大山楂丸中总黄酮的含量测定

大山楂丸中总黄酮的含量测定

【摘要】目的建立大山楂丸中总黄酮的含量测定方法。方法采用分光光度法，

以槲皮素为对照品，对其进行络合显色，在510 rnn波长处测定吸收度，从而测

定大山楂丸中总黄酮的含量。结果线性范围在0.020 004?0.100 02

mg ? ml-1 (r=0. 999 3)之间，平均回收率为 96. 02%，RSD= 1.22% (n=5 )。

结

论该法简便易行、重现性好、结果可靠，可用于该制剂的质量控制。

【关键词】大山楂丸总黄酮分光光度法

Abstract：ObjectiveTo establish ultraviolet spectrophotometry for the content determination of Total Flavones in Dashanzha

Pill. MethodsQuercetin was selected as reference material, and the samples were determined at 510 nm. ResultsThe linear range for quercetin was 0.020 004 ?0.100 02 mg ? ml-1 (r= 0.999 3). The recovery rate was 96.02%; RSD= 1.22% (n=5 ). ConclusionThis method is easy to handle with good accuracy and reproducibility, and is

suitable for the quality control of Dashanzha Pill.

Key words： Dashanzha Pills; Total Flavones; Spectrophotometry

大山楂丸由山楂、神曲、麦芽组成，具有开胃消食的功能，用丁?食积内停

所致的食欲不振、消化不良、脘腹胀闷。主要化学成分有多种黄酮、有机酸、

维生素及各种消化酶等。本实验采用分光光度法对总黄酮进行含量测定。现将

结果报道如下。

1仪器与试药

UV-1800紫外分光光度计（北京瑞利），槲皮素对照品（中国药品生物制

品检定所），大山楂丸（北京同仁堂制药厂），水为本院实验中心自制纯化水，

其他试剂均为分析纯。

2方法与结果

2.1对照品溶液制备精密称取槲皮素对照品20 mg,置100 ml容量瓶中, 加入95%乙醇50 ml溶解，再以50%乙醇稀释至刻度，摇匀，即得0. 2 mg/ml的

对照品溶液。

1.2供试品溶液制备取105°C干燥2 h的大山楂丸约6. 5 g，精密称定，

置索氏提取器中，加入95%乙醇130 m l,回流提取1. 5 h。将提取液定量转移至250m l容量瓶中，补加蒸馏水至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

2.3标准曲线的制备精密量取对照品溶液 1.0, 2.0，

3.0，

4.0，

5.0 ml, 分别置丁10 ml容量瓶中。分别加入50%乙醇使成5 ml;精密加入5%NaN02溶

液0.3 ml,摇匀，放置6 min；加入10%A1 (N03)3溶液0. 3 ml,摇匀，放置6 min；加入 1 mol/L NaOH溶液 4 ml;分别用50%乙醇稀释至刻度，摇匀，放置15 mino以第1瓶作空白，于510 mn处分别测其吸光度，以对照品浓度为横坐标，以吸收度为纵坐标，绘制标准曲线，并计算回归方程。结果见表1。

计算回归方程得Y= 4.854X - 0.005 1，r= 0.999 3。结果表明，槲皮素在0. 020 004?0. 100 02 mg ? ml_l范围内呈良好的线性关系。

2.4稳定性实验取同一供试品溶液，分别于配制后0，15，30，45，60 min,依照“2.3”项方法测定吸收度，分别为0. 284，0.283, 0.281，0.280,

0.278，RSD= 0.85%。实验结果提示：供试品溶液制备后1 h内稳定，吸收度无明显变化。

2.5精密度实验取同一供试品溶液5份，依照“2.3”项方法测定吸收度, 分别为 0.281，0.278，0.285，0.277，0.280，RSD=1. 11%。

2.6重复性实验取同一批样品（批号6015193) 5份，每份各6. 5 g,依

1.2项方法制备供试品溶液。精密吸取 1 ml供试品溶液，依“

2.3”项方法测定，结果分别为 22. 906，2

3.066，22.513，22.434，22.276 mg ? g-1,平均含量为 22. 639 mg . g-1, RSD= 1. 47%。

2.7回收率实验精密称取5份已知含量的样品（批号6015193),精密加入对照品适量，依“2.2”项方法制备供试品溶液。精密吸取lml供试品溶液，

依“2. 3”项方法测定，计算回收率，结果表明，回收率的重现性好。结果见表

2。

表1线性范围考察结果（略）

表2回收率测定结果（略）

0.8样品含量测定精密量取供试液 1 ml置10 ml容量瓶中，加入50%乙醇使成5 ml；照“2.3”项方法，自“精密加入5%NaN02溶液0.3 ml”起，依法操作，另精密量取5 ml 50%乙醇，照“2.3”项方法，自“精密加入5%NaN02 溶液0.3 ml”起，依法操作，制成空白溶液。在波长510 nm处，以空白溶液校正基线，测定供试液的吸光度值，代入回归方程，计算供试液中总黄酮的含量。结果见表3。

表3大山楂丸总黄酮含量测定结果（略）

3讨论

目前，文献报道总黄酮的含量测定方法，主要有紫外分光光度法，HPLC法，荧光光度法等[1?5]。本实验采用分光光度法测定大山楂丸中总黄酮的含量，

简便易行、重现性好、结果可靠，为缺少昂贵设备的研究机构提供了相应的研

究手段。

本实验以槲皮素为标准品，经全波长扫描确定最大吸收波长510 nm为检测

波长。

通过考察样品的提取方式，发现索氏提取法优于超声提取。

通过考察索氏提取样品的时间，发现提取1.5 h，基本能提尽样品中的总

黄酮。

【参考文献】

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总黄酮、多酚含量的测定

燕麦总黄酮含量的测定 一、仪器 紫外-可见分光光度计、分析天平、低速离心机、超声波提取器、恒温水浴锅、粉碎机、pH计、10mL容量瓶15个、10mL具塞试管、100mL烧瓶、10mL离心管10个、试管架2个 二、药品 芦丁标准品40mg、无水乙醇1000mL、亚硝酸钠500g、硝酸铝500g、NaOH 500g 三、实验步骤 （一）、样品处理及总黄酮的提取 1. 将样品籽粒分别称取 2.5 g置于小信封里，80℃烘干24 h。 2. 研成粉末，称取500±2 mg样品于10 mL离心管中，使样品位于试管底部（重复3次）。 3. 每管加4 mL 60％乙醇，放水浴锅60℃浸提2 h。6000 r/min离心10 min，离心后取上清液于10 mL容量瓶中。 4. 再向离心管中加4 mL的60％乙醇，放水浴锅60℃浸提1 h。6000 r/min离心10 min，离心后取上清液于相应的10 mL容量瓶中。60％乙醇定容至10 mL，待测。 （二）、标准曲线绘制 1. 精确量取浓度200 μg/mL芦丁标准溶液0、0.2、0.4、0.8、1.2、1.6、 2.0 mL 分别置于10 mL容量瓶中。 2. 向容量瓶中分别加60％乙醇5、4.8、4.6、4.2、 3.8、3.4、3.0 mL。 3. 然后加5％亚硝酸钠0.3 mL，摇匀，静置6 min。 4. 再加10％硝酸铝0.3 mL，摇匀，静置6 min。 5. 加4％氢氧化钠4.0 mL，用60%的乙醇定容至刻度，摇匀，静置12 min。 6. 于510 nm波长下测定吸光度，并以芦丁标准浓度值为纵坐标，以吸光度为横坐标，绘制标准曲线。 （三）、样品提取液总黄酮含量的测定 准确吸取总黄酮提取液2.0 mL于10 mL容量瓶中，按二的方法测定吸光度，

总黄酮含量测定方案

总黄酮含量测定 一样品溶液的制备 70%乙醇溶液，料液比1﹕8 ，80度下回流2h。取10g样品放入圆底烧 瓶中加入80ml 70%乙醇溶液回流2h,抽滤定容至100ml备用。使用时先离心再用70%乙醇稀释10倍做样品溶液。 二芦丁标准品的配置 精密称取芦丁2mg，加无水乙醇定容至10ml。制得浓度为0.2mg/ml芦 丁标准品溶液。 三显色方法的确定 1 扫描原液分别取芦丁溶液和样品溶液各1ml，加无水乙醇定容至25ml，空白对照，全波扫描。 2硝酸铝显色法分别取芦丁对照品溶液和样品溶液各5ml，加5%亚硝酸 钠溶液（1.25g亚硝酸溶于无水乙醇中定容到25ml容量瓶中) 1ml, 摇匀，放置6min，加10%硝酸铝溶液(4,4014g硝酸铝.九水溶于无水乙醇中定容到25ml 容量瓶中) 1ml，摇匀，放置6min，加4%氢氧化钠试液(2g氢氧化钠溶于无水乙醇中定容到50ml容量瓶中）10ml, 再加无水乙醇定容至25ml，摇匀，放置15min，空白对照，全波扫描bb 。 3氯化铝显色法分别取芦丁对照溶液和样品溶液各5ml ,加1%的氯化 铝溶液（1g氯化铝溶于无水乙醇中定容到100ml容量瓶中)10ml，摇匀放置10min，空白对照，全波扫描。 4 氢氧化钾显色法分别取芦丁对照品溶液和样品溶液各5ml，加3ml10% 氢氧化钾溶液（2.5g氢氧化钾溶于无水乙醇中定容到25ml容量瓶中）， 充分摇匀显色5min后，用无水乙醇定容至25ml, 摇匀，空白对照，全波 扫描。 四显色条件的确定 五标准曲线的绘制 分别取1ml,2ml,3ml,4ml,5ml,6ml芦丁对照品溶液，按所选的显色方法测定吸光度，绘制标准曲线。 六精密度实验 按标准曲线绘制方法，分别准确量取1.0ml芦丁标准液5份，按所选显色剂和所确定的最优显色条件在所选波长下测定吸光度。

总黄酮、多酚含量的测定

总黄酮含量的测定 一、仪器 紫外-可见分光光度计、分析天平、低速离心机、超声波提取器、恒温水浴锅、粉碎机、pH计、10mL容量瓶15个、10mL具塞试管、100mL烧瓶、10mL离心管10个、试管架2个 二、药品 芦丁标准品40mg、无水乙醇1000mL、亚硝酸钠500g、硝酸铝500g、NaOH 500g 三、实验步骤 （一）、标准曲线绘制 1. 芦丁标准品40mg置于称量瓶中80℃烘干至恒重，取烘干后的20mg芦丁标准品用水定容至100mL,得200μg/mL芦丁标准贮备液，精确量取上述浓度芦丁标准贮备溶液0、0.2、0.4、0.8、1.2、1.6、 2.0 mL分别置于10 mL具塞试管中。 2. 向具塞试管中分别加60％乙醇5、4.8、4.6、4.2、 3.8、3.4、3.0 mL。 3. 然后加5％亚硝酸钠0.3 mL，摇匀，静置6 min。 4. 再加10％硝酸铝0.3 mL，摇匀，静置6 min。 5. 加4％氢氧化钠4.0 mL，用60%的乙醇定容至刻度，摇匀，静置12 min。 6. 于510 nm波长下测定吸光度，并以芦丁标准浓度值为横坐标，以吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。研究表明芦丁标准品含量在0～0.5mg 范围内与吸光度具有良好的线性关系。 （二）、样品处理及总黄酮的提取（以60%乙醇提取为例） 1. 将样品在80℃烘干24 h，粉碎后过80目筛置于干燥器中备用。 2. 称取500±2 mg样品于25 mL具塞三角瓶中，使样品位于三角瓶底部（重复3次）。 3. 每瓶加4 mL 60％乙醇，放超声波提取器提取2 h。提取液转至10 mL具塞离心管中。 4. 再向具塞三角瓶中加4 mL的60％乙醇，放超声波提取器提取1 h，提取液转至相应10 mL具塞离心管中，6000 r/min离心10 min，离心后取上清液于相应

银杏叶黄酮提取及含量测定

银杏叶黄酮提取及含量测定 一、实验目的 1、掌握银杏叶中黄酮的提取方法 2、了解银杏叶中黄酮的含量测定 二、实验原理 近几年来，随着对黄酮类化合物研究的日益深入与重视，黄酮类化合物提取技术的发展也得到了促进。目前提取黄酮类化合物的方法主要包括有机溶剂浸提法、超声波提取法、超临界流体萃取法、微波提取法和酶提取法等。 １．１有机溶剂浸提法 目前国内外使用最广泛的银杏叶中黄酮的提取方法就是有机溶剂提取法，一般可用乙酸乙酯、丙酮、乙醇、甲醇或某些极性较大的混合溶剂，如甲醇－水（１＋１）溶液。由于甲醇的毒性、挥发性较大，因此一般采用乙醇作为提取剂。银杏叶干燥粉碎后用有机溶剂浸泡、提取、过滤，滤液中的溶剂经减压蒸馏除去后得银杏叶浸膏粗提物。徐桂花等［１］提取银杏叶中黄酮类化合物时，采用乙醇（７０＋３０）溶液为提取剂，提取温度为７０℃，料液质量浓度比为１ｇ比４０ｍＬ，提取时间为４ｈ。由于乙醇提取工艺在安全性、溶剂成本、效率及杂质酚酸去除等方面都不能应对日益严酷的市场竞争，张林涛等［1］提出了以硼砂－ 氢氧化钙碱水为溶剂提取银杏叶黄酮，其黄酮提取率与文献值相近，但提取工艺时间缩短为１ｈ。 １．２超声波提取法 超声波提取法是利用搅拌作用、强烈的振动和空间效应、高的加速度等使药物有效成分进入溶剂，从而提高提取率，缩短提取时间，并能消除高温对提取成分影响的一种提取法。刘晶芝等［2］运用了超声波技术与水浸提取相结合的方法得出超声波提取的最佳工艺条件为：超声频率４０ｋＨｚ，超声处理时间５５ｍｉｎ，料液质量比１比１００，提取温度３５℃，静置３ｈ，提取率为８１．９％。郭国瑞等［3］以水为介质，超声波提取银杏叶中黄酮苷，与常规水浸提法比较，超声波提取效率大大提高，确定超声波提取的最佳工艺为：超声处理时间５５ｍｉｎ，料液质量比１比３０，提取温度５０℃，提取率为８２．３％。 １．３超临界流体萃取法 超临界流体萃取法是一种以超临界流体代替常规有机溶剂对有效成分进行萃取和分离的新技术。可作为超临界流体的物质很多，其中二氧化碳临界温度（ＴＣ＝３１．３℃）接近室温，且具有无色、无毒、无味、不易燃、化学惰性、价廉、易制成高纯气体等优点而被广泛应用，特别在中药材及其制剂中更显示出其独特、简便、快速、具有较高的选择性、提取杂质少、可直接进样分析的优点。邓启焕等［4］探讨了超临界萃取银杏叶有效成分的影响因素，最佳条件为萃取压力２０ＭＰａ、时间９０ｍｉｎ、粒度３．９ｍｍ、温度４０℃，经测定银杏叶黄酮的质量分数为２８％，高于国际公认标准。 １．４微波提取法 微波提取法是利用分子或离子在微波场中的导电效应直接对物质进行加热从而提取植物细胞内耐热物质的新工艺。曾里等［5］的研究表明以乙醇溶液作溶剂比以水作溶剂的效果好，最佳条件为以乙醇 （６０＋４０）溶液为提取剂，解冻处理２０ｍｉｎ。张鹏等［6］对微波法提取银杏叶中黄酮类物质进行了研究，最佳提取条件为以乙醇（５０＋５０）溶液

总黄酮测定含量

1 各批次药材含量测定 使用已经确定的总黄酮含量检测方法分别进行5个批次原料含量的测定 总黄酮含量测定：分别精密称取药材粗粉0.5g，置100ml锥形瓶中，加70%乙醇50ml，称定重量，超声60分钟，放冷，称定，加入70%乙醇补足减失重量，摇匀，过滤，弃去粗滤液，精密量取续滤液10.0ml上聚酰胺树脂，待充分吸附后，用乙醇进行洗脱，至流出液基本无色，以洗脱液定容至25ml量瓶中，备用。精密量取供试品溶液5ml，置10ml比色管中，加 5％亚硝酸钠溶液0.4ml，使混匀，放置6分钟，加10％硝酸铝溶液0.4ml，摇匀，放置6 分钟，加2mol/L氢氧化钠溶液3ml，再加30%乙醇至刻度，摇匀，放置15分钟，照分光光度法（《中国药典》2010版一部附录Ⅴ B），在504nm 的波长处测定吸收度。 表1 不同批次药材总黄酮含量测定结果 批号含量（%） 1 2 3 X±S 20140516 0.16350.16480.17010.1661±0.0035 20140516紫外扫描色谱图 2 药材总黄酮转移率研究 2.1 单个药材转移率研究

2.1.1 单个药材的转移率测定 同一批次的各药材，分别按照产品生产工艺提取得单个药材的总黄酮浓缩液样品，进行总黄酮含量检测，与“1”项下同批药材的总黄酮含量相比得出单个药材的转移率（如下式），分别进行5批次药材测定。 黄芪、桑叶、黄精、山茱萸：分别取黄芪、桑叶、黄精、山茱萸各100g，加水煎煮两次（回流），第一次加水12倍量，煎煮2.0h，过滤；第二次加水10倍量，煎煮1.0h，过滤，合并滤液浓缩至100ml，备用。 黄芪不同浓缩程度的考查：取黄芪100g，加水煎煮两次（回流），第一次加水20倍量，煎煮2.5h，过滤；第二次加水20倍量，煎煮2.0h，过滤，合并滤液，重复试验三次，分别浓缩至50ml、100ml、200ml，备用。 精密量取上述溶液5ml，加乙醇15ml，摇匀，过滤，弃去粗滤液，精密量取续滤液10.0ml上聚酰胺树脂，待充分吸附后，用乙醇进行洗脱，至流出液基本无色，以洗脱液定容至25ml量瓶中，备用。精密量取供试品溶液5ml，置10ml 比色管中，加5％亚硝酸钠溶液0.4ml，使混匀，放置6分钟，加10％硝酸铝溶液0.4ml，摇匀，放置6 分钟，加2mol/L氢氧化钠溶液3ml，再加70%乙醇至刻度，摇匀，放置15分钟，照分光光度法（《中国药典》2010版一部附录ⅤB），在504nm 的波长处测定吸收度。 表2 不同批次药材提取液总黄酮含量测定结果 批号含量（%） 1 2 3 X±S 20140516 0.16350.16480.17010.1661±0.0035

黄酮含量的测定方法

黄酮含量的测定方法 1、对照法 1） ①对照品制备：精密称取芦丁对照品20.8mg，置于100ml容量瓶中，加70%乙 醇使溶解并稀释至刻度，摇匀。 ②样品溶液制备 精密称取样品0.50g，精密加入70%乙醇50ml，称定重量，超声处理30分钟，称定重量，用70%乙醇补足减失重量，即得。 ③标准曲线的制备 精密称取对照品溶液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml，分别置于25ml比色管中，加70%乙醇10ml，加5%亚硝酸钠溶液1ml，摇匀，放置6分钟，加1mol/L 氢氧化钠溶液10ml，加70%乙醇置刻度，摇匀，放置15分钟。各取10ml 置于50ml容量瓶中，用70%乙醇稀释至刻度。在510nm的波长下测定吸光度。 2） ①样品溶液的制备： 分别精确称取80℃恒温干燥的样品用50%甲醇回流提取，料液比1：15,提取两次，每次30min，将两次提取液合并浓缩至一定体积，用30%甲醇定容至50ml 容量瓶中。从其中取出12ml溶液放入100ml容量瓶中，稀释至刻度，再从100ml 容量瓶中取出1.5ml溶液，放至10ml容量瓶中，定容，为待测样品液Ⅰa和Ⅱa。 ②最大吸收波长的选择：分别作样品液Ⅰa、Ⅱa及芦丁标准品的吸收曲线，均在350 nm 处有一强吸收，因此选择350 nm为测定波长。 ③标准曲线的制定： 精密称取芦丁对照品10.3mg，用少量30%乙醇溶解后，转移至50ml容量瓶，用蒸馏水定容至刻度。分别精密量取2ml、3ml、4ml、5ml、6ml芦丁溶液置于100ml 容量瓶中，于350 nm 波长处测定吸光值，以芦丁空白为参比，以芦丁浓度为横坐标，以吸光度为纵坐标绘制标准曲线，提示在4.12～12.36mg／103ml浓度之间，吸光度值与浓度呈现良好的线性关系。 ④含量测定结果： 分别吸取2．2．1中Ⅰa和Ⅱa待测样品液各适量于石英比色池中，按标准芦丁一吸光度测定法，以样液空白参比，于350nm 波长下测定吸光值，计算各提取液中总黄酮含量。 计算公式为:样品总黄酮含量(%)=0.03692(A+0.1644)/W。 注:上式为通过回归方程转化而来，式中A为测得样品液的吸光度值，W为称样量。

大豆异黄酮的测定方法综述(精)

NANCHANG UNIVERSITY 功能食品学综述论文 学 院:生命科学与食品工程学院专业:食品科学与工程班 级:学号:学生姓名:廖杰 指导教师:王远兴

起讫日期: 2014年 3月至 2014年 4月 大豆异黄酮的测定方法 摘要 本文在参考国内外大量文献的基础上,对大豆异黄酮的测定方法进行了系统的总结和介绍 关键词:大豆异黄酮;测定方法 Abstract: In reference on the basis of a large number of literature at home and abroad, this paper method of the determination of soybean isoflavones were summarized and introduced Keywords:soy isoflavones method 目录 摘 要 ........................................................................................................................................... ........... I Abstract:................................................................................................................................. .............. I 目 录 ........................................................................................................................................... .......... II 1根据紫外吸收特性检测方 法 ......................................................................................................... 1 1.1紫外分光光度法(UV .. (1)

设计实验 总黄酮的提取和测定

设计性实验： 银杏叶中总黄酮的提取和测定 小组人员：袁国明郎启国赵永仓王蓉 一、目的要求 1、探究不同浓度的乙醇和在不同时间下对黄酮类化合物提取率的影响。 2、掌握从银杏叶中提取总黄酮的操作步骤和测定方法。 3、了解提取银杏叶中黄酮类化合物制备的基本原理和方法。 二、实验原理 根据超声波具有空化、粉碎、搅拌等特殊作用，对银杏叶的细胞有破坏现象，使乙醇溶液能渗透到银杏叶中，以便让总黄酮溶解在乙醇中，在通过分离提纯的方法，来获得总黄酮的含量。 黄酮类是含酚羟基的化合物，能够和铝离子产生黄色络合物，在碱性条件下溶液呈红色。因此，本实验所采用的方法是在碱性溶液中加铝盐显色的分光光度法。其具体操作是在所测定的溶液中加入5％NaNO2；10%A1(NO3)3；5％NaOH溶液，在500nm波长下，用紫外分光光度法测定所提溶液中总黄酮的含量。 三、试剂和器材 1、试剂 芦丁标准品；5％NaNO2；10%A1(NO3)3；5％NaOH；30%、40%、50%、60%、70%、80％的乙醇（用95%的酒精31.91ml、42.55ml、53.19ml、68.83ml、74.47ml、85.11ml ）；及蒸馏水等。 2、材料 新鲜的银杏叶 3、器材 容量瓶25ml（×1） 100ml（×6）；吸管0.5ml（×2）1ml（×2），2ml（×1），5ml （×1）粉碎机；超声波清洗机；高速离心机；三角锥形瓶50ml（×6）；滤纸；分光光度

计；烧杯；具塞刻度试管；分析天平；20ml量筒等 四、操作方法 1、银杏叶的处理 把新鲜的银杏叶低温烘干，使水分小于8％，制成干粉，待用。 2、制作标准曲线 准确称取芦丁标准品5mg，用80％乙醇溶解，定容于25mL容量瓶中，摇匀，得0.2mg ／mL的标准溶液。 移液管精确吸取标准溶液0.0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2ml，分别置于10mL容量瓶中，加入5％NaNO2 0.4mL，摇匀，放置5min；加入10%A1(NO3)3 0.4mL，摇匀，放置6min；加入5%NaOH 4.0mL，再加蒸馏水至刻度，摇匀，在80℃水浴中保温10min。以试剂空白作为参比溶液。用1cm比色皿，在510nm波长处测定吸光度，绘制标准曲线（标样浓度和吸光度的关系）。 表1-1 标准曲线制作 管号 1 2 3 4 5 6 7 芦丁标准液（mL）0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 5％NaNO2（mL）0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 放置时间(min) 5 5 5 5 5 5 5 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 10%Al(NO3)3 （mL） 放置时间(min) 6 6 6 6 6 6 6 5%NaOH（mL） 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0 蒸馏水（mL） 5.2 5.0 4.8 4.6 4.4 4.2 4.0 3、探究不同时间对黄酮提取的影响 分别称取6分1g的银杏叶粉末，放在50mL的三角锥形瓶中，并作相应标记，分别加入70%的乙醇溶液各20mL，在超声波清洗机（500W）超声30 min、35 min 、40min、45 min、50min、 55min将溶液用高速离心机离心后除去滤渣，得到粗产品，用量筒量体积做记录，等待备用。 4、探究不同浓度的乙醇对总黄酮提取的影响

植物总黄酮的提取与测定

试验植物总黄酮的提取与测定 摘要本实验采用紫外分光光度法测定芹菜体内总黄酮含量，利用黄酮类化合物与铝盐反应生成红色络合物。以芦丁为标准品在510nm处测定吸光度。得出标准曲线，然后计算样品的黄酮量。下面会就本实验出现的一些状况作出详尽想分析。 材料与方法 材料新鲜芹菜叶 方法 试剂的配制 标准品芦丁；甲醇；石油醚；磷酸；95%乙醇；硝酸铝；亚硝酸钠；氢氧化钠；去离子水 步骤 1 总黄酮提取称取新鲜芹菜叶子10.0g，研磨后于回流装置中用70ml 95%乙醇回流2h，过滤，然后用石油醚做溶剂萃取1~2次去脂溶物。溶剂用量为提取液的1/2，除脂后浓缩并定容至50ml。 2 芹菜黄酮含量的测定吸取10ml置25ml容量瓶中，加30%乙醇2.5ml，再加入5%亚硝酸钠溶液0.75ml摇匀，放置5min，加10%硝酸铝液0.75ml，摇匀，放置5min，再加1mol/L NaOH溶液10ml，摇匀，加30%乙醇至刻度，放置10min，在510nm波长处测定吸光度。同时，取上述稀释液10ml，置于25ml容量瓶中，

加30%乙醇至刻度，作为对照溶液。根据测得的吸光度得出标准曲线 3 标准溶液配制精确称取与120℃真空干燥至恒重的芦丁标准品20mg，置100ml容量瓶中，加60%乙醇溶液，稀释至刻度，精确量取25ml，置于50ml容量瓶中，稀释至刻度，摇匀既得每1ml 含芦丁0.1mg的标准溶液。 4标准曲线制作精确量取标准溶液0。0，2.5,5.0,7.5,10.0,12.5ml，分别置于25ml容量瓶中，加30%乙醇补足至12.5ml，加5%亚硝酸钠溶液0.75ml摇匀，放置5min，精确加入10%硝酸铝液0.75ml，摇匀，放置5min，再精确加入1mol/L氢氧化钠液10ml，用30%乙醇稀释至刻度，以第一管为空白，与510nm波长下测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准溶液。 结果 标准：A1=0.000;A2=0.121;A3=0.266;A4=0.394;A5=0.530;A6=0.673 样品：A（1）=0.000；A（2）=0.036

总黄酮的测定方法

总黄酮的测定方法 黄酮类化合物是广泛存在于植物界的一大类天然产物,种类繁多, 大多数黄酮类化合物与葡萄糖或鼠李糖结合成苷,部分为游离态或与鞣质结合存在。黄酮化合物系色原烷或色原酮的2-或3-苯基衍生物, 一般具有C6-C3-C6的基本骨架结构。近年来, 黄酮类化合物以其广谱的药理作用倍受青睐, 人们对含有黄酮的化合物进行大量研究, 以期获得黄酮含量较高的中草药。因此黄酮的含量测定成为研究的关键步骤。 一、方法 （一）高效液相色谱法 1. 原理植物类样品用石油醚脱脂后，经甲醇加热回流提取，以高效液相色谱法分离，在紫外检测器360nm条件下，以保留时间定性、峰面积定量。 2．仪器和试剂（1）高效液相色谱仪（2）紫外检测器（3）层析柱（4）超声波清洗仪（5）索氏提取器 （6）微孔过滤器（滤膜0.45um）（7）甲醇（色谱纯）（8）芦丁标准品 （9）石油醚，盐酸，磷酸（分析纯）。（10）去离子水 （11）芦丁标准溶液：精确称取经105℃干燥恒重的芦丁标谁品15.0mg，加甲醇溶解并定容至100ml，配成150ug／ml的芦丁标准溶液 3. 操作步骤 （1）样品处理 1）固体样品：称取2.0g干燥的固体样品，研细，置于索氏提取器中，用石油醚（60～90℃）提取脂肪等脂溶性成分，弃去石油醚提取液，剩余物挥去石油醚，加人甲醇50ml和25％HC1 5ml，80℃水浴回流水解1h，取出后快速冷却至室温，转移至50ml容量瓶中，甲醇定容，经0.45um滤膜过滤，供分析用。 2）液体样品：准确吸取样品2.0ml，直接以石油醚萃取脱脂，挥去石油醚后， 以甲醇溶解并定容，经微孔滤膜（0.45um）滤过后供测定用。 （2）色谱分离条件 色谱柱：CLC－ODS，6mm×150mm，5um; 流动相：0.3％磷酸水溶液：甲醇（V:V）＝40:80，临用前用超声波脱气；流速：lml／min；柱温：40℃；检测波长：360nm；灵敏度：0.02AUFS；进样量：20ul。 （3）样品测定：准确吸取样品处理液和标准液各10ul，注入高液相色谱仪进行分离，以其标准溶液峰的保留时间定性，以其峰面积计算出样品中总黄酮的含量。4、结果计算 （二）分光光度法

黄酮含量测定

一、黄酮含量的测定方法 1、样品的处理 取材料地上部分洗净，晾晒至表面无水分，置于干燥箱中，80℃下干燥至恒重，磨成粉末，过筛待用。 2、标准曲线的绘制 准确称取芦丁对照品20mg，置于100ml容量瓶中，加体积分数70%乙醇溶解至刻度，摇匀得0.2mg/ml的对照品溶液。然后，分别吸取0、0.4、0.8、1.2、1.6、2.0、2.4ml，分别置于7支试管中，加水补齐至2.4ml，分别加入5%亚硝酸钠0.4ml，摇匀，放置6min。再加入10%硝酸铝溶液0.4ml，摇匀，放置6min。加入4.3%氢氧化钠溶液4ml，然后分别加2.2ml水，摇匀，放置15min。以空白试剂为参比，用紫外分光光度计在500nm波长处测定吸光度。 3、黄酮的提取（微波提取法） 准确称取干燥至横重的野生马齿苋粉末3份，每份1g，分别置于锥形瓶中，喷洒适量蒸馏水润湿，用中高火微波处理90s。加入一定量体积分数为70%的乙醇溶液，于80℃恒温水浴加热提取1.5h，趁热过滤，洗涤残渣，用70%乙醇定容于50ml容量瓶中，摇匀，得黄酮提取液。 4、黄酮含量的计算 吸取分别黄酮提取液1ml，加1.4ml蒸馏水，摇匀，加入5%亚硝酸钠0.4ml，摇匀，放置6min。再加10%硝酸铝溶液0.4ml，摇匀，放置 6min。加入4.3%氢氧化钠溶液4ml。加入蒸馏水2.8ml，摇匀放置15min。

以蒸馏水代替黄酮提取液的空白试剂为参比，用紫外分光光度计在500nm波长出测定吸光度。带入标准曲线中，计算黄酮含量。 总黄酮含量（mg/g）= c*v/m 式中：c为1ml样品中测得的黄酮含量（mg）； v为提取液总体积（ml）； m为叶片干重。 二、矿质元素的测定 每份需0.2g

黄酮含量的测定

黄酮含量的测定 1.提取（以麦苗粉为例） 根据仿生学原理，人体胃、小肠、大肠的体液酸度最佳pH分别为2.0,7.5,8.3。称取1g麦苗粉末，选用乙醇-水作为浸取剂，模拟胃肠道的pH，分别调pH值2.0,7.5,8.3,在60℃下超声50min，合并3次提取剂，，定容。 工艺流程：1g麦苗粉末→一次提取（加入10ml70﹪的乙醇，乙醇pH2.0）→抽滤→留渣继续二次提取，滤液保存→二次提取（加10ml70﹪的乙醇，提取剂pH7.5）→抽滤→留渣继续三次提取，滤液保存→三次提取（加入10ml70﹪的乙醇，乙醇pH8.3）→合并三次滤液→定容至30mL→黄酮类化合物含量的测定分光光度法测吸光值。 麦苗汁的提取 直接从榨汁后定容至100ml的麦苗汁中取36.5ml，加入85.2ml无水乙醇，60℃超声提取150min。 2.试剂配置 芦丁标准液：准确称取芦丁标准品7.5mg，用50%乙醇溶解并定容至25mL，得到浓度为300mg/mL的芦丁标准溶液。 10% Al(NO3)3溶液：称取5g Al(NO3)3，用蒸馏水溶解并定容至50mL。 5% NaOH 溶液：称取2.5g NaOH，用蒸馏水溶解并定容至50mL。 5% NaNO2 溶液：称取2.5g NaNO2，用蒸馏水溶解并定容至50mL。 0.05mol/L Tris-HCl缓冲液(pH=8.2)：0.1mol/L Tris 50mL，加入0.1mol/L HCl 22.9mL，混匀，稀释定容至100mL。 3 mmol/L 邻苯三酚-HCl溶液：准确称取0.0189g邻苯三酚，用10 mmol/L HCl溶解并定容至100mL。 9mmol/L水杨酸-乙醇：准确称取1.2430g水杨酸，用95%乙醇溶解并定容到1000mL 容量瓶中。 9mmol/L FeSO4：准确称取1.3680g FeSO4，定容到1000mL容量瓶中。 10mmol/L HCl：准确量取83.3mL分析纯HCl，定容到100mL容量瓶中。 8.8 mmol/L H2O2 溶液：吸取0.109mL 30% H2O2，用蒸馏水溶解并定容至500mL。 3.标准曲线的绘制 准确称取芦丁标准品15mg，用50%乙醇溶解并定容至50mL，得到浓度为0.3mg/mL的芦丁标准溶液。取7支试管编号，分别按表1中所给的量加入各种试剂，并测定其吸光值。 表6 芦丁标准曲线的绘制 试剂0(mL) 1(mL) 2(mL) 3(mL) 4(mL) 5(mL) 6(mL) 芦丁标准溶液0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 50%乙醇 3.0 2.5 2.0 1.5 1.0 0.5 0 5% NaNO2 溶液0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 10% Al(NO3)3 溶液0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 5% NaOH 溶液 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0 蒸馏水 2.2 2.2 2.2 2.2 2.2 2.2 2.2 加入5% NaNO2 溶液0.4 mL后，摇匀，放置6min ；加入10% Al(NO3)3 溶液0.4 mL

JC-126 植物提取物中总黄酮(Total Flavones)含量测定方法

1. 仪器和试剂 1.1 UV-2450紫外-可见光分光光度计 1.2 分析天平：感量0.00001g 1.3 超声波清洗仪：功率250W，频率40KHz 1.4 芦丁对照品（99%） 1.5 槲皮素对照品（99%） 1.6 容量瓶（10mL、100 mL） 1.7 微量移液管（1 mL） 1.8 移液管（2 mL） 1.9 醋酸（分析级） 1.10 醋酸钠（分析级） 1.11 无水乙醇（分析级） 1.12 蒸馏水 1.13醋酸-醋酸钠缓冲液（PH4.5）：准确称取醋酸钠（分析纯）1.8g，加入醋酸（分析纯）0.98mL，加水溶解定容至100mL混匀即可。 1.14 0.1mol/L三氯化铝试液：准确称取三氯化铝（分析纯） 2.41g，加水溶解定容至100mL混匀即可。 2. 测定方法 2.1对照品溶液制备 精密称取102℃减压干燥的槲皮素（芦丁）对照品约20mg，于100mL容量瓶中，加70%乙醇溶液定容，即为对照样品溶液。 2.2 样品溶液制备 精密称取植物提取物适量，于100mL容量瓶中，加入80mL70%乙醇，超声

提取30min ，冷却至室温，加入70%乙醇稀释至刻度，摇匀，过滤。续滤液即为样品溶液。 2.3 标准曲线制作 精密称取槲皮素（芦丁）对照品0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2mL 于10mL 容量瓶中，加醋酸-醋酸钠缓冲液2mL ，0.1mol/L 三氯化铝试液2mL ，摇匀，加70%乙醇溶液稀释至刻度，在270nm 处以试剂为空白测定吸光度，以浓度为横坐标，吸光度为纵坐标做标准曲线。 3. 样品测定 取样品续滤液1mL 于10mL 容量瓶中，按工作曲线项下“加加醋酸-醋酸钠缓冲液起”，依法测定吸光度，从工作曲线上读出样品溶液中槲皮素（芦丁）的浓度。 4. 含量计算 100%11???=W K V C ）总黄酮含量（﹪ 这是不是少了个百分号？ 式中：C 1---从标准曲线计算得的显色液总黄酮的浓度，mg/mL ； V 1：显色液的体积，ml ； K ：分取倍数； W ：样品的重量，mg 样品含量结果取两个平行样品含量的平均值。 分取倍数：如100ML 盐酸溶液,稀释到1000ML 定容,然后再取25ML 进行测定.分取倍数就是1/40,相当于取原溶液2.5ML 进行测定. 按照你的方法，V1应该是10ML ，K 应该是100. 你这个应该叫稀释倍数吧。从100ML 里取1ML 分析，推回去就应该乘以100.

总黄酮含量的测定

植物中总黄酮的提取与测定 原理 黄酮母核中含有碱性氧原子,一般又多带酚羟基，能和铝离子产生黄色络合物,又加入亚硝酸钠和氢氧化钠,使在碱性溶液中呈红色，溶液在510 nm 处有最大吸收，显色反应在60 min 内稳定。用芦丁作为对照品，用硝酸铝作为黄酮类比色测定的显色剂，吸光度与芦丁的浓度呈线形关系，采用分光光度法对总黄酮进行了含量测定。 仪器与试剂 新锐T6型紫外可见分光光度计；Explrer型电子天平（0.1mg）。60%的乙醇溶液；5%亚硝酸钠溶液；10%硝酸铝溶液。 芦丁标准溶液的配制 称量13.2mg芦丁，用60%乙醇定容到25ml容量瓶作为标准溶液。 标准曲线的制作 准确吸取0，0.4，0.8，1.2，1.6，2.0 ml芦丁标准溶液，放入10毫升容量瓶内（写明标记），分别加入2.0、1.6、1.2、0.8、0.4、0 ml的60%乙醇溶液；再加入5%亚硝酸钠溶液0.5ml摇匀，放置6min；加入10%硝酸铝溶液0.5ml，放置6min后；加入4%氢氧化钠溶液4.0ml，加60%乙醇定容，摇匀后，放置15min；（扫描找到最大吸收）在510nm处测定吸光度。用0.0ml作为空白，用芦丁含量的浓度作为横坐标，纵坐标作为一定浓度下所对应的吸光度，作标准曲线。 总黄酮提取与测定和计算 称取0.6—0.8g样品粉末，加入60ml60%乙醇放于100ml圆底烧瓶内，置于水浴锅上，70℃条件下回流提取60min。过滤、定容于100ml. 吸取样品量（根据样品的吸光度调整）1.0ml，放入10毫升容量瓶内（写明标记），用60%乙醇加到2.0ml；加入5%亚硝酸钠溶液0.5ml摇匀，放置6min；加入10%硝酸铝，溶液0.5ml，放置6min后；加入4%氢氧化钠溶液4.0ml，摇匀后，加60%乙醇定容，放置15min；在510nm处测定吸光度。根据标准曲线计算总黄酮的含量。 总黄酮含量=A/M·100×稀释倍数A为标准曲线中的含量。 例如：测得的吸光度=0.504 Y=0.0101x+0.0017 A= Y-0.0017/0.0101=0.504-0.0017/0.0101=49.73 M为样品的质量(mg)

总黄酮总酚含量测定方法

太行菊的抗氧化活性试验计划 1. 实验内容 对太行菊的甲醇提取物的乙醇、正己烷、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇、水共六种萃取物进行总酚、总黄酮含量的测定，分析实验结果，选择总分和总黄酮含量比较高的两个层分进行抗氧化能力测定，分析其抗氧化能力强弱，判断其有无研究价值。 用Folin-Denis法测定太行菊甲醇提取物各萃取层组分的总酚含量，以没食子酸作为标准品进行对照。用三氯化铝法测定太行菊各萃取层组分的总黄酮含量，以槲皮素作为标准品进行对照。根据实验结果，选择总酚和总黄酮含量较高的萃取层组分进行抗氧化能力测定，包括DPPH自由基清除能力测定，羟基自由基清除能力测定，还原能力测定。 2.实验步骤 将太行菊用甲醇溶液回流提取其有效成分，旋转浓缩后用水溶解，然后分别用正己烷、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇萃取、水层，得相应层的馏分。 2.1总酚含量测定：在试管中分别加入不同层样品（1mg/ml）0,25ml +Folin-Denis 试剂0.5ml ，5min后，再加入Na2CO3饱和溶液0.5ml,并做三组重复。对照组中样品和Folin-Denis试剂用DW代替，其他不变。空白组中Folin-Denis试剂用DW代替，其他不变。在760nm紫外光下测定吸光度。 对实验结果处理后做标准曲线，以没食子酸为标准品。 以没食子酸的微克数表示总酚含量:吸光度=0.0069 μg没食子酸－0.042。Folin-Denis试剂的配制：在2L烧瓶中加入750ml蒸馏水，再加入100g钨酸钠和20g磷钼酸，再加入50ml正磷酸回流2h, 冷却后装入1L容器内置于暗处 实验组*3: 体积Folin-Denis的体积Na2CO3 MEOH层0.25ml 0.5ml 0.5ml H层0.25ml 0.5ml 0.5ml CH层0.25ml 0.5ml 0.5ml EA层0.25ml 0.5ml 0.5ml BUOH层0.25ml 0.5ml 0.5ml

黄酮的检测方法和理化性质Word版

黄酮类化合物理化性质 不论在黄酮类化合物的提取分离方面还是在其结构测定的研究方面黄酮类化合物的理化性质及其显色反应都发挥着谱学技术所替代不了的作用。下面仅就其与分离和结构测定密切相关的性质进行简要介绍。 一、性状 黄酮类化合物多为结晶性固体少数如黄酮苷类为无定形粉末。游离的各种苷元母核中除二氢黄酮、二氢黄酮醇、黄烷及黄烷醇有族光性外其余则无光学活性。苷类由于在结构中引入糖的分子故均有旋光性且多为左旋。黄酮类化合物的颜色与分子中是否存在交叉共轭体系及助色团OH、OCH3等的种类、数目以及取代位置有关。以黄酮为例其色原酮部分原本元色但在2位上引入苯环后即形成交叉共轭体系并通过电子转移、重排，使共轭链延长。因而显现出颜色。一般情况下黄酮、黄酮醇及其苷类多显灰黄黄色。查耳酮为黄橙黄色而二氢黄酮、二氢黄酮醇、异黄酮类因不具有交叉共轭体系或共轭链短故不显色二氢黄酮及二氢黄酮醇或显微黄色异黄酮。显然在上述黄酮、黄酮醇分子中尤其在7位及4’位引入OH及OCH3等助色团后则因促进电子移位、重排而使化合物的颜色加深。但OH、OCH3引入其他位置则影响较小。花色素及其苷元的颜色随pH不同而改变一般显红 pH 7、紫 pH 85蓝 pH 8 5等颜色。 二、溶解性 黄酮类化合物的溶解度因结构及存在状态苷和苷元、单糖苷、双糖苷或三糖苷不同而有很大差异。一般游离苷元难溶或不溶于水易溶于甲醇、乙醇、醋酸乙酯、乙醇等有机溶剂及稀碱水溶液中。其中黄酮、黄酮醇、查耳酮等平面性强的分子因分子与分子间排列紧密分子间引力较大故更难溶于水而二氢黄酮及二氢黄酮醇等，因系非平面性分子。故分子与分子间排列不紧密分子间引力降低有利于水分子进入溶解度稍大。至于花色苷元花青素类虽也为平面性结构但因以离子形式存在具有盐的通性故亲水性较强水中溶解度较大。黄酮类苷元分子中引入羟基将增加在水中的溶解度而羟基经甲基化后则增加在有机溶剂中的溶解度。例如一般黄酮类化合物不溶于石油醚中故可与脂溶性杂质分开但川陈皮素56783’4’六甲氧基黄酮却可溶于石油醚。 黄酮类化合物的羟基糖苷化后水中溶解度即相应加大而在有机溶剂中的溶解度则相应减小。黄酮苷一般易溶于水、甲醇、乙醇等强极性溶剂中但难溶或不溶于苯、氯仿等有机溶剂中。糖链越长则水中溶解度越大。 另外糖的结合位置不同对苷的水中溶解度也有一定影响以 棉黄素35783’4’六羟基黄酮为例其3O葡 萄糖苷的水中溶解度大于7O葡萄糖苷。 三、酸性与碱性 一酸性 黄酮类化合物因分子中多具有酚羟基故显酸性可溶于碱性水溶液、吡啶、甲酰胺及二甲基甲酰胺中。由于酚羟基数目及位置不同酸性强弱也不同以黄酮为例其酚羟基酸性强弱顺序依次为74’二羟基7或4'羟基一般酚羟基5羟基例如C7 OH因为处于C O的对位在p共轭效应的影响下酸性较强可溶于碳酸钠水溶液中，此性质可用于提取、分离及鉴定工作。 二碱性

银杏叶中黄酮类化合物的含量测定

江苏畜牧兽医职业技术学院 毕业论文（设计） 专业药品质量检测技术班级药检071 学号200703123124 论文 (设计) 题目：银杏叶中黄酮类化合物的含量测定 学生姓名：刘江南 设计地点：江苏畜牧业兽医职业技术学院 指导教师：赵丽职称讲师 论文完成时间： 2010年5月20日

银杏叶中黄酮类化合物的含量测定 刘江南 药品质量检测技术 摘要：黄酮类化合物是银杏叶的主要药用成分，其黄酮含量在很大程度上决定着银杏叶的利用价值。以十二烷基硫酸钠(SDS)一正丁醇一正庚烷一水 微乳系统为流动相，预制聚酰胺薄层板为固定相，通过调节微乳系统的 极性，较好地分离出十几种银杏叶黄酮。与传统的流动相系统—有机溶 液系统相比，微乳系统显示出较强的分离优势。通过对大龄银杏叶不同 生长时期黄酮含量的测定与比较，分析银杏叶中黄酮含量随生长期的变 化规律，揭示出大龄银杏树采摘叶片的最佳时期。试验结果表明：不同 生长时期的银杏叶黄酮含量变化幅度较大,在1年中黄酮含量出现2次峰 值，8月份出现第1个峰值，黄酮含量为0.884%, 以后下降较快,10月叶 色发黄后又上升到最高值 0.977%。 关键词：银杏叶黄酮含量薄层色谱生长时期高效液相色谱 Title：In Gingko leaf flavonoid content determination Liujiangnan Drug quality testing technology Abstract：Flavonoids are the main medicinal components of ginkgo biloba,its flavonoid content to a large extent determines the value of ginkgo biloba use. Sodium dodecyl sulfate (SDS) 1-butanol 1-heptane microemulsion system of water as the mobile phase, pre-polyamide thin-layer plate as the stationary phase, by adjusting the polarity of the microemulsion system, well separated a dozen of flavonoids. Mobile phase with the traditional system - the organic solution systems, the microemulsion system showed strong separation advantage.Leaves of Ginkgo biloba on older growth and flavonoids content during the comparison, analysis of flavonoids of Ginkgo biloba in the variation with growth phase, revealing the older leaves of ginkgo trees picking the best time. The results showed that: different growth stages of the content of flavonoids in a significant reduction in 1 year in the flavonoid content of 2 times the

总黄酮含量测定

附录A（标准的附录） 总黄酮含量的测定（分光光度比色法） 1 试剂 所用试剂均为分析纯，水为去离子水或蒸馏水。 1.1无水乙醇； 1.2硝酸铝溶液（100g/L)：称取AL(NO3)3?9H2O 17.6g，加水溶解，定容于100mL容量瓶中，摇匀备用。 1.3 醋酸钾溶液（9.8g/L)：称取KCOOH 9.814g，加水溶解，定容于100mL容量瓶中，摇匀备用。 1.4 芦丁标准溶液： 1.4.1芦丁对照品储备液（1.0g/L)：精密称取芦丁标准物质50.000mg，置于50mL容量瓶中，加无水乙醇溶解并稀释定容至50mL。 1.4.2 芦丁对照品工作溶液（0.2g/L)：精密吸取芦丁对照品储备液（1.4.1）10mL,置于50mL容量瓶中，加无水乙醇（1.1）至刻度，摇匀备用。 2 仪器 全波长光度计；分析天平（0.000g）；容量瓶等玻璃仪器。 3 分析步骤 3.1 标准曲线 3.1.1精密吸取芦丁对照品工作液（1. 4.2）1mL，2 mL，3mL,4mL，5mL，6mL分别置于50mL容量瓶中。 3.1.2加无水乙醇（1.1）至15mL，然后依次加入硝酸铝溶液（1.2）1.0mL，醋酸钾溶液（1.3）1.0mL，摇匀，加水至刻度，摇匀，静止1hr。 3.1.3 用1cm比色杯于415nm处，以30%乙醇（V/V）溶液为空白，测定吸光度。 3.1.4 以50mL溶液中芦丁质量（mg）为横坐标，吸光度为纵坐标，用线性回归法做标准曲线，（线性范围0.0mg ~1.2mg（以50mL计）。 3.2 空白对照 精密吸取待测试样4.0mL，置于50mL容量瓶中，加无水乙醇14mL,加水稀释至刻度，摇匀。静止1hr，用?=0.22μ的过滤膜过滤，滤液作为样品的空白对照。 3.3样品测定 3.3.1精密吸取待测样液 4.0mL，置于50mL容量瓶中，按3.1.2进行操作。静止1hr，用?=0.22μ的过滤膜过滤，滤液作为测定液。 3.3.2以空白对照液（3.2）作参比，用1cm比色杯，在波长415nm处测定样品溶液的显色吸光度。 3.3.4 通过3.1.4标准曲线回归方程计算样品溶液中的总黄酮含量（mg). 4 样品测定结果计算 m X= ×100 W 式中： X ——样品中总黄酮的含量(mg/100mL) ； m ——由直线回归方程求出的样品比色液中芦丁的质量（mg）； W ——样品的体积（mL）。