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高效液相色谱_蒸发光散射检测器法测定黄芪健胃膏中黄芪甲苷的含量

高效液相色谱_蒸发光散射检测器法测定黄芪健胃膏中黄芪甲苷的含量
高效液相色谱_蒸发光散射检测器法测定黄芪健胃膏中黄芪甲苷的含量

蒸发光散射检测原理与操作要点

蒸发光散射检测器(ELSD)3300 原理与操作 一.操作原理 蒸发光散射检测器的独特检测原理包括以下三个步骤:首先将柱洗脱液雾化形成气溶胶,然后在加热的漂移管中将溶剂蒸发,最后余下的不挥发性溶质颗粒在光散射检测池中得到检测。 雾化(Nebulization): 雾化(Nebulization) 经HPLC 分离的柱洗脱液进入雾化器, 在此与稳定的雾化气体(一般为氮气)混合形成气溶胶。气溶胶由均匀分布的液滴组成,液滴大小取决于分析中采用的气体流量.气体流量越低形成的液滴越大,液滴越大则散射的光越多,从而提高了分析灵敏度,但是越大的液滴在漂移管中越难蒸发。每种方法均存在产生最佳信号噪音比率的最优化气体流量。流动相流速越低要求适当雾化的气体流量也越低。用内径为 2.1mm 的微径柱代替内径为4.6mm 标准型分析柱,能大大降低流动相流速,因而提高分析的灵敏度。 蒸发(Evaporation): 蒸发(Evaporation) 气溶胶中挥发性成分在加热的不锈钢漂移管中蒸发.为特定应用设置适当的漂移管温度,取决于流动相组成和流速,以及样品的挥发性.高有机含量流动相比高含水量流动相要求蒸发的漂移管温度低。流动相流速越低比流动相流速越高要求蒸发的漂移管温度越低。半挥发性样品要求采用较低的漂移管温度,以获得最佳灵敏度.最佳温度需要通过观察各温度时的信号噪音比率来确定。在ELSD 3300 漂移管中,距离雾化器3 英寸处有一个PTFE 涂层的不锈钢撞击器.气溶胶与撞击器相遇,大的液滴从废液管排出。余下的液滴从撞击器周围通过并经过漂移管进入到光散射检测池被检测。除去大的液滴就允许在低温模式下操作ELSD3300,适用于分析半挥发性样品。流动相和雾化气体中的非挥发性杂质会导致噪音。采用高品质的气体,溶剂和挥发性缓冲液(经过过滤的) ,会很大程度上降低基线噪音.若流动相没有完全挥发会导致基线噪音上升。仔细选择设置检测器的参数保证流动相完全挥发。 检测(Detection): 检测(Detection) 悬浮于流动相蒸汽中的样品颗粒从漂移管进入到光散射检测池。在检测池中,样品颗粒散射激光光源发出的光而蒸发的流动相不散射。散射光被硅光电二极管检测,产生电信号输送模拟信号输出端口, 被用于模拟输出的数据采集.。ELSD 3300 光路元件的先进设计为您的HPLC 分析提供了优异的灵敏度。 二.软件界面指导 (Navigating the Software Interface) 3300 软件界面的特点是位于液晶显示屏左上角有一个可展开的菜单。下面的部分将详细描述这个软件菜单. 2.1 主菜单(Main Screen) 操作界面是在仪器使用期间显示的主界面。主界面为当前载入方法提供如下信息: 1. 谱图(Chart):当处于"运行"和"清洁"模式时,谱图显示被激活,界面显示谱图长度可达60min. 2.方法名称(Method Name) :当前载入方法的名称. 3.温度(Temperature):漂移管温度的设定值和实际读数,用"℃"表示。温度范围是从25 至120℃.。注: 漂移管共有两个加热区, 分别位于漂移管前端和后端。主界面显示的是这两个区的平均值。

蒸发光散射检测器ELSD

蒸发光散射检测器ELSD 蒸发光散射检测器(ELSD)的原理及特点 蒸发光散射检测器(Evaporative Light-scattering Detector)是通用型检测器,可以检测没有紫外吸收的有机物质,如人参皂苷、黄芪甲苷等。1993才由Alltech公司商业化生产。 一、ELSD原理: 洗脱液的雾化——流动相的蒸发——含有待测物的剩余颗粒的光散射检测 恒定流速的色谱仪(高效液相、逆流色谱、高效毛细管电泳等)洗脱液进入检测器后,首先被高压气流雾化,雾化形成的小液滴进入蒸发室(漂移管,drift tube),流动相及低沸点的组分被蒸发,剩下高沸点组分的小液滴进入散射池,光束穿过散射池时被散射,散射光被光电管接收形成电信号,电信号通过放大电路、模数转换电路、计算机成为色谱工作站的数字信号——色谱图。 当载气从雾化室把液滴运送到加热漂多管时,蒸发开始。在加热漂移管溶剂被除去,产生微粒或纯溶质的小滴,为了维持颗粒大小的均匀性,在这个步骤中尽量采用低的温度是相当重要的。此外,低温蒸发增强溶质结晶化,溶质颗粒越大,检测光散射的强度就越大。还有,这已被清楚的证明,相同大小的固体颗粒比液体颗粒对散射光更有效。在高的温度下,太剧烈的溶剂挥发会导致颗粒的大小不均匀,或者抑制结晶的形成,反过来又影响液体散射过程。 在这个阶段,洗脱液颗粒或液滴从加热漂移管出来进入检测池,散射入射光从光源到达这里。散射光通过光检测器(光电倍增管或光电二极管)加以定量。光检测器产生的电信号与通过检测池的颗粒数量和大小成比例。在Chromachem检测器,通过居中在可见区的多色光源(卤素灯)产生入射光束。这入射光束集中在光检测池的中间,使光检测器的灵敏度最优化。光检测器是强大的光电倍增管,与入射光束

黄芪甲苷的测定方法

黄芪甲苷含量测定几种常用方法的比较 黄芪甲苷为黄芪的主要活性成分之一。能抗炎降压、镇痛镇静和促进再生肝DNA水平。现代药理研究表明,黄芪甲苷具有改善白细胞变形能力、改善心肌收缩及舒张功能、促进胰岛素分泌和清除自由基等药理作用。近年来,对黄芪甲苷的含量测定方法的研究很多。本人就几种常用方法作一比较。 1高效液相色谱法(I-R_C法) HPLC法因其分离度好、灵敏性高,适用范围广等优点,已广泛用于黄芪甲苷的含量测定、稳定性、药理和临床研究中。 1.1 HPLC—uv法黄芪甲苷属于四环三萜类皂苷,紫外末端吸收f max200.8 nm)。紫外检测灵敏度低,干扰因素多,目前HPLC法是最常用的检测器是紫外检测器。苏瑞强Ⅲ等采用HPLC法测定黄芪甲苷的含量,色谱柱为YWG—C18柱0.9 mm x250 mm,5 m),流动相为乙腈一水(1:2.3),检测波长为203nm,结果线性范围为0.86—5.27 I,L g/mL,加样回收率为97.52%,RSD为3.10%。 1.2 HPLC一示差折光检测法由于黄芪甲苷在紫外区仅有微弱的末端吸收,溶剂噪音对结果有较大的影响,且其前处理繁杂。池玉梅等四应用HPLC示差折光检测法测定黄芪精12I服液中黄芪甲苷的含量,色谱柱为Hypersi|ODS 2(4.6ram X 200ram,5 I,Lm),流动相为甲醇一水(67:33),结果黄芪甲苷线性范围是1-5 g/ml,回收率为98.1%,RSD为2.02%。该法简单方便,重现性好,灵敏度高,结果准确、可靠。 1.3 RP—HPLC法路玫等[3j采用RP—HPLC法测定黄芪注射液中黄芪甲苷的含量。色谱柱为Nova—PakC18柱0.9ram xl5Omm,4la,m),流动相为乙腈一水一磷酸(1:2:O.1),检测波长为203nm,柱温为40%。实验中将样品蒸干,采用水饱和的正丁醇溶解,用氨试液洗涤后蒸干,残渣用甲醇溶解。结果加样回收率为94.7%,RSD为2.6%。该法简便、稳定性好、重珊陆好、灵敏度高,且由于在流动相中加入磷酸,可使基线平稳,样品峰与其他峰达到基线分离。郑志仁等H将药材置索氏提取器提取1 h后采用RP—HPLC法测定提取液中黄芪甲苷的含量,色谱柱为Nueleosil c 18柱,流动相为乙腈一水(1:2),检测波长为205rim。结果黄芪甲苷线性范围是l0.64~53.20I.L g/mL,加样回收率为92.66%。 1.4 HPLC—ELSD法蒸发光散射检测原理是使流动相溶剂喷雾汽化,进入加热管后溶剂挥发;被分析检测的物质颗粒经镭射光产生散射,散射光由光电倍增管收集得到响应,光散射检测器的响应大小决定由被分析物质的颗粒的数量和大小,而不受流动相溶剂的干扰;不要求被检测组分有特定的化学结构。赵灵芝等15]采用HPLC—ELSD法测定黄芪中黄芪甲苷的含量,以Blite—ODS柱为色谱柱,乙腈一水(36:64)为流动相,流速为0.8ml/rain;ELSD参数中漂移管温度为100℃,N 流速为2.74ml/min。结果黄芪甲苷线性范围是2.016~12.096g,加样回收率为97.43%,RSD为1.57%。该法灵敏度高,分离度好,干扰少,前处理简便,回收率高,重现性好。周春玲等对甲醇一水(4o:6o)、四氢呋喃一水(25:75)及乙腈一水(1:21等不同流动相进行了试验,并考察了黄芪甲苷的分离情况及检测灵敏度,同时通过观察峰面积、基线噪音和信噪比,研究了漂移管温度和气体流速等ELSD参数条件。结果表明,采用乙腈一水(1:2)为流动相时,分离情况最好;最佳的测定参数是漂移管温度为105 oC,气体流速为2.96L/rain;样品加样回收率为100.5%,RSD为3.23%。该法分离度好,精密度和重珊性俱佳,回收率高。 1.5 HPLC—MS法高效液相一质谱(HPLC—Ms)联用仪是当前天然药物的成分、药理与临床研究中最重要的联用仪器,能解决复杂成分样品的定性、定量问题。顾泳川等[61建立HPLC—MS法测定大鼠尿中黄芪甲苷的含量,并对其尿药动力学进行研究。采用Diamonsil TMC18柱为色谱柱;乙腈一水(40:60)为流动相;电喷雾离子化接口的四级质谱检测器,内标为地高辛,选择性离子检测(sIM1。实验中尿样加入地高辛混匀离心后,上清液通过已活化的固相萃取小柱,用3ml水淋洗,残渣用2ml甲醇洗脱,N:吹干后用流动相溶解。该法专属性好,方法灵敏度高,最低检测限为lOng/ml,杂质干扰小,操作简便,是检测体内黄芪甲苷的一种新型有效的分析方法。 2 薄层扫描法fLcs法) TLCS法多采用双波长扫描法,能消除有机成分的干扰及操作误差,使测定的灵敏度和准确度提高,一般有内标法和外标法。 2.1普通TLCS法实验中样品用氢氧化钾液提取除去酸性成分,以正丁醇萃取使背景干扰少,用大孔树脂分离皂苷除去样品中糖类等水溶性杂质,并在层析缸中放一小杯氨水,使斑点分离明显;采用硅胶G板,以氯仿一甲醇一水(65:35:lO) 为展开剂,在氨饱和蒸气环境下展开,喷以10%硫酸乙醇溶液后加热显色。加样回收率为97.39%,RSD为1.4%。将样品超声提取后,在硅胶GF254板上以氯仿一醋酸乙酯一甲醇(8:

ELSD蒸发光散射检测器的原理

E L S D蒸发光散射检测器 的原理 Company Document number:WTUT-WT88Y-W8BBGB-BWYTT-19998

HPLC蒸发光散射检测器的原理 简介 蒸发光散射检测器(Evaporative Light Scattering Detector)设计用于高效液相色谱系统,分析任何挥发性低于流动相的化合物。ELSD的应用范围包括:碳水化合物,药物,脂类,甘油三脂,未衍生的脂肪酸和氨基酸,聚合物,表面活化剂,营养滋补品,及组合分子库等。 蒸发光散射检测器消除了常见于其他HPLC检测器的问题。示差检测受溶剂前沿峰的干扰使得分析复杂化,并且由于对温度极其敏感使得基线很不稳定,与梯度洗脱不相容。另外,示差检测器的响应不如ELSD灵敏。而低波长紫外检测器在急变梯度条件下受基线漂移的困扰,并要求被分析化合物带有发色团。ELSD则不受这些限制。不同于这些检测器,ELSD能在多溶剂梯度的情况下获得稳定的基线,使得分辨率更好、分离速度更快。另外,因为ELSD的响应不依赖于样品的光学特性,所以ELSD检测时样品不要求带有发色团或荧光基团。 操作原理 蒸发光散射检测器的独特检测原理为,首先将柱洗脱液雾化形成气溶胶,然后在加热的漂移管中将溶剂蒸发,最后余下的不挥发性溶质颗粒在光散射检测池中得到检测。 步骤1:雾化 雾化 经HPLC分离的柱洗脱液进入雾化器,在此与稳定的雾化气体(一般为氮气)混合形成气溶胶。气溶胶由均匀分布的液滴组成,液滴大小取决于分析中采用的气体流量。气体流量越低形成的液滴越大,液滴越大则散射的光越多,从而提高了分析灵敏度,但是越大的液滴在漂移管中越难蒸发。每种方法均存在产生最佳信号噪音比率的最优化气体流量。流动相流速越低要求适当雾化的气体流量也越低。用内径为的微径柱代替内径为标准型分析柱,能大大降低流动相流速,因而提高分析的灵敏度。 步骤2:蒸发 蒸发 气溶胶中挥发性成分在加热的不锈钢漂移管中蒸发。为特定应用设置适当的漂移管温度,取决于流

黄芪叶中黄芪甲苷含量测定论文

黄芪叶中黄芪甲苷含量测定论文 黄芪为常用中药,素有“补药之长”之称,具有益气固表,利尿托毒等功效.黄芪药用价值很高,临床上常用来治疗非特异性免疫功能低下、乙肝和心血管系统疾病.黄芪甲苷作为黄芪成分之一,它具有降压、抗炎、稳定红细胞膜、提高血浆CAMP含量,促进小鼠再生肝DNA合成和增强免疫功能等多种作用.因此在研究黄芪过程中,我们对其成分黄芪甲苷进行了含量测定方法研究,本文用HPLC法测定黄芪甲苷的含量,其样品浓度的范围在0.01~0.2mg/ml之间与峰面积呈线性,该法灵敏度高,重现性好,可准确地测定黄芪甲苷的含量。 1仪器与试剂 Waters高效液相色谱仪:包括510型泵,991光电二极管阵列型检测器,U6K 型进样器;NECPowerMate型计算机,黄芪甲苷标准品购自辽宁省药品检验所。甲醇、正丁醇为分析纯,乙腈为色谱纯、水为去离子水。试验用黄芪叶6月份采自沈阳医学院草药园。 2方法与结果 2.1色谱条件色谱柱为NucleosilC18柱(4.6mm×250mm,5μm);流动相为乙腈-水=1∶2;流速为0.8ml/min;检测波长为205nm;速度为0.4mm/min。 2.2标准曲线制作精密称取黄芪甲苷标准品2.128mg,加流动相定容至2ml,配制成1.064mg/ml的标准品溶液,分别以10、20、30、40、50μl进样测定,以峰面积对进样量作线性回归,得回归方程为Y=-5.6×10-5+6.9365×10-4X(Y为峰面积,X为黄芪甲苷量),r=0.9994,黄芪甲苷标准品在10.64~5 3.20μg范围内与峰面积呈良好线性关系。 2.3提取方法的选择用3种不同提取方法(索氏提取器提取1h;80℃温浸提取1h和超声波提取1h)提取样品,后2种提取方法测得黄氏甲苷含量略低,故选索氏提取器提取方法。 2.4流动相的选择实验试用多种溶剂系统,最后确定以乙腈-水=1∶2为流动相,黄芪甲苷分离效果最好,保留时间也较适宜。色谱图见上图2(ABC)。 2.5样品液制备将黄芪叶阴干后研成粉过40目筛,然后精密称取5.00g,放置索氏提取器中,用100ml80%甲醇加热提取2h,提取液减压蒸去甲醇,用20ml

蒸发光散射检测器标准操作规程

XXXXXXXXXXXXX仪器设备标准操作规程 1 目的:建立ELSD 2000ES蒸发光散射检测器标准操作规程。 2 范围:ELSD 2000ES蒸发光散射检测器。 3 责任:化验室操作者。 4 内容: 4.1 接通电源:打开仪器后面板上的电源开关,接通ELSD2000ES电源。操作窗口出现,窗口给出仪器为“待机状态”,并有一个计时器显示仪器在此状态下有多少时间。仪器将自动显示上一次运行关机前最后所采用的方法设置。 4.2 操作窗口:操作窗口是仪器运行时主显示窗口。此窗口提供当前运行方法的以下信息: ·方法:当前加载方法的名称。 ·漂移管温度:漂移管的设定温度及当前实际温度读数,单位为℃。 ·气体流量:雾化器气体的设定流量及当前实际流量,单位为L/min。 ·放大系数:当前放大系数的设定值(可能的数值为1、2、4、8和16)。设定为1代表信号没有放大,随每次放大系数的增大信号基于原数值放大两倍。 ·撞击器:当前撞击器的位置,依据当前使用的方法为开或关。 ·输出值:当仪器处于“运行”状态时,显示以mV为单位的信号值。当仪器处于“待机”状态时,显示“Standby”和待机时间。

·满量程电压:满量程电压的设置(根据所用数据采集系统设定为10mV或1000mV)。 ·出错总数:当前发生的操作错误的总数(如果有的话)。 ·窗口键:用于改变仪器状态或进入其他窗口的功能。 【Edit】:快捷键,从“运行”窗口直接切换到“编辑方法”窗口。 【Menu】:从“待机”或“运行”窗口切换到“菜单”窗口。 【Standby】:将仪器从“运行”窗口切换到“待机”状态。 【Zero】:在“运行”窗口下将输出信号调零。 【Run】:运行当前方法的设置,将仪器从“待机”状态切换到“运行”状态。 4.3 仪器状态:ELSD 2000ES有两种不同的操作状态:“待机”(‘Standby’)和“运行”(‘Run’),仪器当前的状态显示在操作窗口上。 4.3.1 待机状态:检测器通电后立即进入“待机”状态。在此状态下,激光,气流,和漂移管加热器都处于关闭状态。操作窗口显示“待机”字样和计时器表示的待机时间。可执行的窗口键是【Menu】和【Run】。 4.3.2 运行状态:在运行状态下,激光,气流,和漂移管加热器都处于打开状态,撞击器状态与设置状态相吻合。输出信号值会有显示。操作窗口会以mV 为单位显示信号输出值。【Edit】,【Menu】,【Standby】和【Zero】窗口键是可执行的。 5日常操作: 5.1 安全: 请遵守以下条例保证ELSD 2000ES操作安全: 1. 实验室保持良好通风以防止溶剂蒸汽积聚。 2. 使用通风柜或其他通风设备以防止吸入排气管逸漏的溶剂烟雾。

蒸发光散射问题集锦

蒸发光散射技术讨论 1、蒸发光检测器属于质量检测器,理论上可以检测到挥发性低于流动相的任何物质,但对有紫外吸收的 样品组份检测灵敏度比较底,重现性比较差(出厂要求重现性RSD<6%即可),现常用于检测没有紫外吸收的物质。 主要原理是,流动相及组份在蒸发室,先被雾化,流动相蒸发,组份形成气溶胶,然后进入检测室,用激光照射照射气溶胶而产生光散射,测定光散射的光强而获得信号。 组份质量(m)与散射光强(I)的关系为:lgI=b·lgm+lgk k和b是与蒸发室温度及流动相性质等试验条件有关的常数。 剩下的就是一些注意事项和简单保养的问题,比如流动相中不能有盐,使用前先升温给气,再进流动相,使用完后先停流动相,后降温,最后停气,光机。 最后说明一下,使用完毕后可将流动相改为水及甲醇,调节温度及气流量冲洗蒸发室,这样可以增加使用寿命,降低噪音。 2、zzz79朋友所说“我们有一台Alltech ELSD 2000,也许是因为蒸发光散射技术本身的问题,重现性特别 差。在方法学学研究时,更是没法做。” 我想您指的重现性较差,可能是说峰面积的重现性比较差吧。如果在每天测定中均采用随行对照品进行校对,含量的重现性还可以说得过去。 我个人认为气体的流速对峰面积的影响非常大,所以如果您使用纯净的气源,精准的气体流速控制,至少在一天内的重现性不成问题。 根据ELSD的工作原理,必须使用对数方程外标两点法进行计算。但是,在实际应用过程中,如果对照品浓度和被测样品浓度较为接近,直接采用峰面积计算也不会有显著性的影响(尽管其不是合理的方法)。 3、比较赞成楼主的说法,ELSD很多人都说它重现性很差,其实我根据我自己的经验,重现性差一般应该 是指其峰面积重现性较差(和UV比较),但其色谱条件的重现性还是比较稳定的。至于标准曲线的做法,我曾经做过一系列的比较实验,也查询了一些资料,目前尚没有定论到底以峰面积和浓度直接做线性还是用自然对数还是以常用对数,三种方法都有。至于我们在实验中应该如何做线性,个人认为:不必拘泥,首先用峰面积和浓度直接做线性,如果相关系数不好,再尝试用对数关系(自然对数或常用对数)。一般都可以解决问题,不象那位同学说的方法学根本没法做,应该还是可以做的。至于楼主所说的,对照品和供试品溶液接近时可直接用峰面积计算,我不是很认同,当很接近时,可以考虑做一个比较窄的范围做线性,你如果直接用两点法做计算的话,必须得有一些数据支持,否则文章是很难发表的,也没有说服力,很容易被人质问,至于做随行对照的问题,按正规要求,不只ELSD,其他检测器的液相也应该这样做,只是因为仪器相对的稳定性所以大家都不做,对于ELSD当然做随行对照最好,至于是否一定要做,我觉得如果是仪器一直都是你一个人在用,而且条件没有变,预热也够充分,那么不做也行,但是这只是考察了自己的一个实验而已,不敢建议大家都不做,在您自己做实验时建议你还是做随行对照的好,也好心里面有底,免得造成不好的影响,呵呵。建议做随行对照。 谈到ELSE仪器的使用上,也有一些体会,但一时难以细细道来,主要就是雾化温度和气体流速的设置上,如果这两个参数设置合理,一般情况下都不会有什么问题,大部分的问题都是出在温度和流速设置不合理上。基线噪音的出现也多是因为两个参数设置不合理而导致雾化器漂移管污染那就只好清洗了,也有个别人因为操作失误而导致问题的但不多见,一般仪器厂商提高的参数设置只能用来参考,实际实验时很少完全和他提供的条件一致的,多比他提供的参数稍微高些,开始设置温度建议高些,

ELSD蒸发光散射检测器的原理

HPLC蒸发光散射检测器的原理 简介 蒸发光散射检测器(Evaporative Light Scattering Detector)设计用于高效液相色谱系统,分析任何挥发性低于流动相的化合物。ELSD的应用范围包括:碳水化合物,药物,脂类,甘油三脂,未衍生的脂肪酸和氨基酸,聚合物,表面活化剂,营养滋补品,及组合分子库等。 蒸发光散射检测器消除了常见于其他HPLC检测器的问题。示差检测受溶剂前沿峰的干扰使得分析复杂化,并且由于对温度极其敏感使得基线很不稳定,与梯度洗脱不相容。另外,示差检测器的响应不如ELSD灵敏。而低波长紫外检测器在急变梯度条件下受基线漂移的困扰,并要求被分析化合物带有发色团。ELSD则不受这些限制。不同于这些检测器,ELSD能在多溶剂梯度的情况下获得稳定的基线,使得分辨率更好、分离速度更快。另外,因为ELSD的响应不依赖于样品的光学特性,所以ELSD检测时样品不要求带有发色团或荧光基团。 操作原理 蒸发光散射检测器的独特检测原理为,首先将柱洗脱液雾化形成气溶胶,然后在加热的漂移管中将溶剂蒸发,最后余下的不挥发性溶质颗粒在光散射检测池中得到检测。

步骤1:雾化 雾化 经HPLC分离的柱洗脱液进入雾化器,在此与稳定的雾化气体(一般为氮气)混合形成气溶胶。气溶胶由均匀分布的液滴组成,液滴大小取决于分析中采用的气体流量。气体流量越低形成的液滴越大,液滴越大则散射的光越多,从而提高了分析灵敏度,但是越大的液滴在漂移管中越难蒸发。每种方法均存在产生最佳信号噪音比率的最优化气体流量。流动相流速越低要求适当雾化的气体流量也越低。用内径为2. 1mm的微径柱代替内径为4.6mm标准型分析柱,能大大降低流动相流速,因而提高分析的灵敏度。 步骤2:蒸发 蒸发 气溶胶中挥发性成分在加热的不锈钢漂移管中蒸发。为特定应用设置适当的漂移管温度,取决于流动相组成和流速,以及样品的挥发性。高有机含量流动相比高含水量流动相要求蒸发的漂移管温度低。流动相流速越低比流动相流速越高要求蒸发的漂移管温度越低。半挥发性样品要求采用较低的漂移管温度,

黄芪甲苷的测定方法

黄芪甲苷含量测定几种常用方法的比较 为黄芪的主要活性成分之一。能抗炎降压、镇痛镇静和促进再生肝DNA水平。现代药理研究表明,黄芪甲苷具有改善白细胞变形能力、改善心肌收缩及舒张功能、促进胰岛素分泌和清除自由基等药理作用。近年来,对的含量测定方法的研究很多。本人就几种常用方法作一比较。 1高效液相色谱法(I-R_C法) HPLC法因其分离度好、灵敏性高,适用范围广等优点,已广泛用于黄芪甲苷的含量测定、稳定性、药理和临床研究中。 1.1 HPLC—uv法属于四环三萜类皂苷,紫外末端吸收f max200.8 nm)。紫外检测灵敏度低,干扰因素多,目前 HPLC法是最常用的检测器是紫外检测器。苏瑞强Ⅲ等采用 HPLC法测定黄芪甲苷的含量,色谱柱为YWG—C18柱0.9 mm x250 mm,5 m),流动相为乙腈一水(1:2.3),检测波长为 203nm,结果线性范围为0.86—5.27 I,L g/mL,加样回收率为 97.52%,RSD为3.10%。 1.2 HPLC一示差折光检测法由于在紫外区仅有微弱的末端吸收,溶剂噪音对结果有较大的影响,且其前处理繁杂。池玉梅等四应用HPLC示差折光检测法测定黄芪精 12I服液中黄芪甲苷的含量,色谱柱为Hypersi|ODS 2(4.6ram X 200ram,5 I,Lm),流动相为甲醇一水(67:33),结果黄芪甲苷线性范围是1-5 g/ml,回收率为98.1%,RSD为2.02%。该法简单方便,重现性好,灵敏度高,结果准确、可靠。 1.3 RP—HPLC法路玫等[3j采用RP—HPLC法测定黄芪注射液中的含量。色谱柱为Nova—PakC18柱0.9ram xl5Omm,4la,m),流动相为乙腈一水一磷酸(1:2:O.1),检测波长为203nm,柱温为40%。实验中将样品蒸干,采用水饱和的正丁醇溶解,用氨试液洗涤后蒸干,残渣用甲醇溶解。结果加样回收率为94.7%,RSD为2.6%。该法简便、稳定性好、重珊陆好、灵敏度高,且由于在流动相中加入磷酸,可使基线平稳,样品峰与其他峰达到基线分离。郑志仁等H将药材置索氏提取器提取1 h后采用RP—HPLC法测定提取液中的含量,色谱柱为Nueleosil c 18柱,流动相为乙腈一水(1:2),检测波长为205rim。结果黄芪甲苷线性范围是l0.64~ 53.20I.L g/mL,加样回收率为92.66%。 1.4 HPLC—ELSD法蒸发光散射检测原理是使流动相溶剂喷雾汽化,进入加热管后溶剂挥发;被分析检测的物质颗粒经镭射光产生散射,散射光由光电倍增管收集得到响应,光散射检测器的响应大小决定由被分析物质的颗粒的数量和大小,而不受流动相溶剂的干扰;不要求被检测组分有特定的化学结构。赵灵芝等15]采用HPLC—ELSD法测定黄芪中的含量,以Blite—ODS柱为色谱柱,乙腈一水(36:64)为流动相,流速为0.8ml /rain;ELSD参数中漂移管温度为100℃,N 流速为2.74ml/min。结果黄芪甲苷线性范围是2.016~ 12.096g,加样回收率为97.43%,RSD 为1.57%。该法灵敏度高,分离度好,干扰少,前处理简便,回收率高,重现性好。周春玲等对甲醇一水(4o:6o)、四氢呋喃一水(25:75)及乙腈一水 (1:21等不同流动相进行了试验,并考察了的分离情况及检测灵敏度,同时通过观察峰面积、基线噪音和信噪比,研究了漂移管温度和气体流速等ELSD参数条件。结果表明,采用乙腈一水(1:2)为流动相时,分离情况最好;最佳的测定参数是漂移管温度为105 oC,气体流速为2.96L/rain;样品加样回收率为100.5%,RSD为3.23%。该法分离度好,精密度和重珊性俱佳,回收率高。 1.5 HPLC—MS法高效液相一质谱(HPLC—Ms)联用仪是当前天然药物的成分、药理与临床研究中最重要的联用仪器,能解决复杂成分样品的定性、定量问题。顾泳川等[61建立 HPLC—MS法测定大鼠尿中黄芪甲苷的含量,并对其尿药动力学进行研究。采用Diamonsil TMC18柱为色谱柱;乙腈一水 (40:60)为流动相;电喷雾离子化接口的四级质谱检测器,内标为地高辛,选择性离子检测(sIM1。实验中尿样加入地高辛混匀离心后,上清液通过已活化的固相萃取小柱,用3ml水淋洗,残渣用2ml甲醇洗脱,N:吹干后用流动相溶解。该法专属性好,方法灵敏度高,最低检测限为lOng/ml,杂质干扰小,操作简便,是检测体内的一种新型有效的分析方法。 2 薄层扫描法fLcs法) TLCS法多采用双波长扫描法,能消除有机成分的干扰及操作误差,使测定的灵敏度和准确度提高,一般有内标法和外标法。 2.1普通TLCS法实验中样品用氢氧化钾液提取除去酸性成分,以正丁醇萃取使背景干扰少,用大孔树脂分离皂苷除去样品中糖类等水溶性杂质,并在层析缸中放一小杯氨水,使斑点分离明显;采用硅胶G板,以氯仿一甲醇一水(65:35:lO) 为展开剂,在氨饱和蒸气环境下展开,喷以10%硫酸乙醇溶液后加热显色。加样回收率为97.39%,RSD为1.4%。将样品超声提取后,在硅胶GF254板上以氯仿一醋酸乙酯一甲醇 (8:6:0.8)展开,254 BITI紫外光灯下定位,双波长( s=228 nm, It=370 nm)反射式锯齿扫描测定,平均加样回收率为 99.5%,RSD为2.5%。

PL-ElS2100型蒸发光散射检测器操作规程

一、目的:规范PL-ElS2100型蒸发光散射检测器的使用。 二、依据:PL-ElS2100型蒸发光散射检测器说明书。 三、责任人:仪分操作人员 四、内容: 4.1系统组成:本系统由1个溶剂输送泵、7725i手动进样阀、PL-ElS2100型蒸发光散射检测、N2000色谱数据工作站和电脑等组成。 4.2工作准备:PL-ElS2100型蒸发光散射检测器要求氮气纯度98%以上。打开氮气供给装置,设定压力为60-100psi。 4.2.1打开PL-ElS2100型蒸发光散射检测器电源开关,仪器开启时处于“STANDBY”模式,加热块关闭,雾化气流速设定为较低的1.2SLM。此模式下可设定仪器参数(EVAP、NEB、GAS)或者加载合适的方法; 4.2.2将工作模式设定为“RUN”,使仪器加热平衡在加热或冷却过程中,仪器会显示“NOT READY”。仪器平衡完毕后会显示“READY”并检查基线。在洗脱液未接入是噪音应低于0.2mv,这表明雾化气洁净干燥。如基线毛刺一般是由于雾化气中的粒子或水分造成的。引入洗脱液并待其平衡15min。 4.2.3再次检查基线,应不超过1mv。如是纯水应不超过0.25mv,纯有机溶剂也应不超过1mv。缓冲体系和稳定剂会明显增加噪音。 4.2.4连接色谱柱,旋开“排气阀”,“purg”键排气至管路无气泡,点击“pump”键停止排气,“排气阀”旋紧,点击“pump”键使泵运行,点击“func”功能键由低至高设定流速。 4.2.5接通电脑和ELSD检测器,然后设定实验分析所需的条件(温度和气体流速) “MODE”键为仪器运行模式;“METHOD”键显示和改变仪器方法;“EVAP”键显示和改变蒸发温度(0-120℃);“NEB”键显示和改变雾化温度(0-90℃);“GAS”键显示和改变雾化气流速(0.80-3.25SLM)或者加载合适的方法;将工作模式切换为“RUN”,仪器平衡完毕后会显示“READY”。 4.3进样 4.3.1色谱柱连接到ELSD检测器上且系统已达到平衡。 4.3.2 进样点击检测器“ZERO”键调零,工作站中“零点校正”按钮校正基线零点,再按一下查看基线。 4.3.3 用试样溶液清洗注射器,并排除气泡后抽取适量即可以注入进样阀,扳下进样阀,工作站采集数据。 4.4清洗管路及进样口 4.4.1分析完毕后,再用经滤过和脱气的适当溶剂清洗色谱系统,正相柱一般用正已烷,反相柱如使用过含盐流动相,则先用水,然后以甲醇-水用分析流速冲洗,特殊情况应延长冲洗时间。 4.4.2冲洗完毕后,逐步降低流速至0,关泵,进样器也应用相应溶剂冲洗,可使用进样阀所附专用冲洗接头。 4.4.3 关断电源,作好使用登记,内容包括日期、检品、使用时间,仪器完好状态等。 4.5注意事项 4.5.1 应用ESLD检测器时禁止用含盐的流动相,气源调节开关一旦调整好就不要随便调动。 4.5.2随时注意排气管口和液体收集瓶。

HPLC法测定黄芪叶中黄芪甲苷的含量

HPLC法测定黄芪叶中黄芪甲苷的含量 【摘要】目的建立一种准确、简便测定黄芪甲苷含量的分析方法。方法色谱柱为Nucleosil C18柱(4.6mm×250mm,5μm);流动相为乙腈-水=1∶2;流速为0.8ml/min;检测波长为205 nm;速度为0.4mm/min。灵敏度为0.1 AUFS,测定了黄芪甲苷的含量,平均回收率为96.1%,RSD为2.15%。结果样品浓度在0.01~0.2mg/ml之间与峰面积成良好的线性关系。结论本方法的重复性好、精密度高、稳定性强。 【关键词】 HPLC 黄芪叶黄芪叶中黄芪甲苷 【Abstract】 0bjective: Establishes one kind accurately, easily to determine Astragaloside the content the analysis method. Method: The chromatographic column is Nucleosil the C18 column (4.6mm×250mm,5μm); Flowing for methyl cyanide - water =1∶2; The speed of flow is 0.8ml/min; The examination wave length is 205 nm; The speed is 0.4mm/min. The sensitivity is 0.1 AUFS, has determined the Astragaloside content. The average returns-ratio is 96.1%, RSD is 2.15%. Result:Sample density in 0.01~0.2mg/ml becomes the good linear relationship with the peak area.Conclusion: This method's duplication is good, accuracy high, stable. 【Key words】 HPLC Leaf of the Astragalus Astragaloside 黄芪为常用中药,素有“补药之长”之称,具有益气固表,利尿

应用蒸发光散射检测器的含量计算1

应用蒸发光散射检测器的含量计算 1.检测器响应和定量分析 响应是随着散射范围的变化而变化,我们假设样品的范围很大,测得的峰面积与样品的质量有如下关系: A=am b(1) a、b是相关系数,它们与液滴大小、溶质浓度、溶质自然特征和蒸发温度等有关。等式1反应出A和m是非线性关系;等式1取对数得到等式2,等式2中㏒A和㏒m是线性关系: ㏒A=b㏒m+㏒a (2) 2.标准曲线的计算: 例如:称取对照品3.10mg至10ml容量瓶中,定容,其含量为310ug/ml。 进样量5ul,得X1:310 ug/ml×5/1000=1.55×10-6,其得到的面积为Y1=79.50。 进样量10ul,得X2:310ug/ml×10/1000=3.10×10-6,其得到的面积为Y2=203.61。 将上述对照品的各稀释浓度及其对应的面积,分别取对数列表如下: _ _ _ ∑(m i-m)(A i-A)∑m i A i-m∑A i 回归系数:b=---------------------------------- = ----------------------------- (1) _ _ ∑(m i-m)2∑m i2-m∑m i 1.496149-0.340845×4.20917 0.061474 b= --------------------------------------------- = ----------------- = 1.356757 0.2776605-0.340845×0.68169 0.0453095 _ _ 截距:a= A-b m (2) a=2.104585-1.356757×0.340845 = 1.64241 设:Y = ㏒Y1=194.35A , X = b㏒m , C = ㏒a , 得:Y = X + C 已知称取供试品0.5330g至25ml容量瓶中,加溶剂至刻度,其含量为213.2ug/ml。 进样量10ul,得X1:21.32×10/1000=21320×10-6,其得到的面积为Y1=194.35。 Y1=194.35 , ㏒2.288585 = 1.356757㏒m +1.64241 2.288585 -1.64241 0.646175 ㏒m = ------------------------------- = ----------------- = 0.476264 1.356757 1.356757

黄芪中黄芪甲苷的含量测定技术

龙源期刊网 https://www.wendangku.net/doc/5c9207381.html, 黄芪中黄芪甲苷的含量测定技术 作者:刘伟 来源:《中国科技博览》2013年第33期 论文摘要:目的建立荧光分析法测定黄芪药材中黄芪甲苷的含量方法。方法利用大茴香 酸在硫酸介质中与黄芪甲苷反应产生强烈荧光的特性进行测定黄芪中黄芪甲苷含量。结果最大激发波长Ex为320 nm,最大发射波长Em为387nm。测定样品的平均回收率为97.22%,RSD=2.31%(n=5)。结论该方法灵敏度高,选择性好,结果无干扰,可广泛应用于黄芪药材的质量控制。 主题词:黄芪黄芪甲苷 中图分类号:R927.2 黄芪为豆科植物蒙古黄芪Astragalus membranaceus(Fisch.)Bge.var.mongholicu(Bge.)Hsiao或膜荚黄芪A.membranaceus(Fisch.)Bge的干燥根,具有补气固表、利尿脱毒,排脓,敛疮生肌等功效。黄芪为常用中药,在中药制剂中以黄芪为君药的产品非常多,因此如何控制黄芪的质量至关重要。黄芪甲苷是黄芪主要有效成分之一,也是黄芪皂苷中具有代表性的单体,在抗衰老、调节免疫功能、保护心肌和大脑缺血等多方面具有显著作用。黄芪甲苷仅在200 nm处有末端吸收,对HPLC色谱法紫外检测器检测不利,噪音对结果影响较大,灵敏度 也较低。2005年版《中国药典》采用蒸发光散射检测器测定,具有分离度好,应用范围宽, 流动相无干扰等优点,但操作繁琐,价格昂贵,不利于制药公司及基层医疗单位普及。本文根据浓硫酸条件下黄芪甲苷与大茴香酸反应产物具有荧光的特性,采用荧光分光光度法测定不同产地、不同生长年限黄芪药材中黄芪甲苷的含量,以期为黄芪的质量控制提供客观的定量评价依据。 1 仪器与试药 Perkin Elmer instruments LS45 Luminesence Spectrometer(美国PerkinElmer 公司LS45型荧光分光光度计),HX-200A型高速中药粉碎机,万分之一电子天平 FA/JA 1004型。72%的硫酸溶液,2%大茴香酸的无水乙醇溶液,石油醚、氯仿、正丁醇(三者均为天津市东丽区天大化学试剂厂产品),甲醇(天津市科密欧化学试剂开发中心产品),无水乙醇(天津市耀华化学试剂有限责任公司产品),以上试剂均为分析纯。 黄芪甲苷对照品购于中国药品生物制品检定所(批号110781-200613)。黄芪药材采集或购于山西,内蒙两省,经山西中医学院中药鉴定教研室牛燕珍副教授鉴定为蒙古黄芪。 2 方法和结果

ELSD检测器原理

ELSD检测器原理 2.1蒸发光散射检测器原理 ELSD原理适用所有待测物的挥发性低于流动相的分离,事实上,新一代ELSD检测器在操作上提供更低的温度,允许半挥发性被分析物的定量,即使检测器的灵敏度可能较低。不挥发溶质,在分析柱的检测极限可以达到毫微克(ng)水平。 采用SFC,超临界流体(通常是二氧化碳)在周围环境大气压和温度条件大气中进行减压和膨胀,不像HPLC,流动相在减压作用下蒸发,形成气流,运载样品以微小颗粒喷雾的形式采用光散射检测。 应用于SFC的限制和其它形式的液相相同,也就是说,溶剂修饰物必须比被分析物具有更高的挥发性。 图1阐明蒸发光散射检测器依次发生的三个主要步骤: 色谱洗脱液的雾化 色谱流动相的蒸发 对含有待测物的剩余颗粒的光散射 每个步骤都具有明确的功能但也会改变,或者是受其它步 骤的影响,所有市场上的蒸发光散射检测器都包含以上步 骤,但在他们操作方法上会有所不同。 因为ELSD易受非线性响应的影响,所以这篇文章的 一部分专门谈到检测器的响应和定量。 图1 2.1.1雾化 这个步骤把大量体积的液体流动相转变成细小的液滴,从而溶剂更易于蒸发;较大的液滴,在蒸发步骤中需要更高的温度。剩余溶质颗粒越大,散射光的强度就更大。 在所有商业上的ELSD,雾化都是用惰性载气通过文丘里管流动,采用载气同轴包装柱洗脱液,使之通过小孔。液滴的大小和均匀性对于检测的灵敏度和重复性非常重要。在一些型号的ELSD,雾化洗脱液立即进入加热的蒸发管,一般情况下是漂移管,在这里开始进行第二步骤。但是,另一型号的则包含一个雾化室(图1)它被认为可以在三个方面增强检测器的操作。 可形成一个窄的液滴尺寸分布,最大的液滴通过在室的内壁冷凝,然后直接到废物出口或排出,在这里连续地虹吸冷凝液体。所以,用于蒸发保留的液滴所需要的蒸发温度大大降低。 柱洗脱液直接通过蒸发管的比例变化为,以纯水溶液作为淋洗液的小于10%,以有机溶剂混合液作为正相色谱洗脱液的为90-100%。这个比例与原子光谱和连接红外光谱(FTIR)和感应耦合等离子体(ICP)不同检测系统的液相作出的雾化情况非常一致。 雾化过程的温度与漂移管的蒸发温度可以各自进行独立的调节。这使得检测器很容易与SFC系统结合,在SFC系统流动相的快速减压具有很大的吸热性,通常会造成固态二氧化碳的形成。通过准确的调节雾化室的温度,可以避免由于大的温度波动影响重现性和流动相的沉淀。采用HPLC,半挥发性分析物的定量检测也可通过降低雾化室的温度来得以增强。相反的,在凝胶渗透色谱(GPC)中,高温度允许采用非常低挥发性的溶剂。雾化室的加入使得检测器的清洁简单化。 2.1.2 蒸发 当载气从雾化室把液滴运送到加热漂多管时,蒸发开始。在加热漂移管溶剂被除去,产生微粒或纯溶质的小滴,为了维持颗粒大小的均匀性,在这个步骤中尽量采用低的温度是相当重要的。此外,低温蒸发增强溶质结晶化,溶质颗粒越大,检测光散射的强度就越大。还有,这已被清楚的证明,相同大小的固

蒸发光散射检测器的工作原理和主要优势

蒸发光散射检测器的工作原理和主要优势 点击次数:407 发布时间:2009-6-9 10:22:27 蒸发光散射检测器已被广泛应用于碳水化合物、类脂、脂肪酸和氨基酸、药物以及聚合物等的检测。 蒸发光散射检测器工作原理 雾化: 液体流动相在载气压力的作用下在雾化室内转变成细小的液滴,从而使溶剂更易于蒸发。液滴的大小和均匀性是保证检测器的灵敏度和重复性的重要因素。 UM 3000蒸发光散射检测器,通过对气压和温度的精确控制,确保在雾化室内形成一个较窄的液滴尺寸分布,使液滴蒸发所需要的温度大大降低。 蒸发: 载气把液滴从雾化室运送到漂移管进行蒸发。在漂移管中,溶剂被除去,留下微粒或纯溶质的小滴。UM 3000蒸发光散射检测器采用低温蒸发模式,维持了颗粒的均匀性,对半挥发性物质和热敏性化合物同样具有较好的灵敏度。 检测: 光源采用650nm激光,溶质颗粒从漂移管出来后进入光检测池,并穿过激光光束。被溶质颗粒散射的光通过光电倍增管进行收集。溶质颗粒在进入光检测池时被辅助载气所包封,避免溶质在检测池内的分散和沉淀在壁上,极大增强了检测灵敏度并极大地降低了检测池表面的污染。 蒸发光散射检测器主要优势 1)可检测挥发性低于流动相的任何样品;

2)流动相低温雾化和蒸发,对热不稳定和挥发性化合物亦有较高灵敏度;3)广泛的梯度和溶剂兼容性,无溶剂峰干扰; 4)辅助载气提高了检测灵敏度,保持检测池内的清洁,避免污染; 5)高精度雾化和蒸发温度控制,保证高精度检测; 6)可与任何HPLC系统连接。 ELSD与几种常用的检测器之间的对比 ELSD UV RID MS 应用范围通用有光吸收的化合物通用通用 响应质量相关化学相关折光度相关质量相关 灵敏度高高低高 未知物检测能不能能能 流动相影响/梯度不影响本底影响影响不影响 基线稳定性好较好差好

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