细胞周期同步化
在细胞培养过程中，细胞多处于不同的细胞周期时相中，其中有少数细胞在进行有丝分裂活动，其余细胞分别处于G1、S和G2各期。不同时相的细胞对药物干预存在不同反应，会影响实验的重复性，因此，需要获得周期一致性的细胞。利用细胞同步化技术可使细胞大量的处于同一细胞时期，并可获得该时期大量的物质，如细胞中期时的染色体。细胞周期同步化(synchronization)是指为了研究某一时相细胞的代谢、增殖、基因表达或凋亡，借助某种自然或人为的实验手段,使细胞群体中处于细胞周期不同时相的细胞停留在同一时相( 除了G0期的细胞)的现象。细胞同步化本质上包括用一定的方法获得一定数量的同步化细胞群和使细胞进入同步化生长的两层含义。
DNA 合成抑制法是通过抑制DNA合成将细胞同步于同一时期的方法。高浓度TdR(胸腺嘧啶核苷)双阻断法是目前常用的抑制DNA 合成的同步化方法。它可逆地抑制DNA 合成，而不影响其他时期细胞的转运，最终可将细胞群阻断在S 期或G1 /S 交界处。其原理是: Td Ｒ是细胞DNA 合成不可缺少的前体，但向培养基中加入过量TdＲ，可形成过量的三磷酸腺苷，后者能反馈抑制其他核苷酸的磷酸化，从而抑制DNA 合成。它将细胞同步于G1 /S期交界处，同步化程度高，适用于任何培养体系，可将几乎所有的细胞同步化，但是容易产生非均衡生长，个别细胞体积增大。TdＲ双阻断法因为简单易行且可逆，在肿瘤药理方面对细胞周期同步化的实验中得到了广泛的应用。羟基脲、5-氟脱氧尿嘧啶、阿糖胞苷、氨甲蝶呤和高浓度ADR、GDR也属于DNA合成抑制剂，它们与TdR作用相似，均可通过抑制DNA合成达到同步化的目的。
中期阻断法是利用破坏微管的药物将细胞阻断在M期从而得到同一时期细胞的方法，常用的药物有秋水仙素等。秋水仙素通过抑制微管的聚合，进而抑制有丝分裂装置的形成，将细胞阻断于有丝分裂中期然后再释放使细胞达到同步化。中期阻断法非平衡生长问题不明显，但可逆性比较差，当阻断时间过长时，许多细胞产生异常分裂。过去研究中也发现，同步后的细胞的生长能力明显不如撤去阻断剂后得到的S期细胞旺盛。秋水仙胺、Nocodazole也是目前常用的中期阻断剂。
经过同步化之后的细胞可以通过流式细胞术对其周期进行分析。将细胞用PI（碘化丙啶）染液进行染色，使用流式细胞仪对细胞内DNA的相对含量进行测定，可分析细胞周期各时相的百分比。由于细胞的DNA含量在不同时期有显著的差异，因此可以将细胞分成
G1/G0期（1倍），S期（1-2倍）和G2/M期（2倍）。流式细胞仪可以根据DNA含量在不同时间内的变化,从而确定细胞周期的长短,也可以直接标记DNA复制（放射性同位素标记）,统计细胞数量与标记细胞的百分比,对细胞周期进行综合分析.
连续分裂的细胞从上一次有丝分裂结束到下一次有丝分裂完成所经历的整个过程为细胞周期(cell cyc1e)。细胞周期包含四个阶段：①G1期(first gap),又称合成前期，指前一次有丝分裂完成到DNA复制前的一段时期；②S期(synthesis phase),即DNA合成期，为真核细胞分裂(cell pision)间期中进行DNA合成的阶段；③G2期(second gap),为DNA合成后期，指DNA合成结束至有丝分裂开始之间的一个阶段；④M期 (mitosis or pision) ,又称D期，是染色体真正开始分离时期。细胞周期又可分为有丝分裂期（M期）和分裂间期(即G1→S→G2)两个时期。尽管细胞周期中各期的持续时间因不同细胞类型而异，但相对而言M期最短，S期较长。流式细胞仪（flow cytometer；FCM）的工作原理是在样品管中放入待测细胞，在气体的压力下使待测细胞进入充满鞘液的流动室。在细胞流动室里单细胞悬液被鞘流液包绕通过流动室内一定孔径的孔，形成细胞柱。然后通过对流动液体中单列的细胞进行逐一检测，得到单个细胞的光散射和荧光指标，在功能水平上定量分析出其体积、内部结构、DNA、RNA、蛋白质、抗原等的物理、化学特征等多个参数。流式细胞仪不仅可以根据不同时间内DNA含量的变化来确定细胞周期的长短，还可以直接用放射性同位素标记DNA复制，通过统计细胞数目与比较各时相细胞的百分比来检测是否达到预期目的，从而对细胞周期各时相进行综合分析。流式细胞分析法与传统的荧光镜检查相比，具有速度快、精度高、准确性好等优点，已成为当代最先进的细胞定量分析技术。
Hela细胞周期时间为21 h，其中G1期为10 h，S期为7 h，G2期为3 h，M期为1 h。
一、S期同步化方法（胸腺嘧啶核苷双阻断法，两次可让细胞同步化到G1/S期）
胸腺嘧啶核苷(TdR)双阻断法：在处于对数生长期细胞的培养基中首次加入过量的DNA合成抑制剂TdR，能可逆地抑制S期细胞的DNA生成，而不作用其他细胞阶段的运转，导致大多数细胞群被同步化于G1/S期交界处，但仍有部分细胞处于S期范围；移去胸腺嘧啶核苷，细胞再培养一段比S期较长而短于G2、M、G1三期总和的时间，让它们完全越过S 期，但又不使按周期发展最快的细胞进入下一个S期。第二次胸腺嘧啶核苷处理，当细胞继续运转至G1/S交界处时，被过量的胸腺嘧啶核苷抑制而停止。细胞则于G1/S期边界汇集，再次撤掉胸腺嘧啶核苷，加入完全培养基，使细胞继续生长，则细胞同时启动于S 期。5-氟脱氧尿嘧啶、羟基脲、阿糖胞苷、氨甲蝶呤、高浓度AdR和GdR等DNA合成抑制剂均可抑制DNA合成使细胞同步化，由于高浓度胸腺嘧啶核苷对S期细胞的毒性较小，因此常用胸腺嘧啶核苷双阻断法诱导细胞同步化。其优点是同步化程度高，适用于任何培养体系。几乎可将所有的细胞同步化，缺点是造成非均衡生长，个别细胞体积增大。
二、M期同步化方法（振荡收集法）
该法利用M期细胞变圆易脱落的特点。在处于对数增殖期的单层贴壁细胞（分裂活跃，M 期多）中加入Nocodazole。一段时间后，多数细胞被阻滞与M期，轻轻振荡或拍击培养瓶，M期细胞则与瓶壁脱离，悬浮在培养液中，收集培养液，之后再加入新鲜培养液，按照此法继续收集，可得到一定数目的M期细胞。振荡收集法操作简单，同步化程度高并且细胞不受药物伤害，能够真实反映细胞周期状况，缺点是由于M期较短，被分离出的细胞很少，只能应用于贴壁细胞。收集到的有丝分裂期的细胞可以贮存在冰上，然后处理其余的培养瓶。
三.实验用品
1.材料：Hela细胞。
2.试剂：%胰蛋白酶液、无血清细胞培养液、DAPI试剂、Hank’s液、2mmol/L TdR、70％乙醇（保存于4℃）、RNase-A（10mg/ml,-20℃保存）、PI（650 g/ml，避光保存于-20℃）、PBS (pH 保存于4℃)、秋水仙胺、秋水仙素。
3.器材：培养瓶、移液器、枪头、5ml注射器、试管、离心管、封口膜、微量移液器、Tips、烧杯、废液缸、细胞培养设备、倒置显微镜、台式离心机、水浴、4℃冰箱、二氧化碳培养箱、N2罐、流式细胞仪、超净工作台。
四.实验步骤
(一)S期同步化方法（TdR双阻断法）
(1) 取指数生长期细胞。
(2) 第一次阻断：将对数生长期细胞的培养基换成含2mmol/L的新鲜TdR培养液。
(3) 37℃、5%CO 二氧化碳培养箱中培养12h
(4) 第一次释放：弃去含有胸腺嘧啶核苷的培养基，用Hanks液对贴壁细胞漂洗2～3
次，并更换不含TdR的新鲜培养基，继续培养16h。
(5) 第二次阻断：弃去培养液，再加入浓度为2mmol/LTdR的新鲜培养基，37℃、
5%CO 培养12h。
(6) 第二次释放：重复第（4）步骤，此时的细胞大部分出去G1/S期边界，同步化细
胞随时间推移逐渐进入S期。
（二）M期同步化方法（振荡收集法）
(1) 取生长于占瓶底面积60%～80%的细胞一瓶，轻轻摇晃或拍击培养瓶，使松动细胞
脱落而悬浮在培养液中，并用离心管收集。
(2) 用Hank洗涤2次，漂洗液收集到离心管。
(3) 600rpm离心5分钟，并用培养液将细胞浓度调整为×105个/ml接种于培养瓶。
(三)利用流式细胞术分析细胞周期时相
(1) 将细胞传代培养至指数生长期，吸弃细胞培养上清，用Hanks液洗涤细胞一次，
胰酶消化细胞，完全培养基终止，收集细胞。1200rmp 5min离心，弃去上清。
(2) 4℃预冷的PBS漂洗细胞沉淀2次，1500rmp离心5分钟，收集细胞。
(3) 快速将细胞悬液注入预冷的70%乙醇中，封口膜封口。4℃固定过夜（可长至2
周）。
(4) 1500rmp 离心5分钟去固定液，收集固定细胞，用 PBS使细胞重悬并转至试管中
吹打均匀（防止细胞破碎）。PBS漂洗2次。
(5) 细胞染色液配制：40×加碘化丙啶（PI）母液（2 mg/ml）：100×RNA酶A母液
（10 mg/ml）：1×PBS =25：10：1000。
(6) 细胞染色：根据细胞量，加入一定体积的细胞染色液（1～）重悬，使上机时细胞
通过率为200～350 Cell/s。
(7) 用300目（孔径40～50 m）的筛网过滤于流式上机管中，上机检测。
(8) 样品分析测定及打印。
(四) 秋水仙素阻抑法
(1)将细胞培养至指数生长期。
(2)加入秋水仙素，使培养基最终浓度为～μg/mL，作用6～7小时。
(3)收集细胞，800rpm离心5～10分钟，弃去上清，沉于管底的细胞即为M期细胞。
(五)N2阻断法
(1)将细胞传代培养至指数生长期。
(2)将培养瓶置于N2罐中并通入适量CO2(约相当于罐中体积的5％)。
(3)关闭N2罐，连接N2管子和压力表，慢慢向罐中充入氮气直到压力为80～90磅／
英寸为止。
(4)将N2装置放在37℃培养箱中10～16小时。次日取出，然后缓缓放出N2(最好放出
窗外)。
(5)取出细胞观察同步化效果，并用振荡法收集细胞于离心管中。
(6)800rpm离心10分钟，收集细胞。
（六）G1期和G2期细胞的获得
1．G2期细胞的获得
根据细胞周期测定的数值，使用胸腺嘧啶核苷双阻断法使细胞同步化于G1/S期交界处后，使细胞释放胸腺嘧啶核苷后继续培养。其培养时间应大于S期时间并小于S期与G2期总和的时间。然后先用振荡收集法使已进入M期的细胞脱落瓶壁，弃去上清培养基；再用胰酶消化，加入新鲜培养基制成细胞悬液，离心收集细胞，即为G2期细胞。
2．G1期细胞的获得
(1)向用胸腺嘧啶核苷双阻断法获得的细胞中加入一定量的培养基，继续培养大于
S+G2+M期小于一个周期的时间即可获得G1期细胞。
(2)向细胞中加入缺乏异亮氨酸的培养基进行培养，培养时间超过一个细胞周期，即可
获得G1期细胞。
Chemical/pharmacol ogical inhibition
of DNA replication/synthe sis or mitotic spindle formation
Lovastatin Inhibition of HMG-CoA
reductase (cholesterol
synthesis) and the
proteasome
Early G1
Mimosine Inhibition
of thymidine,
nucleotide
biosynthesis,
inhibition of
Ctf4/chromatin binding
Late G1;
G1/S
Thymidine
TdR
Excess thymidine-
induced feedback
inhibition of DNA
replication
G1/S
Aphidicolin Inhibition of DNA
polymerase-α and DNA
polymerase-δ
G1/S
Hydroxyurea Inhibition of
ribonucleotide
reductase
G1/S
Colchicine
Colcemide
Inhibition of
microtubule
polymerization
G2/M
Nocodazole Inhibition of
microtubule
polymerization
G2/M
Mitogen or growth factor withdrawal Serum starvation Growth restriction–
induced quiescence
G0/G1
Amino acid
starvation
Growth restriction–
induced quiescence
G0/G1
Density arrest Contact
inhibition
Cell-cell contact–
induced activation of
specific
transcriptional
programs
G1
桂林市初中生物七年级上册第二单元第一章第三节动物细胞同步练习
桂林市初中生物七年级上册第二单元第一章第三节动物细胞同步练习 姓名:________ 班级:________ 成绩:________ 一、选择题 (共15题；共30分) 1. （2分） (2018七上·慈利期中) 关于动物细胞的说法，下列哪一项不正确（） A . 动物细胞没有细胞壁 B . 动物细胞里的能量转换器只有线粒体一种 C . 动物细胞能生长、分裂和分化 D . 动物细胞分裂时细胞质最先分裂成两份 2. （2分）在制作人的口腔上皮细胞的装片时，需要往载玻片上滴加（） A . 清水 B . 0.9﹪的生理盐水 C . 9﹪的盐水 D . 碘液 3. （2分）观察口腔上皮细胞临时装片时，我们看到细胞中染色最深的是（） A . 细胞壁 B . 细胞膜 C . 细胞质 D . 细胞核 4. （2分） (2015七上·辽宁期中) 在显微镜下观察自己制作的洋葱鳞片叶内表皮细胞临时装片，看不见的结构是（） A . 细胞壁 B . 细胞膜 C . 细胞核 D . 细胞质 5. （2分）观察人的口腔上皮细胞时，必须将取出的口腔上皮细胞放在生理盐水中，原因是（） A . 使细胞维持正常的形态 B . 避免细胞干燥 C . 避免细胞缺水死亡 D . 使细胞透明便于观察 6. （2分） (2017七上·龙岗期中) 细胞膜由脂质、蛋白质、糖类组成，下列关于其成分和功能的说法正确的是（） A . 脂质丰富的细胞膜功能复杂
B . 蛋白质种类和数量多的细胞膜功能复杂 C . 糖类的多少决定着细胞膜功能的复杂程度 D . 脂质含量达 50%，对细胞膜的功能起决定性作用 7. （2分）(2017·呼和浩特) 如图是由3个圆所构成的相关概念间包含关系图，其中Ⅰ为大圆，Ⅱ和Ⅲ分别为大圆之内的小圆，符合这种所属关系的是（） A . Ⅰ细胞质、Ⅱ细胞核、Ⅲ线粒体 B . Ⅰ内心泌腺、Ⅱ垂体、Ⅲ卵巢 C . Ⅰ种子植物、Ⅱ孢子植物、Ⅲ被子植物 D . Ⅰ原核生物、Ⅱ细菌、Ⅲ病毒 8. （2分） (2016八下·李沧期中) “风吹草低见牛羊”．下列有关草和羊的描述．正确的是（） A . 草的细胞内都有叶绿体，羊的细胞都没有细胞壁 B . 羊的血管和草的筛管都属于输导组织 C . 草的营养器官中都含有分生组织、保护组织、结缔组织和输导组织 D . 羊的身体由呼吸、运动、消化、循环、泌尿、神经、内分泌、生殖等系统构成 9. （2分）制作人体口腔上皮细胞临时装片的正确顺序是（） ①在载玻片中央滴一滴清水②在载玻片中央滴一滴生理盐水 ③用消毒牙签从口腔侧壁处轻轻刮几下④把牙签放在载玻片的液滴中均匀地涂抹几下⑤滴加碘液染色⑥盖上盖玻片 A . ①③④⑥⑤ B . ②③④⑥⑤ C . ①③④⑤⑥ D . ②③④⑤⑥ 10. （2分）小明用显微镜观察了洋葱表皮细胞和人的口腔上皮细胞作了如下记录，其中正确的是（） ①洋葱表皮细胞中央有较大的液泡 ②口腔上皮细胞由细胞膜、细胞质、细胞核构成 ③洋葱表皮细胞中有叶绿体 ④视野中有气泡，可能是盖盖玻片时操作不当造成的 ⑤视野中光线过强时应调节反光镜和光圈
细胞周期同步化1
细胞周期同步化 借助某种实验手段(自然地或经人为地),使细胞群体中处于细胞周期不同时相的细胞停留在同一时相的现象。 细胞周期同步化分：自然同步化和人工同步化。 自然同步化：是自然界存在的现象, 在动、植物细胞都有发现。它们不受人为条件的干扰, 因而有可能在接近自然的条件下进行观察, 但自然同步化的细胞群体受到诸多条件的限制, 对结果有很大的影响。 人工同步化：是利用细胞培养的方法, 用各种理化因素处理获得的同步化生长的细胞。常用的细胞人工同步化的方法分为选择同步化、诱导同步化或者两者的结合。 同步化分类及方法 （一）自然同步化 1．多核体 如粘菌只进行核分裂，而不发生胞质分裂，形成多核体。数量众多的核处于同一细胞质中，进行同步化分裂，使细胞核达108，体积达5~6cm。疟原虫也具有类似的情况。 2．某些水生动物的受精卵 如海胆卵可以同时授精，最初的3次细胞分裂是同步的，再如大量海参卵受精后，前9次细胞分裂都是同步化进行的。 3．增殖抑制解除后的同步分裂 如真菌的休眠孢子移入适宜环境后，它们一起发芽，同步分裂。 （二）人工同步化 1．选择同步化 1) 有丝分裂选择法：使单层培养的细胞处于对数增殖期，此时分裂活跃，分裂指数高,MI高。有丝分裂细胞变圆隆起，与培养皿的附着性低，此时轻轻振荡，M期细胞脱离器壁，悬浮于培养液中，收集培养液，再加入新鲜培养液，依法继续收集，这样每隔1h摇一次并收获一次，倾出培养液贮存于2~4℃冰箱中保存可连续收集24h，则可获得一定数量的中期细胞。其优点是，操作简单，同步化程度高，细胞不受药物伤害，缺点是获得的细胞数量较少。（分裂细胞约占1%～2%） 2）细胞沉降分离法：不同时期的细胞体积不同，而细胞在给定离心场中沉降的速度与其半径的平方成正比，因此可用离心的方法分离。其优点是可用于任何悬浮培养的细胞，缺点是同步化程度较低。 2．诱导同步化 1）DNA合成阴断法：选用DNA合成的抑制剂，可逆地抑制DNA合成，而不影响其他时期细胞的运转，最终可将细胞群阻断在S期或G/S交界处。5-氟脱氧尿嘧啶、羟基脲、阿糖胞苷、氨甲蝶呤、高浓度ADR、GDR和TDR，均可抑制DNA合成使细胞同步化。其中高浓度TDR 对S期细胞的毒性较小，因此常用TDR双阻断法诱导细胞同步化：
细胞生长状况有关指标的检测方法
细胞生长状况有关指标的检测方法 一、细胞计数 这是细胞培养中常用的基本技术之一。所用材料为细胞计数板。巴氏吸管和显微镜。步骤如下。 l 取清洁计数板和专用盖玻片，用丝绸布轻轻擦干。 l 取细胞悬液0.3ml，加入0.9结晶紫染液，混匀后滴半滴于细胞计数板内，以充满不外溢为宜。也可直接将细胞悬液在一侧滴加到盖玻片中，不要溢出，也不要过少或出现气泡。 l 在显微镜下用10X物镜观察计数四角大方格中的细胞数。代入下式得出细胞密度。 细胞数（ml）=（4大格细胞数之和/4）×104×稀释倍数 台盼蓝染色法可计算出活细胞和死细胞数以测定细胞存活百分率。一般0.5%-1.0%的台盼蓝染液可使死细胞染成蓝色，活细胞不着色。此外还可用0.02%的藻红b染液将死细胞或受损细胞染成红色，或用0.05%的苯胺黑染液将死细胞染成黑丝。 细胞存活率=[4大格活细胞数/（4大格活细胞数+4大格死细胞数）]×100% 在进行细胞计数操作时，必须把细胞悬液准备好，细胞应分散良好，并充分混匀，若出现较多细胞团或细胞数少于200个/10mm2或多于500个/100mm2时，需重制细胞悬液，重新计数。 二、细胞生长曲线和生长倍数 细胞生长曲线是细胞培养实验中最基本的指标，是测定细胞绝对增值数值和生长繁殖基本规律常用的简便方法。常用的方法为：在同一规格的培养瓶中，接种等量的同一代细胞，经培养后每隔24h取出几瓶细胞进行计数，以培养时间为横坐标，不同时刻的细胞数的对数为纵坐标，标出各点并连成线，即为该细胞的生长曲线，可反映出细胞生长的动态。 测定生长曲线的另一种方法是用96孔/24孔细胞培养板，分7组，每组3孔，培养1周（7天），期间逐日检测一组，计数，最后把7天中的细胞数值绘成图，即为细胞生长曲线。 也可采用MTT法来进行生长曲线测定。 标准的细胞生长曲线近似“S”形，一般在传代后第一天细胞数有所减少，经过一段时间的潜伏期，再进入对数生长期，达到平台期后生长稳定，最后衰老。
细胞周期同步化讲课稿
细胞周期同步化 在细胞培养过程中，细胞多处于不同的细胞周期时相中，其中有少数细胞在进行有丝分裂活动，其余细胞分别处于G1、S和G2各期。不同时相的细胞对药物干预存在不同反应，会影响实验的重复性，因此，需要获得周期一致性的细胞。利用细胞同步化技术可使细胞大 量的处于同一细胞时期，并可获得该时期大量的物质，如细胞中期时的染色体。细胞周期同步化(synchronization)是指为了研究某一时相细胞的代谢、增殖、基因表达或凋亡，借助某种自然或人为的实验手段,使细胞群体中处于细胞周期不同时相的细胞停留在同一时相( 除了G0期的细胞)的现象。细胞同步化本质上包括用一定的方法获得一定数量的同步化细胞群和使细胞进入同步化生长的两层含义。 DNA 合成抑制法是通过抑制DNA合成将细胞同步于同一时期的方法。高浓度TdR(胸腺嘧啶核苷)双阻断法是目前常用的抑制DNA 合成的同步化方法。它可逆地抑制DNA 合成，而不影响其他时期细胞的转运，最终可将细胞群阻断在S 期或G1 /S 交界处。其原理是: TdＲ是细胞DNA 合成不可缺少的前体，但向培养基中加入过量TdＲ，可形成过量的三磷酸腺苷，后者能反馈抑制其他核苷酸的磷酸化，从而抑制DNA 合成。它将细胞同步于G1 /S 期交界处，同步化程度高，适用于任何培养体系，可将几乎所有的细胞同步化，但是容易产生非均衡生长，个别细胞体积增大。TdＲ双阻断法因为简单易行且可逆，在肿瘤药理方面对细胞周期同步化的实验中得到了广泛的应用。羟基脲、5-氟脱氧尿嘧啶、阿糖胞苷、氨甲蝶呤和高浓度ADR、GDR也属于DNA合成抑制剂，它们与TdR作用相似，均可通过抑制DNA合成达到同步化的目的。 中期阻断法是利用破坏微管的药物将细胞阻断在M期从而得到同一时期细胞的方法，常用的药物有秋水仙素等。秋水仙素通过抑制微管的聚合，进而抑制有丝分裂装置的形成，将细胞阻断于有丝分裂中期然后再释放使细胞达到同步化。中期阻断法非平衡生长问题不明显，但可逆性比较差，当阻断时间过长时，许多细胞产生异常分裂。过去研究中也发现，同步后的细胞的生长能力明显不如撤去阻断剂后得到的S期细胞旺盛。秋水仙胺、Nocodazole也是目前常用的中期阻断剂。 经过同步化之后的细胞可以通过流式细胞术对其周期进行分析。将细胞用PI（碘化丙啶）染液进行染色，使用流式细胞仪对细胞内DNA的相对含量进行测定，可分析细胞周期各时相的百分比。由于细胞的DNA含量在不同时期有显著的差异，因此可以将细胞分成 G1/G0期（1倍），S期（1-2倍）和G2/M期（2倍）。流式细胞仪可以根据DNA含量在不同时间内的变化,从而确定细胞周期的长短,也可以直接标记DNA复制（放射性同位素标记）,统计细胞数量与标记细胞的百分比,对细胞周期进行综合分析. 连续分裂的细胞从上一次有丝分裂结束到下一次有丝分裂完成所经历的整个过程为细胞周期(cell cyc1e)。细胞周期包含四个阶段：①G1期(first gap),又称合成前期，指前一次有丝分裂完成到DNA复制前的一段时期；②S期(synthesis phase),即DNA合成期，为真核细胞分裂(cell pision)间期中进行DNA合成的阶段；③G2期(second gap),为DNA合成后期，指DNA合成结束至有丝分裂开始之间的一个阶段；④M期 (mitosis or pision) ,又称D期，是染色体真正开始分离时期。细胞周期又可分为有丝分裂期（M期）和分裂间期(即G1→S→G2)两个时期。尽管细胞周期中各期的持续时间因不同细胞类型而异，但相对而言M期最短，S期较长。流式细胞仪（flow cytometer；FCM）的工作原理是在样品管中放入待测细胞，在气体的压力下使待测细胞进入充满鞘液的流动室。在细胞流动室里单细胞悬液被鞘流液包绕通过流动室内一定孔径的孔，形成细胞柱。然后通过对流动液体中单列的细胞进行逐一检测，得到单个细胞的光散射和荧光指标，在功能水平上定量分析出其体积、内部结构、DNA、RNA、蛋白质、抗原等的物理、化学特征等多个参数。流式细胞
鸡胚成纤维细胞的制作及培养
鸡胚成纤维细胞培养 1、准备：取各种已消毒的培养用品置于净化台面，紫外线消毒20分钟。开始工作前先洗手、 75%酒精擦拭手至肘部。 2、布局：点燃酒精灯，安装吸管帽。 3、选胚：取9-10日龄鸡胚，（注：鸡胚日龄越小，形成细胞活力越好，但产量较低）用新 洁尔灭消毒蛋壳10分钟后放净化台。用碘酒、酒精消毒蛋壳。用镊子打开气室。 4、用另一套镊子将壳膜打开将鸡胚夹起去头、爪、眼，放灭菌生理盐水中。 5、把组织块置于烧杯中，用Hanks液漂洗2~3次，去除血污；如怀疑组织可能污染，可先 置于含有青链霉素的混合液中30~60分钟。 6、剪切：用眼科剪把组织切成1~2毫米大小的块，以便于消化。 7、处理组织：将已剪碎的组织碎片倒入一个带玻璃珠的灭菌三角瓶中，其中加入0.25%的 胰酶，10个胚约7ml，或加组织消化液，一个胚1ml（组织消化液以及胰酶的配置见微生物指导）结扎瓶口或塞以胶塞。 8、消化：将其置入37℃水浴箱中或用恒温水浴，消化中应不停摇动，如用电磁恒温搅拌器 消化更好。消化时间依组织块的大小和组织的硬度而定。消化10－15分钟。一般约12分钟。视鸡胚日龄大小而定。越小消化时间越短。见组织松软即可。一般不可消化时间太长否则容易导致细胞活力不足。 9、分离：在消化过程中见消化液发混浊时，可用吸管吸出少许消化液在镜下观察，如组织 已分散成细胞团或单个细胞，立即终止消化，加入0.5％的含5％犊牛血清双抗的的水解乳蛋白Hank，s液少许。（制法见微生物试验实习指导），用力震摇，或用吸管吹打。 使细胞分散，脱落。然后用纱布过滤或随即通过适宜不锈钢筛，滤掉尚未充分消化开的组织块。低速（500~1000转/分）离心消化液5分钟，吸出上清（可以不离心吸掉上清），加入适量含有血清的培养液。 10、计数：用计数板计数，如细胞悬液细胞密度过大，再补加培养液调整后，分装入培 养瓶中。对大多数细胞来说，pH要求在7.2~7.4范围，培养液呈微红色，如颜色偏黄，说明液体变酸，可用NaHCO3调整。分装在细胞培养瓶中。视细胞多少而定加入培养基。 培养基为0.5％的含5％犊牛血清双抗的的水解乳蛋白Hank，s液. 11、将其置入co2细胞培养箱中，37度。瓶口需用纱布棉塞或螺旋帽堵塞，纱布塞易 生霉菌，每次换液时需要换新塞。培养24小时进行观察。一般在24－48小时可形成单层细胞。 传代 1. 倾倒培养瓶内旧培养液。 2. 向瓶内加入胰蛋白酶和EDTA混合液少许，以能覆满瓶底为限。 3. 置温箱中2~5分钟，当发现细胞质回缩，细胞间隙增大后，立即终止消化。 4. 吸除消化液，向瓶内注入Hanks液数毫升，轻轻转动培养瓶，把残余消化液冲掉。注意加Hanks液冲洗细胞时，动作要轻，以免把已松动的细胞冲掉流失，如用胰蛋白酶液单独消化，吸除胰蛋白酶液后，可不用Hanks液冲洗，直接加入培养液。 5. 用吸管吸取营养液轻轻反复吹打瓶壁细胞，使之从瓶壁脱离形成细胞悬液。 6. 计数板计数后，把细胞悬液分成等份分装入数个培养瓶中，置温箱中培养。
人教版生物七年级上册2.1.3《 动物细胞》同步练(有答案)
第三节动物细胞基础巩固 一、选择题 1.在制作人的口腔上皮细胞临时装片的过程中，不需要用到的器具是（）A． B． C． D． 2.关于“观察人的口腔上皮细胞”实验的叙述，不正确的是（） A.在载玻片中央滴加生理盐水 B.碘液染色有利于观察 C.应先用低倍镜进行观察 D.能观察到细胞壁 3.如图是用显微镜观察人的口腔上皮细胞临时装片看到的视野，导致这一结果的操作可能是（）
A.涂抹不均 B.盖盖玻片不当 C.染色不均 D.放大倍数过大 4.在“制作洋葱鳞片叶内表皮细胞临时装片”和“制作人的口腔上皮细胞临时装片”的实验操作中，相关叙述错误的是（） A.制片前，都需用干净的纱布把载玻片和盖玻片擦拭干净 B.制片时，在载玻片中央滴加的液体分别是清水和生理盐水 C.染色时，都是先用碘液处理实验材料，然后再盖上盖玻片 D.盖盖玻片时，都是使盖玻片的一侧先接触液滴，然后缓缓放平 5.如图是某学生制作人的口腔上皮细胞临时装片的操作步骤和观察装片的过程，下列描述正确的是（） A.制作人的口腔上皮细胞临时装片的正确操作步骤是a、b、c、d B.观察装片时甲为镜筒上升，乙为镜筒下降 C.欲将视野右上角的细胞移至视野中央，装片应向右上方移动
D.该同学觉得看到的细胞太小，就转动转换器，又觉得太暗，继而换成平面镜 6.依据图①~③，下列说法错误的是（） A.图示①②虽然形态不同，但其基本结构相同 B.图示①②③的基本结构中都有线粒体和叶绿体 C.图示②③主要区别是③有细胞壁、液泡，②没有 D.图示①②③都是构成生物体的基本单位 二、实验探究题 7.下列图1、图2分别是口腔上皮细胞、番茄果肉细胞结构示意图，据图回答下列问题： （1）图1中，口腔上皮细胞基本结构：A是_____；C是_____。 （2）图2中，D和E是植物细胞不同于动物细胞的结构，D是_____；E是_____，主要功能是_____和_____。 （3）切开梨、西瓜等水果时，会流出一些汁液，这些汁液来自细胞中的_____。
成纤维细胞生长因子及其与受体作用机制的研究进展
成纤维细胞生长因子及其与受体作用机制 的研究进展1 姜媛媛，任桂萍，王文飞，郝建权，李德山 东北农业大学生命科学学院生物制药教研室，哈尔滨（150030） E-mail：deshanli@https://www.wendangku.net/doc/5f15428171.html, 摘要：成纤维细胞生长因子(FGF)是一类多肽类物质，其中大多数成员可与肝素结合发挥作用。目前已知FGF至少包括23个因子，即FGF1～23。部分FGF家族成员N末端有大约3O个氨基酸残基组成的典型信号肽序列，可以分泌到细胞外。FGF家族成员是一类生理功能较广泛的生长因子，功能包括促进细胞有丝分裂、趋化与血管生成、促进中胚层和神经外胚层细胞的存活与生长等。本文根据最近的研究成果对 FGF因子及其受体研究进展做一综述，并主要对FGF因子特征及其研究趋势进行了探讨。 关键词：FGF，FGF受体，肝素 中图分类号:Q74 引言： 成纤维细胞生长因子最早是从脑和垂体的提取液中发现的，该物质是一种能促进成纤维细胞生长的多肽类活性物质，可以通过与细胞膜特异性受体结合对细胞生长进行调节。从70年代中期到目前已进行了大量广泛的研究，目前已知FGF至少包括23个因子，它们在一级氨基酸序列上有一定的同源性，并有类似的生物学功能，且广泛存在于体内多种组织中。FGF对中胚层和神经外胚层来源的细胞具有十分明显的促细胞分裂增殖作用，并且在机体内的胚胎发育、细胞生长分化、创伤组织愈合及肿瘤发生发展中起着十分重要的作用。 1. 成纤维细胞生长因子（FGF）家族 成纤维生长因子（Fibroblast growth factor, FGF）又被称为肝素亲和生长因子(Heparin binding growth factor, HBGF)，是一类通过与细胞膜特异性受体结合发挥作用的多肽分子。现已知FGF家族至少包括23个成员，即FGF1～FGF23。FGF家族成员之间的氨基酸序列同源性约为25%～50%，其每个成员都有140个氨基酸的中轴，该中轴在不同的成员中有高度的同源性。结构分析表明，此中轴折叠成12条逆向平行的β链，它们又进一步形成圆柱状的结构。部分FGF家族成员N末端有大约3O个氨基酸残基组成的典型信号肽序列，使得它们可通过内质网一高尔基复合体的经典(即自分泌和旁分泌)途径被分泌到细胞外，但其中也有部分FGF则因本身缺乏信号肽结构，不能向外分泌，只能在细胞受损时释放[1]。多数FGF（如FGF3～8、10、15、17～19、21～23）的N末端具有典型的信号肽序列。而FGF16和FGF20虽然没有明确的信号肽序列却也能高效地分泌到细胞外[12]。FGF1 和FGF2也缺乏信号肽序列和正常的分泌途径，却也能出现在胞外基质，推测两者可能来自受伤的细胞，或者通过与内质网-高尔基体通路不同的细胞脱颗粒机制释放至胞外的。此外，FGF 11～14没有典型的信号肽序列，因此认为这些FGF是在胞内发挥作用[13]。由于FGF家族成员之间的氨基酸序列有25％～50％的同源性，分子结构有一定的共性，故FGF不同分子之间的生物学效应既有相似性，又有各自的特点[1-3]。 FGF1(aFGF)和FGF2(bFGF)是最先被发现，也是迄今为止研究最充分的两个成员，因其1本课题得到黑龙江省科技厅重点攻关项目（编号：2006G0461-00）的资助。
细胞同步化方法
Cell synchronization of Drosophila cell line Cell synchronization of Drosophila Kc cells Kc cells were cultured in 15-cm plates at a density of 1×106cells/mL in Schneider’s Media (Invitrogen 11720034) supplemented with 10% FCS and penicillin/streptomycin. The cells were arrested in G2 by the addition of the hormone Ecdysone (Sigma H5142, 蜕皮激素, C27H44O6) at a final concentration of 1.7 μM. To arrest the cells at the G1/S transition, the cells were released from Ecdysone into 1 mM HU. For replication timing, cells were pulsed with 50 μg/mL BrdU (Roche 280 879) for 1 h at either 0 or 6 h following release from HU. For identification of early origins, cells were released from G2 into medium containing both BrdU and HU at the same concentrations as above. Cell cycle progression was monitored by FACS. Molecular formula of Ecdysone Cell synchronization of Drosophila S2 cells: Briefly, log-phase (2x106/ml) cells were first incubated with 0.2 nM ponasterone (甾酮A, C27H44O6) A for 24 h to obtain G2 cells. Cells were then rinsed with phosphate-buffered saline (PBS) three times, resuspended in fresh Schneider’s Drosophila medium (GIBCO) containing 5% each of Fetal Bovine Serum and Bovine Calf Serum (JRH Biosciences), along with 1.5 mM hydroxyurea (HU, 羟基脲, CH4NO), and cultured for 18 h to obtain G1/S cells. Afterwards, these cells were rinsed with PBS three times, cultured in the above-specified medium without HU and harvested at various time points for analyses. Molecular formula of ponasterone BrdU-FACS or FACS analyses : Cells grown in 6-well plates were treated with BrdU (10 μM) for 45-60 min, fixed with 80% cold ethanol, treated with 3N HCl, washed and incubated with anti-BrdU MAb (Becton Dickinson) for 60 min. After washing, cells were incubated with Alexa Fluor ? 488 goat anti-mouse IgG (Invitrogen) for 30 min. These cells, or ethanol-fixed cells (for direct FACS assays), were treated with propidium iodide and RNase A for 30 min before FACS analyses. Reference: Lee et al.,2010, JBC. Drosophila Octamer Elements and Pdm-1 Dictate the Coordinated Transcription of Core Histone Genes. David M. MacAlpine., 2004, Genes Dev., Coordination of replication and transcription along a Drosophila chromosome.
细胞原代培养细胞生物学实验报告
细胞生物学实验报告 细胞原代培养 姓名： 学号： 班级： 专业： 同组成员： 一、实验原理
细胞培养是生物学和医学研究中最常用的手段之一，可分为原代培养和传代培养两种。原代培养是直接从生物体获取组织或器官的一部分进行培养。由于培养的细胞刚刚从活体组织分离出来，故更接近于生物体内的生活状态。这一方法可为研究生物体细胞的生长、代谢、繁殖提供有力的手段。同时也为以后传代培养创造条件。 原代培养的方法： 1、组织块法在平皿中用弯头剪把组织尽量剪碎，每个组织块小于1mm3大小。用Hanks 液洗涤2—3次，自然沉淀。用吸管吸去上清液。将组织块贴于培养瓶进行培养。 2、酶消化法将1mm3大小的组织块放入1个三角瓶内加入10—30ml的%的胰蛋白酶。370C磁棒搅拌消化20－30分钟。然后终止消化。用几层无菌纱布过滤。取过滤液，离心800rpm 5—10分钟收集细胞。弃上清，加入带有双抗的培养基，放入培养瓶培养。 取材注意事项： 取材要注意新鲜和保鲜。取材应严格无菌。取材和原代细胞制作时，要用锋利的器械，如手术刀或剃须刀片切碎组织，尽可能减少对细胞的机械损伤。要仔细去除所取材料上的血液（血块）、脂肪、坏死组织及结缔组织，切碎组织时应避免组织干燥，可在含少量培养液的器皿中进行。取材应注意组织类型、分化程度、年龄等，一般来讲，胚胎组织较成熟个体组织容易培养，分化低的较分化高的组织容易生长，肿瘤组织较正常组织容易培养。 二、实验目的 1、理解细胞原代培养原理 2、熟悉细胞原代培养方法与过程 3、了解细胞原代培养的应用 4、独立进行细胞原代培养操作 三、实验材料 手术小直剪刀、眼科直镊子、眼科弯镊子、玻璃平皿、培养瓶、试管、移液管、巴斯德吸管、废液缸、75%酒精棉球、酒精灯。 动物：9-12日龄的鸡胚蛋 四、实验步骤
人教版七年级上册生物同步检测试卷-2.1.3 动物细胞
2.1.3 动物细胞 基础达标卷 1.在观察人的口腔上皮细胞时,如果在显微镜视野中出现了血细胞,则说明( ) A.口没有漱干净 B.牙签刺伤了口腔壁 C.载玻片没有擦拭干净 D.碘液用量过多 2.在制作动物细胞模型时,塑料袋、果脯、琼脂分别相当于细胞的哪些结构?( ) A.细胞膜、细胞核、细胞质 B.细胞膜、细胞质、细胞核 C.细胞核、细胞质、细胞膜 D.细胞核、细胞膜、细胞质 3.下列能正确表示动物细胞内各结构之间位置关系的是( ) 甲乙丙丁 A.图甲 B.图乙 C.图丙 D.图丁 4.水稻叶肉细胞和人体口腔上皮细胞都有的结构是( ) ①细胞壁②细胞膜③细胞质④细胞核⑤液泡 A.②③④ B.②③⑤ C.①③④⑤ D.①③⑤ 5.在光学显微镜下可以观察到的结构是( ) A.人口腔上皮细胞的细胞壁 B.洋葱表皮细胞的细胞膜 C.洋葱表皮细胞的叶绿体 D.黄瓜表层果肉细胞的叶绿体 6.在制作人的口腔上皮细胞、洋葱鳞片叶内表皮细胞临时装片时,在载玻片上分别滴加的液体和它们染色共用的液体依次是( ) A.碘液、清水、清水 B.生理盐水、清水、碘液 C.清水、生理盐水、碘液 D.碘液、生理盐水、碘液 7.下图是某同学在显微镜下所观察到的口腔上皮细胞临时装片的一个视野,其中有细胞、气泡、杂质,请回答下列问题。 (1)图中①②③分别是、、。 (2)如果视野内③过多,而玻片又是清洁干净的,则可能是因为在刮取口腔上皮细胞前。 (3)因口腔上皮细胞的透明度较高,观察时应将视野调(填“明”或“暗”),方法是。 8.下图中甲和乙所示为“观察人的口腔上皮细胞临时装片”实验的部分操作,丙为显微镜,丁为显微镜下观察到的人的口腔上皮细胞。请根据图回答下列问题。
成纤维细胞同步化研究
不同浓度秋水仙素和nocodazole对绒山羊成纤维细胞周期同步化的影响 杨惠茹，肖红梅，蔡婷，俎红丽，于新蕾，刘志红，李金泉，王志新 （内蒙古农业大学动物科学学院动物遗传育种与繁殖重点实验室，呼和浩特 010018 ） 摘要：本文旨在探索更加优化的条件，使绒山羊成纤维细胞经处理后更多的处于有丝分裂G2/M 期。本研究分别采用秋水仙素和nocodazole （诺考达唑）试剂对绒山羊成纤维细胞进行周期同步化处理，用流式细胞仪检测G2/M 期的细胞数量进行比对，观测最佳作用浓度。结果表明，秋水仙素的使用浓度不宜过大；其次，添加秋水仙素时间的不同也会对试验结果产生明显的影响。另外在相同条件下，经nocodazole处理的绒山羊成纤维细胞周期同步化效果比秋水仙素好，最优的处理条件是300 ng/mL nocodazole处理成纤维细胞24 h，所得G2/M期的细胞所占比例为15.10%。结果提示对于绒山羊的成纤维细胞来说，细胞周期同步化处理时，选择nocodazole更好一些。 关键词：绒山羊；成纤维细胞；秋水仙素；nocodazole（诺考达唑）；细胞周期同步化；流式细胞仪 Dolezel等（2011) 报道随着测序技术的发展，使用流式细胞仪分离单条染色体，将拓展测序技术应用的领域，对于山羊这种大基因组动物更有广泛的应用价值。流式细胞术可以分选出指定的染色体，能快速精确地检测染色体数目和结构的畸变，以及非整倍体和染色体缺失。目前已在l7个植物物种中利用流式细胞术对染色体进行分析与分选。Macas等（1993）利用FCM对碗豆的流式核型进行分拣，结合PCR技术对其DNA进行物理定位，成功实现了USP基因、碗豆球蛋白基因和假基因在相应染色体区域上的定位。施家琦等 (1998) 在人类的染色体分选研究中，通过采用流式细胞技术分离染色体实现对人二倍体成纤维细胞的单分散染色体核型的分析及分选。最近的研究中，Yang等（2011) 通过流式技术分离出单个染色体已经完成了基因组的测序工作。翟中和等（1992) 采用流式分离单条染色体工作的核心在于富集足量同步化的中期染色体的细胞核型，因此细胞同期化的处理是研究中最基础最为重要的一步。细胞周期时间长短的主要差别在G1期，而S期、G2期和M 期的总时长相对恒定，尤其是M期持续的时间更为恒定，常常仅持续半小时左右。通过添加有丝分裂抑制剂，来阻滞细胞的有丝分裂使其停滞在G2/M 期，人工调控增加G2/M期的细胞数量，为单条染色体分选做前期准备。目前，秋水仙素是一种最为常用的有丝分裂抑制剂，起作用机理在于抑制中期纺锤体的形成。nocodazole是一种类似于秋水仙素的细胞微管抑制剂,也可阻止微管蛋白聚合和纺锤体形成,使细胞同步于M期,从而使大部分细胞的发育停滞在G2/M期和M期，与秋水仙素试剂相比毒性较低。Tanaka等（1995）研究表明采用nocodazole处理法对大鼠进行同期化处理后，M 期细胞的数量显著增加。因此，本研究将采用这两种试剂对成纤维细胞同期化的最优化条件做探索。 1 材料和方法 1.1材料 1.1.1 试剂耗材和动物 秋水仙素、nocodazole、胎牛血清（Hyclone）、，0.25%胰酶（Gibco）、DMEM/F12培养基（Hyclone）、无水乙醇（国产）、DPBS（Hyclone）、青链霉素（Gibco）、PI(碘化丙啶)、15 mL离心管（corning）、50 mL离心管（corning）、细胞培养瓶（corning）25 cm2、塑料吸管。 本研究选用绒山羊公羊耳源组织，来自于内蒙古鄂尔多斯农场。 1.1.2 主要仪器设备 流式细胞仪( Beeton Diekinson FACSCalibur )、CO2恒温培养箱 ( Galaxy A，RXBiotech) 、
人体各大器官细胞的更新周期
人体各大器官细胞的更新周期 肝细胞的寿命只有5个月 由于血液供应充足，肝脏自我恢复和再生的能力惊人。这意味着它把毒素排出体外的重要工作可以继续下去。如果你奇怪为什么就连酒鬼的肝功能有时候也会提高，这是因为肝细胞只有150天左右的寿命。英国莱斯特皇家医院的肝脏外科医生大卫·劳埃德解释说：“我可以在一次手术中切除患者肝脏的70%，只要两个月的时间，大约90%的肝就会长出来。” 但是，酗酒者的软组织细胞（肝脏的主要细胞）可能会逐渐受损，形成疤痕组织，也叫硬化。因此，虽然健康的肝可以不断自我更新，而硬化损伤是永恒的，有时甚至是致命的。 味蕾的寿命仅仅10天 英国牙医协会的科学顾问达明·维穆斯莱教授解释说，舌头上有大约9000个味蕾，帮助我们感受甜、咸、苦或者酸味。味蕾本身是舌头表面细胞的集合，每个味蕾有大约50个味觉细胞。味蕾一般只需要10天到2周便会自我更新一次。但是，任何引起发炎的因素如感染或者吸烟都会损害味蕾，影响它们的更新，减弱它们的敏感性。 大脑的寿命和你自己的寿命相同 英国巴特与伦敦医院的神经外科专家约翰·瓦德莱指出，能持续终身的大多数细胞是在大脑中发现的。瓦德莱说：“我们的脑细胞约有1000亿个，出生时数量已固定，我们大脑的大部分不会随老化而自我更新。” 事实上，我们的确会损失细胞，这就是患上痴呆症的根本原因以及头
部受伤破坏性很大的原因。瓦德莱说：“但是，大脑有两个部位的细胞会自我更新，支配我们嗅觉的嗅球和用于学习的海马状突起。” 脑细胞处在一种连续不断地死亡且永不复生增殖的过程，死一个就少一个，直至消亡殆尽。这是一种程序性死亡，也叫凋亡。人到20岁之后,脑细胞就开始以每天10万个速度递减，减少的都是那些闲置的，呀不经常通电的，也就是不用的，爱因斯坦的大脑利用为11%，平常人一般3--6%吧 心脏干细胞的寿命是20年 之前人们一直以为心脏不能自我更新。但是，纽约医学院的一项研究发现，心脏上布满不断自我更新的干细胞，它们一生中至少更新2到3次。 肺表面细胞的寿命大约是2到3周 国肺脏基金会副主席基思·普罗斯解释说，肺细胞不断自我更新。但是，肺有不同的细胞，它们的更新速度不同。位于肺部深处的用来交换氧气和气体的气泡或者气囊细胞更新过程稳定，需要约1年的时间。与此同时，肺部表面的细胞必须每隔2到3周进行自我更新。普洛斯博士说：“它们是肺的第一道防线，因此必须快速更新。”肺气肿会阻止这种更新，因为这种病源自气泡的破坏，肺壁上形成了永久性的“洞”。 眼睛的寿命也和你的寿命相同 眼睛是身体中为数较少的在你的生命期间不会改变的身体部分之一。眼部唯一不断更新的部位是角膜。英国视光师学院的院长罗伯·霍根表示，如果角膜受损，它能在24小时内复原。霍根说：“角膜必须有一个平滑的
鸡胚成纤维细胞培养doc
一、鸡胚成纤维细胞的体外培养 鸡胚成纤维细胞在病毒学研究中十分常用。孵化8－12d的鸡胚可用作培养的材料来源。 （一）实验材料 1. 鸡胚：孵化10d的受精蛋数个。孵化方法是将受精蛋放到38.5℃孵卵箱或恒温箱中，静置。每日翻动1—2次，以防止鸡胚粘连到蛋壳上影响发育。箱内湿度(40～70％)可通过在箱底放一盛水盘来维持。鸡胚的孵化期为2ld。孵化前，如遇蛋壳表面污物较多，可用刀片等器具刮除，不要用湿布擦拭，更不能用酒精棉球消毒或者用水洗蛋。孵育前可将受精蛋保存在10℃左右，保存期一般不超过10d。也有人将受精蛋保存在4℃冰箱中。 2. 消化液：含0.25％胰蛋白酶、青霉素100 1U／ml、链霉素100 μg/ml混合消化液。用Hanks 液或HEPES液配制。 3. 培养液：DMEM培养液，添加10％－20％的胎牛血清（FCS）、青霉素100 IU/ml、链霉素100 μg/mL。 4. 其它培养用品：手术器械、平皿、三角瓶或15ml血清瓶、离心管、100目不锈钢筛网、培养瓶或培养板、振荡水浴箱、离心机等。 （二）操作步骤 1)取孵化10d的鸡胚，分别用碘酒与酒精棉球擦拭消毒，晾干。用一已消毒金属器具将受 精蛋大头端击破，用镊子小心夹去破碎蛋壳，然后撕去气室外面的膜，暴露出尿囊绒膜及附着的血管。开口大小以受精蛋内容物不溢出为宜，但不宜太小。用镊子轻轻夹住鸡胚的颈部，小心取出鸡胚，放于无菌培养皿中，除去头部、四肢、内脏和皮肤。 2)胚体用Hanks液或生理盐水清洗3次，切成1－2 mm3的小块，然后转移到容积适中的 三角瓶或15ml血清瓶内。 3)加入适量消化液，一般每10个鸡胚加20 m1消化液，用胶塞密封瓶口。 4)在振荡水浴箱上37℃慢速搅拌5－10 min。加入少量血清钝化胰蛋白酶。然后通过100 目不锈钢筛网，制备细胞悬液，将细胞悬液转移到离心管中。 5)离心（800 rpm，10 min），弃上清液，将细胞沉淀用培养液洗2次。 6)加入培养液，用吸管吹打制成细胞悬液。用血球计数板计数细胞。 7)以0.2～1X06个细胞/ml的密度接种细胞。于37℃、5％CO2培养箱中培养。每2－3d换 液1次。待细胞汇合成片后，可行传代培养。 （三）结果 在倒置显微镜下观察，用8～12d龄鸡胚培养的细胞主要为具有长突起的梭形、星形或三角形的成纤维细胞。用I型和Ⅲ型胶原的抗体作免疫细胞化学分析，培养物以呈阳性反应的成纤维细胞为主。 （四）讨论 鸡胚成纤维细胞在普通培养液中具有生长优势，一般不需特殊处理，经几次传代后就可逐渐排除其它细胞，得到较纯的成纤维细胞。体外培养的胚胎细胞的形态与所取鸡胚的胚龄有关。若用体节前期的胚胎，培养的细胞不是典型的长的或星形的成纤维细胞，而为宽扁的细胞，这可能与胚胎细胞的分化状态有关。
梧州市初中生物七年级上册第二单元第一章第三节动物细胞同步练习
梧州市初中生物七年级上册第二单元第一章第三节动物细胞同步练习 姓名:________ 班级:________ 成绩:________ 一、选择题 (共15题；共30分) 1. （2分）(2019·北部湾) 如图为动植物细胞结构模式图，对它们结构和功能的叙述，正确的是（） A . 图甲可表示人的血液中成熟的红细胞，结构①的功能是控制物质出入细胞 B . 图乙所示的细胞长时间放在清水中会涨破 C . 西瓜清甜多汁，主要与图乙所示细胞中的结构②有关 D . 甲乙所示的细胞中都有细胞生活所需的能量转换器﹣叶绿体和线粒体 2. （2分）在制作人的口腔上皮细胞的装片时，需要往载玻片上滴加（） A . 清水 B . 0.9﹪的生理盐水 C . 9﹪的盐水 D . 碘液 3. （2分）观察口腔上皮细胞临时装片时，我们看到细胞中染色最深的是（） A . 细胞壁 B . 细胞膜 C . 细胞质 D . 细胞核 4. （2分） (2019七上·高州期中) 绿色植物能够利用光能制造有机物，这与细胞中的哪一个结构有关系（） A . 细胞膜 B . 液泡 C . 叶绿体 D . 线粒体 5. （2分）观察人的口腔上皮细胞时，必须将取出的口腔上皮细胞放在生理盐水中，原因是（） A . 使细胞维持正常的形态 B . 避免细胞干燥 C . 避免细胞缺水死亡 D . 使细胞透明便于观察
6. （2分）下列哪项，不是酵母菌和斑马的共同点（） A . 具有细胞结构 B . 要进行呼吸作用 C . 细胞内具有细胞核 D . 属于消费者 7. （2分） (2017七上·龙岗期中) 细胞膜由脂质、蛋白质、糖类组成，下列关于其成分和功能的说法正确的是（） A . 脂质丰富的细胞膜功能复杂 B . 蛋白质种类和数量多的细胞膜功能复杂 C . 糖类的多少决定着细胞膜功能的复杂程度 D . 脂质含量达 50%，对细胞膜的功能起决定性作用 8. （2分） (2019八上·铜陵期末) 依据图中四种结构示意图①～④，下列说法错误的是（） A . 图示①、②分别是植物细胞、动物细胞结构示意图 B . 图④示生物营寄生生活，没有细胞结构也没有自己的遗传物质 C . 图③也是一个细胞，它有细胞壁却没有成形的细胞核 D . ①与②的主要区别是①有细胞壁、液泡和叶绿体等 9. （2分）制作人体口腔上皮细胞临时装片的正确顺序是（） ①在载玻片中央滴一滴清水②在载玻片中央滴一滴生理盐水 ③用消毒牙签从口腔侧壁处轻轻刮几下④把牙签放在载玻片的液滴中均匀地涂抹几下⑤滴加碘液染色⑥盖上盖玻片 A . ①③④⑥⑤ B . ②③④⑥⑤ C . ①③④⑤⑥ D . ②③④⑤⑥ 10. （2分）小明用显微镜观察了洋葱表皮细胞和人的口腔上皮细胞作了如下记录，其中正确的是（） ①洋葱表皮细胞中央有较大的液泡 ②口腔上皮细胞由细胞膜、细胞质、细胞核构成 ③洋葱表皮细胞中有叶绿体
乳腺癌相关成纤维细胞的研究进展
四综述四乳腺癌相关成纤维细胞的研究进展 陈珊珊 姚和瑞 DOI:10.3877/cma.j.issn.1674-0807.2012.03.013 基金项目:国家自然科学基金资助项目(30973505,30945201);广东省科技计划资助项目(2009B030801005);广州市科技计划资助项目(2009Y?C011?1) 作者单位:510120广州,中山大学孙逸仙纪念医院肿瘤科 通信作者:姚和瑞,E?mail:yaoherui@https://www.wendangku.net/doc/5f15428171.html, 恶性肿瘤严重威胁着全人类的健康与生命三近年来,肿瘤基础研究领域的一个重要进展是发现肿瘤微环境对肿瘤生物学行为的调控,即不再认为肿瘤的发生二发展仅与肿瘤细胞有关,而是肿瘤细胞与间质成分构成的肿瘤微环境相互作用的结果三肿瘤相关成纤维细胞(tumor?associated fibroblasts,TAFs)是肿瘤间质的主要成分,参与肿瘤的结构支持并可分泌多种细胞因子三越来越多的研究者认为TAFs 不仅仅是肿瘤结构的机械性支持,而且通过多种信号途径直接参与肿瘤的发生及发展三笔者就TAFs 的来源二功能及其在乳腺癌中的作用进行综述三 1 TAFs 的来源及特征1.1 TAFs 的来源(1)20世纪90年代的研究已证实,间质内的成纤维细胞在难以修复的组织损伤或慢性炎症等因素刺激下可活化为TAFs;血管平滑肌细胞和周细胞亦可转化为TAFs [1]三(2)近几年研究发现,发生上皮?间质转化(epithelial?mesenchyonal transition,EMT)的肿瘤细胞[2]以及内皮细胞也可能转化成为TAFs [3]三肿瘤细胞发生EMT,并通过转化生长因子?β(transforming growth factor?β,TGF?β)下调上皮钙黏着蛋白(E?cadherin)的表达,促使上皮细胞向间质细胞转化三(3)来源于骨髓的CD34+干细胞也可转化成为TAFs三Quante 等[4]的最新研究证实至少有20%的TAFs 来源于骨髓及间充质干细胞三1.2 TAFs 的特征 形态及标志:TAFs 的形态与正常成纤维细胞相似,呈长梭形,核不规则,细胞质中含有多种收缩纤维蛋白二丰富的粗面内质网二细胞间连接和纤维连接蛋白(fibronectin,FN)三TAFs 可合成分泌蛋白质二胶原纤维二弹性纤维二网状纤维及有机基质等,除表达间质细胞的标志物波形蛋白(vimentin)外,还表达其特征性标志物平滑肌肌动蛋白α(α?smooth muscle actin,α?SMA)三这是其