半定量RT-PCR的实验原理和方法步骤

半定量RT-PCR的实验原理和方法步骤

以下实验步骤仅供参考：

1 样品RNA的抽提

①取冻存已裂解的细胞，室温放置5分钟使其完全溶解。

②两相分离每1ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2ml的氯仿，盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后，15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12000rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚氯仿相，中间层以及无色水相上层。RNA全部被分配于水相中。水相上层的体积大约是匀浆时加入的TRIZOL试剂的60%。

③RNA沉淀将水相上层转移到一干净无RNA酶的离心管中。加等体积异丙醇混合以沉淀其中的RNA，混匀后15到30℃孵育10分钟后，于4℃下12000rpm 离心10分钟。此时离心前不可见的RNA沉淀将在管底部和侧壁上形成胶状沉淀块。

④RNA清洗移去上清液，每1mlTRIZOL试剂裂解的样品中加入至少1ml的75%乙醇（75%乙醇用DEPCH2O配制），清洗RNA沉淀。混匀后，4℃下7000rpm离心5分钟。

⑤RNA干燥小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室温空气中干燥5-10分钟。

⑥溶解RNA沉淀溶解RNA时，先加入无RNA酶的水40μl用枪反复吹打几次，使其完全溶解，获得的RNA溶液保存于-80℃待用。

2 RNA质量检测

1）紫外吸收法测定

先用稀释用的TE溶液将分光光度计调零。然后取少量RNA溶液用TE稀释（1:100）后，读取其在分光光度计260nm和280nm处的吸收值，测定RNA溶液浓度和纯度。

①浓度测定

A260下读值为1表示40 μg RNA/ml。样品RNA浓度(μg/ml)计算公式为：A260 ×稀释倍数× 40 μg/ml。具体计算如下：

RNA溶于40 μl DEPC水中，取5ul，1:100稀释至495μl的TE中，测得A260 = 0.21 RNA 浓度= 0.21 ×100 ×40 μg/ml = 840 μg/ml 或0.84 μg/μl

取5ul用来测量以后，剩余样品RNA为35 μl，剩余RNA总量为：

35 μl × 0.84 μg/μl = 29.4 μg

②纯度检测

RNA溶液的A260/A280的比值即为RNA纯度，比值范围1.8到2.1。

2）变性琼脂糖凝胶电泳测定

①制胶

1g琼脂糖溶于72ml水中，冷却至60℃，10 ml的10× MOPS电泳缓冲液和18 ml 的37% 甲醛溶液(12.3 M)。

10×MOPS电泳缓冲液

浓度成分

0.4M MOPS，pH 7.0

0.1M 乙酸钠

0.01M EDTA

灌制凝胶板，预留加样孔至少可以加入25 μl溶液。胶凝后取下梳子，将凝胶板

放入电泳槽内，加足量的1×MOPS电泳缓冲液至覆盖胶面几个毫米。

②准备RNA样品

取3μgRNA，加3倍体积的甲醛上样染液，加EB于甲醛上样染液中至终浓度为10μg/ml。加热至70℃孵育15分钟使样品变性。

③电泳

上样前凝胶须预电泳5min，随后将样品加入上样孔。5–6V/cm电压下2h，电泳至溴酚兰指示剂进胶至少2–3cm。

④紫外透射光下观察并拍照

28S和18S核糖体RNA的带非常亮而浓（其大小决定于用于抽提RNA的物种类型），上面一条带的密度大约是下面一条带的2倍。还有可能观察到一个更小稍微扩散的带，它由低分子量的RNA（tRNA和5S核糖体RNA）组成。在18S和28S 核糖体带之间可以看到一片弥散的EB染色物质，可能是由mRNA和其它异型RNA 组成。RNA制备过程中如果出现DNA污染，将会在28S核糖体RNA带的上面出现，即更高分子量的弥散迁移物质或者带，RNA的降解表现为核糖体RNA带的弥散。用数码照相机拍下电泳结果。

3样品cDNA合成

①反应体系

序号反应物剂量

1 逆转录buffer 2μl

2 上游引物0.2μl

3 下游引物0.2μl

4 dNTP 0.1μl

5 逆转录酶MMLV 0.5μl

6 DEPC水5μl

7 RNA模版2μl

8 总体积10μl

轻弹管底将溶液混合，6000rpm短暂离心。

②混合液在加入逆转录酶MMLV 之前先70℃干浴3分钟，取出后立即冰水浴至管内外温度一致，然后加逆转录酶0.5μl，37℃水浴60分钟。

③取出后立即95℃干浴3分钟，得到逆转录终溶液即为cDNA溶液，保存于-80℃待用。

4梯度稀释的标准品及待测样品的管家基因（β-actin）实时定量PCR

①β-actin阳性模板的标准梯度制备阳性模板的浓度为1011，反应前取3μl按10倍稀释（加水27μl并充分混匀）为1010，依次稀释至109、108、107、106、105、104，以备用。

②反应体系如下：

标准品反应体系

序号反应物剂量

1 SYBR Green 1 染料10μl

2 阳性模板上游引物F 0.5μl

3 阳性模板下游引物R 0.5μl

4 dNTP 0.5μl

5 Taq酶1μl

7 ddH2O 32.5μl

8 总体积50μl

轻弹管底将溶液混合，6000rpm短暂离心。

管家基因反应体系：

序号反应物剂量

1 SYBR Green 1 染料10μl

2 内参照上游引物F 0.5μl

3 内参照下游引物R 0.5μl

4 dNTP 0.5μl

5 Taq酶1μl

6 待测样品cDNA 5μl

7 ddH2O 32.5μl

8 总体积50μl

轻弹管底将溶液混合，6000rpm短暂离心。

③制备好的阳性标准品和检测样本同时上机，反应条件为：93℃2分钟，然后93℃1分钟，55℃2分钟，共40个循环。

5 制备用于绘制梯度稀释标准曲线的DNA模板

①针对每一需要测量的基因，选择一确定表达该基因的cDNA模板进行PCR反应。反应体系：

序号反应物剂量

1 10× PCR缓冲液 2.5 ul

2 MgCl2 溶液 1.5 ul

3 上游引物F 0.5 ul

4 下游引物R 0.

5 ul

5 dNTP混合液 3 ul

6 Taq聚合酶 1 ul

7 cDNA 1 ul

8 加水至总体积为 25ul

轻弹管底将溶液混合，6000rpm短暂离心。

35个PCR循环（94℃1分钟；55℃1分钟；72℃1分钟）；72oC延伸5分钟。

②PCR产物与DNA Ladder在2％琼脂糖凝胶电泳，溴化乙锭染色，检测PCR产物是否为单一特异性扩增条带。

③将PCR产物进行10倍梯度稀释: 将PCR产物进行10倍梯度稀释: 设定PCR产物浓度为1×1010，依次稀释至109、108、107、106、105、104几个浓度梯度。

6 待测样品的待测基因实时定量PCR

①所有cDNA样品分别配置实时定量PCR反应体系。

体系配置如下：

序号反应物剂量

1 SYBR Green 1 染料 10 ul

2 上游引物 1ul

3 下游引物 1ul

4 dNTP 1ul

5 Taq聚合酶 2ul

7 ddH2O 30ul

8 总体积 50 ul

轻弹管底将溶液混合，6000rpm短暂离心。

②将配制好的PCR反应溶液置于Realtime PCR仪上进行PCR扩增反应。反应条件为：93℃2分钟预变性，然后按93℃1分钟，55℃1分钟，72℃1分钟，共40做个循环，最后72℃7分钟延伸。

7 实时定量PCR使用引物列表

引物设计软件：Primer Premier 5.0，并遵循以下原则：引物与模板的序列紧密互补；引物与引物之间避免形成稳定的二聚体或发夹结构；引物不在模板的非目的位点引发DNA 聚合反应(即错配)。

8 电泳

各样品的目的基因和管家基因分别进行Realtime PCR反应。PCR产物与DNA Ladder在2％琼脂糖凝胶电泳，GoldView?染色，检测PCR产物是否为单一特异性扩增条带。

RT-PCR将以RNA为模板的cDNA合成同PCR结合在一起，提供了一种分析基因表达的快速灵敏的方法。RT-PCR用于对表达信息进行检测或定量。另外，这项技术还可以用来检测基因表达差异或不必构建cDNA文库克隆cDNA。RT-PCR比其他包括Northern印迹、RNase保护分析、原位杂交及S1核酸酶分析在内的RNA 分析技术，更灵敏，更易于操作。

RT-PCR的模板可以为总RNA或poly(A)+选择性RNA。逆转录反应可以使用逆转录酶，以随机引物、oligo(dT)或基因特异性的引物（GSP）起始。RT-PCR可以一步法或两步法的形式进行。在两步法RT-PCR中，每一步都在最佳条件下进行。cDNA 的合成首先在逆转录缓冲液中进行，然后取出1/10的反应产物进行PCR。在一步法RT-PCR中，逆转录和PCR在同时为逆转录和PCR优化的条件下，在一只管中顺次进行。

实验步骤：

Trizol法RNA提取步骤

1、提取总RNA

2、逆转录反应

3、PCR反应

化学实验室常见仪器的名称及功能

一、常见仪器的分类 一般根据仪器的主要用途的不同，可将常见化学实验仪器分为下列8类： （一）计量类 用于量度质量、体积、温度、密度等的仪器。这类仪器中多为玻璃量器。主要有滴定管、移液管、量筒、量杯等。 （二）反应类 用于发生化学反应的仪器，也包括一部分可加热的仪器。这类仪器中多为玻璃或瓷质烧器。主要有试管、烧瓶、蒸发皿、坩埚等。（三）容器类 用于盛装或贮存固体、液体、气体等各种化学试剂的试剂瓶等。（四）分离类 用于进行过滤、分液、萃取、蒸发、灼烧、结晶、分馏等分离提纯操作的仪器。主要有漏斗、分液漏斗、蒸发皿、烧瓶、冷凝器、坩埚、烧杯等。 （五）固体夹持类 用于固定、夹持各种仪器的用品或仪器。主要有铁夹、铁圈、铁架台、漏斗架等。 （六）加热类 用于加热的用品或仪器。主要有试管、烧杯、烧瓶、蒸发皿、坩埚等。 （七）配套类

用于组装、连接仪器时所用的玻璃管、玻璃阀、橡胶管、橡胶塞等用品或仪器。 （八）其它类 不便归属上述各类的其它仪器或用品。 二、中学化学常见仪器的名称和使用 （一）计量仪器 1．量杯 量杯属量出式（符号Ex）量器，它用于量度从量器中排出液体的体积。排出液体的体积为该液体在量器内时从刻度值读取的体积数。 量杯有2种型式。面对分度表时，量杯倾液嘴向右，便于左手操作，称为左执式量杯。倾液嘴向左，则称为右执式量杯。250 mL以内的量杯均为左执式，500 mL以上者，则属于右执式。 2．温度计 温度计是用于测量温度的仪器。其种类很多，有数码式温度计，热敏温度计痔。而实验室中常用为玻璃液体温度。 温度计可根据用途和测量精度分为标准温度计和实用温度计2类。标准温度汁的精度高，它主要用于校正其它温度计。实用温度计是指所供实际测温用的温度计，主要有实验用温度计、工业温度计、气象温度计、医用温度计等。中学常用棒式工业温度汁。其中酒精温度计的量程为100℃，水银温度计用200℃和360℃2种量程规格。 使用注意事项

数据库原理与技术实验报告

南华大学计算机科学与技术学院 实验报告 （ 2011 ~2012 学年度第二学期） 课程名称数据库原理与技术实验名称数据库实验 姓名谢志兴学号20104030342 专业电气信息类班级1003班 地点8—209教师刘征海

实验 1 认识DBMS

一、利用管理工具创建数据库、表和表间关系 （一）实验目的和注意事项 实验目的：熟悉SQL Server Management Studio的基本操作，进一步理解数据库、表、表间关系的概念。 注意事项：创建数据库和数据表时应认真，如果出现错误，应相应地修改结构或删除。 （二）实验内容 (1) 利用SQL Server Management Studio 创建数据库，名称为【学生选课XXXX】。XXXX为各位同学的学号中的最后四位 (2) 在【学生选课XXXX】中建立数据表，表的定义如下所示。 学生XXXX(学号，姓名，性别，出生日期，院系名称，备注)； 课程XXXX(课程号，课程名，选修课，学分)； 选修XXXX(学号，课程号，分数)。 要求定义每张表的主码，为属性选择合适的数据类型，决定是否允 许为空，为【性别】和【学分】属性定义默认值。 (3) 定义表之间的关系。 (4) 分别为表录入几行数据记录，同时练习数据的修改和删除操作。 （三）实验步骤 (1) SQL Server Management Studio，连接数据库服务器，进入SQL Server Management Studio 主界面。 (2) 右击【对象资源管理器】|【数据库】，选 择快捷菜单中的【新建数据库】命令，弹出【新建数据库】窗口,在各属 性页中设置新建数据库的属性，包括设置数据库逻辑名、所有者、文件 的逻辑名、文件的物理名、文件类型、文件增长方式、文件的路径、文 件组等属性，如图下所示。

RT-PCR的实验原理与操作步骤复习课程

R T-P C R的实验原理与 操作步骤

提取组织或细胞中的总RNA，以其中的mRNA作为模板，采用Oligo(dT)或随机引物利用逆转录酶反转录成cDNA。再以cDNA为模板进行PCR 扩增，而获得目的基因或检测基因表达。RT-PCR使测的灵敏性提高了几个数量级，使一些极为微量RNA样品分析成为可能。该技术主要用于：分析基因的转录产物、获取目的基因、合成cDNA探针、构建RNA高效转录系统。 (一) 反转录酶的选择 1. Moloney鼠白血病病毒(MMLV)反转录酶：有强的聚合酶活性，RNA酶H活性相对较弱。最适作用温度为37℃。 2. 禽成髓细胞瘤病毒(AMV)反转录酶：有强的聚合酶活性和RNA酶H活性。最适作用温度为42℃。 3. Thermus thermophilus、Thermus flavus等嗜热微生物的热稳定性反转录酶：在Mn2 存在下，允许高温反转录RNA，以消除RNA模板的二级结构。 4. MMLV反转录酶的RNase H-突变体：商品名为SuperScript 和 SuperScriptⅡ。此种酶较其它酶能多将更大部分的RNA转换成cDNA，这一特性允许从含二级结构的、低温反转录很困难的m模板合成较长cDNA。 (二) 合成cDNA引物的选择 1. 随机六聚体引物：当特定mRNA由于含有使反转录酶终止的序列而难于拷贝其全长序列时，可采用随机六聚体引物这一不特异的引物来拷贝全长mRNA。用此种方法时，体系中所有RNA分子全部充当了cDNA第一链模板，PCR引物在扩增过程中赋予所需要的特异性。通常用此引物合成的cDNA中96%来源于rRNA。 2. Oligo(dT)：是一种对mRNA特异的方法。因绝大多数真核细胞mRNA具有3’端Poly(A )尾，此引物与其配对，仅mRNA被转录。由于Poly(A )RNA仅占总RNA的1-4%，故此种引物合成的cDNA比随机六聚体作为引物和得到的cDNA 在数量和复杂性方面均要小。 3. 特异性引物：最特异的引发方法是用含目标RNA的互补序列的寡核苷酸作为引物，若PCR反应用二种特异性引物，第一条链的合成可由与mRNA 3’端最靠近的配对引物起始。用此类引物仅产生所需要的cDNA，导致更为特异的PCR扩增。生物科研https://www.wendangku.net/doc/5d121855.html, 二、实验耗材与试剂 1．RNA提取" target="_blank" >RNA取试剂 2．第一链cDNA合成试剂盒

qPCR实验操作流程

Q-PCR实验流程 一、①实验前准备，每天早上到实验室后，先把超净工作台的紫外灯打 开15-20分钟。②超净台前做实验，需佩戴干净的橡胶手套/一次性薄膜手套，RNA抽提需带口罩。③取EP管/枪头时需用镊子，不可以用使用过的手套直接取用。取完EP管/枪头后，袋子及时封好。④橡胶手套须放入超净台照射紫外，实验操作过程中不得带出超净台，移液器在一天工作结束后调至最大量程，并用75%乙醇清洁移液器，枪头盒及超净台面。⑤实验进行的过程中或观看实验时，没有带口罩不要在超净台前讲话。 二、总RNA抽提 1）细胞培养皿中细胞样品用1*PBS洗两次后，用1ml枪将PBS吸干净，加入1ml Trizol （Invitrogen）溶液，吹打混匀，并吸至1.5ml RNase free EP管中使细胞充分裂解，室温静置5min； 组织样品用液氮充分研磨，加入1ml Trizol （Invitrogen）溶液，混匀，室温放置5min使其充分裂解；（管盖与管壁都需标记样品名称） 2）加入200μl氯仿，剧烈振荡混匀30s，使水相和有机相充分接触，室温静置3-5min；（离心时离心管按顺序排放，离心完毕，离心管的顺序也按顺序排好，与第一步的顺序一致） 3）4℃下，14,000g离心15min，可见分为三层，RNA在上层水相，移至另一个新的RNase free EP管；（用20-200ul的枪吸取上清，吸上清时，枪头应沿着液面上层吸取上清，枪头不可碰到、吸到中间层） 4）沉淀RNA：加入等体积异丙醇，轻柔地充分混匀（颠倒6-8次）（不应用振荡器混匀），室温静置10min； 5）4℃下，14,000g离心10min，收集RNA沉淀（如离心后仍不见EP管底部有沉淀，应将EP管放置在-80度冰箱过夜，继续在4℃下，14,000g 离心10min，收集RNA沉淀），去上清； 6）用75％乙醇洗涤两次（12,000g离心5min）（加入乙醇后只需轻轻颠倒EP管即可，不用振荡器震荡或枪头吸打沉淀），超净台风干；沉淀不

数据库原理实验报告

南京晓庄学院 《数据库原理与应用》 课程实验报告 实验一SQL Server 2005常用服务与实用工具实验 所在院(系):数学与信息技术学院 班级：14软工5班 学号：14551204 14551206 姓名：花元凯罗文波 １.实验目的 (1)了解Microsoft 关系数据库管理系统SQL Server的发展历史及其特性。 (2)了解SQL Server 2005的主要组件、常用服务和系统配置。 (3)掌握Microsoft SQL Server Management Studio 图形环境的基本操作方法。了解使用“SQL Server 2005 联机从书”获取帮助信息的方法；了解“查询编辑器”的使用方法；了解模板的使用方法。 2.实验要求 (1)收集整理Microsoft关系数据库管理系统SQL Server的相关资料，总结其发展历史及SQL Server 2005主要版本类别和主要功能特性。 (2)使用SQL Server配置管理器查看和管理SQL Server 2005服务。 (3)使用Microsoft SQL Server Management Studio连接数据库；使用SQL Server帮助系统获得 所感兴趣的相关产品主题/技术文档。

(4)使用Microsoft SQL Server Management Studio“查询编辑器”编辑并执行Transact-SQL查 询语句。 (5)查看Microsoft SQL Server 2005模板，了解模板的使用方法。 (6)按要求完成实验报告。 3.实验步骤、结果和总结实验步骤/结果 (1) 简要总结SQL Server系统发展历史及SQL Server 2005主要版本类别与主要功能特性。 SQL Server是由Microsoft开发和推广的关系数据库管理系统（DBMS），它最初是由Microsoft、Sybase和Ashton-Tate三家公司共同开发的，并于1988年推出了第一个OS/2版本。1996年，Microsoft 推出了SQL Server 6.5版本；1998年，SQL Server 7.0版本和用户见面；SQL Server 2000是Microsoft公司于2000年推出，该版本继承了SQL Server 7.0 版本的优点，同时又比它增加了许多更先进的功能。SQL Server 2005 是一个全面的数据库平台，使用集成的商业智能(BI) 工具提供了企业级的数据管理。SQL Server 2005 数据库引擎为关系型数据和结构化数据提供了更安全可靠的存储功能。SQL Server 2008是一个重大的产品版本，它推出了许多新的特性和关键的改进，使得它成为至今为止的最强大和最全面的SQL Server版本。目前最新版本是SQL SERVER 2014。 1，SQL Server 2005学习版当保护和管理应用系统内外部的信息变得至关重要时，通过提供一套免费、易于使用和健壮的数据库，学习版帮助开发人员建立强健的和可靠的应用系统。

RT-PCR实验方法总结大全.

RT-PCR实验方法总结大全 RT-PCR实验有三步:抽提RNA,RT,PCR。 要求: 1.做RT前必需测RNA浓度,逆转录体系对RNA量还是有一些要求,常用500ng 或1ug。 2. RT按要求做,一般不会出太大问题。 3. PCR,按常规。但如需扩长片段,则对前两步要求较高,需要有完整的cDNA 存在,不是单改变Mg2+浓度、退火温度能解决的。 1RT和PCR时的引物设计是不是一定要先知道目的基因的序列?必须 在RT时,引物设计有3种方法即a:Random 9mers;b:Oligo dT-Adaptor Primer;和c:特异的下游引物。如果用a和b方法,是扩增的所有的cDNA(理论上,还要用此产物做PCR 的模板继续扩增。 如果用c方法,那么要去那里查它的序列呢?https://www.wendangku.net/doc/5d121855.html,问题: 在做RT-PCR遇到一怪现象,即对同一动物不同组织扩增同一段基因,结果从一种组织中可以扩出我的目的基因,条带非常的好,而另一组织在同样的条件下却得到许多非特异性的条带,尝试其他条件同样无法得到满意的结果,百思不得其解!(注:已肯定该基因在两种组织中都表达,且内参照在两种组织都可扩增出来 从这两种组织中提取的RNA的量是不一样的,我测过吸光度,差异还很大,会不会和这有关呢?请高手指教! 解答: 1.RT-PCR有两种做法:

条件具备的话可用kit进行一步法进行;若条件不太好的话可分两步进行逆转录再PCR。但后来发现两步法的结果更加理想,条带特异性强且无拖尾现象,我推测是体系更加单一比较利于PCR的进行,当然也可能是我买的kit不太好。(promega。 2.RT-PCR应具备的条件 高质量的RNA(保留后可做5‘,3’RACE;引物的(最好产物短点;若涉及粗略定量的话还应考虑RNA的浓度或是cDNA的浓度(如果由内标分子更好,但我发现其实很不容易将RNA的浓度以及内标分子的表达量调整的完全一样;体系的均一性等。 3.RACE 我做过RACE(3’RACE是宝生物的Kit;5‘RACE是Gibico,但现在再进行另一个同源基因的3‘RACE时却怎么也P不出来,这两个基因是由同一对引物扩增出来的,其中一个已经获得了全序列(RACE的方法,而另一个基因的3’UTR 却增么也扩不出来,我推测是不是该基因的3‘UTR太长的缘故,我都快绿了,有无 RT-PCR的常用内标b-actin 和GAPDH的使用有选择性吗?比如不同的细胞,不同的刺激。 有关内参: RT-PCR内参照可以在一个管子里做(那样也是图好看一些,最好分开两管,把除了引物之外的mixture统一配,拍照后,算目的基因和内参的比值,这就是基因表达的相对浓度。 问:我曾经作过同一管的PCR,内有actin 和目的基因引物。虽然可见到两条均一条带但图片质量不理想(而且酶量、Mg2+加倍。请教mxbdna2003 ,你是如何处理同一管的PCR的各成分的浓度? 答: it should determined the amount of RNA. but it not for the quantitity of the PCR. it just was convienent to guess the amount ot the template<(for RT and PCR and bettrer for publication and editor if he don not know the preocedure much. but the amount just

化学实验室功能简介

化学实验教学中心功能 根据学校教务处和设备处等相关部门的指导性意见，配合学院发展的需要，原材料科学与化学工程学院的中心实验室更名为化学实验教学中心，并设立三个分实验室：基础化学实验室、专业化学实验室、理化检测中心，共同承担了教学、科研、地方服务的任务。各分实验室的主要功能分述如下： 基础化学实验室： 本分室主要承担校级公共平台（生命、环境、医学等专业）化学实验类课程、院内化学专业和应用化学专业的基础化学实验类课程的教学工作，包含大学化学、普通化学、无机及分析化学、无机化学、分析化学、有机化学、物理化学、仪器分析等实验课程。 其中，大学化学实验课程面向07年学校大类平台招生改革而设置，给自然科学大类的一年级学生开设。普通化学实验课程为工科类一年级学生开设。无机及分析化学实验、有机化学实验为生命类和医学类一年级学生开设。这四门实验课程所开设的实验项目以无机化学和分析化学相关的基础项目为主，包含少量的简易综合性和趣味性实验，以培养学生宽基础的知识体系和实验能力，并辅以激发学生的学习兴趣。 无机化学、分析化学、有机化学、物理化学的实验课程为学院内本科生的基础课程。同时承担基础实验教学、开放实验和学生毕业论文设计实验，其开出的实验项目分为基础性、综合性和设计性三个层次，部分包含选做实验，根据不同的教学情况进行选择。分述如下：无机化学实验是化学专业学生的第一门必修的、独立的基础实验课。它是以实验为手段来研究无机化学中的重要理论、典型元素及其化合物的变化规律，以及相应的仪器、装置、基本操作的一门课程。着力于培养学生具有宽广的基础知识和熟练的基本技能、能够适应未来社会发展需要的专业人才。教学内容着眼于为学生今后的学习发展奠定基础。学生在学习无机化学专业理论知识的同时，通过实验研究活动，学习和掌握无机化学专业的基本实验技术，研究元素的单质及其化合物的重要性质，熟悉重要无机化合物的制备方法；加深理解和掌握无机化学基本理论和基础知识；比较牢固地掌握化学实验的基本知识和操作技能；培养学生严谨的科学态度；培养学生准确观察化学反应现象，处理实验数据的能力，达到训练学生基本理论知识的综合应用能力；培养学生分离、分析与鉴别物质，合成、制备物质及将所学知识与生产实际结合起来的能力。 通过分析化学实验的学习，学生可以掌握定量化学分析及可见吸光光度分析和部分仪器分析实验的基本知识、基本操作和典型的分析方法；通过实验加深对有关理论的理解，并能灵活运用所学的理论知识指导实验设计与操作；确立“量”的概念、“相对误差”的概念和“有效数字”的概念；培养严谨的科学作风和良好的实验素养，激发实验兴趣和探索精神，提高分析问题和解决实际问题的能力。 有机化学实验是化学专业本科的一门基础实验课程。其主要目的是：通过有机化学实验验证、巩固和深入理解所学的有机化学理论知识；通过实验，使学生正确地掌握基础化学实验的基本操作方法和技能技巧，培养学生独立工作和独立思考的能力，养成严谨的科学态度和良好的科学思维方法。为后续课程的学习、为培养合格的化学教学工作者和化学化工技术人才打下扎实的基础。 通过物理化学实验课程的学习，使学生巩固物理化学理论课中所学习的基本概念、基本理论；掌握通用仪器的基本操作，掌握物理化学中常用的基本实验方法和实验技能，为学生今后做专业基础实验，专业实验和毕业论文打下坚实的基础。

QPCR原理及应用

QPCR原理及应用 由于Real-time qPCR的众多优点，现在已经是生命科学领域的一项常规技术。越来越多的研究文章中涉及RT-PCR的实验，也基本上被real-time qPCR 所代替。由于real-time aPCR 输出的数据不同于常规的PCR 电泳检测，很多没有做过real-time qPCR的研究者常常感到高深莫测，不知从何入手；甚至一些做过次实验的研究者也会对数据处理分析感到迷惑，不知所措。 本文就从real-time qPCR的发展史说起，包括real-time qPCR的原理，实验设计，实际操作，数据分析，常见问题解答五个方面，手把手教你从各个方面了解real-time qPCR，彻底的从菜鸟到高手！ 一、Real-time qPCR发展史 Real-time qPCR就是在PCR扩增过程中，通过荧光信号，对PCR进程进行实时检测。由于在PCR扩增的指数时期，模板的Ct 值和该模板的起始拷贝数存在线性关系，所以成为定量的依据。由于常规的PCR的缺点，real-time qPCR 由于其操作简便，灵敏度高，重复性好等优点发展非常迅速。现在已经涉及到生命科学研究的各个领域，比如基因的差异表达分析，SNP检测，等位基因的检测，药物开发，临床诊断，转基因研究等。 在Real-time qPCR技术的发展过程中，定量PCR仪的发展起了至关重要的作用。1995年，美国PE公司（已经并入Invitrogen公司）成功研制了Taqman 技术，1996年推出了首台荧光定量PCR检测系统，通过检测每个循环的荧光强度，通过Ct值进行数据分析。从而荧光定量PCR获得广泛应用。现在的定量PCR 仪有ABI7000、7300、7500，7700、7900HT、StepOnePlusTM、StepOneTM、PRISM@StepOneTM系列；BIO-RAD的CFX96、iCycler iQ5@、MyiQ@、MJ Research Chromo4TM Opticon 系列；Stratagene MxTM系列；Roche LightCycler@系列；Eppendorf Masercycler@；Corbett Rotor-GeneTM；Cepheid SmartCycler@和BIOER的LineGene系列。 随国内生命科学的快速发展，科研水平不断提高，发高水平文章已不再是新鲜事。与其同时，国内公司经过长期不懈的努力，也有自主研发的real-time PCR

数据库理论与技术实验报告六

数据库理论与技术课程实验报告 学院：电子与信息工程学院专业：计算机科学与技术年级：计科 实验时间： 2012年4月26日 组长：学号：组_______ 姓名：学号：组_______ 姓名：学号：组_______ 姓名：学号：组_______ 指导教师签字：成绩： 实验六、视图、存储过程和触发器实验 一、实验目的和要求 1、实验目的：理解视图的概念和相关命令，并掌握视图相关的SQL语句；理解存储过程的概念和相关命令，并掌握存储过程相关的SQL语句；理解触发器的概念和相关命令，并掌握触发器相关的SQL语句 2、实验要求：掌握视图存储过程和触发器的使用 二、实验内容与步骤 1、利用数据库jxgl完成实现下列查询的视图。（在SQL SERVER2005上附加数据库jxgl），并运行该视图。 安装好的SQL Server2005没有用户数据库，如果磁盘上有数据库文件，可以将其附加到数据库服务器中。 （1）创建视图，实现查询03物流1班学生的详细信息 （2）创建视图，实现查询“入学成绩”在350到400分之间的学生的姓名和班级（3）创建视图，实现查询students表中现有的班级 （4）创建视图，实现查询具有“教授”或“副教授”职称的教师的教师编号和姓名（5）创建视图，实现查询姓“陈”，且籍贯是“宁波”的学生的姓名，出生日期，入学成绩。 （6）创建视图，实现查询课程名称中包含“DB_”的课程的信息

（7）创建视图，实现查询教师上课情况表中还没有安排好上课教师的班级和对应的课程号 （8）创建视图，实现查询全体学生情况，查询结果按所在班级名升序排列，同一班级中的学生按出生日期降序排列 （9）创建存储过程，实现统计03物流1班学生“入学成绩”的平均分、最高分、最低分 （10）创建存储过程，实现统计各个班级的学生人数，按统计结果做降序排列（11）创建存储过程，实现统计各部门教师的人数，筛选出教师人数在指定人数（参数）以上的部门 （12）创建储存过程，实现查询平均分在指定分数（参数）以上的课程编号 2、将上述查询以存储过程实现，并在后面写出运行该存储过程的语句。 注意：在实验报告中说明查询的目的和对应的语句。 三、实验过程及数据记录 （1）创建视图，实现查询03物流1班学生的详细信息 create view v1 as select * from Students where class='03物流1' select * //查询视图v1 from v1 （2）创建视图，实现查询“入学成绩”在350到400分之间的学生的姓名和班级create view v2 as select sname,class from Students where mgrade between 350 and 400 select * //查询视图v2 from v2 （3）创建视图，实现查询students表中现有的班级 create view v3 as select distinct class //加上distinct能消除重复选项 from Students select * //查询视图v3 from v3

PCR扩增实验操作步骤

PCR扩增反应 一、实验原理 PCR：是一种选择性扩增DNA或RNA的方法，其基本原理是依据体内细胞分裂中的DNA半保留复制机理，以及在体外dNTP分子于不同温度下双链和单链可以互相转变的性质，人为地控制体外合成系统的温度，以促使双链DNA变成单链DNA；单链DNA与人工合成的引物退火，以及在dNTP存在下，耐高温的DNA聚合酶使引物沿单链模板延伸成为双链DNA。 PCR反应分3步：①变性：通过加热使DNA 双螺旋的氢键断裂，双链解离形成单链DNA；②退火：当温度突然降低时，由于模板分子结构较引物要复杂得多，而且反应体系中引物DNA量大大多于模板DNA，使引物和其互补的模板在局部形成杂交链，而模板DNA 双链之间互补的机会较少。③延伸：在DNA聚合酶和4 种dNTP底物及Mg2+存在的条件下，5'→3'的聚合酶催化以引物为起始点的DNA链延伸反应，以上3步为一个循环，每一循环的产物可以作为下一个循环的模板，数小时之后，介于两个引物之间的特异性DNA片段得到了大量复制，数量可达2×106~7拷贝。 变性 退火 延伸 图反应历程

二、实验材料 1·模板：细菌DNA 2·TsgDNA聚合酶3·dNTP混合液 4·10倍浓度PCR缓冲液5·2.5mmol/LMgCl2 6·RAPD引物：S14 S15 S18 S66 S74 S88 S97 S103 S110 S115 7·提取细菌DNA的相关试剂 三、操作步骤 1．细菌染色体DNA的提取（见上一组） 3·反应程序： 将RAPD反应试剂加入EP管中 轻混后用100ul石蜡油覆盖于反应混合液之上，防止样品在反复加热-冷却的过程中蒸发，盖好盖子 打开PCR反应仪输入以下反应数据 ●94 摄氏度预变性5min ●94摄氏度变性40s ●40摄氏度退火40s ●72摄氏度延伸1min 将EP管放入仪器开始扩增，循环35次；72摄氏度延伸10min 仪器为Model MyGene 25 Plus 三、注意事项 1、PCR反应体系中DNA样品及各种试剂的用量都极少，必须严格注意吸样量的准确性 及全部放入反应体系中。 2、为避免污染凡是用在PCR反应中的Tip尖、离心管、蒸馏水都要灭菌；吸每种试剂 时都要换新的灭菌Tip尖。 3、加试剂时先加消毒三蒸水，最后加DNA模板和Taq DNA聚合酶。 4、置PCR仪进行PCR反应前，PCR管要盖紧，否则使液体蒸发影响PCR反应。 5.引物条件首先引物与模板的序列要紧密互补，其次引物与引物之间避免形成稳定二聚 体或发夹结构，再次引物不能在模板的非目的位点引发DNA聚合反应（即错配）。

化学实验室实验室简介

民勤县第三中学化学实验室简介 民勤三中现有化学实验室1个，其中仪器室1个，准备室一个，学生实验室2个。各室的水电到位，布局合理，有防火、防盗、换气设备，双人双锁管理，仪器设备按省级标准配置齐全。实验室完全达到两名学生一组进行分组实验的条件。 实验室设有演示台，供电到位，实验室的演示台和学生实验桌采用防酸碱阻燃面板，长、宽、高及材质符合要求。教师演示台有电源总控制设备，集中控制学生实验电源，配有触电保护器。化学实验室演示台和学生实验桌旁设置水槽，实验室内悬挂有名言警句。仪器室与实验室毗邻设置，配备满足仪器存放的仪器橱。对危险品和毒品有完整的管理和领用制度，配有准备台、工具箱（常用类）等。所有仪器按配备标准顺序上架、入柜。教学演示实验及学生分组实验能全部开出。此外，学校还经常及时增补教学实验材料及仪器设备，满足教师演示及学生分组实验的需求。所有实验室采光良好，灯管垂直黑板安装；保持自然通风。 实验室实物流水账、管理明细账记录规范；仪器存放、分类、编号、贴签入柜，摆放科学有序，存取方便；药品、仪器分室存放。 实验教学坚持做到期初有计划、期末有总结，各项制度、实验员工作职责都张贴在墙上，以便经常对照学习。实验的周计划，每学期初就公布上墙，做到合理安排，一周工作早知道。学生进入实验室必须遵守学生实验规则，实验结束要填好实验记录单。仪器损坏按有关制度赔偿。各室登记台帐，既有电子台账，又有纸质台账，做到帐、

物、卡相符，并及时做好新增仪器的登记和仪器的报损工作。实验室工作以教学为中心，以提高教学质量为目的，加强实验教学环节。保证紧密配合教学工作。服务教学一线，结合新课程要求，开足开齐演示实验、学生实验和探究性实验，演示实验开出率达100%，分组实验的开出率达85%以上。

实时荧光定量PCR(Real-Time-PCR)实验流程

实时荧光定量PCR（Real-Time PCR）实验流程 一、RNA的提取(详见RNA提取及反转录) 不同组织样本的RNA提取适用不同的提取方法，因为Real-Time PCR对RNA样品的质量要求较高，所以，正式实验前要选择一款适合自己样品的提取方法，在实验过程中要防止RNA的降解，保持RNA的完整性。 在总RNA的提取过程中，注意避免mRNA的断裂；取2ug进行RNA的甲醛变性胶电泳检测，如果存在DNA污染时，要用DNase I进行消化（因为在处理过程中RNA极易降解，建议体系中加入适量RNA酶抑制剂）。 二、DNase I 消化样品RNA 中的DNA 用DNase I 消化DNA 组份加量 模板(RNA) 10ug RNase Inhibitor 4ul DNase I buffer 10ul DNase I 10ul DEPC处理H2O 至100ul 混匀，37℃ 90min 三、RNA琼脂糖凝胶电泳 1．1%的琼脂糖凝胶电泳凝胶的配制： 1）称取琼脂糖0.45g放入三角瓶中，向其中加入4.5ml的10×MOPS缓冲液和39.5ml 的DEPC水，放微波炉里溶化。 2）待冷却到60摄氏度左右时，加入1ml甲醛，摇匀（避免产生气泡）。倒入凝胶板上凝固30min。 2．取各个RNA样品4μl，加入6×RNA电泳上样缓冲液2μl混匀，加入变性胶加样孔中。3．120V电压下电泳25min。用凝胶紫外分析仪观察，照相保存。 4．RNA电泳结果如下图所示。可见28S和18S两条明亮条带，无DNA条带污染。 四．RNA反转录为cDNA 反转录程序(以MBI的M-MLV为例) 组份加量(20ul体系) 加量(40ul体系) 模板(RNA) 0.1~2.5ug(根据条带的亮度适当调整) 3ug(根据条带的亮度适当调整) 引物T18(50uM)(或其他引物) 2.0ul 4.0ul DEPC处理H2O 至12.5ul 至25ul

(待分)rtpcr原理和实验步骤

原理与实验步骤 一、知识背景： 、基因表达： 单拷贝基因表达存在逐步放大机制，如一个蚕丝心蛋白基因个丝心蛋白（每个存活，可以合成个丝心蛋白）共合成个丝心蛋白。因此单拷贝基因的表达水平对于其功能水平的调控是非常重要的。 、技术( )：即聚合酶链式反应。 在模板、引物和四种脱氧核苷酸存在的条件下依赖于聚合酶的酶促反应，其特异性由两我工合成的引物序列决定。反应分三步： .变性：通过加热使双螺旋的氢键断裂，形成单链。 .退火：将反应混合液冷却至某一温度，使引物与模板结合。 .延伸：在聚合酶和及＋存在下，退火引物沿’’方向延伸。 以上三步为一个循环，如此反复。 、逆转录酶和 逆转录酶（）是存在于病毒体内的依赖的聚合酶，至少具有以下三种活性： 、依赖的聚合酶活性：以为模板合成第一条链。 、水解活性：水解杂合体中的。 、依赖的聚合酶活性：以第一条链为模板合成互补的双链. 二、的准备： .引物的设计及其原则： ) 引物的特异性决定反应特异性。因此引物设计是否合理对于整个实验有着至关重要的影响。在引物设计时要充分考虑到可能存在的同源序列，同种蛋白的不同亚型，不同的剪切方式以及可能存在的对引物的特异性的影响。尽量选择覆盖相连两个内含子的引物，或者在目的蛋白表达过程中特异存在而在其他亚型中不存在的内含子。 ) 引物设计原则的把握 引物设计原则包括 : 、引物长度:一般为～，引物太短会影响的特异性，引物太长的最适延伸温度会超过酶的最适温度，也影响反应的特异性。 、碱基分布：四种碱基最好应随机分布，避免嘌呤或嘧啶的聚集存在，特别是连续出现个以上的单一碱基。含量（值）：％～％，扩增的复性温度一般是较低值减去～度。 、’端要求：’端必须与模板严格互补，不能进行任何修饰，也不能有形成任何二级结构的可能。末位碱基是时错配的引发效率最低，、居中间，因此引物的’端最好选用、、而尽可能避免连续出现两个以上的。 、引物自身二级结构：引物自身不应存在互补序列，否则会自身折叠成发夹状结构或引物自身复性。 、引物之间的二级结构：两引物之间不应有多于个连续碱基互补，’端不应超过个。、同源序列：引物与非特异扩增序列的同源性应小于连续个的互补碱基存在。 、’端无严格限制：’末端碱基可以游离，但最好是或，使产物的末端结合稳定。还可以进行特异修饰（标记、酶切位点等）等等。 根据实验目的选择适当的引物。常用引物设计软件如，等对于这些条件都可以自行设置。 、耗材：

数据库原理与应用技术实验

实验一数据库管理系统(DBMS)使用初步 姓名：学号： 专业：网络工程班级： 同组人：无实验日期： 【实验目的与要求】 1．掌握SQL Serve 2005 服务器的安装方法 2．了解SQL Serve 2005 的环境 3．了解数据库及其对象 【实验准备】 1．了解SQL Server 2005的版本 2．了解SQL Server 2005各版本对硬件和软件的需求 【实验内容】 1.安装SQL Server 2005 2.练习启动、停止和暂停服务管组件的服务，了解SQL Server 2005中包括的服务器 组件，掌握服务管理器和使用。 3.练习Microsoft SQL Server Enterprise Manager的使用。 4.练习Microsoft SQL 查询分析器的使用。 【实验步骤】 1.0.准备工作: 测试数据库的加载 本实验需用到测试数据库db_shopping，请按以下步骤完成测试数据库的加载，以便完成后面实验。 (1)将数据库备份文件复制到某一文件夹(如：C:\TestDB)下 （2）启动SQL Server 服务管理器。 通过“开始=>程序=>Microsoft SQL Server 2005=>管理向导”打开“SQL Server

服务管理器”，启动“SQL Server 服务管理器”，并记录当前运行的服务器名。 （3）启动企业管理器。 (4)在对象资源管理器中，右击数据库->选择还原数据库，如下图： 在出现的对话框中选择”源设备”，如下图

在源设备选项的右边，点击”…”图标，会出现下图所示对话框： 单击添加按钮，在如下图所示对话框中根据备份文件的存储位置选中备份数据库文件，而后点确定。 在弹出对话框的下拉列表中选择数据库db_shopping，同时在选择用于还原的备份集选项相应位置的复选框中打上勾，如下图：

RT-PCR实验步骤

RT-PCR实验步骤 一、总RNA提取 1. 取200mg组织，放到1.5mlEP管中，加入1mlTrizol剪碎。 2. 震荡30s。 3. 加0.2ml氯仿，剧烈摇动30s，室温3min。 4. 12000×g，4℃离心，15min。 5. 吸上层无色水相，移入另一EP管中（约0.5ml）。 6. 加等体积异丙醇，-20℃，30min。 7. 12000×g，4℃离心，10min。在管底部可见微量RNA沉淀 8. 弃上清，加75%乙醇1ml，振荡。 9. 7500×g，4℃离心，10min。 10. 弃上清，用滤纸小心吸取残留液体，室温干燥5-10min。 11. 沉淀溶于20μlDEPC水，取1μl加入79μlDEPC水测OD260/OD280 12. 计算浓度与纯度，-70℃保存。 二、逆转录合成cDNA第一链 反应体系如下

混匀快速离心一次反应条件如下 -20℃ 冰箱冻存三、PCR反应 混匀快速离心一次反应条件如下

PCR产物-20℃冰箱保存 取PCR产物8μl 加5×Loading Buffer 2μl 2%琼脂糖凝胶电泳120V。 100mA 30min 溴化乙锭染色，凝胶成象仪成象并保存结果。 RT-PCR实验方法总结1,2 RT-PCR实验有三步：抽提RNA，RT，PCR。 要求： 1.做RT前必需测RNA浓度，逆转录体系对RNA量还是有一些要求，常用500ng或1ug。 2. RT按要求做，一般不会出太大问题。 3. PCR，按常规。但如需扩长片段，则对前两步要求较高，需要有完整的cDNA存在，不是单改变Mg2+浓度、退火温度能解决的。 1）RT和PCR时的引物设计是不是一定要先知道目的基因的序列？必须 在RT时，引物设计有3种方法即a：Random 9mers；b：Oligo dT-Adaptor Primer；和c：特异的下游引物。如果用a和b方法，是扩增的所有的cDNA（理论上），还要用此产物做PCR 的模板继续扩增。 如果用c方法，那么要去那里查它的序列呢？https://www.wendangku.net/doc/5d121855.html, 问题： 在做RT-PCR遇到一怪现象，即对同一动物不同组织扩增同一段基因，结果从一种组织中可以扩出我的目的基因，条带非常的好，而另一组织在同样的条件下却得到许多非特异性的条带，尝试其他条件同样无法得到满意的结果，百思不得其解！（注：已肯定该基因在两种组织中都表达，且内参照在两种组织都可扩增出来） 从这两种组织中提取的RNA的量是不一样的，我测过吸光度，差异还很大，会不会和这有关呢？请高手指教！ 解答： 1.RT-PCR有两种做法： 条件具备的话可用kit进行一步法进行；若条件不太好的话可分两步进行逆转录再PCR。但后来发现两步法的结果更加理想，条带特异性强且无拖尾现象，我推测是体系更加单一比较利于PCR 的进行，当然也可能是我买的kit不太好。（promega）。 2.RT-PCR应具备的条件 高质量的RNA（保留后可做5‘，3’RACE）；引物的（最好产物短点）；若涉及粗略定量的话还应

数据库原理及技术实验报告2

《数据库原理及技术》实验报告 姓名：莫鸿斌学号：201601030137 班级：2016级计算机科学与技术实验日期：2018-3-16 一、实验项目 了解SQL Server2012常用组件 二、实验目的 1.掌握SQL Server Management Studio的运用； 2.掌握SQL Server 2012常用组件； 3.如何使用SQL Server Management Studio创建数据库及表。 三、实验内容 1.了解SQL Server2012常用组件； 2.使用SQL Server management studio创建数据库factory，要求将数据库文件 factory_data.MDF存放在E:\data下面，其文件初始大小5MB，自动按5MB增长，将事务日志文件factory_log.LDF存放在E:\data目录下，其文件大小按1MB自动增长。 3.在数据库factory下创建如下表： 职工表(职工号（int），姓名（char(10)）,性别(char(2)),出生日期（datetime），党员否（bit），参加工作时间（datetime），部门号（int）)，其中职工号作为主键。 部门表（部门号（int），部门名（char（10）），其中部门号作为主键。 工资表（职工号（int），发放年份（int），发放月份（int），工资（decimal（6,1））），其中职工号、年份、月份作为主键。 4.建立第三步创建的表之间的参照完整性规则。 5.在上述表中输入数据，每个表至少10条记录。 6.备份数据库，考走以备下次试验使用。 四、实验环境 安装有SQL Server2008的PC一台。 五、实验步骤及结果 1.了解SQL Server2012常用组件； 2.使用SQL Server management studio创建数据库factory；要求将数据库文件 factory_data.MDF存放在E:\data下面，其文件初始大小5MB，自动按5MB增长，将事务日志文件factory_log.LDF存放在E:\data目录下，其文件大小按1MB自动增长。

RT-PCR的实验原理与操作步骤

提取组织或细胞中的总RNA以其中的mRN作为模板，采用Oligo（dT）或随机引物利用逆转录酶反转录成cDNA再以cDNA为模板进行PCR扩增，而获得目的基因或检测基因表达。RT-PCF使测的灵敏性提高了几个数量级，使一些极为微量 RNA羊品分析成为可能。该技术主要用于：分析基因的转录产物、获取目的基因、合成cDNA探针、构建RNA高效转录系统。 （一）反转录酶的选择 1. Moloney 鼠白血病病毒（MMLV）反转录酶：有强的聚合酶活性，RNA酶H活 性相对较弱。最适作用温度为37 C。 2. 禽成髓细胞瘤病毒（AMV）反转录酶：有强的聚合酶活性和 RNA 酶 H 活性。 最适作用温度为42 C。 3. Thermus thermophilus 、 Thermus flavus 等嗜热微生物的热稳定性反转录 酶：在Mn2存在下，允许高温反转录 RNA，以消除RNA模板的二级结构。 4. MMLV 反转录酶的 RNase H- 突变体：商品名为 SuperScript 和 SuperScript U。此种酶较其它酶能多将更大部分的RNA转换成cDNA，这一 特性允许从含二级结构的、低温反转录很困难的 m 模板合成较长 cDNA 。 （二）合成 cDNA 引物的选择 1. 随机六聚体引物：当特定 mRNA 由于含有使反转录酶终止的序列而难于拷贝 其全长序列时，可采用随机六聚体引物这一不特异的引物来拷贝全长 mRNA 。 用此种方法时，体系中所有RNA分子全部充当了 cDNA第一链模板，PCR引物在扩增过程中赋予所需要的特异性。通常用此引物合成的 cDNA 中 96%来源 于 rRNA。 2. Oligo(dT) ：是一种对 mRNA 特异的方法。因绝大多数真核细胞 mRNA 具有

化学实验室常见仪器的名称及功能

一、常见仪器得分类 一般根据仪器得主要用途得不同,可将常见化学实验仪器分为下列8类: （一)计量类 用于量度质量、体积、温度、密度等得仪器。这类仪器中多为玻璃量器。主要有滴定管、移液管、量筒、量杯等． (二)反应类 用于发生化学反应得仪器,也包括一部分可加热得仪器。这类仪器中多为玻璃或瓷质烧器.主要有试管、烧瓶、蒸发皿、坩埚等。（三）容器类 用于盛装或贮存固体、液体、气体等各种化学试剂得试剂瓶等。 （四）分离类 用于进行过滤、分液、萃取、蒸发、灼烧、结晶、分馏等分离提纯操作得仪器.主要有漏斗、分液漏斗、蒸发皿、烧瓶、冷凝器、坩埚、烧杯等。 （五)固体夹持类 用于固定、夹持各种仪器得用品或仪器。主要有铁夹、铁圈、铁架台、漏斗架等. (六)加热类 用于加热得用品或仪器。主要有试管、烧杯、烧瓶、蒸发皿、坩埚等。

(七)配套类 用于组装、连接仪器时所用得玻璃管、玻璃阀、橡胶管、橡胶塞等用品或仪器。 (八)其它类 不便归属上述各类得其它仪器或用品。 二、中学化学常见仪器得名称与使用 (一)计量仪器 1。量杯 量杯属量出式(符号Ex）量器,它用于量度从量器中排出液体得体积．排出液体得体积为该液体在量器内时从刻度值读取得体积数。量杯有2种型式。面对分度表时,量杯倾液嘴向右,便于左手操作，称为左执式量杯。倾液嘴向左，则称为右执式量杯。250 mＬ以内得量杯均为左执式,500mL以上者，则属于右执式。 2。温度计 温度计就是用于测量温度得仪器。其种类很多,有数码式温度计，热敏温度计痔。而实验室中常用为玻璃液体温度。 温度计可根据用途与测量精度分为标准温度计与实用温度计2类.标准温度汁得精度高，它主要用于校正其它温度计。实用温度计就是指所供实际测温用得温度计,主要有实验用温度计、工业温度计、气象温度计、医用温度计等。中学常用棒式工业温度汁。其中酒精温度计得量程为100℃,水银温度计用２00℃与3６0℃２种量程规格。 使用注意事项