电泳技术和常用电泳仪

一、名词解释

1．迁移率

带电粒子在单位电场强度下的移动速度，常用μ来表示,

πγημ6Q =,主要

与颗粒半径、形状以及所带的净电荷量等有关。

2．电渗流 在高效毛细管电泳里所指的电渗流是在高电压下，溶液中的正电荷与毛细管壁表面的负电荷之间作用，引起流体朝负极方向运动的现象。

二、选择题

1．瑞典科学家A ．Tiselius 在那年首先利用U 形管建立了移界电泳法（ C ）

A ．1920

B ．1930

C ．1937

D. 1948

2.电泳分析法中，物质间能否分离，取决于下列哪个参数（）

A ．电压

B ．电流

C ．电泳迁移率

D ．电渗

3．20世纪60年代中期问世的等电聚焦，是何种电泳技术（ D ）

A ．分离组份与电解质一起向前移动的同时进行分离的

B ．能够连续地在一块胶上分离数千种蛋白质的

C ．利用凝胶物质作支持物进行的

D ．利用有pH 值梯度的介质，分离等电点不同的蛋白质的

4．等电聚焦电泳具有很高的分辨率，所以在等电点上只要有多少pH单位的差异就能被分离（A）

A．0.01

B．0.05

C．0.10

D．0.15

5．双向凝胶电泳（二维电泳），最多可以分辨出多少个斑点（ D）

A．1000～2000

B．2000～4000

C．4000～5000

D．5000～10000

6．毛细管电泳的特点（D ）

A．不易自动化，操作繁杂，环境污染小

B．容易自动化，操作繁杂，环境污染大

C．不易自动化，操作简便，环境污染大

D．容易自动化，操作简便，环境污染小

7．目前所使用的毛细管柱内径是（C ）

A．5μm～25μm

B．15μm～35μm

C．25μm～75μm

D．30μm～80μm

8．双向电泳样品经过电荷与质量两次分离后（D ）

A．可得到分子的等电点，分离的结果是点

B．可得到分子的等电点，分离的结果是带

C．可得到分子的等电点、分子量，分离的结果是带

D．可得到分子的等电点、分子量，分离的结果是点

9．有关毛细管区带电泳叙述哪一项不正确（B ）

A．也称为毛细管自由溶液区带电泳

B．是毛细管电泳中使用最少的一种技术

C．根据组分的迁移时间进行定性

D．根据电泳峰的峰面积或峰高进行定量分析

10．对毛细管凝胶电泳原理的叙述哪一项不正确（ C ）

A．是将板上的凝胶移到毛细管中作支持物进行的电泳

B．凝胶具有多孔性

C．能根据待测组分的离子强度不同而进行分离

D．起类似分子筛的作用

11. 按试样各个组分的淌度和疏水性不同进行分离的是（）

A. 毛细管区带电泳

B. 毛细管凝胶电泳

C. 毛细管胶束电动色谱

D. 等电聚焦毛细管电泳、

三、简答题

17．简述高效毛细管电泳基本工作原理

答:高效毛细管电泳基本工作原理：溶液中的带电粒子以高压电场为驱动力，沿毛细管通道，以不同速度向与其所带电荷相反的电极方向迁移，并依据样品中各组分之间淌度和分配行为上的差异而实现分离。

毛细管电泳的基本原理及应用

毛细管电泳的基本原理及应用 摘要：毛细管电泳法是以弹性石英毛细管为分离通道，以高压直流电场为驱动力，依据样品中各组分之间淌度和分配行为上的差异而实现分离的电泳分离分析方法。该技术可分析的成分小至有机离子、大至生物大分子如蛋白质、核酸等。可用于分析多种体液样本如血清或血浆、尿、脑脊液及唾液等，比HPLC 分析高效、快速、微量。 关键词：毛细管电泳原理分离模式应用 1概述 毛细管电泳(Caillary Electrophoresis)简称CE，是一类以毛细管为分离通道，以高压直流场为驱动力的新型液相分离分析技术。CE的历史可以追溯到1967年瑞典Hjerten最先提出在直径为3mm的毛细管中做自由溶液的区带电泳(Capillary Zone Electro-phoresis，CZE)。但他没有完全克服传统电泳的弊端[1]。现在所说的毛细管电泳(CE)是由Jorgenson和Lukacs在1981年首先提出，他们使用了75mm的毛细管柱，用荧光检测器对多种组分实现了分离。1984年Terabe将胶束引入毛细管电泳，开创了毛细管电泳的重要分支: 胶束电动毛细管色谱(MEKC)。1987年Hjerten等把传统的等电聚焦过程转移到毛细管内进行。同年，Cohen 发表了毛细管凝胶电泳的工作。近年来，将液相色谱的固定相引入毛细管电泳中，又发展了电色谱，扩大了电泳的应用范围。 毛细管电泳和高效液相色谱（HPLC）一样，同是液相分离技术，因此在很大程度上HPCE与HPLC可以互为补充，但是无论从效率、速度、样品用量和成本来说，毛细管电泳都显示了一定的优势毛细管电泳（C E）除了比其它色谱分离分析方法具有效率更高、速度更快、样品和试剂耗量更少、应用面同样广泛等优点外，其仪器结构也比高效液相色谱（HPLC）简单。C E只需高压直流电源、进样装置、毛细管和检测器。 毛细管电泳具有分析速度快、分离效率高、试验成本低、消耗少、操作简便等特点，因此广泛应用于分子生物学、医学、药学、材料学以及与化学有关的化工、环保、食品、饮料等各个领域[2]。

(完整版)SDS-PAGE蛋白电泳方法

SDS-PAGE 一. 实验原理 SDS 是一种阴离子表面活性剂，在蛋白质溶液里加入 SDS 和巯基乙醇后，巯基乙醇能使蛋白质分子中的二硫键还原， SDS 能使蛋白质的氢键、疏水键打开并结合到蛋白质分子上，形成蛋白质-SDS 复合物。在一定条件下，SDS 与大多数蛋白质的结合比例为 1.4:1。由于十二烷基磺酸根带负电，使各种蛋白质的SDS-复合物都带上相同密度的负电荷，它的量大大超过了蛋白质原有的电荷量，因而掩盖了不同种类蛋白质间原有的电荷差别。SDS与蛋白质结合后，还引起了蛋白质构象的改变。蛋白质-SDS复合物的流体力学和光学性质表明，它们在水溶液中的形状，近似于雪茄烟形的长椭圆棒，不同蛋白质的 SDS 复合物的短轴长度都一样，约为 1.8nm ，而长轴则随蛋白质的 Mr 成正比的变化。基于上述原因，蛋白质-SDS 复合物在凝胶电泳中的迁移率，不再受蛋白质原有电荷和形状的影响，而只与椭圆棒的长度有关，也就是蛋白质 Mr 的函数。 二. 试剂器材 30%凝胶贮液(100mL)：称取试剂Acr 29.2g和Bis 0.8g置于100mL烧杯中，向烧杯中加入约60mL双蒸水，充分搅拌溶解后加双蒸水定容至100mL，置于棕色瓶内4℃贮存，每过1-2个月应重新配制； 注意：丙稀酰胺具有很强的神经毒性，并可通过皮肤吸收，其作用有积累性，配制时应戴手套和口罩等。 分离胶缓冲液(1.5 mol/L Tris-HCl，pH 8.8，100mL)：称取Tris 18.2g 溶于约80mL 双蒸水，用6mol/L的HCl 调整pH值至8.8，加双蒸水定容到100mL，4℃ 贮存；堆积胶缓冲液(0.5 M Tris-HCl，pH 6.8，100mL)：称取Tris 6.0g溶于约80mL双蒸水，用1mol/L的HCl 调整pH值至6.8，加双蒸水定容到100mL，4℃ 贮存；

Bio Rad电泳仪操作规程

Bio-rad小电泳槽及电泳仪操作规程 一．目的 为规范Bio-rad小电泳槽及电泳仪的基本操作、维护保养、异常处理程序，防止人为操作失误，确保Bio-rad小电泳槽及电泳仪正常运转，特制定本程序。 二．适用范围 本程序适用于Bio-rad小电泳槽及电泳仪。 三．责任 1. 本程序的实施者为Bio-rad小电泳槽及电泳仪操作者，各实验室负责人对 本程序的实施情况进行监督。 2. 日常运行及维护、定期维护、定期点检及保养由Bio-rad小电泳槽及电泳 仪操作者负责。 四．内容 1.灌胶 a、取出灌胶模具，打开封底盘至完全开放的状态，松开两侧螺丝，向外侧打开夹子。 b、取长方形和带凹槽的长玻板各一块，从内到外依次按带凹槽玻板及长方形玻板的顺序排列，形成gel sandwich。注意正确排列以防漏胶。 c、短玻板朝外将sandwich放入模具中，检测sandwich的底是否紧靠底面。旋紧螺丝。将封底盘锁至密闭状态。 d、将模具放在桌面上准备灌胶。 e、根据需要配制一定浓度的胶。 1、分离胶的灌制：用加样枪慢慢将胶加入sandwich中，注意不要有气泡。其上加0.1%SDS封顶. 2、浓缩胶的灌制：待分离胶凝后弃去SDS，开始灌浓缩胶，最后轻轻插入梳子。 f、待胶聚合后，拔出梳子，用电泳缓冲液清洗加样槽，去除未聚合的胶。 g、

模具放入电泳槽中。 2.电泳 a、加适量的电泳缓冲液 b、准备样品，加样。 c、盖上电泳槽的盖子，注意红色对正极，黑色对负极。打开电源，开始电泳。初始电压100V,15分钟后改为120v。 d、直至指示剂距前沿1cm处结束电泳，拔掉电源，小心取出胶，根据需要进行染色或转膜，回收电泳缓冲液（可重复利用3次）。 五．注意事项： a、每次用完后，立即清洗电泳槽，灌胶模具，玻璃板（先用自来水洗干净，再用蒸馏水冲一遍后放在架子上晾干）。 b、扣紧或打开灌胶模具时要用力均匀，以免压坏玻璃板。 c、盖上电泳槽的盖子时，务必注意正负极不要接反。

电泳的基本原理

电泳的基本原理 电泳是指带电颗粒在电场的作用下发生迁移的过程。许多重要的生物分子，如氨基酸、多肽、蛋白质、核苷酸、核酸等都具有可电离基团，它们在某个特定的pH值下可以带正电或负电，在电场的作用下，这些带电分子会向着与其所带电荷极性相反的电极方向移动。电泳技术就是利用在电场的作用下，由于待分离样品中各种分子带电性质以及分子本身大小、形状等性质的差异，使带电分子产生不同的迁移速度，从而对样品进行分离、鉴定或提纯的技术。 电泳过程必须在一种支持介质中进行。Tiselius等在1937年进行的自由界面电泳没有固定支持介质，所以扩散和对流都比较强，影响分离效果。于是出现了固定支持介质的电泳，样品在固定的介质中进行电泳过程，减少了扩散和对流等干扰作用。最初的支持介质是滤纸和醋酸纤维素膜，目前这些介质在实验室已经应用得较少。在很长一段时间里，小分子物质如氨基酸、多肽、糖等通常用滤纸或纤维素、硅胶薄层平板为介质的电泳进行分离、分析，但目前则一般使用更灵敏的技术如HPLC等来进行分析。这些介质适合于分离小分子物质，操作简单、方便。但对于复杂的生物大分子则分离效果较差。凝胶作为支持介质的引入大大促进了电泳技术的发展，使电泳技术成为分析蛋白质、核酸等生物大分子的重要手段之一。最初使用的凝胶是淀粉凝胶，但目前使用得最多的是琼脂糖凝胶和聚丙烯酰胺凝胶。蛋白质电泳主要使用聚丙烯酰胺凝胶。 电泳装置主要包括两个部分：电源和电泳槽。电源提供直流电，在电泳槽中产生电场，驱动带电分子的迁移。电泳槽可以分为水平式和垂直式两类。垂直板式电泳是较为常见的一种，常用于聚丙烯酰胺凝胶电泳中蛋白质的分离。电泳槽中间是夹在一起的两块玻璃板，玻璃板两边由塑料条隔开，在玻璃平板中间

血清蛋白电泳操作规程

血清蛋白电泳 一．项目名称 血清蛋白电泳（HYDRAGEL PROTEIN） 二．检验方法名称 琼脂糖凝胶区带电泳 三．方法学原理 蛋白电泳是临床实验室中一种常用的蛋白质剖析技术。它可以对血清或其他体液中的异常蛋白质进行筛选。它是以区带电泳为基础在一种合适的支持介质—琼脂糖上进行的电泳。血清蛋白质在给定的PH条件下主要根据其所带电荷数将其分离成五种片段：白蛋白,α1球蛋白,α2球蛋白,β球蛋白,γ球蛋白，每一区带含有一种或多种血清蛋白质。 四．方法学溯源 自1930年由Tiselius发现了移界电泳（moving boundary eectrophoresis），而后，这种技术的各种局限性已逐渐被区带电泳（zone elecrrophoresis）所克服，区带电泳的条件和支持介质的选择是电泳成败的关键。血清蛋白区带电泳是在临床实验室中常用的技术之一，可定性和/或半定量各条正常或异常蛋白区带。 五．仪器 （一）型号：SEBIA HYDRASYS (PN1210) （二）分析和计算参数： 1．处理量：约162个样本/小时 2．所需样本量：10ul 3．检验时间：约半小时 4．重复性：有良好的批内和批间重复性 5．电泳参数：电压0－300V（可选至3000V） 电流0－500mA 功率0－100W 六．试剂及配套品 （一）试剂 1．HYDRAGEL 7 PROTEIN(E)试剂盒 HYDRAGEL 15 PROTEIN(E)试剂盒 HYDRAGEL 30 PROTEIN(E)试剂盒 （1）商标：SEBIA （2）包装规格：70测试/150测试/300测试 （3）货号：PN4100/ PN4120/ PN4140 2．脱色液 （1）商标：SEBIA （2）包装规格：Pack for 10×100ml （3）货号：PN4540 (4) 成分：柠檬酸

JY300C电泳仪的使用说明

一、设置 /设置状态： 2、按“↑”键或“↓”键，可修改闪动位置； 3、按“ENT”键，选择电压U、电流I、功率的设置换挡。 二、输出 1、在停机/设置状态下按“RUN/STOP”键，使电泳仪输出； 2、液晶屏幕显示输出电压、电流、功率、运行累计时间。 三、停机 1、在运行状态下按“RUN/STOP”键，返回停机/设置状态； 2、如果定时时间到，显示“END”并自动停机，按“RUN/STOP”键，返回停机/设置 状态。 四、编辑 在停机/设置状态下连续按“EDIT”键即可进入编辑状态中的： →程序储存状态“SA VE[X]”按“EDIT”键 →程序选择状态“LOAD[X]”按“EDIT”键 →定时设置状态“XX:XX”按“EDIT”键 →编辑选择状态“QUIT” 1、在“SA VE[X]”程序储存状态下： a)按“↑”或“↓”键，可选择0~9储存程序编号； b)按“ENT”键，使程序储存并返回停机/设置状态； c)按“EDIT”键，放弃程序储存，进入程序选择状态。 2、在“LOAD[X]”程序选择状态下： a)按“↑”或“↓”键，可选择0~9储存程序编号； b)按“ENT”键，使程序调出并返回停机/设置状态； c)按“EDIT”键，放弃程序储存，进入定时设置状态。 3、在“XX:XX”定时设置状态下： a)按“↑”或“↓”键，可选择定时时间； [注]如果定时设置为00:00，即定义为“无定时” b)按“ENT”键，将所有设置参数储存并返回停机/设置状态； c)按“EDIT”键，放弃定时设置，进入编辑选择状态。 4、在“QUIT”编辑选择状态下： a) 按“ENT”键退出编辑，返回停机/设置状态； b) 按“EDIT”键，重复进入编辑状态。

SDS-PAGE电泳实验步骤

垂直板聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白质 一、实验目的 学习SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法(SDS—PAGE)测定蛋白质的分子量的原理和基本操作技术。 二、实验原理 蛋白质是两性电解质，在一定的pH条件下解离而带电荷。当溶液的pH大于蛋白质的等电点(pI)时，蛋白质本身带负电，在电场中将向正极移动；当溶液的pH小于蛋白质的等电点时，蛋白质带正电，在电场中将向负极移动；蛋白质在特定电场中移动的速度取决于其本身所带的净电荷的多少、蛋白质颗粒的大小和分子形状、电场强度等。 聚丙烯酰胺凝胶是由一定量的丙烯酰胺和双丙烯酰胺聚合而成的三维网状孔结构。本实验采用不连续凝胶系统，调整双丙烯酰胺用量的多少，可制成不同孔径的两层凝胶；这样，当含有不同分子量的蛋白质溶液通过这两层凝胶时，受阻滞的程度不同而表现出不同的迁移率。由于上层胶的孔径较大，不同大小的蛋白质分子在通过大孔胶时，受到的阻滞基本相同，因此以相同的速率移动；当进入小孔胶时，分子量大的蛋白质移动速度减慢，因而在两层凝胶的界面处，样品被压缩成很窄的区带。这就是常说的浓缩效应和分子筛效应。同时，在制备上层胶(浓缩胶)和下层胶(分离胶)时，采用两种缓冲体系；上层胶pH=6.7—6.8，下层胶pH＝8.9；Tris —HCI缓冲液中的Tris用于维持溶液的电中性及pH，是缓冲配对离子；CI-是前导离子。在pH6.8时，缓冲液中的Gly-为尾随离子，而在pH＝8.9时，Gly的解离度增加；这样浓缩胶和分离胶之间pH的不连续性，控制了慢离子的解离度，进而达到控制其有效迁移率之目的。不同蛋白质具有不同的等电点，在进入分离胶后，各种蛋白质由于所带的静电荷不同，而有不同的迁移率。由于在聚丙烯酰胺凝胶电泳中存在的浓缩效应，分子筛效应及电荷效应，使不同的蛋白质在同一电场中达到有效的分离。 如果在聚丙烯酰胺凝胶中加入一定浓度的十二烷基硫酸钠(SDS)，由于SDS带有大量的负电荷，且这种阴离子表面活性剂能使蛋白质变性，特别是在强还原剂如巯基乙醇存在下，蛋白质分子内的二硫键被还原，肽链完全伸展，使蛋白质分子与SDS充分结合，形成带负电性的蛋白质—SDS复合物；此时，蛋白质分子上所带的负电荷量远远超过蛋白质分子原有的电荷量，掩盖了不同蛋白质间所带电荷上的差异。蛋白质分子量愈小，在电场中移动得愈快；反之，愈慢。蛋白质的分子量与电泳迁移率之间的关系是： M r =K(10-b·m) logM r =LogK—b·R m ， 式中M r ——蛋白质的分子量； logK——截距； b——斜率； R m ——相对迁移率。 实验证明，蛋白质分子量在15,000—200,000的范围内，电泳迁移率与分子量

PAGE电泳操作说明

非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳 一、制胶 本实验室常用40ml 体系胶浓度9% NH基团中的氢原子被甲基替换而得。工作原理在于TEMED可以催化过硫酸铵或核黄素产生自由基，从而引发聚合反应，促进聚丙烯酰胺凝胶的形成。 根据不同情况TEMED和过硫酸铵可适量加减。 以上的各组分按顺序加入（TEMED最后加入），充分的摇匀后用玻璃棒引流到两块 玻璃板之间，当胶加到上部时，在灌胶口处插入梳子，此步骤要选择合适的梳子，且插入时要尽量缓慢，防止气泡的产生，影响点样，若有漏出要及时的补加聚丙烯酰胺溶液，后用夹子将下面和两边夹紧防止漏胶，放在室温下让其凝结15min以上。 制胶时底板(不带缺口)和盖板(带缺口)与胶接触的那一面以及梳子齿要保证干净，没有灰尘、胶颗粒等，制胶前一般会用酒精擦拭玻璃板表面和梳子齿。 凝固后上电泳仪前将夹子、胶条、梳子卸掉用水冲洗上样孔将残胶冲掉同时赶走气泡。 二、电泳 PCR 扩增产物由非变性聚丙烯酰胺凝胶(PAGE)垂直电泳分离检测。稳定功率20W(电压200V±)，电泳时间一般1.5h，可根据产物片段大小适当调整。 1.预电泳，待凝胶聚合后，将梳子拔出，在电泳槽内加入 1×TBE，预电泳10分钟 2.上样，预电泳后，将PCR产物和loading buffer 3.5ul混合，用移液枪吸取5ul 混 合液轻轻地加入点样孔，尽量的减少加样时间，以防样本弥散。 3.接上电源进行电泳， 电泳槽和玻璃板要用夹子夹紧，否则漏缓冲液会让整个条带跑歪。 功率过高会使温度升高导致玻璃板炸裂，同时注意环境温度，天热时开空调或风扇散热。 三、染色 本实验采用银染法 1.电泳结束后，切断电源，倒去电泳缓冲液，卸去玻璃板，去掉胶条。 2．在托盘中加入固定液100ml/块胶。将整版胶小心放入溶液中（要没过胶），水平摇床上摇2min。 3.加入1ml 20% 硝酸银溶液，8—10min。后倒掉溶液，加清水洗一次。 4.托盘中加入显影液100ml/块胶，于摇床震荡至显色。 5.将洗干净的凝胶放在保鲜膜上包好，以备统计带型和照相。

SDS-PAGE电泳操作规范

聚丙烯酰氨凝胶电泳 一简介 作用原理：聚丙烯酰胺凝胶为网状结构，具有分子筛效应。它有两种形式：非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳（Native-PAGE）及SDS-聚丙烯酰胺凝胶（SDS-PAGE）；非变性聚丙烯酰胺凝胶，在电泳的过程中，蛋白质能够保持完整状态，并依据蛋白质的分子量大小、蛋白质的形状及其所附带的电荷量而逐渐呈梯度分开。而SDS-PAGE仅根据蛋白质亚基分子量的不同就可以分开蛋白质。该技术最初由shapiro 于1967年建立，他们发现在样品介质和丙烯酰胺凝胶中加入离子去污剂和强还原剂（SDS即十二烷基磺酸钠）后，蛋白质亚基的电泳迁移率主要取决于亚基分子量的大小（可以忽略电荷因素）。 二作用 SDS是阴离子去污剂，作为变性剂和助溶试剂，它能断裂分子内和分子间的氢键，使分子去折叠，破坏蛋白分子的二、三级结构。而强还原剂如巯基乙醇，二硫苏糖醇(DTT)能使半胱氨酸残基间的二硫键断裂。在样品和凝胶中加入还原剂和SDS后，分子被解聚成多肽链，解聚后的氨基酸侧链和SDS结合成蛋白- SDS胶束，所带的负电荷大大超过了蛋白原有的电荷量，这样就消除了不同分子间的电荷差异和结构差异。SDS-PAGE一般采用的是不连续缓冲系统，与连续缓冲系统相比，能够有较高的分辨率。浓缩胶的作用是有堆积作用，凝胶浓度较小，孔径较大，把较稀的样品加在浓缩胶上，经过大孔径凝胶的迁移作用而被浓缩至一个狭窄的区带。当样品液和浓缩胶选

TRIS/HCl缓冲液，电极液选TRIS/甘氨酸。电泳开始后，HCl解离成氯离子，甘氨酸解离出少量的甘氨酸根离子。蛋白质带负电荷，因此一起向正极移动，其中氯离子最快，甘氨酸根离子最慢，蛋白居中。电泳开始时氯离子泳动率最大，超过蛋白，因此在后面形成低电导区，而电场强度与低电导区成反比，因而产生较高的电场强度，使蛋白和甘氨酸根离子迅速移动，形成以稳定的界面，使蛋白聚集在移动界面附近，浓缩成一中间层。此鉴定方法中，蛋白质的迁移率主要取决于它的相对分子质量，而与所带电荷和分子形状无关。 三电泳过程 蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中电泳时，它的迁移率取决于它所带净电荷以及分子的大小和形状等因素。如果加入一种试剂使电荷因素消除，那电泳迁移率就取决于分子的大小，就可以用电泳技术测定蛋白质的分子量。1967年，Shapiro等发现阴离子去污剂十二烷基硫酸钠（SDS）具有这种作用。当向蛋白质溶液中加入足够量SDS和巯基乙醇，可使蛋白质分子中的二硫键还原。由于十二烷基硫酸根带负电，使各种蛋白质—SDS复合物都带上相同密度的负电荷，它的量大大超过了蛋白质分子原的电荷量，因而掩盖了不同种蛋白质间原有的电荷差别，SDS与蛋白质结合后，还可引起构象改变，蛋白质—SDS复合物形成近似“雪茄烟”形的长椭圆棒，不同蛋白质的SDS复合物的短轴长度都一样，约为18A(1A=10的负十次方米），这样的蛋白质—SDS复合物，在凝胶中的迁移率，不再受蛋白质原的电荷和形状的影响，而取决于分子量的大小由于蛋白质－SDS复合物在单位长度上

电泳仪使用方法

电泳仪使用方法-CAL-FENGHAI.-(YICAI)-Company One1

电泳仪使用方法 1．首先用导线将电泳槽的两个电极与电泳仪的直流输出端联接，注意极性不要接反。 2．电泳仪电源开关调至关的位置，电压旋钮转到最小，根据工作需要选择稳压稳流方式及电压电流范围。 3．接通电源，缓缓旋转电压调节钮直到达到的所需电压为止，设定电泳终止时间，此时电泳即开始进行。 4．工作完毕后，应将各旋钮、开关旋至零位或关闭状态，并拨出电泳插头。 注意事项 1．电泳仪通电进入工作状态后，禁止人体接触电极、电泳物及其它可能带电部分，也不能到电泳槽内取放东西，如需要应先断电，以免触电。同时要求仪器必须有良好接地端，以防漏电。 2．仪器通电后，不要临时增加或拨除输出导线插头，以防短路现象发生，虽然仪器内部附设有保险丝，但短路现象仍有可能导致仪器损坏。 3．由于不同介质支持物的电阻值不同，电泳时所通过的电流量也不同，其泳动速度及泳至终点所需时间也不同，故不同介质支持物的电泳不要同时在同一电泳仪上进行。 4．在总电流不超过仪器额定电流时（最大电流范围），可以多槽关联使用，但要注意不能超载，否则容易影响仪器寿命。 5．某些特殊情况下需检查仪器电泳输入情况时，允许在稳压状态下空载开机，但在稳流状态下必须先接好负载再开机，否则电压表指针将大幅度跳动，容易造成不必要的人为机器损坏。 6．使用过程中发现异常现象，如较大噪音、放电或异常气味，须立即切断电源，进行检修，以免发生意外事故。 夹芯式垂直电泳槽使用方法： 二、使用方法 (一)清洗部件 上述部件组装前要彻底清洗干净。尤其是玻璃板及凹形带槽橡胶框，必须用泡沫海绵沾少许肥皂粉或洗涤剂彻底清洗干净。清洗后的玻璃板应放在玻璃板支架上晾干水后方能使用。 (二)组装电泳槽 A、1、将四只固定螺杆插进一只贮液框(半上槽)的相应孔洞中，然后将贮液框仰放在桌上。 2、左手拿凹型槽橡胶模框，右手的拇指与中指握住玻璃板的两侧边缘插到橡胶模框内 (注意手指不能接触灌胶面的玻璃板)。 3、将带有玻璃的橡胶模框子放在仰放的贮液槽框架上，其下缘必须对齐贮液槽框下缘。 4、双手拿另一只贮液槽框与仰放在桌上的贮液槽框相合，并使橡胶框上的凸出线位于贮液槽有机玻璃框中央。 5、装上四只螺母，拧紧螺丝。注意拧紧螺丝时用力应均匀，最好用双手按斜角位置双双逐渐拧紧。 6、将电泳槽垂直竖起，放在桌上，带短玻璃板的贮液槽称上槽(阴极端)，带长玻璃板的贮液槽称为下槽(阳极端)，在长玻璃板与橡胶框间有一缝隙。此缝隙可用已熔化的10％琼脂沿长玻璃板下端灌入，为防止留存气泡，可稍抬起一端即可赶去气泡。待琼脂完全凝固后才能灌胶。 B、也可将槽垂直竖起，将带有玻璃的橡胶模框直接放入槽中，对称拧紧螺丝后，用琼脂封底边。 (三)灌胶 1、先灌分离胶，待凝固后再灌浓缩胶。灌胶前接通冷却水，夹紧连接上下贮液槽的两根橡胶管。 2、用细头滴管吸取胶液，沿长、短玻璃板中间缝隙从一端加入胶液。为防止产生气泡，可稍拾起另一端(气泡往高处走)，不断加入胶液。若单层胶(分离胶)则加胶量约距离短玻璃板上端厘米处，轻轻加少许水，双手轻轻将梳子插入，待胶凝后就可形成凹形加样孔。 3、为防止漏胶，在上、下贮液槽中立即加入蒸馏水，但蒸馏水不能超过短玻璃板上缘。 4、胶凝固后即可看到样品槽梳子与凝胶板间有一层折

SDS-PAGE电泳的基本原理及浓缩胶浓缩样品的原理

SDS－PAGE电泳的基本原理及浓缩胶浓缩样品的原理 SDS-PAGE（十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳）是目前最常用的分离蛋白质的电泳技术 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，是在聚丙烯酰胺凝胶系统中引进SDS，SDS能断裂分子内和分子间氢键，破坏蛋白质的二级和三级结构，强还原剂能使半胱氨酸之间的二硫键断裂，蛋白质在一定浓度的含有强还原剂的SDS溶液中，与SDS分子按比例结合，形成带负电荷的SDS-蛋白质复合物，这种复合物由于结合大量的SDS，使蛋白质丧失了原有的电荷状态形成仅保持原有分子大小为特征的负离子团块，从而降低或消除了各种蛋白质分子之间天然的电荷差异，由于SDS与蛋白质的结合是按重量成比例的，因此在进行电泳时，蛋白质分子的迁移速度取决于分子大小。当分子量在15KD到200KD之间时，蛋白质的迁移率和分子量的对数呈线性关系，符合下式：logMW=K-bX，式中：MW为分子量，X为迁移率，k、b均为常数，若将已知分子量的标准蛋白质的迁移率对分子量对数作图，可获得一条标准曲线，未知蛋白质在相同条件下进行电泳，根据它的电泳迁移率即可在标准曲线上求得分子量。 SDS-PAGE电泳成功的关键是什么？ ①溶液中SDS单体的浓度 SDS在水溶液中是以单体和SDS-多肽胶束的混合形式存在，能与蛋白质分子结合的是单体。为了保证蛋白质

与SDS的充分结合，它们的重量比应该为1∶4或1∶3。②样品缓冲液的离子强度因为SDS结合到蛋白质上的量仅仅取决于平衡时SDS单体的浓度，不是总浓度，而只有在低离子强度的溶液中，SDS 单体才具有较高的平衡浓度。所以，SDS电泳的样品缓冲液离子强度较低，常为10-100 mM。③二硫键是否完全被还原只有二硫键被完全还原以后，蛋白质分子才能被解聚，SDS才能定量地结合到亚基上从而给出相对迁移率和分子质量对数的线性关系。Sample buffer 中的β-巯基乙醇的浓度常为4-5%，二硫苏糖醇的浓度常为2-3%。前者有挥发性，最好使用前加入。 SDS-PAGE缓冲液系统的选择，Tris-Glycine、Tris-Tricine、Tris-硼酸盐或者其他？ 一般来说，在被分析的蛋白质稳定的pH范围，凡是不与SDS发生相互作用的缓冲液都可以使用，但缓冲液的选择对蛋白带的分离和电泳的速度是非常关键的。Tris-甘氨酸系统是目前使用最多的缓冲系统。Tris-甘氨酸系统是目前使用最多的缓冲系统。如果要测定糖蛋白的分子量，最好采用Tris-硼酸盐缓冲系统，对于分子质量小于15 kDa的蛋白样品，可以使用SDS-尿素系统，也可以采用Tris-tricine缓冲系统。 积层胶（或称浓缩胶）的作用原理？

产品使用说明书

产品使用说明书 D -Tube TM 透析透析//电洗脱管电洗脱管：： Mini/Midi/Maxi/Mega/D Mini/Midi/Maxi/Mega/D--Tube96TM *建议同时参考本说明书英文原文（说明书编号TB422）。 产品名称产品名称 包装包装 货号货号 D-Tube? Dialyzer Mini, 截留分子量 6–8kDa D-Tube Dialyzer Mini，截留分子量 12–14kDa 10个 10个 71504-3 71505-3 D-Tube Dialyzer Midi, 截留分子量 3.5kDa D-Tube Dialyzer Midi, 截留分子量6–8kDa 10个 10个 71506-3 71507-3 D-Tube Dialyzer Maxi, 截留分子量 3.5kDa D-Tube Dialyzer Maxi, 截留分子量6–8kDa D-Tube Dialyzer Maxi, 截留分子量12-14kDa 10个 10个 10个 71508-3 71509-3 71510-3 D-Tube96? Dialyzer, 截留分子量6-8kDa D-Tube96 Dialyzer, 截留分子量12-14kDa 1 1 71712-3 71713-3 D-Tube Electroelution Accessory Kit 1 71511-3 截留分子量截留分子量 体积体积 试剂盒包装试剂盒包装 目录号目录号 D-Tube? Dialyzer Mega D-Tube Dialyzer Mega D-Tube Dialyzer Mega D-Tube Dialyzer Mega 3.5kDa（蓝色） 3.5kDa（蓝色） 6-8kDa（粉色） 6-8kDa（粉色） 3-10ml 3-10ml 3-10ml 3-10ml 10个 50个 10个 50个 71739-3 71739-4 71740-3 71740-4 D-Tube Dialyzer Mega D-Tube Dialyzer Mega D-Tube Dialyzer Mega D-Tube Dialyzer Mega 3.5kDa（蓝色） 3.5kDa（蓝色） 6-8kDa（粉色） 6-8kDa（粉色） 10-15ml 10-15ml 10-15ml 10-15ml 10个 50个 10个 50个 71742-3 71742-4 71743-3 71743-4 D-Tube Dialyzer Mega D-Tube Dialyzer Mega D-Tube Dialyzer Mega D-Tube Dialyzer Mega 3.5kDa（蓝色） 3.5kDa（蓝色） 6-8kDa（粉色） 6-8kDa（粉色） 15-20m 15-20ml 15-20ml 15-20ml 10个 50个 10个 50个 71745-3 71745-4 71746-3 71746-4 Floating Racks，Mega - - 10个 71748-3 试剂盒概述试剂盒概述 D-Tube? 透析管为生物样品制备提供了极为方便、通用的操作系统。该系统包括两种操作模式——透析和电洗脱，能够高效地替换样品缓冲液或从凝胶中抽提蛋白质、DNA或RNA。所有操作只需在一支离心管中进行，简单快捷，适合在很多实验条件下使用。样品操作中不再需要注射器，微量离心，专门的电洗脱装置或是重复繁琐的操作步骤，只需实验室常规移液器进行样品的添加和移除即可。D-Tube?透析管的双膜设计（可以方便地监测样品水分挥发过程）和大表面积使其亦可用来浓缩生物样品。 D-Tube? 透析管按容量不同分为几种型号：Mini型（10-250μl），Midi型（50-800μl），Maxi型（500-3000μl）和Mega型（分别有3-10ml，10-15ml，15-20ml三种载样体积）。Maxi型号的D-Tube? 透析管试剂盒中包括两个盖子，可以方便将透析管的容量分别调节为500-200μl和2000-3000μl。Mega型透析管的截留分子量有两种，以不同颜色区分：3.5kDa（蓝色）和6-8kDa（粉色）；Mega型透析管也配有不同的管帽，以方便地根据需要调整最大载样体积。底管则决定了它的截留分子量，相同颜色的底管（具有相同的截留分子量）可以与不同的管帽（具有不同的最大载样体积）组合使用的（如图1）。D-Tube96?采用96-管的配置形式，其它特征与Mini型D-Tube? 透析管一致。所有D-Tube

小分子蛋白电泳技术分享

Tricine SDS-PAGE实用方案 Tricine-SDS-PAGE是用于分离分子量在1-10kD的肽类用的。 一、试剂配配制： 1．Low Bis acrylamide（49.5% T, 3% C） Acylamide 48.0g Bis 1.5g Water make up to 100ml 2. High Bis acrylamide (49.5% T, 6% C) Acrylamide 46.5g Bis 3.0g Water make up to100ml 3. Gel Buffer (3M Tris/cl, PH8.45, 0.3% SDS) SDS 0.3g Tris 36.4g Water make up to 100ml PH to 8.45 with HCL 注: 3M Tris 配制时不容易溶解,因此配制时我配制了2M Tris,配方如下: Tris 36.4g SDS 0.3g Water make up to 150ml 4. Anode (Lower) buffer 阳极缓冲液(0.2M Tris/cl, PH8.9) Tris 12.11g Water make up to 500ml PH to 8.9 with HCL 5. Cathode (Upper) buffer 阴极缓冲液(0.1M Tris/cl, 0.1M Tricine, 0.1% SDS, PH 8.25) Tris 6.06g Tricine 8.96g SDS 0.5g Water make up to 500ml

注:不用调PH值 6. 4×Tricine SDS Sample buffer 4×上样缓冲液 (Final concentration: 0.05M Tris/cl, 4% SDS, 12% glycerol, 200mM DTT, 0.01% Commasie G 250) 8×Tris.cl/SDS PH 6.8 2ml Glycerol 4.8ml SDS 1.6g Commasie Blue G 250 4mg Water make up to 10ml 注:8×Tris.cl/SDS PH 6.8配方 Tris 6.05g SDS 0.4g Water make up to 100ml PH to 6.8 with HCL 二、胶的配制 1. 16.5% T 6% C separating gel 30ml 49.5% T 6% C 10ml Gel buffer 15ml Glycerol 3.2ml Water 1.8ml 2. 10% T 3% C spacer gel 30ml 49.5% T 3% C 6.1ml Gel buffer 15ml Water 8.9ml 3. 4% T 3% C stacking gel 12.5ml 49.5% T 3% C 1ml Gel buffer 4.65ml Water 6.85ml 注: 用Bio-Rad系统, 0.75mm的胶,separating gel 配3ml, 加2.5ml; Spacer gel 配1ml,加0.7ml; Stacking gel 配1.25ml. 灌胶前临时加10%AP（过硫酸铵）和TEMED. 胶配制的通用配方:

SDS-PAGE电泳实验步骤

创作编号： GB8878185555334563BT9125XW 创作者：凤呜大王* 垂直板聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白质 一、实验目的 学习SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法(SDS—PAGE)测定蛋白质的分子量的原理和基本操作技术。 二、实验原理 蛋白质是两性电解质，在一定的pH条件下解离而带电荷。当溶液的pH大于蛋白质的等电点(pI)时，蛋白质本身带负电，在电场中将向正极移动；当溶液的pH小于蛋白质的等电点时，蛋白质带正电，在电场中将向负极移动；蛋白质在特定电场中移动的速度取决于其本身所带的净电荷的多少、蛋白质颗粒的大小和分子形状、电场强度等。 聚丙烯酰胺凝胶是由一定量的丙烯酰胺和双丙烯酰胺聚合而成的三维网状孔结构。本实验采用不连续凝胶系统，调整双丙烯酰胺用量的多少，可制成不同孔径的两层凝胶；这样，当含有不同分子量的蛋白质溶液通过这两层凝胶时，受阻滞的程度不同而表现出不同的迁移率。由于上层胶的孔径较大，不同大小的蛋白质分子在通过大孔胶时，受到的阻滞基本相同，因此以相同的速率移动；当进入小孔胶时，分子量大的蛋白质移动速度减慢，因而在两层凝胶的界面处，样品被压缩成很窄的区带。这就是常说的浓缩效应和分子筛效应。同时，在制备上层胶(浓缩胶)和下层胶(分离胶)时，采用两种缓冲体系；上层胶pH=6.7—6.8，下层胶pH＝8.9；Tris—HCI缓冲液中的Tris用于维持溶液的电中性及pH，是缓冲配对离子；CI-是前导离子。在pH6.8时，缓冲液中的Gly-为尾随离子，而在pH＝8.9时，Gly的解离度增加；这样浓缩胶和分离胶之间pH 的不连续性，控制了慢离子的解离度，进而达到控制其有效迁移率之目的。不同蛋白质具有不同的等电点，在进入分离胶后，各种蛋白质由于所带的静电荷不同，而有不同的迁移率。由于在聚丙烯酰胺凝胶电泳中存在的浓缩效应，分子筛效应及电荷效应，使不同的蛋白质在同一电场中达到有效的分离。 如果在聚丙烯酰胺凝胶中加入一定浓度的十二烷基硫酸钠(SDS)，由于SDS带有大量的负电荷，且这种阴离子表面活性剂能使蛋白质变性，特别是在强还原剂如巯基乙醇存在下，蛋白质分子内的二硫键被还原，肽链完全伸展，使蛋白质分子与SDS充分结合，形成带负电性的蛋白质—SDS复合物；此时，

DYY-6C电泳仪操作步骤

DYY-6C电泳仪使用说明 操作步骤： 1．接好电源线并确认与有接地保护的电源插座相连。按颜色接好电泳槽与电泳仪的连接导线，并装入电泳样品。 2．确认电源符合要求后，开启“电源开关”。此时“液晶显示屏”显示欢迎界面，同时仪器蜂鸣4声，然后显示上次工作的设定值，对于每次重复使用同一参数时，可直接选择Start后启动输出。3．如要改变其数值可按上【▲】下【▼】按键。 4．如希望查看并设定电压、电流和定时时间，可以按【选择】键，此时←指示相应位置。同样，其数值由上下调节按键控制。 5．按【启/停】键后，仪器鸣响4声，输出启动，“输出指示灯”闪亮，当输出稳定后，稳压/稳流状态改变时，仪器会自动鸣响2声以示提醒用户。仪器正常输出后，设定值Us、Is、Ts自动变为实际值U、I、T。 6．在仪器正常输出时，按【选择】键，相应显示：Us，Is，Ts，T。 7．选择设置Us、Is、Ts后，在8秒内不按任何按键，则自动返回显示实际值U、I、T。 8．在仪器正常输出时若要停机，可按【启/停】键，输出立刻关闭显示“stop”同时仪器反复鸣响，此时应按一下【选择】键，仪器停止鸣响。如果希望继续工作则应选择“Go on”，定时时间继续累加。而如果选择“Start”，则计时重新从“0：00”开始。 9．定时到后仪器自动显示已用时间并反复鸣响以提示用户。考录到电泳的实际情况，仪器输出始终不关，等待用户手动停机，如果用户希望继续工作，可以按一下【选择】键，仪器停止蜂鸣。 当达到仪器的最大定时时间仪器将自动关输出，显示“stop”，以保证使用安全。 注意事项： 1．本机使用一段时间后应检查电极连线与电泳槽是否接触良好，以避免因连接故障造成仪器不能正常工作。 2．仪器使用中，请勿将电泳槽放在电泳仪上进行实验工作，严禁溅入电解质溶液。如溶液已进入电泳仪，切勿接通电源，以免造成事故。同时应由专业人员修理才可使用。 3．本机输出电压较高，开机后人体不宜和电泳槽溶液或样品接触，最好关机后再看样品，以免触电。 4．本仪器输出功率较大，因此采用了通风散热电路，当输出电流达到一定数值时仪器后面板的风扇自动启动，因此，在仪器工作时不要用物体遮挡后面板。 5．使用过程中如发现异常现象，要立即断电并进行检修。对不明原因可与厂家技术科联系。6．在使用过程中出现停电后来电情况，本仪器将回到初始设定状态。 7．当仪器定时达到最大时间100小时后，仪器自动关闭输出，并显示“END”。 8．长时间不用应关闭电源。长期不用应拔下电源插头并盖上防护罩。 9．及时取走自己的物品，注意用电安全，保持实验室清洁，不浪费。仪器不正常时，及时上报，不得自行处理。

五种电泳技术的比较

五种电泳技术的比较-标准化文件发布号：（9456-EUATWK-MWUB-WUNN-INNUL-DDQTY-KII

五种电泳技术的比较 SDSPAGE 名词解释： 相对迁移率（Rf） 问答题: 1.简述SDS-PAGE的基本原理。 2.影响SDS电泳的关键因素有哪些 AGE 名词解释 1.迁移率 2.电渗 3.电泳 问答题 1.影响电泳迁移率的因素有哪些？ 2.试述琼脂糖凝胶电泳分离脂蛋白的原理。 CAME 1.CAME的基本原理是什么？ 2.CAME分离血清蛋白电泳时应注意哪些问题？ PAGE 名词解释 1.凝胶总浓度 2.交联度 问答题 1.与CAME相比，PAGE有哪些特点。 2.试比较CAME与PAGE操作的区别。 3.简述不连续PAGE的原理。 1.琼脂糖凝胶电泳Agarose Gel Electrophoresis Gel Electrophoresis ：由琼脂、琼脂糖、淀粉胶及聚丙烯酰胺等物质作支持体的电泳。 特点（characteristic）： 1.可以制成非常均匀的凝胶，带电质点在凝胶的孔中泳动。 2. 电泳操作方法简便，电泳速度快。 3. 分辨率高，重复性好，电泳图谱清晰。 4. 适用于生化，免疫等定性定量测定。 （一）优点（advantage) 1.因不含硫酸根和羧基，几乎消除了琼脂的电渗。 2.对蛋白质吸附极微，故无拖尾现象。 3.凝胶结构均匀，孔径较大，可用来分离酶的复合物、核酸、病毒等大分子物质。 4.透明度较好，可直接或干燥成薄膜后进行染色。 5.不吸收紫外光，可直接利用紫外光吸收法作定量测定。 6.有热可逆性。

（二）缺点(disadvantage) 1.机械强度差，易破碎，浓度不能太低。 2.易被细菌污染，不易保存，临用前配制。 3.琼脂糖支持层上的区带易于扩散，电泳后必须立即固定染色。 4.与PAGE相比，分子筛(molecular sieve)作用小，区带少。 应用 1. 适用于大分子的核酸、核蛋白等的分离、鉴定及纯化 2. 临床生化检验中常用于LDH、CK等同工酶的分离与检测 3. 为不同类型的高脂蛋白血症、冠心病等提供生化指标 影响迁移的因素 the size of the molecule conformation of the molecule the agarose concentration of a gel Voltage 百分浓度和分辨率限制 Most agarose gels are made with between 0.7% (good separation or resolution of large 5–10kb DNA fragments) and 2% (good resolution for small 0.2–1kb fragments) agarose dissolved in electrophoresis buffer. Up to 3% can be used for separating very tiny fragments but a vertical polyacrylamide gel 聚丙烯酰胺is more appropriate in this case. Low percentage gels are very weak and may break when you try to lift them. High percentage gels are often brittle and do not set evenly. 1% gels are common for many applications. 琼脂糖凝胶分离血浆脂蛋白 原理：血清脂蛋白经饱和苏丹黑B预染后，以琼脂糖凝胶为支持介质，在pH8.6巴比妥缓冲液中电泳，根据各脂蛋白的组成、大小、形状分离成不同区带。 pH 8.6 > pI ，各种脂蛋白均带负电，电泳时由负极到正极；VLDL为圆 形，受阻力小，LDL形态不规则，受阻力大，所以VLDL跑在前。 加样槽在负极，由负极到正极分别是CM\LDL\VLDL\HDL 2.醋酸纤维薄膜电泳Cellulose acetate membrane electrophoresis，CAME 特点：低吸附作用，低电渗作用，样本用量少，亲水性 1.Low sorption 2.Low electroosmosis 3.Small sample 4.Hydrophilic 电泳图谱不齐 ①点样时血清点加不均匀 ②薄膜局部干燥 ③电泳时供给薄膜的液量不均匀或过少 ④缓冲液变质 ⑤电泳时薄膜位置不正,与电流方向不平行 电泳图谱分理不清 ①点样时血清点加不均匀

SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)实验原理和操作步骤

SDS- 聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) 实验 原理和操作步骤 实验原理： SDS-PAGE 是对蛋白质进行量化，比较及特性鉴定的一种经济、 快速、而且可重复的方法。该法是依据混合蛋白的分子量不同来 进行分离的。 SDS 是一种去垢剂，可与蛋白质的疏水部分相结合，破坏其折 叠结构，并使其广泛存在于一个广泛均一的溶液中。 SDS 蛋白质复 合物的长度与其分子量成正比。在样品介质和凝胶中加入强还原剂 和去污剂后，电荷因素可被忽略。蛋白亚基的迁移率取决于亚基分 子量。 试剂和器材： 试剂： 1. 5x样品缓冲液（10ml）:0.6ml1mol/L的Tris-HCl(pH6.8),5ml 50%甘油，2ml 10%的SDS，0.5ml巯基 乙醇， 1ml 1% 溴酚蓝， 0.9ml 蒸馏水。可在 4℃保存数周，或在 －20 ℃保存数月。 2.凝胶贮液：在通风橱中，称取丙烯酰胺 30g ，甲叉双丙烯酰胺 0.8g ，加重蒸水溶解后，定容到 100ml 。过滤后置棕色瓶中， 4℃ 保存，一般可放置 1个月。 3. pH8.9 分离胶缓冲液：Tris 36.3g，加1mol/L HCl 48ml，

加重蒸水 80ml 使其溶解，调 pH8.9 ，定容至 100ml ， 4℃保存。 4. pH6.7 浓缩胶缓冲液： Tris 5.98g ，加 1mol/L HCl 48ml ，加重蒸水 80ml 使其溶解，调 pH 6.7 ，定容至 100ml ， 4℃保存。 5.TEMED （四乙基乙二胺）原液 6.10% 过硫酸铵（用重蒸水新鲜配制） 7.pH8.3 Tris- 甘氨酸电极缓冲液：称取 Tris 6.0g ，甘氨酸 28.8g ， 加蒸馏水约 900ml ，调 pH8.3 后，用蒸馏水定容至 1000ml 。置4℃保存，临用前稀释 10 倍。 8.考马斯亮蓝G250 染色液：称100mg 考马斯亮蓝G250 ，溶于200ml 蒸馏水中，慢慢加入7.5ml 70% 的过氯酸，最后补足水到250ml ，搅拌 1小时，小孔滤纸过滤。 器材：电泳仪，电泳槽，水浴锅，摇床。 实验操作