2021年甘油含量测定方法

甘油含量的测定

欧阳光明（2021.03.07）

实验原理：采用高碘酸氧化还原法

仪器及药品：

仪器：容量瓶、碘量瓶、锥形瓶

药品：NaIO4；KI；H2SO4；淀粉指示剂

1.0％淀粉指示液：称取1.0g可溶性淀粉，加10mL水，在搅拌下再

注入到90mL水中，微沸2min，放置，取上层

清液使用。试验均要用新配制1.0%的淀粉指示

剂。

标准溶液：

1. 氢氧化钠：0.5N、0.1N、0.01N（常用）用基准苯二甲酸氢钾标定。

2.硫代硫酸钠：

配制：0.1N称取26克硫代硫酸钠（或16克无水硫代硫酸钠），溶于1000毫升水中，缓缓煮沸10分钟，冷却，放置两周后过滤备

用。（常用）

标定：称取0.15克（精确到0.0002克）于120℃烘至恒重的基准重铬酸钾，置于碘量瓶中，溶于25毫升水，加2克碘化钾及20

毫升4mol/L的硫酸（3mol/L 25ml），摇匀。于暗处放置10分

钟。加75毫升水，用0.1N硫代硫酸钠溶液滴定，近终点时

加1毫升0.5％淀粉指示剂，继续滴定至溶液由蓝色变为亮绿

色。同时做空白实验。

N＝G/0.04903（V1-V2）

式中：G——重铬酸钾之重量，克

V1——硫代硫酸钠之用量，毫升

V2——空白硫代硫酸钠之用量，毫升

0.04903——每毫克当量重铬酸钾之克数

实验步骤：

1、试样处理

精确称取大豆油10.00g(精确到小数点后二位)，反应完后，将

分层液下层甘油相转入500ml 容量瓶中，并用适量水洗涤上层

甲酯层，水相也转入容量瓶中，最后定容，待用。

2、甘油含量测定

准确量取10ml上述甘油溶液，放入250ml碘量瓶中，再加入20ml 0.04mol/L NaIO4溶液、10ml 0.6mol/L H2SO4溶液、5ml正己烷，盖好塞盖，摇匀，在室温下于暗处放置30 min。

然后加入1.5g KI(两颗)，反应3min后，再加水75ml ，溶液呈

现葡萄酒色，析出的碘用配制好的约0.1mol/L Na2S2O3标液

滴定，滴定至颜色变亮时加入1ml淀粉指示剂，此时溶液呈现

不透明深蓝色，继续滴至蓝色恰好消失为止（无色），平行测

定3次，同时做空白实验。

产率计算公式：（油脂的转化率以甘油产率表示）

转化率%=

式中：V0——空白消耗Na2S2O3标液体积，ml；

V——试样消耗Na2S2O3标液体积，ml；

C——Na2S2O3标液浓度，mol/L；

M——大豆油的摩尔质量，g/mol；

w——大豆油的质量，g。

美国USP标准 甘油检测操作规程

1目的 1.1 通过对所采购药用辅料甘油各项质量标准的检测，确定其自身安全性。 1.2 通过对所采购药用辅料甘油各项质量标准的检测，确定是否影响产品生产、产品质量、产品的安全性和有效性。 2 适用范围适用于本公司用于生产液体棉签所采购的药用辅料甘油。 3 责任者：质量部经理化验员 4引用标准： 中华人民共和国药典 2010年版二部 美国药典 USP 5包装与贮存要求：保存在密闭容器 6 操作 6.1鉴别（符合红外吸收197 F和6.1.2的鉴别反应） 6.1.1 所需仪器、试剂：气象色谱仪、USP二甘醇（对照品）、USP乙二醇（对照品）、USP 甘油（对照品）、甲醇、氦气 6.1.2 6.1.2.1 标准储存溶液1:准确称量50mg的USP二甘醇（对照品），用甲醇溶解并稀释到100ml容量瓶中。 6.1.2.2 标准储存溶液2:准确称量50mg的USP乙二醇（对照品），用甲醇溶解并稀释到100ml容量瓶中。 6.1.2.3标准储存溶液3:准确称量50mg的USP甘油（对照品），用甲醇溶解并稀释到100ml 容量瓶中。 6.1.2.4解决方案---把每种储存溶液中各取5毫升，放入100毫升的容量瓶中，用甲醇溶解并稀释到100ml容量瓶中。 6.1.2.5测试溶液---取5g甘油，加入到100毫升的容量瓶中，用甲醇溶解并稀释到100ml 容量瓶中。 6.1.2.6色谱系统(见色谱621)--- 在气相色谱仪配备一个火焰离子化检测器，一个0.53毫米×30 m熔融石英分析柱涂有3.0 -μm G43固定相。注射口温度保持在220和检测器温

度保持在250。载气是氦气，流率约为每分钟4.5毫升。分流比相当于10：1。色谱程序,如下所示：最初,柱温是在100，保持4分钟，然后温度以50的比率增加到120，保持10分钟。然后温度再以50的比率增加到220，保持6分钟。色谱仪拆分溶液,并记录峰值响应和保留时间。他相对保留时间约为乙二醇0.3 ，二甘醇0.8，甘油1.0；复制注射的二甘醇的相对标准偏差为不会超过10%。 6.1.2.7 步骤:分别注入相同数量的拆分溶液和测试溶液各1μL，加入到色谱仪中并记录。如果二甘醇或乙二醇的一个峰的相对保留时间为出现于测试溶液中，这个峰值必须直接在测试二甘醇和乙二醇杂质的测试中被被鉴别和量化。 6.2相对密度本品的相对密度在25℃(比重瓶和天平的放置环境)时不小于1.249。 6.2.1 仪器设备：比重瓶、水浴锅、分析天平、滤纸 6.2.2 测定方法：取洁净、干燥并精密称定重量的比重瓶，装满甘油后，装上温度计（瓶中应无气泡），置于25℃的水浴中放置若干分钟，使甘油的温度达到25℃，用滤纸除去溢出侧管的液体，立即盖上罩。然后将比重瓶自水浴中取出，再用滤纸将比重瓶的外面擦净，精密称定，减去比重瓶的重量，求得甘油的重量后，将甘油倾去，洗净比重瓶，装满新沸过的冷水，再照上法测得同一温度时水的重量，按下式计算，即得。 甘油的相对密度=甘油重量/水重量 6.3 颜色 6.3.1 所需仪器、试剂:纳氏比色管50ml、移液管、量筒、容量瓶（1000ml、100ml）、比色用氯化铁液（FeCL3.6H2O、盐酸） 6.3.2比色用氯化铁溶液：用25ml盐酸和975ml水的混合液配制每1ml中含45.0mg的FeCL3.6H2O的溶液。 6.3.3检测方法：在一个50毫升颜色比较管中，当从一个白色的表面向下观察。把0.40毫升的氯化铁比色液用50毫升水稀释后，也放入一个颜色比较管中从白色表面向下查看。测试液的颜色比氯化铁稀释液的颜色浅。 6.4 氯化物 6.4.1 所需仪器、试剂：纳氏比色管50ml、具塞棕色广口瓶或棕色容量瓶、分析纯硝酸（？浓度）（需找美国药典硝酸试剂配制方法）、硝酸银溶液（硝酸银滴定液0.1mol/L:AgNO3=169.87，称16.99g,溶至1000ml，需标定）（需找美国药典配制方法）、0.020N 盐酸（标准对照溶液） 6.4.2检测方法：取甘油 7.0g，取0.020 N盐酸0.10ml，分置于两容器中，分别加水稀释到30到40ml，并分别加1ml硝酸，如果溶液显浑浊,过滤，且过滤时滤纸不得影响溶液中的氯离子的含量（用滤纸滤过时，滤纸中如含有氯化物，可预先用含有硝酸的水溶液洗净

滴定法测定棒酸发酵液中甘油含量

第27卷第3期河北工业科技 V ol.27,No.32010年5月 H ebei Jour nal of Industr ial Science and T echno log y M ay 2010 文章编号:1008 1534(2010)03 0189 03 滴定法测定棒酸发酵液中甘油含量 康 辉,刘桂军,孙凤卿,赵 霞 (石药集团河北中润制药有限公司,河北石家庄 050041) 摘 要:为了消除发酵液中还原糖的影响,建立了高碘酸钠滴定法测定棒酸发酵液中甘油含量的方法,该方法的回收率为98.5%,RSD 值为1.69%。本法操作简便,成本低廉,适用于发酵液中甘油含量的测定。 关键词:棒酸发酵液;滴定法;甘油;含量中图分类号:T Q460.7 文献标志码:A Determination of glycerol content in clavulanic acid fermentation broth by titration KANG H ui,LIU Gui jun,SU N Feng qing,ZH AO Xia (Hebei Zhong run P har maceutical Company L imited,Shijiazhuang Phar maceutical Gr oup,Shijiazhuang Hebei 050041,China) Abstract:T he met ho d fo r the deter minatio n o f glycero l co ntent in the clavulanic acid ferment ation bro th by so dium per iodate titr ation is established so as to eliminate the infect ion of reducing sug ar in the bro th.T he averag e recover y r ate is 98.5%,and RSD is 1.69%.T he method is convenient and accurate with low cost.It can be applied t o the deter minatio n of g lycer ol content in the fer mentat ion broth. Key words:clavulanic acid fermentatio n bro th;titration;g ly cer ol;content 收稿日期:2010 01 14;修回日期:2010 03 16责任编辑:张士莹 基金项目:国家 十一五 科技支撑计划项目(20007BAI26B00)作者简介:康 辉(1975 ),女,河北石家庄人,工程师,主要从事抗生素研发方面的工作。 棒酸是由棒状链霉菌代谢产生的一种 内酰胺酶抑制剂,与 内酰胺类抗生素连用对产生 内酰胺酶的耐药菌有抑制作用,因具有抑制 内酰胺酶的作用,所以棒酸具有可观的医用及经济价值,其年产值可达几十亿元。由于其具有广泛的药理学特性,所以临床需求量不断增加,棒酸原料药的需求量也在不断增加。甘油是棒酸生物合成的直接前体,其在发酵过程中的浓度直接影响棒酸的发酵单位。因此,开发适用于工业化生产的棒酸时,发酵液中甘油的检测分析方法是保证高发酵单位的关键。精确分析甘油含量的方法有高碘酸氧化法、分光光度法[1]、原子吸收法、气相色谱法、近红外光谱法、高效 液相色谱法[2]和甘油激酶法[3]等。但在微生物培养基和代谢产物成分十分复杂的发酵液中,由于含有其他多羟基醇类的类似产物,故影响了甘油的测定结果,而国际上用来测定发酵液中甘油含量的试剂盒方法价格昂贵,成本较高,故不适合发酵生产过程中对甘油含量的监控。 笔者参照!中国药典?(2005版)中甘油含量的测定方法 [4] ,根据棒酸发酵液的特性,建立了一种快 速、简便、准确测定发酵液中甘油含量的方法,并验证了其检测的精确性。 1 方 法 1.1 原理 甘油与高碘酸钠发生反应生成酸,剩余的高碘酸钠用乙二醇中和,最后由氢氧化钠滴定生成酸。由于发酵液中的单糖也和高碘酸钠发生反应生成

甘油检验操作规程

江西欧氏药业有限责任公司GMP文件 1 目的：为规范质量检验人员对甘油的检验操作，保证检验结果的准确性和可靠性，特制定本规程。 2 范围：适用于辅料甘油的检验。 3 责任人：QC人员（化验员）对实施本规程负责，QC主任（质量控制实验室负责人）负责监督检查，质量部部长负责抽查执行情况。 4 内容： 4.1 检品名称及代码 4.1.1 物料名称：甘油 4.1.2 物料代码：F002 4.2 质量标准编号：STP-ZL-02-002-00。 4.3 取样规程编号：SOP-ZL-03-017-00。 4.4 检验项目及操作方法 4.4.1【性状】 4.4.1.1仪器与用具：电子天平、锥形瓶 4.4.1.2操作方法： 4.4.1.3记录：记录观察到的辅料的行状、颜色、色泽，味道、溶解等。 4.4.1.4结果与判定：本品为无色、澄清的黏稠液体；味甜，有引湿性，水溶液（1→10）显中性反应。本品与水或乙醇能任意混溶，在丙酮中微溶，在三氯甲烷或乙醚中均不溶。 4.4.2相对密度 4.4.2.1仪器与用具：电子天平、比重瓶、干燥箱、恒温水浴锅 4.4.2.2试液与试剂：纯化水

名称甘油检验操作规程 编号 SOP-ZL-06-002-00 码 2/7 4.4.2.3操作方法：取本品，照《相对密度测定法》（编号：SOP-ZL-01-023-00）检查， 4.4.2.4记录与计算：记录每次称量数据，并按下述计算公式计算相对密度： 相对密度= W 1 -W W 1 -W 式中：W 0为比重瓶重（g）；W 1 为供试品+比重瓶重（g）；W 2 为水+比重瓶重（g）。 4.4.2.5结果与判定：在25℃时不小于1.2569。 4.4.3【鉴别】 4.4.3.1仪器与用具：红外分光光度计等 4.4.3.2试液与试剂：无水乙醇 4.4.3.3操作方法：取本品，照《红外分光光度法》（编号：SOP-ZL-01-013-00）检查， 4.4.3.4记录：记录供试品的红外色谱图并附图 4.4.3.5结果与判定：本品的红外光吸收图谱应与对照的图谱（光谱集77图）一致。 4.4.4【检查】 4.4.4.1颜色： 4.4.4.1.1仪器与用具:移液管、纳氏比色管等。 4.4.4.1.2试液与试剂：纯化水、基准重铬酸钾 4.4.3.1.3操作方法：取本品50ml，置50ml纳氏比色管中，照《溶液颜色检查法》（编号：SOP-ZL-01-005-00），与对照液（取比色用重铬酸钾液0.2ml，加水稀释至50ml制成）比较，。 4.4.4.1.4记录：记录样品溶液和标准溶液量取的数据，溶液配制记录，观察样品溶液与对照液的颜色， 4.4.4.1.5结果与判定：样品溶液与对照液的颜色比较不得更深。 4.4.4.2氯化物

甜水中甘油含量的测定

12 甜水中甘油含量的测定 12.1主题内容与适用范围 标准规定了甜水中甘油含量的测定方法。 本标准适用于甜水及蒸馏甘油中甘油含量的测定。 12.2原理 根据过碘酸钾氧化有机化合物中的羟基，羟基使甘油被氧化成甲醛和甲酸，过碘酸钾在此情况下还原成碘酸钾。 C3H5(OH)3十2KIO4＝2HCHO十2K103十HCOOH十H2O 剩余的过碘酸钾和碘酸钾在强酸性条件下，加碘化钾游离出碘后，再用标准Na2S203溶液滴定，以淀粉作指示剂。 KIO3 +5KI+6HCI 3I2+6KCI+3H2O KI04+7KI+8HCl 4I2+8KCl+4H2O I2十2Na2S2O32NaI+Na2S4O6 从反应中看出1mol的KI04可放出4mol的I2而1mol的KIO3放出3 mol的I2：，甘油反应时仅用去游离碘的1／4，所以， 滴定样品时，耗用标准溶液的体积数应不超过空白的3／4，超过3／4结果偏低。 12.3 仪器 12.3.1 容量瓶500ml 12.3.2 碘量瓶500 ml 12.3.3 移夜管25ml 12.3.4 滴定管50ml 12.3.5 量筒20 ml 12.4 试剂 12.4.1 碘化钾：10％水溶液； 12.4.2 淀粉指示剂 12.4.3 硫代硫酸钠：0．1N标准溶液； 12.4.4 20％盐酸溶液： 12.4.5 0.1N高碘酸钾溶液 12．5试验程序 在分析天平上准确称取样品4g放于500 ml的容量瓶中，稀释至刻度摇匀后取25ml放入碘量瓶中；再加入0.1N KIO4溶液25ml，放置15分钟后，加入20%盐酸溶液20ml，10％碘化钾溶液20ml，静置15分钟后用0.1mo1/L Na2S2O3，标准溶液滴定至淡黄色，加入1ml 淀粉指示剂，继续滴定至蓝色消失即为终点。同时在相同的条件下作空白试验。 12．6计算方法 （B-S）×C×0.023024 甘油含量％：×100% M×25/500 式中：B：空白试验所耗用硫代硫酸钠标准溶液的体积ml

甘油质量标准及检验操作规程

甘油内控质量标准及检验操作规程 1、目的：建立甘油检验操作规程，确保甘油的质量。 2、适用范围：适用于甘油的检验操作。 3、责任者：检验员负责实施，质控部负责人负责监督。 4、依据：中国药典2010版二部。 5、规程： （一）、质量标准： （二）、操作规程： 试剂与试药：硫酸氢钾标准氯化钠溶液标准硫酸钾溶液氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）醋酸盐缓冲液（pH3.5） 50%（W/V）乙二醇

溶液 2.14%（W/V）高碘酸钠溶液 仪器与用具：试管5个 50ml烧杯4个 50ml纳氏比色管1个红外光吸收仪1台电子天平1台 1.性状 1.1取本品适量，目视观察为无色、澄清的黏稠液体；味甜，感觉；有引湿水溶液（1 →10）显中性反应。 1.2本品与水或乙醇能任意混溶，在丙酮中微溶，在三氯甲烷或乙醚中不溶。 1.3相对密度本品的相对密度，在25℃时不小于1.2569。 2、鉴别： 2.1本品的红外光吸收图谱应与对照的图谱（光谱集77图）一致。 3.检查： 3.1颜色取本品50ml，置50ml纳氏比色管中，与对照液（取比色用重铬酸钾液0.2ml，加水稀释至50ml制成）比较，不得更深。 3.2氯化物取本品5.0g，依法检查（附录Ⅷ A），与标准氯化钠溶液7.5ml 制成的对照液比较，不得更浓（0.0015%）。 3.3硫酸盐取本品10g，依法检查（附录Ⅷ B），与标准硫酸钾溶液2.0ml 制成的对照液比较，不得更浓（0.002%）。 3.4脂肪酸与酯类取本品40g，加新沸过的冷水40ml，再精密加氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）10ml，摇匀后，煮沸5分钟，放冷，加酚酞指示液数滴，用盐酸滴定液（0.1mol/L）滴定剩余的氢氧化钠，并将滴定的结果用空白试验校正，消耗的氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）不得过 4.0ml。 3.5丙烯醛、葡萄糖与铵盐取本品5ml，加10%氢氧化钾溶液5ml，在60℃放置5分钟，不得显黄色或发生氨臭。 3.6易炭化物取本品 4.0g，照易炭化物检查法（附录Ⅷ O）项下方法检查，静置时间为1小时，如显色，与对照溶液（取比色用氯化钴溶液0.2ml、比色用重铬酸钾溶液1.6ml与水8.2ml制成）比较，不得更深。 3.7二甘醇、乙二醇与其他杂质取本品约10g，精密称定，置25ml量瓶中，精密加入内标溶液（每1ml中含0.5mg正己醇的甲醇溶液）5ml，加甲醇溶解并稀释至刻度，作为供试品溶液；取二甘醇、乙二醇适量，精密称定，加甲醇溶解

【CN109725084A】酱油中甘油含量的检测方法【专利】

(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910113878.9 (22)申请日 2019.02.14 (71)申请人 上海爱普食品工业有限公司 地址 201908 上海市宝山区罗新路111号 (72)发明人 陈秋燕　孙宇薇　张晓洁　谢文明　 (74)专利代理机构 上海申汇专利代理有限公司 31001 代理人 翁若莹　王文颖 (51)Int.Cl. G01N 30/02(2006.01) G01N 30/06(2006.01) (54)发明名称 酱油中甘油含量的检测方法 (57)摘要 本发明公开了一种酱油中甘油含量的检测 方法，其特征在于，在液体酱油样品中加入有机 溶剂将甘油提取到有机相中，由于甘油具有强极 性，因此需要将甘油提取到有机相中；在混合物 中加入衍生化试剂衍生样品；将装有混合液的容 器加盖进行涡旋反应，并静置提取液；在混合物 中加入有机溶剂提取衍生物；对其进行检测。本 发明检测酱油中甘油含量的方法具有操作简便、 快速、准确、仪器通用性强等优点，操作简便、安 全分析过程快速、 高效所得结果较精确。权利要求书1页 说明书4页 附图1页CN 109725084 A 2019.05.07 C N 109725084 A

权　利　要　求　书1/1页CN 109725084 A 1.一种酱油中甘油含量的检测方法，其特征在于，包括以下步骤： 步骤1)：在液体酱油样品中加入有机溶剂将甘油提取到有机相中； 步骤2)：在步骤1)得到的混合物中加入衍生化试剂衍生样品； 步骤3)：将装有步骤2)得到的混合液的容器加盖进行涡旋反应，并静置提取液； 步骤4)：在步骤3)得到的混合物中加入有机溶剂提取衍生物； 步骤5)：对步骤4)得到的样品进行检测。 2.如权利要求1所述的酱油中甘油含量的检测方法，其特征在于，所述步骤1)中的有机试剂采用DMF。 3.如权利要求1所述的酱油中甘油含量的检测方法，其特征在于，所述步骤1)具体为：使用有机溶剂将液体酱油样品进行溶解，进行反复提取，提高甘油提取率，将液体酱油样品中的甘油提取到有机相。 4.如权利要求1所述的酱油中甘油含量的检测方法，其特征在于，所述步骤2)中的衍生化试剂采用硅烷化试剂BSTFA。 5.如权利要求1所述的酱油中甘油含量的检测方法，其特征在于，所述步骤4)中的有机溶剂采用正己烷。 6.如权利要求1所述的酱油中甘油含量的检测方法，其特征在于，所述步骤4)具体为：在步骤3)得到的混合物中加入有机溶剂后，对其进行涡旋并离心，提取有机溶剂层。 7.如权利要求1所述的酱油中甘油含量的检测方法，其特征在于，所述步骤5)中的样品检测前用微孔滤膜过滤。 8.如权利要求1所述的酱油中甘油含量的检测方法，其特征在于，所述步骤5)中的检测采用GC-MC，其具体参数为：进样口温度250℃，程序升温最终温度280℃，以30℃/min升至240℃保持2min，再以50℃/min升至280℃。 2

甘油含量测定

嗯。你都问到这个问题了，具体仪器、操作什么的我就不说了。就说一下思路。 强碱条件下甘油和二价铜的络合物显绛蓝色，所以利用甘油的这个特性就可以轻松搞定。 主要试剂是AR级的甘油、氢氧化钠、硫酸铜。 向氢氧化钠碱化的甘油溶液里加硫酸铜，一定要保证甘油被完全络合，并且保证多余的二价铜都以氢氧化铜沉淀形式存在，但是氢氧化钠也不要加太多。 甘油铜可见区最大吸收波长是在630nm。 先作个标准系列，绘出吸光度-浓度曲线，然后把待测试样吸光度测出来在标准曲线上一算，浓度就得到了。 氢氧化铜解离出来的铜离子在630nm处也有吸收，好在它是一个定值，测出来后从每个甘油的A里面扣掉就行了。 甘油含量化学方法有很多，比色法，滴定法．甘油在强碱性条件下，与Cu2+定量形成绛蓝色的甘油铜溶液。根据朗伯-比尔定律，溶液吸光度A与吸光物质浓度C成正比：A=kC。甘油配制浓度C1与衍生的分析甘油铜浓度C有如下关系：C=k1C1，k1为稀释系数，则吸光度值与甘油配制浓度有如下正比关系： A=kk1C1+ε，k、k1为常数，ε为系统误差。 先根据吸光度与甘油配制浓度C1做出关系曲线:，然后确定最佳线性拟合范围，最终得出拟合线性方程，程序化后，用于甘油含量的快速测定。 [供应] 拜发甘油检测试剂盒 发布日期：2010-9-21 截止日期：2009-5-9

拜发甘油检测试剂盒 （酶学试剂盒） 订货号： 10148270035 产品名称：甘油（Glycerol ） 产品英文名称： Glycerol 包装： Ca.3 x 11 tests 产品介绍：如下 产品说明： Glycerol （用于检测食品中的甘油） 酶法分析试剂盒（紫外分光光度法） RIDASCREEN（产品编号：0 414 433） 30次检测 1. 简介 酶法分析试剂盒（紫外分光光度法）此法适用于检测食品（啤酒、葡萄汁、醋、蜂蜜、酒精、果酒）、化妆品、药品（溶液、栓剂）、纸板、烟草及生物制品中的甘油。 2. 原理 甘油在甘油激酶的催化下可被ATP磷酸化为3-磷酸甘油酯，ATP转化为ADP；反应式为 GK Glycerol﹢ATP L-glycerol-3-phosphate﹢ADP 上式中形成的ADP在丙酮酸激酶的催化下可与PEP作用下生成ATP及丙酮酸酯；反应式为 PK ADP﹢PEP ATP﹢Pyruvate 丙酮酸酯在L-乳酸酯脱氢酶的作用下可被NADH还原为L-乳酸酯，NADH被氧化为NAD；反应式为 L-LDH Pyruvate﹢NADH﹢H﹢ L-lactate﹢NAD﹢ 被氧化的NADH的量取决于甘油的量，NADH的吸光度值可在334，340及365nm下测量。 3. 试剂盒内容物 －－－－瓶1共有3瓶，每瓶约有2g辅酶及缓冲液的混和物，包括：甘氨酰甘氨酸缓冲液， PH约7.4； N ADH约7mg；ATP约22mg；PEP-CHA约11mg；硫酸镁 －－－－瓶2约0.4ml悬浮物，包括： 丙酮酸激酶，约240U； L-乳酸酯脱氢酶，约220U －－－－瓶3约0.4ml甘油激酶悬浮物，约34U －－－－瓶4为甘油检测对照溶液（甘油检测对照溶液可不需要计算结果），此溶液使用时不需稀释。（效期见标签） 4. 检测溶液的制备（10次） －－－－取出1瓶瓶1，用11ml重蒸水溶解，使用时此溶液需在20-25℃持续回温约10分钟 －－－－瓶 2不需稀释 －－－－瓶 3不需稀释 5. 操作者应该注意之事项 使用前请仔细阅读，中文翻译件仅供参考 －－－－瓶1约含500mg碳酸钠，应避免接触皮肤和呼吸器官，其他用于甘油检测的试剂不具有危险性－－－－实验之后，用过的试剂可作为实验室废料处理，但必须在当地法规允许的前提下

滴定法测试甘油含量实验方案

常州英德索特工业盐进出口有限公司 滴定法测试甘油纯度实验方案 1.实验目的 用酚酞作为指示剂，用NaOH滴定，通过计算得到甘油的含量。 2.实验原理 用NaIO4氧化甘油，一分子的甘油产生一分子的甲酸，过量的乙二醇溶液除去过量的甲酸，用NaOH滴定甲酸的含量，计算得到甘油的含量。 CH2OH-CH2OH-CH2OH + 2NaIO4——HCOOH + 2HCHO + H20 HCOOH + NaOH——H2O + NaCOOH 3.实验药品与实验设备 实验药品：去离子水（实验前煮沸10min以上除去CO2） 乙二醇（1体积乙二醇加入一体积去离子水） 硫酸（0.1mol/L,浓硫酸配制） 甲酸钠（1mol/L） 高碘酸钠（60g/L的0.1 mol/L的硫酸溶液） NaOH(0.05mol/L,0.125mol/L) 酚酞5g/L 实验仪器：pH计、碱式滴定管、磁力搅拌器、分析天平、容量瓶、烧杯、量筒、移液管、表面皿。 4.实验步骤 1)称取0.5g左右的甘油样品，置于500ml的烧杯中，加入蒸馏水至250ml左右，搅拌 均匀，加入0.05mol/L的NaOH溶液调节pH至7.9±0.1。 2)准确加入50ml的NaIO4溶液盖上表面皿，在暗处静置30min。 3)加入10ml的50%的乙二醇溶液，在暗处静置20min。 4)加入5ml的1mol/L甲酸钠溶液，加入两滴酚酞溶液，随后用0.125mol/L 的NaOH 溶液滴定至终点pH为7.9±0.2。NaOH用量为V1，所加入的甘油质量为m。 5)用50ml的水代替样品做空白试验，加入高碘酸钠前滴定调节PH到6.5，滴定终点 pH为6.5。NaOH用量为V2. 5.计算 甘油含量X=（9.21*0.125*（V1- V2））/m % 6.注意事项 1）分析试验注意称量准确 2）溶液试剂注意是否过期，溶液是否澄清。 3）提前预判滴定终点，保证滴定终点的准确性。 4）pH计使用前用标准溶液校准。

甘油检验操作规程

甘油检验操作规程 1 目的：建立甘油检验操作规程。 2 适用范围：适用于甘油的检验操作。 3 职责：检验人员对本规程的实施负责。 4 规程： 4.1 编制依据：《中国药典》2010年版二部P83。 4.2 质量指标：见《甘油质量标准》。 4.3 仪器与用具：滴定管、烘箱。 4.4 试药与试液：硫酸氢钾、重铬酸钾液、标准氯化钠、标准硫酸钾、氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）、盐酸滴定液（0.1mol/L）、10%氢氧化钾、硫酸、醋酸盐缓冲液、标准铁溶液、高碘酸钠。 4.5 操作方法

4.5.1 性状：本品为无色、澄清的黏稠液体；味甜；有引湿性，水溶液（1→10）显中性反应。本品与水或乙醇能任意混溶，在氯仿或乙醚中均不溶。 相对密度：取本品，按《相对密度检验操作规程》检验，在25℃时应不小于1.2569。 4.5.2 鉴别（红外光谱）：取本品，按《红外光谱测定操作规程》检验，应与对照图谱一致（光谱集77图）。 4.5.3 检查 4.5.3.1 颜色：取本品50ml，置50ml纳氏比色管中，与对照液（取比色用重铬酸钾液0.2ml，加水稀释至50ml制成）比较，不得更深。 4.5.3.2 氯化物：取本品5.0g，依《氯化物检验操作规程》检验，与标准氯化钠溶液7.5ml制成的对照液比较，不得更浓

（0.0015%）。 4.5.3.3 硫酸盐：取本品10g，依《硫酸盐检验操作规程》检验，与标准硫酸钾溶液2.0ml制成的对照液比较，不得更浓（0.002%）。 4.5.3.4 脂肪酸与酯类：取本品40g，加新沸过的冷水40ml，再精密加氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）10ml，摇匀后，煮沸5分钟，放冷，加酚酞指示液数滴，用盐酸滴定液（0.1mol/L）滴定剩余的氢氧化钠，并将滴定的结果用空白试验校正，消耗的氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）不得过4.0ml。 4.5.3.5 丙烯醛、葡萄糖与铵盐：取本品4.0g，加10%氢氧化钾溶液5ml，混匀，在60℃放置5分钟，不得显黄色或发生氨臭。 4.5.3.6 易炭化物：取本品4.0g，照《易炭化物检查操作

2021年甘油含量测定方法

甘油含量的测定 欧阳光明（2021.03.07） 实验原理：采用高碘酸氧化还原法 仪器及药品： 仪器：容量瓶、碘量瓶、锥形瓶 药品：NaIO4；KI；H2SO4；淀粉指示剂 1.0％淀粉指示液：称取1.0g可溶性淀粉，加10mL水，在搅拌下再 注入到90mL水中，微沸2min，放置，取上层 清液使用。试验均要用新配制1.0%的淀粉指示 剂。 标准溶液： 1. 氢氧化钠：0.5N、0.1N、0.01N（常用）用基准苯二甲酸氢钾标定。 2.硫代硫酸钠： 配制：0.1N称取26克硫代硫酸钠（或16克无水硫代硫酸钠），溶于1000毫升水中，缓缓煮沸10分钟，冷却，放置两周后过滤备 用。（常用） 标定：称取0.15克（精确到0.0002克）于120℃烘至恒重的基准重铬酸钾，置于碘量瓶中，溶于25毫升水，加2克碘化钾及20 毫升4mol/L的硫酸（3mol/L 25ml），摇匀。于暗处放置10分 钟。加75毫升水，用0.1N硫代硫酸钠溶液滴定，近终点时 加1毫升0.5％淀粉指示剂，继续滴定至溶液由蓝色变为亮绿

色。同时做空白实验。 N＝G/0.04903（V1-V2） 式中：G——重铬酸钾之重量，克 V1——硫代硫酸钠之用量，毫升 V2——空白硫代硫酸钠之用量，毫升 0.04903——每毫克当量重铬酸钾之克数 实验步骤： 1、试样处理 精确称取大豆油10.00g(精确到小数点后二位)，反应完后，将 分层液下层甘油相转入500ml 容量瓶中，并用适量水洗涤上层 甲酯层，水相也转入容量瓶中，最后定容，待用。 2、甘油含量测定 准确量取10ml上述甘油溶液，放入250ml碘量瓶中，再加入20ml 0.04mol/L NaIO4溶液、10ml 0.6mol/L H2SO4溶液、5ml正己烷，盖好塞盖，摇匀，在室温下于暗处放置30 min。 然后加入1.5g KI(两颗)，反应3min后，再加水75ml ，溶液呈 现葡萄酒色，析出的碘用配制好的约0.1mol/L Na2S2O3标液 滴定，滴定至颜色变亮时加入1ml淀粉指示剂，此时溶液呈现 不透明深蓝色，继续滴至蓝色恰好消失为止（无色），平行测 定3次，同时做空白实验。 产率计算公式：（油脂的转化率以甘油产率表示） 转化率%=

甘油含量的测定

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实验七高碘酸氧化法测定丙三醇含量 一、实验目的 1. 掌握高碘酸氧化法（碘量法）的基本原理 2. 高碘酸氧化碘量法测定丙三醇含量 二、实验原理 在弱酸性介质中，高碘酸能定量地氧化位于相邻碳原子上的羟基。氧化结果，碳链断裂，生成相应的羰基化合物和羧酸。一元醇或羟基不在相邻碳原子上的多羟醇等均不被氧化。这就是高碘酸氧化法测定多羟醇含量的基本依据。其反应可用下列通式表示。 CH2OH(CHOH)n CH2OH+(n+1)HIO4=2HCHO+nHCOOH+(n+1)HIO3+H2O 试样中加入一定量且过量的高碘酸，氧化反应完全后，加入碘化钾溶液，剩余的高碘酸和反应生成的碘酸被还原析出碘，用硫代硫酸钠标准溶液滴定，同时做空白试验，由空白滴定与试样滴定之差值即可算出试样中α-多羟醇含量。 氧化HC H2C OH H2C OH OH+2HIO42HCHO +2HIO3H2O + HCOOH+ 还原 HIO4+7KI+7H+ = 4I2+7K++4H2O HIO3+5KI+5H+ = 3I2+5K++3H2O 滴定 I2+2Na2S2O3 = 2NaI+Na2S4O6 丙三醇—2HIO4—2I2—4Na2S2O3 丙三醇的物质的量n丙三醇为

322n 4 1O S Na n =丙三醇 α-多羟醇的物质的量n 用下面的通式表示为 322n 21O S Na E n =-多羟醇 α 三、仪器及试剂 容量瓶 250mL 碘量瓶（或锥形瓶+胶塞） 250mL 移液管 25mL 滴定管 50mL 碘化钾20% 淀粉指示剂 % 硫代硫酸钠标准液 mol·L -1。 高碘酸溶液：取高碘酸（HIO 4·2H 2O ）溶于200mL 水中，用冰乙酸稀释至1000mL ，储于棕色瓶中备用。 （三）测定步骤 1. 精确称取~（约3~4滴）丙三醇于250mL 容量瓶中，用水溶解并稀释至刻度。 2. 测定 吸取试样溶液，于250mL 碘量瓶中，准确加入高碘酸钾溶液，10mlH 2SO 4溶液，盖好瓶塞，摇匀，于室温放置30min ，然后加入10mL20%碘化钾溶液，析出的碘用·L -1硫酸钠标准溶液滴定，当溶液呈淡黄色时，加%的淀粉指示剂，继续滴定至蓝色刚好消失即为终点。 3. 同样条件下进行空白试验 根据实验结果计算试样中丙三醇含量

甘油的检测方法汇总

甘油的检测方法汇总 在发酵行业中，甘油作为底物，是发酵液中生物合成的直接前体，会影响外源蛋白的启动表达效率，其含量的高低直接影响产物的发酵单位，是决定菌种取舍的重要指标，是提高工程菌的发酵密度，提高产品生产率的关键。在生物柴油生产中，它是副产物，其含量直接影响生物柴油的使用性能，是衡量生物柴油产品品质的重要指标之一。此外，甘油能与水结合以防止红细胞的冷冻损伤，能延长红细胞的保存期，被普遍用作细胞内冷冻保护剂等。由于甘油用途很广，因此其含量的测定具有非常重要的意义。 目前国内外甘油含量的测定方法较多，主要有高碘酸氧化法、Cu2 +络合比色法、酶比色法法、紫外-可见分光光度法、高效液相色谱法、气相色谱法、近红外光谱法以及原子吸收法等。下面将对其进行简要概述： 一、高碘酸法 1.原理：高碘酸氧化法是目前常见用于甘油含量检测的方法，利用高碘酸与甘油发生氧化还原反应，剩余高碘酸及反应生成的碘酸与碘化钾反应生成碘，再用硫代硫酸钠进行滴定，根据消

V1——空白试样消耗硫代硫酸钠标准溶液的体积，mL； V2——试样消耗硫代硫酸钠标准溶液的体积，mL； C——硫代硫酸钠标准溶液的浓度，mol／L；M——甘油相对分子质量； 二、酶比色法 1.原理：它是利用酶的特异性催化反应建立的测定甘油的一种酶学方法，是指甘油在甘油激酶作用下转化为3-磷酸甘油，后者由磷酸甘油氧化酶催化生成磷酸二羟丙酮和过氧化氢，然后过氧化氢和4-氨基安普比林、4-氯酚在过氧化物酶催化下反应生成紫兰色、能在500 nm 左右 有特征吸收峰的醌亚胺，通过颜色深浅即吸光度的变化测定所生成的H 2O 2 ，甘油的含量与生成 的H 2O 2 成正比，这样用比色法就可以测定甘油的含量。 2.操作步骤 波长：500nm (480~520nm) 反映温度：37℃比色杯光径：1cm 取一定量R1(参看R2瓶签)加入1瓶R2中，溶解后即为工作液，工作液预先保温至测试温度。

甘油分析方法

甘油分析方法 甘油的化学分析方法 过碘酸钠法（GB/T 13216.6—91） 原理：在强酸性介质中，过碘酸钠将三个相连羟基的甘油氧化分解成甲酸和甲醛，用NaOH中和生成的甲酸，用pH值计指示终点。从NaOH标准溶液的消耗量计算甘油的含量。 CH2OH-CHOH-CH2OH+2NaIO4→2HCHO+HCOOH+2NaIO3+H2O 试剂 蒸馏水：不含二氧化碳。 乙二醇稀释溶液：1体积不含甘油的乙二醇，用酚酞作指示剂中和后，再用1体积水稀释。 硫酸溶液：约0.1mol/L。 甲酸钠溶液：约0.1mol/L。 过碘酸钠酸性溶液的制备：称取60g（精确至0.1g）过碘酸钠，溶于已加入120mL硫酸溶液的约500mL的水中，边加入边冷却，转移到1000mL容量瓶中，用水稀释到刻度并摇匀。必要时用玻璃过滤器过滤。 溶液的酸度校核：空白试验所用NaOH溶液的体积应不少于4.5mL，这与基本反应产生的酸度相当。 NaOH溶液：约0.05mol/L。 NaOH标准溶液：约0.125 mol/L。 酚酞指示剂：溶解0.5g酚酞于95%（体积比）乙醇中，稀释至100mL。

仪器 滴定管：50mL。 pH值计：pH值计应用两种缓冲溶液校准。 a：邻苯二甲酸氢钾溶液：0.05mol/L（10.12g/L），20℃时pH值为4.00；b：10水四硼酸二钠（Na2B4O7·10H2O）溶液：0.01mol/L（3.81g/L），20℃时pH值为9.22。 测定步骤 （1）试验份：称取含甘油不大于0.5g的样品（精确至0.0002g）。如果不知甘油的大致含量，应称取0.5g样品进行预测（如果甘油含量大于75%， 最好称取0.5g+0.1g样品，精确至0.0002g），置于500mL容量瓶中， 用水稀释至刻度，摇匀后取50mL此溶液用于测定。 （2）试验溶液的制备：对碱性样品或样品酸化时出现焦油沉淀，可将试验份放入配有回流冷凝器的烧瓶中，需要时稀释到50mL，加2滴酚酞指示 剂，用硫酸溶液中和到刚好褪色。再加入5mL硫酸溶液，煮沸5min， 冷却，必要时过滤，并用水洗涤过滤器。滤液转入600mL烧杯中。无 上述情况时则可将样品直接放入烧杯进行测定。 （3）滴定：用水稀释试样至体积约250mL，在不断搅拌下，加入NaOH溶液，调节pH值至7.9±0.1。加入50mL过碘酸钠溶液，混合搅匀，盖 上表面皿，在温度不超过35℃的暗处放置30min。然后加入10mL乙 二醇稀释溶液，混合，在相同条件下放置20min。加5.0mL甲酸钠溶 液，用NaOH标准溶液滴定至pH值7.9±0.2。. （4）空白试验：在相同条件下，用相同量的试剂和稀释水，用50mL水代替

甘油含量的测定

湖南古杉生物能源有限公司标准 GS/ZYP 15 甘油含量的测定 1、范围 1.1、本标准适用于粗甲酯中、冷凝水中、生物柴油中甘油含量的测定。 1.2、本标准规定了甘油含量的分析方法，本法仅限粗略测定。 2、引用标准 2.1、AOCS E—III36 （79）甘油含量的测定 3、原理 在酸性条件下，与甘油反应过量的高碘酸以及生成的碘酸被「还原成12,再用硫代硫酸 钠标液滴定即可计算出甘油含量。 CH20H CHOH + 2NalO 4 2H.C00H + 2NalO 3 + H20 CH20H 14H + + 12I- + 104- + 103- ________ 712 + 7H2O I2+2S2O32--------- ? 2 I- + S4O62- 4、试剂及仪器 所有试剂和溶剂须采用分析纯，水也应为蒸馏水或相当纯净的水。 4.1、过碘酸钾溶液：称取过碘酸钾 2.65g溶于100ml的1N的硫酸溶液中，不加热溶解后加 水稀释至1000ml。 4.2、10%KI溶液：称取50克的KI溶于450毫升的蒸馏水中。 4.3、20%勺盐酸溶液 4.4、1 %的淀粉指示剂：称取1克的淀粉指示剂，用少量的水调成糊状，加入100毫升刚煮 沸的蒸馏水，搅拌均匀，静置15分钟，取上层清液。 4.5、0.1mol/LNa 2S2Q标准溶液，准确标定。 4.6、分析天平：精确度为0.0001g 4.7、碘量瓶：250ml 4.8、移液管：25ml、50ml 4.9、棕色滴定管：50ml 4.10、容量瓶：500ml 4.11、量筒：20ml、50ml 5、操作步骤 按表1规定准确称取适量（记为W样品于500ml的容量瓶中，加水至刻度摇匀，用移液管吸取 25ml的样品注入碘量瓶中，再加入50ml （用移液管吸取）的过碘酸钾溶液，轻轻 摇匀后静止15分钟，如室温低于10C时，应延长到20?25分钟。静止后的溶液中加入10% 的KI溶 液20ml, 20%勺盐酸溶液20ml和50ml的水，用0.1 mol/LNa 2SQ的N Q SQ标准溶液滴定至溶液为 淡黄色时，加入淀粉指示剂1ml继续滴定至蓝色消失，所消耗的N Q SQ标 准溶液体积数记为V2。同时用25ml的水代替甘油作空白试验，空白试验所用NaS zQ标准溶 液体积数记为V1。

滴定法测试甘油含量实验方案

滴定法测试甘油纯度实验方案 1.实验目的 用酚酞作为指示剂，用NaOH滴定，通过计算得到甘油的含量。 2.实验原理 用NaIO 4氧化甘油，一分子的甘油产生一分子的甲酸，过量的乙二醇溶液除去过量的甲酸，用NaOH滴定甲酸的含量，计算得到甘油的含量。 CH 2OH-CH 2OH-CH 2OH + 2NaIO 4——HCOOH + 2HCHO + H 20 HCOOH + NaOH——H 2O + NaCOOH 3.实验药品与实验设备 实验药品： 去离子水（实验前煮沸10min以上除去CO 2） 乙二醇（1体积乙二醇加入一体积去离子水） 硫酸（

0.1mol/L,浓硫酸配制） 甲酸钠（1mol/L） 高碘酸钠（60g/L的 0.1 mol/L的硫酸溶液） NaOH( 0.05mol/L, 0.125mol/L) 酚酞5g/L 实验仪器： pH计、碱式滴定管、磁力搅拌器、分析天平、容量瓶、烧杯、量筒、移液管、表面皿。 4.实验步骤 1)称取 0.5g左右的甘油样品，置于500ml的烧杯中，加入蒸馏水至250ml左右，搅拌均匀，加入 0.05mol/L的NaOH溶液调节pH至 7.9± 0.1。 2)准确加入50ml的NaIO 4溶液盖上表面皿，在暗处静置30min。 3)加入10ml的50%的乙二醇溶液，在暗处静置20min。

4)加入5ml的1mol/L甲酸钠溶液，加入两滴酚酞溶液，随后用 0.125mol/L的NaOH溶液滴定至终点pH为 7.9± 0.2。NaOH用量为V 1，所加入的甘油质量为m。 5)用50ml的水代替样品做空白试验，加入高碘酸钠前滴定调节PH到 6.5，滴定终点pH为 6.5。NaOH用量为V 2. 5.计算 甘油含量X=（ 9.21* 0.125*（V 1- V 2））/m% 6.注意事项 1）分析试验注意称量准确 2）溶液试剂注意是否过期，溶液是否澄清。 3）提前预判滴定终点，保证滴定终点的准确性。 4）pH计使用前用标准溶液校准。

甘油含量的测定

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实验七高碘酸氧化法测定丙三醇含量 一、实验目的 1. 掌握高碘酸氧化法（碘量法）的基本原理 2. 高碘酸氧化碘量法测定丙三醇含量 二、实验原理 在弱酸性介质中，高碘酸能定量地氧化位于相邻碳原子上的羟基。氧化结果，碳链断裂，生成相应的羰基化合物和羧酸。一元醇或羟基不在相邻碳原子上的多羟醇等均不被氧化。这就是高碘酸氧化法测定多羟醇含量的基本依据。其反应可用下列通式表示。 CH2OH(CHOH)n CH2OH+(n+1)HIO4=2HCHO+nHCOOH+(n+1)HIO3+H2O 试样中加入一定量且过量的高碘酸，氧化反应完全后，加入碘化钾溶液，剩余的高碘酸和反应生成的碘酸被还原析出碘，用硫代硫酸钠标准溶液滴定，同时做空白试验，由空白滴定与试样滴定之差值即可算出试样中α-多羟醇含量。 氧化HC H2C OH H2C OH OH+2HIO42HCHO +2HIO3H2O + HCOOH+ 还原 HIO4+7KI+7H+ = 4I2+7K++4H2O HIO3+5KI+5H+ = 3I2+5K++3H2O 滴定 I2+2Na2S2O3 = 2NaI+Na2S4O6 丙三醇—2HIO4—2I2—4Na2S2O3 丙三醇的物质的量n丙三醇为

322n 4 1O S Na n =丙三醇 α-多羟醇的物质的量n 用下面的通式表示为 322n 21O S Na E n =-多羟醇 α 三、仪器及试剂 容量瓶 250mL 碘量瓶（或锥形瓶+胶塞） 250mL 移液管 25mL 滴定管 50mL 碘化钾20% 淀粉指示剂 % 硫代硫酸钠标准液 mol·L -1。 高碘酸溶液：取高碘酸（HIO 4·2H 2O ）溶于200mL 水中，用冰乙酸稀释至1000mL ，储于棕色瓶中备用。 （三）测定步骤 1. 精确称取~（约3~4滴）丙三醇于250mL 容量瓶中，用水溶解并稀释至刻度。 2. 测定 吸取试样溶液，于250mL 碘量瓶中，准确加入高碘酸钾溶液，10mlH 2SO 4溶液，盖好瓶塞，摇匀，于室温放置30min ，然后加入10mL20%碘化钾溶液，析出的碘用·L -1硫酸钠标准溶液滴定，当溶液呈淡黄色时，加%的淀粉指示剂，继续滴定至蓝色刚好消失即为终点。 3. 同样条件下进行空白试验 根据实验结果计算试样中丙三醇含量