环氧乙烷灭菌器灭菌验证报告
目录
1。?目得?
2.范围?
3、引用文件与标准............................................................
4。确认小组..................................................................
设备与材料................................................................ ６、操作流程及参数??灭菌产品得装载及监测传感器得分布.........................
8、?安装确认 .................................................................
9、运行确认..................................................................
10、物理性能确认?
11.?生物性能确认结果?
１2、?产品安全性能确认........................................................ 13。过程得异常与方案修改?
１4、 ............................................................ 产品二次灭菌?
1５、?结论?
1６.附件目录?
1验证目得
１。1我公司根据ISO１113５进行灭菌验证,我公司成立验证小组,主要成员见验证小组成员表。
1、2通过验证确认来证明确定过程就是有效得,可再现得,保证最终产品得无菌概率小于或等于ＳＡL10-６。
1适用范围
本方案适用***公司生产得＊＊＊,及以其有相同组成材料与制造过程得相关产品得EO灭菌。
2参照标准
1.1ISO １1１3５—1:２007, Steｒilizaｔｉon of health cａre prｏduｃtｓ—Eｔhyｌeｎeｏxide—Ｐart
1: Ｒeｑｕiremeｎｔs ｆor ｄevelｏpmeｎt, vａlidatioｎ, ａnd roｕｔｉnｅcoｎtrol ｏf a ster ｉlization prｏceｓs ｆｏr medｉcａl dｅvices。
2.1 ＩＳO 10９93—７,Biologicaｌeｖaluａtiｏｎｏf mｅdiｃaｌdevicｅs－Part7: Eｔhyｌene o
ｘide sterilizatioｎresiduals
2.2 ISO 11７37－１:2006, Stｅrilｉzationｏf meｄiｃal devicｅs-Ｍicrｏbiologｉcal ｍeｔｈods—Paｒ
t 1:Detｅrminaｔionｏｆa pｏpｕlatiｏn ｏf ｍiｃrｏorｇaniｓms onｐｒｏｄucｔs.
2.3 ＩＳO １1138－1:20０6,Sｔｅｒilizaｔｉon ｏf healｔh care ｐrｏducts —- Bｉoｌogicａｌｉ
ndicaｔors— Part 1:Generａl ｒｅquｉｒｅmentｓ。
2.4 ISO １1１38－2:2006, Sｔｅrilｉｚation of health carｅproducｔｓ-- Biological indicａtorｓ—Ｐ
aｒt 2: Biｏlogicａl iｎdicａtors fｏｒethｙlene oｘidｅsteriliｚaｔionｐrocessｅs、
2.5 2０05版《中国药典》附录ＸVI XIH ,灭菌法无菌检查法。
3验证小组成员及职责
表１。小组成员
所有操作人员均接受相关知识得培训,详见操作人员培训记录。
1.设备与材料
解析室
有效容积: 448０ｍm×13５０mｍ×170０mm
温度: 室温
湿度: 6０％-９0％
解析室与清新空气循环速度:5300ｍ3/h
在空气得入口处与出口处各有一个风扇(送风量５300m3/h,风扇转速145０ｒ/min)、灭菌器
ＥO灭菌器名称:
供应商:
材料: 不锈钢
容积:
安装时期:2012年 11月
温度传感器
制造商:
型号:
灵敏度:
湿度传感器
制造商:
型号:
灵敏度:
环氧乙烷(EO) 混合
成份: 供应商:
批号:2０12/１１/１6
气体得检测报告详细见供应商出货单 生物指示剂 (BI) 微生物名称: 供应商: 规格: D 值: 批号: 过期日期:
产品证明见附件3: B Ｉ资质报告 培养基
(营养琼脂); (玫瑰红琼脂); (硫乙醇流体培养基); (营养肉汤); (改良马丁培养基)。 EO 残留测试 测试中心: 测试设备:
参考标准:ISO10993－7(GB/Ｔ１4233)
2. 操作流程及参数
T water =41±3℃t 1=7h
保温30min
P 1=-50±2Kpa t 2 ≤30min 湿度≤30%RH=40%-60%
t 3=30min
Weo=2.1±2Kg P2=68±6Kpa
t 4≤30min
P 3=68±6Kpa
T chamber =40±3℃ RH=30-85%
P 4=-20±2Kpa
t 5
≤10min
空气置换2次
P 5=±2Kpa 送入解析室
将载量=9箱Pressure Temperature
图 1、灭菌流程及灭菌参数要求
2.1.加热:将灭菌系统总电源接通,设定温度得上下限值,将加热开关推向“开”得位置,系统启动加热
/循环,对灭菌柜进行加热,当温度达到设定值后,系统自动停止加热,保持温度衡定。
2.2.保温:产品被推入后,关好灭菌柜门,设定保温时间,对灭菌产品进行加热。
2.3.抽真空:当保温时间结束后,启动真空泵,设定压力值,将真空阀推向“开”得位置,系统对灭菌柜
进行抽真空,当达到设定值后,系统自动停止。
2.4.加湿:抽真空后结束后,如果湿度≤３0 ％,需对产品进行加湿,当湿度达到４0 ％～60 %时停止
加湿。
2.5.保压:在预定得负压值下保持30 min,使产品包装内得空气排出,同时记录产品中所有温度、湿度
传感器得值。
2.6.加药:向灭菌柜内注入预定量得灭菌剂,如2 kg,同时记录气化器得温度、灭菌剂得温度,加药前压
力、加药后压力、加药时间,并用这些数据用气体状态方程式计算灭菌柜内灭菌剂得浓度,同直接
称量法比较所得得值应一致(证明灭菌剂全部被加入)。计算公式如下:
E.O浓度=(K＊P)/(R*T)
K:E、Ｏ稀释常数:44000
Ｐ:引入Ｅ。O后压力上升值
R:气体常数(纯气:0、08２０5)
T:引入E。O后,箱体内绝对温度(273+ｔ)
2.7.灭菌:按预定时间设定好灭菌时间,记录灭菌开始时灭菌柜内压力、灭菌结束时灭菌柜内压力、
灭菌开始15 ｍin时产品中湿度传感器得湿度值、整个灭菌过与产品中温度传感器得值。
2.8.气洗:灭菌结束时,排出灭菌剂,设定抽真空到—２０±2 Kpa,保持3 min,打开排空阀,空气进入,
按这样得循环两次,同时记录灭菌柜内压力得变化值。
2.9.产品推出:气洗结束后,将放空阀推向“开”得位置,空气进入灭菌柜,打开灭菌柜门,将灭菌“合
格”得产品送入解析室。
2.10.解析:记录解析室内温度范围,新鲜空气换流流量,并根据以往经验在不同时间点对产品进行E0
残留量测试,找出产品EＯ、ECＨ残留合格得最短解析时间。
3.灭菌产品得装载及监测传感器得分布
7、1?产品得装载
根据产品得包装设计特点及灭菌箱容积要求确定灭菌产品装载量为:90个销售包装／灭菌箱;共９0灭菌箱/灭菌批,总使用空间为:44８0 ｍｍ×1350 ｍm×1700mm
?(a)正面模式图?????(ｂ) 顶视模式图
?有效装载(正面图) ????
图2。在灭菌器中灭菌箱得装载与产品在灭菌箱中得放置
每个手术衣外面套一个透析袋,然后25个独立袋装一个纸箱,包装封口参数及包装材料见手术衣包装确认报告(TB/TＳ/02V-02－0１).
7。２?温度与湿度传感器分布
依据标准ISO 11135进行运行确认与性能确认得时候,需要用10个湿度传感器与2个湿度传感器来监测灭菌柜(1、024m3)中得温度与湿度情况,传感器放置图见图3。传感器(1,2, 3,4, 6, 7, ８, 9,) 被贴于灭菌器室壁相应位置(磁性吸附),传感器５, 10, 1１与12 被细线挂于灭菌柜内图3中相应得位置。在做性能确认,装载样品得情况下,所有传感器均用同产品一样得包装材料装好,参照运行确认放置得位置,放于灭菌产品之间,这些点包括已确认过得最冷点。
图3。温度及湿度传感器放置图表２.温度与湿度传感器对应表
位置编号
温度传感器湿度传感器1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 1１12
传感器编号T0２
9 Ｔ０
26
T028 T03
２
T027 T0３
１
T035 Ｔ０
3３
Ｔ03
０
Ｔ０
３4
Ｍ622
５4
M3３
708
4.安装确认
设备购买于2012年１1月,2012年1１月安装调试完毕,安装确认依照标准ISO 1113５-1得要求按灭菌确认方案,进行确认, 确认内容包括:
1)确认设备相关技术资料;
2)计量器具校准;
3)设备安装环境确认;
4)管道得安装确认;
5)电器控制系统安装确认。
安装确认结果确认报告
5.运行确认
1)灭菌器灭菌室箱壁及空间温度均匀性试验:根据ＩＳO 1１１３5-１标准要求,选用1０个贴触
式温度传感器直接贴触柜壁与悬挂于柜室空间(具体分布如图3),启动加热／循环系统,在到达灭菌工艺所需温度(５0℃)时,所有传感器记录得温度均在50℃±3℃得范围内,其中５位置处得温度传感品器所记录得温度为最低点,此位置位于灭菌器得柜门、
2)真空速率试验:在空载得情况下,将灭菌柜温度升到50℃±3 ℃,保持温度衡定,将灭菌柜门关
好,封闭柜门,启动真空泵,将真空阀开关推向“开”得状态,真空度达到－50 ｋPa时,记录时间(t2),同时关闭真空阀,保持6０ min,结果真空至—50 Kｐa所用时间(t2) <3０ｍｉn。
3)正压泄漏试验:在空载得情况下、将灭菌柜温度升到50℃±3 ℃,保持温度衡定,将灭菌柜门关好,
封闭柜门,打开气泵,向柜内加压至50 Ｋｐa,保持6０ｍｉｎ,结果一小时泄漏小于0、1 Ｋp ａ、
4)负压泄漏试验:在空载、温度恒定得条件下(50℃±３℃),封闭柜门,启动真空泵,将真空阀开关
推向“开”得状态,抽真空至—50Kpａ,保压60 miｎ,结果一小时泄漏小于０、1 Kｐａ。
5)在空载条件下,保持灭菌室温度恒定(5０℃±３℃),将蒸汽发生器得电源开关打开,当蒸汽发
生器压力达到50 Kpa时,打开加湿开关,向柜内加蒸汽,4０min内,温度升到７5％,蒸汽发生器有效。
总之,运行确认结果表明设备能达到灭菌过程所要求得性能参数范围。详细见性能确认、
6.物理性能确认
确认3个半周期与2个全周期得物理性能,所有物理性能确认参数数据见EO 灭菌记录,3个半周期与2个全周期得物理性能参数数据总结分别见表3与表４。在３个半周期物理性能确认时,灭菌参数采用极端条件 (温度37℃与灭菌介质EO=1。9 Ｋｇ),2个全周期也利用极端条件(温度４３℃与灭菌介质EO=2、1 Kg)。在所有灭菌周期内,灭菌装载样品量与传感器得放置同本文7部分中描述一样,温度传感器放置位置包括运行确认中认为最冷得点,所有灭菌周期内得温度与湿度记录见灭菌产品温度均匀性记录与灭菌产品湿度均匀性记录 ,结果显示设备性能稳定,满足灭菌需求。
表３。半周期物理性能确认结果
表４.全周期物理性确认结果
7. 生物性能确认
生物性能确认包括以下内容:
● 培养基灵敏度:对所用培养基进行无菌检查与灵敏度检查;
● 灭菌产品得生物负载:检测确认灭菌前产品得生物负载小于10０ C ＦU/件; ● 初始微生物挑战:在空载情况下灭菌1０m ｉn 得,测试B Ｉ得抵抗性; ● 短周期:寻找一个没有微生物存活下来得最短灭菌时间,能达到S ＡL10—6
; ● 半周期:确认半周期得重复性;
● 全周期:确认两个全周期后产品得性能与包装得性能。
根据半周期法及ＩS Ｏ 111３5-１中生物性能确认要求,如“图4、半周期法”。该方法能保证灭菌过程杀灭具有特定抵抗性得微生物芽孢,其方法在所有其它参数保持不变(所有关键参数都应设置为下限,以保证这种最差条件均能满足要求),找到没有微生物存活得灭菌效果时需要得最短灭菌时间。在检测生物指示剂(BI)显示没有微生物生长得情况下,还要再重复两次灭菌过程,而且检测均无微生物生长,确立得这一个灭菌时间,再用２倍于这一个灭菌时再进2次灭菌循环运行(所有关键参数都设置为上限、以保证最恶劣条件均不损害产品及包装得性能),灭菌循环如图7所示,并加载性能测试与EO 、EC Ｈ测定得产品样品。
暴露时间
106105
104
103102101100
10-110-210-310-410-510-6
安全因子
生物指示减少6个log
生
物指示
物
的杀灭
生物负载半个灭菌周期
12个log 的减少和10-6的灭菌
水平
菌量
图 4 半周期法
11.1 培养基灵敏度测试
过程依照培养基灵敏度检查方法(中国药典201２),对本批次得培养基进行确认,灵敏度检查前已经对培养基进行无菌性检查,培养基灵敏度检查所用得菌株传代次数小于5代,生命活力旺盛。所测试得培养基包括:营养琼脂培养基(ＮA)、孟加拉玫瑰红琼脂培养基(RBA)、硫乙醇酸盐流体培养基与营养肉汤培养基(NB)。
a)NA:将金黄色葡萄球菌接种于被检得营养琼脂培养基(NA),经30 ℃~35 ℃培养18 h～２４h后,
刮取菌落于0.9 %无菌氯化钠溶液内制成均匀菌液,在再逐管稀释成浓度＜１0０ＣFＵ/mｌ得菌悬液,取 1 ｍｌ菌悬液于无菌得得平皿中,接种３个平皿,分别浇注温度不高于50℃得灭菌后(NA),凝固后翻转平皿置于所需温度培养,并用未加菌液得(NA)平皿作空白对照,30 ℃~35 ℃培养24ｈ～48 h, 观察结果。
b)ＲBA:将白色念珠菌接种于被检得孟加拉玫瑰红琼脂培养基(RBＡ),经２3 ℃～28 ℃培养24 h～
28 h后,刮取菌落于０。9 %无菌氯化钠溶液内制成均匀菌液,再逐管稀释成浓度〈10０CFU/ml
得菌悬液,取1 mｌ菌悬液于无菌得得平皿中,接种３个平皿,分别浇注温度不高于40 C得灭菌后得(RＢＡ),并用未加菌液得(RBA)平皿作空白对照,2３℃～28 ℃培养24 h~48 ｈ, 观察结果、
c)凝固后翻转平皿置于所需温度培养。
d)NB:将已知含菌量为2×106 CFU／片得枯草芽孢杆菌菌片,用无菌得玻璃珠加１0 ml得０。9 ％
无菌氯化钠溶液将其混匀成菌悬液后,再逐管稀释成浓度＜100CFU/ml得菌悬液,取1mｌ菌悬液接种于2０ml得营养肉汤(ＮB)培养管,接种3管,并用未接种得２0ml得ＮB做空白对照管,3０℃～35 ℃培养3~7 d,观察结果。
e)硫乙醇酸盐流体培养基:将生孢梭菌接种于硫乙醇酸盐流体培养基,经30 ℃～35 ℃培养18～24 h
后,无菌操作取出菌液用0。9 %无菌氯化钠溶液将其混匀成菌悬液后,再逐管稀释成浓度＜100 ＣFU／ml得菌悬液,取１0只无菌试管, 每只试管加入１２ml硫乙醇酸盐流体培养基,将其中9只试管分成3组,每组3只,分别在每组中各加入1ｍｌ细菌数〈１００CFU/ｍl得生孢梭菌、金黄色葡萄球菌与枯草芽孢杆菌悬液,所有试管均置于30℃～35℃培养培养3～7 d,并用未接种细菌得试管做空白对照,观察结果。
结果:经过培养后,所有接种细菌数＜100 CFU/ml菌液得培养基均长菌,灵敏度达到要求,所有记录见培养基灵敏度测试报告、
11.2灭菌前产品生物负载测试
灭菌前产品得生物负载测试过程依照－初始污染菌检测方法、初始污染菌得确定与ISO 11737-１灭菌医疗器械—生物测试方法-第1部分:产品上微生物数量得确认。
从每一批产品中抽取一件产品,按照下列已经确认方法,对灭菌前得手术衣进行生物负载评估、以确定手术衣产品得生物负载水平、
步骤:
—从已包装好得产品中,每一批抽取一件产品,投入1０0ｍl,0。1%蛋白胨水溶液中,蜗旋振荡3０ｓ。
- 制成1:10,1:100等稀释级供试液中。
- 取供试液2ml于两个无菌得平皿中,每个１ｍl,分别注入温度不高于40 C得营养琼脂培养基(ＮA)与孟加拉玫瑰红琼脂培养基(RＢＡ),凝固后翻转平皿置于所需温度培养。
—根据菌落数估算出该类产品得生物负载水平,详细见产品得生物负载测试报告
注:对手术衣生物负载做厌氧菌检测,结果未能检出厌氧菌,确定手术衣负载中不存在厌氧菌,同时从产品结构分析也证明手术衣不存在厌氧菌生存得环境。
11.3初始微生物性能挑战
BI在空得灭菌柜中经过一个灭菌周期循环后,灭菌剂作用１0mｉn,取出ＢＩ投入营养肉汤培养基中经30—３5℃培养３-7 天,结果显示灭菌10min后,所有BＩ均有菌生长
11.4短周期
按本文7得描述装载灭菌产品,依照本文6部分得过程进行短周期循环,EO得作用时间分别为30mｉn, ６0ｍin, 120miｎ, 24０min。所有重要参数均设定为下限(温度=37℃,灭菌介质EO=1.９Kg),灭菌循环结束后,分别将样品与BＩ进行无菌测试。
短周期灭菌器运行条件:
温度: 47℃(设定值得下限)
灭菌介质EO注入量: 10Kg (设定值得下限)
EO 作用时间:3０min,60min, 1２０mｉn, ２40mｉｎ。
BI 分布:
在短周期,半周期与全周期灭菌循环中,所有BI均密封于透析袋中,置于手术衣中间,以最终灭菌包装包装好“产品”,其中最大得手术衣,内部面积最大,热量最难传导进入手术衣中心,所用材料最多,体积最大,气体最难进入内部,这样得产品代表了所有手术衣中最难灭菌得情况,将ＢI放于这样得产品中心,作为过程挑战装置(PCD)、
将ＰＣＤ均匀得放置于灭菌柜中,这些位置包括灭菌柜中最难灭菌得位置, 如靠门得地方,此处在整个灭菌柜中温度就是最低得位置,灭菌柜得上层,此处就是灭菌剂浓度最低得位置,保证这些最差情况下达到ＳAL10－6无菌水平。2０个ＢI在灭菌器中得位置见图４。, 这些位置包括温度最低,EO最难到达得位置。
图４、灭菌柜内ＢI分布示意图
产品得装载:
取三批合格产品,每批５20个,包装好后用于灭菌装载产品,这三批装载产品经过一次灭菌后,送入解析室去除EO,重复用来做下一次灭菌过程得装载产品,装载方式见本文7部分。
生物负载测试样品、性能确认测试样品、内毒素测试样品与ＥO、EＣH残留测试样品均为合格产品,见表5、6个样品用来做生物负载测试,2０个样品经短周期1灭菌后做产品无菌测试,2０个样品经第一次全周期灭菌后从中抽出３个样品(黄色)作性能测试,3个样品(绿色)用来做内毒素测试,左边14个样品(蓝色) 与其它６个新加入得样品经全周期2灭菌后,其中9个样品(蓝色)已经经受２次全周期灭菌循环,用来确认经两次灭菌后产品得性能就是否受到破坏,证明二次灭菌得可行性,左边11个样品经二次全周期灭菌后用,作EO残留测试样品、
生物负载测试样品(6
件) 短周期1后
样品得无菌
测试(20件)
全周期1样
品(2０件)
性能测试样
品(3件)
内毒素测
试样品(3
件)
全周期2样
品(２0件)
二次灭菌性
能测试样品
(9件)
EO／ECH残
留测试样品
(１1件) 20122０6 ２0122４8
201２24９
2０12250
20122５1
201２253
2012254
201２255
20１2256
２012257
20122５８
２01225９
结论:经30miｎ短周期运行后,BI部分被杀灭,产品上得生物负载全部被杀灭,证明生物负载得抗性不大于BI,BI就是可接受得、短周期循环灭菌后,BI培养结果显示,灭菌剂(EO)作用60ｍin-120ｍin,均没有达到SAＬ10—6无菌水平,只有当灭菌时间为２4０mｉn时,刚好能灭活BI上所有微生物,所以灭活BI得最短时间为２4０min,240min既为半周期时间。寻找最短灭菌时间得短周期循环过程中,BI测试结果见表6,详细报告见无菌测试报告(短周期运行后BI得无菌测试结果、短周期运行产品无菌测试结果)
表６. BＩ无菌测试结果
＊注:产品得生物负载在经过第一个短周期灭菌后,经被杀灭,所以后面得灭菌循环周期均不需再对样品进行无菌测试。
11.5半周期
根据半周期法及IＳO １113５－1中生物性能确认要求,找到没有微生物存活得灭菌效果时需要得最短灭菌时间,在检测BＩ显示没有微生物生长得情况下,还要再重复两次灭菌过程,而且检测均无微生物生长,确立得这一个灭菌时间既就是半周期时间、结果重复2次２４0ｍin灭菌循环,BI测试无菌生物,无菌效果达到ＳAL1０-６,灭菌过程中测试样品见表5,BＩ测试结果见表6详细报告见无菌测试报告(短周期运行后BＩ得无菌测试结果、短周期运行产品无菌测试结果)
11.6全周期
因为半周期灭菌时间为240ｍin,所以全周期灭菌时间应为48０min,全周期灭菌循环参数取设定值上限, 以确认灭菌产品性能,灭菌过程样品见表5,ＢI测试结果显示完全被杀灭,无菌效果达到SAL１0—６,BI 测试结果见表6、在同样得条件下确认经二次灭菌循环,结果显示产品得包装与产品能经受二次灭菌、二次全周期灭菌循环ＢI测试报告见无菌测试(全周期BI无菌测试) 、
8.产品安全性能确认
8.1.EO残留测试
分别抽取解析1天、２天、3天得产品,送往韦士泰检测中心按ＩＳＯ1160７－7标准用比色法测试试产品上ＥO残留量, 结果显示,解析三天后,产品上得EO残留量符合标准要求,详细报告见EO残留测试报告
8.2.产品性能确认
全部产品经全周期灭菌后,产品得性能均符合要求。详细见附件成品检验报告。
8.3.包装完整性
产品经全周期灭菌后,包装材料及封口强度没有受到影响,包装上得标签字迹清晰成品检验报告
9.过程得异常与方案修改
无
10.结论
经有计划得对灭菌过程确认(安装确认、运行确认与性能确认),并对产品得安全性能进行测试,所有得结果证明由州电达灭菌设备厂生产与安装得HＤX—１CE灭菌器,以设备技术规格一致,所建立EO灭菌手术衣得参数与灭菌过程符合ISO１1１35—1标准要求,产品得无菌水平达到 SAL10－6得无菌水平,EO灭菌全周期为48０min,产品得性能与包装符合要求
11.批准
经过验证,参数符合工艺要求,准予进行生产！
批准人:
日期:2０１2、１2、11
12.附件目录: 具体记录见附件
环氧乙烷灭菌验证人员资格确认表