10×TBE电泳缓冲液使用说明书

Bio Rad电泳仪操作规程

Bio-rad小电泳槽及电泳仪操作规程 一．目的 为规范Bio-rad小电泳槽及电泳仪的基本操作、维护保养、异常处理程序，防止人为操作失误，确保Bio-rad小电泳槽及电泳仪正常运转，特制定本程序。 二．适用范围 本程序适用于Bio-rad小电泳槽及电泳仪。 三．责任 1. 本程序的实施者为Bio-rad小电泳槽及电泳仪操作者，各实验室负责人对 本程序的实施情况进行监督。 2. 日常运行及维护、定期维护、定期点检及保养由Bio-rad小电泳槽及电泳 仪操作者负责。 四．内容 1.灌胶 a、取出灌胶模具，打开封底盘至完全开放的状态，松开两侧螺丝，向外侧打开夹子。 b、取长方形和带凹槽的长玻板各一块，从内到外依次按带凹槽玻板及长方形玻板的顺序排列，形成gel sandwich。注意正确排列以防漏胶。 c、短玻板朝外将sandwich放入模具中，检测sandwich的底是否紧靠底面。旋紧螺丝。将封底盘锁至密闭状态。 d、将模具放在桌面上准备灌胶。 e、根据需要配制一定浓度的胶。 1、分离胶的灌制：用加样枪慢慢将胶加入sandwich中，注意不要有气泡。其上加0.1%SDS封顶. 2、浓缩胶的灌制：待分离胶凝后弃去SDS，开始灌浓缩胶，最后轻轻插入梳子。 f、待胶聚合后，拔出梳子，用电泳缓冲液清洗加样槽，去除未聚合的胶。 g、

模具放入电泳槽中。 2.电泳 a、加适量的电泳缓冲液 b、准备样品，加样。 c、盖上电泳槽的盖子，注意红色对正极，黑色对负极。打开电源，开始电泳。初始电压100V,15分钟后改为120v。 d、直至指示剂距前沿1cm处结束电泳，拔掉电源，小心取出胶，根据需要进行染色或转膜，回收电泳缓冲液（可重复利用3次）。 五．注意事项： a、每次用完后，立即清洗电泳槽，灌胶模具，玻璃板（先用自来水洗干净，再用蒸馏水冲一遍后放在架子上晾干）。 b、扣紧或打开灌胶模具时要用力均匀，以免压坏玻璃板。 c、盖上电泳槽的盖子时，务必注意正负极不要接反。

生物实验常用缓冲液和酶的配制

实验室常用技术参数资料 一、核酸及蛋白质常用数据 1．核苷三磷酸的物理常数 2．常用核酸的长度与分子量

3．常用核酸蛋白换算数据（1）重量换算 1μg=10-6g1pg=10-12g 1ng=10-9g 1fg=10-15g （2）分光光度换算： 1A260双链DNA=50μg/ml 1A260单链DNA=30μg/ml 1A260单链RNA=40μg/ml （3）DNA摩尔换算： 1μg 100bp DNA=1.52pmol=3.03pmol末端 1μg pBR322 DNA=0.36pmol 1pmol 1000bp DNA=0.66μg 1pmol pBR322=2.8μg 1kb双链DNA（钠盐）=6.6×105道尔顿 1kb单链DNA（钠盐）=3.3×105道尔顿 1kb单链RNA（钠盐）=3.4×105道尔顿 （4）蛋白摩尔换算： 100pmol分子量100，000蛋白质=10μg 100pmol分子量50，000蛋白质=5μg

100pmol分子量10，000蛋白质=1μg 氨基酸的平均分子量=126.7道尔顿 （5）蛋白质/DNA换算： 1kb DNA=333 个氨基酸编码容量=3.7×104MW蛋白质 10，000MW蛋白质=270bp DNA 30，000MW蛋白质=810bp DNA 50，000MW蛋白质=1.35kb 100，000MW蛋白质=2.7kb DNA 4．常用蛋白质分子量标准参照物

5．常用DNA分子量标准参照物 续上表

二、常用缓冲液 1．分子克隆常用缓冲液 2．磷酸缓冲液 （1）25℃下0.1mol/L磷酸钾缓冲液的配制※

53种常见缓冲液配制方法

53种常见缓冲液配制方法 乙醇－醋酸铵缓冲液(pH3.7)取5 mol/L醋酸溶液15.0 ml，加乙醇60 ml和水20 ml，用10 mol/L氢氧化铵溶液调节pH值至3.7，用水稀释至1000 ml，即得。 三羟甲基氨基甲烷缓冲液(pH8.0)取三羟甲基氨基甲烷12.14 g，加水800 ml，搅拌溶解，并稀释至1000 ml，用6 mol/L盐酸溶液调节pH值至8.0，即得。 三羟甲基氨基甲烷缓冲液(pH8.1)取氯化钙0.294 g，加0.2 mol/L三羟甲基氨基甲烷溶液40 ml使溶解，用1 mol/L盐酸溶液调节pH值至8.1，加水稀释至100 ml，即得。 三羟甲基氨基甲烷缓冲液(pH9.0)取三羟甲基氨基甲烷6.06 g，加盐酸赖氨酸3.65 g、氯化钠5.8 g、乙二胺四醋酸二钠0.37 g，再加水溶解使成1000 ml，调节pH值至9.0，即得。 乌洛托品缓冲液取乌洛托品75 g，加水溶解后，加浓氨溶液4.2 ml，再用水稀释至250 ml，即得。 巴比妥缓冲液(pH7.4)取巴比妥钠4.42 g，加水使溶解并稀释至400 ml，用2 mol/L盐酸溶液调节pH值至7.4，滤过，即得。 巴比妥缓冲液(pH8.6)取巴比妥5.52 g与巴比妥钠30.9 g，加水使溶解成2000 ml，即得。 巴比妥－氯化钠缓冲液(pH7.8)取巴比妥钠5.05 g，加氯化钠3.7 g及水适量使溶解，另取明胶0.5 g加水适量，加热溶解后并入上述溶液中。然后用0.2 mol/L盐酸溶液调节pH 值至7.8，再用水稀释至500 ml，即得。 甲酸钠缓冲液(pH3.3)取2 mol/L甲酸溶液25 ml，加酚酞指示液1滴，用2 mol/L氢氧化钠溶液中和，再加入2 mol/L甲酸溶液75 ml，用水稀释至200 ml，调节pH值至3.25～3.30，即得。 邻苯二甲酸盐缓冲液(pH5.6)取邻苯二甲酸氢钾10 g，加水900 ml，搅拌使溶解，用氢氧化钠试液(必要时用稀盐酸)调节pH值至5.6，加水稀释至1000 ml，混匀，即得。 枸橼酸盐缓冲液取枸橼酸4.2 g，加1 mol/L的20％乙醇制氢氧化钠溶液40 ml使溶解，再用20％乙醇稀释至100 ml，即得。 枸橼酸盐缓冲液(pH6.2)取2.1％枸橼酸水溶液，用50％氢氧化钠溶液调节pH值至6.2，即得。

各种缓冲液的配制方法大全

磷酸氢二钠–柠檬酸缓冲液 Na2HPO4分子量 = 14.98，0.2mol/L 溶液为28.40克/升。 Na2HPO4·2H2O 分子量 = 178.05，0.2mol/L 溶液含35.01克/升。 C4H2O7·H2O 分子量 = 210.14，0.1mol/L 溶液为21.01克/升 20%盐酸溶液如何配置： 取浓盐酸（质量百分比浓度为36.5%）一个体积（如100毫升），加入到96.5毫升水中就可以了。 36.5%*100*1.17=20%*m m=213.5(克) 所需水的质量为;213.5-117=96.5克，也就是96.5毫升水。 PH 0.2mol/L Na2HPO4 （毫升） 0.1mol/L 柠檬酸 （毫升） pH 0.2mol/L Na2HPO4 （毫升） 0.1mol/L 柠檬酸 （毫升） 2.2 2.4 2.6 2.8 3.0 3.2 3.4 3.6 3.8 4.0 4.2 4.4 4.6 4.8 5.0 0.40 1.24 2.18 3.17 4.11 4.94 5.70 6.44 7.10 7.71 8.28 8.82 9.35 9.86 10.30 10.60 18.76 17.82 16.83 15.89 15.06 14.30 13.56 12.90 12.29 11.72 11.18 10.65 10.14 9.70 5.2 5.4 5.6 5.8 6.0 6.2 6.4 6.6 6.8 7.0 7.2 7.4 7.6 7.8 8.0 10.72 11.15 11.60 12.09 12.63 13.22 13.85 14.55 15.45 16.47 17.39 18.17 18.73 1 9.15 19.45 9.28 8.85 8.40 7.91 7.37 6.78 6.15 5.45 4.55 3.53 2.61 1.83 1.27 0.85 0.55

5.缓冲液离子强度对电泳速度的影响

缓冲液离子强度对电泳速度的影响 目标：⒈阐述电泳的基本原理及注意事项。 ⒉初步掌握电泳技术（以血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳为例）。 ⒊观察并比较不同缓冲液离子强度对电泳速度的影响。 实验用品：电泳仪，电泳槽，醋酸纤维薄膜（2×8cm），点样器（X胶片），滤纸，无齿小镊子，pH8.6（I0.06和0.03）的巴比妥缓冲液等。 试剂：1、I0.06pH8.6的巴比妥缓冲液： 巴比妥钠12.76g 巴比妥 1.66g 蒸馏水1000ml 2、I0.03pH8.6的巴比妥缓冲液： 巴比妥钠 6.38 巴比妥0.83 蒸馏水1000ml 或用I0.06pH8.6的巴比妥缓冲液加蒸馏水稀释一倍即成。 3、氨基黑10B染色液： 氨基黑10B0.5g 冰醋酸10ml 乙醇50ml 蒸馏水40ml 4、漂洗液： 乙醇45ml 冰醋酸 5.0ml 蒸馏水50ml 实验原理： 由于血清中各种蛋白质等电点（pI）不同，所以在同一PH8.6缓冲液中电离程度不同，因而带电荷的多少不同。再则不同蛋白质其分子大小、形状等差异，把它放入同一电场中其电泳的迁移率（是指带电颗粒在单位电场强度下的电泳速度）不同而分离。蛋白质分子大而带电荷少的移动速度慢，如此将血清蛋白从正极到负极依次分为A、α1、α2、β、γ五个区带，经染色、漂洗、脱色，然后计算各蛋白质区带的迁移率，得出电泳缓冲液离子强度对电泳速度是如何影响的。 操作步骤： 1.一般电泳装置：示教 2.电泳操作： ①酸纤维薄膜的准备：在距一端1.5cm处用铅笔画一条细线，然后浸泡于I0.06PH8.6的巴比

妥缓冲液或I0.03PH8.6的巴比妥缓冲液中约20min。 ②取出，用滤纸吸走多余的缓冲液。 ③用点样器蘸取血样点于薄膜上。 ④将点好样的薄膜置于电泳槽上，点样面朝下，点样端置电场中的负极。 ⑤电泳：电压110~160V、时间35~40分钟。 ⑥染色：氨基黑10B或丽春红S染液染色2~3分钟。 ⑦漂洗：3~4次，背景变白，图象清晰。 结果观察与分析： 1.比较用I=0.03和I=0.06的缓冲液进行电泳时的结果，观察图形，判断用哪种离子强度好。 2.利用所记录的电泳电压（V），支持物有效长度（CM），电泳时间（S）和清蛋白移动距离（CM），分别计算用离子强度0.03和0.06的清蛋白迁移率，判断离子强度对电泳速度的影响。 ※迁移率（μ）是指带电颗粒在单位电场强度下的电泳速度（V）。 即：μ=V/E，∵V=d/t （cm/S）（t—时间d—移动距离cm） E=U/L(V/cm) (U—电压L—支持物有效长度) ∴μ=V/E=（d/t）/(U/L)=dL/Ut (cm2/vs) 结论：

JY300C电泳仪的使用说明

一、设置 /设置状态： 2、按“↑”键或“↓”键，可修改闪动位置； 3、按“ENT”键，选择电压U、电流I、功率的设置换挡。 二、输出 1、在停机/设置状态下按“RUN/STOP”键，使电泳仪输出； 2、液晶屏幕显示输出电压、电流、功率、运行累计时间。 三、停机 1、在运行状态下按“RUN/STOP”键，返回停机/设置状态； 2、如果定时时间到，显示“END”并自动停机，按“RUN/STOP”键，返回停机/设置 状态。 四、编辑 在停机/设置状态下连续按“EDIT”键即可进入编辑状态中的： →程序储存状态“SA VE[X]”按“EDIT”键 →程序选择状态“LOAD[X]”按“EDIT”键 →定时设置状态“XX:XX”按“EDIT”键 →编辑选择状态“QUIT” 1、在“SA VE[X]”程序储存状态下： a)按“↑”或“↓”键，可选择0~9储存程序编号； b)按“ENT”键，使程序储存并返回停机/设置状态； c)按“EDIT”键，放弃程序储存，进入程序选择状态。 2、在“LOAD[X]”程序选择状态下： a)按“↑”或“↓”键，可选择0~9储存程序编号； b)按“ENT”键，使程序调出并返回停机/设置状态； c)按“EDIT”键，放弃程序储存，进入定时设置状态。 3、在“XX:XX”定时设置状态下： a)按“↑”或“↓”键，可选择定时时间； [注]如果定时设置为00:00，即定义为“无定时” b)按“ENT”键，将所有设置参数储存并返回停机/设置状态； c)按“EDIT”键，放弃定时设置，进入编辑选择状态。 4、在“QUIT”编辑选择状态下： a) 按“ENT”键退出编辑，返回停机/设置状态； b) 按“EDIT”键，重复进入编辑状态。

缓冲溶液【(最全)常见缓冲溶液配制方法】

缓冲溶液【(最全)常见缓冲溶液配制方法】常见缓冲溶液配制 乙醇－醋酸铵缓冲液(pH3.7)：取5mol/L醋酸溶液15.0ml，加乙醇60ml和水20ml，用10mol/L氢氧化铵溶液调节pH值至3.7，用水稀释至1000ml。 三羟甲基氨基甲烷缓冲液(pH8.0)：取三羟甲基氨基甲烷12.14g，加水800ml，搅拌溶解，并稀释至1000ml，用6mol/L盐酸溶液调节pH值至8.0。 三羟甲基氨基甲烷缓冲液(pH8.1)：取氯化钙0.294g，加 0.2mol/L三羟甲基氨基甲烷溶液40ml使溶解，用1mol/L盐酸溶液 调节pH值至8.1，加水稀释至100ml。 三羟甲基氨基甲烷缓冲液(pH9.0)：取三羟甲基氨基甲烷6.06g，加盐酸赖氨酸3.65g，氯化钠5.8g，乙二胺四醋酸二钠0.37g，再加水溶解使成1000ml，调节pH值至9.0。 乌洛托品缓冲液：取乌洛托品75g，加水溶解后，加浓氨溶液4.2ml，再用水稀释至250ml。

巴比妥缓冲液(pH7.4)：取巴比妥钠4.42g，加水使溶解并稀释至400ml，用2mol/L盐酸溶液调节pH值至7.4，滤过。 巴比妥缓冲液(pH8.6)：取巴比妥5.52g与巴比妥钠30.9g，加水使溶解成2000ml。 巴比妥－氯化钠缓冲液(pH7.8)：取巴比妥钠5.05g，加氯化钠3.7g及水适量使溶解，另取明胶0.5g加水适量，加热溶解后并入上述溶液中。然后用0.2mol/L盐酸溶液调节pH值至7.8，再用水稀释至500ml。 甲酸钠缓冲液(pH3.3)：取2mol/L甲酸溶液25ml，加酚酞指示液1滴，用2mol/L氢氧化钠溶液中和，再加入2mol/L甲酸溶液75ml,用水稀释至200ml,调节pH值至3.25～3.30。 邻苯二甲酸盐缓冲液(pH5.6)：取邻苯二甲酸氢钾10g，加水900ml,搅拌使溶解，用氢氧化钠试液(必要时用稀盐酸)调节pH值至5.6，加水稀释至1000ml，混匀。 枸橼酸盐缓冲液：取枸橼酸4.2g,加1mol/L的20％乙醇制氢氧化钠溶液40ml使溶解,再用20％乙醇稀释至100ml。

常见缓冲液的配方

一.常用贮液与溶液 1mol/L亚精胺（Spermidine）: 溶解2.55g亚精胺于足量的水中，使终体积为10ml。分装成小份贮存于-20℃。 1mol/L精胺（Spermine）：溶解3.48g精胺于足量的水中，使终体积为10ml。分装成小份贮存于-20℃。 10mol/L乙酸胺（ammonium acetate）：将77.1g乙酸胺溶解于水中，加水定容至1L后，用0.22um孔径的滤膜过滤除菌。 10mg/ml牛血清蛋白(BSA）：加100mg的牛血清蛋白（组分V或分子生物学试剂级，无DNA酶）于9.5ml水中（为减少变性， 须将蛋白加入水中，而不是将水加入蛋白），盖好盖后，轻轻摇动，直至牛血清蛋白完全溶解为止。不要涡旋混合。加水定容到10ml，然后分装成小份贮存于-20℃。 1mol/L二硫苏糖醇（DTT）：在二硫苏糖醇5g的原装瓶中加32.4ml水，分成小份贮存于-20℃。或转移100mg的二硫苏糖醇至微量离心管，加0.65ml的水配制成1mol/L二硫苏糖醇溶液。 8mol/L乙酸钾（potassium acetate）：溶解78.5g乙酸钾于足量的水中，加水定容到100ml。 1mol/L氯化钾（KCl）：溶解7.46g氯化钾于足量的水中，加水定容到100ml。3mol/L乙酸钠（sodium acetate）：溶解40.8g的三水乙酸钠于约90ml水中，用冰乙酸调溶液的pH至5.2，再加水定容到100ml。 0.5mol/L EDTA:配制等摩尔的Na2EDTA和NaOH溶液（0.5mol/L），混合后形成EDTA的三钠盐。或称取186.1g的Na2EDTA?2H2O和20g的NaOH，

PAGE电泳操作说明

非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳 一、制胶 本实验室常用40ml 体系胶浓度9% NH基团中的氢原子被甲基替换而得。工作原理在于TEMED可以催化过硫酸铵或核黄素产生自由基，从而引发聚合反应，促进聚丙烯酰胺凝胶的形成。 根据不同情况TEMED和过硫酸铵可适量加减。 以上的各组分按顺序加入（TEMED最后加入），充分的摇匀后用玻璃棒引流到两块 玻璃板之间，当胶加到上部时，在灌胶口处插入梳子，此步骤要选择合适的梳子，且插入时要尽量缓慢，防止气泡的产生，影响点样，若有漏出要及时的补加聚丙烯酰胺溶液，后用夹子将下面和两边夹紧防止漏胶，放在室温下让其凝结15min以上。 制胶时底板(不带缺口)和盖板(带缺口)与胶接触的那一面以及梳子齿要保证干净，没有灰尘、胶颗粒等，制胶前一般会用酒精擦拭玻璃板表面和梳子齿。 凝固后上电泳仪前将夹子、胶条、梳子卸掉用水冲洗上样孔将残胶冲掉同时赶走气泡。 二、电泳 PCR 扩增产物由非变性聚丙烯酰胺凝胶(PAGE)垂直电泳分离检测。稳定功率20W(电压200V±)，电泳时间一般1.5h，可根据产物片段大小适当调整。 1.预电泳，待凝胶聚合后，将梳子拔出，在电泳槽内加入 1×TBE，预电泳10分钟 2.上样，预电泳后，将PCR产物和loading buffer 3.5ul混合，用移液枪吸取5ul 混 合液轻轻地加入点样孔，尽量的减少加样时间，以防样本弥散。 3.接上电源进行电泳， 电泳槽和玻璃板要用夹子夹紧，否则漏缓冲液会让整个条带跑歪。 功率过高会使温度升高导致玻璃板炸裂，同时注意环境温度，天热时开空调或风扇散热。 三、染色 本实验采用银染法 1.电泳结束后，切断电源，倒去电泳缓冲液，卸去玻璃板，去掉胶条。 2．在托盘中加入固定液100ml/块胶。将整版胶小心放入溶液中（要没过胶），水平摇床上摇2min。 3.加入1ml 20% 硝酸银溶液，8—10min。后倒掉溶液，加清水洗一次。 4.托盘中加入显影液100ml/块胶，于摇床震荡至显色。 5.将洗干净的凝胶放在保鲜膜上包好，以备统计带型和照相。

常见缓冲溶液配制方法

常见缓冲溶液配制方法 乙醇－醋酸铵缓冲液：取5mol/L醋酸溶液，加乙醇60ml和水20ml，用10mol/L氢氧化铵溶液调节pH值至，用水稀释至1000ml。 三羟甲基氨基甲烷缓冲液：取三羟甲基氨基甲烷12.14g，加水800ml，搅拌溶解，并稀释至1000ml，用6mol/L盐酸溶液调节pH值至。 三羟甲基氨基甲烷缓冲液：取氯化钙0.294g，加L三羟甲基氨基甲烷溶液40ml使溶解，用1mol/L 盐酸溶液调节pH值至，加水稀释至100ml。 三羟甲基氨基甲烷缓冲液：取三羟甲基氨基甲烷6.06g，加盐酸赖氨酸3.65g，氯化钠5.8g，乙二胺四醋酸二钠0.37g，再加水溶解使成1000ml，调节pH值至。 乌洛托品缓冲液：取乌洛托品75g，加水溶解后，加浓氨溶液，再用水稀释至250ml。 巴比妥缓冲液：取巴比妥钠4.42g，加水使溶解并稀释至400ml，用2mol/L盐酸溶液调节pH值至，滤过。 巴比妥缓冲液：取巴比妥5.52g与巴比妥钠30.9g，加水使溶解成2000ml。 巴比妥－氯化钠缓冲液：取巴比妥钠5.05g，加氯化钠3.7g及水适量使溶解，另取明胶0.5g加水适量，加热溶解后并入上述溶液中。然后用L盐酸溶液调节pH值至，再用水稀释至500ml。 甲酸钠缓冲液：取2mol/L甲酸溶液25ml，加酚酞指示液1滴，用2mol/L氢氧化钠溶液中和，再加入2mol/L甲酸溶液75ml,用水稀释至200ml,调节pH值至～。 邻苯二甲酸盐缓冲液：取邻苯二甲酸氢钾10g，加水900ml,搅拌使溶解，用氢氧化钠试液(必要时用稀盐酸)调节pH值至，加水稀释至1000ml，混匀。 枸橼酸盐缓冲液：取枸橼酸4.2g,加1mol/L的20％乙醇制氢氧化钠溶液40ml使溶解,再用20％乙醇稀释至100ml。 枸橼酸盐缓冲液：取％枸橼酸水溶液，用50％氢氧化钠溶液调节pH值至。 枸橼酸－磷酸氢二钠缓冲液：甲液：取枸橼酸21g或无水枸橼酸19.2g,加水使溶解成1000ml，置冰箱内保存。乙液：取磷酸氢二钠71.63g，加水使溶解成1000ml。取上述甲液与乙液混合，摇匀。 氨－氯化铵缓冲液：取氯化铵1.07g，加水使溶解成100ml，再加稀氨溶液(1→30)调节pH值至。 氨－氯化铵缓冲液：取氯化铵5.4g，加水20ml溶解后，加浓氯溶液35ml，再加水稀释至100ml。 硼砂－氯化钙缓冲液：取硼砂0.572g与氯化钙2.94g，加水约800ml溶解后,用1mol/L盐酸溶液约调节pH值至，加水稀释至1000ml。 硼砂－碳酸钠缓冲液～：取无水碳酸钠5.30g,加水使溶解成1000ml；另取硼砂1.91g，加水使溶解成100ml。临用前取碳酸钠溶液973ml与硼砂溶液27ml，混匀。 硼酸－氯化钾缓冲液：取硼酸3.09g,加L氯化钾溶液500ml使溶解，再加L氢氧化钠溶液210ml。 醋酸盐缓冲液：取醋酸铵25g，加水25ml溶解后，加7mol/L盐酸溶液38ml，用2mol/L盐酸溶液或5mol/L氨溶液准确调节pH值至(电位法指示)，用水稀释至100ml，即得。 醋酸－锂盐缓冲液：取冰醋酸50ml，加水800ml混合后，用氢氧化锂调节pH值至，再加水稀释至1000ml。 醋酸－醋酸钠缓冲液：取醋酸钠5.1g，加冰醋酸20ml，再加水稀释至250ml。 醋酸－醋酸钠缓冲液：取无水醋酸钠20g，加水300ml溶解后，加溴酚蓝指示液1ml及冰醋酸60～80ml，至溶液从蓝色转变为纯绿色，再加水稀释至1000ml。 醋酸－醋酸钠缓冲液：取2mol/L醋酸钠溶液13ml与2mol/L醋酸溶液87ml，加每1ml含铜1mg的硫酸铜溶液，再加水稀释至1000ml。 醋酸－醋酸钠缓冲液：取醋酸钠18g，加冰醋酸，再加水稀释至1000ml。 醋酸－醋酸钠缓冲液：取醋酸钠5.4g，加水50ml使溶解，用冰醋酸调节pH值至，再加水稀释至100ml。 醋酸－醋酸钠缓冲液：取醋酸钠54.6g，加1mol/L醋酸溶液20ml溶解后，加水稀释至500ml。 醋酸－醋酸钾缓冲液：取醋酸钾14g，加冰醋酸，再加水稀释至1000ml。 醋酸－醋酸铵缓冲液：取醋酸铵7.7g，加水50ml溶解后，加冰醋酸6ml与适量的水使成100ml。

电泳仪使用方法

电泳仪使用方法-CAL-FENGHAI.-(YICAI)-Company One1

电泳仪使用方法 1．首先用导线将电泳槽的两个电极与电泳仪的直流输出端联接，注意极性不要接反。 2．电泳仪电源开关调至关的位置，电压旋钮转到最小，根据工作需要选择稳压稳流方式及电压电流范围。 3．接通电源，缓缓旋转电压调节钮直到达到的所需电压为止，设定电泳终止时间，此时电泳即开始进行。 4．工作完毕后，应将各旋钮、开关旋至零位或关闭状态，并拨出电泳插头。 注意事项 1．电泳仪通电进入工作状态后，禁止人体接触电极、电泳物及其它可能带电部分，也不能到电泳槽内取放东西，如需要应先断电，以免触电。同时要求仪器必须有良好接地端，以防漏电。 2．仪器通电后，不要临时增加或拨除输出导线插头，以防短路现象发生，虽然仪器内部附设有保险丝，但短路现象仍有可能导致仪器损坏。 3．由于不同介质支持物的电阻值不同，电泳时所通过的电流量也不同，其泳动速度及泳至终点所需时间也不同，故不同介质支持物的电泳不要同时在同一电泳仪上进行。 4．在总电流不超过仪器额定电流时（最大电流范围），可以多槽关联使用，但要注意不能超载，否则容易影响仪器寿命。 5．某些特殊情况下需检查仪器电泳输入情况时，允许在稳压状态下空载开机，但在稳流状态下必须先接好负载再开机，否则电压表指针将大幅度跳动，容易造成不必要的人为机器损坏。 6．使用过程中发现异常现象，如较大噪音、放电或异常气味，须立即切断电源，进行检修，以免发生意外事故。 夹芯式垂直电泳槽使用方法： 二、使用方法 (一)清洗部件 上述部件组装前要彻底清洗干净。尤其是玻璃板及凹形带槽橡胶框，必须用泡沫海绵沾少许肥皂粉或洗涤剂彻底清洗干净。清洗后的玻璃板应放在玻璃板支架上晾干水后方能使用。 (二)组装电泳槽 A、1、将四只固定螺杆插进一只贮液框(半上槽)的相应孔洞中，然后将贮液框仰放在桌上。 2、左手拿凹型槽橡胶模框，右手的拇指与中指握住玻璃板的两侧边缘插到橡胶模框内 (注意手指不能接触灌胶面的玻璃板)。 3、将带有玻璃的橡胶模框子放在仰放的贮液槽框架上，其下缘必须对齐贮液槽框下缘。 4、双手拿另一只贮液槽框与仰放在桌上的贮液槽框相合，并使橡胶框上的凸出线位于贮液槽有机玻璃框中央。 5、装上四只螺母，拧紧螺丝。注意拧紧螺丝时用力应均匀，最好用双手按斜角位置双双逐渐拧紧。 6、将电泳槽垂直竖起，放在桌上，带短玻璃板的贮液槽称上槽(阴极端)，带长玻璃板的贮液槽称为下槽(阳极端)，在长玻璃板与橡胶框间有一缝隙。此缝隙可用已熔化的10％琼脂沿长玻璃板下端灌入，为防止留存气泡，可稍抬起一端即可赶去气泡。待琼脂完全凝固后才能灌胶。 B、也可将槽垂直竖起，将带有玻璃的橡胶模框直接放入槽中，对称拧紧螺丝后，用琼脂封底边。 (三)灌胶 1、先灌分离胶，待凝固后再灌浓缩胶。灌胶前接通冷却水，夹紧连接上下贮液槽的两根橡胶管。 2、用细头滴管吸取胶液，沿长、短玻璃板中间缝隙从一端加入胶液。为防止产生气泡，可稍拾起另一端(气泡往高处走)，不断加入胶液。若单层胶(分离胶)则加胶量约距离短玻璃板上端厘米处，轻轻加少许水，双手轻轻将梳子插入，待胶凝后就可形成凹形加样孔。 3、为防止漏胶，在上、下贮液槽中立即加入蒸馏水，但蒸馏水不能超过短玻璃板上缘。 4、胶凝固后即可看到样品槽梳子与凝胶板间有一层折

生物化学常用缓冲液

生物化学常用缓冲液 （一）基本概念 ⑴ Bronsted-Lowry酸碱理论（酸碱质子理论）: 1923年由丹麦化学家J.N.Brφnsted和英国化学家T.M.Lowry同时提出了酸碱质子学说，认为凡能释放质子的分子或离子（如：H2O，HCl，NH4+，HSO4- 等）称为酸，凡能接受质子的分子或离子（如：H2O，NH3，Cl-等）称为碱。因此，一种酸释放质子后即成为碱，称为该酸的共轭碱，同样一种碱与质子结合后，形成对应的酸，称为该碱的共轭酸。 如盐酸在水中的解离： HCl Cl- ＋H+ HCl是酸，Cl-是它的共轭碱。 pH = pKa+log{[质子受体]/[质子供体]} ⑵缓冲体系的设计： 1960年，N.E.Good和他的同事们提出，适合生命科学研究使用的缓冲体系应具有以下特性： ① pKa值在6-8之间； ②在水中的溶解度高； ③不易穿透生物膜； ④盐效应小； ⑤离子浓度、溶液组成和温度对解离的影响小； ⑥不与金属离子生成复合物或沉淀； ⑦该缓冲剂化学稳定； ⑧紫外和可见光波长范围内光吸收小； ⑨易制得高纯度的盐。 （二）生物化学常用缓冲液 ⑴磷酸盐缓冲液： 磷酸盐是生物化学研究中使用最广泛的一种缓冲剂，由於它们是二级

解离，有二个pKa值，所以用它们配制的缓冲液，pH范围最宽： NaH2PO4： pKa1＝2.12， pKa2＝7.21 Na2HPO4： pKa1＝7.21， pKa2＝12.32 配酸性缓冲液：用NaH2PO4，pH＝1-4， 配中性缓冲液：用混合的两种磷酸盐，pH＝6-8， 配碱性缓冲液：用Na2HPO4，pH＝10-12。 用钾盐比钠盐好，因为低温时钠盐难溶，钾盐易溶，但若配制SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳的缓冲液时，只能用磷酸钠而不能用磷酸钾，因为SDS（十二烷基硫酸钠）会与钾盐生成难溶的十二烷基硫酸钾。 磷酸盐缓冲液的优点为： ①容易配制成各种浓度的缓冲液； ②适用的pH范围宽； ③pH受温度的影响小； ④缓冲液稀释后pH变化小，如稀释十倍后pH的变化小于0.1。 其缺点为： ①易与常见的钙Ca++离子、镁Mg++离子以及重金属离子缔合生成沉淀； ②会抑制某些生物化学过程，如对某些酶的催化作用会产生某种程度的抑制作用。 ⑵ Tris（三羟甲基氨基甲烷）缓冲液： Tris缓冲液在生物化学研究中使用的越来越多，有超过磷酸盐缓冲液的趋势，如在SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳中已都使用Tris缓冲液，而很少再用磷酸盐。 Tris缓冲液的常用有效pH范围是在“中性”范围，例如： Tris-HCl缓冲液： pH＝7.5-8.5 Tris-磷酸盐缓冲液： pH＝5.0-9.0 Tris-HCl缓冲液的优点是： ①因为Tris的碱性较强，所以可以只用这一种缓冲体系配制pH范围由

(最全)常见缓冲溶液配制方法

常见缓冲溶液配制方法 乙醇－醋酸铵缓冲液(pH3.7)：取5mol/L醋酸溶液15.0ml，加乙醇60ml和水20ml，用10mol/L氢氧化铵溶液调节pH值至3.7，用水稀释至1000ml。 三羟甲基氨基甲烷缓冲液(pH8.0)：取三羟甲基氨基甲烷12.14g，加水800ml，搅拌溶解，并稀释至1000ml，用6mol/L盐酸溶液调节pH值至8.0。 三羟甲基氨基甲烷缓冲液(pH8.1)：取氯化钙0.294g，加0.2mol/L三羟甲基氨基甲烷溶液40ml 使精品文档，你值得期待 溶解，用1mol/L盐酸溶液调节pH值至8.1，加水稀释至100ml。 三羟甲基氨基甲烷缓冲液(pH9.0)：取三羟甲基氨基甲烷6.06g，加盐酸赖氨酸3.65g，氯化钠5.8g，乙二胺四醋酸二钠0.37g，再加水溶解使成1000ml，调节pH值至9.0。 乌洛托品缓冲液：取乌洛托品75g，加水溶解后，加浓氨溶液4.2ml，再用水稀释至250ml。 巴比妥缓冲液(pH7.4)：取巴比妥钠4.42g，加水使溶解并稀释至400ml，用2mol/L盐酸溶液调节pH 值至7.4，滤过。 巴比妥缓冲液(pH8.6)：取巴比妥5.52g与巴比妥钠30.9g，加水使溶解成2000ml。 巴比妥－氯化钠缓冲液(pH7.8)：取巴比妥钠5.05g，加氯化钠3.7g及水适量使溶解，另取明胶0.5g 加水适量，加热溶解后并入上述溶液中。然后用0.2mol/L盐酸溶液调节pH值至7.8，再用水稀释至500ml。 甲酸钠缓冲液(pH3.3)：取2mol/L甲酸溶液25ml，加酚酞指示液1滴，用2mol/L氢氧化钠溶液中和，再加入2mol/L甲酸溶液75ml,用水稀释至200ml,调节pH值至3.25～3.30。 邻苯二甲酸盐缓冲液(pH5.6)：取邻苯二甲酸氢钾10g，加水900ml,搅拌使溶解，用氢氧化钠试液(必要时用稀盐酸)调节pH值至5.6，加水稀释至1000ml，混匀。 枸橼酸盐缓冲液：取枸橼酸4.2g,加1mol/L的20％乙醇制氢氧化钠溶液40ml使溶解,再用20％乙醇稀释至100ml。 枸橼酸盐缓冲液(pH6.2)：取2.1％枸橼酸水溶液，用50％氢氧化钠溶液调节pH值至6.2。 枸橼酸－磷酸氢二钠缓冲液(pH4.0)：甲液：取枸橼酸21g或无水枸橼酸19.2g,加水使溶解成1000ml，置冰箱内保存。乙液：取磷酸氢二钠71.63g，加水使溶解成1000ml。取上述甲液61.45ml与乙液38.55ml 混合，摇匀。 氨－氯化铵缓冲液(pH8.0)：取氯化铵1.07g，加水使溶解成100ml，再加稀氨溶液(1→30)调节pH值至8.0。 氨－氯化铵缓冲液(pH10.0)：取氯化铵5.4g，加水20ml溶解后，加浓氯溶液35ml，再加水稀释至100ml。 硼砂－氯化钙缓冲液(pH8.0)：取硼砂0.572g与氯化钙2.94g，加水约800ml溶解后,用1mol/L盐酸溶液约2.5ml调节pH值至8.0，加水稀释至1000ml。 硼砂－碳酸钠缓冲液(pH10.8～11.2)：取无水碳酸钠5.30g,加水使溶解成1000ml；另取硼砂1.91g，加水使溶解成100ml。临用前取碳酸钠溶液973ml与硼砂溶液27ml，混匀。 硼酸－氯化钾缓冲液(pH9.0)：取硼酸3.09g,加0.1mol/L氯化钾溶液500ml使溶解，再加0.1mol/L 氢氧化钠溶液210ml。 醋酸盐缓冲液(pH3.5)：取醋酸铵25g，加水25ml溶解后，加7mol/L盐酸溶液38ml，用2mol/L盐酸溶液或5mol/L氨溶液准确调节pH值至3.5(电位法指示)，用水稀释至100ml，即得。 醋酸－锂盐缓冲液(pH3.0)：取冰醋酸50ml，加水800ml混合后，用氢氧化锂调节pH值至3.0，再加水稀释至1000ml。 醋酸－醋酸钠缓冲液(pH3.6)：取醋酸钠5.1g，加冰醋酸20ml，再加水稀释至250ml。 醋酸－醋酸钠缓冲液(pH3.7)：取无水醋酸钠20g，加水300ml溶解后，加溴酚蓝指示液1ml及冰醋酸60～80ml，至溶液从蓝色转变为纯绿色，再加水稀释至1000ml。 醋酸－醋酸钠缓冲液(pH3.8)：取2mol/L醋酸钠溶液13ml与2mol/L醋酸溶液87ml，加每1ml含铜1mg的硫酸铜溶液0.5ml，再加水稀释至1000ml。

DNA电泳相关试剂及缓冲液的配制

DNA 电泳相关试剂及缓冲液的配制

1. 0.5M EDTA(pH=8.0):在800ml 蒸馏水中加入186.1g 二水乙二胺四乙酸钠（EDTA-Na 2·2H 2O),充分搅拌，这时溶液为乳白色，加NaOH 调解pH 值至8.0，这时溶液颜色逐渐变为澄清。最后 定容至1L 。高压灭菌。 2. 5 X TBE:Tris 碱54g;硼酸27.5g;20ml0.5M EDTA(pH=8.0),加蒸馏水定容至1L 。高压灭菌。（不过我在实验中没有灭菌，实验结果影响不大）。1 X TBE:5 X TBE 缓冲液与蒸馏水按 1: 4 稀释就OK 。 配置方法方法1：1%的溴酚蓝 将托盘天平上称取1g 溴酚蓝定溶于100ml 无水乙醇中，转移入 滴瓶中，贴标签备用。 方法2：0.05% 的溴酚蓝 配western blot 用的2*SDS 上样缓冲液需要用到0.1% 的溴酚蓝，

2-DE中溴酚蓝一般也是配成0.1%母液。实际上，溴酚蓝在水中的溶解度不高，直接将0.1g溴酚蓝溶于100ml水是有困难的。下面是其较合适的配制方法： 0.05%的溴酚蓝配制方法：取溴酚蓝0.1g，加0.05mol/L氢氧化钠溶液3.0ml使溶解，再加水稀释至200ml，即得。变色范围pH2.8～4.6（黄→蓝绿）。只是不知道加入NaOH会不会影响2-DE实验。估计影响不大，因为指示剂用量毕竟很少。 方法3：1％溴酚蓝 加1g水溶性钠型溴酚蓝于100ml水中，搅拌或涡旋混合直到完全溶解。溴酚蓝其钠盐易溶解在水里。 相关词条 甲醇、乙醇、苯、有机化学、氢氧化钠 Western上样缓冲液配制整理

产品使用说明书

产品使用说明书 D -Tube TM 透析透析//电洗脱管电洗脱管：： Mini/Midi/Maxi/Mega/D Mini/Midi/Maxi/Mega/D--Tube96TM *建议同时参考本说明书英文原文（说明书编号TB422）。 产品名称产品名称 包装包装 货号货号 D-Tube? Dialyzer Mini, 截留分子量 6–8kDa D-Tube Dialyzer Mini，截留分子量 12–14kDa 10个 10个 71504-3 71505-3 D-Tube Dialyzer Midi, 截留分子量 3.5kDa D-Tube Dialyzer Midi, 截留分子量6–8kDa 10个 10个 71506-3 71507-3 D-Tube Dialyzer Maxi, 截留分子量 3.5kDa D-Tube Dialyzer Maxi, 截留分子量6–8kDa D-Tube Dialyzer Maxi, 截留分子量12-14kDa 10个 10个 10个 71508-3 71509-3 71510-3 D-Tube96? Dialyzer, 截留分子量6-8kDa D-Tube96 Dialyzer, 截留分子量12-14kDa 1 1 71712-3 71713-3 D-Tube Electroelution Accessory Kit 1 71511-3 截留分子量截留分子量 体积体积 试剂盒包装试剂盒包装 目录号目录号 D-Tube? Dialyzer Mega D-Tube Dialyzer Mega D-Tube Dialyzer Mega D-Tube Dialyzer Mega 3.5kDa（蓝色） 3.5kDa（蓝色） 6-8kDa（粉色） 6-8kDa（粉色） 3-10ml 3-10ml 3-10ml 3-10ml 10个 50个 10个 50个 71739-3 71739-4 71740-3 71740-4 D-Tube Dialyzer Mega D-Tube Dialyzer Mega D-Tube Dialyzer Mega D-Tube Dialyzer Mega 3.5kDa（蓝色） 3.5kDa（蓝色） 6-8kDa（粉色） 6-8kDa（粉色） 10-15ml 10-15ml 10-15ml 10-15ml 10个 50个 10个 50个 71742-3 71742-4 71743-3 71743-4 D-Tube Dialyzer Mega D-Tube Dialyzer Mega D-Tube Dialyzer Mega D-Tube Dialyzer Mega 3.5kDa（蓝色） 3.5kDa（蓝色） 6-8kDa（粉色） 6-8kDa（粉色） 15-20m 15-20ml 15-20ml 15-20ml 10个 50个 10个 50个 71745-3 71745-4 71746-3 71746-4 Floating Racks，Mega - - 10个 71748-3 试剂盒概述试剂盒概述 D-Tube? 透析管为生物样品制备提供了极为方便、通用的操作系统。该系统包括两种操作模式——透析和电洗脱，能够高效地替换样品缓冲液或从凝胶中抽提蛋白质、DNA或RNA。所有操作只需在一支离心管中进行，简单快捷，适合在很多实验条件下使用。样品操作中不再需要注射器，微量离心，专门的电洗脱装置或是重复繁琐的操作步骤，只需实验室常规移液器进行样品的添加和移除即可。D-Tube?透析管的双膜设计（可以方便地监测样品水分挥发过程）和大表面积使其亦可用来浓缩生物样品。 D-Tube? 透析管按容量不同分为几种型号：Mini型（10-250μl），Midi型（50-800μl），Maxi型（500-3000μl）和Mega型（分别有3-10ml，10-15ml，15-20ml三种载样体积）。Maxi型号的D-Tube? 透析管试剂盒中包括两个盖子，可以方便将透析管的容量分别调节为500-200μl和2000-3000μl。Mega型透析管的截留分子量有两种，以不同颜色区分：3.5kDa（蓝色）和6-8kDa（粉色）；Mega型透析管也配有不同的管帽，以方便地根据需要调整最大载样体积。底管则决定了它的截留分子量，相同颜色的底管（具有相同的截留分子量）可以与不同的管帽（具有不同的最大载样体积）组合使用的（如图1）。D-Tube96?采用96-管的配置形式，其它特征与Mini型D-Tube? 透析管一致。所有D-Tube

DYY-6C电泳仪操作步骤

DYY-6C电泳仪使用说明 操作步骤： 1．接好电源线并确认与有接地保护的电源插座相连。按颜色接好电泳槽与电泳仪的连接导线，并装入电泳样品。 2．确认电源符合要求后，开启“电源开关”。此时“液晶显示屏”显示欢迎界面，同时仪器蜂鸣4声，然后显示上次工作的设定值，对于每次重复使用同一参数时，可直接选择Start后启动输出。3．如要改变其数值可按上【▲】下【▼】按键。 4．如希望查看并设定电压、电流和定时时间，可以按【选择】键，此时←指示相应位置。同样，其数值由上下调节按键控制。 5．按【启/停】键后，仪器鸣响4声，输出启动，“输出指示灯”闪亮，当输出稳定后，稳压/稳流状态改变时，仪器会自动鸣响2声以示提醒用户。仪器正常输出后，设定值Us、Is、Ts自动变为实际值U、I、T。 6．在仪器正常输出时，按【选择】键，相应显示：Us，Is，Ts，T。 7．选择设置Us、Is、Ts后，在8秒内不按任何按键，则自动返回显示实际值U、I、T。 8．在仪器正常输出时若要停机，可按【启/停】键，输出立刻关闭显示“stop”同时仪器反复鸣响，此时应按一下【选择】键，仪器停止鸣响。如果希望继续工作则应选择“Go on”，定时时间继续累加。而如果选择“Start”，则计时重新从“0：00”开始。 9．定时到后仪器自动显示已用时间并反复鸣响以提示用户。考录到电泳的实际情况，仪器输出始终不关，等待用户手动停机，如果用户希望继续工作，可以按一下【选择】键，仪器停止蜂鸣。 当达到仪器的最大定时时间仪器将自动关输出，显示“stop”，以保证使用安全。 注意事项： 1．本机使用一段时间后应检查电极连线与电泳槽是否接触良好，以避免因连接故障造成仪器不能正常工作。 2．仪器使用中，请勿将电泳槽放在电泳仪上进行实验工作，严禁溅入电解质溶液。如溶液已进入电泳仪，切勿接通电源，以免造成事故。同时应由专业人员修理才可使用。 3．本机输出电压较高，开机后人体不宜和电泳槽溶液或样品接触，最好关机后再看样品，以免触电。 4．本仪器输出功率较大，因此采用了通风散热电路，当输出电流达到一定数值时仪器后面板的风扇自动启动，因此，在仪器工作时不要用物体遮挡后面板。 5．使用过程中如发现异常现象，要立即断电并进行检修。对不明原因可与厂家技术科联系。6．在使用过程中出现停电后来电情况，本仪器将回到初始设定状态。 7．当仪器定时达到最大时间100小时后，仪器自动关闭输出，并显示“END”。 8．长时间不用应关闭电源。长期不用应拔下电源插头并盖上防护罩。 9．及时取走自己的物品，注意用电安全，保持实验室清洁，不浪费。仪器不正常时，及时上报，不得自行处理。

各种缓冲液的配制方法

1．甘氨酸–盐酸缓冲液（0.05mol/L） X毫升0.2 mol/L甘氨酸+Y毫升0.2 mol/L HCI，再加水稀释至200毫升 甘氨酸分子量 = 75.07，0.2 mol/L甘氨酸溶液含15.01克/升。 2．邻苯二甲酸–盐酸缓冲液（0.05 mol/L） X毫升0.2 mol/L邻苯二甲酸氢钾 + 0.2 mol/L HCl，再加水稀释到20毫升 邻苯二甲酸氢钾分子量 = 204.23，0.2 mol/L邻苯二甲酸氢溶液含40.85克/升3．磷酸氢二钠–柠檬酸缓冲液 Na2HPO4分子量 = 14.98，0.2 mol/L溶液为28.40克/升。 Na2HPO4-2H2O分子量 = 178.05，0.2 mol/L溶液含35.01克/升。 C4H2O7·H2O分子量 = 210.14，0.1 mol/L溶液为21.01克/升。

4．柠檬酸–氢氧化钠-盐酸缓冲液 ① 使用时可以每升中加入1克克酚，若最后pH 值有变化，再用少量50% 氢氧化钠溶液或浓盐酸调节，冰箱保存。 ② 5．柠檬酸–柠檬酸钠缓冲液（0.1 mol/L ） 柠檬酸C 6H 8O 7·H 2O ：分子量210.14，0.1 mol/L 溶液为21.01克/升。 柠檬酸钠Na 3 C 6H 5O 7·2H 2O ：分子量294.12，0.1 mol/L 溶液为29.41克/毫升。 6．乙酸–乙酸钠缓冲液（0.2 mol/L ） Na 2Ac·3H 2O 分子量 = 136.09，0.2 mol/L 溶液为27.22克/升。 7．磷酸盐缓冲液

（1）磷酸氢二钠–磷酸二氢钠缓冲液（0.2） Na 2HPO 4·2H 2O 分子量 = 178.05， 0.2 mol/L 溶液为85.61克/升。 Na 2HPO 4·2H 2O 分子量 = 358.22，0.2 mol/L 溶液为71.64克/升。 Na 2HPO 4·2H 2O 分子量 = 156.03，0.2 mol/L 溶液为31.21克/升。 （2）磷酸氢二钠–磷酸二氢钾缓冲液（1/15 mol/L ） Na 2HPO 4·2H 2O 分子量 = 178.05，1/15M 溶液为11.876克/升。 KH 2PO 4分子量 = 136.09，1/15M 溶液为9.078克/升。 8．磷酸二氢钾–氢氧化钠缓冲液（0.05M ） X 毫升0.2M K 2PO 4 + Y 毫升0.2N NaOH 加水稀释至29毫升