NIKON ECLIPSE 80i 共聚焦荧光显微镜中文说明书

激光扫描共聚焦显微镜的原理和应用

激光扫描共聚焦显微镜的原理和应用 一、激光扫描共聚焦显微镜的原理 传统的光学显微镜使用的是场光源，标本上每一点的图像都会受到邻近点的衍射或散射光的干扰；激光扫描共焦显微镜(Laser Scanning Confocal Microscope，LSCM)采用点光源照射样本，在焦平面上形成一个轮廓分明的小的光点，该点被照射后发出的荧光被物镜搜集，并沿原照射光路回送到由双色镜构成的分光器。分光器将荧光直接送到探测器。光源和探测器前方都各有一个针孔，分别称为照明针孔和探测针孔。照明针孔与探测针孔相对于物镜焦平面是共轭的，焦平面上的点同时聚焦于照明针孔和发射针孔，焦平面以外的点被挡在探测针孔之外不能成像，这样得到的共聚焦图像是标本的光学切面，避免了非焦平面上杂散光线的干扰，克服了普通显微镜图像模糊的缺点，因此能得到整个焦平面上清晰的共聚焦图像。 原理图 二、激光扫描共聚焦显微镜组成特点 LSCM由显微镜光学系统，激光光源，扫描装置和检测系统构成，整套仪器由计算机控制，各部件之间的操作切换都可在计算机操作平台界面中方便灵活地

进行。显微镜是LSCM的主要组件，它关系到系统的成像质量。通常有倒置和正置两种形式，前者在切片、活细胞检测等生物医学应用中使用更广泛。 三、激光扫描共聚焦显微镜的应用 （一）细胞的三维重建 普通荧光显微镜分辨率低，显示的图像结构为多层面的图像叠加，结构不够清晰。LSCM能以0.1μm的步距沿轴向对细胞进行分层扫描，得到一组光学切片，经A/D转换后作为二维数组贮存。这些数组通过计算机进行不同的三维重建算法，可作单色或双色图像处理，组合成细胞真实的三维结构。旋转不同角度可观察各侧面的表面形态，也可从不同的断面观察细胞内部结构，测量细胞的长宽高、体积和断层面积等形态学参数。通过模拟荧光处理算法，可以产生在不同照明角度形成的阴影效果，突出立体感。通过角度旋转和细胞位置变化可产生三维动画效果。LSCM的三维重建广泛用于各类细胞骨架和形态学分析、染色体分析、细胞程序化死亡的观察、细胞内细胞质和细胞器的结构变化的分析和探测等方面。（二）静态结构检测 1.细胞原位检测核酸 用于细胞核定位及其形态学观察、检测细胞内DNA的复制及断裂情况以及染色体定位观察。 2.原位检测蛋白质、抗体及其他分子 原位检测蛋白质、抗体及其他分子 免疫荧光标记技术 检测荧光蛋白 3.检测细胞凋亡 检测细胞凋亡不同时期细胞形态、细胞凋亡相关蛋白

激光扫描共聚焦显微镜中荧光强度的测定条件研究.

激光扫描共聚焦显微镜中荧光强度的测定条件研究 [ 05-12-18 15:01:00 ] 作者：Yu Nanshen 编辑：studa9ngns 【摘要】目的本文对应用激光扫描共聚焦显微镜进行荧光强度的测定条件做了详细的分析。方法选择和设置激光扫描共聚焦显微镜的各参数，对用间接免疫荧光法检测改性后的材料表面对人牙龈成纤维细胞分泌细胞外基质纤粘连蛋白FN和I型胶原的影响进行荧光强度的定量。结果细胞在材料表面接种后FN的荧光染色强度在四组材料之间差异无显著性，说明材料表面化学成分的改变对FN的形成没有明显影响。但四组材料对I型胶原分泌的影响有差异。结论选择和设置适合的激光扫描共聚焦显微镜中荧光强度的测定条件，可以真实有效的反映实验的结果。 关键词激光扫描共聚焦显微镜荧光强度 The research on determine condition of fluorescence intensity in confocal laser scanning microscopy 【Abstract】 Objective To explore the conditions under which fluorescence intensity is determined in confocal laser scanning microscopy.Methods The parameters of confocal laser scanning microscopy were set and the effects of these modifications on the response of the fibro-conglutination albumen and type I collage n of human gingival fibrobˉlasts on indirect immunityfluorescence were observed，and the fluorescence intensity of the effects was measured.Reˉsults After the cells grafted on the material surface，the fluorescence dye intensity of the fibro-conglutination albuˉmen had no notable differ ence in materials of the four groups，the alter of the chemistry component of the material surˉface had no notable influence on the formation of the fibro-conglutination albumen.But the effects of the type I collaˉgen were different in materials of the four groups.Conclusion Setting appropriate conditions for the determination of fluorescence intensity in confocal laser scanning microscopy is important in the analysis of the true results of experiˉment.Key words confocal laser scanning microscopy fluorescence intensity

显微镜测微尺标准操作规程

山西维康堂中药饮片有限公司 题目：显微镜测微尺标准操作规程文件编号：SOP-ZL-006-01 制订人：审核人：批准人： 起草日期：审核日期：批准日期： 编制依据：《中国药典(2010版)》一部 颁发部门：质量部制作备份：2 分发部门：质量部实施日期： 1.目的：建立显微测微尺标准操作规程，确保显微镜测微尺操作符合规定要求。 2.范围：本标准适用于显微镜测微尺使用的管理。 3.职责： 3.1质量部QC负责该设备的日常使用和维护。 3.2 质量部QA负责监督检查本标准的实施情况。 4.内容： 4.1目的 使用目镜测微尺和镜台测微尺在显微镜下观察目标物的细胞和后含物，测量其直径、长短。 4.2 原理 （1）目镜测微尺：是一块圆形玻片，在玻片中央把Nmm长度刻成N×10等分。根据需要可以选用C-2，C-3，C-4，C-5，C-6 ，C-7型号。 （2）镜台测微尺：是中央部分刻有等分线的载玻片，将1mm等分为100格，每格长10μm，专门校正目镜测微尺。在镜台测微尺上得到的读数就是目标物细胞的真实大小。本实验室用C-1型号。 4.3操作步骤 （1）目镜测微尺的校正 将目镜测微尺装入目镜筒内的隔板上，使刻度朝下（字体呈正面）。把镜台测微尺置于载物台

上，使刻度朝上，并对准光源。先用低倍镜找到镜台测微尺的刻度，改用高倍镜观察，当看清镜台测微尺的刻度后，转动目镜，使目镜测微尺与镜台测微尺的刻度平行，移动推动器，使目镜测微尺的“0”点与镜台测微尺的某一刻度重合，然后，仔细寻找两尺第2个完全重合的刻度。计数两重合刻度之间目镜测微尺的格数和镜台测微尺的格数。 （2）计算公式 因为镜台测微尺刻度每格长10μm，所以由（1）公式计算出所校正的目镜测微尺每格所代表的长度。 镜台测微尺格数×10 目镜测微尺的每格长度（μm）= （1） 目镜测微尺格数 例如：目镜测微尺20小格等于镜台测微尺3小格，镜台测微尺每格10μm，则3小格的宽度为3×10＝30μm，那么，相应地在目镜测微尺上每小格大小为： 3×10 = 1.5μm 20 (3) 注意事项 （3.1）目标物的测量重复4次，取平均值； （3.2）先低倍再高倍； （3.3）重叠线格数越多误差越小； （3.4）当更换不同放大倍数的目镜或物镜时，必须校正目镜测微尺每一格所代表的长度。 (4) 目标物大小的测定 取下镜台测微尺，将目标物制片置于载物台上，先在低倍镜和高倍镜下找到目的物。然后在高倍镜下用目镜测微尺测量标本的长和直径。 测定目标物时，测量10个。用最大和最小的数值来表示目标物大小的范围。 4.4实验结果

显微镜的操作规程

1、目的：制定显微镜的操作规程，使检验人员正确使用显微镜。 2、适用范围：适用于显微镜的操作。 3、责任人：检测员。 4、正文： 4.1.仪器调整 4.1.1.将亮度调节轮调至最小，并关上开关。 4.1.2 将电源插头插入外接电源插座（插入前应检查外接电源电压与仪器所需输入电压是否一致）。 4.1.3 开启开关，拨动亮度调节轮至适当位置。 4.1.4 转动物镜转换器，将4×物镜置入光路中。 4.1.5 转动聚光镜升降手轮，使聚光镜上升至定位位置。 4.1.6 将标本置于载物台上，用片夹将其固定，利用载物台纵横移动手轮，将标本欲观察部分移入可观察的光路中。 4.1.7 拨动光栏拨杆，将孔径光栏升至中间位置。 4.1.8 用右眼观察，转动粗手轮使载物台缓慢上升至标本轮廓可见，再用微调手轮精细调焦到标本物象清晰。 4.1.9 视度调节，通常人的左右眼视度不完全一致，显微观察时应进行视度补偿。此时用左眼观察，并转动左目镜筒上的视度调节圈，使之成像清晰。 4.1.10 瞳距调节，双手握住双目外壳转动，使两目镜出瞳中心距离适合您的两眼瞳距（使两眼观察图像重叠合一为止）。 4.1.11 根据需要，选择10×, 40×, 100×等物镜后通过微调，对物体进行精调焦直至清晰。 注意：使用高倍物镜时，标本盖玻片厚度应为0.17±0.01mm，否则会影响图像的清晰度。 4.2 物像衬度调整：一般情况下，目镜视场中像的衬度依赖于标本物体本身的衬度，然而对于同一标本物体，合理地调整光源亮度，孔径光栏大小，会得到良好的物像衬度。所以不应只靠关小孔径光栏来降低视场中的亮度，当取下目镜向镜筒内观察时可看见孔径光栏像，调整孔径光栏，使其像充满物镜后光孔的70%-80%，通常效果会比较好。

Zeiss 激光扫描共聚焦显微镜 操作手册

Zeiss 激光扫描共聚焦显微镜操作手册 目录: 1 系统得组成 系统组成及光路示意图 实物照片说明 2 系统得使用 2、1 开机顺序 2、2 软件得快速使用说明 2、3 显微镜得触摸屏控制 2、4 关机顺序 3 系统得维护 1 系统得组成 激光扫描共聚焦显微镜系统主要由:电动荧光显微镜、扫描检测单元、激光器、电脑工作站及各相关附件组成。 系统组成及光路示意图: 电脑工作站 激光器 电动荧光显微镜扫描检测单元 实物照片说明: 电动荧光显微镜 扫描检测单元 CO2 培养系统控制器 激光器 电脑工作站 2 系统得使用 2、1 开机顺序 (1)打开稳压电源(绿色按钮) 等待2 分钟(电压稳定)后,再开其它开关 (2)主开关[ MAIN SWITCH ]“ON” 电脑系统[ SYSTEMS/PC ]“ON” 扫描硬件系统[ PONENTS ]“ON” (3)打开[ 电动显微镜开关] 打开[ 荧光灯开关] (注:具有5 档光强调节旋钮) (4)Ar 离子激光器主开关“ON” 顺时针旋转钥匙至“—” 预热等待约15分钟, 将激光器[ 扳钮] 由“Standby”扳至 “Laser run”状态,即可正常使用 (5)打开[ 电脑开关],进入操作系统

注:键盘上也具有[ 电脑开关] 2、2 软件得快速使用说明 (1)电脑开机进入操作系统界面后,双击桌面共聚焦软件ZEN 图标 (2)进入ZEN 界面,弹出对话框: “Start System”——初始化整个系统,用于激光扫描取图、 分析等。 “Image Processing”——不启动共聚焦扫描硬件,用于已 存图像数据得处理、分析。 (3)软件界面: 1 功能界面切换:扫描取图(Acquisition)、图像处理(Processing)、维护(Maintain) (注:Maintain仅供Zeiss专业工程师使用) 2 动作按钮; 3 工具组(多维扫描控制); 4 工具详细界面; 5 状态栏; 6 视窗切换按钮; 7 图像切换按钮;8 图像浏览/预扫描窗口;9 文档浏览/处理区域;10 视窗中图像处理模块 动作按钮: Single ——扫描单张图片、并在图像预览窗口显示。 Start ——开始扫描单张图片或一个实验流程(1组图片,如XYZ、XYT 等)。 Stop ——暂停/结束扫描。 New ——建立一个新图像扫描窗口/文档。 激光连接状况检查 眼睛观察/相机/共聚焦LSM 光路切换(ZEN软件界面右上角): Ocular ——通过观察筒用眼睛观察。(激光安全保护装置自动阻断激光、保护眼睛。) Camera ——光路切换至相机。 LSM ——共聚焦扫描成像光路。 显微镜设置: “Ocular”——> “Light Path”——> 点击物镜图标,选择物镜——> 样品聚焦。 透射光控制(Transmitted Light Control) 反射光光闸控制(Reflected Light Shutter) 荧光激发块选择(Reflector) 共聚焦LSM 扫描设置 点击“LSM”(ZEN软件界面右上角),系统切换至共聚焦扫描光路: 光路设置: Smart Setup ——自动预设光路 选取“荧光探针”、“颜色”、扫描方法, 应用“Apply”。 (注:Fastest 为最快速扫描,多条激光谱线同时扫 描。Best signal 为最佳信号扫描,多条激光谱线顺 序扫描。Best promise 为兼顾速度与信号得折

激光共聚焦显微镜技术1讲解

激光共聚焦显微镜技术 The techniques and applications of Confocal Laser Scanning Microscopy 激光共聚焦显微镜(LSCM)的发展简史 1957年，Marvin Minsky提出了共聚焦显微镜技术的某些基本原理，获得了美国的专利。1978年，阿姆斯特丹大学的G.J.Brakenhoff首次展示了改善了分辨率的共焦显微镜。 1985年，Wijnaendtsvan Resandt推出了第一台对荧光标记的材料进行光切的共焦显微镜 激光共聚焦显微镜(LSCM)的发展简史 ?80年代末，各家公司都推出了商品化的共焦显微镜,英国的Bio-Rad公司的MRC系列，德国Leica公司的TCS系列，Zeiss公司的LSM系列等。 ?近二十年来，从滤片型到光谱型，人们对共焦高分辨率，采集图像快速，技术的改进及应用开发不断进行，出现了很多新的技术。如双光子，FCS,FLIM ,STED等。 共焦显微镜的优点 人眼分辨率：0.2mm 光学显微镜分辨率：0.25μm 电子显微镜分辨率：0.2nm 共焦显微镜分辨率：μm 共焦显微镜的优点 ?电子显微镜的缺陷： 1.只能观察固定样品 2.样品制备过程（固定、包埋、切片）造成的假象 ?荧光显微镜的缺陷: 1.可以观察活细胞或组织，但细胞或组织内结构高度重叠。 2.荧光具有强散射性，造成图像实际清晰度的大大下降。 3.荧光漂白很快，使荧光图像的拍照有困难。 4.如果荧光滤片选配不当，多荧光标记样品图像的采集很困难，且很难抑制光谱交叉。 共焦显微镜的优点 ?共焦显微镜与传统显微镜的区别 1.抑制图像的模糊，获得清晰的图像 激光扫描共焦显微镜技术 ?共焦显微镜与传统显微镜的区别

光学显微镜标准操作规程

光学显微镜标准操作规程 1 目的 规范光学显微镜标准操作规程，确保光学显微镜正确使用。 2 授权操作人员 经培训并通过考核的微生物实验室工作人员。 3 原理 当被观察物体置于镜前的焦点稍远处时，物体反射的光线经物镜放大后成一倒立实像位于目镜前焦点附近，再经目镜放大呈倒立虚像位于观察者的明视距离（约250mm）处。 4 工作环境 相对湿度：10% ~ 85%；运行温度：15 ~ 30℃。 5 操作程序 5.1 准备：将光学显微镜放置在采光好的实验台上，避免振动。向上转动粗调螺旋至一定高度后，将载物片放于载物台上。 5.2 调焦与低倍镜观察：将10×低倍物镜对准镜筒，转动粗调螺旋使物镜下降到快接触标本处后，选择平面反光镜的角度，调整聚光器的上下高度和光栅大小，使目视亮度适宜，再用细调螺旋上下调节焦点，使物像清晰。 5.3 高倍镜观察：转换40×高倍镜对准镜筒，一般不需重新调焦，仅调节细螺旋即可看到清晰物像。 5.4 油镜观察：于革兰氏染色处滴加香柏油一小滴，将玻片放在载物台上。使油镜头（100×）对准镜筒，转动粗调螺旋使之降至与玻

片轻轻接触。然后升高聚光镜使其与载物台平齐，将光栅放至最大，选择凹面反光镜调节角度，使射入光线最强。再转动粗调螺旋使物镜上升，待见到标本中物像后，调节细调螺旋使物像清晰，对标本进行顺序观察。 5.5 收镜：显微镜使用完毕，取下载物片，用擦镜纸将油镜头揩干净（必要是可滴一滴清洁液于擦镜纸上）。用绸布擦拭镜身，将物镜转成“八”字形，镜筒、聚光器下降至最低处，反光镜放水平位，以右手握镜臂，左手托镜座，轻轻放入显微镜箱内。 6 维护及保养 光学系统清洁，一般情况下可用洗耳球吹气、小毛刷刷除仪器表面的灰尘。当光学系统有污染时，可用擦镜纸蘸清洁液擦拭，如被尿、便等污染时可用棉签蘸1%氨水擦拭污染区。 7 应急处理 出现不能解决的故障，应及时联系维修人员并通知微生物负责人。 8 注意事项 8.1 要培养良好的操作习惯，使用螺旋时要注意，当对焦时以转动粗调螺旋为主，尽量少用细调螺旋，以延长机械系统的寿命。在转换高倍镜，特别是油镜观察时，切记粗调螺旋只能将镜头上移而不能下移，以免压碎载物片，碰坏镜头。 8.2 显微镜存放的环境条件应防震、防潮、防尘、防日晒、防温差过大。

显微鉴别标准操作规程

显微鉴别标准操作规程 中药材、中药成品 1检验依据： 《中华人民共和国药典》2010年版（一部） 2定义： 通常是借助显微镜，应用植物细胞、组织学和矿物晶体光学等知识鉴别中药材或中成药的一种方法， 3检验操作方法(临时制片法) 3.1仪器和用具 3.1.1仪器 生物光学显微镜、显微描绘器、滑走切片机或徒手圆筒生物切片器、镜台测微尺、离心机。 3.1.2用具 放大镜、刀片、解剖刀、镊子（包括粗镊及眼科弯镊与直镊）、剪（眼科剪与手术剪）、解剖针。载玻片、盖玻片吸湿器（即玻璃干燥器改装蒸馏水加微量苯酚，潮气润湿药材样品用）培养皿或小烧杯（放切片用，切片后的处理均可在其中进行）、酒精灯、铁三角架、石棉网、滴瓶、试管、试管架、滴管、玻璃棒（粗与细）、乳钵、量筒毛笔（从刀上刷取切片用）铅笔（H B、4H、6H绘图用）带盖搪瓷盘（装切片标本用）纱布、吸水纸（滤纸）、火柴等。 3.2试液 3.2.1水合氯醛试液： 取水合氯醛50g，加水15ml与甘油10ml使溶解，即得。

此液为透化剂，可使干缩的细胞壁膨胀而透明，并能溶解淀粉粒、树脂、蛋白质及挥发油等。 3.2.2甘油醋酸试液（xx液）： 取甘油、冰醋酸与水各等份，混合即得。 此液专用于观察淀粉形态，可使淀粉不膨胀变形，便于测量其大小。 3.2.3甘油-乙醇溶液： 取甘油1份，50%乙醇1份，混合即得。 此液为封藏液，用于保存植物材料及临时切片，有软化组织的作用。 3.2.4xxⅢ试液取xxⅢ 0.01g，加90%乙醇5ml溶解后，加甘油5ml，摇匀即得。本液应置棕色玻璃瓶内保存，在2个月内应用。 此液可使木栓化、角质化细胞壁及脂肪油、挥发油、树脂等染成红色或淡红色。 3.2.5钌红试液： 取10%醋酸钠溶液1～2ml，加钌红适量使呈酒红色即得。本液应临用新制。此液可使粘液染成红色。 3.2.6间苯三酚试液： 取间苯三酚1g，加90%乙醇100ml使溶解，滤过即得。应置棕色玻璃瓶内，在暗处保存。 此液与浓盐酸合用，可使木化细胞壁染成红色或紫红色。 3.2.7碘试液： 取碘化钾

正置显微镜操作规程

正置显微镜操作规程 1 目的 1.1 规范正置显微镜的使用和维护操作程序和方法，确保检验观察的正确性。 2 范围 2.1 适用于本中心正置显微镜的使用和维护。 3 职责 3.1 设备使用人有责任按本规程进行正确的操作和维护。 4 程序说明 4.1 操作前准备 4.1.1首先根据需要安装好目镜，物镜和光源部分，将准备好的载玻片置于载物台上。 4.1.2旋转物镜转换器，将物镜置于光路中，先自低倍开始，根据被观察物的特征，依次增高显微镜倍数。 4.1.3每次观察前，先将物镜调至与载玻最近距离处，再从目镜注视视野情况，缓慢由下向上凋节升降螺旋至视野内出现物像后，再调节细螺旋，至物像清晰。 4.2 低倍镜观察 4.2.1取镜和放置：显微镜平时存放在台面或箱中，使用时，右手紧握镜臂，左手托住镜座，将显微镜放在自己左肩前方的实验台上，镜座后端距桌边1-2寸为宜，便于坐着操作。 4.2.2对光：用拇指和中指移动旋转器（切忌手持物镜移动），使低倍镜对准镜台的通光孔。打开光圈，上升集光器，直到视野内的光线均匀明亮为止。 4.2.3放置玻片标本：取一玻片标本放在镜台上，一定使有盖玻片的一面朝上，切不可放反，用推片器弹簧夹夹住，然后旋转推片器螺旋，将所要观察的部位推到通光孔的正中。 4.2.4调节焦距：以左手按逆时针方向转动粗调节器，使镜台缓慢的上升至物镜

距标本片约5毫米处，应注意在上升镜台时，切勿在目镜上观察。一定要从右侧看着镜台上升，以免上升过多，造成镜头或标本片的损坏。左手顺时针方向缓慢转动粗调节器，使镜台缓慢下降，直到视野中出现清晰的物象为止。如果物象不在视野中心，可调节推片器将其调到中心（注意移动玻片的方向与视野物象移动的方向是相反的）。如果视野内的亮度不合适，可通过升降集光器的位置或开闭光圈的大小来调节，如果在调节焦距时，镜台下降已超过工作距离（>5. 40毫米）而未见到物象，说明此次操作失败，则应重新操作，切不可心急而盲目的上升镜台。 4.3 高倍镜观察 4.3.1选好目标：一定要先在低倍镜下把需进一步观察的部位调到中心，同时把物象调节到最清晰的程度才能进行高倍镜的观察。 4.2.2转动转化器，调换上高倍镜头，转换高倍镜时转动速度要慢，并从侧面进行观察（防止高倍镜头碰撞玻片），如高倍镜头碰到玻片，说明低倍镜的焦距没有调好，应重新操作。 4.2.3调节焦距：转换好高倍镜后，一般能见到一个不太清楚的物象，可将细调节器的螺旋逆时针移动约0. 5-1圈，即可获得清晰的物象。如果视野的亮度不合适，可用集光器和光圈加以调节，如果需要更换玻片标本时．必须顺时针转动粗调节器使镜台下降，方可取下玻片标本。 4.4 油镜观察 4.4.1在使用油镜之前，必须先经低、高倍镜观察，然后将需进一步放大的部分移到视野的中心。 4.4.2将集光器上升到最高位置，光圈开到最大。 4.4.3转动转换器，使高倍镜头离开通光孔，在需观察部位的玻片上滴加一滴香柏油，然后慢慢转动油镜，在转换油镜时，从侧面水平注视镜头与玻片的距离，使镜头浸入油中而又不以压破载玻片为宜。 4.4.4慢慢转动细调节器至物象清晰为止。如果不出现物象或者目标不理想要重找，在加油区之外重找时，应按照低倍→高倍→油镜程序操作；在加油区内重找应按照低倍→油镜程序操作，不得用高倍镜，以免由沾污镜头。 4.4.5油镜使用完毕，先用擦镜纸沾少许二甲苯将镜头上和标本上的香柏油擦去，

荧光显微镜技术参数

荧光显微镜技术参数 1．工作条件及用途 适于在气温为摄氏-40℃～＋50℃的环境条件下运输和贮存，在电源220V （ 10%）/50Hz、气温摄氏-5℃～40℃和相对湿度85%的环境条件下运行。 可作切片的明场（BF）、荧光（FL）、偏光（PO）观察。 2．主要技术指标 2.1 研究级正置显微镜 2.1.1 研究级正置显微镜，可作明场、偏光和荧光的观察 2.1.2 光学系统：无限远校正光学系统，齐焦距离必须为国际标准45mm 2.1.3 调焦：载物台垂直运动方式距离不小于25mm，带聚焦粗调限位器，粗调旋钮扭矩可调，最小微调刻度单位≤1微米 2.1.4 观察镜筒：宽场三目观察筒，倾角为30° *2.1.5 照明装置：内置透射光柯勒照明器，12V100W卤素灯，光强预调开关，内置式滤色镜（日光平衡滤色片、ND25、ND6），左右手均可操作。 *2.1.6 物镜：万能平场半复消色差物镜 4X（N.A≥ 0.13，W.D≥17） 10X（N.A≥0.3，W.D≥10） 20X（N.A≥0.5，W.D≥2.1 spring） 40X（N.A≥0.75，W.D≥0.51 spring） 100X（N.A≥1.30，W.D≥0.2 spring,oil） 2.1.7 载物台：右手油式载物台，带有旋转装置和扭矩调节装置，高抗磨损性陶瓷覆盖层载物台。 2.1.8 目镜：10X宽视野目镜，带屈光度校准 2.1.9 物镜转换器：六孔物镜转换器 2.1.10 聚光镜：摇摆式聚光镜，N.A.≥0.9 2.1.11 具备ECO环保节能感应开关，操作人员离开30分钟后自动关闭透射光源。 2.2 荧光照明系统 2.2.1 荧光照明器：八孔荧光照明器，配置ND25、ND6、ND1.5中灰滤色片，

显微镜标准操作规程

显微镜标准操作规程 目的：制订显微镜的标准操作规程。 适用范围：各类检定菌及物料的显微镜鉴别。 责任：显微镜操作人员对本规程实施负责。 程序： 1.显微镜主要包括物镜、目镜、聚光镜、反射镜四部分。还包括照明光源、滤光片、载玻 片和盖玻片。 2.采光 2.1用低倍镜对准栽物台中央之圆孔。 2.2打开光圆对好光源（不能直接对太阳光）。 3.观察照明是否良好，视野是否均匀。 4.调节焦距：从侧面注视物镜头，将大螺旋把镜筒转下，至镜头将接近标本玻片为止（注意 两者不能相碰，避免损坏），再从目镜观察，同时将大螺旋把镜筒慢慢转上，至视野内可见物象为止，再用小螺旋调节光线，以供视野内可见物象为止，再用小螺旋调节至物象清楚。 5.调节光线：使用聚镜或光圈调节光线，以供视野适宜光度。 6.观察步骤 6.1先用低倍镜观察全景，再转高倍镜进行局部观察。 6.2从低倍镜转到高倍镜时，必须在低倍镜下把目视移到视野中心，然后把镜筒转上，再转 动物镜转盘，将高倍镜对准标本，然后调节焦距。 6.3镜检时，须两眼同时睁开、用左眼观察，以便右眼以绘图或记录。 6.4使用完毕，进行使用登记。 7.注意事项 7.1拿镜时必须用右手紧握镜臂，左手平托镜座，注意放平放稳。 7.2使用时必须按步骤小心缓慢转动。 7.3使用高倍镜观察液体标本时，一定要加盖玻片，否则，不仅清晰度下降，而且试液会浸 入高倍镜的镜头内，使镜片受到污染和腐蚀。 7.4显微镜应在清洁、干燥、无震动、无腐蚀性气体存在的工作室操作。

7.5要保持清洁，勿使尘埃、污物、手指等接触光学部分。 7.6镜内零件不得任意拆出，或与他镜调换。 7.7用完后，把镜臂复原，物镜转成人字形，接近载物台。 7.8擦拭光学系统，必须用镜头纸，不准用毛巾、手帕、衣服擦拭，更严禁用手擦拭。乙醚、 酒精不可用得过多，以免脱胶。镜片表面有一层紫兰色的透光膜，不要误作污物来擦拭。

激光共聚焦显微镜操作规程

激光共聚焦显微镜操作规程 一、准备工作 a)打开计算机。依次打开激光器电源、钥匙开关。多线氩离子(458 nm, 488 nm, 514 nm) ON、氦氖绿(543 nm) ON、 氦氖红(633 nm) ON。打开汞灯电源开关。 b)登陆Windows XP系统。双击快捷方式：FV10-ASW 1.1。User ID: Administrator ; Passeword: Administrator。注 意区分大小写。 二、显微镜镜下观察 １.微分干涉差观察 a)使用手控面板选择物镜。插入起偏镜。插入微分干涉滑块。 b)点击FV10-ASW软件中的图标。标本聚焦. ２.荧光观察： c)使用手控面板选择物镜。 d)打开汞灯的机械快门，拉出DIC滑块，点击FV10-ASW软件中的图标 e)使用手控面板选择荧光滤色片。标本聚焦。 ３.获取单张荧光图像 a)点击FV10-ASW软件中的按钮。 b)关闭汞灯快门，点击按钮，关闭卤素灯快门。 c)点击染料选择按钮，在染料列表中，双击用于观察的荧光染料。点击Apply按钮。 d)点击XY Repeat按钮开始扫描。调节图像。点击Stop按钮停止扫描。 e)选择AutoHV,，并选择扫描速度。 f)点击XY按钮取得一幅图像。 g)点击SeriesDone按钮，“2D View-LiveImage(x)”2D界面就出现。 h)保存该幅图像:右图像管理器中显示的图像图标，选择另存为保存该幅图像。(保存为“xml”类型是击FV10-ASW 软件专用的图像格式。) ４.获得单张（荧光+微分干涉）图像 a)点击FV10-ASW软件中的按钮，关闭汞灯快门。点击按钮，关闭卤素灯快门。 b)点击染料选择按钮，在染料列表中，双击用于观察的荧光染料。点击Apply按钮。 c)选择TD1。 d)点击XY Repeat按钮开始扫描。调节绿色(FITC)图像和微分干涉差的图像。点击Stop按钮停止扫描。 e)选择AutoHV, 并选择扫描速度。 f)点击XY按钮取得一幅图像。 g)点击SeriesDone按钮, “2D View-LiveImage(x)”2D界面就出现。 h)保存该幅图像。 ５.获取3D图像 例: 绿色荧光(FITC)和红色荧光(Rhodamine)双标（这里介绍线序列扫描取图的过程.）

显微镜操作规程

为了保证使用过程中对设备操作的规范性,为操作人员提供一份标准的操作方法,避免因人为操作不当造成设备损坏,以保证使用的正常进行和设备的使用寿命。 2.范围： 此标准操作程序适用于XSP-1C显微镜。 3.职责： 实验室人员按此文件正确的使用和维护XSP-1C显微镜。 4.内容： 4.1. 操作前准备： 4.1.1. 将显微镜平稳的放至在实验桌上。 4.1.2.打开开关，调节光源，将10*平场目镜转入通光孔，将聚光器上的虹彩光圈打 开到最大位置，用左眼观察目镜中视野的亮度，转动反光镜，使视野的光照达 到最明亮最均匀为止。光线较强时，用平面反光镜；光线较弱时，用凹面反光 镜。 4.1.3. 用擦镜纸将10*平场目镜、物镜(10*/0.25、100*1.25消色差物镜，半平场物 镜40*/0.65) 擦拭干净。 4.2．操作程序 4.2.1. 低倍镜观察： A. 将标本片放置载物台上，用标本夹夹住；转动横向、纵向移动手轮，使被观察 的标本处在物镜正下方。 B. 转动粗动手轮，使载物台降至最低位置，旋上所需物镜。 C. 把10*平场目镜转入光路，插入目镜，并降聚光镜升至最高位置。 D. 转动粗调节旋钮，慢慢升起载物台，直至物像出现。 E. 再用细调节旋钮使物像清晰为止。 4.2.2. 高倍镜观察： A. 用半平场物镜40*/0.65观察： a. 先按步骤2使物像清晰，转换高倍物镜。 b. 从目镜观察，调节光源亮度。 c. 缓慢调节粗调节旋钮，使载物台上升，直至物像出现。 d. 再用细调节旋钮使物像清晰为止。 B. 用100*1.25消色差物镜观察（油镜）： a. 先按步骤2使物像清晰，转出物镜。 b. 在玻片标本的物检部位滴上一滴香柏油。 c. 从侧面注视，用粗调节旋钮将载物台缓缓的上升，使100*1.25消色差物镜 浸入香柏油，使镜头几乎与标本接触。 d. 重新调节光线亮度：从目镜内观察，放大视场光阑及聚光器上的虹彩光圈， 上调聚光器至顶位，使光线充分照明。

OLYMPUS显微镜标准操作规程

OLYMPUS显微镜标准操作规程 1.目的 规范尼康显微镜使用操作规程，保证显微镜的正常使用。 2.授权操作人 经培训并通过考核的微生物实验室工作人员。 3.适用范围 微生物实验室尼康显微镜 4.工作环境 相对湿度：85%；运行温度：25±10℃。 5.操作程序 5.1将开关由“O”拨至“I”，旋转亮度调节钮调节亮度。 5.2瞳距调节调节目镜筒的展幅，使左右眼的视场重叠合 一。 5.3将标本放在载物台上。拨开弹片，将标本固定住。 5.4旋转物镜转换器，选择所需放大倍率的物镜移入光路。 转动粗调，当标本接近物镜后旋转微调对焦。 5.5油镜观察时，在标本上加1滴油，慢转物镜转换器，将 油镜移入光路。如果浸油中含有气泡，应除去。 5.6油镜观察完毕，应用去油剂清洁干净，旋转物镜转换器 使镜头离开视野后放低载物台。 5.7关闭开关，切断电源。待足够冷却，用防尘罩将显微镜

罩住。 6.质量控制（不需要） 7.维护保养 7.1每日保养使用完毕，用去油剂清洁镜头。 7.2每月保养每月对聚光镜进行清洁保养。松开聚光镜安 全钮，取出聚光镜，用湿布轻轻擦拭。顽固性污垢可用中性洗涤剂擦拭。 8.校正 8.1例行校正至少每年一次。 8.2故障校正维修后，需要校正。 9.应急处理 9.1出现不能自行解决的故障应及时联系工程师维修处 理，并告知微生物实验室负责人。 9.2出现影响检验质量的故障，应立即停止使用该显微镜， 转由其他显微镜代替。 10.注意事项 10.1搬运显微镜时，应抓住显微镜后上部并托住前下端。 10.2显微镜喷漆部件、塑料部件不能用有机溶剂如酒精、 乙醚等清洁。

参考文献 [1] 尼康显微镜配套说明书 [2] 中国合格评定国家认可委员会．CNAS-CL31：2007医学实验室质量和能力认可准则在临床微生物学检验领域的应用说明.2007 [3] 中国合格评定国家认可委员会。CNAS-CL02：2008医学实验室质量和能力认可准则（ISO15189：2007）.2008 编写人：AAA BBB 操作人：本室操作人员批准人：

激光共聚焦显微镜原理

激光共聚焦显微镜原理 激光共聚焦扫描显微技术（Confocal laser scanning microscopy）是一种高分辨率的显微成像技术。普通的荧光光学显微镜在对较厚的标本（例如细胞）进行观察时，来自观察点邻近区域的荧光会对结构的分辨率形成较大的干扰。共聚焦显微技术的关键点在于，每次只对空间上的一个点（焦点）进行成像，再通过计算机控制的一点一点的扫描形成标本的二维或者三维图象。在此过程中，来自焦点以外的光信号不会对图像形成干扰，从而大大提高了显微图象的清晰度和细节分辨能力。 图1. 共聚焦显微镜简化原理图 图1是一般共聚焦显微镜的工作原理示意图。用于激发荧光的激光束(Laser)透过入射小孔(light source pinhole)被二向色镜(Dichroic mirror)反射，通过显微物镜(Objective lens)汇聚后入射于待观察的标本(specimen)内部焦点(focal point)处。激光照射所产生的荧光(fluorescence light)和少量反射激光一起，被物镜重新收集后送往二向色镜。其中携带图像信息的荧光由于波长比较长，直接通过二向色镜并透过出射小孔(Detection pinhole)到达光电探测器(Detector)（通常是光电倍增管（PMT）或是雪崩光电二极管（APD）），变成电信号后送入计算机。而由于二向色镜的分光作用，残余的激光则被二向色镜反射，不会被探测到。

图2. 探测针孔的作用示意图 图2解释了出射小孔所起到的作用：只有焦平面上的点所发出的光才能透过出射小孔；焦平面以外的点所发出的光线在出射小孔平面是离焦的，绝大部分无法通过中心的小孔。因此，焦平面上的观察目标点呈现亮色，而非观察点则作为背景呈现黑色，反差增加，图像清晰。在成像过程中，出射小孔的位置始终与显微物镜的焦点(focal point)是一一对应的关系（共轭conjugate）,因而被称为共聚焦（con-focal）显微技术。共聚焦显微技术是由美国科学家马文?闵斯基(Marvin Minsky)发明的；他于1957年就为该技术申请了专利。但是直到八十年代后期，由于激光研究的长足进步，才使得激光共聚焦扫描显微技术（CLSM）成为了一种成熟的技术。 图3. 激光共聚焦显微镜原理框图 当今的激光共聚焦显微镜已经发展为一种结合了激光技术，显微光学，自动控制和图像处理等多种尖端科研成果的高技术工具。是现代微观研究领域不可缺少的利器之一。Nikon秉承“信赖与创造”的一贯企业理念，正在为业界提供世界领先水平的共聚焦显微镜系统产品。

手术显微镜1的标准操作规程

手术显微镜1的标准操作规程（SOP） 3 页数：SOP编号：SOP-YK-YQGL-023-1 批准人：审核人：制定人：（签名、日期）（签名、日期）（签名、日期） 颁发日期：生效日期：修订登记：

审查登记： 。仪器有限公司Leica M841仪器型号：Leica 用途一、是眼科内、外眼手术的必备工具。组成二、 1.光学镜头（三光路镜头）控制转动显微镜支架2. 3.控制单元面板摄像导航装置4. 5.全视网膜镜装置 6.眼底激光自动保护镜装置 7.脚部控制开关 8.显微镜底座 三、操作方法

1.除掉防尘罩，打开控制转动显微镜支架底座上的固定按钮。 2.将显微镜推倒手术床旁边，锁定控制转动显微镜支架底座上的固定按钮，插上电源插头，打开控制单元面板侧面上的电源开关，显微镜自检正常后开机，打开显微镜镜头上方架的安全锁，使显微镜能上转动。 3.让病人平躺在手术床上，打开显微镜支架的左右臂调节钮，将光源调到术眼上，术者及助手扭动各自的双目显微镜头旁边的瞳距调节钮，调节瞳距。 4.术中，术者用脚部控制开关控制显微镜的亮度及位置（前后、左右、上下）至术野清晰。 如需摄像，将手术记录系统的数据线接在显微镜摄像导航5. 装置的录像转换接口处，可在显示屏上观看手术全过程，并刻录保存。 6.术闭，关闭电源，打开控制转动显微镜支架底座上的固定按钮，将显微镜退回原位，套上防尘罩。 四、维护与清洁 1.维护 1.1显微镜头注意防尘，每次使用后要套上防尘罩。 1.2保持使用环境干燥。 1.3保持相对无菌，只在手术室中使用。 1.4用闭要锁住显微镜支架底座上的固定按钮。。 1.5不能随意拨动显微镜杠杆臂上的平衡砣。

偏光显微镜标准操作规程

编订目的：建立59XA-2型偏光显微镜使用、维护、保养标准操作规程，供化验员标准操作。 应用范围：适用于59XA-2型偏光显微镜。 责任范围：化验员 内 容： 1 仪器结构：如下图： 2 操作方法 2.1 灯光照明 2.1.1 接通电源，打开电源开关。 2.1.2 调节亮度旋钮，直到获得所需亮度。一般情况，不要将照明调至最强状态，否则，灯泡满符合下工作寿命将大大缩短。 2.2 调焦 2.2.1 观察试样时，一般先用低倍物镜观察，先调节粗动手轮是载物台上升让试样接近物镜，然后边观察边使试样下降直到观察到图象，最后用微调手轮精细调焦至物象清晰为止。 聚光镜中 心调节螺钉 目镜 双目观察镜筒 勃氏镜 补偿器插口 孔径光栏 调节手柄 起偏镜调 节刻度圈 粗动调焦手轮 微动调焦手轮 检偏镜 推拉手柄 物镜 四孔转换器 旋转载物台 集光镜 亮度调节旋钮

2.2.2 转换至其他倍率物镜，基本可达到齐焦。 2.3 调整载物台和物镜中心重合：对试样调焦清晰，在视域内打一明显目标点，使之位于目镜了线交点上，旋转载物台，若物镜光轴与载物台旋转中心有偏移，目标点将绕某一中心S（即物台旋转中心）旋转，其轨迹为一圆圈，此时将目标 点转至0 1点，调节物镜中心，使0 1 点移至S点并重合，再转动工作台，观察两 点是否重合，如仍有偏移，重复调整。 2.4 孔径光阑中心调节：取下目镜，观察后物镜后焦面亮圆，缓缓开缩孔径光阑，观察光阑与亮圆的同心度，如有偏移，可调节聚光镜中心调节螺钉而达到两者的重合。 2.5 正交偏光观察 2.5.2调好像后，由于起偏镜一直处于光路中，此时为单偏光状态，再推入检偏镜，使其刻度处于“0”位，起偏镜刻度也必须对准“0”位，此时，两偏振镜处于正交，即检偏镜偏振方向为南北向，起偏镜为东西向。 2.5.2 使用10X及10X以下物镜时，应将拉索镜打下，并适当下降聚光镜。2.5.3 使用25X以上物镜时，应推上拉索镜，聚光镜应上升至最高。 2.5.4 根据需要可将入石膏试试板或1/4λ云母试板或石英楔子插入补偿器插口，进行光性则定。 2.6 锥光观察：锥光观察一般使用25X以上的高倍物镜，在正交偏光状态下，推入勃氏镜并推上位索镜，调整勃氏镜中心，观察试们的锥光特性。 3 维护与保养 3.1 镜头镜面用脏后，可用脱脂棉沾乙醚、酒精混合液（混合比例7：3）轻轻擦拭，灰尘可用吹风球吹去。 3.2 机械运动部位可加少量钟表油润滑。 3.3 物镜、目镜用后装入箱盒内，各通光接口入可加盖、罩或挡灰板，或自制罩套防止灰尘。 3.4 定期检查和修理。 4 注意事项

微生物检验标准操作规程

1 目的 建立微生物限度检查的操作规程，为微生物检查人员提供正确的标准操作方法。 2 范围 适用于原辅材料、内包装材料、半成品、成品的微生物限度检查。 3 责任 QA对本规程的有效执行承担监督检查责任，QC对本规程的实施负责。 4 程序 4.1 简述: 微生物限度检查法系指检查非规定灭菌制剂及其原、辅料受到微生物 污染程度的一种检查方法，包括染菌量及控制菌的检查。螨，属于节肢动物门，蛛形纲，蜱螨目。种类繁多，分布甚广。其生活习性各异，分为自由生活和寄生生活两种类型。在土壤、池沼、江河和湖海里，动、植物体上，贮藏食品和药品中，都可能有它们的存在。药品可因其原料、生产过程或包装、运输、贮存、销售等条件不良，受到螨的污染。螨可蛀蚀损坏药品，使药品变质失效，并可直接危害人体健康或传播疾病。能引起皮炎及消化系统、泌尿系统、呼吸系统等的疾病。因此，药品特别是中成药，必须进行活螨检查。 4.2 器皿、仪器及用具。 4.2.1 玻璃器皿： 250ml锥形瓶、250ml具塞三角烧瓶、研钵（陶瓷制，直径10-12cm）、培养皿（90mm）、量筒（100ml）、试管（18×180mm）及塞、吸管（1ml分度0.01,10ml 分度0.1）、注射器(20或30ml)、注射针头、载玻片、盖玻片、 玻璃消毒缸（带盖）。 4.2.2 用具：大、小橡皮乳头（放于干净带盖的容器中，并应定期用70%-75%乙 醇溶液浸泡）,无菌衣、帽、口罩、手套灭菌，备用, 显微镜、放大镜（5-10倍）、实体显微镜、解剖针（尖端宜尖细且粗糙，否则不易挑取体表光滑的螨体）、发丝针（由一根长约10cm的小金属棒，将其一端磨成细尖，另取长约1.5cm的头发一根，以其长度的一半紧贴在金属棒的尖端上，用细线将其缠紧，然后粘上加拿大树胶或油漆，即得。适用于挑取行走缓慢且体表刚毛较多的螨体）、小毛笔（即绘图毛笔。适用于挑取活动快的螨类，笔锋宜尖细，以免螨体夹在笔毛之间）、载玻片、盖玻片、酒精灯、培养皿或小搪瓷盘（内衬黑色纸片）、扁形称量瓶（高3cm、宽6cm）。 4.2.3 仪器：匀浆仪、培养箱、鼓风干燥箱、台式灭菌器、恒温水浴锅、超净工