雷公藤氯内酯醇对帕金森病大鼠多巴胺神经元的保护作用
雷公藤氯内酯醇对帕金森病大鼠多巴胺神经元的保护作用程晓馨1,2,李丰桥1,黄 敏2,王晓民13,韩济生1
(1.北京大学神经科学研究所,北京100083;2.大连医科大学基础医学院,辽宁大连116027)
摘要:目的 探讨雷公藤氯内酯醇(T4)对帕金森病(PD)大鼠多巴胺(DA)神经元的保护作用。方法 采用线刀损毁大鼠内侧前脑束(MF B)制备部分损伤性PD模型,应用旋转行为测试行为学改变,HP LC2EC D检测纹状体DA含量,酪氨酸羟化酶(TH)免疫组化检测DA神经元的存活率,双抗夹心E LIS A法检测损毁侧脑组织中细胞因子含量。结果 T
4
在较低剂量下(1μg?kg-1)能够改善安非他明(AMPH)诱发的PD大鼠异常旋转行为,其损伤侧纹状体DA含量和黑质致密部DA神经元存活率均比对照组增加,并能抑制脑内T NF2α和I L22的异常升高。结论 免疫抑制剂T4
对PD大鼠具有肯定的神经保护作用,其作用的发挥与T
4
抵抗细胞因子在脑内过度升高而产生的毒性作用有关。
关键词:雷公藤氯内酯醇;帕金森病;多巴胺;神经保护;免疫抑制剂
中图分类号:R282.71;R965 文献标识码:A 文章编号:0513-4870(2002)05-0339-04
帕金森病(Parkins on’s disease,PD)是以中枢多巴胺(dopamine,DA)能神经元变性死亡为主要特征的一种神经系统退变性疾病。以神经元保护剂为主的神经元保护性治疗成为当前防治PD的研究热点。一系列研究证明,免疫异常与PD发病密切相关,PD病人脑内I L21β,I L22,I L26,T NF2α及TG F2α等细胞因子的含量明显升高[1,2]。众多的研究亦证明,异常激活的免疫反应确实参与神经元的渐进性退变过程[3]。因此干扰免疫过程的药物无疑会对减轻或阻止PD的进一步发展。新近研究发现,免疫抑制剂FK506和rapamycin均有强的神经营养和保护作用,对PD模型鼠中脑多巴胺能神经元的退行性变呈现显著的缓解作用[4]。雷公藤氯内酯醇(tripchlorolide,T
4
)是中药雷公藤中的一种小分子单体活性成分,有与FK506相似的免疫抑制和抗炎活性,已发现该药可促进外周移植神经的存活[5],但对中枢神经是否有保护作用尤其对PD有何影响尚无报道。本研究就其对DA细胞的神经保护作用进行初步的实验观察与分析。
收稿日期:2001208220.
基金项目:国家重点基础研究规划资助项目(G1999054008).
作者简介:程晓馨(1968-),女,硕士,讲师;
王晓民(1956-),男,博士,教授.
3通讯作者 T el:(010)62091151,Fax:(010)62091150,
E2mail:xm wang@https://www.wendangku.net/doc/5a14203983.html,
材料与方法
动物 健康S praque2Dawley(S D)大鼠,体重180～220g,♂,由北京维通利华实验动物繁殖中心提供。每笼5～6只群养,笼底铺以锯末,给以自然照明,温度20℃,自由饮食。
药品与试剂 T
4由北京大学药学院提纯并进行结构鉴定,分子量为397,呈白色针状结晶,纯度为98%。安非他明(am phetamine,AMPH)、单胺标准品(DA,DOPAC,H VA,52HI AA)及小鼠单克隆TH抗体(clone number:TH22)均为Sigma公司产品。SP2 9002(生物素标记羊抗鼠IgG)免疫组化试剂盒(中山试剂公司),大鼠T NF2αE LIS A试剂盒(Endogen公司),大鼠I L22E LIS A试剂盒(深圳晶美公司)。
线刀损毁大鼠内侧前脑束(MFB)制备部分损伤性PD模型 用Scoutern线刀损毁大鼠单侧MF B,建立部分损伤性帕金森病模型[6,7]。将大鼠用6%水合氯醛(350mg?kg-1,ip)麻醉,固定于大鼠脑立体定位仪上,手术暴露颅骨。根据包新民S D大鼠图谱,选取MF B定位坐标为:前囟后315mm,矢状线右侧旁开215mm,硬膜下深715mm,线刀从针管中伸出218mm。将线刀上移3mm,再回到原处,如是3次。术后给予抗生素预防感染。
动物分组 实验设模型对照组和药物处理组,每组24只大鼠。药物处理组动物于手术前24h和1h ip不同剂量的T4(015,1,5μg?kg-1),qd,直至术后27d。术后d28处置大鼠。
旋转行为测试 术后d28测转。按Ungerstedt 的方法[8],ip AMPH(215mg?kg-1),诱发大鼠旋转。测转时间为45min,给药后5min内开始统一记录。旋转行为的表示方法:以向右侧(本实验为损伤侧)旋转与向左侧(本实验为健侧)旋转总转数的差值在45min内的平均数(r?min-1)为净旋转次数。
组织处理 测转结束次日,每组随机取3～5
只,4%多聚甲醛灌流固定,取全脑,行冰冻切片,留做TH免疫组化。断头处死其余动物,取其纹状体用作HP LC2
EC D检测。将大鼠脑置于金属脑模中,切取损伤针道周围组织,进行组织学检查,以判定手术的成功与否。手术部位偏离者,从实验数据中剔除;部位正确者,留做下一步的E LIS A检验。
HP LC2ECD检测单胺类递质 取损毁侧纹状体检测DA,H VA和DOPAC含量。仪器参数:流速为112m L?min-1,L2EC D26A电压设定为+018V,信号输出1nA?mV-1,记录量程为50mV。
免疫组化2酪氨酸羟化酶(TH) 按SP免疫组化试剂盒说明操作,TH单抗浓度选用1∶10000。组织标本采用冰冻切片。
双抗夹心E LISA法检测损毁侧脑组织中细胞因子含量 T NF2α与I L22的测定方法基本相同,具体步骤按说明书完成。蛋白定量用考马斯亮蓝法测定。
数据处理 图表用P owerpoint和Prism310版绘制。多组数据间差异用单因素方差分析(ANOVAs)和Newman K euls post2hoc检验。以P<0105作为统计学差异显著性的界限。
结果
1 T4对PD大鼠异常旋转行为的影响
AMPH注入正常大鼠后可以诱发大鼠向两侧出现轻度的旋转,但左右的旋转次数基本相同。其净旋转次数约012r?min-1。本实验中,MF B损毁对照组大鼠出现明显的向损伤侧旋转的行为,平均约5 r?min-1。经T4处理者呈现显著的缓解效应,与损伤对照组相比,T
4
1μg?kg-1组其旋转转数降低56%,5μg?kg-1组旋转转数比对照组降低44%,015μg?kg-1组改善旋转异常效果不明显,各组间的差异有统计学意义(P<0105),见图1。
2 T4对PD大鼠损伤侧纹状体DA含量的影响最后一次行为学观察结束后,分别取各组大鼠
损伤侧纹状体,用HP
LC2EC D方法检测纹状体内单
胺类递质的含量。T
4
015～5μg?kg-1均可使损伤侧
纹状体DA含量增加,其中T
4
1μg?kg-1组与对照组相比,DA含量升高了140%,有显著性差异(P< 0105)。通过检测DOPAC和H VA含量判断DA的代
谢情况,结果表明T
4
1μg?kg-1组H VA含量与对照组相比明显升高,而DOPAC含量在各组未见显著差异(表1)。
Figure1 E ffect of T4on the AMPH2induced rotational behavior of MF B lesioned rats.T4was injected intraperitoneally once daily from one day before to26days after surgery.R otational behavior challenged by AMPH (215mg?kg-1,ip)was measured on the28th day after surgery.n=11～16,3P<0105vs control group
T able1 E ffect of T4treatment of contents of DA, HVA and DOPAC in striatum of MBF lesioned rats (ng?mg-1w et tissue)
G roupΠμg?kg-1DA H VA DOPAC
C ontrol 1.5±0.40.47±0.06 1.49±0.24
T40.5 1.5±0.40.71±0.21 1.4±0.6
T41.0 3.7±0.83 1.02±0.133 2.2±0.4
T45.0 2.5±0.60.76±0.28 1.7±0.3 Measurement was performed with the method of HP LC2EC D.n=11～16, x±s,3P<0.05vs control group
3 T4对PD模型鼠黑质致密部DA神经元数目的影响
酪氨酸羟化酶(TH)是DA合成的限速酶,存在于DA能神经元的胞浆内,通过TH免疫组化方法可以鉴定DA能神经元。TH免疫组化显示,用线刀切断黑质到纹状体的传导通路MF B后,损伤侧(右侧)黑质致密部的DA能神经元大量死亡,与未损伤侧(左侧)相比残存的神经元只有2213%;T4110
μg?kg-1组和T
4
510μg?kg-1组黑质致密部的TH阳性细胞形态正常,结构完整,数目明显多于对照组,分别为7118%和8815%,差异十分显著(P<0101),
见图2
。
Figure 2 Survival ration of TH 2positive neurons in S Npc of MPH 2transected rats after treatment with T 4for 28d.Survival ration was calculated by the number of TH 2positive neurons in S Npc of lesioned side com pared with
its respective unlesioned side.n =3～5,3
P <0105,33
P <0101vs control group
4 T 4对脑内TNF 2
α和I L 22水平的影响机械损毁MF B 可造成脑组织损伤,刺激炎症因
子的产生。本实验用E LIS A 法检测细胞因子T NF 2
α和I L 22的含量。T 4处理组(015～5μg ?kg -1
)T NF 2
α的含量明显低于对照组,分别降低43162%,43152%和37158%。同时I L 22的生成也受到抑制,T 41
μg ?kg -1组和5μg ?kg -1
组I L 22的含量明显低于对照组(P <0101),见表2。
T able 2 Contents of TNF 2
αand I L 22in brain tissues of MFB lesioned rats with T 4treatment
G roup Πμg ?kg -1
T NF 2αΠpg ?mg -1
I L 22Πpg ?mg -1Naive 4.2±0.98.4±0.5C ontrol 10.3±1.0##
19.1±2.9##
T 40.5 5.8±0.8310.7±2.6T 41.0 5.8±0.9
3
6.9±1.13T 45.0
6.4±0.43
9.3±1.33
n =11～16, x ±s ,3
P <0.05vs control group ;##
P <0.01vs
naive group
讨论
本实验用线刀损毁大鼠MF B ,制备部分损伤PD 模型研究雷公藤单体T 4的神经保护作用,是国内的首例应用。选择合适的模型是实验研究首先需解决的问题。据记载,迄今已建立了小鼠、大鼠、猫和猴子等动物的多种PD 模型,其中最常用的为立体定向注射62OH DA 损伤MF B 而建立的PD 模型。但该模型由于DA 能神经元损伤严重和快速,不适用于
神经元再生以及早期PD 治疗的研究。最近,国外有学者采用机械损伤MF B 的办法来建立PD 大鼠模型
[6,7]
。该模型在损伤初期时多巴胺神经元部分丢
失,多巴胺细胞呈进行性死亡,并且可用右旋安非他明(AMPH )诱发大鼠旋转行为。因此适用于对神经元损伤修复以及PD 治疗和预防药物的研究。
T 4是雷公藤活性单体成分之一,具有免疫抑制
作用及抗炎活性
[9]
。本实验首次揭示T 4在较低剂
量下(1μg ?kg -1
)能够改善AMPH 诱发的PD 大鼠异
常旋转行为,其损伤侧纹状体DA 含量和黑质致密部DA 神经元存活率均比对照组增加。提示T 4通过保护DA 能神经元,减缓或阻止其进行性坏死的进程而保护DA 系统。
诸多研究发现,PD 患者伴有免疫功能的异常,黑质中往往含有异常活性的胶质细胞
[10]
。胶质细
胞占成人脑细胞总数的90%以上,通过产生神经营养因子和调节炎症Π免疫过程而支持神经元,是脑内的免疫细胞
[11]
。大量活化的胶质细胞可以产生多
种细胞因子和自由基作用于周围的神经元,最终导致神经元死亡
[12]
。因此防止其过度激活是保护神
经元免受损伤的关键。新近研究表明,机械损毁大鼠MF B 可以激活黑质纹状体部位的胶质细胞[13]
。
在本实验中,MF B 损毁的PD 大鼠脑内T NF 2α和I L 22的含量增加,T 4可以使之降低,同时行为学指标、
黑质2纹状体内DA 含量和DA 神经元数目亦明显改
善,提示抑制脑内T NF 2
α和I L 22的异常升高可保护DA 神经元。FK 506可通过抑制62OH DA 激活的胶
质细胞而缓解T NF 2α水平的升高,发挥保护DA 能神经元的作用
[14]
。由此推测,T 4通过抑制激活的胶
质细胞、下调细胞因子在脑内的异常升高而保护DA 神经元,减缓DA 神经元的进行性死亡进程。
综上所述,雷公藤氯内酯醇T 4作为一种能够通过血脑屏障的小分子物质,在低于毒性作用的浓度下,抵抗细胞因子在脑内过度升高而产生的毒性作
用,缓解DA 细胞的死亡,具有肯定的神经保护和营养作用。通过本实验,同时还提示免疫异常与PD 病变有密切的关系,免疫抑制剂T 4可通过干扰PD 的异常免疫过程而保护神经细胞。从而揭示T 4对PD 的防治具有良好的应用前景,有望成为一种新型
的神经元保护类药物。REFERENCES :
[1]M ogi M ,Harada M ,Narabayashi H ,et al .Interleukin
(I L)21β,I L22,I L24,I L26,and trans forming growth factor2α
levels are elevated in ventricular cerebrospinal fluid in juvenile Parkins onism and Parkins on’s disease[J].Neurosci Lett,1996,211(1):13-16.
[2]M ogi M,Harada M,Riederer P,et al.Tum or necrosis
factor2α(T NF2α)increase both in the brain and in the cerebrospinal fluid from Parkins onian patients[J].Neurosci Lett,1994,165(1-2):208-210.
[3]K uhn W,Muller T,Nastos I,et al.The neuroimmune
hypthesis in Parkins on’s disease[J].Neuroscience,1997,8
(1):29-34.
[4]Snyder SH,Sabatini DM,Michael M L,et al.Neural actions
of immunophilin ligands[J].TIPS,1998,19(1):21-26.
[5]Ding W L,Liu DM,Wen W.E ffect of Tripterygium wilfordii
hook on nerve regeneration after heterografting[J].Acta Anat Sin(解剖学报),1999,30(1):31-43.
[6]K nusel B,Beck K D,Winslow JW,et al.Brain2derived
neurotrophic factor administration protects basal forebrain cholinergic but not nigral dopaminergic neurons from degenerative changes after ax otomy in the adult rat brain[J].
J Neurosci,1992,12(11):4391-4402.
[7]Lapchak PA,Beck K D,Araujo DM,et al.Chronic
intranigral administration of brain2derived neurotrophic factor produces striatal dopaminergic hypofunction in unlesioned adult rats and fails to attenuate the decline of striatal dopaminergic function following medial forebain bundle transection[J].Neuroscience,1993,53(3):639-650.
[8]Ungerstedt U,Arbuthnett G W.Quantitative recording of
rotational behavior in rats after62hydroxydopamine lesions of the nigrostriatal dopamine system[J].Brain Res,1970,24
(3):458-493.
[9]G ang YY,Zhang ZX.Progresses of pharmacological studies
of Tripterygium wilfordii H ook and its minomers[J].J
China Pharm Univ(中国药科大学学报),1995,26(4): 252-256.
[10]Y oudim M B,Riederer P.Understanding Parkins on’s disease
[J].Sci Am,1997,276(1):52-59.
[11]McG eer EG,McG eer P L.The role of the immune system in
neurodegenerative dis orders[J].Mov Disord,1997,12(6): 855-858.
[12]Chang RC,Huds on P,Wils on B,et al.In fluence of neurons
on lipopolysaccharide2stimulated production of nitric oxide and tum or necrosis factor2alpha by cultured glia[J].Brain Res.
2000,853(2):236-244.
[13]Revuelta M,Venero J I,Machado A,et al.Serotonin
hyperinnervation in the adult rat ventral mesencephalon following unilateral transection of the medial forebrain bundle.
C orrelaction with reactive microglia and astroglial populations
[J].Neuroscience,1999,91(2):567-577.
[14]M ogi M,T ogari A,T anaka K,et al.Increase in level of
tum or necrosis factor2αin62hydroxydopamine2lesioned striatum in rats suppressed by immunosuppressant FK506 [J].Neurosci Lett,2000,289(3):165-168.
PROTECTIVE EFFECT OF TRIPCH LOROLIDE ON
DOPAMINERGIC NEURONS IN PARTIALLY LESIONED
RAT MODE L OF PARKINSON’S DISEASE
CHENG Xiao2xin1,2,LI Feng2qiao1,HUANG Min2,WANG Xiao2min1,HAN Ji2sheng1
(1.Neuroscience Research Institute,Peking Univer sity,Beijing100083,China;
2.School o f Basic Medical Sciences,Dalian Medical Univer sity,Dalian116027,China)
ABSTRACT:AIM T o study whether the immunosuppressant tripchlorolide(T4)exerts neuroprotective effect on dopaminergic neurons.METH ODS A rat m odel of Parkinson’s disease(PD)was set up by transection of the medial forebrain bundle(MFB)with a wire knife.The rotational behavior,HP LC2ECD,tyrosine hydroxylase(TH) immunocytochemistry,E LISA methods were used to evaluate the influence on the dopaminergic neurons following T4 treatment.RESU LTS T4treatment was shown to effectively attenuate the rotational behavior challenged by amphetamine(215mg?kg-1,ip)in the PD rats.T4markedly prevented the decrease of dopamine content in the striatum and the loss of dopaminergic neurons in the substantia nigra pars compacta.T4was found to suppress the abnormal increase of T NF2αand I L22level in brain tissues of PD rats after MFB transection.CONCL USION The evidence that the immunosuppressive Chinese herb extract T4possesses neuroprotective activities on the dopaminergic neurons in PD rats was presented.The underlying mechanism of T4may be relevant to its immunosuppressive activity.
KEY WOR DS:tripchlorolide;Parkinson’s disease;dopamine;neuroprotection;immunosuppressant
雷公藤内酯醇抗生育作用有效性及安全性的研究
雷公藤内酯醇抗生育作用有效性和安全性的研究 研 究 生：徐 元 萍 指导老师：章汉旺 教授 中文摘要 目的：研究雷公藤内酯醇对雄性大鼠的抗生育作用，探讨其作用部位、有效性和毒副作用。 方法：选用健康雄性Wistar大鼠观察雷公藤内酯醇对其精子生成及对睾丸、附睾和心、肝、肾等内脏器官的影响，实验分两个阶段，第一阶段实验组给大鼠喂服雷公藤内酯醇0.05mg/kg·d，每周6d，连续8周, 用1%的二甲基亚砜DMSO 配制，对照组喂服1%二甲基亚砜DMSO，2ml/kg·d，第二阶段实验组给大鼠饲服雷公藤内酯醇0.1mg/kg·d，0.05mg/kg·d，0.03mg/kg·d，每周6d，连续4周，对照组喂服1%DMSO，每周称取体重，取材观察睾丸生精细胞凋亡情况，附睾精子活力及对心、肝、肾、睾丸的影响。 结果：实验组的精子活力明显下降，剂量≥0.05mg/kg·d的大鼠精子活力为0，睾丸切片中，高剂量组有不同程度睾丸生精细胞的损伤，其靶细胞主要为精子细胞和精母细胞，精原细胞未见损害，精子发育停滞，生精小管破坏。睾丸内曲细精管生精上皮有损伤，管腔内上皮有脱落，对照组大鼠形态学观察未见明显异常。应用流式细胞术检测睾丸生精细胞凋亡，实验组与对照组无显著差异，不同剂量的雷公藤内酯醇对实验组和对照组的体重影响并无显著差异。病理切片对照2组及雷公藤内酯醇低、中、高剂量组HE及PAS染色，形态学观察心、肾未见异常，对照2组及雷公藤内酯醇中、低剂量组HE染色，形态学观察肝未见异常，仅大剂量组可见肝细胞少量空泡变性。
结论：雷公藤内酯醇是一种有效的抗生育药，对组织器官的毒性小，且避孕作用是可逆性的，但长时间的使用可引起一定的睾丸及肝脏损伤，作为避孕药推广时尚需对它的成分作进一步的改进研究。 关键词 雷公藤内酯醇 生育力 避孕 大鼠
多巴胺译文
最后以如下的编辑形式发表： 《自然》2009年6月11日；论文编号：459（7248）:837 - 841。数字对象唯一标识符：10.1038/nature08028 多巴胺神经元如何代表积极和消极动机的事件？ 雅之松本和兴英彦坂 感觉运动研究实验室，美国国家眼科研究所，美国国家卫生研究所（位于马里兰州贝塞斯达的20892-4435号） 摘要 中脑多巴胺神经元被奖励或因对感官刺激产生兴奋的反应预测奖励所激发。这些兴奋反应的强度会随着奖励价值的增加而增加。这种反应特性导致一个假设，即多巴胺神经元编码与价值有关的信号并且受到厌恶事件的抑制。在这里，我们表明，这个假设只是对多巴胺神经元的一个子集成立。当猴子们被控制实施了用它们欲求的和厌恶的后果进行的巴甫洛夫程序实验（分别用液体奖励和将气体吹到脸上的方式）的时候，我们将多巴胺神经元的活动记录了下来。我们发现有些多巴胺神经元会对奖励预测刺激产生兴奋并且会被吹气预测刺激所抑制，就像价值假说预测的那样。然而，与该假设不一致的是，更加大量的多巴胺神经元会对两种刺激都产生兴奋。一些多巴胺神经元会对奖励和气体吹拂本身都产生兴奋，特别是当这些刺激是不可预测的时候。对吹气预测刺激产生兴奋的神经元位于黑质致密部更靠背部的地方，然而被刺激抑制的神经元位于更靠腹部中央的地方，一些是在腹侧被盖区。关于它们对于吹气本身反应的一个相似的解剖上的差异也被观察到了。这些研究表明不同类型的多巴胺神经元以不同的方式表达动机信号。
如果中脑多巴胺神经元确实编码与价值有关的信号，它们的活动应该受厌恶刺激的抑制，因为厌恶刺激产生负激励价值，然而，结果却不一致，一些研究显示它们的活动受厌恶刺激抑制，而另外一些研究则表明它们的活动既受厌恶刺激抑制又受其激发。这些研究当中几乎没有人检测在相同多巴胺神经元上的奖励所产生的影响，部分是因为实验时动物是被麻痹了的。 要测试多巴胺神经元是否编码激励价值，我们在两种不同的情况下对两只猴子实施了巴甫洛夫程序实验（图1a）：在其中一个实验中液体奖励是预期的（欲求块，图1a），在其中的另外一个实验中吹气是预期的（厌恶块，图1b）。在每块区域，三个条件刺激（CSs）与非条件刺激（USs，奖励或吹气）分别以100%，50%，0%的可能性与其相关。这三个条件刺激被认为是传递三个不同水平层次动机价值的。确实，在欲求块，预期的舔舐活动随着奖励概率的增多而增多（Fig.1c）。在厌恶块，预期的眨眼活动随着吹气的增多而增多（图1d）。 当猴子被施用巴甫洛夫程序的时候，我们记录了在黑质致密部和腹侧被盖区当中或周围的103个公认的多巴胺神经元（68个来自猴N,35个来自猴D）中单个神经元的活动。他们的电化学生理特性明显不同于黑质致密部和腹侧被盖区（补充图1）其他神经元，此后我们称它们为多巴胺神经元。 以往的研究大多将多巴胺神经元定性为在功能上是与同类同性质的。我们发现这是不正确的。图2a和e表明了两个多巴胺神经元分别对不同条件刺激的反应活动，它们的活动在欲求区相似（顶行）。他们都能被100%的奖励性条件刺激（与概率为100%的奖励相关的条件刺激）激起兴奋。这种兴奋在概率对应于50%的奖励性条件刺激的时候强度会下降，甚至在概率对应于0%的奖励性条件刺激的时候变为抑制。然而，多巴胺神经元在厌恶区（底行）表现出完全不同的的反
敲除α-突触核蛋白保护多巴胺能神经元
敲除α-突触核蛋白保护多巴胺能神经元 甲基苯丙胺诱导的帕金森病模型中多巴胺能神经元死亡的主要因素是α-突触核蛋白过表达。中国南方医科大学王慧君博士所在团队发现，立体定位注射α-syn-shRNA慢病毒抑制右侧纹状体α-syn mRNA和蛋白的表达后，帕金森病模型大鼠抑郁表现减弱，且纹状体中多巴胺水平和酪氨酸羟化酶及超氧化物歧化酶活性显著增加，而活性氧生成量、一氧化氮合酶活性、一氧化氮含量和丙二醛含量下降，同时纹状体中凋亡细胞的数量明显降低。作者认为，α-突触核蛋白具有通过抑制氧化应激和改善多巴胺能系统功能扭转甲基苯丙胺诱导的神经毒性的能力。相关文献发表于《中国神经再生研究（英文版）》杂志2014年5月第9期。 TUNEL染色结果显示，以立体定向注射α-syn-shRNA慢病毒敲除右侧纹状体中α-syn后，腹腔注射甲基苯丙胺建立帕金森病模型大鼠纹状体中凋亡细胞的数量显著降低 Article: " Protective effect of alpha-synuclein knockdown on methamphetamine-induced neurotoxicity in dopaminergic neurons," by Yunchun Tai1, Ling Chen1, Enping Huang1, Chao Liu1, 2, Xingyi Yang1, Pingming Qiu1, Huijun Wang1 (1 Department of Forensic Medicine, School of Basic Medical Sciences, Southern Medical University, Guangzhou, Guangdong Province, China; 2 Guangzhou Forensic Science Institute, Guangzhou, Guangdong Province, China) Tai YC, Chen L, Huang EP, Liu C, Yang XY, Qiu PM, Wang HJ. Protective effect of alpha-synuclein knockdown on methamphetamine-induced neurotoxicity in dopaminergic neurons. Neural Regen Res. 2014;9(9):951-958. 欲获更多资讯： Neural Regen Res
小鼠中脑多巴胺神经元发育的机制
成绩 中国农业大学 课程论文 （2011-2012学年秋季学期） 论文题目：小鼠中脑多巴胺神经元发育起源及命运决定 课程名称：发育生物学 任课教师：周波 班级：生化082 学号：0807090106 姓名：贾晓波
小鼠中脑多巴胺能神经元发育起源及命运 决定的分子机制 贾晓波 （生物学院生化082 0807090106） 摘要中脑多巴胺能神经元在哺乳动物中枢神经系统中有着极其重要的生理功能，其功能包括随意运动、认知、情感及奖赏等方面，多巴胺能神经元的特异性缺失将会造成巨大的损害，其中就包括帕金森症。一方面明确多巴胺能神经元的发育及起源的分子机制对于了解神经递质系统是一件重要的工作，另一方面，还可以为这些多巴胺能神经元缺失的疾病的治疗带来福音。 关键词胚胎发育；中脑；转录因子；命运决定 1中枢神经系统中的多巴胺能神经元 中枢神经系统递质表型的发育是大脑形成完整的、具有正常生理功能神经环路过程中的重要一环。中枢神经系统包括大量形态不同、类型各异的神经元，同时它们所产生和释放的神经递质也有所不同，在一定程度上决定了神经系统功能的多样性和复杂性，最终导致了神奇的神经系统功能。多巴胺（dopamine，DA）是儿茶酚胺类神经递质之一，它在哺乳动物中枢神经系统中有着极其重要的生理功能，包括运动的整合、神经内分泌激素释放的调节、认知、情感、奖赏、意识和记忆。特异性分泌多巴胺神经递质的神经元成为DA神经元。多巴胺能神经元主要源自中脑。 在小鼠的中脑，有3个DA神经元的核群：黑质（substantia nigra，SN）致密带（A9，有近10000个DA神经元）、腹侧被盖区（ventral tegmental area，VTA，A10，有近25000个DA神经元）和红核后区（retrorubral field ，RRF，A8）。其他的DA神经元群分布于视丘下部的中间未定带（medial zona incerta）（A13，有近900个DA神经元）等。位于黑质区的DA神经元发出的上行纤维投射至纹状体（尾核及壳核；中脑纹状体通路，mesostriatal pathway）释放DA，其退行性病变可造成纹状体内多巴胺释放量的减少，因而成为帕金森症（Parkinson’sdisease，PD）运动障碍产生的直接原因。腹侧被盖区内DA神经元集中投射至伏隔核的边缘叶（中脑边缘叶通路，mesolimbic pathway），它的过度活跃则与精
补益肝肾汤治疗帕金森病患者的效果及对其自主神经功能紊乱及睡眠
补益肝肾汤治疗帕金森病患者的效果及对其自主神经功能紊乱及睡眠障碍的影响评价 发表时间：2018-05-28T11:46:12.107Z 来源：《中国误诊学杂志》2018年第8期作者：李军 [导读] 帕金森病是一种自主神经退行性疾病，此病随着年龄的增加发病率逐渐升高，好发人群为60岁以上的老年人。 常德市第四人民医院神经内科 415001 摘要：目的分析补益肝肾汤治疗帕金森病患者的效果及对其自主神经功能紊乱及睡眠障碍的影响，评价补益肝肾汤的临床应用意义以供参考。方法选择110例于我院2015年3月-2017年3月进行治疗的帕金森病患者作为本次实验对象，随机将其分为两组各55例，对照组采取常规左旋多巴进行治疗，实验组联合补益肝肾汤治疗，比较治疗前后SPOCA-AUT（自主精神症状量表）以及睡眠质量等。结果经过治疗后实验组体温调节、排尿、性功能评分及总评分改善明显，且优于对照组（P<0.05），实验组患者睡眠质量改善程度优于对照组。结论对于帕金森症患者的治疗，采用左旋多巴+自拟补益肝肾汤进行治疗能够明显改善患者病情，疗效确切值得推广。 关键词：帕金森病；补益肝肾汤；自主神经功能紊乱；睡眠质量；临床疗效 帕金森病是一种自主神经退行性疾病，此病随着年龄的增加发病率逐渐升高，好发人群为60岁以上的老年人。患者的临床表现为肢体强直、动作迟缓、吐字不清、静止性震颤、步态改变、睡眠障碍、记忆力减退等，给患者的生活造成极大影响。为分析补益肝肾汤治疗帕金森病患者的效果及对其自主神经功能紊乱及睡眠障碍的影响，选取我院神经内科收治的110例帕金森患者进行研究，将本次研究结果详细做报告如下。 1.资料与方法 1.1一般资料 选择110例于我院2015年3月-2017年3月进行治疗的帕金森病患者作为本次实验对象进行研究，所有患者符合纳入标准和排除标准。对照组：年龄60～69岁，平均年龄为（63.47±2.06）岁；病程3个月～8.20年；平均时间为（3.90±0.35）年；疾病分级：2级15例，2.5级20例，3级12例，4级8例；其中男性患者27例，女性患者28例。实验组：年龄61～70岁，平均年龄为（63.85±2.10）岁；病程3个月～8.30年；平均时间为（3.86±0.31）年；疾病分级：2级16例，2.5级20例，3级12例，4级7例；其中男性患者26例，女性患者29例。将两组患者的一般资料（性别、年龄、病程、疾病分级等）进行统计学处理，结果P>0.05认为差异无意义，即认为组间具有良好的可比性，可进行对比研究。 1.2纳入标准和排除标准 纳入标准：（1）所有患者入院后确诊为帕金森病，符合中医老年震颤症诊断和疗效评定标准，患者临床表现为自主神经功能障碍（2）患者除帕金森病外无其他严重的神经系统疾病（3）自愿入组并签署同意书。排除标准：（1）患有严重的心、肾等功能障碍、自身免疫病、高血压、糖尿病等（2）妊娠期、哺乳期妇女（3）患有严重的精神障碍、智力障碍或拒绝入组等。 1.3治疗方法 对照组患者给予左旋多巴治疗：于饭后口服左旋多巴（上海福达制药有限公司生产，国药准字H31020888）初始剂量为1片/ 次/250mg，3次/d，根据患者个人情况逐日增加给药剂量。实验组患者给予自拟补益肝肾汤+左旋多巴进行治疗：川芎、当归、黄芪、天麻、芍药、白术、威灵仙各10g+生地黄、熟地黄各20g+防风、荆芥各6g+全蝎3g+2000ml水煎至400ml，患者分两次早晚服用，左旋多巴用法用量对照组完全相同。 1.4评价指标 连续治疗半年，记录两组患者治疗前后SPOCA-AUT（自主精神症状量表）、睡眠质量情况。 1.5数据处理 以下所有研究数据均采用SPSS17.0软件进行处理，计数资料以t检验，计量资料以X2检验，若p＜0.05认为差异有意义。 2.结果 2.1 SPOCA-AUT，具体数据详见表1。 经过治疗后两组患者睡眠质量均有一定的改善，实验组患者睡眠质量改善效果更明显（P<0.05）。 3.讨论 帕金森症近年来发病率逐渐升高，目前临床上对此病的发病机制尚在研究中，认为此疾病的发生发展可能与环境因素、遗传因素、年龄因素等有一定的关系[1]。帕金森病患者由于脑神经元的坏死等使神经系统发生退行性改变，从而使患者出现一系列临床症状，如智力减退、运动迟缓和肌肉僵直等，临床上常规采用左旋多巴等药物进行治疗，但治疗效果并不理想[2]。有研究显示多数帕金森症患者均存在肝肾亏损情况，认为此疾病与肝肾功能失调有一定的关系[3]。自拟补益肝肾汤是由川芎、当归、黄芪、天麻、芍药、白术、威灵仙、生地
雷公藤内酯醇人工抗原的合成及多克隆抗体的制备
雷公藤内酯醇人工抗原的合成及多克隆抗体的制备刘晓1?，唐波1?，姚其正2，郑伟娟1*，华子春1* 1南京大学医药生物技术国家重点实验室，南京(210093) 2中国药科大学药学院，南京(210009) E-mail: zchua@https://www.wendangku.net/doc/5a14203983.html, 摘要: 用碳二亚胺（EDC）法将14位羟基修饰的雷公藤内酯醇（Triptolide 14-succinate）和不同的蛋白载体（cBSA，OVA）偶联合成雷公藤内酯醇的人工免疫抗原和检测抗原，紫外光谱鉴定了偶联效果，计算了偶联率。利用免疫抗原免疫小鼠，制备了小鼠多克隆抗体，用检测抗原分析了血清抗体效价，利用抗原竞争ELISA分析了抗体特异性，为进一步研究雷公藤内酯醇的分子作用机理以及制备雷公藤内酯醇的单克隆抗体奠定了基础。 关键字: 雷公藤内酯醇，14位羟基修饰，人工抗原，多克隆抗体 1. 引言 雷公藤内酯醇（Triptolide,简称TP）,分子式C20H24O6，分子结构如图1，分子量360.41，二萜类三环氧内酯化合物，是从植物雷公藤（Tripterygium Wilfordii Hook.f.）中提取的有效成分里活性最强的部分，具有消炎散结、清热解毒、抗菌、免疫抑制以及抗生育等功效。长期以来，作为临床上公认的免疫抑制剂主要用于各种自身免疫性疾病，如类风湿性关节炎以及器官移植排斥反应的治疗。近年来研究发现，该药对多种肿瘤细胞有诱导凋亡的作用，与化疗药物联合应用能协同杀伤肿瘤细胞或逆转肿瘤耐药，说明它具有抗肿瘤效果，因此在肿瘤治疗方面的应用也日益受到人们的关注。除此以外，它还对细胞发育增殖、细胞周期等有调控作用。近年来，国内外对雷公藤内酯醇具有如此广泛的作用的分子机理产生了越来越浓厚的兴趣，从多个不同的角度进行了研究。但是，由于缺少方便快捷的雷公藤内酯醇检测手段，长期以来对雷公藤内酯醇直接作用位点的研究一直十分困难，对雷公藤内酯醇作用的靶蛋白和作用途径知之甚少。细胞免疫化学是追踪分子在细胞内的作用过程的有力工具，如果能够得到雷公藤内酯醇的抗体，就为利用细胞免疫化学研究雷公藤内酯醇的作用靶点和在细胞内的定位等创造了分子探针，为最终研究雷公藤内酯醇作用机制和寻找其靶蛋白创造了可能。作为小分子半抗原，雷公藤内酯醇需要和大分子蛋白载体偶联才能成为能够诱导产生抗体的免疫原，为了不影响小分子的生物活性，提高偶联效率，我们需要选择合适的反应基团。已有的雷公藤内酯醇结构-活性研究显示雷公藤内酯醇的不同生物效应依赖于不同的功能基团。研究证实，对于12，13位环氧进行开环反应所获得的稳定的衍生物（雷公藤内酯三醇）会丧失免疫抑制和抗炎的生物活性。14位羟基是雷公藤内酯醇最容易被改造修饰的基团，研究表明，14位羟基被改造为水溶性的基团作为前药能极大改善小分子的水溶性，促进体内代谢，降低毒性，甚至能改善雷公藤内酯醇在体内的免疫抑制活性和抗肿瘤活性[1] [2]。 综合考虑，雷公藤内酯醇的14位羟基是最合适的偶联基团。TP的水溶性不理想，且14位羟基不容易在温和条件下和蛋白载体反应，我们首先对14位羟基进行结构修饰，改造为水溶性的羧基，利用缩合反应偶联改造的牛血清白蛋白（cBSA，氨基化修饰的BSA）和鸡卵清蛋白（OVA），合成TP的免疫抗原TP-cBSA和检测抗原TP-OVA。用免疫抗原免疫小鼠，顺利得到了雷公藤内酯醇的多抗。 本课题得到基金项目：国家自然科学基金（批准号：30425009,30730030）、江苏省自然科学基金（批准号：BK2007715）资助。 ?对本文同等贡献；*共同通讯作者。
多巴胺的功能和结构
多巴胺的结构和功能 一、多巴胺的简介 多巴胺（dopamine，DA，或3-羟酪胺，3、4-二羟苯乙胺）又名儿茶酚乙胺或羟酪胺，是儿茶酚胺类的一种，分子式为C8H11 N O2（化学式和空间结构如图1）。是内源性含氮有机化合物，为酪氨酸在代谢过程中经二羟苯丙氨酸所产生的中间产物[1]。 图1 多巴胺的化学式和空间结构 多巴胺是去甲肾上腺素的前体，多巴胺能神经末梢中的囊泡与去甲肾上腺素囊泡不同点在于它不含多巴胺β-羟化酶，所以不会将多巴胺羟化成去甲肾上腺素，可以行使储存多巴胺的功能。脑内多巴胺的代谢产物主要是3-甲氧基-4-羟基苯乙酸(HVA)[2]。 多巴胺神经元在脑内分布相对集中，支配范围较局限。多巴胺能神经纤维主要投射于黑质-纹状体,中脑边缘系统和结节-漏斗部位。黑质纹状体部位的多巴胺能神经元位于中脑黑质，其神经纤维投射到纹状体,在纹状体储存。当黑质被破坏或黑质-纹状体束被切断，纹状体中多巴胺的含量随即降低；中脑边缘系统的多巴胺能神经元位于中脑脚间核头端的背侧部位，其神经纤维投射到前脑边缘;结节-漏斗部位的多巴胺能神经元位于下丘脑弓状核，其神经纤维投射到正中隆起[2]。在大脑中合成、分泌多巴胺递质的多巴胺能神经元主要集中位于中脑组织黑质致密部、腹侧被盖区和红核后区。 二、多巴胺的功能 多巴胺是儿茶酚胺类神经递质，可以与脑内广泛表达的多巴胺能受体结合，在中枢神经系统中有着极其重要的作用，多巴胺神经元可调节和控制许多重要的行为过程，其中包括运动、认知、奖赏、情感、学习记忆和神经内分泌的调节等。其中阿尔维德·卡尔森（Arvid Carlsson）确定多巴胺为脑内信息传递者的角色，使他获得了2000年诺贝尔医学奖。 1.运动——帕金森病 多巴胺对运动控制起重要作用，多巴胺拮抗剂和激动剂应用的研究表明了多巴胺受体在运动控制中的重要作用如：大鼠的前进，后退，僵直，吸气和理毛功能。通常激动剂提高多巴胺的运动功能，拮抗剂作用相反。已明确了在决定向前运动中的D1和D2受体有相互促进作用[1]。 帕金森病是最常见的运动系统神经退行性病变，黑质多巴胺神经元的大量丢失是产生帕金森病的原因之一，其中黑质区靠近腹侧部的多巴胺神经元丢失程度最为严重[3]。在
雷公藤内酯醇改善IMQ诱导的银屑病样小鼠模型症状的初步
勘误 DOI:10.13232/https://www.wendangku.net/doc/5a14203983.html,ki.jnju.2018.05.015 雷公藤内酯醇改善IMQ诱导的银屑病样小鼠模型症状的初步探究 南京大学学报，2018, 54(5), 992-1000 The symptomatic improvement of IMQ-induced psoriasiform mouse model after the treatment with triptolide Journal of Nanjing University, 2018, 54(5), 992-1000 图5 Triptolide抑制TNF-α和IL-17A的表达 A: IHC染色检测TNF- α和IL-17A表达水平（200X）。B: RT-PCR检测TNF- α的表达水平。C: RT-PCR检测IL-17A的表达水平( ***P < 0.001, **P < 0.01, *P < 0.05,mean ± SEM; n = 5) Fig.5 Triptolide inhibit the expression level of TNF- α and IL-17A A: IHC stain detect the expression level of TNF- α and IL-17A(200X). B: RT-PCR detect the mRNA expression level of TNF-α. C: RT-PCR detect the mRNA expression level of IL-17A ( ***P < 0.001, **P < 0.01, *P < 0.05,mean ± SEM; n = 5)
帕金森病的最新国内外研究进展
应羞笠螳垒盎痘数量堑国内窆Ｅ盈窒迸基筮！塑 帕金森病的最新国内外研究进展 卢芳刘树民杨婷婷（黑龙江中医药大学中医药研究院，黑龙江哈尔滨１５００４０） ［关键词】发病机制；临床治疗；帕金森病 ［中图分类号】Ｒ７４２．５［文献标识码）Ａ［文章编号］１００５－９２０２（２００９）０９?１１７１．，０４ 帕金森病（ＰＤ）是一种以黑质纹状体通路的退变为主要特 征的神经系统变性疾病。其基本病理特征是黑质致密区多巴 胺（ＤＡ）神经元变性伴胞浆内嗜酸性包涵体即Ｌｅｗｙ小体形成， 导致黑质纹状体通路破坏及尾状核、壳核中ＤＡ含量减少。该 病典型临床症状为静止震颤、肌肉僵直、运动迟缓和姿势反射 受损。ＰＤ病情呈进行性加重，严重限制病人的活动能力及影 响病人的生活质量，如果不进行积极有效的治疗，病人生存期 明显缩短，晚期因长期卧床而死于肺炎和尿路感染等并发症。 目前ＰＤ的发病机制尚未明确，已有研究表明与遗传、环境因 素、感染、衰老、氧化应激、过多的自由基形成及神经生长因子 缺乏等有关，是多种机制协同作用的结果…。ＰＤ至今仍无有 效的治疗措施。 １ＰＤ的发病机制 １．１ＤＡ、乙酰胆碱（ＡＣｈ）等神经递质失衡学说ＤＡ为纹状 体内的抑制性递质，ＡＣｈ为兴奋性递质，正常时两者处于动态 平衡状态。患ＰＤ时，黑质的ＤＡ神经元变性、脱落及黑质－纹状 体系统神经通路的神经纤维变性，导致ＤＡ显著减少，而ＡＣｈ 含量却无明显变化，ＤＡ的抑制作用降低，ＡＣｈ的兴奋作用相对 增强，两者动态平衡受到破坏，从而出现ＰＤ的症状Ｂ’。 １．２线粒体功能障碍ＰＤ患者普遍存在着线粒体复合物Ｉ 活性下降，活性氧（ＲＯＳ）生成增加。线粒体上的质子泵功能下 降，膜电压降低和渗透性通道开放，从而触发凋亡过程。线粒 体复合物Ｉ缺失可导致氧化应激和增加神经元对兴奋性毒性 死亡的易感性ｐｏ。 １．３氧化应激与脑内其他部位相比，黑质致密部暴露于较 高水平的氧化应激状态，原冈有：①ＤＡ的代谢过程中产生大量 的自由基；②ＤＡ自身氧化形成的神经黑色索中含大量的铁离 子，这种还原型铁离子可与ＤＡ代谢中产生的过氧化氢反应生 成高度毒性的羟自由基，进而导致脂质过氧化，黑质神经元凋 亡。正常情况下，ＤＡ毒性产生的过氧化氧被还原璎谷胱甘肽 清除，故不会造成危害。但在ＰＤ病人残存的ＤＡ神经元中，可 基金项目：教育部２００６年度“春晖计划”科研合作项目；黑龙江省杰出 青年科学基金项目（ＪＣ２００７０５）；黑龙江省教育厅海外学人科 研资助项目（１１５３ｈ１８） 通讯作者：刘树民（１９６３．），男，博士，教授．博士生导师，主要从事中药 临床药效物质基础研究及中药药性理论研究。 第一作者：卢芳（１９７９一），女，博士，主要从事中药临床药效物质基础 研究及中药药性理论研究。?１１７ｌ? 能因代偿作用，使得ＤＡ的毒性加速，或单胺氧化酶（ＭＡＯ）一Ｂ （降解ＤＡ生成Ｈ：０２）活性增高，或还原型谷胱甘肽缺乏，导致 Ｈ：０：不能有效清除，并与还原型铁离子通过Ｆｅｎｔｏｎ反应，生成 高度毒性的羟自由基。 氧化应激与线粒体功能障碍互为因果，恶性循环。氧化应 激产生的大量自由基可损伤线粒体复合物Ｉ。另一方面，线粒 体复合物Ｉ的抑制导致更多自由基的生成。这构成了目前ＰＤ 发病机制中最为多数学者认同的学说。 １．４谷氨酸的毒性作用在ＰＤ中，谷氨酸的神经毒性作用 机制如下：①亲离子型谷氨酸受体中的Ｎ?甲基一Ｄ一天冬氨酸 （ＮＭＤＡ）型受体受谷氨酸激活后，导致大量的细胞外ｃａ＋内 流，胞内Ｃａ＋大量增加，激活Ｃａ＋依赖性蛋白酶，导致神经元坏 死和／或凋亡。②谷氨酸可激发线粒体自由基的生成，引起线 粒体功能障碍，这种毒性作用与ＮＭＤＡ受体无关。谷氨酸的神 经毒性作用与ＰＤ发生之间的关系渐被重视。目前应用ＮＭＤＡ 受体拮抗剂和谷氨酸释放抑制剂治疗ＰＤ也是ＰＤ研究的热点 之一［”。 １．５免疫炎性机制已有多项研究认为免疫炎性机制可能参 与了ＰＤ神经变性的发病过程。临床发现ＰＤ患者血液和脑脊 液中淋巴细胞数目增多，其脑脊液可引起体外培养的ＤＡ能神 经元的死亡，同时患者体内免疫球蛋白复合物、细鲺因子和Ｃ一 反应蛋白等多项指标发生改变。因此，目前免疫炎症机制已成 为ＰＤ发病机制研究的又一热点…。 １．６细胞凋亡学说神经递质、自由基、化学毒物、营养缺乏、 物理性损害等都能诱发细胞凋亡。导致ＰＤ患者黑质细胞凋亡 的可能原因：①线粒体功能缺陷与氧化应激；②细胞色素Ｃ：细 胞色素ｃ在细胞凋亡的启动中作为凋亡起始因子，起着重要作 用；③凋亡诱导因子：它是一种５７ｋＤ的双功能黄索蛋白，除具 有电子供体／受体功能外，还可独立作用于核染色质，具有促凋 亡作用。④金属离子：研究显示中脑黑质含色素的神经元具有 蓄积金属元素的特性，此部位多种金属元素的蓄积已被证实有 促黑质细胞凋亡的作用，有锰离子、ｃａ“、铁离子、镁离子等。 （ＤＣａｓｐａｓｅ：它是一种天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶，已经证 实Ｃａｓｐａｓｅ的激活都发生在细胞凋亡之前，属于凋亡起始因子。 被活化的Ｃａｓｐａｓｅ蛋白酶激活后通过级联反应激活下游的 Ｃａｓｐａｓｅ效应分子，最后水解一系列底物，造成ＤＮＡ降解，进入 细胞凋亡的最终通路。⑥受细胞内多种基因调节物影响．主要 是ｂｃｌ－２家族（Ｃ—ｍｙｅ，Ｃ—ｌｏｓ，Ｃ－ｊｕｎ，ＩＣＥ，ｐ５３，Ｆａｓ等）ｔ５，６］。 １．７转运体失调学说转运体失调学说能解释ＤＡ能神经元 选择性缺失的机制。对ＤＡ毒性作用机制的研究以及能产生万方数据
补益肝肾方对治疗帕金森病自主神经功能障碍的临床观察
补益肝肾方对治疗帕金森病自主神经功能障碍的临床观察 目的本次实验课题主要探讨补益肝肾方治疗帕金森病患者自主神经功能障碍的临床效果。方法本次研究范围限定在我院2015年1月～2017年3月收治的108例帕金森病自主神经功能障碍患者，随机分为观察组和对照组，对照组患者采用多巴制剂进行治疗，观察组在对照组的基础上采用补益肝肾方进行治疗，对两组患者治疗前、治疗3个月、6个月的帕金森病自主神经症状量表（SPOCA-AUT）、统一帕金森病评分量表（UPDRS）评分情况进行对比分析。结果观察组患者治疗后SPOCA-AUT各评分优于对照组（P＜0.05）；观察组患者治疗后UPDRS各评分优于对照组（P＜0.05）。结论对帕金森病自主神经功能障碍患者在西医治疗的基础上采用补益肝肾方进行治疗能够有效调节精神系统功能紊乱，值得 推广。 标签：补益肝肾方；帕金森病；自主神经功能障碍 本次择取我院108例帕金森病自主神经功能障碍患者进行研究，现报告如下。 1 资料与方法 1.1 一般资料 本次研究范围限定在我院2015年1月～2017年3月收治的108例帕金森病自主神经功能障碍患者，按照随机数字的分组方式分为观察组和对照组各54例。男65例，女43例，年龄54～79岁，平均年龄（66.2±6.96）岁，平均病程（4.2±1.56）年。两组患者一般资料差异无统计学意义（P>0.05）。 1.2 方法 对照组：给予患者多巴制剂进行治疗，初次使用的剂量为250 mg/次，一日三次，在饭后进行服用，观察患者使用药物后的耐受情况，根据患者的实际情况能够适当的增加用药剂量在125～750 mg之间，患者最大使用剂量为2 g/次，一日不能超过6 g。 观察组：给予患者多巴制剂+补益肝肾方进行治疗，补益肝肾方配方为：当归10 g、川芎10 g、芍药10 g、黄芪10 g、防风6 g、全蝎3 g、熟地黄20 g、生地黄20 g、天麻10 g、白术10 g、秦艽10 g、肉苁蓉10 g、威灵仙10 g、荆芥6 g；结合500 mL水进行水煎，一天一剂，一日服用两次。全部患者均治疗6个月。 1.3 观察指标
多巴胺
多巴胺的生理作用及其应用 乔博 胡剑青 张一弛 张文涛 关键词 多巴胺 突触传递 中枢神经系统递质 受体 帕金森病 摘要 多巴胺（DA）是一种中枢神经递质，由多巴胺能神经元合成并储存在囊泡中，可能是通过胞裂外排的方式由神经元释放。多巴胺作用于多巴胺受体，通过一系列反应，改变细胞膜对离子的通透性，从而产生生理作用。 多巴胺有调节躯体活动、精神活动、内分泌和心血管活动的作用。多巴胺能神经元的病变可导致多种疾病，如帕金森病，精神分裂症等。 1． 概述 多巴胺（DA）按系统命名法，名为邻苯二酚乙胺，属于儿茶酚胺类物质。其盐酸盐为白色、有光泽结晶。熔点243—249℃（分解）。无臭。味微苦。置于空气中及遇光时颜色渐变深。易溶于水。 在五十年代以前，多巴胺一直被认为是合成去甲肾上腺素的前体。瑞典哥德堡大学教授阿维德·卡尔森（Arvid Carlsson）在五十年代进行了一系列开拓性的研究，证实了多巴胺是脑内的一种重要的神经递质，并且还和帕金森病之间存在着密切的关系。此后，科学家们进行了大量关于多巴胺的研究，人们对多巴胺这个神奇的小分子在大脑内的作用的认识也不断加深。卡尔森也因为他的研究成果，获得了2000年的诺贝尔生理或医学奖。 2． 多巴胺作为神经递质 2.1 解释几个名词 黑质：在中脑被盖与大脑脚底之间有一大的灰质团块是黑质，见于中脑全长。黑质细胞富含黑色素，是脑内合成多巴胺的主要核团。黑质主要与端脑的新纹状体(尾状核和壳核)有往返纤维联系。在正常生理状态下，黑质是调节运动的重要中枢。 纹状体：是基底神经节的主要组成部分，是由尾状核及豆状核组成。豆状核又分为内侧的苍白球和外侧的壳核。纹状体分为新纹状体和旧纹状体两部分。 新纹状体：在发生学上比较年轻，包括尾状核及壳核，它们起源于端脑。在这两个神经细胞团中，含有大量的小细胞和较少的大细胞。小细胞接受来自大脑皮层各部以及来自丘脑的神经，因此，新纹状体直接受到大脑皮层的影响，而且还间接地受到通过丘脑传来的小脑以及其它锥体
多巴胺(dopamine
多巴胺 多巴胺（dopamine, DA）是神经系统中另一类重要的儿茶酚胺类神经递质，其含量至少占整个中枢神经系统儿茶酚胺含量的50%。 多巴胺一度被认为仅是去甲肾上腺素生物合成过程中的中间产物。1958年，瑞典药理学家Carlson首先报道纹状体内多巴胺含量极高，约占全脑多巴胺含量的70%，且和去甲肾上腺素的分布并不一致。这使人们提出设想，多巴胺可能是脑内独立存在的神经递质。60年代，人们证实帕金森病是黑质致密区多巴胺能神经元变性所致，用多巴胺的前体左旋多巴(L-DOPA)可获较好疗效，这对多巴胺的研究起了极大的推动作用。70年代中，应用放射受体结合分析方法证实体内存在着多巴胺受体，某些化合物能与其结合而产生生理效应。进入80年代后，大量实验深入分析了DA受体的亚型及其与多种生理功能和疾病的关系。80年代末至90年代初，随着分子生物学技术的发展，DA受体的不同类型得以克隆，其结构也被阐明。 第一节 多巴胺能神经元的分布及纤维联系 一、多巴胺能神经元的主要分布 采用荧光组织化学、免疫细胞和组织化学方法可以显示出多巴胺能神经元在中枢神经系统中的分布。Falck-Hillarp（1962）发现，神经元内的单胺类物质可与甲醛蒸汽反应，聚合成为异喹啉（isoquinoline）类化合物，该化合物在荧光显微镜下可发射出波长不同的荧光，神经元内的儿茶酚胺可转变成绿色荧光物，5-羟色胺可转变成黄色荧光物。运用这一方法，中枢多巴胺能神经元的胞体分布被成功定位。到目前为止，已知脑内有10个多巴胺细胞群，继去甲肾上腺素的A1 ~ A7细胞群之后，被命名为A8 ~ A17，其中A8 ~ A10细胞群分布于中脑，A11 ~ A14细胞群在丘脑，A15、A16位于端脑，A17在视网膜内（表1）。A8 ~ A10细胞群集中了约70%的DA能神经元。 表1 脑内多巴胺能神经元胞体的定位 A8 位于红核后方的网状结构内，内侧丘系外侧部的背侧 A9 位于中脑大脑脚的背内侧黑质复合体，大部分位于致密部，少部分位于网状部
帕金森病的神经保护治疗研究现况
帕金森病的神经保护治疗研究现况 帕金森病是常见的神经系统变性疾病之一，多认为是一种老年性病变，纹状体多巴胺（dopamine，DA）神经递质水平下降是产生PD运动症状的主要因素。目前药物治疗是首选且是主要的手段，手术治疗则是有效补充手段。现就将帕金森病神经保护治疗研究现在和进展做一简要回顾。 标签：帕金森病；神经保护；药物；治疗 中国帕金森病治疗指南的药物治疗部分提出：原则上PD一旦被诊断就应及早予以保护性治疗，保护性治疗的目的是延缓疾病的发展，改善患者的症状。对于帕金森病的神经保护治疗，应该是指那些通过影响病因及发病机制中的某些中间环节进行干预而带来长期益处的措施，或指能推迟疾病发病或发展为目的的治疗方法。目前为止已进行的和筛出的药物：单胺氧化酶B抑制剂司来吉兰和雷沙吉兰、神经营养因子、多种DR激动剂（普拉克索）、胶质细胞系源性神经营养因子、辅酶Q10和维生素E以及各种中药。 单胺氧化酶B抑制剂 单胺氧化酶B抑制剂（MAO-B）是脑基底神经节主要的MAO亚型，多在胶质细胞内表达，主要参与多巴胺的降解。在基础研究中表明，B型单胺氧化酶能够氧化1-甲基-4-苯基-1，2，3，6-四氢吡啶（MPTP）生成MPP+，MPP+是一种能够抑制线粒体功能并导致多巴胺能神经元退化凋亡的神经毒素。B型单胺氧化酶抑制剂能够保护由MPTP诱导的多巴胺能神经元的损伤。MAO-B抑制剂司来吉兰可阻止MPTP诱发的猴或小鼠PD综合征。 司来吉兰和维生素E治疗PD试验（DATATOP）是第一个进行关于神经保护性治疗的临床试验研究。在DATATOP研究结果表明：司来吉兰可延缓运动功能障碍的发展、改善运动症状，使早期PD患者应用左旋多巴治疗运动功能障碍的起始时间可能推迟约9个月，提示其可能具有潜在神经保护作用。然而，司来吉兰对早期PD病人有微弱的短期症状改善作用，该研究中没有设置口服用药前洗脱期，因此难以判断是神经保护效应还是本身症状改善效应。即使设置了洗脱期，由于对洗脱期时间窗的设定还不好确定，同样会影响观察是症状改善效应还是神经保护作用。由于临床实验设计和实验结果存在不少问题，因此不好确定司立吉林是否对PD患者具有神经保护作用。但是目前临床上作为保护性治疗的药物主要是单胺氧化酶抑制剂，尽管对这些临床研究的结果尚需进一步证实。 自由基清除剂（维生素E，辅酶Q10，姜黄素） 维生素E是天然自由基清除剂，有抗氧化作用，PD早期尤其是未经治疗患者用维生素E和司来吉兰可能减缓黑质细胞变性、延缓疾病进展。而DATATOP 研究结果提示：补充维生素E不能推迟PD病人帕金森病相关症状的出现，提示维生素E可能并无神经保护作用。
6类治疗帕金森病的药物
6类治疗帕金森病的药物 帕金森是一种突发的缓慢进展的中枢神经系统变性疾 病其特征是动作的缓慢与缺失肌肉僵直静止性震颤和姿势 不稳。治疗帕金森病的药物有以下几类：1、抗胆碱能药物：此类药物有抑制乙酰胆碱的活力，相应提高脑内多巴胺的效应和调整纹体内的递质平衡。适用于早期轻症患者和作为左旋多巴的辅助药物。常用药物有：安坦2～4mg，2～3次/d；开马君2.5～5mg，3/d。具有明显的中枢性不良反应，包括记忆障碍、精神错乱、幻觉、镇静、焦虑、口干、眼花、恶心等付作用，有青光眼者禁用。湖州市第三人民医院神经内科杨君祥2、多巴胺替代疗法：此类药物以直接补充脑内多巴胺的不足，是目前所有抗帕金森药中疗效挺好且耐受良好的治疗药物。有左旋多巴和脑外多巴脱羧酶抑制剂：苄丝肼和卡比多巴。美多巴和息宁是目前最常用的合剂，前者为左旋多巴与苄丝肼合剂，起效快，效果强，持续时间短；息宁为左旋多巴与卡比多巴合剂，效果较美多巴弱，但作用时间长。3、多巴胺能受体激动剂：此类药物直接作用于纹状体上的多巴胺受体而起到治疗作用，可与左旋多巴合用或在左旋多巴失效时应用，它能够推迟左旋多巴的应用和可能存在的神经保护作用，现多倾向用于早期病人的治疗，尤其是对40岁以前发病的年轻患者。有溴隐亭、协良行、泰舒达、普
拉克索（森福罗）、罗匹尼罗、卡麦角林、罗替戈汀等。4、儿茶酚-氧位-甲基转移酶抑制剂（COMT）：儿茶酚胺氧位甲基转移酶是一种在人体内广泛存在的酶,在脑内与单胺氧化 酶一起共同作用，将多巴胺分解代谢，如果抑制了该酶的活性，就可以减少左旋多巴和多巴胺在体内的降解，使左旋多巴更多地进入脑内转化为多巴胺，同时也延长多巴胺在脑内的时间。有托卡朋（答是美）、恩托卡朋（珂丹）等。5、神经保护剂：维生素E和辅酶Q10等。6、金刚烷胺。能加强突触前合成和释放多巴胺，减少多巴胺的重吸收，尚有抗胆碱能作用。可与抗胆碱能药或左旋多巴合用。如有健康疑问，可到全球医院网公众号（webQQYY）咨询。（责任编辑：金忠）
帕金森药物治疗
帕金森病的药物治疗 药物治疗 左旋多巴是多巴胺的代谢前体，可以通过血脑屏障，进入基底节后经脱羧而成多巴胺，起着补充多巴胺神经递质缺乏的作用。虽然震颤也常有减轻，但动作过缓与僵直的改善最为显著。症状较轻的病人可以恢复接近正常的活动，而卧床不起的病人可以下地行动。与周围脱羧酶抑制剂卡比多巴合用，可降低左旋多巴需用的剂量，因为后者的降解代谢被阻滞，减少不良反应（恶心，心悸，面部潮红），使更多的左旋多巴能有效地进入脑部。息宁有不同的卡比多巴/左旋多巴固定比例的剂型： 10/100,25/100,25/250，还有一种缓释片50/200mg剂型。 治疗开始时先用息宁（25/100mg）片，每日3次，每次1片。根据病人的耐受情况，每隔4-7天逐步增加剂量，直至产生最大的效果。缓慢而小心地增加剂量，令病人在进餐时或饭后服药，可使不良反应减轻（虽然饮食中大量的蛋白质可妨碍左旋多巴的吸收）。大多数病人需要每天总量400-1000mg的左旋多巴，每2-5小时分次服药，每天至少需要100mg的卡比多巴来减轻周围的不良反应。有的病人可能需要每天总量2000mg的左旋多巴与200mg卡比多巴。 应用左旋多巴治疗时，常使剂量受到限制的不良反应是不自主动作（动作困难），表现为口-面或肢体的舞蹈动作或肌张力障碍。随着治疗时间的延长，这些动作困难出现的阈值也相应降低，即在应用较低剂量时也会出现。在某些病例中，药物只有在产生某种程度的动作困难情况下才能使帕金森综合征的症状有所减轻。在应用左旋多巴治疗2-5年后，半数以上的病例开始体验到药效的波动性（开-关效应）。每次服药后症状改善持续的时间愈来愈短，附加出现的动作困难的多动现象，使病人经常在严重的动作缺失与无法控制的多动状态之间来回摆动。对这种开-关现象的传统处理方法是尽可能降低每次的用药剂量，并缩短给药的间隔时间，甚至每1-2 小时给药一次。多巴胺受体激动剂，息宁缓释片或司立吉林（见下文）可作为有用的辅助治疗。左旋多巴其他的不良反应包括直立性低血压，幻觉，恶梦以及偶见的中毒性谵妄。幻觉和谵妄最常见于年老且有痴呆的病例。 某些权威人士相信早期应用左旋多巴治疗会加速一些问题（如动作困难，开-关现象）的出现，因此主张尽可能延迟左旋多巴的使用，先依靠抗胆碱能药物与金刚烷胺。另一些专家则认为动作困难与开-关现象等都是疾病病程进展的组成部分。 金刚烷胺100-300mg/d口服，在50%早期轻度帕金森综合征病例的治疗中有用，在疾病的后期能加强左旋多巴的作用。它的作用机制不肯定；它
帕金森氏病治疗药物临床试验中的一些特殊问题
帕金森氏病治疗药物临床试验中的一些特殊问题――EMEA帕金森氏病治疗药物临床研究指导原则简介 摘要： 本指导原则于 1998年6月发布，主要就临床试验需要遵循的一般原则之外，帕金森氏病治疗药物临床试验的一些特殊点进行了讨论，强调应根据药物的作用特点和目标适应症的不同，对试验的入选人群、试验设计策略、有效性评价指标以及安全性评价的主要关注点进行调整。 关键词： xx病临床试验 1.临床研究的设计 xx病的临床研究受以下因素的困扰： 疾病的长病程和疾病的缓慢进展过程，疾病的变异性，症状和体征的种族差异，药物和其它合并治疗的时间所导致的一天中症状严重程度的循环变化，以及错误诊断、共患病和合并治疗等。 帕金森氏病临床试验的设计决定于研究的目的，新药物是否作为左旋多巴的联合治疗，以及纳入的病人是早期病人还是进展期病人。 要区别以下研究目标： (1)在左旋多巴治疗之前，缓解早期病人的症状。 (2)缓解已经用左旋多巴治疗的病人的症状，这又可以分为以下亚组情况： 用xx不能有效控制运动症状的病人。 用左旋多巴治疗的病人出现剂量依赖的运动波动。 用左旋多巴治疗的病人出现非剂量依赖的运动波动。
(3)以减缓疾病进展为目标的治疗,分为以下两种情况： 治疗目标为延缓非剂量相关的运动波动。 神经保护治疗。 1.1在左旋多巴治疗之前，缓解早期病人的症状。 通过治疗延长生命、减缓帕金森氏病的进展、以及减缓发生耐受性的可能性，以此为治疗目标的临床研究，在早期病人仅进行3个月时间的研究太短了。推荐进行至少6个月（不包括剂量滴定期）的双盲、安慰剂对照临床试验，以建立有效性，同时，安全性也得以保证。 主要的有效性指标应该是核心症状的改善，例如运动症状。随机、双盲、安慰剂对照的二支或三支临床试验优于没有安慰剂的二支的比较研究。一般而言，运动症状是高度变异的和波动的，帕金森氏病的运动症状也不例外。症状轻微的早期病人尤其是这样。在早期帕金森氏病的临床试验中，使用安慰剂组可以区分真正的治疗效果和症状波动。在疾病早期症状轻、疾病进展缓慢，使用安慰剂不成为伦理问题。 在早期帕金森氏病，为了证明试验药物和已知标准治疗之间有相似的或者更好的利益/风险比，应进行阳性药物对照临床试验。 1.2缓解已使用左旋多巴治疗的帕金森氏病人的症状 在进展期帕金森病人中进行的临床试验药物，应该与左旋多巴联合应用。这些病人尽管在使用左旋多巴治疗，仍可能运动症状控制不好，或者存在剂量依赖或非剂量依赖的运动波动。 1.2.1使用左旋多巴不能有效控制运动症状的病人 使用左旋多巴无波动症状的病人，在加用试验药物或者安慰剂之前，已有的左旋多巴治疗应该进行最优化，以便区分受试药物真正的疗效和亚最佳剂量左旋多巴的疗效。如果预期左旋多巴的剂量调整会比较频繁，可以对最佳剂量进行限定，例如，加用受试药物前80％的最佳剂量已经确定。加用受试药物