Ghrelin基因衍生肽Des__省略_statin主要功能及其分泌调节_耿春银

最完整的肽知识

最完整的肽知识-CAL-FENGHAI-(2020YEAR-YICAI)_JINGBIAN

最完整的肽知识 科学定义肽 肽是一种可以被人体细胞完全吸收的小分子高营养物质。具有修复细胞，营养细胞，激活细胞的高级生理功能。可全面增加人体免疫，提高体力体能。 肽是分子结构介于氨基酸和蛋白质之间的、以肽键链接而成的一类化合物，也是一段最具活性、最易吸收、生理功能性极高的营养物质。 肽的分类 1、多肽：10个以上氨基酸组成的肽，分子量段在5000～10000之间。 2、寡肽：2~9个氨基酸组成的肽. 3、小分子肽或小肽：2~4个氨基酸组成的肽，分子量段在100～180之间的。 将小分子活性多肽统称为“生物活性肽”。 肽的备制 传统法主要有：微生物发酵法、酸法、碱法、电法、人工嫁接法、基因表达法、酶解法等。 肽的应用 1、医用类多肽药物，肽类抗生素，疫苗，农用类抗菌肽，饲料小肽，日化用 化妆品，食品用大豆多肽，玉米多肽，酵母多肽，海参肽。 2、肽的功能角度来分：降压肽，抗氧化肽，降胆固醇肽，类鸦片活性肽，高F 值寡肽，食品强味肽等。 3、活性肽与营养，荷尔蒙、酵素抑制、调节免疫、抗菌、抗病毒、抗氧化有 非常紧密关系。 4、多肽大体上分为：多肽类药物和多肽类保健品。传统的多肽类药物主要是 多肽类激素，2011年对多肽类药物的开发已经发展到疾病防治的各个领域，特别是在以下各领域发展较快。 【肽的3大特征】 1、肽是人体的生命元素 人体的很多活性物质都是以肽的形式存在的，没有肽就没有活性物质 人体吸收蛋白质主要以肽的形式，而不是传统认为以氨基酸形式吸收的 食物中提供的异体蛋白质，必须分解为氨基酸和小肽的形式被吸收和细胞所利用，然后重新组建成人体自身的蛋白质 2、小肽直接作用于细胞 小肽直接介入血细胞、脑和神经细胞、肌肉细胞、生殖细胞、内分泌细胞、皮肤细胞的新陈代谢，参与细胞的生长、发育、生理功能以及分裂增殖各个环节3、小肽功能多样

降钙素基因相关肽参与痛觉调制的研究进展

降钙素基因相关肽参与痛觉调制的研究进展1 罗蓉赵晏 西安交通大学环境与疾病相关基因教育部重点实验室；西安交通大学医学院生理学与病 理生理学系, 西安 710061 E-mail: zhaoy502@https://www.wendangku.net/doc/5219179316.html, 摘要降钙素基因相关肽(calcitonin gene related peptide, CGRP)是广泛分布于神经系统的一种神经肽，其在外周及脊髓参与伤害性信息的传递及痛敏化的形成，并与P物质、兴奋性氨基酸、辣椒素1型受体、趋化因子、激活素、大麻素受体、阿片受体、神经生长因子、血管活性肠肽、5-羟色胺、糖皮质激素等生物活性物质或受体在痛觉调制过程中存在相互影响。关键词降钙素基因相关肽；痛觉调制；脊髓 降钙素基因相关肽(Calcitonin gene related peptide, CGRP) 是1983年发现的来自降钙素基因的神经肽。CGRP虽然来自降钙素基因,但其分子结构和生理作用均和降钙素不同，在甲状腺滤泡旁细胞内加工成降钙素，在神经系统和其它部位则加工成CGRP。目前已知人和大鼠CGRP都有2种类型：α- CGRP和β-CGRP. CGRP的所有种类均含有37个氨基酸残基。α- CGRP是神经组织内降钙素基因转录后经与降钙素不同的剪接而产生的肽类物质，而β-CGRP是由独立基因编码的肽类物质。二者具有相近似的生物活性，但氨基酸组成仅在第3 、22 、25 位有所不同。其中，α- CGRP主要分布于中枢神经系统，而β-CGRP则主要位于外周。 CGRP通过特异的受体发挥作用，CGRP与受体结合后，激活腺苷酸环化酶，使细胞内cAMP升高，通过第二信使cAMP的介导而发挥生物活性。CGRP是体内一种重要的生物活性肽，广泛分布于机体多个部位,对心脏、血管、肾脏、骨组织、味蕾、消化系统以及神经系统的功能有重要的调节作用。目前已知CGRP受体有四种亚型，均属于G蛋白耦联受体。CGRP及其受体均广泛分布于中枢及外周神经系统。在中枢神经系统，CGRP主要分布于杏仁核、尾核、脊髓背角和三叉神经束, 垂体、下丘脑、延髓和海马也有一定分布，脊髓中含量最高, 大脑皮层其含量则极低。脊髓中CGRP阳性纤维和终末密集分布于后角浅层，少量阳性纤维和终末散在分布于后角深层，前角内未见阳性纤维和终末。在人脑，CGRP受体高密度分布的部位有伏隔核、中央杏仁核、尾核尾部等处，中等密度分布的部位有壳核尾部、下丘脑腹侧部、丘脑中线核群等处，低密度分布的部位有皮质、动眼神经核等处。脑内CGRP 受体和CGRP分布不完全一样。在脊髓CGRP受体广泛分布于脊髓后角浅层的感觉神经元细胞膜上，初级感觉传入纤维末梢也有CGRP受体分布。 近年来研究表明CGRP在中枢和外周神经系统中的伤害性信息传递过程中起重要作用。 1本课题得到国家自然科学基金（No.30400131，30371729,）、教育部高校博士点基金（No.20040698022，20020698033）和陕西省自然科学基金（No.2004C225）资助。 - 1 -

铁蛋白结构与功能

铁蛋白结构与功能 摘要：铁元素是生物体中的半微量元素，铁元素子生物体内的平衡对生物体的健康有着很重要的作用，而作为可以调节体内铁元素平衡的铁蛋白很早就出现在学者的研究中。铁蛋白不仅直接在人体内发挥作用，也通过植物食物的铁元素积累影响着人类的健康，所以通过阅读了几篇文献后，简单概括一下目前对铁蛋白的结构和功能的研究情况。 关键词：铁蛋白结构功能 铁是生物体很重要的一种半微量元素，对生物体的健康有着极为重要的作用，铁在动物体内参与造血、运输氧气、免疫和防御等生理过程，在植物体内则参与叶绿素的形成，但是铁含量超标则会造成消化功能紊乱、生长受阻等。所以，维持生物体体内铁含量平衡至关重要。铁蛋白是生物体内的铁贮藏蛋白质，起着调节生物体铁平衡的作用。 目前，在动物、植物和微生物体内都对铁蛋白进行了大量研究[1]，除了对其基因[2]、结构和功能做了大量研究之外，也在不断探索研究铁蛋白的方法[3]、铁蛋白的新作用[4-5]以及铁蛋白的作用方法等6-7]。由于铁元素在生物体内的重要作用和植物性食物的铁含量很低，甚至在某些地区有缺铁现象的发生，为了提高植物食物中的铁含量，有学者已经开始了通过转基因技术，将豌豆铁蛋白基因专人水稻[8-9]。

虽然铁蛋白对动物和植物都很重要，但是无论是存在分布、结构和功能上，动物和植物体内的铁蛋白都不同[10]。与动物铁蛋白相比，植物铁蛋白具有两个显着的特点：首先，植物铁蛋白在其N端具有一个独特的EP 肽段；其次，植物铁蛋白只含有H型亚基，且有两种不同的H型亚基组成。 1.铁蛋白的结构 铁蛋白分子通常由24个亚基形成一个中空的球状蛋白质外壳，内径通常为7~8nm，外径为12~13nm，厚度为2~。每个球状铁蛋白分子大约有4500个三价铁原子储存在其中。每两个铁蛋白亚基反向平行形成一组，再由这十二组亚基对构成一个近似正八面体，成4-3-2重轴对称的球状分子 (图1)。每个铁蛋白亚基外形成空心的柱状(长约5nm，直径约，且由一个两两成反向平行的4个α螺旋簇 (A、B和C、D)、C末端第五个较短α螺旋(E)以及N末端的伸展肽段 (EP) 构成。B和C螺旋之间由一段含18个氨基酸的BC环连接，E螺旋位于4α螺旋簇的尾端并与之成60° 夹角 (图2)。每个铁蛋白分子形成12个二重轴通道、8个三重轴通道和6个四重轴通道，这些通道被认为是铁蛋白内部与外部离子出入铁蛋白的必经之路，起着联系铁蛋白内部空腔与外部环境的作用。

抗菌肽及基因表达体系研究进展

抗菌肽及 基因表达体系研究进展 罗振福1　李俊波2　贺建华1　范志勇1 11湖南农业大学科学技术学院 21湖南省唐人神研发中心 摘　要　抗菌肽是20世纪70年代由瑞典科学家H G Boman首次发现,其具有优良的光谱抗菌性能,无残留,不会导致耐药菌株的出现,是目前抗生素类较有潜力的替代品。早在20世纪80年代,人们就已试图通过转基因等生物工程技术改良物种或大量表达该类物质,目前已有众多表达体系和转基因动植物研究成功,并有一些抗菌肽类药物投入临床使用。 关键词　抗菌肽　基因工程　提取　表达 抗菌肽(antimicrobial peptide)是生物体用来抵制外来入侵病原体,具有抗菌作用的一类小分子蛋白质或短肽,并且在生物体内广泛存在。20世纪70年代H GBoman在用大肠杆菌诱导惜古比天蚕(Hyatophora cecropia)时分离得到世界上第1个真正意义上的抗菌肽—天蚕素(cecropin)。此后,人们相继从各种小到细菌大到高等动植物体内分离获得该类物质,其发现种类和数量也随着时间的推移而不断增加。 抗菌肽具有优良的广谱抗菌性能,对革兰阳性菌和阴性菌都表现出良好的抑菌效果,相对于抗生素具有效价高和无残留等特点,一直受到各国学者的广泛关注。随着基因工程和生物工程的发展,对于抗菌肽在体外的克隆和转载表达等研究也在积极进行中,各种转抗菌肽基因动植物及产品相继问世,对抗菌肽的大规模利用提供了一条前景广阔的道路。文章试图通过介绍抗菌肽的一些基本作用、获得方式及在基因工程方面的研究进展,以期增加对该类物质的认识,并为今后规模化利用提供参考。1　抗菌肽作用 1.1　杀菌和抗菌 抗菌肽是一种肽类抗生素,对于各种革兰阳性 收稿日期:2008-09-17 通讯作者:李俊波菌和阴性菌都具有较高的抗性,可杀灭侵入宿主体内的细菌或抑制其生长繁殖。如人类防御素hBD-2对大肠杆菌及其他常见致病菌具有明显的抑制和杀灭作用,并且活性比hBD-1高10倍(但有浓度限制,只有超过100μg/m L时才能抗金黄色葡萄球菌)。目前,无论是人工合成还是生物提取的抗菌肽,均表现出较好的广谱抗菌性能,是传统抗生素较有潜力的替代品。 1.2　抗病毒 众多研究证实,抗菌肽能通过影响病毒的复制和转移,或直接杀灭病毒而发挥作用。如从嗜中性粒细胞中提取的Ind olicidin在浓度为60～100m g/m L的50 %抑制剂量时对HI V-1型病毒(333m g/m L)具有一定杀灭作用;caerin1.1,caerin1.9和m aculatin1.13种抗菌肽可抑制HI V的感染,阻断病毒向T细胞转移;防御素则可使单纯疱疹病毒(HS V)、水泡性口膜炎病毒(VS V)和流感病毒(I V)失活等。 1.3　抗肿瘤 M Anderss on等首次发现,NK-lysin具有抗肿瘤活性并得到后人证明,此后,人们加深了其在医学上的研究。究其抗肿瘤原因,可能与抗菌肽直接杀灭和抑制肿瘤细胞有关,如从欧洲林蛙分离出来的tem porin L能诱导肿瘤细胞坏死,具有一定阻止肿瘤细胞扩散的作用;从鲎血细胞中提取的速普肽(又名

降钙素基因相关肽对胃肠作用

降钙素基因相关肽对胃肠作用的相关研究进展胃肠道是唯一一个由中枢神经、肠神经和自主,正是在这种复杂而精细的调控下,使得胃肠道能正常进行对内外环境的适应性活动,以完成其生理功能。降钙素基因相关肽( cal2citonin gene2related pep tide, CGRP)是人类利用基因重组技术发现的第一个活性多肽,具有多种生理功能,其药理作用越来越得到人们的重视。它广泛分布于中枢和外周神经系统,尤其是感觉神经末梢和胃肠道的壁内神经丛,本文就CGRP对胃肠的作用做一综述。 1CGRP及其受体在胃肠的分布 胃肠道的CGRP主要分布在迷走神经和内脏神经的传入纤维,以及胃肠道的壁内神经丛,对辣椒素的作用敏感,大多数为CGRP免疫阳性神经纤维。胃内只有不到10%的迷走神经传入纤维含有CGRP,与此相反,近80%的胃脊髓传入神经元含CGRP,且肌层明显高于粘膜层。肠道中来自脊髓传入神经和壁内神经的CGRP各约占50% ,源于脊髓传入神经的CGRP主要分布在粘膜下血管壁,而源于壁内神经的则在肠壁其它各层占优势。此外在胆管、胰管、Oddi括约肌、下食管括约肌(LES) 、肛门内括约肌等组织中也有CGRP阳性神经纤维[ 1 ]。CGRP受体广泛分布在多种哺乳动物的LES、胃肠平滑肌、阑尾的纵行肌、肛门内括约肌以及整个消化道的粘膜层。CGRP及其受体的分布部位不同,决定了其功能上的特异性, 来自壁内神经的CGRP可能主要是调节胃肠道的运动。这些纤维在受内外环境理化因素的刺激时与胃肠适应性反应的调节有关。 2CGRP与胃粘膜血流 胃粘膜血流量减少是胃粘膜损伤的一个重要原因,胃粘膜血液供应在生理情况下已存在解剖上的缺陷,应激状态下,外周交感2肾上腺髓质系统强烈兴奋,儿茶酚胺释放增多,同时糖皮质激素分泌增加,它可增强儿茶酚胺对缩血管的反应,更容易引起胃肠粘膜血管痉挛,导致胃粘膜缺血、缺氧。由于在外伤、脑血管疾病等应激状态下易发生胃粘膜缺血导致胃粘膜屏障功能降低及上皮细胞代谢障碍,从而引起胃

抗菌抗病毒常用实验研究方法知识

抗菌抗病毒常用实验研究方法 细菌、病毒性疾病是目前国内外流行的主要传染病,尤其是近两年来,由冠状病毒引起的SARS及由流感病毒引起的禽流感给动物及人类带来的严重危害,是人所共知的"由于各种疫苗的不断出现,虽然一些细菌、病毒病已得到了有效的控制,但是其治疗尚无有效的解决方法因此研制高效、低毒的新型中药抗菌、抗病毒制剂已成为巫待解决的问题。 1、常用的抗菌方法 1、1稀释法 1、1、1试管稀释法 培养基内抗生素的含量按几何级数稀释并接种适量的细菌，经孵育后，观察能引起抑菌作用最低抗生素浓度，称最低抑菌浓度(MIC)为该菌对药物的敏感度。稀释法所获得的结果比较准确，常被用作校正其他方法的标准。如以下黄贝贝等的青钱柳抗菌作用的实验研究和黄利权等的火绒草的抗菌活性研究的实验方法: 1、应用试管稀释法,测定青钱柳提取物对试验菌的抑菌效果,检验不同浓度下青钱柳提取物对细菌、霉菌的抗菌作用。结果:青钱柳提取物在体外对金黄色葡萄球菌、乙型溶血性链球菌等革兰氏阳性菌具有较强的抗菌作用;而对大肠埃希氏菌、铜绿假单孢菌等革兰氏阴性菌的抗菌作用不明显;对黄曲霉、烟曲霉等霉菌的抗菌作用不明显[1]。 2、采用试管稀释法,分别测定了火绒草水煎液、水提醇沉液、醇提物、醇提石油醚部分、醇提乙酸乙酯部分、醇提正丁醇部分、醇提水溶部分等7种提取物对大肠杆菌C83882、大肠杆菌C8390 3、大肠杆菌C8391 4、沙门氏菌C79-20、金黄色葡萄球菌Newbould S-30 5、金黄色葡萄球菌临床分离株等6株病原菌的最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC)。试验结果表明,火绒草醇提物及其石油醚部分和乙酸乙酯部分对两种金黄色葡萄球菌具有较强的抑制作用,其MIC为0114 mg/ml生药浓度,MBC为0127 mg/ml生药浓度,而其它部分对金黄色葡萄球菌的抑制作用较弱。火绒草醇提正丁醇部分和水溶部分对3株大肠杆菌和1株沙门氏菌具有较强的抑制作用,其MIC为2170 mg/ml生药浓度,MBC为2170 mg/ml 生药浓度,显示了较强的抗菌活性[2]。 1、1、2肉汤稀释法 以水解酪蛋白(M-H)液体培养基将抗生素作不同浓度的稀释，然后种入待检细菌，定量测定抗菌药物抑制或杀死该菌的最低抑菌浓度(MIC)或最低杀菌浓度(MBC)。 如刘菁菁的研究蓝玉簪龙胆对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌( MRSA) 的体内外抗菌活性。蓝玉簪龙胆分别以乙醇、氯仿、正丁醇、蒸馏水提取，得到极性不同的4部分产物，利用肉汤稀释法测定其对 MRSA 和甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌( MSSA) 的最低抑菌浓度( MIC) ; 体内实验部分: 采用腹腔注射 MRSA 法建立小鼠感染模型，分别给予蓝玉簪龙胆水提液高、中、低剂量，银黄胶囊治疗 15 d，并与模型对照组比较，观察存活率。结果：体外实验: 蓝玉簪龙胆各极性组分对 MRSA 和 MSSA 菌株均有不同程度的抑菌作用，其中正丁醇组分抑菌作用最强，其次为乙醇、水层组分; 体内试验: 除了蓝玉簪龙胆大剂量组，其余各治疗组存活率均高于模型对照组，而蓝玉簪龙胆中剂量组存活率最高。结论蓝玉簪龙胆对 MRSA 和 MSSA 均具有一定的抗菌作用，而且敏感性差异无显著性; 对MRSA 感染小鼠有一定治疗作用[3]。胡景玉等为了了解衡水地区大肠埃希菌的药

人降钙素基因相关肽(CGRP)酶联免疫分析

人降钙素基因相关肽(CGRP)酶联免疫分析 试剂盒使用说明书 本试剂盒仅供研究使用。 检测范围：96T 2 ng/L -60 ng/L 使用目的： 本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本降钙素基因相关肽(CGRP)含量。 实验原理 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人降钙素基因相关肽(CGRP)水平。用纯化的人降钙素基因相关肽(CGRP)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入降钙素基因相关肽(CGRP)，再与HRP标记的降钙素基因相关肽(CGRP)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的降钙素基因相关肽(CGRP)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人降钙素基因相关肽(CGRP)浓度。 1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融 2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。 操作步骤 1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀 释。 2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、

待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。 3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。 4.配液：将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用 5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此 重复5次，拍干。 6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。 7.温育：操作同3。 8.洗涤：操作同5。 9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色 15分钟. 10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。 11.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止 液后15分钟以内进行。 操作程序总结： 计算 以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标

重组铁蛋白的活性研究[设计+开题+综述]

开题报告 食品质量与安全 重组铁蛋白的活性研究 一、选题的背景与意义 铁是人体生理代谢必需元素之一，也是不可缺少的营养元素。缺铁对儿童的智力、身体发育，免疫功能，消化吸收功能均有较大影响。缺铁性贫血是世界上最普遍的营养缺乏症，会损坏免疫系统，降低人的生理和心理机能，也会阻碍大脑认识能力的发育。据估计，全球约有30％的人口受缺铁的痛苦。在以稻米等植物性食物为主食的发展中国家，缺铁的影响程度更大，有近半数的5岁以下儿童和超过一半的孕妇患有铁缺乏症。 铁蛋白是一种广泛存在于动物、植物和微生物中的铁储存蛋白，是动植物生长发育的储存铁的共同来源。当细胞内二价铁离子含量高时，铁蛋白通过它的亚铁氧化还原中心，在氧气的帮助下，将其催化氧化生成无毒的三价铁储藏在它的内部，1分子铁蛋白最多可储存4500个三价铁，这个特点是铁蛋白与其它酶最大的不同之处；当细胞需要铁时，铁蛋白在还原剂的帮助下，将三价铁还原为二价铁离子从其内部释放出来，以供其它蛋白质合成利用，所以铁蛋白在细胞内具有去除二价铁离子的毒性以及调节铁代谢平衡的双重作用，同时它还参与细胞RNA代谢的调节。有研究认为该蛋白是解决动物和人类全球饮食缺铁的有效方法。 纽虫是一类生活在浅海潮间带的无脊椎动物，在世界各地都有分布，它具有柔软、能伸展、无分节的身体，以及一个极具特征性的捕食器——能够翻转的吻。研究表明其铁蛋白有较强的结合铁的能力，因此通过基因工程技术导入铁结合蛋白基因来提高食品铁含量以改良其营养品质将具有十分重要的意义。 二、研究的基本内容与拟解决的主要问题： 基本内容： 1、重组铁蛋白的获取 （1）IPTG诱导重组蛋白的表达，SDS—PAGE检测表达的情况； （2）大量表达蛋白并检测该蛋白为可溶性还是包涵体形式存在；

慢性疼痛的基因治疗

慢性疼痛的基因治疗 田玉科安珂 华中科技大学同济医学院附属同济医院麻醉学教研室 慢性疼痛被广泛地定义为急性组织损伤修复后疼痛持续超过1个月、疼痛持续或反复发作超过3个月以上或与组织损伤有关的疼痛预计持续存在或加重。其中神经性痛、炎症性痛以及癌痛均可引发慢性疼痛。剧烈或长期的疼痛会使机体各器官系统功能发生紊乱而影响生活、学习和工作。目前慢性疼痛的治疗主要是靠给麻醉性镇痛剂和非甾体类抗炎药等，但往往带来耐药、成瘾，并涉及许多器官、系统的其他副作用。因此寻找一种安全有效、作用持久、经济方便、副作用小的镇痛方法已成为人们感兴趣的课题。 随着细胞分子生物学的发展和基因工程技术的日臻完善，基因治疗作为一项新的生物干预手段，已被广泛应用于多种疾病的治疗与研究。正是基于对慢性疼痛的分子生物学机制有了更加深入的了解，人们才有可能在基因水平上探讨其治疗，为疼痛治疗开辟了一条新的途径，目前疼痛的基因治疗途径有两种，现就此方面的研究现状作一简要介绍。 1、间接体内疗法（Ex vivo Gene Therapy） 该疗法也称作细胞移植疗法，是早期疼痛基因治疗最常用的，被认为是一种接近于生理的、有效的镇痛方法。它是基因治疗与移植技术相结合的方法，其要点是选择合适的基因、靶细胞及最有效的基因转移方法。 1.1 机理 基于疼痛时内源性抑制信息的不足，包括5-羟色胺、去甲肾上腺素、γ-氨基丁酸（GABA）、内源性阿片肽如β-内啡肽、脑啡肽、强啡肽以及内源性甘丙肽和神经营养因子如脑源性神经营养因子（BDNF）等。该方法是将体外培养的某些细胞株移植入体内，这些类似于“生物微泵”的移植细胞在中枢神经系统（脊髓）持续分泌、缓释多种抗痛蛋白分子、抗痛蛋白调控因子、酶类或信号转导因子，从而增强局部抗痛蛋白的表达，降低疼痛敏感性，产生良好的镇痛效果，避免了全身给药带来的副作用，目前研究最多和最深入的是嗜铬细胞移植和基因工程细胞移植。 1.2 嗜铬细胞移植 动物实验和临床研究显示, 将同种或异种嗜铬细胞移植于机体的特定部位, 可提高宿主对疼痛的耐受性, 产生镇痛效应。1986年[1]Sagen首先将牛肾上腺髓质嗜铬细胞移植到大鼠蛛网膜下腔，通过移植细胞不断分泌5-TH和去甲肾上腺素以及脑啡肽等镇痛物质发挥抗痛作用；1993年Winnie等[2]将此技术应用于临床，他将人肾上腺嗜铬细胞植入顽固性疼痛病人的脊髓蛛网膜下腔, 使70%~80% 病人的疼痛得到明显缓解, 减少或停止使用止痛药，从此开创了细胞镇痛研究的先河。 1.3 基因工程细胞移植

小分子美塑专业知识

维观小分子美塑的特色 细胞的活力决定肌肤的美丽 魅力期小分子美塑是采用国际尖端的基因工程技术生产出的与人体100%同源的生物活性物质和纯植物萃取活性成分，利用小分子超微渗透技术，将其直接导入肌肤所需的各个层面（浅、中、深），直接作用于细胞，使细胞分裂增殖，促进胶原和弹力蛋白的分泌与合成，激活细胞，启动肌肤的主动修复和抗衰老机制，从根本上解决肌肤衰老皱纹，暗黄等一系列问题。 魅力期小分子美塑项目的定位 1、是一个具备国际科研背景（加拿大世科枝术研究中心、加拿大医疗器械科技公司），目前处于世界领先水平的生物基因美容抗衰项目。非手术，不开刀，保持时间久。 2、它是介于医学美容和生活美容之间的新的美容领域，结合二者的优势，解决了单独靠医学美容或生活美容无法解决的问题：从根本上改善皮肤质量，逆转皮肤衰老状态。 3、是一个净/疗/护/养结合的高端长线项目，是美容院挖掘顾客潜力，增加顾客忠诚度，提高美容院档次，获得更多利润的高科技含量的美容抗衰项目。 魅力期小分子美塑的亮点和特色： 亮点： 1、世界尖端的高科技细胞自然美容抗衰疗法； 2、无创无痛，轻松告别微创时代； 3、以非手术美容手段挑战整形美容手术效果； 特色： 1、靶向作用——激发静止期细胞的活力，多方位多层次全面改善肤质 2、先进性－一现代生物基因技术，靶向定位，深度渗透，小分子活性物直达肌肤深层后6

秒钟即开始发挥作用，然后以3.7倍的速度让细胞再生，让皮肤的衰老瞬间停止！ 3、叠加性－一可以终生使用，长期使用效果更好，皮肤不断叠加改善 4、安全性－一非手术、不用药、不打针，纯生物基因配方，不含国家限制或禁止的1218种 成份，不含色素香精、渗透剂、防腐剂等，完全按CMP标准生产，绝对安全可靠。 5、持久性强－一因为是从本质上彻底改善肤质，逆转皮肤健康状态，所以维持时间长久。小分子与传统护理品的区别： 4、小分子美塑是世界尖端的高科技细胞自然美容抗衰疗法；颠覆传统二十年的被动给予和补 充，变被动为主动。启动细胞活力。从根本上解决肌肤问题。 2、是传统护理保养的更高级别。 小分子美塑系列的核心技术： 强大的基因工程和小分子技术 国际最新诺贝尔奖技术水通道蛋白运载技术 独家的抗菌肽无添加保鲜国家发明专利技术 双效美塑抗衰技术（小分子美塑+深导技术） 小分子美塑系列的核心成分： BFGF ——碱性成纤维细胞生长因子 护肤、修复作用——能够改善细胞生长的微环境，促进弹性纤维和胶原蛋白的合成，使肌肤富有弹性，使皮肤处于滑嫩的状态。 抗皱、防衰老作用——能够促进成纤维细胞的生长发育，不断以新的细胞取代老化细胞，因此产生防皱、祛皱作用。 美白、祛斑作用——更新衰老细胞，从而降低皮肤细胞中黑色素和有色细胞的含量，减轻皮肤色素的沉着。

人乳铁蛋白转基因研究进展

*基金项目:国家高技术研究与发展计划(863)重大专项(2002AA206111)资助。 赵春江，男，1970年生，中国农业大学生物学院博士后。E-mail:.**通迅作者。Author for correspondence.E-mail:.收稿日期：2003-05-19接受日期：2003-09-17 农业生物技术学报Journal of Agricultural Biotechnology 2004,12(4):470~475 ·综述 ·人乳铁蛋白转基因研究进展* 赵春江刘兆良 樊宝良李 宁** (中国农业大学农业生物技术国家重点实验室， 北京100094)摘要：人乳铁蛋白是一种具有多种生理功能的糖基化蛋白，可可逆性地结合两个铁离子。概述了人乳铁蛋白的结构和理化性质，以及乳铁蛋白基因的结构，并着重论述了人乳铁蛋白转基因研究的状况和主要研究成果。在此基础上，提出了尚未解决的问题，并展望了人乳铁蛋白转基因研究的前景。 关键词：人乳铁蛋白；人乳铁蛋白基因；重组人乳铁蛋白 Study Progress of Human Lactoferrin Transgene ZHAO Chun-Jiang LIU Zhao-Liang FAN Bao-Liang LI Ning** (State Key Laboratory for Agrobiotechnology,China Agricultural University,Beijing 100094,China) The human lactoferrin (hLF)is an iron-binding glycoprotein with muti-functions,including broad spectrum antimicro-bial activity and anti-inflammatory and immunoregulatory activities.In the review,the protein and gene structures and their physical and chemical properties of hLF were briefed.The main achievements of hLF transgenic study were assessed in detail.On the basis of the assessment,the aspects in the study which need more efforts to be investigated were presented. human lactoferrin;human lactoferrin gene;recombinant human lactoferrin 人乳铁蛋白（human lactoferrin ，hLF ）是一种属 于铁结合蛋白家族的糖基化蛋白[1]，由Sorensen 和 Heremans [2]首次发现， 并由Blanc 和Isliker 命名。乳铁蛋白可以可逆性地结合两个铁离子，其离子结合强度是运铁蛋白（在体内对铁起运输作用的主要蛋白）的300倍[3]。人乳铁蛋白由692个氨基酸组成，分子量约为80kD [4]。在乳铁蛋白内有2个具有铁离子结合能力的叶状结构，一个是氨基端区，即 N-lobe ，另一个为羧基端区， 即C-lobe [5]。两区间有40％的同源氨基酸序列。每个区能结合一个铁离子，同时结合1个二价炭酸根阴离子。人乳铁蛋白为N 端连接的糖基所修饰。经酶促反应，一个寡聚糖苷链以共价键结合在以Asn-Xaa-Thr/Ser 顺序排列的天冬酰胺酸残基上[6]。人乳铁蛋白有3个可能被糖基 化的位点， 分别位于C 叶的第138的天冬酰胺酸残基、N 叶的第479、624天冬酰胺酸残基上[4]。在3个位点中，位于138、479的天冬酰胺酸残基优先被糖 基化，第624的天冬酰胺酸残基的糖基化受第479 位天冬酰胺酸残基糖基化的限制[7]。乳铁蛋白广泛存在于哺乳动物的体液和嗜中性粒细胞的次级颗粒中，乳铁蛋白具有的生理功能主要包括：广谱的抗菌功能、抗炎症功能和免疫生理调节功能[8]。这些功能是通过乳铁蛋白直接获取铁离子或结合在细胞表面而使菌体细胞通透性增加实现的[9]。乳铁蛋白可结合发生炎症区域的铁离子，从而阻止游离的铁离子参与催化有害的氧化反应。乳铁蛋白同时也能影响T 细胞的扩增反应[10]。一些研究表明，乳铁蛋白在体内的抗菌作用远比体外强。这可能是由于乳铁蛋白上存在着抑菌和潜在的免疫调节功能区。在体内，乳铁蛋白通过与体内的细胞结合而发挥抗菌和免疫调节作用[11]。人乳铁蛋白的许多生理功能的发挥有赖于与特异性细胞受体的结合[12]。现已发现人乳铁蛋白受体存在于多种细胞，如肠细胞、血小板、哺乳动 物上皮细胞、 淋巴细胞等[13,14]。其它人乳铁蛋白潜在

常见的抗菌肽的基因序列

1、Thanatin的基因序列：ATGACTTCATCAAGATGCATGTTGGTGCTAGCTTGCCTAGCTTGTATTGG TATAGCCTCAGGAAGACACCTGGCCCCTGGAGCACCGGACATATTCACA CGTCTAACCAGGTCTTTGGACGATAACCAGTCTGCTTTCAATGATGACGA TGAACTCACCGAACTTCTGCGTCCCACCAGATCCCTGGACGATAACCAG TCTGCTTTCAATGAAGAAGATGAACTGGCCGAACTCGAGCGTCCAACCA GGTCTCTAGATGACAACCAGTCAGCTTTCAATGAAGAAGATGATCTTGCA GAACTCCAGCGCCCCACCAGGTCCCTAGATGATAACCAGTCTGCCATCG TTGA AGACGATAAATTCCAACATGAGTTGGTGAGACAGAAAAGGGGGAAAGTA CCGATAATTTACTGCAACAGGAAGACCGGGGTTTGCAAGCGAATGTAA Thanatin 除了对水稻立枯丝核菌无明显抑菌效果外，对其它5 种供试真菌均有明显的抑制菌丝生长的效果，尤其是对尖孢镰孢菌、黄色镰刀菌和辣椒炭疽病菌的效果为好。在抗细菌活性的检测中，Thanatin 对革兰氏阴性菌（大肠杆菌E.coliDH5α）和革兰氏阳性菌（金黄色葡萄球菌）的生长均有抑制作用。Thanatin 则是由斑腹刺益蝽鉴定发现的既对丝状真菌有抗性，又对细菌有抗性的双抗因子。 2、AFP的基因序列; AAGGTCGTTTCTCTCGCTTCTCTGGGTTTCGCCCTCGTCGCTGCCCTTG GCGTGGTAGCCAGCCCCGTGGATGCCGATTCTCTCGCCGCAGGTGGTC TGGACGCAAGAGACGAGAGCGCCGTTCAAGCCACATACGACGGTAAAT GCTACAAGAAGGACAATATCTGCAAGTATAAGGCACAGAGCGGCAAGAC GGCCATTTGCAAGTGCTATGTCAAAGTGTGCCCCCGAGACGGCGCGAA GTGCGAGTTTGACAGCTACAAGGGCAAGTGCTACTGCTAG AFP来自巨大曲霉，根据《巨曲霉(Aspergillus_giganteus)中的抗真菌蛋白质AFP

华南理工大学生物化学与分子生物学2008真题精

878 华南理工大学 2008年攻读硕士学位研究生入学考试试卷 (请在答题纸上做答,试卷上做答无效,试后本卷必须与答题纸一同交回 科目名称:生物化学与分子生物学 适用专业:微生物学,生物化学与分子生物学,生物医学工程 共 8 页 (考试时间3小时,总分数150分 一. 选择题 (从备选答案中选出一个正确的答案, 每小题 1分,共 30分 1.反转录酶除了有以 RNA 为模板生成 RNA-DNA 杂交分子的功能外,还有下列活性 A DNA聚合酶和 RNase A B DNA聚合酶和 S1核酸酶 C DNA聚合酶和 RNase H D S1核酸酶和 RNaseH 2.一个酶有多种底物,判断其底物专一性强弱应依据参数 A Kcat B Km C Kcat/Km D 其它 3.DNA 分子上被依赖于 DNA 的 RNA 聚合酶特异识别的顺式元件是 A 弱化子 B 操纵子 C 启动子 D 终止子 4.蛋白质形成三级结构的驱动力是:(B A 范德华力 B 疏水作用 C 氢键 D 离子键 5.利用羟基磷灰石分离提纯蛋白质是属于

A 离子交换层析 B 吸附层析 C 亲和层析 D 分子筛层析。 6.下述哪种方法不适合用来测定核酸分子的大小及其分子量 A 电镜测量法 B 沉降分析法 C 粘度法 D 吸咐层析法。 7 .今有 A,B,C,D 四种蛋白质, 其分子体积由大到小的顺序是 A>B>C>D,在凝胶过滤柱层析过程中,最先洗脱出来的蛋白质一般应该是 A A, B B, C C, D D 8.生物体内甲基的直接供体是 A S-腺苷蛋氨酸 B 半胱氨酸 C 蛋氨酸 D 牛磺酸 9 .如果要测定一个小肽的氨基酸顺序,下列试剂中选择一个你认为最合适的 A 茚三酮 B CNBr C 胰蛋白酶 D 异硫氰酸苯酯 10 .在天然蛋白质组成中常见的一个氨基酸,它的侧链在 pH7.2和 pH13都带电荷,这个氨基酸是 A 谷氨酸 B 组氨酸 C 酪氨酸 D 精氨酸 11.某蛋白质 pI 为 7.5,在 pH6.0的缓冲液中进行自由界面电泳,其泳动方向为 A 原点不动 B 向正极泳动 C 向负极泳动 12.在接近中性的pH的条件下,下列哪种基团既可以为H +的受体,也可为H +的供体 A His-咪唑基 B Lys-ε-氨基 C Arg-胍基 D Cys-巯基 13.测定蛋白质在 DNA 上的结合部位常用方法 A Western印迹 B PCR C 限制性图谱分析 D DNaseI保护足印分析 14.人细胞 DNA 含 2.9×109碱基对,其双螺旋的总长度约为

review：抗菌肽及其基因工程表达研究概况

抗菌肽及其基因工程表达研究概况 当前，细菌性感染和疾病呈上升趋势，细菌耐药性的形成是一个重要的原因。由耐药性细菌，如耐药性结核杆菌、大肠杆菌和被称为“超级细菌”耐甲氧西林金葡菌( MRSA)[24]等对人和动物造成的危害日趋严重。如何克服细菌的耐药性是当前的研究重点和热点。科研工作者们正努力寻求新的抗菌策略，这些策略包括：合理应用抗生素；改造现有抗生素或研发新的抗生素；微生态制剂的研究与应用；噬菌体制剂研究与应用；中草药细菌耐药抑制剂研究与应用；抗菌肽研究与应用等。其中抗菌肽研究与应用是最有前景的一个领域。 1. 抗菌肽的生物活性及作用机制 1.1抗菌肽的抗细菌作用 在APD数据库中有1158个抗细菌肽，至少有113种以上的不同细菌均能被抗菌肽所杀灭。抗菌肽的抗菌作用机理的研究比较多。一是基于膜攻击作用的杀菌机制有一下几个模型[1，2]：（1）桶板模型(barrel-stave model)：带正电荷的含α-螺旋抗菌肽单体与细胞膜上带负电荷的磷脂分子相互吸引而结合在细胞膜表面，多个抗菌肽分子形成多聚体，扰乱了质膜上蛋白质和脂质原有的排序，并以与膜表面垂直的排列方式将疏水基团插到磷脂双分子层，形成横跨细胞膜的离子通道，造成细胞质物质泄漏和电化学势丧失，细胞膜崩解而导致细胞死亡。（2）地毯模型(carpet model)：以该机制杀菌的抗菌肽并不插入细胞膜内部，但在电荷作用下，一定浓度的抗菌肽像地毯样展开平行排列在细胞膜表面或形成颗物，利用疏水作用和分子张力作用改变细胞膜的表面张力，从而在细胞膜上出现暂时的孔洞，除了细胞液的相互渗透，抗菌肽还可通过此孔洞进入细胞。（3）穿孔螺旋模型（toroidal-hole model）：抗菌肽分子的极性端与磷脂分子的极性端相对一起形成以螺旋状形式的连续翻转，从而导致膜的完整性破坏和功能丧失；（4）分子团聚集式(micellar aggregate)：抗菌肽分子以不规则形式聚集于膜表面，类似地毯式模型的作用形成跨膜电势差而导致膜损伤。二是基于抗菌肽的非膜结构破坏型机制，包括抗菌肽穿过细胞膜或核膜，作用于胞内DNA、RNA，酶和蛋白质等分子，可抑制细胞外膜蛋白质，细胞壁的合成，抑制细胞的呼吸作用。如Carlsson等研究发现，attacin能够抑制大肠杆菌细胞外膜蛋白相关基因的转录，

食品生物技术知识要点

繁星★春水 18:48:56 酶联免疫吸附根据检测目的和操作步骤的不同，分为间接法、双抗体夹心法、竞争法、直接法。 第一个应用基因工程技术生产的一种酶是：凝乳酶 繁星★春水 19:05:27 在发酵工程中，黄单胞杆菌的最适PH值是7.0，发酵中PH控制在6.5～７.５ 繁星★春水 19:07:18 国际上按果糖含量极其发展分为哪三代①第一代含42%的果糖②第二代含55%的果糖③第三代含90%以上果糖 繁星★春水 19:13:00 简介酶传感器的两种类型：①电极密接型，直接在基础电极的敏感面上安装固定化酶膜，从而构成酶电极。②液流系统型，固定化酶与基础点极是公载的，将固定化酶填充在反应柱内，底物溶液流经反应柱时发生酶促反应，产生生化信号，再流经基础电极敏感面，此时生化信号转换成电信号。 繁星★春水 19:17:11 酶法生产葡萄糖和酸法生产葡萄糖相比较的优缺点：优点，①原料淀粉不必精制；②水解率98%以上；③设备需求不需耐酸压；④无苦味和色素生成；⑤管理上只需保温不必中和；⑥收得率高 缺点，糖化时间较长 繁星★春水 19:20:43 单细胞蛋白：指在大规模系统培养的包括水藻、放线菌、细菌、真菌、和酵母等微生物生产的菌体蛋白质，一般以收获干菌体的形式为产品。 繁星★春水 19:46:30 细胞融合的方法：PEG诱导法、仙台病毒诱导法、电融合法 繁星★春水 19:47:23 酶的固定化方法：吸附法、包埋法、结合法、交联法、热处理法。繁星★春水 19:48:26 生物技术的主要内容：基因工程、细胞工程、发酵工程、酶工程。繁星★春水 19:52:01 传统生物技术的三个步骤：①上游处理过程，原料的粗加工；②发酵和转化，微生物的大量生长、繁殖、发酵生产某个产品的过程；③下

降钙素基因相关肽与疼痛相关性的研究进展

降钙素基因相关肽与疼痛研究进展 郑州大学第一附属医院孙振涛李平乐 降钙素基因相关肽(Calcit onin gene related peptide，CGRP)是体内一种重要的生物活性肽，1983年Rosenfold等应用DNA基因重组和分子生物技术研究发现。CGRP广泛分布于哺乳动物和人的中枢及外周神经系统中，生理作用广泛而多样。近年研究表明，CGRP在中枢和外周神经系统的伤害性信息传递中起着重要作用。这一发现不仅使我们能更好地解释神经病理性疼痛产生机制，并为研制治疗神经病理性疼痛的药物提供一些新的思路和方法。本文就CGRP与疼痛的研究进展作一综述。 1 CGRP的生物活性及合成、释放 CGRP由37个氨基酸组成，分子量3 786 . 91，它与降钙素基因同源，由2800个碱基对组成，其中含有5个内含子和6个外显子。由降钙素基因转录的RNA，最先在神经组织翻录成128个氨基酸组成的CGRP而发挥其生物效应。人和鼠的CGRP有α和β两种基因，两者具有类似的生物活性，氨基酸组成仅在第3、22、25位有所不同。研究发现CGRP广泛分布于中枢及外周神经系统，在脊髓背根神经节( dorsal root ganglion，DRG)、三叉神经节内初级小型感觉神经元、脊髓和脑干的投射纤维中密度较高，其中α- CGRP主要分布于中枢神经系统，而β- CGRP则主要位于周围神经系统。 CGRP释放的机制尚未完全清楚，内毒素、吗啡硫酸盐、睾丸酮和神经生长因子可促进CGRP基因表达，1，25-二羟骨化醇可抑制其

表达。此外，年龄、细胞分化程度与基因表达调控也密切相关。辣椒素是常被用来诱导CGRP释放的物质，甲状腺素、多种理化因素及炎症介质等均可诱发神经末梢释放CGRP。雄激素、ACTH、乙酰胆碱和阿片肽则可抑制此过程。神经末梢内钙离子的积聚，细胞内cAMP/cGMP第二信使系统，可能也包括PKC系统均部分介导CGRP 释放的调节，有研究发现CGRP从神经末梢释放后还可经神经末梢再吸收。CGRP 活性的调节主要靠中性内肽酶等神经肽酶的降解。 2 CGRP与疼痛调节 2.1 与脊髓水平疼痛的关系 疼痛的脊髓机制不论在神经形态学、神经生理学和神经化学方面都处于重要的地位，因此，在漫长的疼痛研究过程中始终引人注目。现已探明，疼痛信号在进人高位神经中枢以前已在脊髓受到调控，即对疼痛信息的量、性质和时速进行调节、转换或控制。脊髓的这种功能主要集中在脊髓背角，脊髓背角是躯体和内脏传人的第一个释站及传人输出相互作用的重要场所。组织损伤能导致长时间的脊髓背角神经功能改变，这种变化反过来又影响感觉神经元对疼痛的反应，背角神经元活动的增强来源于外周组织感受器引起的神经反射增强，这些变化是由有活性的神经元的可塑性介导的。国外研究认为C-纤维神经肤和兴奋性氨基酸递质在这种变化和反应中发挥重要作用。 CGRP与P物质共存于脊髓背根神经节（DRG）的初级传人神经元中，CGRP可以抑制与P物质降解有关的内肤酶，使P物质的作用增加或延长。CGRP与P物质在痛觉调制中存在协同作用，CGRP等