小鼠睾丸发育过程中Si1基因表达的研究

云南大学学报(自然科学版),2007,29(2):208～212CN53-1045/N　ISSN0258-7971 JournalofYunnanUniversit y

Ξ

小鼠睾丸发育过程中Si1基因表达的研究

罗　兰1,2,李水冰1,余　敏1,谭德勇1

(1.云南大学生命科学学院生物化学与分子生物学实验室,云南昆明　650091;

2.昆明医学院基础医学院细胞生物学暨医学遗传学教研室,云南昆明　650031)

摘要:以1天龄、未成熟(3周龄)、成熟期(10周龄以上)的昆明正常小鼠睾丸组织为实验材料,利用地高辛标记的Si1基因探针在其组织切片上进行DNA-mRNA分子原位杂交,探讨Si1基因在小鼠睾丸发育过程中的表达变化.同时,分别在生后15,20d及25d的昆明小鼠睾丸组织切片上进行凋亡细胞原位检测,验证小鼠睾丸上述发育时期的细胞凋亡情况.结果发现:①Si1基因在1天龄小鼠的睾丸组织生精上皮内无杂交信号;

在未成熟小鼠的睾丸组织部分生精上皮内有极强的杂交信号;在成熟小鼠的睾丸组织生精上皮内无杂交信号.

②小鼠睾丸组织生精上皮内,凋亡细胞数从生后第15～20天呈增加趋势,于生后第20天出现峰值,生后第25

天又降低.上述结果表明Si1基因可能参与了小鼠睾丸的发育过程,在小鼠睾丸发育的特定时期发挥作用,由于Si1基因的表达与小鼠生精细胞凋亡发生的时期同步,表明该基因可能与小鼠睾丸发育过程中的细胞凋亡有关.

关键词:小鼠;睾丸;Si1基因;基因表达;凋亡

中图分类号:Q344.13 文献标识码:A 文章编号:0258-7971(2007)02-0208-05

Si1基因是一个新的功能基因(GenBank接受号:AY050169),目前对于Si1基因的功能还知之甚少,以往的研究中表明它与细胞周期的增殖调控有关,可能是一个细胞生长抑制基因,即一个细胞周期负调控基因[1].在肿瘤中,一个SNP位点被发现,该位点在非肿瘤人群中的分布频率为14%,而在肠癌中的分布频率达到51.5%.表明该基因与肠癌有密切关系[2].

生殖细胞的发育是一个极为特殊的分化过程,也是一个极特殊的细胞周期运行过程.在这一过程中,既有生殖细胞本身的频频分裂增殖,又有其不断地发育分化和死亡[3].研究细胞周期调控基因在生殖细胞发育过程中的表达既可探讨生殖细胞的发育机制,也可从另一个角度探讨细胞周期调控机制,并可探讨细胞周期调控基因在生殖细胞发育过程中的生理功能.此外,近年来的研究表明,小鼠睾丸发育过程不仅存在细胞的生长和分化过程,也涉及了生精细胞的退化过程.有形态学及生化研究表明,生精细胞的退化主要通过细胞凋亡来实现[4].有学者对不同发育阶段小鼠生精细胞的凋亡作了系统的研究,发现凋亡细胞数从生后1d到生后3周有增加的趋势,于生后第3周出现峰值,之后降低[5].

Si1基因既然与细胞周期和肿瘤发生有关[1,2],它与发育过程也许有一定的联系.探讨Si1基因在小鼠睾丸生殖细胞发育过程中的表达,对探讨小鼠睾丸中生殖细胞发育的分子机制有重要的参考意义.由于小鼠睾丸生精细胞在发育过程中存在退化,因此本文同时考察小鼠睾丸生精细胞发育过程的凋亡,以探讨Si1基因与生精细胞凋亡过程的联系.

1　材料与方法

1.1　生物学材料

Ξ收稿日期:2006-06-10

　基金项目:国家自然科学基金资助项目(39960030,30360040);云南省应用基础研究基金资助项目(1999C002Z).　作者简介:罗　兰(1973-),女,湖南人,硕士,主要从事细胞生物学及医学遗传学方面的研究.

1.1.1　小鼠睾丸　Si1基因原位杂交实验选用昆明种健康雄鼠,小鼠分组为:1天组为1天龄小鼠;未成熟组为3周龄小鼠;成熟组为10周龄以上小鼠.每组选3只小鼠.细胞凋亡原位杂交检测亦选用昆明种健康雄鼠,小鼠分组为:生后15,20d及25d,每组选3只小鼠.

1.1.2　Si1基因探针　Si1基因cDNA由本实验室克隆并保存.DIG(地高辛)标记、检测试剂盒(购自德国宝灵曼公司),细胞凋亡检测试剂盒购于迈新公司.

1.2　实验方法

1.2.1　组织切片制备　小鼠断颈处死后取睾丸, 10%中性甲醛固定,常规石蜡包埋.切片厚9μm,用甘油蛋白粘片剂贴于预先用APES(3-氨基丙基三乙氧基硅烷)处理过的载玻片上,37℃温育24 h后,室温干燥备用.

1.2.2　Si1基因探针制备　按常规方法扩增并抽提克隆的Si1基因质粒DNA,用Bam HⅠ和HindⅢ酶切,胶回收插入的cDNA片段.取回收的cDNA片段约1μg,加入混合六聚寡核苷酸引物2μL(Hexami2 cleotidemaxture),标记DigoxigenindUTP2μL, Klenow聚合酶1U,消毒四蒸水补充到总体积为20μL,37℃保温20h,然后加2μL0.2mol/LEDTA,2

μL4mol/LLiCl终止反应.-20℃无水乙醇(2.5倍)沉淀DNA,-20℃过夜.12000r/min离心20 min,沉淀用50μL1×TE溶解.

1.2.3　H.E染色　按常规H.E染色操作.

1.2.4　Si1基因组织原位杂交　小鼠睾丸组织按常规组织化学方法进行固定,切片.每组随机取5张切片.原位杂交按文献[6]进行,稍加修改.

1.2.4.1　预处理　石蜡切片经二甲苯脱蜡2次,每次20min.用无水乙醇洗2次,每次10min.置空气中干燥,在2×SSC中常温饱和20min.

1.2.4.2　预杂交　用消毒滤纸擦干组织切片周围的液体,但保持组织湿润.玻片置于6×SSC饱和的湿盒中,组织材料上加40～50μL预杂交液,42℃孵育4～5h.

1.2.4.3　杂交　在预杂交液中加入适量的变性标记探针达最终质量浓度50n g/mL,每张玻片上滴加40～50μL,42℃湿盒过夜.

1.2.4.4　免疫显色　将杂交后的玻片置2×SSC 中洗1h,1×SSC中洗1h,0.5×SSC37℃洗30 min,0.5×SSC室温洗30min.封闭剂(3%牛血清白蛋白,0.3%TritonX-100,BufferⅠ(100mmol/L Tris?HCl,150mmol/LNaCl,pH7.5)稀释)中室温孵育2h,以消除非特异性抗原.复合抗体Dig-AP用BufferⅠ按1∶500稀释,室温孵育过夜. BufferⅠ洗2次,每次15min,NBT显色液暗盒显色6h,EDTA终止反应.乙醇系列脱水,二甲苯透明,树胶封片.Ol ympus显微镜下观察照相.

1.2.5　细胞凋亡原位检测　切片于37℃的二甲苯中脱蜡10min,然后在室温下保温5min.系列酒精逐级复水(100%,95%,85%,70%,50%室温各3min)后,用0.85%NaCl洗5min,1×PBS洗5 min.4%的多聚甲醛室温固定15min后,1×PBS 洗3次,每次5min.用20μg/mL的蛋白酶K室温消化20min,1×PBS洗5min.4%的多聚甲醛室温再固定10min后,1×PBS洗3次,每次5min.在切片上滴加平衡缓冲Buffer液,室温10min.在冰上混匀平衡Buffer液、生物素标记的核苷酸的混合物、末端转移酶(TdT酶)(体积比98∶1∶1),滴加到切片上,PBS湿盒内37℃孵育60min.2×SSC终止反应,室温15min.PBS洗3次,每次5min,以除去生物素标记的dNTP.滴加0.3%的H2O2室温封闭5min,以封闭内源性的过氧化物酶.PBS洗3次,每次5min.用PBS稀释辣根过氧化物酶标记生物素(500∶1),进行抗体连接,室温孵育30min,随后PBS洗3次,每次5min.每张切片加2滴新鲜配制的DAB溶液,显微镜下观察5～10min,阳性颗粒为棕黄色.自来水冲洗终止反应,二甲苯透明,中性树胶封固.Ol ympus显微镜下观察照相.

2　结　果

2.1　小鼠睾丸的H.E染色

2.1.1　1天龄睾丸(见图1A)　曲精小管呈实心管状,由支持细胞和原始生精细胞构成.细胞基本排列成1层,紧贴基膜,核呈长圆形.局部区域也有2层细胞.部分节段上,近中央部位有一些核大而圆的细胞.曲精小管之间有大量的间质细胞.

2.1.2　未成熟鼠睾丸(见图1B)　这一时期的睾丸曲精小管多已经空腔化,有些截面上可见到2种类型的细胞,靠近管壁的1层或几层细胞体积小,排列

902

第2期 罗　兰等:小鼠睾丸发育过程中Si1基因表达的研究

紧密,细胞核小而致密(染色深),核为圆形.而近管腔中间的内层细胞则体积稍大,细胞核亦稍大,且染色较浅;有些截面上只见到1种类型的细胞,细胞体

积小,排列紧密,细胞核小而致密(染色深),核为圆形,呈1层或几层排列.总体上,曲精小管之间的距离较大,不像成熟组睾丸中那样多彼此贴近.2.1.3　成熟鼠睾丸(见图1C )　该组曲精小管的组织结构与未成熟组有很大区别,其生精上皮细胞已完全有了分化.所有截面上可见精原细胞层、初级精母细胞层、精子细胞及成熟精子等各级细胞.在绝大多数曲精小管正(中)横截面上,包括精原细胞和生精干细胞在内的细胞,贴近基膜,排列成1层,这1层细胞体积小,排列紧密,细胞核小而致密(染色深),多数核为圆形,个别为椭圆形.从第2层

细胞开始,细胞的体积与其核的体积都变大,有些为精原细胞的2倍以上,从形态学指征判断:第2,3层(个别地方还包括第4层)为初级和次级精母细胞.初级精母细胞和次级精母细胞以内细胞的特点是其胞体和胞核均明显比精母细胞小得多,大致与精原细胞相同或更小,胞核也较致密,从形态学指征判断为精子细胞

.这一时期曲精小管中已有大

量充分变态或正在变态中的精子.

2.2　Si1基因原位杂交结果　Si1基因在1天龄

小鼠的睾丸组织中,生精上皮无论哪一层细胞中均未检测到明显的杂交信号(见图2A ).在未成熟小鼠睾丸组织部分生精上皮内出现或强或弱的杂交信号,部分生精上皮内的信号极强,并且具有杂交信号的细胞是离开基底膜第2,3层及其以内的细胞(见图2B );而在成熟小鼠睾丸组织中生精上皮的无论哪一层细胞中均未检测到明显的杂交信号(见图2C ).

2.3　细胞凋亡原位检测结果　原位检测的阳性细

胞,其阳性颗粒呈棕黄色,大小不一,形态各异,分布不均匀.生后第15天,生精上皮内已经有凋亡细胞出现,凋亡细胞集中于生精上皮内离开基底膜第3层及其以内的细胞(见图3A ).至生后第20天,生精上皮内的凋亡细胞数量达到了高峰,信号也最强,离开基底膜第2层及其以内的各层均有凋亡细胞(见图3B ).但至生后第25天起,生精上皮内的凋亡细胞数量便急剧下降,且凋亡细胞仅集中于离开基底膜的第1层及第2层细胞,且信号强度减弱(见图3C ).

A:1天龄小鼠;B:未成熟小鼠;C:成熟小鼠

图1　小鼠睾丸的H.E 染色结果

Fig.1TheresultsofH.Estainin

ginmicetestis

A:1天龄小鼠;B:未成熟小鼠;C:成熟小鼠

图2　Si1基因在小鼠睾丸中的表达结果

Fig.2Theex

pressionofSi1

geneinmicetestis

012

云南大学学报(自然科学版) 第29卷

A:生后第15天;B:生后第20天;C:生后第25天

图3　小鼠睾丸发育过程中的细胞凋亡原位检测结果

Fig.3Theresultsofdetectionofa

poptoticcellsinsitudurin

gthedevelo pmentofmicetestis

3　讨　论

3.1　Si1基因在小鼠睾丸发育过程中的作用　本

研究小组通过比较血清培养细胞和血清饥饿细胞的基因表达差异,获得了一段血清饥饿细胞中特异表达的cDNA 序列,以此序列出发,通过搜索表达序列标签(EST ),拼接出完整的基因序列,通过PCR 分段克隆获得全长cDNA 序列.该基因cDNA

全长5429b p,编码框预测有791个氨基酸残基,共有21个外显子.GenBank 搜索,该基因与已有的细胞周期调控基因没有同源性.所以,该基因是一个新的与细胞周期有关的基因(GenBank 接受号:AY050169).由于该基因最初发现在无血清培养条

件下表达,故叫血清抑制基因(seruminhibit gene,Si1基因)[1].目前对于Si1基因的功能研究还处于起步阶段.Si1基因在U251细胞血清抑制培养中有较高的表达,而U251细胞在血清抑制培养后大量进入到G 0期,由此推测其可能是细胞由G 1期进入G 0期的调控基因,是一个细胞周期负调控基因.我们曾对p16,p21和p53基因在血清培养和血清饥饿细胞中的表达进行过研究

[7]

,发现在血清

饥饿细胞中较血清培养细胞中表达较强,Si1基因也有一样的表达特征,表明该基因有可能是一个细胞生长抑制基因.

本研究中,Si1基因在1天龄小鼠和成熟小鼠的睾丸组织中生精上皮内没有表达,但在未成熟小鼠的睾丸组织部分生精上皮内出现表达,部分生精上皮内的表达信号极强,这一结果表明;Si1基因可能参与了小鼠睾丸的发育过程,并在小鼠睾丸发育的特定时期发挥作用.

3.2　Si1基因与生精细胞凋亡　在细胞凋亡原位

检测的组织切片中,我们发现,在小鼠睾丸发育过程中,特定时期存在着生精细胞的凋亡现象.本研究表明:凋亡细胞从生后15～20d 有增加的趋势,于生后第20天出现峰值,之后迅速降低.这一结果与张健等人的研究结果[5]一致.本研究结果表明,在小鼠个体发育首次精子发生期间,出现了一个较为明显的凋亡波,有学者认为此凋亡波的出现是保证随后的精子正常发生所必需的,其生理意义很可能是调节并保持生精细胞与支持细胞的最适数目比,以保证生精细胞发育和分化的正常进行[8].也有学者认为,在精子发生过程中,由于增殖而产生一些染色体异常的细胞,细胞凋亡是对这些细胞的负选择[9].本研究结果表明,在未成熟(3周龄)小鼠睾丸组织的部分生精上皮内出现极强的Si1杂交信号,并且具有杂交信号的细胞是离开基底膜第2,3层及其以内的细胞;而同期(生后第20天)有

强烈凋亡信号的细胞也是离开基底膜第2层及其以内的各层细胞.二者的阳性结果是吻合的.这一结果提示Si1基因强表达的时期与小鼠生精细胞强凋亡信号出现的时期一致,表明Si1基因与小鼠睾丸生精细胞的凋亡过程有一定联系,当然,这还有待进一步的研究.

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Theex pressionoftheSi1geneinthetestisofmiceat

differentdevelo pmentsta ge

LUOLan1,2,LIShui2bing1,YUMin1,TANDe2yong1

(https://www.wendangku.net/doc/5c14810586.html,b.ofBiochemistr yandMolecularBiolo gy,SchoolofLifeScience,YunnanUniversit y,Kunmin g650091,China;

2.De partmentofCellBiolo gyandGenetics,Kunmin gMedicalColle ge,Kumin g650031,China)

Abstract:Usin ginsituh ybridizationtechni quewithDi gLabeledDNA probe,theex pressionofSi1gene intestisofone2dayold,3weeksoldandmatureKunmin gmicewerestudied.Atthesametime,TUNEL methodwereusedfordetectionofa poptoticcellsinsitutodetectthecella poptosisofthes permato geniccells intestisofmiceat15thda yafterbirth,20thda yafterbirthand25thda yafterbirth.Theresultsareasfol2 lows:(1)Theex pressionofSi1genewasver ystron gin partialseminiferoustubeof3weeksoldmice,butthe expressionofSi21genewasnotbeobservedintestisofone2dayoldmiceandmaturemice.(2)Thenumberof apoptoticcellsincreasedfrom15thda yafterbirthto20thda yafterbirth,reachedits peakson postnatal20th dayanddescendedon25thda yafterbirth.SotheconclusionthatSi1gene partici patesinthedevelo pmentof testisofmice,andthe periodofSi21geneex pressionandthecella poptosisofthes permato geniccellsinmice weres ynchronousl y get.

Ke ywords:mouse;testicle;Si1gene;geneex pression;a poptosis 3333333333333333333333333333 (上接第189页)

Chemicalconstituentsfrom Hedyotis di f fusa

YANGYa2bin,YANGXue2qiong,DINGZhon g2tao

(KeyLaborator yofMedicinalChemistr yforNaturalResource,Ministr yofEducation,

YunnanUniversit y,Kunmin g650091,China)

Abstract:Fromthe Hedyotis dif fusa sevenknowncom poundswereisolated.Theirstructuresweredeter2 minedas32methox y25,72dihydroxyflavonol(Ⅰ),102acetylscandoside(Ⅱ),asperuloside(Ⅲ),5,7,4′2trih y2 droxyflavonol(Ⅳ),ursolicacid(Ⅴ),daucosterol(Ⅵ),β2Stiosterol(Ⅶ).

Ke ywords:Hedyotis dif fusa;rubiaceae;flavone;iridoid

212云南大学学报(自然科学版) 第29卷

小鼠睾丸支持细胞分离培养

小鼠睾丸支持细胞分离培养 一、材料和器械： 1、材料：小白鼠（18~ 20 日龄）1只 2、配液： PBS 1L，高压灭菌 细胞洗液：DMEM+双抗 消化液：0 25% ( 质量分数) 胰蛋白酶，0 1%( 质量分数) 胶原酶 细胞培养液：DMEM+10%FBS+双抗 3、器械： 镊子、手术剪、手术刀各3-4把，高压灭菌 500mL烧杯2个，高压灭菌 25 mL离心管、5 mL离心管各20个，高压灭菌 酒精棉一瓶 细胞培养皿若干 冰块若干 二、操作步骤： 1、处死小鼠颈椎脱臼法处死； 2、消毒置于含75% ( 体积分数) 乙醇平皿中浸泡2 min, 然后置于超净台上； 3、取睾丸用中剪剪开下腹部皮肤, 眼科剪从下腹部附睾部剪断精索, 取出双侧睾丸, 放入含预冷细胞洗液的培养皿中； 4、取实质修剪睾丸附带的精索。剥除睾丸被膜, 将睾丸实质剪成约1 mm 1 mm 1 mm 碎块, 静置3~ 4 min； 5、消化转入25mL 离心管中。吸出上层细胞洗液, 每只睾丸加入1 5mL 37 预温的0 25% ( 质量分数) 胰蛋白酶，37 高速振荡消化15~ 20min, 直到残存的间质消化成粘液状, 可见成片断的曲细精管； 6、终止消化加入入少许血清终止消化,； 7、离心1000 r/ min离心5 min, 倾去上层胰酶。加入DMEM/ F12 培养基重悬, 1000r/min 离心5min。倾去上层培养液； 8、再消化每只睾丸加入1 mL 37 预温的0 1%( 质量分数) 胶原酶, 37 低速

缓慢振荡消化20~ 25min； 9、铜网过滤取滤液800 r/ min 离心5min, 2 次去除胶原酶, 用培养液洗涤； 10、接种往离心管加入细胞培养液5ml左右，吹打均匀，接种到两个30细胞培养皿中，补加培养液到培养皿1/3~1/2,培养皿标记显微观察后放入36CO2培养箱培养。 三、换液纯化，计数结果鉴定

遗传病遗传方式、发病机制及临床症状,名词解释

21三体综合征(Down 综合征) 单纯型(游离型)47,XX(XY),+21 (2)易位型46,XY,-D,+t(DqGq) 45,XX,-14,-21,+t(14q21q) (3)嵌合型46,XY/47,XY,+21 临床特征:(1)特殊面容;鼻梁低,眼斜视,外眼角上翘,内眦赘皮,耳小,低位,口常开,流口水。(2)智力障碍,智商一般在25-50。(3)50%有先天性心脏畸形,通贯手(猿线),草鞋脚。 5p-综合征(猫叫综合征) 46,XY,5p -46,XY,del(5)(p15) 临床特征:哭声如猫叫,智力落后,生长阻滞,小头,满月脸,斜视,心脏畸形。 先天性睾丸发育不全综合征(Klinefelter syndrome) (1)47,XXY (2)48,XXXY (3)49,XXXXY (4)46,XY/47,XXY 临床特征:外表男性,睾丸小,不育,男性乳房发育。其性情体态女性化。身材瘦长,体力较弱。 先天性卵巢发育不全综合征(Turner syndrome) (1) 45,X0 (2)45,X0/46,XX 临床特征;外表女性,原发闭经,卵巢萎缩,外生殖器发育不良,身材矮小(身高一般不超过 1.50M),盾状胸,肘外翻,乳房不发育,色素痣,蹼颈和低发际,一般不能生育。 脆性X染色体智力障碍综合征(Martin-Bell syndrome) 临床特征: 三大一低,大睾丸、大头围、大耳朵、低智商 染色体微缺失综合征(Microdeletion syndrome) Prader-Willi综合征 出生时吸吮困难,外生殖器发育不良。2-3岁时转为饮食过量,肥胖。轻度或中度智力障碍。Angelman综合征 严重运动和智力发育障碍,共济失调,肌张力减退,患儿有急冲式动作,阵发不恰当的大笑,故有“快乐木偶”综合征(Happy puppet syndrome)之称。 常染色体显性遗传病(AD),多在成人发病 α珠蛋白生成障碍性贫血综合征 Hb Bart’s胎儿水肿综合征(hydrops fetalis syndrome) (- -/- -) γ4 临床特征:胎儿组织严重缺氧,全身严重水肿,导致自发性流产或出生后不久死亡。 HbH病(- -/α-) γ4、β4 临床特征:低色素小细胞性溶血性贫血、黄疸、肝脾肿大 α珠蛋白生成障碍性贫血性状(- -/αα或α-/α-) 临床特征:轻度小细胞性贫血 α珠蛋白生成障碍性贫血静止型携带者(αα/α-)

受精到胚胎发育全过程.

受精到胚胎发育全过程 作者：佚名2005-2-8 受精和胚胎发育是生命的开始，每个人都要经历，但大多数人都一头雾水。心里有好多疑惑，可又不好意思问出口。那就看看这里吧！ 受精 精子 精子是男性的生殖细胞，由睾丸产生，平时就储存在睾丸和附睾里。正常男子每次射出精液2～6毫升，每毫升约有0.6～1.5亿个精子。射出的精子依靠鞭毛的摆动奋力向前游去，与等候在输卵管的卵子结合。 成熟卵泡（箭头所指处） 卵子是女性的生殖细胞，由卵巢产生并排出。女性进入生育期以后，卵巢每月会排出一个卵子，有时 可以排两个。卵子从卵巢排出后进入输卵管内，停留在输卵管的峡部与壶腹部的交界处等待受精。

性交过程 男性通过性交将精液射入女性的阴道内，精子离开精液经宫颈管进入宫腔，当精子与卵子相遇，精子通过酶的作用得以穿过卵子的外围到达卵子的表面，一当精子与卵子表面接触便开始了受精过程。到达卵子表面的精子会借助尾部的摆动而进入卵子的内部。 受精卵（箭头所指分别为精原核和卵原核） 精子和卵子各带23条染色体，受精即精子和卵子的染色体结合，这样就有了46条染色体，受精卵由单细胞分裂成两个相同的细胞，并慢慢向宫腔移动，边移动边分裂，到子宫时已成为约有48个细胞的中空团块，叫胚泡或囊胚，进行下一步的植入。 受精卵的发育与着床

卵子受精后即开始有丝分裂，并在一边分裂的同时一边向子宫腔方向移动。受精卵在输卵管内36小时后分裂为2个细胞，72小时后分裂成16个细胞，叫桑椹胚。受精后第4日，细胞团进入子宫腔，并在子宫腔内继续发育，这时，细胞已分裂成48个细胞，成为胚泡准备植入。胚泡可以分泌一种激素，帮助胚泡自己埋入子宫内膜。受精后第6-7日，胚泡开始着床。着床位置多在子宫上1/3处，植入完成意味胚胎已安置，并开始形成胎盘，孕育胎儿了。 1、受精卵 2、精原核和卵原核开始互相融合 3、受精卵开始有丝分裂 4、几近完成的有丝分裂

睾丸的二次发育吃什么好呢

如对您有帮助，可购买打赏，谢谢睾丸的二次发育吃什么好呢 导语：很多男性在第一次睾丸发育的过程中没有发育得好，所以说睾丸总是会出现过小的现象，如果男性的睾丸发育不好的话，那么就会影响到男性的生殖 很多男性在第一次睾丸发育的过程中没有发育得好，所以说睾丸总是会出现过小的现象，如果男性的睾丸发育不好的话，那么就会影响到男性的生殖功能，男性生殖功能下降的话就会引发不育症疾病，这样对于一个男性来说危害是很大的，而当男性的睾丸发育不好的话还有二次发育，那么男性睾丸二次发育的时候该吃什么好呢？ 睾丸早期发育缓慢，至青春期后随性成熟迅速生长，成人睾丸平均长3.3cm，宽约2.3cm，厚为1.7cm.至于饮食的影响，一般问题不大指导意见： 成年男性器官都已经发育成熟了，不会二次发育了，不知您现在是什么情况，可以去医院看看，针对性治疗.多进行户外运动，有些男性的睾丸一大一小，一高一低，如果差别不大，均属正常。如果睾丸周围温度过高或受到化学毒物的影响，精子的产生将出现障碍。间质细胞产生雄激素，与男性第二性征、生理功能等密切相关。睾丸保养是解决男性性功能障碍的重要手段，男性可在洗澡时或睡前对睾丸双手按摩，拇指轻捏睾丸顺时，逆时各十分钟，长期坚定必有益处。 促进睾丸的发育还需要注意合理的饮食： 1、多食优质蛋白质，优质蛋白质主要是指各种动物性食物，如鸡、鸭、鱼、瘦肉、蛋类，可提出供人产生精子所需用要的各种氨基酸。 2、补充维生素和微量元素。研究证明，维生素A和E是与维持性功能并延缓衰老有关的维生素。它们在促进睾丸发育、增加精子的生成并提高其活力等方面具有决定性作用。 生活中的小知识分享，对您有帮助可购买打赏

小鼠睾丸发育过程中Si1基因表达的研究

云南大学学报(自然科学版),2007,29(2):208～212CN53-1045/N　ISSN0258-7971 JournalofYunnanUniversit y Ξ 小鼠睾丸发育过程中Si1基因表达的研究 罗　兰1,2,李水冰1,余　敏1,谭德勇1 (1.云南大学生命科学学院生物化学与分子生物学实验室,云南昆明　650091; 2.昆明医学院基础医学院细胞生物学暨医学遗传学教研室,云南昆明　650031) 摘要:以1天龄、未成熟(3周龄)、成熟期(10周龄以上)的昆明正常小鼠睾丸组织为实验材料,利用地高辛标记的Si1基因探针在其组织切片上进行DNA-mRNA分子原位杂交,探讨Si1基因在小鼠睾丸发育过程中的表达变化.同时,分别在生后15,20d及25d的昆明小鼠睾丸组织切片上进行凋亡细胞原位检测,验证小鼠睾丸上述发育时期的细胞凋亡情况.结果发现:①Si1基因在1天龄小鼠的睾丸组织生精上皮内无杂交信号; 在未成熟小鼠的睾丸组织部分生精上皮内有极强的杂交信号;在成熟小鼠的睾丸组织生精上皮内无杂交信号. ②小鼠睾丸组织生精上皮内,凋亡细胞数从生后第15～20天呈增加趋势,于生后第20天出现峰值,生后第25 天又降低.上述结果表明Si1基因可能参与了小鼠睾丸的发育过程,在小鼠睾丸发育的特定时期发挥作用,由于Si1基因的表达与小鼠生精细胞凋亡发生的时期同步,表明该基因可能与小鼠睾丸发育过程中的细胞凋亡有关. 关键词:小鼠;睾丸;Si1基因;基因表达;凋亡 中图分类号:Q344.13 文献标识码:A 文章编号:0258-7971(2007)02-0208-05 Si1基因是一个新的功能基因(GenBank接受号:AY050169),目前对于Si1基因的功能还知之甚少,以往的研究中表明它与细胞周期的增殖调控有关,可能是一个细胞生长抑制基因,即一个细胞周期负调控基因[1].在肿瘤中,一个SNP位点被发现,该位点在非肿瘤人群中的分布频率为14%,而在肠癌中的分布频率达到51.5%.表明该基因与肠癌有密切关系[2]. 生殖细胞的发育是一个极为特殊的分化过程,也是一个极特殊的细胞周期运行过程.在这一过程中,既有生殖细胞本身的频频分裂增殖,又有其不断地发育分化和死亡[3].研究细胞周期调控基因在生殖细胞发育过程中的表达既可探讨生殖细胞的发育机制,也可从另一个角度探讨细胞周期调控机制,并可探讨细胞周期调控基因在生殖细胞发育过程中的生理功能.此外,近年来的研究表明,小鼠睾丸发育过程不仅存在细胞的生长和分化过程,也涉及了生精细胞的退化过程.有形态学及生化研究表明,生精细胞的退化主要通过细胞凋亡来实现[4].有学者对不同发育阶段小鼠生精细胞的凋亡作了系统的研究,发现凋亡细胞数从生后1d到生后3周有增加的趋势,于生后第3周出现峰值,之后降低[5]. Si1基因既然与细胞周期和肿瘤发生有关[1,2],它与发育过程也许有一定的联系.探讨Si1基因在小鼠睾丸生殖细胞发育过程中的表达,对探讨小鼠睾丸中生殖细胞发育的分子机制有重要的参考意义.由于小鼠睾丸生精细胞在发育过程中存在退化,因此本文同时考察小鼠睾丸生精细胞发育过程的凋亡,以探讨Si1基因与生精细胞凋亡过程的联系. 1　材料与方法 1.1　生物学材料 Ξ收稿日期:2006-06-10 　基金项目:国家自然科学基金资助项目(39960030,30360040);云南省应用基础研究基金资助项目(1999C002Z).　作者简介:罗　兰(1973-),女,湖南人,硕士,主要从事细胞生物学及医学遗传学方面的研究.

男孩会因睾丸激素发生变化(word)

男孩会因睾丸激素发生变化 男孩子们的成长会与女孩有着重大的区别，所以家长一定要了解睾丸激素在男孩成长中的重要作用哦！ 睾丸激素会使男孩发生重大变化： 4岁——男孩开始变得淘气、好动； 13岁——男孩进入快速成长时期，缺乏目标； 14岁——遇到人生历程中的第一次考验，开始进入成年期的初级阶段 奇妙的成长过程 在子宫内，胎儿大脑的发育异常迅速。开始时只有几个细胞，经过短短一两个月的发育，就能生长成最为复杂的细胞结构。到怀孕6个月的时候，胎儿就具备了惊人的能力(这些能力都受大脑的支配)，例如能识别语言，能对动作做出反应，当妈妈不小心碰到肚子时，他甚至能踢一脚！通过超声波测试，我们能清楚地看到胎儿的嘴在动，好像是在妈妈的子宫里唱歌。 婴儿出生时，他的大脑还没有发育完全——仅仅发育了1/3。经过很长一段时间后，大脑才能发育完全。例如语言中枢要等孩子长到13岁的时候才能发育完全。(这就是在小学阶段要一直要求男孩进行朗读训练的原因。) 当胎儿还孕育在母体中时，男女胎儿在大脑结构上的差别就非常明显了。其中一个差别是，男孩大脑的发育速度明显慢于女孩大脑的发育速度。另一个差别是，男孩大脑的左右半球之间的联系少于女孩。 所有动物的大脑都由左右两个半球组成。对一些低等动物(比如蜥蜴或鸟)来说，它们两个大脑半球的结构是相同的。因此，如果受到重击，一侧大脑半球的部分结构遭到破坏，它们另一侧大脑半球照常运作，能担负起另一半的功能。然而，人类就不一样了(人类需要思考的东西太多了)，人类大脑的两半球各司其职。一个半球负责语言和推理，另一个半球负责运动、感情以及对时空的定位。这两个大脑半球依靠神经纤维束相互连接，这个纤维束被称为胼胝体。男孩胼胝体的体积小于女孩胼胝体的体积——左右脑之间的联系是非常少的。 所以家长在男孩的日常护理中一定要注意到这些才能更好地去照顾宝宝，关爱宝宝的成长哦！

精神发育迟滞临床路径

精神发育迟滞诊疗常规 试行 一、精神发育迟滞临床路径标准住院流程 一 适用对象 第一诊断为 精神发育迟滞 二 诊断依据 根据《国际精神与行为障碍分类第十版》 世界卫生组织委托中华人民共与国卫生部编著 人民卫生出版社 【 诊断要点 】 发育成熟 岁 前起病 主要表现为智力低下与不同程度得社会适应能力欠缺。 注意与儿童精神分裂症、儿童孤独症得鉴别。排除因视、听障碍或儿童多动症所造成得适应及学习困难。有些儿童因患慢性躯体疾病、营养不良或学习条件欠缺可表现出暂时性得精神发育延缓 不要误诊为精神发育迟滞。 根据智商 水平分为四级 轻度精神发育迟滞 ～ 中度精神发育迟滞 ～ 重度精神发育迟滞 ～ 极重度精神发育迟滞 ＜ ～ 为边缘智力。 病因学诊断 根据病史、智力测验结果及躯体检查线索 尽可能利用现有辅助检查条件做出精神发育迟滞得病因学诊断。如 怀疑遗传因素或染色体异常所致精神发育

迟滞者可做染色体检查及核型分析 怀疑苯酮尿症需化验血清与尿中苯丙氨酸浓度 怀疑先天性卵巢发育不全及先天性睾丸发育不全可查血、尿性激素浓度 怀疑先天性甲状腺功能低下者需进行甲状腺功能得有关检查 先天性颅脑畸型可做头部 线平片及 检查。 这些检查不仅有助于明确诊断 更就是病因治疗得直接依据。 三 治疗方案得选择 根据《精神发育迟滞诊疗指南》 中华医学会编著 人民卫生出版社 进行系统得病史采集、精神检查、体格检查及相关辅助检查 制定治疗策略 精神发育迟滞得药物治疗一般遵循病因治疗结合特殊教育训练得原则 以促进或改善脑细胞功能得药物作为基础性治疗 视不同得临床相分别选用多种氨基酸、脑复康、 氨酪酸等药物治疗 心理治疗与康复治疗 四 标准住院日为49-56天 五 进入路径标准 第一诊断必须符合精神发育迟滞 疾病编码 当患者同时具有其她疾病诊断 但在住院期间不需要特殊处理也不影响第一诊断得临床路径流程实施时 可以进入路径。 六 住院后得检查项目 必需得检查项目 血常规、尿常规、大便常规 肝、肾功能、电解质、血糖、血脂、心肌酶、甲状腺功能 、 等 、凝血功能、感染性疾病筛查 乙肝、丙肝

组织学解剖--睾丸

组织学解剖--睾丸 睾丸(一) 一般结构 1. 被膜浆膜（睾丸鞘膜脏层）：由间皮及少量结缔组织组成白膜（tunica albuginea）：位于浆膜深层，由致密结缔组织组成睾丸纵隔（mediastinum testis）：白膜在睾丸后缘增厚形成睾丸纵隔，纵隔结缔组织呈放射状深入睾丸实质形成许多睾丸小隔 2. 实质由睾丸小隔分隔睾丸实质成250多个锥体形睾丸小叶。每个睾丸小叶含1）1～4条弯曲的小管——生精小管生精小管在近睾丸纵隔处变为短而直的直精小管 直精小管在睾丸纵隔内相互吻合形成睾丸网 即生精小管→直精小管→睾丸网2）生精小管间的结缔组织为睾丸间质,内含睾丸间质细胞 (二) 生精小管(seminiferous tubule) 是睾丸产生精子的场所它为极度弯曲的上皮性管道成人的生精小管：长30～70cm 管径150～250um，中央为管腔 管壁厚60～80um 1.结构生精上皮基膜1）生精上皮（spermatogenic epithelium）组成：两种细胞支持细胞：支持细胞作单层排列生精细胞（spermatogenic cell）生精细

胞镶嵌在支持细胞侧面及腔面 由上皮基部到腔面作多层（5～8层）排列2）基膜较厚外周覆以胶原纤维和一些梭形的具有收缩功能的类肌细胞(myoid cell)肌样细胞收缩有助于精子排出 2.生精细胞与精子的发生生精细胞精原细胞 初级精母细胞 次级精母细胞 精子细胞 精子青春期前，生精小管管腔很小或缺如，管壁中只有支持细胞和精原细胞青春期开始，在垂体促性腺激素的作用下，生精细胞不断增殖分化形成精子，生精小管壁内可见不同发育阶段的生精细胞。 1）精原细胞（spermatogonium）位置紧贴生精上皮基膜细胞形态圆形或椭圆形，直径约12um细胞结构细胞质内除核糖体外，细胞器不发达。是各级生精细胞中最幼稚的细胞细胞分类精原细胞分A、B两型A型精原细胞是生精细胞中的干细胞，经过不断地分裂增殖，一部分A型精原细胞继续作为干细胞，另一部分分化为B型精原细胞B型精原细胞经过数次分裂后，分化为初级精母细胞

Oct4在不同时期牛睾丸组织中的表达

Oct4在不同时期牛睾丸组织中的表达 黄伟玲，宋锐，陶勇，张运海，曹鸿国*，章孝荣* （安徽农业大学动物科技学院，安徽地方畜禽遗传资源保护与生物育种省级实验室，安徽合肥230036） 摘要：为探明不同时期牛睾丸组织中干细胞的表达特点，以2.5月龄、4月龄牛胎儿和出生后1年牛、2年牛睾丸为试验材料，通过HE染色和免疫组化法染色，探讨了不同时期牛睾丸的组织学特征及Oct4在睾丸组织中的表达。结果显示，早期胎儿阶段的牛睾丸组织细胞呈现团状，睾丸组织中细胞随着年龄增长逐步分化形成管状，在2.5月龄和4月龄胎牛睾丸组织中，Oct4阳性细胞广泛分布于睾丸组织生精小管细胞团和睾丸间质中；在出生后1年牛睾丸组织中，阳性细胞主要分布于牛睾丸组织生精小管基底膜，在睾丸间质中数量较少或没有；在出生后2年牛睾丸组织中，仅在睾丸组织生精小管基底膜的少量细胞呈现Oct4阳性。试验证实了随着牛年龄的增长，牛睾丸组织中Oct4阳性细胞逐渐减少或消失。关键词：Oct4；牛；睾丸组织 中图分类号：S814.1文献标识码：文章编号：0529-5130（2011）01-0036-03 睾丸组织是生殖系统的重要组成部分，Guan 等［1］和Valenzuela等［2］先后从睾丸组织中分离出具有胚胎干细胞（embryonic stem cells，ES细胞）特性的多能性细胞，为干细胞的分离培养和应用奠定了基础。Oct4又称Oct3或Pou5f1，是由Pou5f1基因编码产生的，是POU（Pit-Oct-Unc）结构域的转录因子家族中的一员［3］，Oct4作为干细胞的主导基因广泛表达于各种类型的干细胞，本次试验采用免疫组织化学方法探讨Oct4阳性细胞在不同时期牛睾丸组织中的分布及表达，为从牛睾丸中分离培养多能性干细胞奠定基础。 1材料与方法 1.1试验材料 PV-9000二步法免疫组化检测试剂盒和显色用浓缩型DAB试剂盒购自北京中杉金桥生物技术有限公司，Oct4兔多克隆抗体购自Abcam公司。 牛睾丸分别取自2.5月龄、4月龄的黑白花奶牛胎儿以及出生后1年、2年的黑白花奶牛；12.5d昆明白小鼠胎儿生殖嵴用作阳性对照。 1.2切片制作与观察 试验材料取出后，用生理盐水冲洗，4%多聚甲醛固定48h，将固定好的各睾丸组织样本流水冲洗24h后，依次经梯度酒精脱水、二甲苯透明、常规石蜡包埋、切片等处理，然后将切片贴于预先用多聚 收稿日期：2010-02-24；修回日期：2010-10-25 基金项目：国家“863”重点项目（2008AA101003）；安徽农业大学资助引进与稳定人才科研启动项目（yj2007-10）。 作者简介：黄伟玲（1984-），女，硕士研究生。 *通讯作者：曹鸿国，副教授，主要研究方向为动物干细胞与胚胎工程，E-mail：caohongguo1@https://www.wendangku.net/doc/5c14810586.html,；章孝荣，教授，主要研究方向为动物胚胎工程，E-mail：zxr@https://www.wendangku.net/doc/5c14810586.html,。赖氨酸处理过的干净载玻片上。选取连续相邻的四张切片分别作HE、免疫组化染色、免疫染色阴/阳性对照。 石蜡切片60?烤30min，经二甲苯脱蜡，酒精梯度复水。用含Triton X-100和双氧水的通透液孵育10min，柠檬酸缓冲液中微波抗原修复20min，0.025%Triton X-100的TBS冲洗，3%双氧水孵育10 min，含1%BSA的TBS封闭30min，1?2500稀释的Oct4一抗湿盒4?孵育过夜，二抗添加按照试剂盒操作说明书进行，DAB显色1min。显色后的切片经苏木精衬染，酒精梯度脱水，二甲苯透明，中性树胶封片，在显微镜下观察拍照。 2结果 2.1不同年龄牛睾丸组织的结构特征 在2.5月龄牛胎儿睾丸组织中，未形成曲细精管结构，不同类型的细胞开始分区，原始生殖细胞聚集明显，呈现明显的团状细胞集落，各细胞集落之间被支持细胞分隔（图1A）。4月胎牛睾丸组织中生精小管结构初步显现，生精小管的管腔还没有形成，睾丸组织间质分布于生精小管周围（图1B）。1年牛睾丸组织生精小管结构形成，但生精小管管腔仍处于闭锁状态，睾丸间质细胞呈梭形分布于生精小管周围，精原细胞沿生精小管基底膜整齐分布（图1C）。2年牛睾丸组织中生精小管的管腔已经形成，管腔壁上有多层细胞分布（图1D）。 2.2Oct4在不同年龄牛睾丸组织的表达 表达Oct4是干细胞的普遍特征，牛睾丸组织切片免疫组织化学检测显示在2.5月龄和4月龄胎牛睾丸组织中，在牛睾丸组织生精小管细胞团和睾丸间质细胞中Oct4阳性细胞较多，阳性细胞在睾丸组织的实质和间质中均有较多分布（图2A，2B）；伴随着 · 63 ·Animal Husbandry＆Veterinary Medicine2011Vol.43No.1

睾丸发育不全诊断详述

睾丸发育不全诊断详述 *导读：睾丸发育不全症状的临床表现和初步诊断?如何缓解和预防？ 一、诊断 先天性睾丸发育不全患者在儿童期无异常，常于青春期或成年期时方出现异常。患者体型较高，下肢细长，皮肤细白，阴毛及胡须稀少，腋毛常常没有，呈类阉体型，约半数患者两侧乳房肥大，外生殖器常呈正常男性样，但阴茎较正常男性短小，两侧睾丸显著缩小，多小于3cm，质地坚硬，性功能较差，精液中无精子，患者常因不育或性功能低下求治，智力发育正常或略低。 一般在发育期前难于作出诊断，不育或性功能障碍是患者就诊的主要原因。体型较高，双侧睾丸较小，两侧乳房肥大是典型病状。X小体阳性，染色体组型为47，XXY则可肯定诊断。 需与以下症状相互鉴别： 睾丸增大和变硬：睾丸内有增生的肾上腺皮质残余会使睾丸增大和变硬，绝大多数病人青春期后无精液。此症状出现在双侧先天性肾上腺皮质增生比较罕见的病例中。双侧肾上腺皮质增生(adrenogenitalsyndrome)，实为先天性肾上腺皮质增生，是一种隐性基因缺陷遗传病，由于不周合成肾上腺皮质激素的某些酶，使肾上腺生成氢化可的松不周，垂体分泌ACTH增多，致肾上腺皮质增殖分泌过多的雄性激素，使女性胎儿外生殖器发育男

性化，病人尿中排17-酮量增高。某些肾上腺酶的先天缺陷导致类固醇的生成异常。女性则引起假两性畸形，男性生殖器巨大。 本病常需与低促性腺激素性性腺功能减退(hypogonadotropic hypogonadism，HH)相鉴别。后者睾丸小而软，外生殖器及第二性征发育较差，男性乳房发育较少见，身材亦较高，上下肢均过长，血浆促性腺激素减低，血清T明显降低，曲细精管和Leydig细胞均有明显异常，染色体核型正常。根据这些不同的特点可与本病相鉴别。 二、预防 先天性睾丸发育不全的染色体畸形，以高龄妇女妊娠中机会为多，可参照遗传病的有关预防措施： 1.禁止近亲结婚，避免高龄妊娠。 2.婚前检查以期发现不应结婚的遗传病或其他疾病。 3.携带者的检出通过群体普查、家系调查及系谱分析、实验室检查等手段确定是否为遗传病，并确定遗传方式等。 4.遗传咨询 1) 遗传咨询对象： ①确诊为遗传性疾病的患者及其亲属。 ②连续发生原因不明疾病的家庭。 ③先天性原发性智能低下，怀疑与遗传有关者。 ④平衡易位染色体或致病基因的携带者。 ⑤原因不明反复流产的妇女。

小鼠睾丸生殖细胞标本制作及减数分裂期染色体观察

Isolation and staining of mouse meiotic metaphase chromosomes 小鼠睾丸生殖细胞标本制作及减数分裂期染色体观察 xx 2011级生科四班201100140120 同组者：xx 【实验目的】 1、learn to isolate mouse testes cells and stain with Giemsa. 学会分离小鼠睾丸细胞并用Giemsa染液染色 2、Observe the number and morphology of mouse chromosomes 观察小鼠染色体的数目及形态特征 【实验材料】 【Reagents】 秋水仙素colchicine solution 吉姆萨染液Giemsa stains solution 生理盐水physiological saline 氯化钾溶液KCl solution 固定液fixation solution 【Tools and equipments】 Dissecting tray，beaker，centrifuge tube，microscope，glass slide，pipette，scissors，forceps，copper mesh. 解剖盘，烧杯，离心管，显微镜，载玻片，吸管，剪刀，镊子，铜网 【实验原理】 meiosis is a process of reductional division in which the number of

chromosomes per cell is cut in half. In animals, meiosis always results in the formation of gametes, while in other organisms it can give rise to spores. 减数分裂是细胞分裂染色体数减半的过程，在动物中,减数分裂的结果总是在形成配子,而在其他生物可以产生孢子。 Testosterone is the place where the male germ cell develop and mature,it is the organ that produce sperm. After sexual maturation, sex cells of mammals in the testis is always mature partially. Therefore,have an appropriate treatment to testis enables us to get a variety of chromosomes of different process. 睾丸是雄性动物生殖细胞发育和成熟的部位，是产生精子的器官。哺乳动物在性成熟以后，精巢内的性细胞总是在分批分期不断的成熟，因此，对哺乳动物的精巢进行一定的技术处理，随时都可以获得减数分裂过程中各个时期染色体的标本。 Inject an amount of colchicine solution into the abdomen cavity can prevent the formation of the spindle fiber, so that a large amount of cells in the process of meiotic metaphase can be accumulated. By the normal way of making specimen,we can observe the chromosomes of mouse testosterone 用适量的秋水仙素溶液注入动物腹腔内，可以阻止分裂细胞纺锤丝的形成，从而积累大量处于分裂中期的细胞。利用上述原理，通过常规的制片方法，观察小鼠睾丸细胞的染色体。 Chromosomes are not visible in the cell’s nucleus—not even under a microscope—when the cell is not dividing. However, the DNA that makes up chromosomes becomes more tightly packed during cell division and is then visible under a microscope. Most of what researchers know about

促进睾丸发育的方法

如对您有帮助，可购买打赏，谢谢 促进睾丸发育的方法 导语：睾丸是男性很重要的生殖器官，有很多人的思想是比较传统的，生殖器官出现异常的话不好意思去医院检查，这其实是耽误了最佳的治疗时机，有些 睾丸是男性很重要的生殖器官，有很多人的思想是比较传统的，生殖器官出现异常的话不好意思去医院检查，这其实是耽误了最佳的治疗时机，有些男性的睾丸发育比较迟缓，其实这种情况也是有不好的办法去解决的，接下来我们就为大家详细的介绍一下促进睾丸发育的一些方法。 正常的成年男子睾丸体积的个体变异很大，正常人两侧的睾丸并不是完全一样的。正常成年人的睾丸，体积大者可达25毫升，小者可能仅有几毫升，一般认为成年人睾丸体积小于10毫升者称为小睾症。 在先天性的原因中，常见的有两种：一种是先天性睾丸发育不良，此病又称为细精管发育不全症。另一种是先天性肾上腺增生症。除了常见的这两种先天性的原因外，由后天性的因素造成睾丸大小不一的也为数不少。如一侧睾丸外伤、腮腺炎病毒也是引起睾丸一大一小的重要原因之一。有一些人将阴囊内其他病变误认为睾丸一大一小。还有些人把腹股沟斜疝、精索静脉曲张、附睾结核、附睾炎等误认为睾丸增大，因为这些病有时也表现为一侧阴囊较对侧大些。我院是完整按照世界卫生组织人类不孕不育诊疗标准建立的现代化专科医院，建议您来我院详细检查，明确病因，及早治疗。 上面的这些内容就是关于促进睾丸发育的一些方式了，睾丸的发育和男性的生育有很大的关系，所以这些并不是难以启齿的问题，只要大家积极的面对，这些都是可以解决的，如果大家觉得自己有这种问题的话可以按照上述的这些办法进行治疗。 生活中的小知识分享，对您有帮助可购买打赏

转录因子Ets1和Ets2在小鼠睾丸组织中的表达及其意义

［文章编号］　１６７１－５８７Ⅹ（２０１１）０１－０００６－ ０５［收稿日期］　２０１０－０８－ １６［基金项目］　国家自然科学基金资助课题（３０７７１５５５ ）［作者简介］　刘　洋（１９８５－），男，黑龙江省大庆市人，基础兽医学硕士，主要从事Ｅｔｓ转录因子对小鼠睾丸组织调控 研究。 ［通信作者］　张学明（Ｔｅｌ：０４３１－８７８３６１６２，Ｅ－ｍａｉｌ：ｚｈａｎｇｘｕｅｍ＠ｊｌｕ．ｅｄｕ．ｃｎ）［ＤＯＩ］ ＣＮＫＩ：２２－１３４２／Ｒ．２０１０１１３０．１１０８．０００［网络出版时间］　２０１０－１１－３０　 １１：０８［网络出版地址］　ｈｔｔｐ ：／／ｗｗｗ．ｃｎｋｉ．ｎｅｔ／ｋｃｍｓ／ｄｅｔａｉｌ／２２．１３４２．ｒ．２０１０１１３０．１１０８．０００．ｈｔｍｌ转录因子Ｅｔｓ１和Ｅｔｓ２在小鼠睾丸组织中的表达及其意义 刘　洋，金　波，郭　斌，赵丽红，韩玉帅，岳占碰，张学明 （吉林大学畜牧兽医学院动物胚胎工程吉林省重点实验室，吉林长春１３００６２ ）［摘　要］　目的：检测Ｅｔｓ家族转录因子Ｅｔｓ１和Ｅｔｓ２在小鼠睾丸组织中的表达，探讨其对小鼠睾丸发育的调控及其对精原干细胞（ＳＳＣｓ）增殖、分化的可能影响。方法：取生后第１、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、５０和 ７０天的小鼠睾丸组织，对成年小鼠进行白消安１０ｍｇ·ｋｇ－１ 腹腔注射，分别在注射后第０、３、５、８、１ ０和１８天取睾丸组织，用半定量ＲＴ－ＰＣＲ方法对比内参β－ａｃｔｉｎ在对应组织内的表达水平，分析Ｅｔｓ１、Ｅｔｓ２ｍＲＮＡ在睾丸组织中的相对表达量。结果：Ｅｔｓ１的表达量在生后第１～３０天显著高于出生后第３５天（Ｐ＜０．０５或Ｐ＜０．０１），之后明显降低并保持稳定；Ｅｔｓ２在生后第１～２５天表达量显著高于第３５天（Ｐ＜０．０５或Ｐ＜０．０１），之后明显下降并保持稳定。白消安处理后，Ｅｔｓ１的表达量于第５天降至最低，随后逐渐恢复，第９天后基本达到处理前水平并保持相对稳定，其中第５、８天表达量均显著低于处理后第０天（Ｐ＜０．０５或Ｐ＜０．０１）；Ｅｔｓ２的表达量在白消安处理后前期变化不明显，第１０天时明显降低，与第０和１８天比较差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５），之后缓慢回升，第１８天左右恢复至处理前水平。结论：转录因子Ｅｔｓ１和Ｅｔｓ２可能对睾丸早期发育、成年精子发生的维持及精原细胞的增殖、分化具有调节作用。 ［关键词］　Ｅｔｓ转录因子家族；Ｅｔｓ１；Ｅｔｓ２；睾丸；白消安；小鼠［中图分类号］　Ｑ５１；Ｒ－３３２ ［文献标志码］　Ａ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓ　ｏｆ　ｔｒａｎｓｃｒｉｐ ｔｉｏｎ　ｆａｃｔｏｒｓ　Ｅｔｓ１ａｎｄ　Ｅｔｓ２ｉｎ　ｍｏｕｓｅ　ｔｅｓｔｉｓ　ｔｉｓｓｕｅ　ａｎｄ　ｓｉｇ ｎｉｆｉｃａｎｃｅｓＬＩＵ　Ｙａｎｇ，ＪＩＮ　Ｂｏ，ＧＵＯ　Ｂｉｎ，ＺＨＡＯ　Ｌｉ－ｈｏｎｇ，ＨＡＮ　Ｙｕ－ｓｈｕａｉ，ＹＵＥ　Ｚｈａｎ－ｐｅｎｇ ，ＺＨＡＮＧ　Ｘｕｅ－ｍｉｎｇ（Ｋｅｙ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｏｆ　Ａｎｉｍａｌ　Ｅｍｂｒｙｏ　Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ　 ｏｆ　Ｊｉｌｉｎ　Ｐｒｏｖｉｎｃｅ，Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆ　Ａｎｉｍａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　ａｎｄＶｅｔｅｒｉｎａｒｙ　 Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｊｉｌｉｎ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈａｎｇｃｈｕｎ　１３００６２，Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｄｅｔｅｃｔ　ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓ　ｏｆ　Ｅｔｓ　ｆａｍｉｌｙ　ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ　ｆａｃｔｏｒｓ　Ｅｔｓ１ａｎｄ　Ｅｔｓ２ｉｎ　ｍｏｕｓｅ　ｔｅｓｔｉｓｔｉｓｓｕｅ　ａｎｄ　ｅｘｐｌｏｒｅ　ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　Ｅｔｓ１ａｎｄ　Ｅｔｓ２ｏｎ　ｔｈｅ　ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ　ｏｆ　ｍｏｕｓｅ　ｔｅｓｔｉｓ　ａｎｄ　ｓｅｌｆ－ｒｅｎｅｗａｌ　ａｎｄｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｓｐｅｒｍａｔｏｇｏｎｉａｌ　ｓｔｅｍ　ｃｅｌｌｓ（ＳＳＣｓ）．Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｔｈｅ　ｍｏｕｓｅ　ｔｅｓｔｉｓ　ｔｉｓｓｕｅｓ　ｗｅｒｅ　ｃｏｌｌｅｃｔｅｄ　ｆｒｏｍ　ｓｐｅｃｉｆｉｃｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ　ｓｔａｇｅｓ　ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ　ｐｏｓｔｎａｔａｌ　ｄａｙｓ　１，５，１０，１５，２０，２５，３０，３５，４０，５０ａｎｄ　７０；Ｂｕｓｕｌｆａｎｐｅｒｉｔｏｎｅａｌ　ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ　ｗａｓ　ｐｅｒｆｏｒｍｅｄ　ａｎｄ　ｍｏｕｓｅ　ｔｅｓｔｉｓ　ｔｉｓｓｕｅｓ　ｗｅｒｅ　ｃｏｌｌｅｃｔｅｄ　ｏｎ　ｔｈｅ　０ｔｈ，３ｒｄ，５ｔｈ，８ｔｈ，１０ｔｈ，１８ｔｈｄａｙｓ　ａｆｔｅｒ　ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅ　ｍＲＮＡ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｌｅｖｅｌｓ　ｏｆ　Ｅｔｓ１ａｎｄ　Ｅｔｓ２ｉｎ　ｓａｍｐｌｅｓ　ｗｅｒｅ　ａｎａｌｙｚｅｄ　ｂｙ　ｓｅｍｉ－ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ　ＲＴ－ＰＣＲ　ｗｉｔｈβ－ａｃｔｉｎ　ａｓ　ｔｈｅ　ｉｎｔｅｒｎａｌ　ｃｏｎｔｒｏｌ．Ｒｅｓｕｌｔｓ　Ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　Ｅｔｓ１ｗａｓ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ　 ｈｉｇｈｅｒ６ 第３７卷　第１期２０１１年１月吉　林　大　学　学　报　（医　学　版） Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｊｉｌｉｎ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ　Ｅｄｉｔｉｏｎ）Ｖｏｌ．３７Ｎｏ．１　 Ｊａｎ．２０１１

小鼠睾丸细胞染色体的制备与观察

小鼠睾丸细胞染色体的制备与观察 一、实验目的 1、了解快速制备动物染色体的方法，掌握小鼠睾丸细胞染色体的制备方法； 2、观察小鼠睾丸染色体的数目及其形态特征； 3、掌握小鼠睾丸染色体标本制备基本过程，了解操作步骤的原理。 二、实验原理 染色体是基因的载体。真核细胞染色体的数目和结构是重要的遗传指标之一。制备染色体标本无疑是细胞学最基本的技术之一，优良的染色体制片是进行染色体显带、组型分析、原位杂交等的先决条件。 染色体的制备在原则上可以从所有发生有丝分裂的组织和细胞悬浮液中得到。最常用的途径是从骨髓细胞、血淋巴细胞和组织培养的细胞中制备染色体（由于分裂旺盛）。本实验采用的方法是从小鼠的睾丸细胞中获取。在小鼠睾丸中，细胞有丝分裂和减数分裂比较旺盛，因此不需要体外培养就可以直接得到分裂中期细胞。通过小鼠睾丸得到染色体比较简便，一般不需要无菌操作。用秋水仙素作为有丝分裂的抑制剂。 染色体的形态结构在细胞增殖周期中是不断地运动变化的，一般在有丝分裂中期，染色体的形态最典型、最易辨认和区分。因此，制备染色体标本获取的是中期细胞。通过前处理，低渗，固定，制片，染色等步骤制得染色体标本，可观察到许多处于分裂中期的染色体，可以进行染色体组型分析。 用适量的秋水仙素溶液注入动物腹腔内，可以阻止分裂细胞纺锤丝的形成，从而积累大量处于分裂中期的细胞。利用上述原理，通过常规的制片方法，观察小鼠睾丸细胞的染色体。 三、实验用品 解剖盘解剖剪镊子 10ml刻度的离心管离心机载玻片盖玻片显微镜小鼠秋水仙素 0.3% KCl 固定液（甲醇：冰醋酸=3：1） Giemsa染液 0.9%生理盐水

四、实验步骤 （一）标本的制备 1、取雄性小鼠以每克体重4μｇ注射秋水仙素，经14～16小时后，断头法 杀死小鼠，取出睾丸用生理盐水（0.9%的NaCl）洗去血污。 2、放入装有1ml 0.3%KCl液的小烧杯中剪碎至呈乳白色。 3、用铜网过滤到刻度离心管中，再加0.3%KCl液至4ml。37℃静置30分钟， 进行低渗处理。以800～1000转/分离心8分钟。 4、弃上清液，加入2ml甲醇·冰醋酸固定液（3：1），并用吸管至管底吹气， 轻轻打散细胞，固定8分钟。 再以800～1000转/分离心8分钟。 5、弃上清液，加1ml固定液，再制成细胞悬液，固定5分钟。 6、取洁净的低温预冷载片，距载片10～15cm高度滴下2～3滴细胞悬液， 从载片一边向另一边轻轻吹气，并同时轻轻敲打载片，以使细胞均匀分布和促使染色体展开。 7、将玻片竖直放置于玻片盒中 一周后 （二）标本的染色与观察 1、用 Giemsa染色20 ～ 30分钟，采用倒置染色法：在玻璃板上用废旧玻 片做支架，使标本玻片的标本面朝下放置到支架上，在玻璃板和标本载玻片之间滴加Giemsa染液。 2、细水冲洗玻片背面，去多余染液，气干。 3、镜检：低倍镜下寻找分散良好、染色适中的分裂相，高倍镜或油镜下观 察染色体形态并计数。 五、实验结果 显微镜下（共有20个染色体）

小鼠睾丸细胞染色体标本的制备及观察

姓名系年级组别同组者 科目细胞生物学实验题目小鼠睾丸细胞染色体标本的制备及观察学号 小鼠睾丸细胞染色体标本的制备及观察 一．实验目的 1．了解快速制备动物染色体标本的方法，掌握小鼠睾丸细胞染色体标本的制备方法。 2．观察小鼠睾丸染色体的数目及其形态特征。 3．掌握小鼠睾丸染色体标本制备基本过程，了解操作步骤的原理。 二．实验原理 （一）染色体 染色体是基因的载体。真核细胞染色体的数目和结构是重要的遗传指标之一。制备染色体标本无疑是细胞学最基本的技术之一，优良的染色体制片是进行染色体显带、组型分析、原位杂交等的先决条件。 染色体的制备在原则上可以从所有发生有丝分裂的组织和细胞悬浮液中得到。最常用的途径是从骨髓细胞、血淋巴细胞和组织培养的细胞中制备染色体。本实验采用的方法是从小鼠的睾丸细胞中获取。 染色体的形态结构在细胞增殖周期中是不断地运动变化的，一般在有丝分裂中期，染色体的形态最典型、最易辨认和区分。因此，制备染色体标本获取的是中期细胞。 染色体特征： 1.数目（2n=？） 2.长度（绝对长度、相对长度） 3.着丝粒位置（M/SM/ST/T） 4.随体与次溢痕的数目、大小和位置 5.带型分析 （二）操作方法 小型动物的染色体制片最好最有效的材料就是骨髓组织（由于分裂活动旺盛，睾丸也可以）。利用睾丸细胞的制片技术虽然需要离心以及细致的操作，但其基本程序是简便的。在小鼠睾丸中，细胞有丝分裂和减数分裂比较旺盛，因此不需要体外培养就可以直接得到分裂中期细胞。通过小鼠睾丸得到染色体比较简便，一般不需要无菌操作。用秋水仙素作为有丝分裂的抑制剂。 由于小鼠睾丸细胞分裂活动旺盛，具有高度的分裂能力，本实验采用这一材料，通过前处理、低渗、固定、制片、染色等步骤制得染色体标本，可观察到许多处于分裂中期的染色体，可以进行染色体组型分析。 减数分裂是细胞分裂染色体数目减半时发生在性细胞的形成过程中。哺乳动物在性成熟以后，精巢内的性细胞总是在分批分期不断的成熟，因此，对哺乳动物的精巢进行一定的技术处理，随时都可以获得减数分裂过程中各个时期染色体的标本。 用适量的秋水仙素溶液注入动物腹腔内，可以阻止分裂细胞纺锤丝的形成，

男性克氏征的临床表现

男性克氏征的临床表现 *导读：先天性睾丸发育不全综合征或称小睾丸症（Klinefelter’s综合征，简称克氏征），Klinefelter于1942年首先发现并描述了小睾丸及青春期乳房发育为临床特征。1959年Jacobs等首次用细胞遗传学方法发现了1例克氏征患者，证实了他的染色体有异常。…… 先天性睾丸发育不全综合征或称小睾丸症（Klinefelter’s综合征，简称克氏征），Klinefelter于1942年首先发现并描述了小睾丸及青春期乳房发育为临床特征。1959年Jacobs等首次用细胞遗传学方法发现了1例克氏征患者，证实了他的染色体有异常。 本征在新生男婴中发病率为1／700～1／800，在男性生殖腺发育不全和无生育患者中高达30%。多数患者核型为47，XXY，占80%，还有其它几种类型。由于染色体在减数分裂期的不分离造成的嵌合体，约占1／3，核型为46，XY／47，XXY或45，X／47，XXY，患者有可能一侧睾丸发育正常。其它多倍体XXYY，XXXY等比较少见。 克氏征其个体表现为男性，以幼年及少年时期体征不明显，而到青春发育时期逐渐出现乳房增大、胡须、阴毛及腋毛稀少、肩窄、臀宽等女性体态。一少部分病人有女子性情，外生殖器仍具备男性特点，但睾丸小而软，性功能低下，精液无精子。睾丸活检示

间质增生，生精小管玻璃样变，精子发生完全停止或严重减少。约1／4病人出现智力发育障碍，而且XX染色体越多智力发育障碍越明显。据统计，此类患者乳腺癌发病机会较高，垂体促性腺激素，特别促卵泡刺激素FSH，在血浆及尿中浓度均较高，而血浆睾酮浓度则低于正常，对绒毛膜促性腺激素及睾酮的反应很差。治疗上以补充雄性激素不足为主，一般可每3～4周注射200mg，对雄性化有帮助，但不能影响女性型乳房。为了外观或心理因素，有时可作乳房成型术。