FISH试剂盒说明书

FISH试剂盒说明书

FISH样本的制备→探针的制备→探针标记→杂交→染色体显带→荧光显微镜检测→结果分析。 FISH(fluorescence in situ hybridization)荧光标记的原位杂交技术

试剂和说明

提供的材料

一盒包含4种试剂，可做20次试验，一次检测22mm×22mm靶区。

X/Y DNA探针盒：

X/Y DNA探针（已提前变性）：﹣20℃避光保存

DAPIⅡ复染剂：﹣20℃避光保存

NP-40：﹣25~﹣30℃

22×SSC：﹣20℃~﹣25℃

储存和处理

未开封X/Y DNA试剂盒﹣20℃避光干燥处保存。20×SSC盐和NP-40可以单独储存于室温。阳性对照片应在-20 ℃条件下，密封加干燥剂保存。

需要但公司不提供的材料

实验室试剂超纯甲酰胺

100%乙醇，室温储存浓缩的（12N）盐酸 1N氢氧化钠

纯净水（蒸馏水或去离子水或Milli-Q），室温储存固定剂（3:1 甲醇：乙酸）每日新鲜配置 Drierite(商品名，干燥用无水硫酸)和液氮

实验室设备

荧光显微镜设备和推荐的滤光片

相差光学显微镜

预清洁的显微镜玻片

载玻片加热器（45℃-50℃）

22mm×22mm玻璃盖玻片

可调容积吸管（1-10ul）和无菌微量移液管头

聚丙烯微量离心管（0.5ml或1.5ml）

计时器磁力搅拌器漩涡混合器微量离心机刻度量筒

水浴锅（67±2℃和73±1℃）有氧培养箱（42℃）钻石笔湿盒镊子

一次性注射器（5ml）

染色缸（6）建议型号：Wheaton Product.No.900620竖式染色缸

pH剂和pH试纸温度计

金属丝试管架橡胶胶水

0.45um细孔过滤设备

工作液的准备

20×SSC

66g 20×SSC

200ml 纯化水

250ml 最终量

彻底混合，用pH计室温下测pH。如果需要，用浓盐酸调pH到5.3。加纯水至总量250ml。通过0.45um孔径的过滤设备过滤。室温储存6个月。

变性液

49ml 甲酰胺

7ml 20×SSC pH 5.3

14ml 纯化水 70ml 最终量

充分混合，放置于玻璃染缸。用pH计室温下测pH。确保pH在7.0-8.0。储存于有盖容器2-8℃。可最多使用1周。每次用前测定pH。

乙醇洗液

用100%乙醇和纯化水v/v稀释70%，85%。盖紧容器盖子室温下储存。若未发生蒸发或因过量使用所致溶液稀释，可使用1周。

0.4×SSC洗液

950ml 纯化水

20ml 20×SSC pH 5.3

1000ml 最终量

彻底混合。用pH计室温下测pH，用1N氢氧化钠调pH至7.0-7.5。加纯水至总量1000ml。通过0.45um孔径的过滤设备过滤。未使用过的液体室温储存6个月。使用过的液体当日丢弃。

0.1%NP-40在2×SSC中

100ml 20×SSC pH 5.3

849ml 纯化水

1ml NP-40

1000ml 最终量

彻底混合，用pH计室温下测pH，用1N氢氧化钠调pH至7.0-7.5.加纯水至总量1000ml。通过0.45um孔径的过滤设备过滤。加入70ml至染缸中保持室温。未使用的液体于加盖容器中室温储存6个月。使用过的液体当日丢弃。

标本收集、处理、储存和玻片准备

标本收集和处理

FISH测试步骤

标本DNA变性：

1. 在准备玻片前将杂交湿盒（一个密闭容器）置于42℃培养箱预热至42℃。

2. 加入变性液至玻片染色缸并于73±1℃水浴至少30min。使用前测量温度。

3. 标本DNA变性：将准备好的玻片浸泡在73±1℃变性液中5min。每一个玻片染色缸一

次不要放入超过4张玻片。

4. 用镊子将玻片从变性液中移出并立即置于室温下70%酒精洗液。摇动玻片除去甲酰胺。让玻片立于酒精洗液中1min。

5. 从70%酒精中移出玻片，依次用85%、100%酒精重复步骤4。

6. 晾干多余的酒精：用吸墨纸触及玻片底边并用实验室擦拭纸擦拭玻片下面。 P5

7. 在滴加探针溶液前，将玻片置于45-50℃载玻片加热器上不超过2min。

注意：如果在探针准备好之前玻片已备好超过2min，玻片应保留在100%酒精广口瓶内。在将玻片置于玻片加热器前不要风干。

探针准备

1. 将探针在室温复温，以降低其粘度便于准确吸取。

2. 涡流混合。在微量离心机轻微离心1-3s，使内容物沉于试管底部。再次轻轻涡流混合。

注意：探针是提前变性的，在标本玻片上滴于靶区。

杂交

1. 将10ul探针溶液滴于玻片的靶区。立即将22mm×22mm盖玻片覆盖于探针溶液上使溶液在盖玻片下均匀扩散。气泡会干扰杂交，应避免。

注意：在盖上盖玻片前勿将探针溶液滴在多个靶区。

2. 将玻片置于提前预热至42℃的杂交湿盒中，盖紧湿盒的盖子。

3. 将杂交湿盒放于42℃培养箱，杂交过程至少30min。

注意：在一些标本中，为获取更强的信号，也许需要更长的杂交时间。可能过夜培养（长达16小时）。超过1小时的培养，盖玻片必须用橡胶胶水一类的可清除密封剂密封，杂交湿盒必须加湿。

过程如下:

用5ml注射器抽橡胶胶水。在盖玻片和玻片周围涂少量橡胶胶水，从而形成密封圈。

将玻片置于加湿的杂交湿盒中（一个密闭容器,内置一片浸湿的吸墨纸或在容器内侧贴1in.×3in.纸巾）。

用密闭门关盖湿盒，培养1-16小时。培养后，从玻片上除去橡胶胶水。

杂交后洗涤

1. 加入0.4×SSC（pH7.0-7.5）至玻片染色缸中。将玻片染色缸放于73±1℃水浴中至少30min 或者直至溶液温度达到73±1℃，以预热0.4×SSC溶液。

注意：如果一次杂交的玻片数量超过4片，必须分批次洗涤。每次洗涤前洗液温度必须回至73±1℃。

2. 从第一张玻片的靶区移去盖玻片并立即将玻片置于含0.4×SSC玻片染色缸中。摇动玻片1-3秒。重复操作剩下3张玻片，73±1℃温育2min。

注意：在新加入玻片前不要移去盖玻片？在最后一张玻片加入水浴后开始计时2min。 3. 从水浴中拿出所有玻片放于室温2×SSC/0.1%NP-40缸中50-60s。玻片放置于水浴后摇动

1-3s。

4. 在暗处风干玻片（密闭抽屉或含架子的密闭橱柜）。

5. 用10ul的DAPIⅡ复染液滴于玻片靶区，覆盖盖玻片。在信号计数前将玻片储存于暗处。储存在﹣20℃的暗处储存杂交玻片（含盖玻片）。在此条件下玻片可以储存12个月而没有荧光信号强度的显著丢失。若要延长储存时间，需将盖玻片密封以防干燥同时﹣20℃储存。

信号计数评估玻片

用以下标准评估：探针信号强度：信号应明亮，清晰，可计。信号应为明亮紧凑的椭圆形或线性弥散的椭圆形。背景：黑暗，无荧光颗粒，无朦胧。交叉杂交/目标特异性：探针应只在目标上杂交和显影（X染色体着丝点或Y染色体的Yq12）需评估中期分裂相以发现交叉杂交和非目标序列。至少有98%的细胞应表现1个或更多信号。

（参看以下信号计数指南）

问题解决指南，处理新鲜玻片。

选择最佳视野和可计数的细胞核

用25×物镜扫视杂交区域，观察标本分布。挑选标本分布稀疏，无间期与中期分裂相重叠处，视野内可见间期或中期分裂相。避免细胞密集，重叠，或单个核的核边界不清。避免丛密细胞区。只计数信号清晰的细胞。计数

用40×或63×物镜，选定视野的左上区，从左至右，计数每个可计数中期分裂相细胞（计数＞20个）的信号数或每个可计数间期细胞核（计数＞500个）边界内的信号数。计数200个间期细胞核后若有5%以上无杂交信号则杂交失败。

ADP含量试剂盒使用说明

ADP含量试剂盒使用说明 产品简介： ADP广泛存在于动物、植物、、微生物和培养细胞中，是描述细胞能量代谢状态的主要参数。测定ADP含量并且计算能荷，能够反映能量代谢状态。 ADP在254nm下有吸收峰，可以利用高效液相色谱法测定其含量。 试验中所需的仪器和试剂： 高效液相色谱仪、低速离心机、溶剂抽滤装置、针头式过滤器（水系，50个，0.22μm）、滤膜（水系和有机系各1个，0.45μm）、C18柱（4.6×150mm）、可调式移液器、样品瓶（50个，2mL）、甲醇（色谱级，300mL）、甲醇（色谱级，300mL）、蒸馏水 产品内容： 试剂一：液体60mL×1瓶，4℃保存； 试剂二：液体60mL×1瓶，4℃保存； 试剂三：粉剂1×1瓶，粉剂2×1瓶，4℃保存；临用前用少量蒸馏水将粉剂1和粉剂2溶解后倒入1000mL容量瓶中，用蒸馏水定容至1000mL，形成流动相缓冲液基质（注：试剂瓶中的粉剂要冲洗干净）,4℃可保存1周； 试剂四：ADP标准品5mg×1支，-20℃保存。临用前加入1mL双蒸水，配成5mg/mL溶液，配好后-20℃可保存1周； 操作步骤： 一、实验前的准备工作： 1、将双蒸水1000mL、流动相缓冲液基质1000mL和甲醇300mL用0.45μm的滤膜抽滤，以除去溶剂中的杂质，防止堵塞色谱柱。（注：双蒸水和缓冲液基质用水系滤膜抽滤，甲醇用有机系滤膜抽滤）。 2、流动相的配制：将抽滤完毕的流动相缓冲液基质1000mL与甲醇配比为99.9：0.1（v/v），即取999mL缓冲液基质与1mL甲醇混合。

3、将抽滤完毕的甲醇和双蒸水配比成100%的甲醇，10%的甲醇，双蒸水各250mL。将2和3中的溶剂超声30分钟，以脱去溶剂中的气泡，防止堵塞色谱柱。 二、ADP的提取： 1、组织的处理：准确称取组织重量0.1g，加入1mL试剂一，提取ADP，4000g常温离心15min，取上清液，加入等体积的试剂二，混匀，4000g常温离心15min，取上清，0.22μm水系微孔滤膜过滤后冰上放置，待测。 2、细胞处理：收集约30mL细胞，离心菌体经干燥后，加入1mL试剂一，超声破壁细胞(950 W，30%，15min，工作1s间隔2s)，4000g常温离心15min，取上清液，加入等体积的试剂二，混匀，4000g常温离心15min，取上清，0.22μm水系微孔滤膜过滤后冰上放置，待测。 三、ADP含量测定操作步骤： 1.开启电脑、检测器和泵，安装上色谱柱，打开empower软件，在方法组中设置进样量20μL，流速1mL/min，保留时间10min，检测波长254nm,设置完毕保存方法组。 2.用100%的甲醇、10%的甲醇、双蒸水按甲醇浓度从大到小的顺序洗色谱柱30min。 3.用流动相洗柱子，待基线稳定后开始加样。 4.加入标准品20μL，在10min内可分离ADP，ADP的保留时间在4min左右（柱子不同，保留时间有差异），计算不同浓度的ADP标准品的峰面积。 5.加入样品20μL，在相应保留时间处检测ADP的峰面积。 ADP含量的计算： 将5mg/ml的ADP标准品用双蒸水分别稀释成100μg/ml、80μg/ml、60μg/ml、40μg/ml和20μg/ml的ADP标准品溶液，以标准品浓度（μg/ml）为横坐标，峰面积为纵坐标分别计算ADP标准曲线。 注：标准品的稀释倍数要根据样品中ADP浓度确定，样品中ADP的峰面积必须落在不同浓度的ADP标准品的峰面积之内，该标准品稀释倍数只是一个参考。

人elisa试剂盒,人8羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)ELISA试剂盒使用说明书

人elisa试剂盒,人8羟基脱氧鸟苷（8-OHdG）ELISA 试剂盒使用说明书 本试剂仅供研究使用标本：血清或血浆 樊克生物专业供应： 使用目的：本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本8羟基脱氧鸟苷 （8-OHdG）含量。 试验原理： 8-OHdG试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知8-OHdG浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板 内进行检测。先将8-OHdG和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合 的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中8-OHdG的浓度呈比例关系。 试剂盒内容及其配制 试剂盒成份（2-8℃保存）96孔配置48孔配置配制 96/48人份酶标板1块板（96T）半块板（48T）即用型 塑料膜板盖1块半块即用型 标准品：80ng/ml 1瓶（0.6ml）1瓶（0.3ml）按说明书进行稀 稀 空白对照1瓶（1.0ml）1瓶（0.5ml）即用型 标准品稀释缓冲液1瓶（5ml）1瓶（2.5ml）即用型 生物素标记的抗8-OHdG抗体1瓶（6ml）1瓶（3.0ml）即用型 亲和链酶素-HRP 1瓶（10ml）1瓶（5.0ml）即用型 洗涤缓冲液1瓶（20ml）1瓶（10ml）按说明书进行稀 释 底物A 1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型 底物B 1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型 终止液1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型 标本稀释液1瓶（12ml）1瓶（6.0ml）即用型 自备材料 1．蒸馏水。 2．加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。 3．振荡器及磁力搅拌器等。 安全性

β-葡萄糖苷酶测定试剂盒使用说明

β-葡萄糖苷酶测定试剂盒使用说明 分光光度法50管/24样货号：BC2560 产品简介： β-GC（EC3.2.1.21）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，催化β-糖苷键水解，具有多方面生理作用：在纤维素的糖化作用中，β-GC负责进一步水解纤维素二糖和纤维素寡糖生成葡萄糖；β-GC水解萜烯类香气前驱体，使糖苷键合态变成游离态。从而产生香味；β-GC能够水解植物体内野黑樱苷，释放HCN，从而防止昆虫取食。 β-GC分解对-硝基苯-β-D-吡喃葡萄糖苷生成对-硝基苯酚，后者在400nm有最大吸收峰，通过测定吸光值升高速率来计算β-GC活性。 试验中所需的仪器和试剂： 可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1ml玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。 产品内容： 提取液：液体50ml×1瓶，4℃保存。 试剂一：粉剂×2瓶，-20℃保存；临用前每瓶加入10ml双蒸水，充分溶解备用；用不完的试剂仍-20℃保存。 试剂二：液体25ml×1瓶，4℃保存。 试剂三：液体80ml×1瓶，4℃保存。 标准品：液体×1支，取1.5ml EP管加入1ml，5mol/ml的对硝基苯酚溶液。 操作步骤： 一、样品的前处理：

1.细菌或培养细胞： 先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（ml）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1ml提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；15000g4℃离心10min，取上清，置冰上待测。 2.组织： 按照组织质量（g）：提取液体积(ml)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1ml 提取液），进行冰浴匀浆。15000g4℃离心10min，取上清，置冰上待测。 3、标准样品的准备：取100μL标准液，加入到400μL试剂三中，得到1mol/ml标准液，十倍稀释到100nmol/ml，倍比稀释：50、25、12.5、6.25nmol/ml，稀释液用试剂二。100、 50、25、12.5、6.25nmol/ml做标准液。 二、测定步骤： 1.分光光度计预热30min以上，调节波长至400nm，蒸馏水调零。 2.加样表 试剂名称（μl）对照管测定管标准管试剂一400 试剂二500500 样本100100 迅速混匀，放入37℃准确水浴30min后，立即放入沸水浴中煮沸5min（盖紧，以防止 水分散失），流水冷却后充分混匀（以保证浓度不变） 试剂一400 充分混匀，8000g，4℃，离心5min，取上清液

TPPA试剂盒说明书

T P P A试剂盒说明书-CAL-FENGHAI.-(YICAI)-Company One1

梅毒TPPA试书剂盒说明书 1、试验原理： 梅毒抗体检测是采用抗原抗体凝集反应中的抗原抗体凝集反应。其原理如下：将梅毒 (Nichols 株)的精制菌体成分包被在人载体明胶粒子上。这种致敏粒子和样品中的梅毒螺旋体（TP）抗体进行反应发生凝集，产生粒子凝集反应（TP）抗体，并且可用来测定抗体效价。 2、样本收集和贮存： 血清或血浆1ml，标本应无溶血，无脂血，无微生物污染。不满足上述要求的标本拒收，标本的采集应使用清洁，无菌的一次性的干燥管。 标本用量最少50ul，七天内检测的标本应在2-8℃保存，贮存在-20℃可保存4W，同时避免反复冻融血清。 3、安全防范： 3．1此试剂盒内含人血成分。尽管所有的对照及定点对照都已经过试验验证并且发现对于乙型肝炎表面抗原，丙型肝炎抗体，HIV抗体均为阴性；但仍认为它们具有潜在的感染性。 3．2移液过程禁止用口。 3．3 在处理试剂和标本的地方禁止吸烟，饮食。 3．4使用试剂盒和标本时，必须戴一次性手套，穿试验服。使用后请彻底洗手清洁。 3．5患者样本及其他潜在感染材料试验后应放入医用垃圾桶内。 3．6试剂的溶解液，血清稀释液和阳性对照血清含有叠氮钠作为防腐剂,叠氮钠可以和铅铜反应形成爆炸的金属叠氮化合物.为防止金属叠氮化合物的形成,应用大量的水冲洗以免其堆积. 4、试剂： 4．1 储存与稳定性： 试剂应在2-10℃保存。 冻干试剂必须在复溶后的当天使用，如果保存在2-10℃最多可使用7天。 4．2 试剂盒组成：（由富士瑞士欧公司出产） （1）溶解液（液体） 8mL×1瓶 用于调制致敏粒子和未致敏粒子。 （2）血清稀释液 29mL×1瓶 用于样品的稀释。 （3）致敏粒子（冷冻干燥）

小鼠cfos试剂盒使用方法

小鼠c-fos试剂盒使用方法 检测范围：96T 20pg/ml-480pg/ml 使用目的： 本试剂盒用于测定小鼠血清、血浆及相关液体样本中c-fos含量。 实验原理 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠c-fos水平。用纯化的小鼠c-fos抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入c-fos，再与HRP标记的c-fos抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的c-fos呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中小鼠c-fos 浓度。 试剂盒组成 1 30倍浓缩洗涤液20ml×1瓶7 终止液6ml×1瓶 2 酶标试剂6ml×1瓶8 标准品（960pg/ml）0.5ml×1瓶 3 酶标包被板12孔×8条9 标准品稀释液 1.5ml×1瓶 4 样品稀释液6ml×1瓶10 说明书1份 5 显色剂A液6ml×1瓶11 封板膜2张 6 显色剂B液6ml×1/瓶12 密封袋1个 标本要求 1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融 2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。 操作步骤 1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀 释。 480pg/ml 5号标准品150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液 240pg/ml 4号标准品150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液 120pg/ml 3号标准品150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液 60pg/ml 2号标准品150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液 30pg/ml 1号标准品150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液 2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、 待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。 3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。 4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用 5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此 重复5次，拍干。 6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。 7.温育：操作同3。

人MyoDELISA试剂盒使用说明书

人Myo-DELISA试剂盒使用说明书 本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定人血清，血浆及相关液体样本中人Myo-D含量。 实验原理： 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人Myo-D水平。用纯化的人Myo-D抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入Myo-D，再与HRP标记的Myo-D抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的Myo-D 呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人Myo-D浓度。 样本处理及要求： 1.血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上 清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。 2.血浆：应根据标本的要求选择EDTA、者柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合10-20分钟后， 离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。 3.尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中 如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。 4.细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

加A试剂盒使用说明书

编码品名规格单位 北京华越洋生物 加A试剂盒50次盒GX9133 北京华越洋生物 加A试剂盒100次盒GX9133 产品及特点本产品利用Taq DNA polymerase的不依赖于模板的末端转 移酶活性，在只有dATP存在的情况下，在平末端的DNA片段加 上一个dA尾巴，使平末端片段也能被T载体克隆。 1.简单, 2X Tailing Buffer 中含有所需要的所有成分,不需要 单独准备。 2.适用于任何平末端的DNA片段，包括Pfu DNA polymerase等酶合成的DNA片段。 3.产物可以直接用于与T载体的连接。 规格及成分成份50 次包装 2 X Tailing Buffer 1.25 mL Taq DNA olymerase(5U/uL) 50 uL 使用手册1份运输及保存低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。 自备试剂PCR片段 使用方法一：反应前纯化处理： 用Vent, Deep Vent, Pfu, Pwo等具有3到5外切活性的 DNA聚合酶扩增得到的DNA片段，必须经过彻底的去除残留的酶 的处理过程（如酚/氯仿抽提或Proteinase K处理），否则它们将 在加A反应时，切除掉加上的A尾巴，干扰反应。可以采取胶回收 和酚/氯仿抽提法等常规方法纯化，最后溶解在水或TE中，终浓度 以0.1 ug/uL为宜。 二：加A反应

在干净的0.5 mL或1.5 mL离心管中，分别加入下列成分： 回收的DNA片段(0.2-2 ug) 25 uL 2 X dA Tailing Buffer 1 uL Taq DNA polymerase（5 U/uL） 补水到50 uL 72℃保温2小时 三：反应后处理 加A反应后，Taq DNA polymerase将与DNA末端紧密结合，所以必须酚/氯仿抽提去除。如果使用Proteinase K处理后再 用酚/氯仿抽提效果会更好。得到的DNA溶于适量水和TE中后即 可用于T载体的连接反应。 疑难解答Q：Taq DNA polymerase加尾有特异性吗？ A：在有四种核苷酸存在的反应体系中，Taq DNA polymerase加 尾特异性跟DNA的3’末端的核苷酸有关。如果要加T，要加尾的 DNA片段最好末位为T。如果要加A，要加尾的DNA片段最好末 位为C。其关系具体见下表： 3’末端核苷酸加尾核苷酸 A A,但效率极低 C A>C G G>A>C T T>A --DNA & Cell Biol. 12:763, 1993 关联产品加T试剂盒（dT Tailing Kit）、一站式T载体制备套装

Annexin V-FITC 凋亡检测试剂盒操作方法及步骤说明书

Annexin V-FITC凋亡检测试剂盒 说明： 细胞凋亡是细胞的基本特征之一，它在机体的胚胎发育、组织修复、内环境的稳定等方面起着十分重要的作用。Annexin Ⅴ是一种分子量为35-36kD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，能与细胞凋亡过程中翻转到膜外的磷脂酰丝氨酸（Phosphatidylserine，PS）高亲和力特异性结合。以标记了FITC的Annexin Ⅴ作为荧光探针，利用流式细胞仪或荧光显微镜可检测细胞凋亡的发生。 Propidium iodide（PI）是一种核酸染料，它不能透过完整的细胞膜，但在凋亡中晚期的细胞和死细胞，PI能够透过细胞膜而使细胞核红染。将Annexin Ⅴ与PI匹配使用，可以将凋亡早期的细胞和晚期的细胞以及死细胞区分开来。 产品组成（50／25次反应）： · Annexin V-FITC 500ul／250ul（20ug /ml） · Binding Buffer 40ml／20 ml · Propidium Iodide (PI) 250ul／125ul（50ug /ml） 保存条件: 2-8℃储存，有效期一年。 注意事项： 1.为保证得到理想的实验结果，在使用此试剂盒之前请认真阅读该注意事项； 2.试剂（尤其是小瓶装的试剂）在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖 时液体洒落； 3.Propidium iodide（PI）能通过皮肤吸收，对眼睛有刺激作用； 4.此试剂盒仅供科研使用，不宜用于临床诊断； 5.本试剂盒中提供的PBS为随试剂赠送，并非试剂盒的真正组成成分；细胞的洗涤同常规方法。 操作注意要点： 1.整个操作过程动作要尽量轻柔，勿用力吹打细胞，尽量在4℃下操作； 2.反应完毕后请尽快检测，因为细胞凋亡是一个动态的过程，反应1小时后荧光强度就开始衰 变；

生物素标记试剂盒使用说明书

生物素标记试剂盒 使用说明书 货号: EBLK0002

产品介绍： Elabscience生物素标记试剂盒提供了生物素标记所需全部试剂，用于含有氨基（NH2-）抗体的标记。生物素已经活化，可直接使用，每个试剂盒足以完成3次标记，每次可标记0.2-2mg。试剂盒中包括6个用于抗体标记脱盐的Filtration tube，不用透析，操作简便，熟练操作90min可完成整个标记过程。 产品特点： 试剂全面:本试剂盒提供了生物素标记所需全部试剂。 快速:整个过程仅需90min。 方便:通过Filtration tube即可脱盐，无需透析或者凝胶过滤。 使用灵活:既可用于微量标记又可大量标记，每次可标记0.2-2mg。 理想的标记效果:已经优化确定了最适的标记比例，降低标记不足或由于过度标记而失活的可能性。 产品组成： 标记过程需要仪器： 1. 10ul，50ul，200ul，1000ul可调高精度移液器 2. 恒温箱（37℃） 3. 离心机（离心力可达到12,000×g） 储存条件： 本试剂盒未开封前在2-8℃可稳定保存一年

生物素标记反应原理： NH2-Reactive Biotin专一地与伯胺反应（N-末端及赖氨酸残基侧链）形成稳定的酰胺键 生物素标记NH 2 -Reactive Biotin使用量的计算： 每个反应中生物素试剂的使用量取决于待标记蛋白质的量和浓度。通过优化，我们确定了标记2mg/ml的抗体（IgG ，150KD），使用生物素和抗体的分子比为20:1能达到较理想的标记效果。 1、标记2mg/ml的抗体，使用生物素和抗体的分子比为20:1时，应加入生物素量的计算方 法： ml蛋白×2mg蛋白 ml蛋白×1mmolIgG 150,000mgIgG ×20mmol生物素 mmol蛋白 = mmol生物素 2、对于10mmol的生物素溶液，应加入反应中该生物素体积的计算方法： mmol生物素×1,000,000μL L ×L 10mmol = ul生物素 计算示例： 对于0.5ml 2mg/ml的IgG（分子量为150,000）溶液，需加入10mM的生物素溶液13.3ul。 0.5ml IgG×2mgIgG 1mLIgG ×1mmolIgG 150,000mgIgG ×20mmol生物素 1mmolIgG =0.000133mmol生物素 0.000133mmol生物素×1,000,000μl L ×L 10mmol =13.3ul生物素溶液 操作过程： 实验前准备： 1.仔细阅读使用说明书。 2.计算待使用NH2-Reactive Biotin的量。 3.提前20min从冰箱中取出试剂盒，平衡至室温（注：不需要用到的NH2- Reactive Biotin 继续放置冰箱中）。

AMP含量试剂盒使用方法及注意事项等说明

AMP含量试剂盒使用方法及注意事项等说明 产品简介： AMP广泛存在于动物、植物、、微生物和培养细胞中，是描述细胞能量代谢状态的主要参数。测定AMP含量并且计算能荷，能够反映能量代谢状态。AMP在254nm下有吸收峰，可以利用高效液相色谱法测定其含量。 试验中所需的仪器和试剂： 高效液相色谱仪、低速离心机、溶剂抽滤装置、针头式过滤器（水系，50个，0.22μm）、滤膜（水系和有机系各1个，0.45μm）、C18柱（4.6×150mm）、可调式移液器、样品瓶（50个，2mL）、甲醇（色谱级，300mL）、甲醇（色谱级，300mL）、蒸馏水产品内容： 试剂一：液体60mL×1瓶，4℃保存； 试剂二：液体60mL×1瓶，4℃保存； 试剂三：粉剂1×1瓶，粉剂2×1瓶，4℃保存；临用前用少量蒸馏水将粉剂1和粉剂2溶解后倒入1000mL容量瓶中，用蒸馏水定容至1000mL，形成流动相缓冲液基质（注：试剂瓶中的粉剂要冲洗干净）,4℃可保存1周； 试剂四：AMP标准品5mg×1支，-20℃保存。临用前加入1mL双蒸水，配成5mg/mL 溶液，配好后-20℃可保存1周； 操作步骤： 一、实验前的准备工作： 1、将双蒸水1000mL、流动相缓冲液基质1000mL和甲醇300mL用0.45μm的滤膜抽滤，以除去溶剂中的杂质，防止堵塞色谱柱。（注：双蒸水和缓冲液基质用水系滤膜抽滤，甲醇用有机系滤膜抽滤）。 2、流动相的配制：将抽滤完毕的流动相缓冲液基质1000mL与甲醇配比为99.9：0.1（v/v），即取999mL缓冲液基质与1mL甲醇混合。

3、将抽滤完毕的甲醇和双蒸水配比成100%的甲醇，10%的甲醇，双蒸水各250mL。将2和3中的溶剂超声30分钟，以脱去溶剂中的气泡，防止堵塞色谱柱。 二、AMP的提取： 1、组织的处理：准确称取组织重量0.1g，加入1mL试剂一，提取AMP，4000g常温离心15min，取上清液，加入等体积的试剂二，混匀，4000g常温离心15min，取上清，0.22μm水系微孔滤膜过滤后冰上放置，待测。 2、细胞处理：收集约30mL细胞，离心菌体经干燥后，加入1mL试剂一，超声破壁细胞(950W，30%，15min，工作1s间隔2s)，4000g常温离心15min，取上清液，加入等体积的试剂二，混匀，4000g常温离心15min，取上清，0.22μm水系微孔滤膜过滤后冰上放置，待测。 三、AMP含量测定操作步骤： 1.开启电脑、检测器和泵，安装上色谱柱，打开empower软件，在方法组中设置进样量20μL，流速1mL/min，保留时间10min，检测波长254nm,设置完毕保存方法组。 2.用100%的甲醇、10%的甲醇、双蒸水按甲醇浓度从大到小的顺序洗色谱柱30min。 3.用流动相洗柱子，待基线稳定后开始加样。 4.加入标准品20μL，在10min内可分离AMP，AMP的保留时间在7min左右（柱子不同，保留时间有差异），计算不同浓度的AMP标准品的峰面积。 5.加入样品20μL，在相应保留时间处检测AMP的峰面积。 AMP含量的计算： 将5mg/ml的AMP标准品用双蒸水分别稀释成100μg/ml、80μg/ml、60μg/ml、40μg/ml和20μg/ml 的AMP标准品溶液，以标准品浓度（μg/ml）为横坐标，峰面积为纵坐标分别计算AMP 标准曲线。 注：标准品的稀释倍数要根据样品中AMP浓度确定，样品中AMP的峰面积必须落在不同浓度的AMP标准品的峰面积之内，该标准品稀释倍数只是一个参考。

高纯度质粒小提试剂盒使用说明书

高纯度质粒小提试剂盒 Pure Mini Plasmid Kit (目录号：HS0103) 产品包装 试剂盒成分 50 preps Buffer P1 15 ml Buffer P2 15 ml Buffer P3 20 ml Buffer PD 30 ml RNase A(10 mg/ml) 150 ul Buffer PW 60 ml Buffer EB 10 ml Spin Columns PA 50个 Collection Tubes (2 ml) 50个 （注意：使用前将全部RNase A 溶液加到Buffer P1中混合均匀，2 ~ 8℃保存） 保存条件 本试剂盒在室温(15 ~ 25℃)干燥条件下，可保存12个月；更长时间的保存可置于2 ~ 8℃。若溶液产生沉淀，应在使用前置于37℃下溶解沉淀。单独包装的RNase A 在室温可稳定保存12个月。加入RNase A 后的Buffer P1应置于2 ~ 8℃保存，可稳定保存6个月。 产品简介 本试剂盒用于高纯度质粒DNA 的小量制备与纯化。菌体经碱裂解、高盐、低pH 处理，质粒可从菌体中释放出来，并特异、高效地被离心柱硅胶膜（Spin Columns PA ）吸附。通过去蛋白液（Buffer PD ）和漂洗液（Buffer PW ）的清洗可去除蛋白及其他杂质，在低盐、高pH 条件下洗脱，最后得到高纯度的质粒DNA 。 北京厚生博泰科技有限公司 Beijing Hooseen Biotech Co., Ltd.

使用本试剂盒可从1 ~ 5 ml过夜培养的菌液中纯化得到高达20 ug的高纯度质粒DNA，可在30 min之内完成提取任务。所得质粒可直接用于酶切、转化、PCR、测序、低敏感细胞株的转染等各种常规分子生物学操作。 产品特点 1. 快速：步骤少，操作简便，节约时间。 2. 简便：离心吸附柱不需要预平衡，漂洗液Buffer PW 和去蛋白液Buffer PD不需要另加乙醇，即开即用。 3. 纯度高：所得质粒可直接用于酶切、转化、PCR、测序、低敏感细胞株的转染等各种常规分子生物学操作。 操作步骤 1. 取1 ~ 5 ml过夜培养的菌液，室温12,000 rpm离心1 min，尽量将上清去除干净。 （注意：根据菌液的浓度决定取液量，浓度高时取1 ml菌液离心即可，浓度低时可多收集一次） 2. 加入250 ul Buffer P1，用枪头充分吹打使菌体重悬均匀。 （注意：是否将RNase A溶液加到Buffer P1中并混合均匀；菌体沉淀是否悬浮充分，如有未彻底悬浮的菌块会影响裂解，导致提取的质粒浓度及纯度降低） 3. 加入250 ul Buffer P2，温和颠倒混匀6 ~ 8次，直到溶液变得清亮粘稠。 （注意：不可剧烈震荡，以免造成基因组DNA片段的污染，所用时间不要超过5 min，以免质粒受到破坏，如未完全变得清亮，可能是菌体太多，可增加Buffer P2的用量，在后续的操作中Buffer P3的用量也要相应增加） 4. 加入350 ul Buffer P3，立即温和颠倒混匀6 ~ 8次，可见白色沉淀物产生，室温静置2 min，然后12,000 rpm离心3 ~ 5 min。 （注意：Buffer P3加入后应立即混合，避免产生局部沉淀，如果上清中还有微小白色沉淀，可再次离心后取上清） 5. 小心将上清液转移到离心吸附柱Spin Columns PA中，静置2 min，让质粒DNA与吸附柱中的硅胶膜充分结合。12,000 rpm离心0.5 ~ 1 min，弃收集管中的废液。 6. 向吸附柱中加入500 ul去蛋白液，12,000 rpm离心1 min，弃收集管中废液。 （注意：如果宿主菌是endA-，如DH5α若TOP10，此步骤可省略。如果宿主菌是endA+，如TG1、BL21、HB101、JM101等，此步骤不可省略，因这些宿主菌含有大量的核酸酶，易降解质粒。如果提取低拷贝质粒

试剂盒使用说明书

牛气肿疽(symptoinatic anthrax)酶联免疫分析（ELISA） 试剂盒使用说明书 本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定牛血清，血浆及相关液体样本中牛气肿疽(symptoinatic anthrax)的含量。 实验原理： 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中牛气肿疽(symptoinatic anthrax)水平。用纯化的牛气肿疽(symptoinatic anthrax)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入牛气肿疽(symptoinatic anthrax)，再与HRP标记的牛气肿疽(symptoinatic anthrax)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的牛气肿疽(symptoinatic anthrax)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中牛气肿疽(symptoinatic anthrax)浓度。 试剂盒组成： 试剂盒组成48孔配置96孔配置保存说明书1份1份 封板膜2片（48）2片（96） 密封袋1个1个 酶标包被板1×481×962-8℃保存标准品：1800pg/ml0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存标准品稀释液 1.5ml×1瓶 1.5ml×1瓶2-8℃保存酶标试剂3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存样品稀释液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存显色剂A液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存显色剂B液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存终止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存浓缩洗涤液（20ml×20倍）×1瓶（20ml×30倍）×1瓶2-8℃保存 样本处理及要求： 1.血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上 清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。 2.血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心 20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。 3.尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程 中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。 4.细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/ 分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分

武汉科前生物猪繁殖与呼吸综合征ELISA试剂盒使用说明书

猪繁殖与呼吸综合征病毒ELISA抗体检测试剂盒使用说明书【样品制备】 取动物全血，按常规方法制备血清，要求血清清亮，无溶血。 【洗涤液配制】 使用前，浓缩的洗涤液应恢复至室温（25℃左右），并摇动使沉淀的盐溶解（最好在37℃水中加热5~10分钟），然后用蒸馏水或去离子水作20倍稀释（例如：每板用20ml浓缩液加上380ml水），稀释好的洗涤液在2~8℃可以存放7天。 【样品和对照稀释】 样品稀释：在血清稀释板中按1:40的体积稀释待检血清样品（195μl样品稀释液中加5μl待检血清样品）。 对照稀释：在血清稀释板中按1:4分别稀释阳性对照和阴性对照（180μl样品稀释液中加60μl对照血清）。 【注意事项】 1 试剂盒使用前各试剂应平衡至室温，使用后放回2~8℃。 2 不同批号试剂盒的试剂组分不得混用，使用试剂时应防止试剂污染。 3 不要用口移液。 4 底物液B不要暴露于强光，避免接触氧化剂。 5 未使用的抗原包被板切记不要撕开上面的封口膜。 6 待检血清样品数量较多时，应先使用血清稀释板稀释完所有要检测血清，再将稀释好的血清转移到检测板，使反应时间一致。 7 浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水稀释，如果发现有结晶加热使其溶解后再使用。 8 严格按照操作说明书可以获得最好的结果。 【操作步骤】 1 取抗原包被板（根据样品多少，可拆开分次使用），每孔加入稀释好的洗涤液200μl，静置3分钟倒掉液体，并在吸水纸上拍干，共计洗板2次。再分别将稀释好的待检血清和对照各取100μl加入到抗原包被板孔中，待检样品做1孔，阴性对照和阳性对照各设2孔，每孔100μl。轻轻振匀孔中样品（勿溢出），置37℃温育30分钟。 2 甩掉板孔中的溶液，每孔加入稀释好的洗涤液200μl，静置3分钟倒掉，再在吸水纸上拍干，共计洗涤5次， 3 每孔加羊抗猪酶标二抗100μl，置37℃温育30分钟。 4 洗涤5次, 方法同2。切记每次在干净吸水纸上拍干。 5 每孔先加底物液A一滴（50?l）、再加底物液B一滴（50?l）,混匀,室温(18℃~25℃)避光显色10分钟。 6 每孔加终止液一滴(50μl)，10分钟内测定结果（测定前在震荡器上轻轻震动一下）。 【结果判定】在酶标仪上测各孔OD630nm值。试验成立的条件是阳性对照孔平均OD630nm值≥0.7，阴性对照孔平均OD630nm值必须＜0.3。 样品OD630nm值＞0.42，判为阳性；样品OD630nm值介于0.38到0.42之间，判为可疑；样品OD630nm值＜0.38，判为阴性。 注意：用620~650纳米波长测定结果均有效。

BCA试剂盒操作说明

INSTRUCTIONS Warranty: Pierce products are warranted to meet stated product specifications and to conform to label descriptions when used and stored properly. Unless otherwise stated, this warranty is limited to one year from date of sale for products used, handled and stored according to Pierce instructions. Pierce’s sole liability for the product is limited to Number Description 23225BCA? Protein Assay Kit , sufficient reagents for 500 test tube or 5,000 microplate assays 23227 BCA? Protein Assay Kit , sufficient reagents for 250 test tube or 2,500 microplate assays Kit Contents: BCA? Reagent A , 1,000 ml (in Product No. 23225) or 500 ml (in Product No. 23227), containing sodium carbonate, sodium bicarbonate, bicinchoninic acid and sodium tartrate in 0.1 M sodium hydroxide BCA? Reagent B , 25 ml, containing 4% cupric sulfate Albumin Standard Ampules, 2 mg/ml , 10 x 1 ml ampules, containing bovine serum albumin (BSA)at 2.0 mg/ml in 0.9% saline and 0.05% sodium azide Storage: Upon receipt store at room temperature. Product shipped at ambient temperature. Note: If either Reagent A or Reagent B precipitates upon shipping in cold weather or during long-term storage, dissolve precipitates by gently warming and stirring solution. Discard any kit reagent that shows discoloration or evidence of microbial contamination. Table of Contents Introduction..................................................................................................................................................................................1Preparation of Standards and Working Reagent (required for both assay procedures)................................................................2Test Tube Procedure (Sample to WR ratio = 1:20).....................................................................................................................3Microplate Procedure (Sample to WR ratio = 1:8)......................................................................................................................3Troubleshooting...........................................................................................................................................................................4Related Pierce Products...............................................................................................................................................................5Additional Information................................................................................................................................................................5Cited References..........................................................................................................................................................................6Product References. (6) Introduction The BCA? Protein Assay is a detergent-compatible formulation based on bicinchoninic acid (BCA) for the colorimetric detection and quantitation of total protein. This method combines the well-known reduction of Cu +2 to Cu +1 by protein in an alkaline medium (the biuret reaction) with the highly sensitive and selective colorimetric detection of the cuprous cation (Cu +1) using a unique reagent containing bicinchoninic acid.1 The purple-colored reaction product of this assay is formed by the chelation of two molecules of BCA with one cuprous ion. This water-soluble complex exhibits a strong absorbance at 562 nm that is nearly linear with increasing protein concentrations over a broad working range (20-2,000 μg/ml). The BCA?method is not a true end-point method; that is, the final color continues to develop. However, following incubation, the rate of continued color development is sufficiently slow to allow large numbers of samples to be assayed together. The macromolecular structure of protein, the number of peptide bonds and the presence of four particular amino acids (cysteine, cystine, tryptophan and tyrosine) are reported to be responsible for color formation with BCA.2 Studies with di-,tri- and tetrapeptides suggest that the extent of color formation caused by more than the mere sum of individual color-producing functional groups.2 Accordingly, protein concentrations generally are determined and reported with reference to standards of a common protein such as bovine serum albumin (BSA). A series of dilutions of known concentration are 3747 N. Meridian Road P.O. Box 117 Rockford, IL 61105 BCA? Protein Assay Kit