paper systematically describes the animal models commonly used in Alzheimer's disease research, providing help for the biological characteristics and prevention of AD. 【Key words】Alzheimer's disease; Animal model; Research progress 阿尔茨海默病是以进行性记忆缺失和痴呆为特征的神经退行性疾病。65岁前发病称早老性家族性痴呆；65岁后发病称迟发的老年性痴呆。典型病理变化为细胞外由β淀粉样蛋白(Amyloid-β，Aβ)形成的老年斑块，过度磷酸化的tau蛋白组成的神经元纤维缠结［1］。AD分为早发的家族性AD(Familial AD，FAD)和迟发的散发性 AD(Sporadic AD,SAD)。SAD发病机制主要与遗传和环境有关。胰岛素通路和能量代谢障碍、糖尿病，脑外伤，神经炎症反应以及Apo Eε4等位基因等都是AD的危险因素［2］。目前尚无有效安全的治疗AD的方法及药物。科学家们一直试图建立与AD发病机制接近的灵长类动物模型。本文着重探讨与AD相关的转基因动物模型和灵长类动物模型的现状及特点作一综述。 1.AD相关的转基因模型的特点 研究证实多数 FAD患者是由PSEN1突变所致［3］，PSEN1第4～12外显子之间是主要基因突变位点，近年来，研究者们建立了几种AD PSEN1基因突变的转基因模型，包括PSEN1(A246E)[4]、PSEN1(M146L)[4]、PSEN1(M146V)[4]、PSEN1(P264L)[4]、 PSEN1(P117L)[4]、PSEN1-YAC[4]等。研究者们发现携带人PSEN1突变的转基因AD小鼠不能模拟出FAD的典型特征，因此转入人PSEN1基因突变的同时加入PSEN2其他突变基因，用这种方法成功建立了十多种转基因AD小鼠，而且十多种AD转基因小鼠都能能表现出FAD部分神经病理学特征和行为学上的改变。目前AD转基因小鼠是研究阿尔茨海默病发病机理和治疗方面经典的动物模型，但是已知的这些PSEN1转基因模型小鼠同时不能模拟FAD的全部神经行为学和病理学特征。灵长类动物由于在生理结构和生物化学方面与人类高度相似。因此急需建立一种灵长类非人动物模型，探索这种模型是否能够更好的模拟FAD的多种神经行为学及病理学的特征。 2.FAD灵长类非人动物模型研究现状 近十几年来，随着转基因技术进步和灵长类动物转基因技术的发展，使得建立灵长类非人阿尔茨海默病转基因模型成为可能[5]。由于从发病机制上看FAD是由APP或PSEN1、PSEN2突变所致，专家们尝试将结合其他突变基因(PSEN2、APP和 MAPT) 和PSEN1突变来建立FAD转基因灵长类非人动物模型。上述方法在理论上能够模拟出FAD的发病原因和疾病特征，而且可以通过遗传保种，在建立模型动物群体方面表现出优势。但是灵长类非人阿尔茨海默病转基因动物模型面临严峻的问题：（1）转入AD致病基因的灵长类非人转基因动物通常需十几年才呈现AD特征性的神经病理学和行为学改变，灵长类动物模型效率低、成本高，尚未见成功模型报道；（2）短期难以开展对转基因的个体开展临床病理鉴定和行为学的评价。PSEN1在灵长类动物中非常保守。有关非人灵长类动物中AD基因突变是否与人类相似方面的研究较少。John J．Ely发现一只黑猩猩PSEN1突变[5]，其PSEN1突变的特征未知；与其他年龄及性别相匹配的未突变PSEN1黑猩猩相比，其是否出现神经退行性病理改变和行为学变化均不知道；其子代是否有PSEN1基因突变、行为学及病理变化是否出现等还没有报道。 目前AD尚未研制出安全有效的药物和方法，迫切需要能模拟AD经典病理变化的理想动物模型，以前建立在啮齿类的动物模型各有优缺点，不能全面体现AD的病例神经行为学方面的全部改变。目前被大家所认可的转基因动物模型也有待完善。利用基因筛选和基因修饰分子生物学技术建立AD灵长类非人动物模型意义重大，对于进一步明确发病机理，AD药物的治疗、开发和筛选，早期诊断有重要的应用价值和前景。 【参考文献】 [1] Grundke-Iqbal I,Iqbal K,Tung YC,et.al.Abnormal phosphorylation of the microtubule associated protein tau(tau) in Alzheimer cytoskeletal pathology.Proc Natl Acad Sci U S A 83(13):4913-4917. [2] Iqbal K,Grundke-Iqbal I.Alzheimer's disease,a multifactorial disorder seeking multitherapies.Alzheimers Dement 6(5):420-424. [3] Ballard C,Gauthier S,Corbett A,et al.Alzheimer’s disease[J].Lancet 2011,377(9770):1019-1031． [4] Wen P H,Shao X,Shao Z,et al.Overexpression of wild type but not an FAD mutant presenilin-1 promotes neurogenesis in the hippocampus of adult mice[J].Neurobiol Dis,2002,10(1):8-19． [5] Chan A W.Progress and prospects for genetic modification of nonhuman primate models in biomedical research[J].ILAR J,2013,54(2):211-223． [6] Joseph M.Erwin P RH J.One Gerontology:Advancing Understanding of Aging through Studies of Great Apes and Other Primates[M].Aging in Nonhuman Primates，Erwin Jm H P,Basel:Interdiscipl Top Gerontol,Karger,2002:31,1-21. 基金项目：浙江省科技计划项目(2017C37173);嘉兴学院南湖学院重点SRT资助项目(NH85178445)；2016年度浙江省教育技术研究规划课题(JB039)

中医证候动物模型的研究进展

内蒙古中医药 文献研究 生进行“医—患”检查练习，使学生就能够清楚眼部的体征。通过这种教学方式，除达到增强理解和加深记忆外，还激发了学生的学习兴趣，调动了主动参与学习的积极性。 ３．３示教练习、 组织有序：项目有视力检查、色觉检查、结膜囊冲洗法、滴眼药水法、涂眼药膏法、泪道冲洗法、外耳道清洁法、外耳道滴药法、鼻腔滴药法等。采用的方法为：①课前准备：讲授适应症、禁忌证、操作前准备、操作过程；②示教练习：教师示教应统一操作程序、统一标准、示教设备要齐全，练习用具数量及完好程度要有保障。根据情况组织全班同学示教练习和分组示教练习。如远视力检查，采取全班示教—分组练习；如滴眼药水法、鼻腔滴药法，全班分４组，每组１位教师先示教，然后２位学生一组互换练习。教师应为学生创设和谐宽松的教学环境，使学生以愉快的心情投入练习；在分组练习过程中，教师应加强巡回指导，及时了解学生在学习态度、学习纪律、实践操作方法等方面存在的问题，对不规范的操作予以及时纠正。③课堂考核评价。 考核对学生而言是一种既有压力也有动力激励机制，在课堂教学结束之前约１５分钟进行，对不同的内容分别随机抽取几对同学采用“真人真做”，先由全班同学进行讨论，然后教师对不足、不规范的操作给予补充和纠正；对表现好、突出的同学给予表扬；教师对课堂教学设计上的不足也应该进行自我评价，充分发挥课堂小结对教学效果的反馈与促进作用。 ３．４利用录像、 充实教学：项目有眼科常用检查法、眼科护理管理、眼科常用护理技术操作、耳鼻咽喉科常用检查法、耳鼻咽喉科常用护理技术操作、口腔科常用检查及口腔保健等。通过录像弥补了理论教学的不足，解决了实践教学的困难。今后还要鼓励教师制作必要的操作技能标准录像带和多媒体课件。 ３．５肢体语言、 生动课堂：教师适当运用肢体语言来体现所讲授的内容，则能起到事半功倍的效果。如在讲授鼻出血的简易 止血方法时（指压止血法）、鼻科病人的护理正确擤鼻法时，若 仅从理论上讲听起来很抽象、乏味。如果教师在讲授理论知识后，再演示指压止血法、正确擤鼻法，并要求学生一起动手练习，由于鼻出血有些同学经历过，却不知道只用两个手指都能止血；擤鼻涕每个人都擤过，却不知道正确的擤鼻方法，这样做，可使学生耳目一新，课堂气氛活跃起来了，同时也展现了肢体语言的独特魅力，使学生所学的理论知识得到了升华，记忆深刻。 ３．６案例讲述、 有助教学：临床学科的教师要激发学生的学习兴趣采用讲故事就是一个很好的办法。临床学科的教师把临床上典型病例带入课堂讲解就是最好的故事，教师把故事带进课堂，用讲故事的方法去讲理论，可以避免那种陈旧的说教式的讲课风格。幽默的语言，有趣的故事，在谈笑中深入浅出地把道理讲得通俗易懂，让学生在故事天地中受到教育和启发，应该成为职业学校教师必备的素质。 ４良好的课堂环境有利于学生综合素质的培养 要把一堂课上好，良好的课堂秩序是前提和保证。在课堂上要求每一位学生必须遵守纪律，养成良好的个人行为习惯；教师在组织教学过程中要善于捕捉学生的优点，并放大他（她）的优点，这样既能有效帮助学生建立自信，同时也通过树立榜样来激励和教育普通学生向优秀的学生学习，营造良好的学习氛围。对部分学生中存在的不足则以恰当的方式给予纠正。如：有的同学习惯趴在桌子上读书写字；有的看书写字把书本斜着放；有的女学生喜欢留很长的刘海，甚者低头时整个脸都遮住了。任其发展不仅是影响形象，还会影响视力，在讲授屈光不正病人护理时，通过组织同学进行近视的成因和预防讨论就可以帮助纠正这些不良习惯；另一方面通过给她们介绍护士应有的良好职业形象，帮助她们纠正不良姿态，不断提高其自身素养。 中医证候动物模型的研究进展 肖芸＊ 方肇勤＊ ＊上海中医药大学（２０１２０３）２００８年５月６日收稿 摘要：建立动物模型是医学研究的重要手段，而中医对于疾病的发病、诊断、治疗等一直多以人为观察对象。本文旨在总结中医证候动物模型的研究进展，为继续进行中医证候实验研究提供思路与借鉴，建议今后的中医动物实验研究，侧重以下方面：建立中医证候动物模型的非创伤性辨证论治体系、包括相应的辨证标准；利用分子生物学的快速进展，从基因、蛋白质等微观层次研究中医证本质；开展遗传性病证动物的研究等。关键词：中医；证候；模型 中图分类号：Ｒ２４１．３ 文献标识码：Ｂ 文章编号：１００６－０９７９（２００８）０５－００６４－０３ １中医证候动物模型的制备 １．１模型种类： 迄今为止的证候模型，覆盖广泛，包括八纲辨证、脏腑辨证、气血津液辨证、六淫辨证、六经辨证、卫气营血辨证等［１￣９］。其中， 按照脏腑辨证，包括：肾虚证（肾阴虚、肾阳虚证）动物模型、脾虚证动物模型、肝脏证候（肝郁、肝阳上亢）动物模型、心脏证候动物模型（心气虚）、肺脏证候动物模型等。按照气血津液辨证，包括：气虚证动物模型、血虚证动物模型、血瘀证动物模型等。按照六淫辨证，包括：寒证、热证动物模型，按 照卫气营血辨证，包括温病动物模型。另外还有痹证动物模型、厥脱证动物模型等。各种模型以脾虚、肾虚、血瘀证最多。１．２造模方法： 多可分为三种［１０］。１．２．１中医病因模型： 在中医病因学说的基础上，利用各种病证模型，如冷水浴制造阳虚模型；温湿箱加高糖高脂饮食制作温病湿温之湿热中阻模型。还有利用中药四气五味特性制成的特色模型，如青皮、枳壳、附子制作的糖尿病气阴两虚证动物模型［１１］。 １．２．２西医病理模型： 发现某些药物的毒性反应、或手术后的不良反应所致特异病理改变与中医某些证候中典型的病理改变 ６４

氧化苦参碱对银屑病样小鼠模型氧化应激的拮抗作用

氧化苦参碱对银屑病样小鼠模型氧化应 激的拮抗作用 (作者：___________ 单位： __________ 邮编：____________) 【摘要】目的研究氧化苦参碱对银屑病样小鼠模型氧化应激的拮抗作用，探讨其防治银屑病的机制。方法采用注射雌激素刺 激小鼠阴道上皮组织增生的方法复制银屑病小鼠动物模型，同时给予 不同剂量的氧化苦参碱干预，实验10d后，取小鼠血清测定超氧化物歧化酶(SOD)总抗氧化能力(T-AOC)、丙二醛(MDA)谷光甘肽(GSH) 及一氧化氮(NO)水平的含量，并观察氧化苦参碱对小鼠阴道上皮细胞有丝分裂的影响。结果氧化苦参碱80、40和20mg? kg-1均可抑制小鼠阴道上皮的有丝分裂(P0.01);氧化苦参碱80mg - kg-1可升高雌激素周期小鼠血清SOD和T-AOC的含量(P0.05，P0.01)，降低MDA GSH和NC含量(P0.01);氧化苦参碱40mg?kg-1可降低雌激素周期小鼠血清MDA和NC 含量(P0.05，P0.01)。结论氧化苦参碱对实验性银屑病具有保护作用，该作用可能与其抑制表皮细胞增殖并降低血清 MDA GSH及NO含量，升高SOD和T-AOC的含量有关。 【关键词】氧化苦参碱；银屑病;有丝分裂指数；超氧化物歧化酶；丙

二醛;谷光甘肽 氧化苦参碱（Oxymatrine , OMT是苦豆子生物碱的一种，具有抗炎、抗增殖、改善机体免疫功能等作用［1］。银屑病（psoriasis）是一种以皮肤组织为主要病理改变的慢性炎症性皮肤病。近年来研究表明，银 屑病患者体内释放大量的超氧阴离子自由基，对生物膜的结构造成广 泛损伤，引起皮肤炎症的发生［2-3］。作者通过给小鼠注射己烯雌酚的方法复制银屑病样小鼠模型［4］，观察氧化苦参碱对银屑病小鼠血清超氧化物歧化酶（SOD）总抗氧化能力（T-AOC）、丙二醛（MDA）谷光甘肽（GSH）及一氧化氮（NO）水平及阴道上皮组织细胞有丝分裂的影响，探讨了其防治银屑病的机制。 1材料与方法 1.1实验材料 1.1.1实验动物昆明种雌性小鼠，体重18?22g，宁夏医科大 学实验动物中心提供，合格证SYXK （宁2005- 0001）。 1.1.2药品氧化苦参碱（宁夏制药厂，批号64041201）;甲氨蝶呤（Methotrexate ，MTX浙江海正药业股份有限公司，批号080903A）; 己烯雌酚（Diethylstilbestrol ，DES上海通用药业股份有限公司，批号090203）;秋水仙碱（Colchicin ，CLC昆明制药厂，批号841201）。 1.1.3 试剂和主要仪器SOD MDA GSH T-AOC和NO测试盒（南 京建成生物工程研究所，批号20091115）;752N紫外可见分光光度计（上海精密科学仪器有限公司）。

实验动物模型

第章实验动物模型 第一节实验动物选择的原则 第二节生物科学研究中的动物模型

实验动物模型 选择什么样的实验动物作实验是生物医学研究工作中一个重要环节，不能随便选用一种实验动物来作科学研究，因为在不适当的动物身上进行实验，常可导致实验结果的不可靠，甚至使整个实验徒劳无功，直接关系到科学研究的成败和质量。事实上，每一项科学实验都有其最适宜的实验动物。

第一节实验动物选择的原则 ?科学研究工作中实验动物的选择，首先应根据实验目的和要求来选择，其次再参考是否容易获得、是否经济，是否容易饲养和管理等情况。 ?在实验动物选择上必须注意三点，即实验动物的种类（Species）；品种（Breed）或品系（Strain）；质量和实验动物的健康状态。

尽量选择与研究对象的机能、代谢、结构及疾病特点相似的实验动物； ?生物医学研究的根本目的是要解决人类疾病的预防和治疗问题。因此，在选择实验动物时应优先考虑的问题是动物的种系发展阶段。在可能的条件下，尽量选择那些机能、代谢、结构和人类相似的实验动物作实验。一般来说，实验动物愈高等，进化愈高，其机能、代谢、结构愈复杂，反应就愈接近人类，猴、狒狒、猩猩、长臂猿等灵长类动物是最近似于人类的理想动物。

第二节生物科学研究中的动物模型 一、动物模型的意义和优越性 ?生物科学研究的进展常常依赖于使用动物模型作为实验假说和临床假说二者的试验基础。人类各种疾病的发生发展是十分复杂的，要深入探讨其疾病的发病机理及疗效机理不能也不应该在病人身上进行。可以通过对动物各种疾病和生命现象的研究，进而推用到人类，探索人类生命的奥秘，以控制人类的疾病的衰老，延长人类的寿命。

银屑病药效学模型及结果评价-姚治 孙涛

发布日期20061110 栏目化药药物评价>>非临床安全性和有效性评价 标题银屑病药效学模型及结果评价-姚治孙涛 作者姚治孙涛 部门 正文内容审评三部姚治、孙涛 摘要：近来国内创新性的抗银屑病药物的申报呈上升趋势，但由于银屑病发病机制不完全清楚，现有药效学模型与 临床的相关性尚存在一定问题，给研究和评价带来一定困难。本文整理总结了现有的一些抗银屑病体内外药效学模 型和试验方法，并对其结果的评价价值做了一定探讨。希望对相关研究和评价提供参考。 关键词：银屑病、药效学、评价 银屑病是以表皮角质形成细胞过度增殖和分化不全、真皮浅层微血管扩张并伴有炎症反应为病理特征的表皮角化性皮肤病，其发病机制迄今尚未完全清楚。综合近年来的研究报道，关于银屑病发病的新概念认为：银屑病是多基 因遗传背景下T细胞失常的免疫性疾病，表皮过度增殖与分化异常和炎症等疾病现象涉及到细胞和分子水平的异常 调控，后者是指在银屑病中异常表达的免疫分子、细胞因子、炎症介质和调节分子。国外文献报导ET-1(内皮素1)、 sE-selectin（可溶性选择素E）、sIL-2R（可溶性白介素2受体）、IL-6（白介素6）、IL-8（白介素8）、CD4+/CD8+ 等与银屑病有关。 下面简要介绍一下几种与银屑病有关的体内外药效学试验模型及结果评价： 一、体内试验 表皮细胞增殖过快和角化不全是银屑病的基本病理特点，小鼠尾部鳞片的表皮缺乏颗粒层的形成，雌激素周期的小鼠阴道上皮细胞增殖活跃，上皮细胞转换加快，均与人银屑病表皮病理特征相似。药物如能抑制小鼠阴道上皮有 丝分裂和促进鼠尾颗粒层形成，就可能具有抗银屑病作用。下面两种方法是被广泛使用的较为经典的银屑病药效学 模型： 1、对小鼠阴道上皮细胞有丝分裂的影响试验 雌性小鼠预先注射雌激素（如乙烯雌酚）数日，使其处于雌激素生理周期。阴道给予药物数日，末次给药后腹腔注射秋水仙碱以终止细胞分裂。取小鼠阴道组织，固定，染色，观察阴道上皮细胞的有丝分裂指数。常以甲氨蝶呤 为阳性对照。 若试验结果表明药物有抑制阴道上皮细胞的有丝分裂的作用，则可提示对银屑病的疗效。 2、对小鼠尾鳞片表皮细胞生成的影响试验 取小鼠，将试验药物直接在尾部外涂给药一定时段(一般为2周)，取尾根部皮肤，固定，染色，测量鼠尾表皮厚度和颗粒形成情况。 若试验结果表明药物有促进鼠尾颗粒层形成作用，则可提示对银屑病的疗效。 3、对盐酸普奈洛尔所致豚鼠耳部皮肤银屑样皮损的影响 采用盐酸普奈洛尔乳剂型搽剂（5％）连续涂抹豚鼠两侧耳廓皮肤，每日2次，连续2周后取少量豚鼠的两侧耳廓皮肤，固定，染色，光镜观察评价造模质量。于耳廓皮肤涂抹给药，每日2次，连续2周。同法观察耳部皮肤的角 化层、颗粒层、棘细胞层、基底细胞层及固有层的变化情况，并测定表皮厚度。

帕金森病模型

帕金森病模型 对帕金森病发病机制及治疗方法的研究依赖于成功的帕金森病模型的建立。采用的模型如下： 利血平模型 利血平能不可逆地封闭单胺类物质的运输，影响细胞内囊泡的单胺再循环，故而于世纪年代被用于制作大鼠模型。当喷齿类动物注射利血平后，由于囊泡内摄取的多巴胺、轻色胺和去甲肾上腺被封闭，在胞质内被降解，快速降低单胺水平，导致肌肉僵硬等的症状。 甲基苯丙胺模型 与利血平一样，甲基苯丙胺作用于多巴胺神经末梢，使多 巴胺水平明显下降，而对黑质多巴胺能神经元胞体的影响很小。有报道称对多巴 胺能神经元的毒性作用由过氧化亚確酸盐的产生介导，这种毒性作用能够被抗氧化剂所阻 断。该模型的不足主要是没有出现组织病理学改变。 轻多巴胺模型 轻多巴胺，不能透过血脑屏障，只有直接脑内给药才能 造成中枢神经系统多巴胺能神经元损伤。注入黑质区内的能选择性引起多巴胺能 神经元的死亡。注入纹状体内的先被神经末梢摄取，再通过逆轴突转运至黑质的 细胞体，也引起多巴胺能神经元的死亡。但此过程呈慢性渐进性改变，类似人体内的病程可用以建立早、中期模型。 鱼藤酮模型 天然有机杀虫剂鱼藤酮容易透过血脑屏障，能抑制线粒体呼吸链复合物的活性，选择性引起黑质和纹状体多巴胺能神经元变性死亡。根据等的方法制备鱼藤酮大鼠昆明理工大学博士学位论文 模型，将渗透微菜埋于大鼠背部皮下，再从其下颂角静脉插管与微栗相连，每日 灌注鱼藤酮，连用周，大歲表现为身体屈曲，运动减少，有时伴有强直，震颤和自发的旋转行为。 百草枯模型 百草枯，是一种除草剂，其结构与的活性代谢物相似，被认为 是可能的危险因素。可以速度缓慢地穿过血脑屏障。小鼠注射后引起黑质和纹状 体多巴胺能神经元的减少，继而出现随意运动的减少。 模型 能通过血脑屏障，在星形胶质细胞中单胺氧化酶的作用下转变为它 的活性形式，被多巴胺转运体摄人多巴胺能神经元，从 而特异性地对多巴胺能神经元产生毒性作用。的毒性作用被认为是抑制线粒体复 合物的活性产生氧化应激的作用机制说明线粒体功能障碍在典型发病中起重 要作用。此外，导致的产生，而是引起多巴胺能神经元凋亡的原因之一。 损毁模型是研究使用最普遍的动物模型。通常经皮下、腹腔、静脉或肌内注射给药。 除以上模型外，还有基因敲除模型、转基因模型、免疫损伤模型、拟胆碱药物模型和机械损伤模型等。目前还没有一种完全符合理想标准的模型，但总的来说， 小鼠模型是目前最为重要、应用最广的动物模型。如何在动物、药物和给药方法等选择中找到 较适合的结合点，较全面地反映病因及发病机理、病理特点，是建立好的动物模型的关

阿尔茨海默病动物模型建立方法的论述_薛斌

基金项目:成都医学院“实验室开放基金课题”资助(S YSKF200748)。 作者简介:薛斌(1984-),男,成都医学院2005级临床本科班学生,研究方向:小鼠空间记忆障碍时效关系研究。△通讯作者:荣成(1980-),男,助教, 成都医学院基础医学实验技术中心科研秘书,研究方向:小鼠空间记忆障碍时效关系研究。 阿尔茨海默病动物模型建立方法的论述 薛　斌1　荣　成　张　晓2　杨　拯2　江红丽2 (1.成都医学院2005级临床本科甲班　2.成都医学院实验技术教研室) [摘　要]学习记忆能力障碍是老年性痴呆(Alzheimer ’s disease,AD)的主要临床症状和特征,而目前对阿尔茨海默病的发病机制有三种有影响力的学说。因此理想的阿尔茨海默病AD 动物模型,对研究该病的发病机制及治疗具有重要意义,本文就目前几种有影响力的AD 的动物模型研究现状作一综述。 [关键词]阿尔茨海默病　穹窿海马伞　胆碱能神经元　T au 蛋白　β-淀粉样肽 阿尔茨海默病(Alzh eimer ’s disease ,AD )是一种临床常见的中枢神经系统变性疾病,目前其发病机制有三种影响力的学说,如淀粉样蛋白学说、乙酰胆碱能学说、线粒体损伤学说。现关于AD 疾病的研究日益受到国内外学者的高度重视。其建立一个可靠的A D 动物模型是研究AD 的重要环节。有关AD 动物模型建立的方法较多,各有利弊,本文针对这几种学说的AD 动物模型的建立和新的动物模型的建立作一综述。 一、自然衰老认知障碍AD 动物模型 AD 是一个与年龄相关的疾病,衰老因素在AD 发病过程中扮演着重要角色,衰老所特有的病理生理变化及其它病变的影响,是用年轻动物制作的动物模型所不能替代的。通过行为筛选的方式,选择带有认知和记忆严重缺失的个体,它们的行为损害与老年人和A D 患者的认知损害相类似,同时还可出现某些相应的脑组织病理改变[1]。故是研究AD 较好的动物模型。但存在以下缺点:①老年动物神经系统的发病与A D 的发病机制过程不完全一致,因此神经化学方面的改变也是不同的。②体质差,易死亡,故不宜用于周期长的实验。③对药物的吸收代谢不佳。④价格昂贵。所以该模型的应用受到一定限制。 二、损害模型的AD 动物模型1.断开穹窿海马伞通路模型 早在1954年,Daitz 等人就采用横断穹窿海马伞系统来研究观察神经元的退化过程。后来人们为了进行AD 方面的研究,采取了真空抽吸、横断或电解等方法损毁单侧或双侧穹窿海马伞通路建立AD 模型[2-3]。此种方法主要是通过切断隔海马通路(如扣带束、背穹窿海马伞),破坏胆碱能及非胆碱能纤维传入,导致实验动物行为及神经化学方面的缺损,造成动物空间定向和记忆障碍及胆碱能神经元的丢失。1994年在此基础上,Jeltsch 等的实验研究结果表明,切断双侧穹窿海马伞通路造成的A D 模型在数月后其行为及神经化学的缺失也不能恢复[4]。该模型是建立在“AD 认知障碍的胆碱能假说”的基础上,基底前脑的胆碱能细胞发出轴突广泛地投射到新皮质和海马等高级脑区,这一投射与学习记忆和认知功能有着密切的联系。在任何一个环节阻断或损坏这一投射系统都可导致动物认知障碍和学习记忆能力的损害。其病理检查发现A D 患者基底前脑的胆碱能细胞出现严重溃变,其细胞丢失的程度和患者的认知能力成负相关关系[5]。如通过手术、化学或免疫切除的方式损伤基底前脑——海马胆碱能投射,来模拟AD 的前脑胆碱能系统的损害,可用于①研究前脑胆碱能系统选择性损害对AD 的记忆减退与认识障碍的临床症状的关系的研究;②拟胆碱药物治疗A D 的药物筛选、疗效评价和作用机制的研究;③胚胎基底前脑胆碱能细胞脑内移植治疗AD 的实验研究;④神经营养因子如N G F 等脑室投递治疗A D 的研究以及N GF 或其它神经营养因子基因修饰细胞脑内移植对A D 进行基因治疗的研究等。用此方法 建立A D 模型,周期短(约两周),但手术定位难以控制,很难避免手术区邻近组织的受损。故此方法基本不再运用。 2.慢性缺血痴呆模型 脑的供血不足可以导致脑损伤和一系列的临床症状,加拿大学者To r re 报告用老年动物慢性脑缺血模型引起的行为缺失和脑组织病理生理改变在许多方面与人类的老年期痴呆包括AD 相类似[6]。慢性缺血痴呆模型是通过结扎老年大鼠的双侧颈总动脉和一侧椎动脉或者一侧锁骨下动脉,造成脑的长期供血不足和相应的脑损害,这些脑损害与AD 的临床表现和病理改变有一定相似性[6]。其特点为:①脑组织长期供血不足;②只有老年动物长期缺血才出现恒定的行为损害和病理改变,年轻动物长期缺血造成的损伤是一过性的。基于该模型的制作机理和特点,考虑到临床上有不少AD 患者同时合并有脑血管型痴呆和脑供血不足,我认为这一模型适用于研究混合性老年期痴呆的发病机制和有关药物治疗的研究。 3.鹅膏蕈氨酸(Ibo tenic acid ,IBO )损害模型 IBO 是一种谷氨酸受体激动剂,具有强烈的神经兴奋毒性作用,通过与神经元胞体或树突上的N M DA 受体相结合导致神经元中毒性损伤而溃变。基于基底前脑神经元丢失在衰老和AD 有关的认知缺失中的重要作用,以谷氨酸类似物微量注射到基底前脑导致其神经元溃变和认知缺陷。制作A D 模型最常用的谷氨酸类似物主要有海仁酸(Kainic acid,K A)、IBO 和使君子氨酸(quisqualic ,Q U IS )。其中以IBO 最为首选,尽管IBO 和Q U I S 都能造成基底前脑胆碱能神经元溃变,但只有IBO 能恒定地损害动物学习记忆有关的行为执行。基底前脑细胞对K A 的敏感性较低,故用量较大,易引起动物死亡,并往往在导致基底胆脑细胞损害的同时引起其它部位神经元(如海马锥体细胞)的死亡[7-8]。 4.Okadaic acid 慢性损害AD 模型 Okadaic acid(O A)是一种丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸化酶的特异性抑制剂,O A 的长期脑室投递可引起动物的记忆严重缺失,同时导致脑内A β淀粉样沉积斑块形成以及N F T 样磷酸化Tau 蛋白出现。O A 损害模型是利用O A 对丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸化酶的特异性抑制作用,以及它对蛋白激酶C (PK C )的激活作用。丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸化酶的抑制可以使T au 蛋白过磷酸化,导致N FT 的形成。同时,PK C 激活,丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸化酶的活性抑制,可剌激A β产生,进而引起A β的沉 积和老年斑的形成[9] 。由于O A 对蛋白磷酸化酶,丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸化酶的抑制作用和提高PK C 的活性,并能同时复制出AD 的二大分子标志有关的病理改变——老年斑和N F T ,该模型具有明显的优势主要适用于:①研究AD 发病的病理机制,A β和Tau 蛋白代谢异常与A D 病理的关系,以及A β和Tau 在AD 病变中的相互作用。②从另一角度验证现有AD 治疗方法 — 16—

中医药病症、证候动物模型研究问题

中医药病症、证候动物模型研究问题 中医、中药是经验科学，中医对于“病症”及“证”的认识，是直观和感性的，与西医有着本质的不同，缺乏定量化的指标，而这也应该指导中医药病症、证候动物的造模过程。换句话说，中医药病症、证候动物模型，应该尽可能多的模拟人生病的真实过程，更加与人的“病症”及“证”的生理及病理状态相似，真实反映中医学的“病症”及“证”。在此基础上，通过对人或模拟动物的血液、体液等代谢产物及其它相关物质用药前后的对比研究，发现引起“病症”及“证”的物质基础，从而找出中医药学“病症”及“证”的本质，进而更加客观地指导中医药病症、证候动物造模过程。中医药病症、证候动物模型的规范化应包括直观规范化和客观模型规范化两个阶段。直观规范化阶段应尽量使动物模型与中医“病症”和“证”的诊断要点相符；而客观规范化阶段则应采用客观化的指标，以指导和评价中医的“病症”和“证”动物模型。 一、中医证候动物模型研究回顾 中医证候动物模型的研究始于1960年，邝安坤发现过量使用肾上腺皮质激素的小白鼠表现为阳虚征象：体重下降、萎靡、耐寒力低。1963年又发现用助阳药物（附子、肉桂、肉苁蓉、仙灵脾）能治疗这种状态。1964年，易宁育用六味地黄汤治疗类似阴虚的肾性高血压大鼠。同年，上海第二医学院舌象小组研究气虚（人工慢性贫血）和阴虚（高位小肠侧瘘）家兔的舌象病理组织变化，首次直接用中医证候作为模型名称。此后，1974年山西医学院用腹腔血凝块作为瘀血模型研究宫外孕方药理。 1976年后，随着中医药研究的重点从病向证转移，研制证候动物模型成了中医药界的要求。1977年，孙孝洪撰文指出：“‘辨证论治’为中医临床独特的理论体系，复方和中药的使用主要是针对‘证’。长期以来，中药实验研究主要沿用西医常用的病理模型，因而受一定‘外因论’、‘局部定位论’的束缚，常致造成临床疗效与实际结果间的差距，为全面阐明中药治疗原理带来一定困难”。此文明确指出了中药研制自己的动物模型的必要性，使此项工作开始受到中医药界的关注，并为中医药动物模型研制进入一个新的发展时期拉开了序幕。据统计，1976年以前17年发表的有关中医药动物模型的文献与1977年后14年间发表的文献量之比为1∶32。1977年，上海中医学院重新用肾上腺皮质激素和甲状腺素＋利血平复制小白鼠阳虚、阴虚模型并用助阳药、滋阴药治疗，从组织化学和分子生物学角度进行研究。同年，上海第一医学院研制出高分子右旋糖酐微循环血瘀模型。1979年北京师范大学张启元尝试用灌喂大黄煎剂“泻下伤脾”建立小鼠脾虚证模型。肾虚、脾虚、血瘀三证模型开创了中医动物模型的先河，并在以后成为研究重点。迄今，肾虚模型有21种造模方法，文献量占中医动物模型总文献量的18.3%；脾虚模型有19种造模方法，文献量占31.1%；血瘀模型有42种造模方法，文献量占12.0%。1982年在广州召开的中西医结合虚证与老年病会议上，虚证动物模型实验报告第一次占据重要位置，由此引起中医药界的高度注意，并导致了一场长时间的，以中、西医方法论为焦点，以中医药动物模型的可行性为对象的讨论。从此，各种模型纷纷建立，如湖南医学院的艾叶注射肝郁模型，四川医学院的大肠杆菌静脉注射温病卫气营血模型，梁月华的温热药、寒凉药喂饲大鼠热证、寒证模型，贲长恩的溶血性贫血血虚模型等等，都有相当影响，理论文献也日见增多。 1984年，卫生部科教司在编写《医学实验动物模型和细胞系研制与应用》一书中，首先收录了11种中医动物模型。1987年，成都中医学院中医实验研究组编著《中医证候动物模型实验方法》一书，详细介绍了当时已有的几十种中医模型，并在总论中论述了证候动物模型的定义、研究原则、动物选择、制作思路和方法。1988年10月中国病理生理学会中医病理生理专业委员会在南昌召开“全国中医病证动物模型复制经验交流会”，作为首次中医动物模型专题的全国性

缺血性中风动物模型研究

缺血性中风动物模型研究 2013级硕士8班陈林伟南京中医药大学 摘要:实验动物或细胞模型完全模拟人类的中风十分困难，动物模型与临床的拟合具有重要意义。脑缺血动物模型为研究脑缺血后病理过程.病理生理机制及评价潜在的治疗干预效果等提供了极其重要的手段。 关键词:缺血性中风；动物模型；大脑中动脉闭塞 脑卒中，俗称中风，包括脑出血、脑血栓和脑梗塞等。缺血性中风是由大脑主动脉或其分支血栓形成，或内栓子阻塞引起，且多为大脑中动脉(MCA)栓塞。利用实验动物或细胞模型完全模拟人类的中风十分困难，过去二十年，经动物模型研究证明有效的700多种药物中，除一种新自由基消减剂(NXY-059)外，其余全都未能在三期临床得到阳性结果，从而无法证明其有效性，故研究建立与人类发病机理相近、可长期观察、结果稳定可靠、便于操作、价格低廉而实用的符合人类中风的动物模型成为一个迫切需要解决的问题。 1 实验动物的选择 在新药研发与脑缺血基础工作中，选择恰当的动物模型是非常重要的。缺血性中风动物模型中使用的实验动物有两大类：即灵长类和啮齿类。对于中风的生理病理的了解，最初来源于中风患者。因此，灵长类动物对中风的基础研究具有重要作用。与人类相似的多脑回灵长类动物种属(如猕猴)，在行为和感觉运动整合方面与人类有密切的相似性，是中风基础研究、探索性研究和临床前评价的最佳动物模型。利用非人灵长类动物制备模型，已有了几十年的经验积累，如狒狒。STAIR会议提出，药物一旦用小动物做出阳性结果，应该在较高的物种进行验证，然后才能开始临床试验[1]。最近报道，利用狨猴模型发现了神经保护药物氯美噻唑。国内也有学者采用光化学法成功造成树鼩局部脑缺血模型呤[2]，其造模方法亦被多人借鉴采纳。但是，到目前为止，尚无标准化的、被广泛接受的灵长类动物中风模型。 与灵长类较大的动物相比，啮齿类动物模型，如大鼠和小鼠，具有价格便宜、来源充足、品种纯化、制作模型方法简单、存活率高、脑血管解剖和生理较接近于人类、易于监测生理参数，脑标本制作容易等多面的优势[3]。但是啮齿类动物的大脑与人和非人灵长类

帕金森病动物模型具体方法及步骤

帕金森病动物模型具体方法及步骤 原型物种人 来源MPTP 模式动物品系SPF级Balb/C小鼠，健康，雄性，4~6W，体重为 18g~20g。 实验分组实验分六组：正常对照组、模型组、阳性药组、受试药组三个剂量组。 实验周期4-6 weeks 建模方法模型建模方法： 腹腔注射MPTP 20mg／kg／d，连续注射14天。对照组使用等体积生理盐水进行腹腔注射，操作及注意事项相同。MPTP给药结束后，模型建立成功。 药物给以相应的药物处理；正常组、PD模型组使用等体积PBS进行腹腔注射，操作及注意事项相同。 应用疾病模型 1.转棒实验：使用小鼠转棒仪检测小鼠的运动协调能力。将小鼠置于直径为3cm的旋转杆上，转速调整为30r/min，每次同时测定5只小鼠，每个隔室中1只。记录小鼠从转棒开始转动至掉落转棒所经历的时间，测定时间为 1min，每次中间休息1min，连续5 次，记录1min 内掉落次数。 2.旷场实验：即自发活动，是检测MPTP损伤后少动的常用指标。

旷场实验所用实验箱为尺寸：500×500×300mm旷场，周壁的颜色为黑色，旷场底面被平均分为16个4×4 个小方格。正上方架摄像头，视野覆盖整个旷场。将动物放置在正中央格，同时进行摄像和计时，时间为5 min。通过计算机示踪分析系统来分析动物在一定时间内的活动状态。实验室保持安静，室温为20 ℃左右，光线充足。观察指标：方格间穿行次数（动物的四肢从一个格进入另一个格为穿行一次）、直立次数（动物双前肢同时离地，或者双前肢放在墙壁上算作直立一次）、中央格停留时间、穿过中央格的次数。 3.爬杆实验：是评价小鼠运动协调能力的经典方法。通过记录小鼠由杆的顶端往下爬到底部（双前爪着地）所需时间，比较其运动能力。本实验将小鼠放置于一个木制的粗糙的小球上，其下端接有一个表面粗糙、截面为圆形的木棒，木棒下端放置于鼠笼里，当小鼠头朝下方从木球爬至木棒上，用秒表记录此刻的时间为A，当其爬至木棒最下端时，记录此刻的时间为B，那么小鼠爬完整个木棒所用的时间为C，C=A-B，每只小鼠测试俩次，将俩次爬杆的平均时间作为统计指标。 1.脑组织尼氏体染色 取各组小鼠脑组织，经固定液固定、石蜡包埋、切片后，进行尼氏小体染色。观察各组动物脑组织中尼氏小体的数量。 2. 免疫组化检测脑黑质TH表达 取各组小鼠脑组织切片，修片至脑黑质部位，进行免疫组化染色酪氨酸羟化酶

冠心病中医证候动物模型研究进展

龙源期刊网 https://www.wendangku.net/doc/5715533414.html, 冠心病中医证候动物模型研究进展 作者：耿亚马月香 来源：《中国中医药信息》2016年第08期 摘要：冠心病（coronary artery heart disease，CHD）是心血管疾病常见病种。CHD动物模型是现代医学研究疾病发展转归及评价药物作用疗效必不可少的工具，而针对于中医证候的动物模型是在中医基本思想的指导下在动物身上模拟出人类疾病的某些特征，制备出与人类疾病症状和病理变化相似或相同的动物模型。目前，建立CHD中医证候动物模型的方法多种多样，本文从痰瘀互结、心脾阳虚、寒凝血瘀、痰浊血瘀、心气虚、气虚血瘀方面综述了这几类模型的研究进展，以期为冠心病的研究提供参考。 关键词：冠心病；中医证候；动物模型；综述 DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2016.08.035 中图分类号：R259.414 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2016）08-0129-04 冠心病（coronary artery heart disease，CHD）是指冠状动脉粥样硬化使管腔狭窄或阻塞，或/和冠状动脉痉挛导致心肌缺血缺氧而引起的心脏病，又称缺血性心脏病（IHD）。根据CHD临床致病特点，可归属中医学“胸痹”“真心痛”等范畴。在CHD研究中，动物模型的建立是主要研究方法之一，近年许多研究者在冠心病中医证候动物模型研究中取得一定成效，但也存在诸多与中医基本思想不协调的问题。笔者通过检索中国知识资源总库2005-2015年文献，对有关CHD中医证候动物模型文献做一梳理，现总结如下。 1 痰瘀互结证小型猪模型 林氏等[1]以高脂饲料（每100 kg饲料含胆固醇2 kg，胆盐0.5 kg，猪油10 kg）每日每只900 g喂养 小型猪2周，并以介入法对冠状动脉血管内皮进行损伤，术后继续以高脂饲料每日每只900 g喂养8周。观察测量并分别记录小型猪高脂2、6、10周的体质指数、舌象、心电图，以及无创血流动力学参数，包括心输出量、每搏输出量、外周血管阻力、左心做功。 在实验动物中，因小型猪的生理解剖、血脂指标和人类非常相近[2]。生理生化方面，猪 的血液学、血流动力学、血液生化指标方面已被证实与人类相似，而且品种纯正、体质量较小、生长缓慢，近年来，在中医证候动物模型研究中应用越来越突出[3-4]。有学者以《中药新药治疗冠心病心绞痛的临床研究指导原则》为参照，对小型猪冠心病模型痰瘀互结证候进行诊断与评分，制定了CHD痰瘀互结证小型猪模型的评分标准，对主症、兼症、舌象、脉象进行评分，根据评分标准判断CHD痰瘀互结证小型猪模型是否建立[1，5]。