当前位置：文档库 › 羊毛角蛋白的提取及其成膜性

羊毛角蛋白的提取及其成膜性

万方数据

羊毛角蛋白的提取及其成膜性

作者：徐恒星，史吉华，周奥佳，阎克路， XU Hengxing， SHI Jihua， ZHOU Aojia， YAN Kelu

作者单位：徐恒星,史吉华,阎克路,XU Hengxing,SHI Jihua,YAN Kelu(东华大学化学化工与生物工程学院,上海201620;东华大学纺织面料技术教育部重点实验室,上海201620)，周奥佳,ZHOU

Aojia(东华大学化学化工与生物工程学院,上海,201620)

刊名：

纺织学报

英文刊名：Journal of Textile Research

年，卷(期)：2012,33(6)

本文链接：https://www.wendangku.net/doc/5017786273.html,/Periodical_fzxb201206009.aspx

植物蛋白质提取方法总汇

植物蛋白质提取方法总汇一、植物组织蛋白质提取方法 1、根据样品重量(1g样品加入3.5ml提取液，可根据材料不同适当加入)，准备提取液放在冰上。 2、把样品放在研钵中用液氮研磨，研磨后加入提取液中在冰上静置(3-4小时)。 3、用离心机离心8000rpm40min4℃或11100rpm20min4℃ 4、提取上清液，样品制备完成。蛋白质提取液：300ml 1、1Mtris-HCl(PH8) 45ml 2、甘油(Glycerol)75ml 3、聚乙烯吡咯烷酮(Polyvinylpolypyrrordone)6g这种方法针对SDS-PAGE，垂直板电泳！二、植物组织蛋白质提取方法氯醋酸—丙酮沉淀法 1、在液氮中研磨叶片 2、加入样品体积3倍的提取液在-20℃的条件下过夜，然后离心(4℃8000rpm以上1小时)弃上清。 3、加入等体积的冰浴丙酮(含0.07%的β-巯基乙醇)，摇匀后离心(4℃8000rpm以上1小时)，然后真空干燥沉淀，备用。 4、上样前加入裂解液，室温放置30分钟，使蛋白充分溶于裂解液中，然后离心(15℃8000rpm 以上1小时或更长时间以没有沉淀为标准)，可临时保存在4℃待用。 5、用Brandford法定量蛋白，然后可分装放入-80℃备用。药品：提取液：含10%TCA和0.07%的β-巯基乙醇的丙酮。裂解液：2.7g尿素0.2gCHAPS 溶于3ml灭菌的去离子水中(终体积为5ml)，使用前再加入1M的DTT65ul/ml。这种方法针对双向电泳，杂质少，离子浓度小的特点！当然单向电泳也同样适用，只是电泳的条带会减少！三、组织：肠黏膜目的：WESTERN BLOT检测凋亡相关蛋白的表达应用TRIPURE提取蛋白质步骤：含蛋白质上清液中加入异丙醇：(1.5ml每1mlTRIPURE用量) 倒转混匀，置室温10min

羊毛角蛋白再生及其利用

羊毛角蛋白再生及其利用我国是世界上第二大羊毛生产国，近年来，羊毛产量不断增长，接近40万吨（世界羊毛生产及价格走势预测。新疆农垦经济，2002，（4）：40）；同样的，因劣质、废旧和工艺损耗等原因，每年又会有十几万吨的羊毛资源被废弃而没有得到充分利用。而羊毛纤维中角蛋白质成分含量高达80%以上（姚金波，滑钧凯，刘建勇。毛纤维新型整理技术。北京：中国纺织出版社，2001），基本上分布在羊毛鳞片表外层和原纤中，纯度相对很高，是高实用价值的角蛋白资源。随着人们对各种废弃资源回收利用的深入研究以及近年来纺织界人士对羊毛价值提升技术的研究，（刘让同，羊毛价值提升技术与羊毛角蛋白的纤维化再生，毛纺科技，2004，（10）：8-12），人们对废弃羊毛利用的研究逐渐从早期的低值应用（制作劣质毛毡）发展到高附加值应用研究（角蛋白资源利用）。由于应用领域不同，再生的方法也不尽相同，目标回收率（回收的目标成分占角蛋白总量的比重）也会有很大差异。假设目标回收率仅为30%，则再生利用的角蛋白质重量可达3万吨以上，而资源价值从几百元/吨增加到几万元/吨，（刘让同，羊毛角蛋白再生纤维化的研究进展，毛纺科技，2004，（11）：5-9），废变宝，社会效益和经济效益十分可观。而实现这种转变的方式就是将这些废弃羊毛解聚、提取目标成分并再生利用。解聚的程度不同，则角蛋白分子的相对分子量不同，则其应用领域也不同。 1.角蛋白水解氨基酸羊毛角蛋白完全水解可得到18种天然氨基酸，其中人体必需氨基酸（缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸、色氨酸、苏氨酸及蛋氨酸）及半必需氨基酸（精氨酸和组氨酸）含量很高（见表1），另外，谷氨酸和胱氨酸含量均超过10%，比天然食物中的含量高得多。因而，从羊毛角蛋白中可大量提取各种氨基酸，并广泛应用于食品、药品、保健品等产品中。表1 羊毛角蛋白中氨基酸含量水解羊毛角蛋白提取氨基酸的方法很多。从化学理论上讲，蛋白质的肽键可以通过酸、碱、酶等介质水解拆断，生成游离氨基酸。酶水解工艺条件复杂、设备精度要求高；碱水解常引起氨基酸构型变化(消旋)，产品品质差；故目前多采用酸水解。酸水解法得到的氨基酸不会发生消旋，但色氨酸往往破坏殆尽，酪氨酸部分破坏；碱水解则只能得到消旋化的氨基酸，羟基氨基酸、巯基氨基酸全部被破坏。（王成林陶雷李旦蚕蛹蛋白与大豆分离蛋白酶解比较研究，农产品开发，2000，（10）：10-12）

膜蛋白提取

1分离组织膜蛋白的方法： 1、取组织，加入10ml Buffer A 于冰上充分匀浆。 2、J6-HC离心机800rpm，4℃离心10min后，所得上清液转入超速离心管。 3、100000g，4℃离心1hr。弃去上清，沉淀用适量的Buffer B重悬，冰上孵育2hr后分装至EP管，Eppendorf台式离心机10000rpm，4℃离心30min。 4、收集所得上清液即为膜组份。 Buffer A：0.32M 蔗糖，5mM Tris-HCl（PH 7.5），120mM KCl，1mM EDTA,1mM EDTA, 0.2mM PMSF, 1ug/ml Leupeptin, 1ug/ml Pepstatin A, 1ug/ml Aprotinin。冰上预冷。Buffer B：20mM HEPES（PH 7.5），10%甘油，2% Triton X-100, 1mM EDTA, 1mM EDTA, 0.2mM PMSF, 1ug/ml Leupeptin, 1ug/ml Pepstatin A, 1ug/ml Aprotinin。冰上预冷。 2 取约0.1g肝组织，加入2ml粉碎缓冲液，冰浴中超声粉碎，每次20秒，间隔30秒，共3次，4°c 105xg条件下离心2小时，上清液为胞浆蛋白，沉淀部分加入1ml胞膜蛋白提取液，超声粉碎，4°c 105xg条件下离心2小时，上清液为胞膜蛋白。样品蛋白含量测定采用酚试剂法。 3 我们实验室提取膜蛋白的方法如下： 1．将细胞种于T75 或T175的培养瓶中培养数天，细胞铺满瓶底后，吸去培养液。将PBS/EDTA 溶液(NaCl:0.1M,NaH2PO4:0.01M,EDTA:0.04%)加入量以覆盖细胞为止，置于培养箱或在超净台内消化3～5分钟，如仍未脱落瓶底，用吸管吹打，使细胞完全脱落。2．收集细胞悬液于10毫升或50毫升的离心管中，1000rpm离心10分钟，去上清液。3．按 2.5毫升（T75）/每瓶或5毫升（T175/ 每瓶加入冰冷的匀浆液（HEPES:50mM,PH7.4,MgCl2:3mM,EGTA:1mM）于离心管中，将溶液和沉淀转移到匀浆器中，匀浆。 4．将匀浆液转入离心管中，加入适量的Tris –HCl (50mM, PH7.4) 4oC, 18000rpm (40000g) 10分钟。在沉淀中加入同前量的匀浆液，再匀浆，匀浆后加入适量的tris-HCl buffer. 4度18000rpm(40000g)离心，共离心三次。 5．在最后一次离心得到沉淀中按250微升每瓶（T75）或500微升每瓶（T175）加入tris-HCl buffer，匀浆，取50微升匀浆液测量蛋白浓度。 6．按实验要求，将匀浆分装于1毫升的Eppendoff 管中，其于-80oC 冰箱中待用。主要基于膜蛋白分子量较大，在40000g时易沉降来分离。做膜蛋白的免疫荧光，可以用荧光抗体染色，然后用荧光显微镜或共聚焦显微镜观察，具体的protocol可以找到，就不多说了。需要注意的是，要弄清楚你所使用的一抗结合部位是在膜蛋白的胞外结构域还是胞内结构域，如果是胞外，可以直接染色；如果在胞内，则需要用无水甲醇在-20度处理10min，使细胞膜通透，然后再用抗体孵育，这样抗体才能进入细胞内与蛋白结合。

Protein extraction from yeast(酵母蛋白质提取)

Protein extraction from yeast 1. Glass beads lysis Conzelmann A, Riezman H, Desponds C, Bron C. 1988. A major 125 kd membraneglycoprotein of Saccharomyces cerevisiae is attached to the lipid bilayer through aninositol-containg phospholipid. EMBO J 7: 2233± 2240. 2. rapid protein extraction in optimized SDS sample buffer HorwathA,RiezmanH. 1994.RapidproteinextractionfromSaccharomycescerevisiae. Yeast 10: 1305± 1310. Sample Buffer: 0.06M Tris-HCl, pH 6.8 10% (v/v) glycerol 2% (w/v) SDS 5% (v/v) 2-mercaptoethanol 0.0025% (w/v) bromophenol blue10 ml 0.6 ml 1M Tris 6.8

2 ml 50% glycerol 2 ml 10% SDS 0.5 ml 2-mercaptoethanol 0.1 ml Sat. Bromphenol blue 4.9 ml H2O Make sample Buffer fresh before use. Can store buffer frozen at—20 degrees for ~6 months. 1. Grow cells overnight (~1x107cells/ml; A600 = 0.7) and collect 1.5 ml cells (adjustvolumes according to cell density of cultures) in 1.5 ml microfuge tube (1 minute, 14000xg).It is important not to grow the cells to a high density. 10 microliters of a saturated overnight culture in YPD innoculated to 5 ml SD + essentialamino acids for ~16 hrs gives A600 of 0.5 to 1.0 for wild-type cells grown at 30 degrees150 microliters of YPD saturated culture diluted to 5 ml YPD and grown for ~5 hrs at 30degrees gives an A600 of ~ 0.8 for wild-type cells. 2. Wash cells 1X with water and collect again by centrifugation. 3. Resuspend cells in 100 microliters sample buffer. 4. Heat at 95 deg C for 5 minutes. 5. Centrifuge 14000xg for 5 minutes. Load 15 microliters per lane on an SDS PAG

纤维化学与物理-第三章蛋白质纤维-羊毛

3.2 羊毛纤维P208-225 一、羊毛的形态结构二、羊毛的表观性状三、羊毛的近程结构（化学组成、分子结构）四、羊毛的远程结构（构象）五、羊毛的聚集态结构六、羊毛纤维的性能 ?使用羊毛的历史：新石器时代，公元前3000～4000年 ?羊毛的特性：光泽柔和，手感丰满而富有弹性，悬垂性良好，吸湿透气，穿着舒适保暖，不易沾污，抗皱性较好，耐磨性优良 ?羊毛的用途：精纺或粗纺的高级面料；家纺及装饰用品；工业用呢等 ?最高档的纺织纤维之一天然动物毛包括： ?羊毛（绵羊毛：主产地澳大利亚、俄罗斯、新西兰、中国、阿根廷） ?山羊绒（开司米Cashmere） ?马海毛（安哥拉山羊毛，原产于土耳其的安哥所拉省，现有南非、土耳其、美国三大产地，是长羊毛） ?兔毛 ?骆驼毛（绒） ?牦牛毛（绒）等羊毛通常是指绵羊毛，产量占纺织纤维的5%左右。 ?原毛：从羊身上剪下的毛 ?原毛组成： ?羊毛纤维占40％～70％ ?杂质：羊脂、羊汗、泥沙、污物及草籽、草屑等。 ?净毛率：羊毛纤维在原毛中的含量百分率，随羊毛品种和羊的生长环境等不同有很大变化 ?原毛不能直接用来纺织，必须经过初步加工（选毛、开毛、洗毛、炭化等），才能获得较为纯净的羊毛纤维。羊毛的初加工： ?选毛：按原毛品质加以区别分类，如把羊肩、背、腿、尾、头等处毛分开 ?开毛：利用开毛机使其松散，并除去部分泥沙、尘土 ?洗毛：除去羊毛脂和羊毛汗为主，同时也去除泥沙、粘土等 ?炭化：用H2SO4除去植物性杂质 ?稀H2SO4浸渍→低温烘干→高温焙烘（酸液浓缩，使纤维素脱水甚至炭化变焦脆）→通过机械作用粉碎除去一、羊毛的形态结构 ?横截面：椭圆形（长短轴之比为1.1～1.3），越细越接近圆形； ?纵向：鳞片，卷曲 ?近似于椭圆柱状的形状，不同品种的羊毛直径、长度、卷曲以及起鳞程度等差异很大。形态结构模型如P209图5－8所示。 1. 鳞片层（cuticle） ?由角质化的扁平状细胞通过细胞间质粘连而成，是羊毛纤维的外壳。 ?鳞片形状：如鱼鳞或瓦片一样，重叠覆盖 ?排列方式：定向，自由端均指向毛尖方向并包覆在羊毛纤维的表面 ?鳞片大小：各种羊毛的鳞片基本相近，平均宽度约28微米、长度约36微米、厚度约0.5～1微米。 ?鳞片覆盖密度：差异较大：一般细羊毛鳞片的可见高度（鳞片暴露程度）低于粗羊毛，其鳞片层的总厚度则较粗羊毛的大。 ?鳞片排列的密度和鳞片伸出羊毛表面的程度，对羊毛光泽和表面性质影响较大。

酵母蛋白质提取对照品

酵母蛋白质提取对照品酵母蛋白概述酵母蛋白是存在于天然酵母中的一种优质完全蛋白。酵母是人类利用最早、最多、最广泛的一种单细胞微生物，在真菌分类系统中属于子囊菌纲、担子菌与半知菌类。酵母自古以来就被人们应用于日常生活中，如发面、酿酒、助消化等。酵母的营养价值酵母也是天然的营养来源和营养载体，其营养成分具有“三低四优”的特点，即低脂、低糖、不含胆固醇，富含优质完全蛋白质、完整的B族维生素、以生命结合态形式存在的多种矿物质和功能膳食纤维。优点酵母是补充优质蛋白质的最好来源。 1、酵母中含有丰富的蛋白质，高达40%～60%。 2、酵母中的蛋白质的消化率可达96%，净利用率达59%。 3、酵母含有完整的氨基酸群，包括人体必需的8种氨基酸，特别是在谷物蛋白中含量较少的赖氨酸，在酵母中含量较高。此外，酵母中的氨基酸比例接近联合国粮农组织(FAO)推荐的理想氨基酸组成值，故其营养价值较高。 4、酵母中还含有一些功能蛋白，例如金属硫蛋白（简称MT），它具有广泛的生物功能，在体内主要参与微量元素的贮存、运输和代谢、拮抗电离辐射、清除羟基自由基及重金属解毒等多种作用。酵母还含有丰富的助消化酶（酵素），能帮助日常饮食中的、酵母本身的、以及外源补充的营养更好地消化、吸收和利用。 5、酵母蛋白是酵母本身所含有的，而非多种蛋白来源的简单混合。如何选择含有蛋白质的食物选择蛋白质食物首先应考虑蛋白质含量的多少。如果食物中蛋白质含量太少，即使营养价值很高，也不能满足人体需要。在常见的每100克食物中，肉类含蛋白质10-20克，鱼类含15-20克，全蛋含13-15克，豆类含20-30克，谷类含8-12克，蔬菜、水果含1-2克。判断蛋白质的优劣主要有三点：一是人体消化吸收的程度，吸收得越彻底，其营养价值就越高；二是人体吸收后的利用程度，生物利用度（即蛋白质的生理价值）越高，其营养价值也越高；三是所含的必需氨基酸是否丰富、种类是否齐全、比例是否适当，种类齐全、数量充足、比例适当的完全蛋白质质量最高。

羊毛特性

纺织纤维特性说到纺织纤维，我们先了解一下两个概念：纤维：从生产角度看，凡是直径在数微米到数十微米或略粗些，长度比直径大许多倍（上千倍甚至更多）的物体。纺织纤维：纤维中长度达到数十毫米以上，具有一定的强度，一定可挠曲性和相互纠缠的抱合性和其它的服用性能，而可以生产纺织制品的。我们常用的纺织纤维有：天然纤维、化学纤维、人造纤维。第一节羊毛羊毛是纺织工业的重要原料，特具有许多优良特性，如弹性好、吸湿性强、保暖性好、不易沾污、光泽柔和。这些性能使毛织物具有各种独特风格。用羊毛可以织制各种高级衣用织物，如薄花呢等；有手感滑糯、丰厚有身骨、弹性好、呢面洁净、光泽自然的春秋织物，如中厚花呢等；有质地丰厚、手感丰满、保暖性强的冬季织物，如格类大衣呢等。羊毛也可以织制工业用呢绒、呢毡、毛毯、衬垫材料等。此外，用羊毛织制的各种装饰品如壁毯、地毯，名贵华丽。一、羊毛的分子结构（一）、蛋白质纤维的组成所有蛋白质纤维都能被酸或碱溶液水解，水解后的最终产物为ɑ-氨基酸。下表为各种蛋白质纤维的蛋表中数字是100克干燥蛋白类物质水解后测得的各种氨基酸的干重克数，因此，他们的总和是大于100的。蛋白质纤维的蛋白类物质中，各种ɑ-氨基酸含量的比例差别是很大的。同一种蛋白质纤维，不同品种是成分差别也很大，甚至同一只羊身上的纤维由于饲料的变化，各个时期也有差异。毛尖和

毛干部分，由于日晒雨淋、气候作用等所引起的物理化学变化不同，也会引起组成成分的差异。因此在我们日常生产当中，看是同一原料的品种，虽然工艺条件一致，但生产中仍会有差异。（二）羊毛纤维的分子结构羊毛纤维的大分子是由许多ɑ-氨基酸用酰胺键（又称肽键）联结构成的多缩氨酸链为主链。在组成羊毛的20多种ɑ-氨基酸中，以二氨基酸——精氨酸、松氨酸，二羚基酸——谷氨酸、天门冬氨酸和硫氨基酸——胱氨酸等的含量最高，因此在羊毛角蛋白大分子主链间能形成盐式键、二硫交联和氢键等空间横向联键。蛋白质纤维的大分子链的单分子空间结构形式通常有两大类：一类是直线型曲折链，另一类是螺旋连，其中最普通的是ɑ-氨基酸，羊毛的大分子间，依靠分子引力、盐式键、二硫键和氢键等相结合，呈较稳定的空间螺旋状态，称为ɑ-角蛋白。在一定条件下，受到张力作用，大分子链伸展转变为角蛋白，张力撤去后，在一定条件下，他又恢复到原来的弯曲状态---ɑ-角蛋白，有时甚至会出现过缩。二、羊毛的形态结构及其类型（一）、羊毛的形态结构纺织用的毛类纤维，最大量的是绵羊毛，统称羊毛。毛纤维覆盖于绵羊皮肤的表面，并非均匀分布，而是呈簇状密集在一起。在每一小簇中，有一根直径较粗、毛囊较深的导向毛，其他较细毛纤维围绕着导向毛生长，形成毛丛。同支毛中的导向毛较细，与周围毛细度、长度差异较小；异支毛中的导向毛与他周围的毛长短、粗细差异较大。所以说，毛丛的形态和质量，是羊毛品质好坏的重要标志。毛丛中纤维形态相同，长度、细度相近，生长密度大，又有较多的脂汗使纤维相互粘连，形成上下基本一致的形状，从外部看呈平顶状的，称平顶毛丛。具有这种毛从的羊毛品质最好，同质细羊毛多属这一类型。毛从中纤维粗细混杂、长短不一，短而细的毛靠近毛丛底部，粗长纤维突出在毛丛外面并扭结成辫，形成底部大、上部小的圆锥形，呈这种辫状的羊毛品质较差。羊毛是由许多细胞聚集构成。他可分为三个组成部分：包覆在毛干外部的鳞片层；组成羊毛实体主要部分的皮质层；在毛干中心不透明毛髓组成的髓质层。髓质层只存在于较粗的纤维中，细毛无髓质层。鳞片层由角质化了的扁平状角蛋白细胞组成。各种羊毛的鳞片大小基本上相同，平均宽度28微米，高度36微米，厚度0.5—1.0微米。鳞片在羊毛上覆盖的密度因羊的品种和羊毛的粗细而又较大差异。细羊毛上鳞片排列的密度比粗羊毛大，鳞片可见高度小。有观察实测，细羊毛1毫米长度中约有鳞片100层左右。鳞片可见高度约为8—10微米；粗羊毛1毫米长度中约有鳞片50层，鳞片可见高度大。鳞片在羊毛表面上覆盖的形态，基本有三种：环状覆盖、瓦状覆盖和龟裂状覆盖。鳞片层的主要作用，是保护羊毛不受外界条件的影响而引起性质变化。鳞片排列的疏密和附着程度，对羊毛的光泽和表面性质有很大的影响。粗羊毛上鳞片较稀，易紧贴于毛干上，使纤维表面光滑，光泽强，如林肯毛。美利奴细羊毛，纤维细，鳞片紧密，反光小，光泽柔和近似银光。此外，鳞片层的存在，是羊毛具有毡化的特性。皮质层在鳞片层的里面，是羊毛的主要组成部分，也是决定羊毛物理化学性质的基本物质。髓质层是由结构松散和从满空气的角蛋白细胞组成，细胞间相互联系较差。在显微镜下观察，髓质层呈暗黑色。含髓质层多的羊毛，脆而易断，不易染色。（二）毛纤维分类 1、按纤维组织结构分类：细绒毛、粗绒毛、粗毛、发毛、两型毛、死毛细绒毛：直径在30微米以下，无髓质层，鳞片多呈环状，油汗多，卷曲多，光泽柔和。异质毛中底部的绒毛，也称为细绒毛。粗绒毛：直径在30—52.5微米。粗毛：直径在52.5---75微米，有髓质层，卷曲少，纤维粗直，抗弯刚度大，光泽强。发毛：直径大于75微米，纤维粗长，无卷曲，在一个毛丛中经常突出于毛丛顶端，行程毛辫。两型毛：一个纤维上同时兼有绒毛和粗毛的特征，有断断续续的髓质层，纤维粗细差异较大，我

提取蛋白的常规方法

1、原料的选择早年为了研究的方便，尽量寻找含某种蛋白质丰富的器官从中提取蛋白质。但至目前经常遇到的多是含量低的器官或组织且量也很小，如下丘脑、松果体、细胞膜或内膜等原材料， - 105 - 蛋白质提取与制备Protein Extraction and Preparation 因而对提取要求更复杂一些。原料的选择主要依据实验目的定。从工业生产角度考虑，注意选含量高、来源丰富及成本低的原料。尽量要新鲜原料。但有时这几方面不同时具备。含量丰富但来源困难，或含量来源均理想，但分离纯化操作繁琐，反而不如含量略低些易于获得纯品者。一般要注意种属的关系，如鲣的心肌细胞色素C 较马的易结晶，马的血红蛋白较牛的易结晶。要事前调查制备的难易情况。若利用蛋白质的活性，对原料的种属应几乎无影响。如利用胰蛋白酶水解蛋白质的活性，用猪或牛胰脏均可。但若研究蛋白质自身的性质及结构时，原料的来源种属必须一定。研究由于病态引起的特殊蛋白质（本斯.琼斯氏蛋白、贫血血红蛋白）时，不但使用种属一定的原料，而且要取自同一个体的原料。可能时尽量用全年均可采到的原料。对动物生理状态间的差异（如饥饿时脂肪和糖类相对减少），采收期及产地等因素也要注意。 2、前处理 a、细胞的破碎材料选定通常要进行处理。要剔除结缔组织及脂肪组织。如不能立即进行实验，则应冷冻保存。除了提取及胞细外成分，对细胞内及多细胞生物组织中的蛋白质的分离提取均须先将细胞破碎，使其充分释放到溶液中。不同生物体或同一生物体不同的组织，其细胞破坏难易不一，使用方法也不完全相同。如动物胰、肝、脑组织一般较柔软，作普通匀浆器磨研即可，肌肉及心组织较韧，需预先绞碎再制成匀桨。 ⑴机械方法主要通过机械切力的作用使组织细胞破坏。常用器械有：①高速组织捣碎机（转速可达 10000rpm，具高速转动的锋利的刀片），宜用于动物内脏组织的破碎；②玻璃匀浆器（用两个磨砂面相互摩擦，将细胞磨碎），适用于少量材料，也可用不锈钢或硬质塑料等，两面间

羊毛术语

羊毛术语 A 腈纶（聚丙烯腈纤维）：由化学合成聚合物制成的一种合成纤维，具有类似于羊毛的特性。吸附：在纤维表面对染料分子的暂时固着能力。亲和力：染料分子对纤维的吸引程度。接近：由染料亲和力引起的染料分子向纤维的运动。阿朗花爱尔兰戈尔韦（Galway）：郡阿朗岛上的渔民传统制作并穿着的绞花针织花型。ArcanaTM（拉细羊毛）：一种超细纤维，适用于生产非常柔软的优质服装。仿羔皮织物：一种模仿新生的阿斯特拉罕羔羊皮毛的美丽诺毛圈织物。澳大利亚超细美丽诺：由羊毛标志公司授予的质量认证标志，表示该服装内含有18.5微米或者更细的羊毛。 B 反绕：从绳状染色织物上去除皱褶和绳状褶皱痕的工序。毛包：将剪毛压缩打包而成的长方形包装。分批染色：通常在一个染缸内同时进行一道染色工序的面料称为一个面料批次。腹毛：绵羊腹部的短毛。生物聚合物：自然界里发现的聚合物，包括淀粉、蛋白质、缩氨酸以及DNA和RNA，它的个体单元为糖、氨基酸和核酸。黑羊毛：从长有灰色、棕色或黑色羊毛的绵羊身上剪下的羊毛。漂白：用特殊的化学药品增加羊毛织物的白度的工序。混纺：一种纺织品含有两种或两种以上的不同纤维，或者不同形态的同种纤维，不同颜色或不同等级的同种纤维。美丽诺：通常与棉、丝、尼龙、涤纶和人造丝混纺。模版印花：用刻花的木板印出图案。蒸呢：与decatising（蒸呢）同义。圈圈纱/织物：一种三股纱线，其中一股比另外两股松，因而在纱线表面形成起伏或者圈圈。另外也指用这种纱线织成的织物。源于法语，意为“弯曲或卷曲”。小圈圈纱：和圈圈纱同样的方法制成，但圈圈及扭曲程度较小。毛辫：较长、较粗且有光泽的羊毛。透气性：指织物传导湿气的能力。

脂肪组织蛋白的提取方法.doc

①用液氮研磨的方法更佳，具体方法可以联系本公司****@***.c*m索取详细资料。 beibokit https://www.wendangku.net/doc/5017786273.html, - 2 - 产品说明书相关产品：产品总蛋白提取试剂盒核蛋白提取试剂盒膜/胞浆/核蛋白分步提取试剂盒Bradford蛋白定量试剂盒ECL化学发光检测试剂盒细胞蛋白提取试剂盒组织蛋白提取试剂盒细菌蛋白提取试剂盒酵母蛋白提取试剂盒昆虫蛋白提取试剂盒磷酸化蛋白提取试剂盒SDS-PAGE凝胶配制试剂盒总蛋白提取试剂盒（2D电泳用）植物蛋白提取盒（2D电泳用）细菌膜蛋白提取盒（2D电泳用）产品号BB-3101 BB-3102 BB-3104 BB-3411 BB-3501 BB-3121 BB-3122 BB-3123 BB-3125 BB-3126 BB-3105 BB-3702 BB-3181 BB-3183 BB-3187 产品磷酸化蛋白富集试剂盒膜蛋白提取试剂盒活性蛋白提取试剂盒BCA蛋白定量试剂盒植物核蛋白提取试剂盒细菌膜蛋白提取试剂盒植物总蛋白提取试剂盒植物膜蛋白提取试剂盒

蛋白酶抑制剂混合物真菌蛋白提取试剂盒磷酸酶抑制剂混合物SDS-PAGE上样Buffer 细菌蛋白提取盒（2D电泳用）酵母蛋白提取盒（2D电泳用）线粒体蛋白提取盒（2D电泳用）产品号BB-3108 BB-3103 BB-3106 BB-3401 BB-3154 BB-3151 BB-3124 BB-3152 BB-3301 BB-3127 BB-3311 BB-3703 BB-3182 BB-3185 BB-3191 beibokit https://www.wendangku.net/doc/5017786273.html, - 3 -

羊毛角朊蛋白的再生利用技术

羊毛角朊蛋白的再生利用技术陈莉萍,于伟东 (东华大学纺织学院,上海　200051) 摘　要:详细介绍了羊毛角朊和相关蛋白质再生纤维的应用研究现状,以及羊毛角朊再利用的可能性与研究,尤其是分析了氧化法和还原法对羊毛角朊蛋白的溶解过程,溶液成膜的机械性能和湿法纺丝的应用。指出了目前研究中存在的问题和羊毛角朊蛋白再生利用技术的发展前景。关键词:羊毛;角蛋白;再生纤维;溶解;共混膜中图分类号:TS10219 文献标识码:A 文章编号:100321456(2003)0420003205 收稿日期:2003-05-20 作者简介:陈莉萍(1968-),女,兰州理工大学轻工系讲师,东华大学纺织学院硕士研究生,从事纺织材料与纺织品的开发研究,目前主要从事羊毛角朊蛋白的再生利用技术的研究。在人类回归自然、崇尚绿色、清洁生产的今天,天然纤维和环保纺织品受到人们的重视。而人类使用久远的羊毛、蚕丝以其特有的对人体生理亲和与保健作用,使得这类纤维及其再生蛋白纤维一直为人们所关注。由于天然纤维资源的限制,开发其再生产品成为当今的热点问题。我国羊毛资源丰富,又是毛纺业生产大国,由于羊毛品质、饲养管理和纺织技术的限制,每年都有大量的短纤维、粗纤维被废弃,这些不仅造成了角朊蛋白资源的浪费,而且污染环境。因此研究废弃羊毛纤维的再生利用及其方法,对有效利用和保护自然资源有着十分重要的意义。1　目前相关蛋白质物质的再生利用111　丝素蛋白早在二战之前,日本就已开始研究丝素蛋白纤维,至今已能成功地将丝素溶解,制得各种丝素—高聚物共混膜和再生丝素纤维,并开始应用于医疗卫生、纺织服用和其他产业。已报道的有聚乙烯醇—丝素蛋白,丝素—壳聚糖,丝素蛋白—聚氨酯,以及丝素蛋白—海藻酸钠,丝素—聚丙烯酰胺和丝素—纤维素共混膜。丝素溶解:将精练后的丝素纤维,用氯化盐∶乙醇∶水以摩尔比1∶2∶8的三元溶剂,在70～80℃下搅拌溶解,经透析、过滤后得到丝素溶液。共混膜的制备一般是在丝素溶液中添加适量的交联剂(如低级多元醇)后,与高聚物溶液混合成膜。112　植物蛋白植物蛋白有多种,如大豆、花生、玉米等。大豆蛋白质纤维是从豆粕中提取球蛋白并纯化,再添加羟基[1] 和氰基[2] 高聚物配制成一定浓度的蛋白纺丝液,经湿法纺丝而成。最早的大豆蛋白质纤维是美国学者博伊尔(R 1A 1Boyer )在20世纪三四十年代研制成功的。我国在2000年成功试纺大豆蛋白纤维,并进行工业化生产,生产能力达1500t 左右。大豆蛋白纤维不仅细度细、比重轻、强伸度高、耐酸碱,而且有羊绒般的手感和棉纤维的吸、导湿性,但也存在有色、易起毛起球、耐热性差的问题。玉米蛋白质纤维是美国Virginia Carilina Chemical 公司于1948年开发的,商品名为Varinia 纤维。Varinia 纤维是利用玉米残渣,以70%的异丙醇提取出玉米醇蛋白(Z ein ),再将其溶解、过滤,储留成熟,以湿法纺丝制成纤维。玉米蛋白纤维的强伸性、吸湿性、染色性都与常用化学纤维相近,除可用来做内衣、外衣和运动服外,更多地用于产业用纺织品。玉米蛋白纤维在阳光照射下会缓慢变质,但交联改性的玉米蛋白纤维具有耐酸、耐碱、耐溶剂性和防老化性能,且不蛀不霉 [3 ] 。

细菌总蛋白和膜蛋白提取方法

[【生物化学与分子生物学】]细菌总蛋白和膜蛋白提取方法膜蛋白, 细菌膜蛋白, 细菌一、从新鲜样品中提取总蛋白（简易法） 1、自配裂解液（pH 8.5-9.0）：50 mM Tris-HCl，2 mM EDTA, 100 mM NaCl，0.5% Triton X-100，调pH值至8.5-9.0备用；用前加入100 μg/ml 溶菌酶，1μl/ml 的蛋白酶抑制剂PMSF。该裂解液用量为10-50ml 裂解液/1g湿菌体。 2、将40ml 菌液在12000g，4℃下离心15分钟收集菌体，沉淀用PBS悬浮洗涤2遍，沉淀加入1ml裂解液悬浮菌体。 3、超声粉碎，采用300w，10s超声/10s间隔，超声20min，反复冻融超声3次至菌液变清或者变色。 4、1000g离心去掉大碎片，上清可直接变性后PAGE电泳检测，或者用1% SDS溶液透析后冻存。缺点：Western blotting结果表明，疏水性跨膜蛋白提取效率有限。二、从Trizol裂解液中分离总蛋白 1、Trizol溶解的样品研磨破碎后，加氯仿分层，2-8℃下10000g离心15min，上层水相用于RNA提取，体积约为总体积的60%。 2、用乙醇沉淀中间层和有机相中的DNA。每使用1ml Trizol加入0.3ml无水乙醇混匀，室温放置3min，2-8℃不超过2000g离心5min。 3、将上清移至新的EP管中，用异丙醇沉淀蛋白质。每使用1ml Trizol加入1.5ml异丙醇，室温放置10min，2-8℃下12000g离心10min，弃上清。 4、用含有0.3M 盐酸胍的95%乙醇洗涤。每1ml Trizol加入2ml洗液，室温放置20min，2-8℃下7500g 离心5min，弃上清，重复洗涤2次。最后加入2ml无水乙醇，涡旋后室温放置20min，2-8℃下7500g离心5min，弃上清。 5、冷冻干燥5-10min，1%SDS溶液溶解，反复吹打，50℃温浴使其完全溶解，2-8℃下10000g离心10min去除不溶物。 6、替代方案：将3中的酚醇上清液移至小分子量透析袋中，在2-8℃的1% SDS溶液中透析3次，1000g 离心10min去除沉淀，上清可直接用于蛋白实验。三、从新鲜样品中提取疏水性膜蛋白（Triton X-114去污剂法） 1、配制疏水性蛋白提取液（非裂解液）：1% Triton X-114，150mM NaCl, 10mM Tris-HCl，1mM EDTA，调pH值至8.0备用。 2、菌液于4℃条件下15000g离心15min收集菌体；用1ml 含有5mM MgCl2 的PBS洗涤3次，最后于4℃条件下15000g离心15min收集菌体。 3、菌体沉淀加入1ml冷提取液，于4℃条件下放置2h，17000g离心10min，去除沉淀取上清。 4、将上述上清中的Triton X-114含量增加到2%，再加入20mM的CaCl2抑制部分蛋白酶活性，37℃条件下放置10min使其分层。室温下1000g离心10min使液相和去污相充分分层。 5、将液相和去污相分开，分别用10倍体积的冷丙酮在冰上沉淀45min。 6、于4℃条件下17000g离心30min，用去离子水洗涤沉淀3次。 7、将沉淀溶解在1% SDS溶液中，测定蛋白浓度，比较液相和去污相中蛋白提取效率，一般是去污相中疏水性膜蛋白较多，适于进一步蛋白实验 8、SDS-PAGE进一步分析液相和去污相的蛋白图谱。

P0033 细胞膜蛋白与细胞浆蛋白提取试剂盒

细胞膜蛋白与细胞浆蛋白抽提试剂盒产品简介：碧云天的细胞膜蛋白与细胞浆蛋白抽提试剂盒(Membrane and Cytosol Protein Extraction Kit)提供了一种比较简单、方便地从培养细胞或组织中抽提细胞膜蛋白和细胞浆蛋白的方法。抽提的膜蛋白不仅包括质膜上的膜蛋白，也包括线粒体膜、内质网膜和高尔基体膜等上的膜蛋白。本试剂盒通过匀浆适度破碎细胞，经低速离心去除细胞核和少数未破碎的细胞产生的沉淀，随后取上清高速离心获得细胞膜沉淀和含有细胞浆蛋白的上清，然后通过优化的膜蛋白抽提试剂从沉淀中抽提获取膜蛋白。约90分钟即可完成培养细胞或组织的细胞膜蛋白与细胞浆蛋白的分离和抽提。抽提得到的蛋白可以用于SDS-PAGE，Western、酶活性测定等后续实验。膜蛋白抽提试剂中含有蛋白酶抑制剂、磷酸酯酶抑制剂和EDTA等，后续不适合用于蛋白酶、磷酸酯酶等受这些抑制剂影响的酶的活性测定，但抽提获得的膜蛋白或细胞浆蛋白适合用于检测蛋白的磷酸化水平。本试剂盒按照本说明书的操作步骤可以抽提100个细胞或组织样品。保存条件： -20℃保存，一年有效。注意事项：需自备PMSF。PMSF一定要在抽提试剂加入到样品中前2-3分钟内加入，以免PMSF在水溶液中很快失效。 PMSF(ST506)可以向碧云天订购。使用本试剂盒抽提到的细胞膜蛋白与细胞浆蛋白均可直接用碧云天生产的BCA法蛋白浓度测定试剂盒(P0009/P0010/P0010S/P0011/P0012/P0012S)测定蛋白浓度。抽提获得的细胞膜蛋白不适合用Bradford法测定蛋白浓度。为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。使用说明： 1.准备试剂：室温融解并混匀膜蛋白抽提试剂A和B，融解后立即置于冰浴上。取适量的膜蛋白抽提试剂A和B备用，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM。 2.准备细胞或组织样品： a. 对于细胞 (1) 收集细胞对于贴壁细胞：培养约2000-5000万细胞，用PBS洗一遍，用细胞刮子刮下细胞或用含有EDTA但不含胰酶的细胞消化液处理细胞使细胞不再贴壁很紧，并用移液器吹打下细胞。离心收集细胞，吸除上清，留下细胞沉淀备用。尽量避免用胰酶消化细胞，以免胰酶降解需抽提的目的膜蛋白。对于悬浮细胞：培养约2000-5000万细胞，直接离心收集细胞，吸除上清，留下细胞沉淀备用。 (2) 洗涤细胞：用适量冰浴预冷的PBS轻轻重悬细胞沉淀，取少量细胞用于计数，剩余细胞4℃，600g离心5分钟沉淀细胞。弃上清，随后4℃，600g离心1分钟，以沉淀离心管管壁上的残留液体并进一步沉淀细胞，尽最大努力吸尽残留液体。 (3) 细胞预处理：把1毫升临用前添加了PMSF的膜蛋白抽提试剂A加入至2000-5000万细胞中，轻轻并充分悬浮细胞，冰浴放置10-15分钟。 b. 对于组织：取约100毫克组织，用剪刀尽量小心剪切成细小的组织碎片。加入1毫升临用前添加了PMSF的膜蛋白抽提试剂A，轻轻悬浮组织碎片，冰浴放置10-15分钟。注：如果组织样品比较少，也可以使用更少的组织量，例如30-50mg，后续试剂的用量及操作步骤不变；组织用量较少时，最后获得的膜蛋白也较少。

植物蛋白质提取方法

一、植物蛋白质提取 1. TCA-丙酮法（1）称量一定量的样品置于液氮预冷的研钵中，加少许PVPP，反复加液氮研磨至粉末。（2）研磨好的样品用10 倍体积（w/V）的10%的TCA-丙酮溶液悬浮，加入0.1 M PMSF、 1 M DTT 至终浓度为1 mM PMSF、10mM DTT，超声5 分钟，于-20℃静置6 小时或过夜后，4℃，20000g 离心15 分钟，弃上清。（3）沉淀用10 倍体积于样品的丙酮溶液重悬浮，于-20℃静置1 小时后，4℃，20000g 离心15 分钟，弃上清。（4）重复步骤（3）一次。（5）沉淀用10 倍体积于样品的乙醇/乙醚=1:1 洗，于-20℃静置1 小时后，4℃，20000g 离心15 分钟，弃上清。（6）重复步骤（3）一次。（7）取出沉淀真空干燥约5 分钟，除尽有机溶剂。（8）按10mg 干粉末加200 微升裂解液的比例，加入1 mM PMSF、10mM DTT，超声5 分钟，充分溶解1 小时，10℃，35000g 离心30 分钟，上清为所需的蛋白溶液。（9）用Bradford 法测定蛋白样品的蛋白浓度。（10）蛋白样品溶液小量分装，-80℃保存。注意事项：（1）TCA 有利于去除酚类色素等物质，但不利于蛋白的抽提，使用浓度不宜过高，在后面丙酮处理中，尽量除去。（2）蛋白样品保存：样品浓度不宜过高，建议将高浓度样品适度调整，为避免反复冻融应分装保存，长期保存用-80℃，短期保存用-20℃。（3）1M DTT：0.1542g DTT 用1ml MilliQ 水溶解，-20℃保存。（4）0.1M PMSF：0.0174g PMSF 用1ml 异丙醇溶解，-20℃保存。

膜蛋白的提取方法-全攻略

https://www.wendangku.net/doc/5017786273.html, 膜蛋白的提取方法-全攻略一、膜蛋白简介膜蛋白在细胞中扮演着重要的角色：例如被熟知的识别、信号转导、运输等功能，也是用药的理想的靶点，虽动物细胞主要有9种膜脂，而膜蛋白的种类繁多，多数膜蛋白分子数目较少，但却赋予细胞膜非常重要的生物学功能。根据膜蛋白分离的难易及其与脂分子的结合方式，膜蛋白可分为两大类型：外在膜蛋白、内在膜蛋白。 (1) 外在膜蛋白为水溶性蛋白，靠离子键或其它较弱的键与膜表面的蛋白质分子或脂分子结合，因此只要改变溶液的离子强度甚至提高温度就可以从膜上分离下来，膜结构并不被破坏。 (2) 内在膜蛋白与膜结合非常紧密，一般只有用去垢剂(detergent)使其膜解后才可分离出来。附注：使用分级抽提方法获得的“膜蛋白”中只有很少一部分是具备多跨膜区的整合膜蛋白。二、膜蛋白的提取方法谈及蛋白分离，我们想到：超速离心，盐析法、超滤法、凝胶过滤法、等电点沉淀法、离子交换层析、亲和层析、吸附层析、逆流分溶、酶解法……有时这些方法常常组合到一起对特定的物质进行分离纯化。由于蛋白质种类繁多，不同的蛋白质由于结构和组成的差异，其溶解

https://www.wendangku.net/doc/5017786273.html, 度也各不相同.根据蛋白质的溶解特性，同时可选择不同的溶剂提取，分为水溶液提取和有机溶剂提取. 但是与胞质蛋白，核蛋白提取不同之处在于膜蛋白是嵌在膜中的，水溶性不好，基本方法就是用不同的离心速度去掉胞质蛋白等，然后用去污剂把蛋白从膜中释放出来。膜蛋白分离纯化的重要步骤是选择适当的增溶用表面活性剂，一般常用的有胆酸盐，CHAPS(一种离子去污剂），Emulgen和Lubrol等表面活性剂。 1）先分离膜，然后提取；如选用冷热交替法、反复冻融法、超声破碎法、玻璃匀浆法、自溶法和酶处理法使得细胞破碎，然后通过梯度离心得到含有膜蛋白的粗组分。（例如：用液氮研磨组织，加入匀浆缓冲液及蛋白酶抑制剂，然后差速离心、蔗糖密度梯度离心。收集37%与41%间的成分，即为质膜部分。裂解即可收集膜蛋白） 2）用特殊的去污剂选择性的分离。从膜上提取蛋白有许多困难。在多数情况下，都是采用去垢剂将疏水蛋白从其膜结构中溶解下来，然后将蛋白质稳定。去垢剂的选择通常是依据他对所需要蛋白质的提取效率来确定，但在某些情况下，还要考虑到以后的纯化步骤。虽然许多膜蛋白必须在去垢剂存在的情况下进行纯化，但最终仍可能需要除去去垢剂。这常常会引起蛋白质失活，但如果蛋白质是用于测序的，他将不是一个问题。如果不是用于测序的，可考虑使用能够黏附去垢剂的疏水珠.许多文献和生化试剂供应商的产品目录中，都介绍有许多种不同的可用来溶解膜蛋白的去垢剂.然而，他们并不是普遍适用的.在设计膜蛋白溶解方案时，必须考虑某一去垢剂的特殊性质.如 triton X-100在280nm处有吸收，如果某蛋白质的测试与280nm 处的吸收有关，就应避免使用这类去垢剂. 将膜制剂与胞质蛋白及细胞核分离后，再进一步从细胞膜制剂中将所需的膜蛋白增溶下来.这种做法的好处是可以用强烈的去垢剂提取细胞骨架的相关蛋白，而无需考虑胞质蛋白、细胞核成分或染色质成分的混入.使用这种方法所获得的膜蛋白，无论在种类上还是数量上，都比酸溶解法所得到的蛋白（<5000Da）要多.一般提取的膜蛋白量往往只占膜蛋白总量的不足0.1%，所以充分的膜蛋白的提取，无疑对于研究膜蛋白的结构和功能都是非常重要的. 酸溶解法简单，可靠，但有时含有其他蛋白。一般的都是利用4℃时所有的蛋白质原则上都溶于Triton X-114水溶液，在温度超过20℃时，此溶液分为水相和去污相；此时亲水性蛋白溶于水相，疏水的膜蛋白溶于去污剂相中。利用此性质可提取膜蛋白。 3 )膜蛋白色谱(Chromatography of Membrane Protein,CMP)：CMP分离强疏水性蛋白、多肽混合物的层析系统，一般有去垢剂（如SDS）溶解膜蛋白后形成SDS-融膜蛋白，并由羟基磷灰石为固定相的柱子分离纯化。羟基磷灰石柱具有阴离子磷酸基团（P-端），又具有阳离子钙（C-端），与固定相结合主要决定于膜蛋白的大小、SDS结合量。利用原子散射法研究cAMP的

蛋白质的十种提取方法

蛋白质的十种提取方法.txt大人物的悲哀在于他们需要不停地做出选择；而小人物的悲哀在于他们从来没有选择的机会。男人因沧桑而成熟，女人因成熟而沧桑。男人有了烟，有了酒，也就有了故事；女人有了钱，有了资色，也就有了悲剧。蛋白质提取方法-------列举10种方法 [ 来源：绿谷生物网点击数： 4587 更新时间： 2008年05月30日 ][ 收藏本文 ] 一、植物组织蛋白质提取方法（summer） 1、根据样品重量（1g样品加入3.5ml提取液，可根据材料不同适当加入），准备提取液放在冰上。 2、把样品放在研钵中用液氮研磨，研磨后加入提取液中在冰上静置（3-4 小时）。 3、用离心机离心8000rpm40min4℃或11100rpm20min4℃ 4、提取上清夜，样品制备完成。蛋白质提取液：300ml 1、1Mtris-HCl（PH8） 45ml 2、甘油（Glycerol）75ml 3、聚乙烯吡咯烷酮（Polyvinylpolypyrrordone）6g 这种方法针对SDS-PAGE，垂直板电泳！二、植物组织蛋白质提取方法 (summer) 三氯醋酸—丙酮沉淀法 1、在液氮中研磨叶片 2、加入样品体积3倍的提取液在-20℃的条件下过夜，然后离心（4℃8000rpm以上1小时）弃上清。 3、加入等体积的冰浴丙酮（含0.07%的β-巯基乙醇），摇匀后离心（4℃8000rpm以上1 小时），然后真空干燥沉淀，备用。 4、上样前加入裂解液，室温放置30 分钟，使蛋白充分溶于裂解液中，然后离心（15℃8000rpm 以上1小时或更长时间以没有沉淀为标准），可临时保存在4℃待用。 5、用Brandford法定量蛋白，然后可分装放入-80℃备用。药品：提取液：含10%TCA 和0.07%的β-巯基乙醇的丙酮裂解液：2.7g 尿素0.2gCHAPS 溶于3ml 灭菌的去离子水中（终体积为5ml），使用前再加入1M 的 DTT65ul/ml。这种方法针对双向电泳，杂质少，离子浓度小的特点！当然单向电泳也同样适用，只是电泳的条带会减少！三、组织：肠黏膜（newinbio）目的：WESTERN BLOT检测凋亡相关蛋白的表达