牛奶中酪蛋白和乳糖的分离及纯度测定

第21卷　第3期大学化学2006年6月

牛奶中酪蛋白和乳糖的分离及纯度测定

周夏衍　夏春兰　楚延锋　付晓平　邓立志　周鑫玉

(武汉大学化学与分子科学学院　武汉430072)

摘要　分离牛奶中的酪蛋白和乳糖,并对其纯度进行测定。以此作为物理化学设计实验的部

分内容。

“牛奶中酪蛋白和乳糖的分离及鉴定”作为物理化学的设计实验,其主要实验内容包括:①通过调节pH分离牛奶中酪蛋白和乳糖;②试验酪蛋白和乳糖的鉴定方法;③通过酪蛋白电泳实验分离不同形态的酪蛋白。实验综合了分离技术、分光光度法、旋光度测定、电泳等内容。“牛奶中酪蛋白和乳糖的分离及纯度测定”作为其中的一部分,具体内容如下。

1　牛奶中酪蛋白的分离

牛奶是一种乳状液,主要由水、脂肪、蛋白质、乳糖和盐组成。酪蛋白是牛奶中的主要蛋白质,是含磷蛋白质的复杂混合物。蛋白质是两性化合物,当调节牛奶的pH达到酪蛋白的等电点(pH=4.8)时,蛋白质所带正、负电荷相等,呈电中性,此时酪蛋白的溶解度最小,会从牛奶中沉淀出来,以此分离酪蛋白。因酪蛋白不溶于乙醇和乙醚,可用此两种溶剂除去酪蛋白中的脂肪。

取50mL新鲜牛奶,在恒温水浴中加热至40℃,边搅拌边慢慢加入10%醋酸溶液,使牛奶pH=4.8,放置冷却、澄清后,用尼龙布过滤酪蛋白。(在滤液中加入少量粉状碳酸钙,留作乳糖的分离。)依次用乙醇、乙醇和乙醚的等体积混合液、乙醚洗涤酪蛋白,去除脂肪,待酪蛋白充分干燥后称量其重量,并计算牛奶中酪蛋白的含量。

2　牛奶中乳糖的分离

上的醇羟基 乳糖是一种二糖,它由D2半乳糖分子C′上的半缩醛羟基和D2葡萄糖分子C

4

脱水通过β21,4苷键连接而成。乳糖是还原性糖,绝大部分以α2乳糖和β2乳糖两种同分异构体型态存在,α2乳糖的比旋光[α]20

=+86°,β2乳糖的比旋光[α]20D=+35°,水溶液中两种乳

D

糖可互相转变,因此其水溶液有变旋光现象。乳糖也不溶于乙醇,当乙醇混入乳糖水溶液中,乳糖会结晶出来,从而达到分离的目的。

将1中加入碳酸钙的滤液置于蒸发皿中,用蒸汽浴浓缩至约15mL,稍冷后,在热溶液中加入约90mL95%乙醇,再加热,使其混合均匀,趁热过滤,滤液应澄清。滤液移至锥形瓶中,加塞,放置1～2天,让乳糖充分结晶,过滤分离出乳糖晶体。用冷的95%乙醇洗涤结晶,一般应对乳糖重结晶,干燥后称重,计算牛奶中乳糖的含量。

05

3　酪蛋白的纯度测定

用双缩脲法测定酪蛋白的含量[1]

。在碱性溶液中双缩脲与铜离子结合形成复杂的紫红色复合物,而蛋白质及多肽的肽键与双缩脲的结构类似,也能与铜离子在碱性环境中形成紫红色复合物,其最大吸收光波长为540nm 。该复合物颜色的深浅与蛋白质的浓度成正比,而与蛋白质的分子量及氨基酸组成无关。

配制双缩脲试剂:取1.5g 硫酸铜(CuS O 4?5H 2O )和6.0g 酒石酸钾钠(NaK C 4H 4O 6?4H 2O )溶

于500mL 蒸馏水中,搅拌加入300mL 的10%Na OH 溶液(可另加1g KI,以防止Cu 2+自动还原

成一价氧化亚铜沉淀),用水定容至1000mL 。此试剂可长期保存,若有黑色沉淀需重配。 酪蛋白标准曲线的制作:取7个容量瓶编号,按表1操作。表1　测定酪蛋白标准曲线的溶液配制

编号

V /mL 标准酪蛋白溶液蒸馏水双缩脲试剂1

0 6.0020.002

1.00 5.0020.003

2.00 4.0020.004

3.00 3.00

20.005

4.00 2.0020.006

5.00 1.0020.007

6.00020.00

注:标准酪蛋白溶液的配制:用0.05mol/L NaOH 溶液溶解酪蛋白(CP ),加热或放置过夜助溶,配

制成2mg/mL 的酪蛋白溶液。

　图1　酪蛋白溶液标准曲线 充分混匀后,在60℃水浴中放置30m in,冷却

至室温,用V I S 27220分光光度计在540nm 波长下

测定其吸光度。以吸光度A 540为纵坐标,酪蛋白溶

液质量浓度为横坐标,绘制标准曲线(图1)。

酪蛋白溶液标准曲线的拟合式为A =5.711×

10-4+0.2879ρ,R =0.99939,其中A 为吸光度,ρ

为酪蛋白溶液质量浓度,R 为相关系数。

将从牛奶中分离的酪蛋白配成合适的浓度,

在上述相同条件下,测定其吸光度。由标准曲线

计算纯酪蛋白的浓度,与实际浓度比较,计算从牛奶中分离出来的酪蛋白的纯度。

测定从牛奶中分离的酪蛋白的纯度一般在90%以上。

4　乳糖的纯度测定

不同浓度的乳糖溶液具有不同的旋光度,其旋光度与浓度成正比。因乳糖具有变旋光现象,其溶液需放置数小时或加入2滴浓氨水,使之达到平衡,再测定旋光度。

配制不同浓度的标准乳糖溶液,放置过夜,用341旋光仪测定其旋光度。乳糖为分析纯,

含一个分子结晶水,[α]25D =52°。以旋光度为纵坐标,乳糖溶液质量浓度为横坐标,绘制标准

1

5

　图2　乳糖溶液标准曲线

曲线(图2)。

乳糖溶液标准曲线的拟合式为α=-0.006+

0.0528ρ,R =0.9999,其中α为旋光度,ρ为乳糖溶

液质量浓度,R 为相关系数。

将从牛奶中分离的乳糖配制成合适的浓度,先

测定其变旋光,后加入2滴浓氨水摇匀,静置20m in 后,测定平衡时的旋光度。由标准曲线计算纯乳糖

的浓度,与实际浓度比较,计算从牛奶中分离出来

的乳糖的纯度。

测定从牛奶中分离的乳糖的纯度一般在90%

以上。

5　实验注意事项 ①酪蛋白等电点随温度不同而变化,等电点pH 为4.6～4.8。分离酪蛋白时,边加醋酸,边搅拌,边测pH,同时观察沉淀。开始快搅拌,接近等电点时,应慢搅拌。 ②酪蛋白沉淀用200目的尼龙布过滤比较好,同时进行抽滤。用滤纸很难过滤;而用纱布过滤,酪蛋白容易粘在其上。

③用乙醇和乙醚清洗酪蛋白沉淀时,应将酪蛋白捣碎,并在溶剂中搅拌、浸泡,充分洗净脂肪。纯净的酪蛋白应为白色,若发黄表明脂肪未洗干净。 ④用双缩脲法测定酪蛋白的含量时,应使酪蛋白与双缩脲试剂反应完全,否则测量结果不准。

⑤首次结晶出来的乳糖含有杂质,一般需要重结晶,否则乳糖难以溶解,且溶液混浊,测定的旋光度不准。

⑥测定乳糖的平衡旋光度时,应放置数小时或加入2滴浓氨水,待平衡后再测。

参　考　文　献

1　李如亮.生物化学实验.武汉:武汉大学出版社,1998　

　(上接第49页)

参　考　文　献

1　高鸿.分析化学前沿.北京:科学出版社,1991

2　陈炳稔,何广平,凌莫育.应用化学,1997,14(6):75

3　陈炳稔,何广平,刘小珠.化学通报,1998(10):43

4　赵振国,顾惕人.化学学报,1983,41(12):1091

5　He Guangp ing,Chen B inren .Chinese Journal of R eactive Polym ers,2001,10(2):15425

牛奶中脂肪含量的测定

萍乡学院牛奶中脂肪含量的测定 专业：商检技术 学生姓名：薛钦 指导老师：肖沐航 学号： 完成时间：2020年6月13日

牛奶中脂肪含量的测定 【实验目的】 1、了解从牛奶中分离脂肪的方法。 2、熟练掌握脂肪哥特里-罗紫法的测定方法。 3、了解罗紫哥特里法测脂肪原理。 【实验原理】 牛奶是一种营养成分齐全、保健功能显著的食品，被誉为“最接近完善”的食品和人体“白色血液”。牛奶的组成成分十分复杂，基本成分主要为脂肪蛋白质、乳糖、无机盐、维生素和水。脂肪是牛奶等食品的重要营养组成成分，脂肪酸作为脂肪中的有效成分，其种类、含量和比例与人体营养需求密切相关；随着食品工业的快速发展，牛乳质量越来越受到人们的关注，乳脂是牛乳质量评价的重要指标之一。牛奶脂肪主要含有甘油三酯、甘油酯、脂肪酸。 分离牛奶中脂肪的方法;悬浮结晶、固化层熔融结晶法融或者采用离心机分离。能用离心机分离出脂肪,因脂肪比重轻，通过高速旋转，产生离心作用将脂肪分离出来。 熔融结晶是一种重要的分离、纯化及浓缩技术。熔融结晶分离的原理很简单，根据熔点不同进行分离，熔融的混合物移去热源后，依熔点高低逐渐固化得以分离。 检测脂肪的主要方法有：索氏抽提法、酸水解法、哥特里-罗紫法、盖勃氏法和巴布科克氏法、氯仿-甲醇提取法等。

本实验是采用哥特里-罗紫法。又称碱性乙醚提取法。其原理是是利用氨-乙醇溶液，破坏乳的胶体性状及脂肪球膜，使非脂成分溶解于氨-乙醇溶液中而脂肪游离出来，再用乙醚-石油醚提取出脂肪，蒸馏去除溶剂后，残留物即为乳脂。罗紫哥特里法适用于适用于巴氏杀菌乳、灭菌乳、生乳、发酵乳、调制乳、乳粉、炼乳、奶油、稀奶油、干酪和婴幼儿配方食品中脂肪的测定。 【实验步骤】 取一定量样品（牛奶吸取；乳粉精密称取约1g，用10ml60℃水，分数次溶解）于抽脂瓶中，加入氨水，充分混匀，置60℃水浴中加热5分钟，再振摇2分钟，加入10ml乙醇，充分摇匀，于冷水中冷却后．加入25ml乙醚，振摇半分钟，加入25ml石油醚，再振摇半分钟，静置30min，待上层液澄清时，读取醚层体积，放出一定体积醚层于一已恒重的烧瓶中，蒸馏回收乙醚和石油醚，挥干残余醚后．放入l00—105℃烘箱中干燥小时，取出放入干燥器中冷却至室温后称重，重复操作直至恒重。 【仪器与试剂】 离心机、抽脂瓶；水浴锅乳粉。 ①20％氨水（相对密度）； ②96％乙醇； ③乙醚（不含过氧化物）； ④石油醚（沸程30—60℃） 【计算结果】

对牛奶的七大误解

对牛奶的七大误解 近年来，对牛奶是优是劣的争论一直没有停止。甚至有人还抛出了“牛奶有害”论调，这是不对的，也是不科学的。牛奶是完美的，不仅营养丰富、全面，而且易于吸收，所以它成了人们健康食品的最佳选择。但正如任何事物一样，有阳光就会有阴影，牛奶也不例外，有美丽也就会有误会。人们对牛奶的误会，综合起来讲，大约有以下七个方面： 你对牛奶的七大误解 误会一：牛奶越香越好 牛奶加热时才有奶香味，凉奶则很少闻到香味。此外，不同季节牛奶口感也有很大区别。夏天青饲料吃得较多，相对来讲含水分多、干物质、脂肪少，同时青饲料（包括青草）中的油酸部分转入牛乳中，使其含量升高。而油酸属于长链不饱和脂肪酸，不挥发，不体现香气，因此夏季的牛奶“奶香味”较淡。冬季牛青贮、干草吃得较多，其干物质、脂肪含量高，营养丰富，牛吃了以后部分转化为短链脂肪酸，熔点低，易挥发，赋予牛奶特有的乳香味，冬季的牛奶“奶香味”则较浓。 误会二：牛奶越浓越好 很多人选购的牛奶，揭开后喜欢看到上面附有一层厚厚的黄油，认为这样黏稠的牛奶才是好奶，这种观点是不正确的。喝牛奶时，你不妨留心一下，便可在牛奶包装物上发现印有两个很特别的字眼：均质。 均质是指牛奶加工时将牛奶中的脂肪球进一步粉碎，使脂肪充分溶解到蛋白质和水中，从而防止脂肪吸附在袋、盖和盒上。牛奶经过均质这种细加工，把脂肪球打碎，有利于人体吸收，能够更有效地促进消化。同时，被打碎的脂肪球溶入奶中发出脂肪香，使奶味更加浓郁醇厚。一般来说，均质过的牛奶，看起来较稀，但其营养价值实际上一点儿也不比看起来似乎黏稠的牛奶低。那些在袋上、盒上和盖上附有黄油的牛奶，是因为脂肪量大，经过一定时间后，脂肪就会上浮，形成油脂。这样的牛奶难以被人体充分吸收，常会造成不必要的浪费。 在此需要提醒的是，有的牛奶生产厂家甚至利用人们对此的误解，在牛奶中添加增稠剂，以此蒙骗消费者，所以正确选购牛奶时，千万不要以表面的稀稠作为判断牛奶质量优劣的标准。误会三：牛奶加热煮沸喝 如果想喝热牛奶，用温水浸泡即可，牛奶不仅不宜冷冻保存，而且还不宜高温久煮。牛奶煮熟后，营养会有所损失，煮的时间越长，损失越大。这是因为随着温度的升高，牛奶中所含的维生素、蛋白质等营养成分都会发生化学变化，不仅色、香、味降低，还会转化成其它物质，所以牛奶加热时间不宜过长。 一般来说，消毒牛奶的温度要求并不高，80—85℃/10—15秒。如果煮沸，温度达到100℃，牛奶中的乳糖就会出现焦化现象，而焦糖可诱发癌症。其次，煮沸后牛奶中的钙会出现磷酸沉淀现象，从而降低牛奶的营养价值。 误会四：牛奶可以当水喝 有些人把牛奶当开水喝，以为多多益善，这是不对的。水对于人体是非常重要的，为使体内水分保持平衡，必需从饮食中得到补充。牛奶虽含有大量水分，但属于高渗性饮料，饮入过多，特别在出汗、失水过多时，容易导致脱水。因此，一般来说，牛奶是不能当水喝的。 但也有特殊情况，如中国飞人刘翔喝牛奶跟喝水似的。据他的父母说，他从小就喜欢喝牛奶，十六七岁的时候，他每天就要喝三四瓶了，刘翔自己也说爱喝奶胜过于水：“我很喜欢喝牛奶，早晚都喝。”这是因为刘翔每天大量的运动消耗，需要喝大量的牛奶来补充自己的体能。误会五：牛奶用微波炉加热会致癌 有人说，牛奶用微波炉加热后喝会致癌，这是不科学的。其实微波加热的原理很简单，乃是

牛奶中部分成分的分析.

牛奶中部分成分的分析 1.实验目的 1.1设计合适的实验方法来分析牛奶中蛋白质与钙的含量 1.2学习利用等电点沉淀法从牛奶中制备酪蛋白 1.3熟悉可见光分光光度计的操作。 1.4加强对沉淀、抽滤、溶液配制等基本操作的锻炼。 1.5掌握双缩脲法测定蛋白质的原理和方法。 1.6掌握配位滴定法测定液体食品中钙含量的原理和方法。 1.7通过与牛奶包装上注明的含量比较，学会对自己实验分析结果进行客观评价。 2. 实验原理 牛乳中的主要的蛋白质是酪蛋白，含量约为35g·L-1。酪蛋白是一些含磷蛋白质的混合物，等电点为4.7。利用等电点时溶解度最低的原理，将牛乳的pH调至4.7时，酪蛋白就沉淀出来。用乙醇洗涤沉淀物，除去脂类杂质后便可得到纯酪蛋白。 双缩脲(NH2CONHCONH2)在碱性溶液中与硫酸铜反应生成紫红色化合物，称为双缩脲反应，蛋白质分子中含有许多肽键在碱性溶液中也能与Cu2+反应产生紫红色化合物。在一定范围内，其颜色的深浅与蛋白质浓度成正比。因此，可以利用比色法测定蛋白质浓度。双缩脲法是测定蛋白质浓度的常用方法之一。操作简便、迅速、受蛋白质种类性质的影响较小，但灵敏度较差，而且特异性不高。除-CONH-有此反应外，-CONH2、-CH2NH2、-CS-NH2等基团也有此反应。 钙与身体健康息息相关，钙除成骨以支撑身体外，还参与人体的代谢活动，它是细胞的主要阳离子，还是人体最活跃的元素之一，缺钙可导致儿童佝偻病，青少年发育迟缓，孕妇高血压，老年人的骨质疏松症。缺钙还可引起神经病，糖尿病，外伤流血不止等多种过敏性疾病。补钙越来越被人们所重视。牛奶中含有易被人体吸收得钙，有些牛奶产品中还特地加钙而成为钙奶。对于液体牛奶中钙的含量，可采用EDTA法进行直接测定。考虑到牛奶中含有Fe3+、Al3+等干扰离子，可以加入少量三乙醇胺以消除它们的，调节pH≈12～13，以铬蓝黑R作指示剂，指示剂与钙生成红色的络合物，当用EDTA 滴定至计量点时，游离出指示剂，溶液呈现蓝色。 3. 实验步骤

牛奶中提取酪蛋白

牛奶中提取酪蛋白 [目的与要求] 1、了解等电点沉淀法 2、学习从牛奶中制备酪蛋白的方法 3、加深对蛋白质等电点性质的理解 [原理] 蛋白质是一种亲水胶体，在水溶液中蛋白质分子表面形成一个水化层。另外，蛋白质又是一种两性离子，在一定pH溶液能够维持一个稳定的状态。但是调节蛋白质溶液的pH值至等电点时，蛋白质会因失去电荷而变得不稳定，此时若再加脱水剂或加热，水化层被破坏，蛋白质分子就相互凝聚而析出。等电点沉淀法主要利用两性电解质分子在等电点时溶解度最低的原理，而多种两性电解质具有不同等电点而进行分离的一种方法。 牛乳中主要的蛋白质是酪蛋白含量约为35g/L。酪蛋白是一些含磷蛋白质的混合物，等电点为4.7。将牛乳的pH调至4.7时，酪蛋白就沉淀出来。用乙醇洗涤沉淀，除去脂类杂质后便可得到较纯的酪蛋白。 但单独利用等电点沉淀法来分离生化产品效果并不太理想，因为即使在等电点时，有些两性物质仍有一定的溶解度，并不是所有的蛋白质在等电点时都能沉淀下来，特别是同一类两性物质的等电点十分接近时。生产中常与有机溶剂沉淀法、盐析法并用，这样沉淀的效果较好。 本实验目的是使学生运用等电点沉淀法制备酪蛋白，从中加深对蛋白质等电点性质的理解。 [方法和步骤] 1、取预先放冰箱中冷却的消毒牛奶6mL，3 000r/min离心10min，除去脂肪层的乳液置50毫升烧杯内，加热至40℃左右，在搅拌下慢慢加入10mL左右预热的醋酸-醋酸钠缓冲液，此时混浊液中有大量絮状物沉下。冷至室温，3 000r/min离心10min，弃去上清液，得酪蛋白粗品。 2、用蒸馏水洗沉淀三次（每次5mL左右），3 000r/min离心10min，弃去上清液。 3、将沉淀置研钵中，研碎后，渐加5mL 95%乙醇，静置片刻，将全部悬浮液转移至布氏漏斗抽滤，抽干后的制品，用乙醇-乙醚混合液洗沉淀二次（每次5mL），最后用无水乙醚洗沉淀二次（每次5mL），抽干。 4、将沉淀摊开在表面皿上，风干，得酪蛋白制品（称重，记录）。 5、酪蛋白溶液的配制：称取酪蛋白0.1g，置10毫升烧杯中，加5mL 0.2mol/L氢氧化钠溶液，搅匀，隔水加热，溶解后转移至10毫升容量瓶中，用少量蒸馏水洗烧杯数次，洗液并入容量瓶中，最后加水至刻度处，摇匀，置冰箱中保存备用。 [结果与计算] 计算酪蛋白含量和得率： 1、含量：酪蛋白克数/100mL牛奶 2、 100 %? = 理论含量 测得含量 得率 式中理论含量3.5g/100mL牛奶

牛奶的品质改善技术

甘肃省高等教育自学考试 毕业论文 题目：牛奶的品质改善技术 专业：动物医学 姓名：苏子杰 指导老师：薛慧文 甘肃省高等教育自学考试办公室印制 2014年4月 目录

摘要 (1) 关键词 (1) 前言 (1) 1 牛奶的营养与消费趋势 (1) 1.1牛奶的营养特点 (1) 1.1.1 牛奶中的蛋白质和氨基酸 (2) 1 .1. 2 牛奶中的碳水化合物 (3) 1.1.3牛奶脂肪 (3) 1.1.4 牛奶的矿物质 (3) 1.1.5 牛奶维生素 (3) 1.1.6 牛奶其他成分 (4) 1.2 牛奶的消费局势 (4) 1.2.1 营养 (4) 1.2.2安全 (4) 1.2.3 保健 (4) 2 影响牛奶品质的因素 (4) 2.1 遗传因素 (4) 2.1.1 品种 (4) 2.2.2 个体 (5) 2.2.3 年龄和胎次 (5) 2.2 日粮管理 (5) 2.2.1 日粮模型 (5) 2.2.2 采食量 (5) 2.2.3 日粮能量 (5) 2.2.4 日粮中的矿物质和维生素 (5) 2.3 其他因素 (6) 2.3.1 季节 (6) 2.3.2 气温 (6) 2.3.3 产奶量 (6) 3 改善牛奶品质的营养调配技术 (6) 3.1改善奶牛乳房健康的营养调控技术 (6)

3.1.1维生素A和胡萝卜素 (6) 3.1.2 维生素E和硒 (7) 3.1.3铜、锌、锰、碘 (7) 3.2提高牛奶营养物质含量的营养调控技术 (7) 3.2.1保证牛奶营养物质含量达标的基本营养原则 (7) 3.2.2提高牛奶营养物质含量的特殊营养调控技术 (7) 3.3改善牛奶脂肪酸组成的营养调控技术 (7) 3.3.1牛奶脂肪酸组成调控的关键点 (7) 3.3.2日粮调控技术 (8) 3.3.3瘤胃调控技术 (8) 4 总结 参考文献 (8) 致谢 (8)

牛奶中酪蛋白的提取与分析

实验题目：牛奶中酪蛋白的提取与分析实验材料：牛奶 小组成员： 实验时间：

一：实验题目：牛奶中酪蛋白的提取与分析 二：报告撰写者 三、小组成员 实验仪器 温度计、布氏漏斗（*）、pH试纸（*）、抽滤瓶（*）水浴锅、烧杯、量筒、表面皿（*）、电子天平（*）、2个1000ml的容量瓶（*）、2张醋酸纤维薄膜（2cm×8cm 厚度120nm）成品（*）、培养皿9—10cm（*）、毛细管（*）、尺子、铅笔、单面刀片（*）、镊子、普通滤纸（*）、电泳槽、玻璃板8cm ×12cm（*）、752型分光光度计（*）、细布（*）、、、的移液管、试管、试管架、 四、实验材料 牛奶（蒙牛特仑苏和伊利金典） 五、实验试剂 特仑苏400ml、金典200ml、巴比妥（*）、巴比妥钠（*）、氨基黑10B（*）、50ml甲醇AR（*）、100ml冰醋酸AR（*）、95%的乙醇250ml（*)、95%的乙醚100ml（*）、L的乙酸100ml（*）、L的乙酸钠100ml（*）、25g氢氧化钠固体（*）标准酪蛋白、15mg五水硫酸铜（*）、60mg酒石酸钾钠（*）所需试剂配制方法： 乙醇乙醚混合液的配制： 10ml95%的乙醇 10ml95%的乙醚 乙醇钠缓冲液的配制： 配制乙醇乙醚1:1的混

L 的乙酸51ml L 的乙酸钠49ml 巴比妥钠缓冲液的配制： 巴比妥 巴比妥钠 染色液的配制： 氨基黑10B 50ml 甲醇AR 10ml 冰醋酸AR 漂洗液的配制： 45ml95%乙醇AR 5ml 冰醋酸AR 蒸馏水 透明液的配制： 25ml 的冰醋酸AR 75ml 的无水乙醇AR L 氢氧化钠溶液的配制： 16g 的氢氧化钠固体定容至1000ml 10%氢氧化钠溶液的配制： 5g 的氢氧化钠固体定容至50ml 双缩脲试剂的配制： 15mg 五水硫酸铜 配制巴比妥钠缓冲液（,./L ）, 将上 +40ml 蒸馏水， 混匀既得染 配制的乙酸钠缓冲液（l ） 混匀得染色液 混匀得透明液 溶于5ml 蒸馏水，在搅拌情况下，加入10%氢氧化钠溶液3ml ，用

牛奶中钙含量测定

牛奶中钙的测定 在人们的日常生活中，牛奶已经很普及了。牛奶中除不含纤维素外，几乎含有人体所需各种营养物质，其蛋白质含量为3.5％~4％，脂肪含量为3％~4％，碳水化合物为4％~6％，并且奶中钙、磷、钾等微量元素含量也极丰富。其中，钙对人体是很重要的。 一、钙的相关知识 钙是人体内最重要的、含量最多的矿物元素，约占体重的2%。广泛分布于全身各组织器官中，其中约99%分布于骨骼和牙齿中，构成骨盐并维持它们的正常生理功能；约1%分布在体液（即肌体的软组织和细胞的外液）中，其含钙量虽少，却对体内的生理和生化反应起着重要的调节作用。1.1 钙在人体内的基本作用： 钙是人体内的一种微量元素，它在体内的含量虽然微乎其微，但是它的作用是巨大的。直接的作用是钙能维持调节机体内许多生理生化过程，调节递质释放，增加内分泌腺的分泌，维持细胞膜的完整性和通透性，促进细胞的再生，增加机体抵抗力。间接的作用就比较具体繁多，例如钙可以使骨骼粗壮，使肌肉发达，使人精神饱满，维持体内酸碱适中、水和电解质平衡等。钙还可以消除炎症、净化血液、强力解毒、健美皮肤并能抑制有害病菌的入侵等。钙使人体保持上述状况，实际上是人体抵抗力强的一种综合表现。举例来说，钙能预防治疗感冒的原因有三方面：⑴钙能降低毛细血管的通透性；⑵钙能抑制病菌的生存；⑶钙能增强人体对环境冷暖变化的适应能力。具体来说，钙有以下功能： (1)维持血管的正常通透性 体液中钙含量降低，毛细血管通透性增强，血液中的成分可以渗出血管外，这就是某些过敏性疾病的发病机制。注射钙制剂，可以降低毛细血管通透性，过敏性疾病即可缓解。 (2) 抑制神经肌肉的兴奋性 钙离子有降低神经骨骼肌兴奋性的作用。血钙浓度低到每10 0毫升血7毫克以下时，神经骨骼肌兴奋性增强，可以出现手足搐搦症或惊厥。这时静脉推注钙制剂，提高血钙浓度，惊厥即可停止。 (3)参与肌肉的收缩 肌浆里的钙与骨骼肌收缩有直接关系，对维持心肌的正常收缩也起重要作用。如果钙浓度过高，可以减弱肌紧张，引起心跳减慢或心脏停跳。

生物化学实验四 酪蛋白的制备

实验四酪蛋白的制备 一、目的要求 学习和掌握从牛乳中制备蛋白的原理和方法；掌握等电点沉淀法提取蛋白质的原理和方法；掌握离心方法。 二、实验原理 牛乳中主要的蛋白质是酪蛋白，含量约为3.5g/L。酪蛋白是一些含磷蛋白质的混合物，等电点为4.7.利用等电点时溶解度最低的原理，将牛乳的pH调至4.7时，酪蛋白就沉淀出来。用乙醇洗涤沉淀物，除去脂类杂质后便可得到纯的酪蛋白。 三、材料、器材与试剂 1〉材料 鲜牛奶。 2〉器材 离心机、抽滤装置、精密pH试纸、电炉、烧杯、温度计、玻棒、漏斗、滤纸、滴管。3〉试剂 (1) 95%乙醇。 (2) 无水乙醚。 (3) 0.2mol/L pH4.7醋酸-醋酸钠缓冲液。 A液：0.2mol/L醋酸钠溶液，称取CH3COON a·3H2O 54.44g，用蒸馏水定容至2000ml。 B液：0.2mol/L醋酸溶液，称取优级纯醋酸(含量大于99.8%)24.0g，定容至2000ml。 取A液1770ml，B液1230ml混合即可得pH4.7的醋酸-醋酸钠缓冲液3000ml。 (4)乙醇-乙醚混合液的配制：乙醇-乙醚=1:1(体积分数)。 四、实验步骤 (1)将20ml牛奶加热至40°C，在搅拌下慢慢加入预热至40°C、pH4.7的醋酸缓冲液20ml。用精密pH试纸调pH至4.7，将上述悬浮液冷却至室温，离心15min(3000r/min)，弃去上清液，得到酪蛋白粗制品。 (2)用水洗1次，离心10min，弃去上清液。 (3)在沉淀中加30ml乙醇，搅拌片刻，将全部悬浮液转移至布氏漏斗中离心10min，弃上清液，用乙醇-乙醚混合液洗1次。最后用乙醚洗沉淀1次，抽干或滤纸过滤得到湿的酪蛋白。 (4)将沉淀摊开，风干；得到酪蛋白纯品。 五、结果及处理 准确称重，得20ml牛乳中酪蛋白含量(g)，按下式计算酪蛋白的得率： 测得含量 得率(%)= 理论含量×100 式中，理论含量为3.5g/100ml牛乳。 实验结果： (1.426-0.795) ×5 得率(%)= 3.5 ×100=90.14%

牛奶中酪蛋白含量的测定

牛奶中酪蛋白的提取及含量测定 一、实验原理 1、牛乳的主要成分：碳水化合物（5%）、脂类（4%）、蛋白质（3.5%）、维生素、微量元素（Ca、P等矿物质）、水（87%） 牛奶中的糖主要是乳糖。乳糖是一种二糖，它由D?半乳糖分子和D?葡萄糖分子通过P -1,4-糖昔键连接而成。乳糖溶于水，不溶于乙醇，当乙醇混入乳糖水溶液中时，乳糖会结晶出来，从而达到分离的目的。 牛奶中的蛋白质主要是酪蛋白和乳清蛋白两种，其中酪蛋白占了牛乳蛋白质的80%。酪蛋白是白色、无味的物质，不溶于水、乙醇等有机溶剂，但溶于碱溶液。而乳清蛋白水合能力强，分散性强，在牛乳中呈高分子状态。 2、等电点沉淀法： 在等电点时，蛋白质分子以两性离子形式存在，其分子净电荷为零（即正负电荷相等），此时蛋白质分子颗粒在溶液中因没有相同电荷的相互排斥，分子相互之间的作用力减弱，其颗粒极易碰撞、凝聚而产生沉淀，所以蛋白质在等电点时，其溶解度最小，最易形成沉淀物。酪蛋白的等电点为4.7左右（不同结构的酪蛋白等电点有所不同），本实验中将牛乳的pH调值4.7时，酪蛋白就沉淀出來。 市售牛奶通常会添加耐酸碱稳定剂來增加粘稠度，以致即使pH调至等电点酪蛋白也沉淀的很少，故实验时可将pH稍微调过多一点再调回等电点。同时，市售牛奶由于生产过程通常导致酪蛋白组分发生变化，因而使pl偏离了 4.7,通常偏酸。3、酪蛋白的提纯 根据乳糖、乳清蛋白等和酪蛋白的溶解性质差异，可以用纯水洗涤来除去乳糖、乳清蛋白等溶于水的杂质，再用乙醇除去脂类，然后过渡到用乙瞇洗涤，由于乙瞇很快挥发，最终得到纯粹的酪蛋白结晶。 4、蛋白质含量的测定（考马斯亮蓝结合法） 考马斯亮蓝能与蛋白质的疏水微区结合，这种结合具有高敏感性。考马斯亮蓝G520的磷酸溶液呈棕红色，最大吸收峰在465nm o当它与蛋白质结合形成复合物时呈蓝色，其最大吸收峰变为595nm o在一定范围内，考马斯亮蓝G520- 蛋白质复合物呈色后，在595nm下，吸光度与蛋白质含量呈线性关系，故可以测定蛋白质浓度。 二、实验器材与试剂 1、器材：恒温水浴锅、离心机、抽滤装置、蒸发皿、精密pH试纸、旋涡混合器、紫外分光光度计、试管四、5mL吸管、50mL容量瓶、100mL ft筒、电子分析天平 2、试剂：鲜牛奶、pH4.7醋酸■醋酸钠缓冲溶液、乙醇■乙艇混合液（95%乙醇、无水乙瞇体积比1： 1）、0.9%NaCl溶液、标准蛋白液（0.1mg/mL牛血清蛋白）、考马斯亮蓝G520染液 三、实验操作记录 1、酪蛋白的制备 将20mL牛奶盛于100mL的烧杯中加热到40*C,在搅拌下慢慢加入预热至40?C、pH4.7的醋酸缓冲溶液20mLo用冰醋酸调节溶液pH至4.7,此时即有大量的酪蛋白沉淀析出。将上述悬浮液冷却至室温，离心Smin (4000r/min),弃去上清液，沉淀即为酪蛋白粗品。

如何区分乳糖不耐和牛奶过敏

牛奶小常识3 有些人喝了牛奶之后会有一些不适应，这里介绍一下两种情况，牛奶过敏症和乳糖不耐症。一：牛奶过敏症 1、概念：牛奶过症敏即是指人体对牛奶(主要是牛奶中的某些蛋白质如α-S1酪蛋白和β-乳球蛋白)产生过敏反应。也可称为牛奶蛋白不耐受。正常情况下，这些蛋白质是能被消化的，但是，如果人体的消化能力不足，则这两种蛋白质可能以未被消化的形式进入人体，从而引起过敏反应。 2、主要发生人群：新生婴幼儿和老年人是容易发病人群。老年人因为消化能力下降，对大分子长链蛋白质不容易消化。而新生婴幼儿则是因为他们的消化系统和免役系统都尚未发育完成。一般而言，新生婴幼儿0-6个月是最最敏感的时期，两岁以后，随着消化能力的提高和免疫功能的增强，大部分的小朋友不再对牛奶过敏。 3、主要症状：首先发生于皮肤、接着是胃肠道、呼吸道，症状有腹痛、腹胀、腹泻，皮疹、呕吐，严重时哮喘、便血等。 4、现在我们的婴儿奶粉都调整了酪蛋白与乳清蛋白的比例，使其比例为40：60，大大的降低了酪蛋白的含量，牛奶过敏症发生得比较少。 二：乳糖不耐症 1、概念：人体内能够分解乳糖的酶只有乳糖酶。由于乳糖酶的缺乏，乳糖不能分解在葡萄糖和半乳糖被吸收进入血液，称为乳糖消化不良”或“乳糖吸收不良”。由于乳糖酶的缺乏，没有被分解吸收的乳糖进入结肠后，被细菌发酵生成果酸和气体，引起人肠鸣、腹痛、排气和腹泻等症状，就称为“乳糖不耐受”。 2、主要发生人群：主要发生在以下几类人群中：正常的成年人，这是最常见、最主要的乳糖不耐受群体。其次还有由于很罕见的先天性疾病、由于早产而造成婴儿肠道乳糖酶活性低下以及由于肠道手术或其他原因，造成肠黏膜损伤，从而使乳糖酶活性会暂时消失一个月或更长一段时间等等。婴幼儿乳糖不耐症的情况比较少，人出生时，肠道内的乳糖酶活性是最高的，可以有效地保障对乳中乳糖的消化和吸收，从而为个体提供有效的能量和营养。随着人的生长发育，体内乳糖酶活性呈规律性衰减，结果造成乳糖吸收障碍。“乳糖不耐受症”的现象 3、乳糖不耐症的主要症状：主要表现为一些胃肠道症状，有腹部紧张、疼痛和腹泻。 4、乳糖不耐症患者可以采用一些办法：不要空腹喝牛奶，一次喝牛奶量不要太大，或者配合谷物同吃，或者加麦片同吃都能减少不适应的症状， 注：当消费者喝了牛奶之后有些反应，如腹泻之类的，有可能是自己的身体的一些原因造成的，而不是奶粉的原因。 怎样照顾有先天乳糖不耐症的宝宝 先天乳糖不耐症是一种隐性的遗传缺陷，是因为分解乳糖的酵素beta-galactosidase缺乏所引起。负责

低乳糖牛奶有营养吗

低乳糖牛奶有营养吗 牛奶是我们日常生活必不可少的，它有很高的营养价值，对身体有很多好处，基本我们日常生活已经离不开牛奶了，我们经常在超市中会看到各种各样的牛奶，总会让我们觉得眼花缭乱，不知道怎么样去选择，现在我们经常在超市看到很多低乳糖牛奶，那么什么是低乳糖牛奶，低乳糖牛奶有营养吗在许多人心里画了个问号。下面一起了解下低乳糖牛奶。 所谓低乳糖奶，即乳糖含量较低的奶。有人误认为是糖尿病人专用的牛奶，其实不是。低乳糖奶是在生产过程中加入一定量的乳糖酶，将乳糖分解为葡萄糖和半乳糖，模拟人体的乳糖消化过程，再经过杀菌、灭酶工艺制成的产品。 一、喝牛奶不舒服的现象普遍存在 您喝牛奶时有过不舒服的情况吗？比方肚胀、腹泻等。可能就是因为乳糖不耐受。我国居民乳糖不耐受率高达70%。乳糖不

耐受的原因是体内缺乏乳糖酶。 二、解决乳糖不耐受的方法 我国居民乳制品摄入不足，造成了钙缺乏情况严重。据《中国居民膳食宝塔》，成人每天要喝300g牛奶。但是，乳糖不耐受人群要喝牛奶又难受，如何解决呢？有以下几种方法。 1.喝酸奶。因为乳酸菌将一部分乳糖分解成乳酸，就降低了乳糖不耐受的情况。 2.少量，或兑水喝。或和其他固体食物一起吃。 3.喝低乳糖的牛奶。 三、低乳糖牛奶为什么能缓解乳糖不耐受情况？ 低乳糖牛奶即经过乳糖酶水解法加工的牛奶。在牛奶中加入乳糖酶，经过一定时间和温度的水解，利用乳糖酶(β- 半乳糖苷酶) 来分解乳糖，达到降低乳糖的目的。简单的说，就是因为一些人缺乏乳糖酶，所以，在体外先让乳糖酶把绝大部分乳糖水解，就不至于喝起来不舒服了。

四、低乳糖牛奶为什么喝起来甜甜的？ 低乳糖牛奶其中的乳糖被分解为半乳糖和葡萄糖，由于葡萄糖比乳糖甜，所以喝起来甜甜的，并不是因为添加了蔗糖。 五、低乳糖牛奶营养和普通牛奶比有变化吗？ 只是乳糖被分解为半乳糖和葡萄糖，乳糖酶在水解乳糖的同时还会部分参与半乳糖苷转移反应，生成低聚半乳糖；而总体营养成分改变不大。 六、低乳糖牛奶有效性 潘丽莉等报道，在北京募集68名乳糖不耐受的小学生，饮用250ml低乳糖牛奶后，乳糖不耐受发生率降低到6.1%，说明

实验六-从淡奶粉中分离、鉴定酪蛋白和乳糖

实验六从淡奶粉中分离、鉴定酪蛋白和乳糖 教学要求: 1 掌握通过等电点分离蛋白质的原理和方法； 2 掌握蛋白质鉴定的特征反应； 3 掌握还原性糖的鉴定方法。 教学重点：掌握通过调节溶液体系的pH值利用等电点分离蛋白质。 教学难点：蛋白质和还原性糖鉴定反应的操作及其现象观察 教学时数：4 学时 一、实验目的 １、掌握分离蛋白质和糖的原理和操作方法； ２、掌握蛋白质的定性鉴定方法； ３、了解乳糖的一些性质。 二、实验原理 牛奶的主要成分是水、蛋白质、脂肪、糖和矿物质，其中，蛋白质主要是酪蛋白，而糖主要是乳糖。 蛋白质在等电点时溶解度最小，当把牛奶的ＰＨ值调到4.8时(酪蛋白的等电点),酪蛋白便沉淀出来。酪蛋白不溶于乙醇和乙醚，可用乙醇和乙醚来洗去其中的脂肪。 乳糖不溶于乙醇在滤去酪蛋白的清液中加入乙醇时，乳糖会结晶出来。 三、实验步骤 １、酪蛋白与乳糖的提取 ４g奶粉与80 mL 40℃温水调配均匀，以10%乙酸调节pH=4.7(用精密pH试纸测试)，

静置冷却，抽滤。 滤饼用6mL水洗涤，滤液合并到前一滤液中。滤饼依次用6mL95%乙醇，6mL乙醚洗涤，滤液弃去。滤饼即为酪蛋白，晾干称重。 在水溶液中加入2.5g碳酸钙粉，搅拌均匀后加热至沸，过滤除去沉淀，在滤液中加入1～2粒沸石，加热浓缩至8ml左右，加入10ml 95%乙醇（注意离开火焰）和少量活性炭，搅拌均匀后在水浴上加热至沸腾，趁热过滤，滤液必须澄清，加塞放置过夜，乳糖结晶析出，抽滤，用95%乙醇洗涤产品，晾干称重。 ２、酪蛋白的性质 缩二脲反应取10ml酪蛋白溶液，加入10% NaOH溶液2ml后，滴入1%CuSO4溶液1ml。振荡试管，观察现象(溶液呈蓝紫色)。 蛋黄颜色反应取10ml酪蛋白溶液，加入浓硝酸2ml后加热，观察现象（有黄色沉淀生成）。再加入10%NaOH溶液2ml，有何变化?(沉淀为橘黄色) 3、乳糖的性质 Fehling反应Ｆehling试剂A和Ｂ各3mL,混匀，加热至沸后加入0.5mL5%乳糖溶液，观察现象。 Tollen反应在2mLTollen试剂中加入0.5mL5%乳糖溶液，在80℃中加热，观察现象(有银镜生成)。 四、实验结果 品名性状产量收率

牛奶里面钙含量有多少

牛奶里面钙含量有多少 牛奶是我们经常喝到的一种饮品，牛奶里面含有丰富的营养，经常喝牛奶是可以起到很好的养生功效和保健的作用，牛奶有养胃润肠等好处，此外牛奶在美容养颜上面也是功效显著的，所以我们要懂得如何利用牛奶来为我们的健康和美丽服务，大家都知道喝牛奶能补钙，那么牛奶里面钙含量是多少呢？ 牛奶是最古老的天然饮料之一，被誉为“白色血液”，对人 体的重要性可想而知。牛奶顾名思义是从雌性奶牛身上所挤出来的。在不同国家，牛奶也分有不同的等级。目前最普遍的是全脂、低脂及脱脂牛奶。目前市面上牛奶的添加物也相当多，如高钙低脂牛奶，其中就增添了钙质。 作用 牛奶味甘，性平、微寒，入心、肺、胃经 具有补虚损，益肺胃，生津润肠之功效

用于久病体虚、气血不足、营养不良、噎膈反胃、胃及十二指肠溃疡、消渴、便秘。 好处一：防皱 把60克的草莓充分捣烂，然后用纱布过滤掉草莓渣取汁，往牛奶菊花雪梨汤草莓汁中倒入一杯新鲜的纯牛奶，将它们充分摇匀之后就可以擦拭到脸部肌肤，并配合适当的按摩。大约20分钟之后就可以用清水清洗干净了。据说，这种美容护肤方法是瑞士保养肌肤古秘方之一哟，有清洁肌肤、滋养肌肤、收敛毛孔，同时还能够有效的防止皱纹滋生。 好处二：滋润肌肤 准备好一汤匙的纯牛奶、适量的橄榄油、少许面粉。将它们充分搅拌在一起，搅拌好之后就可以敷在脸上了，大概20分钟之后就可以用温水冲洗干净了。这款面膜对肌肤有很好的滋润功效，能让肌肤非常的柔软细滑。 好处三：美白肌肤

把新鲜的纯牛奶倒入面膜碗中，然后把面膜纸放入纯牛奶中，等面膜纸充分吸收纯牛奶之后就可以敷在脸上了。大约15分钟 之后就可以用温水冲洗干净了。 100毫升牛奶含有104毫克的钙，一杯牛奶大约250~300毫升，大概260~312毫克。 在上面的文章里面我们介绍了什么是牛奶，我们知道牛奶不但可以食用而且食用价值很高，经常喝牛奶是可以起到养胃美容等功效，上文给大家科普了一下牛奶里面的钙含量。

牛奶中酪蛋白的制备

牛奶中酪蛋白的制备 一、实验目的 1. 学习从牛奶中制备酪蛋白的原理和方法。 2. 掌握等电点沉淀法提取蛋白质的方法。 二、实验原理 利用酪蛋白的等点点为4.7，所以调节牛奶的pH4.7使酪蛋白沉淀洗出。等电点是调节溶液的pH,使蛋白质所带的正电荷和负电荷恰好相等，总净电荷为零，以两性离子存在，不想阳极移动也不想阴极移动，此溶液的pH称为蛋白质的等电点。酪蛋白不溶于乙醇、乙醚等试剂。因而加入乙醇乙醚洗涤沉淀物除去脂类杂质后便可得到纯酪蛋白。 三、实验材料、试剂与仪器 （一）材料与试剂 95%乙醇、新鲜牛奶、乙醇-乙醚混合液（乙醇：乙醚=1：1） 0.2mol/L pH4.7醋酸-醋酸钠缓冲液 A液：0.2mol/L醋酸钠溶液称NaAC·3H2O 27.22g，定容至1000 mL。 B液：0.2mol/L醋酸溶液，称优纯醋酸（含量大于99.8%）6.0g定容至500 mL。 取A液590mL，B液410mL混合即得pH 4.7的醋酸-醋酸钠缓冲液1000 mL。 （二）器具 离心机、抽滤装置、精密pH试纸、玻璃棒、量筒、恒温水浴 四、实验步骤 （一）酪蛋白的粗提 100mL牛奶加热至40℃。在搅拌下慢慢加入预热至40℃、pH4.7的醋酸缓冲液100mL，用精密pH试纸或酸度计调pH至4.7。将上述悬浮液冷却至室温。离心15分钟（3000 r /min）。弃去清液，得酪蛋白粗制品。 （二）酪蛋白的纯化 1. 用水洗涤沉淀3次，离心10分钟（3 000r/min），弃去上清液。 2. 在沉淀中加入30mL乙醇，搅拌片刻，将全部悬浊液转移至布氏漏斗中抽滤。用乙醇-乙醚混合液30 mL洗沉淀2次。最后用乙醚洗沉淀2次，抽干。 3. 将沉淀摊开在表面皿上，风干；得酪蛋白纯品。 （三）准确称重，计算含量和得率。

酪蛋白的提取与测定(参考资料)

牛乳中酪蛋白的制备与浓度测定 一、实验目的 1、学习从牛乳中分离酪蛋白的原理和方法 2、掌握等电点沉淀法提取蛋白质的方法 3、了解紫外吸收法测定蛋白质浓度的原理，熟悉紫外分光光度计的使用 4、学会用考马斯亮蓝结合法测定蛋白质浓度 二、实验原理 1、准备酪蛋白原理：牛乳中主要含有酪蛋白和乳清蛋白两种蛋白质，其中酪蛋白占了牛乳蛋白质的80%。牛乳在PH4.7时酪蛋白等电聚沉后剩余的蛋白质统称为乳清蛋白。酪蛋白是白色、无味的物质，不溶于水、乙醇等有机溶剂，但溶于碱溶液。乳清蛋白不同于酪蛋白，其粒子的水和能力很强，分散性高，在乳中呈高分子状态。本法利用等电点时溶解度最低的原理，将牛乳的PH调至4.7时，酪蛋白就沉淀出来。用乙醇洗涤沉淀物，除去脂类杂质后便可得到纯的酪蛋白。 2、紫外吸收法测定蛋白质浓度的原理：大多数蛋白质由于有酷氨酸和色氨酸的存在，在紫外光280nm有吸收高峰，可以进行蛋白质含量的测定。但是核酸在280nm也有吸收，干扰测定，不过核酸的最大吸收峰在260nm，通过测定在280nm和260nm时A的比值，然后通过计算消除核酸存在的影响，可以求得有核酸存在时蛋白质的浓度。 3、考马斯亮蓝结合法测定蛋白质浓度原理：考马斯亮蓝能与蛋白质的疏水微区相结合，这种结合具有高敏感性。考马斯亮蓝G250的磷酸溶液呈棕红色，最大吸收峰在465nm。当它与蛋白质结合形成复合物时呈蓝色，其最大吸收峰改变为595nm，考马斯亮蓝G250—蛋白质复合物的高消光效应导致了蛋白质定量测定的高敏感度。 在一定范围内，考马斯亮蓝G250—蛋白质复合物呈色后，在595nm下，吸光度与蛋白质含量呈线性关系，故可以用于蛋白质浓度的测定。 三、实验器材与试剂 1、制备酪蛋白： 烧杯、玻璃棒、量筒、精密PH试纸、离心机、布氏漏斗、表面皿、恒温水浴锅 牛奶、醋酸缓冲液、冰醋酸、95%乙醇、无水乙醚 2、紫外光吸收法： 紫外可见光分光光度计、容量瓶50ml(×1)、石英比色皿 0.9%NaCl、1mol/LNaOH溶液、1mol/L乙酸溶液 3、考马斯亮蓝法： 紫外可见光分光光度计、试管1.5cm×15cm(×9)、玻璃比色皿 牛血清白蛋白（0.1mg/ml）、考马斯亮蓝、0.9%NaCl 四、实验步骤

鲜牛奶的酸度和钙含量测定

实验名称：鲜牛奶酸度和钙的含量测定 一前言：随着食用鲜牛奶的人越来越多，我们不得不考虑鲜牛奶的新鲜程度和价值程度。因此我对鲜牛奶的调查做了个实验方案。在此作为大一学生的我恳切希望各位专家多多的给我提出意见，指出我的不足和错误，以利于我的提高。 二摘要：“鲜牛奶酸度和钙含量的测定”实验阐明了酸碱滴定和配位滴定的原理和方法从而达到设计实验的目的也锻炼了学生的创新思维和综合能力。 三关键词：鲜牛奶，酸度，钙的含量，粉红色，蓝色，掩蔽。 四实验目的 1．了解鲜牛奶酸度和钙含量的测定方法及酸度的表示。 2．了解EDTA溶液的配制和标定。 3．了解酸碱滴定和配位滴定的原理和方法。 五实验原理 1.酸度的测定。 鲜牛奶的酸度是指滴定100 mL鲜牛奶样品消耗0.1 mol?L-1氢氧化钠溶液的毫升数。 2. KHC8H4O4 + NaOH= KNaC8H4O4+H2O 3.钙含量的测定。 测定鲜牛奶中钙含量采用配位滴定法，用二乙胺四乙酸二钠盐溶液滴定鲜牛奶中的钙，在PH为10-13的碱性溶液中钙与钙指示剂发生配位反应形成粉红色配合物。用EDTA溶液滴定到计量点时游离出指示剂，溶液呈现蓝色。三乙醇胺与干扰离子Fe3+、Al3+生成更稳定的配位化合物，降低了干扰离子的浓度。 六实验设备 25 mL移液管、250 mL锥形瓶、50 mL量筒、500mL容量瓶、烧杯、碱式滴定管、胶头滴管、表面皿、玻璃棒、研钵、滤纸、石棉网、电热炉、电子分析天平。 七实验材料及试剂 鲜牛奶、0.1 mol?L-1氢氧化钠溶液、酚酞指示剂（1g/L的90％乙醇）、邻苯二甲酸氢钾、0.01 mol?L-1EDTA标准溶液、10%氢氧化钠溶液、钙指示剂（钙指示剂与NaCl1:100研磨混匀）、碳酸钙、1:1HCl、三乙醇胺(在酸性溶液中加入三乙醇胺然后调至碱性)。 （一）试剂的配制。

酪蛋白的提取

一、实验目的 1、掌握一种提取蛋白的方法。 2、掌握一种检测牛乳质量的方法。 二、实验原理 酪蛋白是乳蛋白质中最丰富的一类蛋白质，约占乳蛋白的80~82%，酪蛋白不是单一的蛋白质，是一类含磷的复合蛋白质混合物，以一磷酸酯键与苏氨酸及丝氨酸的羟基相结合。它还含有胱氨酸和蛋氨酸这两种含硫氨基酸，但不含半胱氨酸。它在牛乳中的含量约为35g/L，比较稳定，利用这一性质，可以检测牛乳中是否掺假。 酪蛋白在其等电点时由于静电荷为零，同种电荷间的排斥作用消失，溶解度很低，利用这一性质，经牛乳调到pH4.6，酪蛋白就从牛乳中分离出来。酪蛋白不溶于乙醇，这个性质被利用来从酪蛋白粗制剂中将脂类杂质除去。 三、仪器和试剂 仪器：温度计、布氏漏斗、pH 试纸、抽滤瓶、电炉、烧杯、量筒、表面皿、天平等。 试剂： 1. 95%乙醇、乙醚 2. pH4.6乙酸钠缓冲液0.2mol/L 3. 乙醇、乙醚混合液：乙醇∶乙醚=1∶1（体积比） 4. 市售牛乳 四、实验步骤 1.酪蛋白等电点沉淀 将100ml牛乳放到500ml烧杯中，加热至40℃左右的乙酸钠缓冲液，直到pH达4.6左右，用pH试纸或酸度计调试。将上述悬浮液冷却至室温，然后放置5min，用细布过滤，收集沉淀。 2.除脂类杂质 将上述沉淀用少量水洗数次，然后悬浮于30ml95%的乙醇中。将此悬浮液倾于布氏漏斗中，抽滤除去乙醇溶液，再倒入乙醇—乙醚混合液洗涤沉淀两次，最后再用一米洗涤沉淀两次，抽干。将沉淀从布氏漏斗中移去，在表面皿上摊开以除去乙醚，干燥后得到的是酪蛋白纯品。准确称重后，计算出每100ml牛乳所制备出的酪蛋白数量（g%），并与理论产量（3.5g%）相比较，求出实际获得百分率。 一、实验目的 酶是植物体内具有催化作用的蛋白质，植物体内的生化反应，一般都是在酶的作用下进行的，没有酶的催化反应，植物的生命也就停止了，因此对酶的研究是阐明生命现象本质中十分重要的部分。为要研究酶首先要将酶从组织中提取出来，加以分离、纯化，不同的研究目的对酶制剂的纯度要求也不相同，有些工作只需要粗的酶制剂即可，而有些工作则要求较纯的酶制剂，需根据不同情况区别对待。在酶的提取和纯化过程中，自始至终都需要测定酶的活性，通过酶活性的测定以监测酶的去向。 二、实验原理 （一）酶的提取 1.酶的存在位置? 存在于动植物以及微生物的细胞的各个部位。 2.如何将酶从细胞中分离? 从高等植物中提取酶常遇到一些实际问题，首先是细胞中含有许多种酶，每种酶的浓度又很低，只占细胞总蛋白质中的极小部分（叶中的双磷酸核酮糖羧化酶除外），而许多植物组织中蛋白质的含量又很低。此外，各种酶的存在状态不同，有在细胞外的外酶，在细胞内的内酶，内酶中又有与细胞器一定结构相结合的结合酶，也有的存在于细胞质中，提取时都应区别对待，作不

实验报告-从牛奶中分离酪蛋白

实验报告 一、实验名称：从牛奶中分离酪蛋白 二、实验目的： 1.学习从胶体中提取某一类物质的方法。 2.学习蛋白质的各种颜色反应及其原理。 三、实验原理： 1.蛋白质是两性化合物，溶液的酸碱性直接影响蛋白质分子所带的电荷。当调节牛奶 的pH值达到酪蛋白的等电点（pl）4.8左右时，蛋白质所带正、负电荷相等，呈电 中性，此时酪蛋白的溶解度最小，会以沉淀形式从牛奶中析出。 2.缩二脲反应原理：具有两个或两个以上肽键的化合物在碱性条件下与Cu2+反应,生 成红紫色的络合物。所有的蛋白质均有此显色反应。 3.蛋白黄色反应原理：硝酸将蛋白质分子中的苯环硝化，在加热状态下产生了黄色硝 基苯衍生物，再加碱颜色加深呈橙黄色。这是含有芳香族氨基酸特别是含有酪氨酸 和色氨酸的蛋白质所特有的颜色反应。 4.茚三酮反应原理：蛋白质与茚三酮共热，产生蓝紫色的还原茚三酮、茚三酮和氨的 缩合物。此反应为一切氨基酸及α-氨基酸所共有。 四、实验步骤及现象： 1.取50mL脱脂牛奶于150mL烧杯中，用热水浴加热至40℃，维持此温度，边搅拌 边加稀醋酸（1：9）溶液约2mL——有白色沉淀析出。 2.继续搅拌并使悬浊液冷却至室温，然后将混合物转入离心杯中，于3000r/min离心 15min。 3.离心完毕后，上清液倒入乳糖回收瓶中，沉淀用95%的乙醇（20ml）搅匀，然后用 布氏漏斗减压过滤，用乙醇-乙醚（1：1）混合液洗涤沉淀2次，每次约10ml，最 后用5ml乙醚洗涤沉淀一次，减压过滤至干——得到干燥的白色固体。 4.将干粉铺于表面皿上，称量并计算牛奶中酪蛋白含量。 5.称取0.5g酪蛋白，溶解于0.4M氢氧化钠溶液的生理盐水（5mL）中，然后滴加3-4 滴1%硫酸铜溶液，振荡试管——溶液变成紫色。 五、实验数据： 空表面皿的质量m0 =28.15g 表面皿与酪蛋白的总质量m1 =31.78g 牛奶中酪蛋白的质量m= m1 - m0 =3.63g 六、讨论与感想： 1.牛奶是一种胶体，在正常情况下是均一稳定的，要想分离出其中的某一成分，就应 该想办法使这种成分变成沉淀析出。通过本次实验，我知道了可以通过调节胶体的 酸碱性，来改变蛋白质分子所带电荷，使其达到等电点。此时蛋白质分子间的电荷 作用力最小，分子间没有了间隙，浮力减小，蛋白质就会沉淀。而实验中50ml牛 奶和2ml稀醋酸（1：9）所配成的混合液的pH恰好在4.8左右，正好是蛋白质的

牛奶中乳糖含量的测定——直接滴定法

牛奶中乳糖含量的测定——直接滴定法 1. 1试验样品新鲜牛奶. 1. 2试验试剂碱性酒石酸铜甲液（300g硫酸铜和0.1g亚甲基蓝）; 碱性酒石酸铜乙液（100g酒石酸钠、150g氢氧化钠和8g亚铁氰化钾）; 21. 9%乙酸锌溶液; 10. 6%亚铁氰化钾溶液; 1mg /mL和0. 1mg /mL标准乳糖溶液。 1.3 溶液的配置 碱性酒石酸铜甲液：取300g硫酸铜粉末，加适量温蒸馏水溶解；取0.1g亚甲基蓝适量蒸馏水溶解。前者冷却后加入2L容量瓶，再加入后者，之后用蒸馏水定容至2L。 碱性酒石酸铜乙液：取100g酒石酸钠和8g亚铁氰化钾用适量蒸馏水溶解；取150g氢氧化钠，冷水浴，先加入500mL蒸馏水不停搅拌直至溶解，再加500mL蒸馏水搅拌，待溶解由浑浊变为澄清时方可拿下。二者加入2L容量瓶中，用蒸馏水定容。 21. 9%乙酸锌溶液：取21.9g乙酸锌，溶于100mL蒸馏水中。 10. 6%亚铁氰化钾溶液：取10.6g亚铁氰化钾溶液，溶于100mL蒸馏水中。 1mg/mL乳糖标准溶液：称取预先在100℃烘箱中干燥2h 的分析纯乳糖1.000g，经水溶解后移入1000mL 容量瓶，定容至刻度。每毫升溶液相当于1mg 乳糖。 0.1mg/mL乳糖标准溶液：称取预先在100℃烘箱中干燥2h 的分析纯乳糖0.100g，经水溶解后移入1000mL 容量瓶，定容至刻度。每毫升

溶液相当于0.1mg 乳糖。 2.1 样品处理: 准确吸取25mL 新鲜牛奶于250mL 容量瓶中,加50mL 水, 缓慢加入5mL 乙酸锌及5mL10. 6%的亚铁氰化钾溶液,加水至刻度,混匀,静置30min 过滤,滤液备用. 2.2 标定碱性酒石酸铜: 准确吸取5. 0mL 碱性酒石酸铜甲液及5. 0mL 乙液置150mL 锥形瓶中,加水10mL 从滴定管中滴加约14mL( 1mg /mL)标准乳糖溶液,加热至沸,趁沸以1滴/秒的速度继续滴加乳糖标准液,至蓝色刚好退去为终点,记录消耗的乳糖标准液的体积,平行操作三份,取其平均值,计算每10mL 碱性酒石酸铜液相当于乳糖的质量( mg ) . 2.3 样品测定: 准确吸取5. 0mL 碱性酒石酸铜甲液及5. 0mL 乙液置150mL 锥形瓶中,加水10mL ,从滴定管中滴加约2mL 前述制备的样品溶液,加热至沸,趁沸以1滴/秒的速度继续滴加样品液,至兰色刚好退去为终点,记录消耗的样品液的体积,平行操作三份,得出平均消耗体积. 2.4 结果计算: 样品中乳糖含量按如下公式计算 1001000 25021????=V m m X 式中：X ——样品中乳糖含量，g/mL ；1m ——10ml 碱性酒石酸铜溶液相当于乳糖的质量,mg ；2m ——样品的总量，mL ；V ——测定时平均消耗样品液的体积, mL 。