分散垂直气流法则

分散垂直气流法则

内容：在分散垂直通道内，热气体应当自上而下流动，冷气体应当自下而上流动才能使气流温度均匀分布。

使用条件：hg》hL

保证温度均匀分布的条件是：几何压头=阻力损失

烟囱

总阻力包括；摩擦阻力，局部阻力，气体动压头及几何压头增量等。

设计烟囱注意的问题：1为保证在任何季节都有足够的抽力，计算时该用夏季最高温度时的空气密度2若当地的空气湿度较大，计算时必须用湿空气的密度。

温度场概念

当物体内部各个部分存在着温度差，热量即从高温部分流向低温部分，在某一瞬间，物体内部所有各点温度的分布情况，称为温度场。

不稳定温度场：刚刚点火升温的窑炉炉壁

稳定温度场：

对流换热影响因素：

1流体发生运动的动力：自由于东和强制运动。

2流体流动的状态：层流和湍流

3流体的韧性

4放热面的形状和位置

判断自然对流时层流与湍流的依据是Gr准数和Pr准数的乘积。

辐射换热

1概念：A+R+D=1

如果投射到物体上的辐射能全部都被物体吸收，此时A=1,R=D=0；该物体叫绝对黑体。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。，此时A=D=O,R=1；该物体叫绝对白体或绝对镜体。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。，全部通过该物体，此时，D=1,A=R=0，该物体叫绝对透明体

一般来说，影响热辐射的吸收和反射的主要因素不是物体表面的颜色，而是其均性表面状态和温度，物体长向越粗糙就越接近黑体，不管什么颜色的物体，平滑面和磨光面的吸收率要比粗糙面小得多

电偶测量管道内的空气温度时，为什么会出现温度差，怎样减少误差之间的辐射换热，会产生则温度差。

1采用表面比较光滑，黑度比小的热电偶外套管

2测温时热电偶必须装置的气流速度较快处，在热电偶安装处可造成人为瓶颈或采用抽气式热电偶

测量误差随，为提高T2,可以在装热电偶的部分包上绝热层，或在热电偶外面叫隔热罩

气体辐射的特点

1双原子分子，惰性气体，辐射和吸收能力都很弱2三院子以上气体都有较强的辐射和吸收能力3气体的辐射和吸收对波长具有一定的选择性4气体是透热体A+D=1,一边吸收，一边透过

高位发热值和低位发热值的区别

高位发热量：是指燃料完全燃烧，并当燃烧产物中的水蒸气全部凝结为水时所放出的热量

低位发热量：指燃料完全燃烧后，其燃烧产物中的水蒸气仍以气态存在时所放出的热量

燃料的低位发热量等于从高位发热量中扣除水的汽化热后的热量，水后汽化热=2500kj/kg 挥发分

挥发物含量高时火焰长，着火温度低，易着火，灰道不完全燃烧热损失小

着火易到难：木柴>泥煤>褐煤>烟煤>无烟煤

恩氏粘度

在侧蒂诺温度下油从恩格勒粘度计中流出200ml所需时间与20C蒸馏水流出200ml所需的时间之比值。

重油的牌号是以50C时油的恩氏粘度来分类的。温度高，粘度降低

闪点，燃点，着火点，凝固点定义

当有火源接近时，若出现蓝色闪光，则此时油温称油的闪点。若油温超过闪点，用火源接近油表面时在蓝光闪现后能持续燃烧称为燃点。若再继续提高油温，则油表面的蒸汽即使无火源接近也会自发燃烧起来，即自燃，相应的油温称油的着火点。当油类完全失去流动性时的最高温度叫凝固点。

储油罐中，油的加热温度应严格控制在闪点以下，以防止发生火灾。

燃烧室或炉膛内的温度不应低于重油的着火点，否则不易燃烧。

空气系数的计算

1氧平衡方法

2氮平衡方法

提高实际燃烧温度的途径

1选用高发热量的燃料

2控制适当的空气系数，使a略大于1

3预热空气或燃料，提高tf或ta，使燃料或空气带入显热增加，提高总收入热量，将使tp 增加。

4减少向外界散失热量

固态碳的燃烧

化学反应速度

扩散速度

炭的燃烧速度

延迟着火现象及火焰传播速度的影响因素

气体燃料的燃烧是连锁反应进行的，当气体燃料与空气的混合物加热至着火温度后，要经过一定的感兴期后才能迅速燃烧，在感应期内不断生成含有高能量的连锁刺激物，此时并不放出大量热量，故不能立即使邻近层气体温度升高而燃烧，这一现象叫延迟着火现象。

影响因素：不仅与空气燃料的种类有关，还与温度及压强有关。温度越高，压强越大，延迟着火时间越短。

影响回火，脱火的因素及燃烧方法

燃烧方法：1长火焰燃烧：煤气在烧嘴内完全不与空气混合，喷出后靠扩散作用进行混合而燃烧，火焰长。2短焰燃烧：煤气在烧嘴内预先与部分空气混合，喷出后燃烧并进一步与二次空气混合燃烧，火焰较短。3无焰燃烧：煤气和空气在进烧嘴前或在烧嘴内完全混合，在烧嘴内或喷出后，立即燃烧，几乎无火焰。

影响因素：1回火速度与火焰传播速度的变化情况类似，即开始时随着一次空气系数a1增加而增加，至a1值接近1时达最大值，再持续增大a1值，则回火速度反而下降。回火速度

愈大，愈容易发生回火现象。2脱火速度随着一次空气系数a1增加而减少，脱火速度愈小，愈容易发生脱火现象。3a1接近1时，易发生回火现象。随着a1的增加而愈易发生脱火现象。4烧嘴喷出口直径愈大，愈易回火而不是脱火。5煤气的组成，压力，预热温度等均对回火和脱火速度有影响。

燃烧时，产生回火易发生爆炸事故；产生脱火，易发生中毒事故。

重油雾化的三个要求

1雾化要细：经研究最合适的雾滴直接为50um或比50um稍细些2油流股中各雾滴直径要均一3油流股断面上雾滴的分布要均匀。

雾化方法：机械雾化和介质雾化

乳化油简介

乳化油有两相：以液珠形式为主叫分散相或内相。另外一相叫连续相或外相。

乳化油类型：1油包水型2水包油型3多重型

烧乳化油的效果：1节油2火焰变短发亮，刚性增强，火焰温度稍有提高。3基本上消除了化学不完全燃烧。4烟气内氧气含量增多了5烟气内水含量有所增加，可加强辐射传热。6减轻公害。

固体燃料燃烧三个阶段

1准备阶段（干燥，预热，干馏）2燃烧阶段（挥发物和焦炭的燃烧）3燃尽阶段（固体燃料特有的阶段）

干燥过程及其设备概念

绝对温度：单位体积湿空气中含有的水蒸气质量称为空气的绝对温度

相对温度：湿空气的绝对温度与同湿度同总压下饱和空气的绝对温度之比称为相对温度。

湿含量：1Kg绝干空气所含的水蒸气质量称为空气的湿含量

干球温度：是湿空气的实际温度

露点：未饱和的湿空气在湿含量不变的条件下，冷却到饱和状态时的湿温度称为露点。

湿球温度：在玻璃液体温计的湿包上裹以湿纱布，纱布的一端侵入水中，在平衡状态下该温度计所指示的温度称为空气的湿球温度。

I-X图的组成

横坐标：空气的温度x 纵坐标：热含量i

耐火材料的主要性能

耐火度：材料在高温下抵抗融化的性能。荷重软化点：耐火砖在一定压强下加热，发生一定变形和坍塌时的温度。热稳定性：耐急冷急热性能。抗化学腐蚀性：指耐火砖抵抗熔渣、煤渣侵蚀的能力。高温体积破坏性：指材料在高温下长期使用时，体积发生不可逆变化的性能。预热带上下温差原因及解决办法

原因：1几何压头使热气体向上流动2上部空间大于下部空间阻力小3窑车衬砖首先从下部吸收热量

解决方法：1采用平顶结构2设计时减少高宽比3适当缩短窑长，减少冷空气吸入4使用各种气幕5近车台面设排烟口，使烟气多次向下流动6加快气体流动速度7减少窑车质量

窑车散热和蓄热问题

影响因素1最高烧成温度2烧成周期3窑车衬砖性能

挡板与挡墙的作用

1增加气流阻力2便于温度制度和压强制度的调节

烧成带烧嘴的布置方法

1布置在两个侧墙轨道平面上，下，烧嘴呈垂直水平的交错排列且布置较密2轨道面以下的烧嘴数量比轨道面以上的多3采用小流量，多喷嘴系统布置。

轨道窑多采用集中排烟系统。火焰转向有利于加热和排烟

对点热体的要求

1电热体的发热温度要满足工艺要求2电热体要具有较高的比电阻和较小的电阻温度系数3电热体的化学稳定性好4电热体要具有良好的机械性能5电热体的热膨胀系数要小6电热体材料价格便宜

电热体尺寸的确定

原则：A要满足电热功率的要求即应有合适的电阻B要有合适的表面积，使其表面积功率符合要求

确定方法：A确定合适的电阻B确定合适的表面积

电阻炉的设计

尺寸设计：1确定电阻炉的有效装载尺寸2确定电热元件在炉内的安装方式

功率确定：1热平衡法热收入=热支出2面积负荷法3容积负荷法

纸片扩散法在药敏试验中的应用

纸片扩散法在药敏试验中的应用 作者：黄志坚 作者单位：福建省三明市畜牧兽医站,365000 刊名： 福建畜牧兽医 英文刊名：FUJIAN JOURNAL OF ANIMAL HUSBANDRY AND VETERINARY MEDICINE 年，卷(期)：2004,26(6) 被引用次数：11次 引证文献(11条) 1.董永军.杨井泉.王丽荣.王三虎.杭柏林药敏片的研制及其抑菌效果观察[期刊论文]-安徽农业科学 2006(11) 2.徐倩倩.李继昌.李永科.刘立新.李睿中草药对犊牛腹泻主要病原菌体外抑菌试验[期刊论文]-中国奶牛 2008(7) 3.陈美婉.刘长秀.余思琴.杨志文.吴传斌纳米银温敏喷雾凝胶与环丙沙星联合应用体外抑菌作用[期刊论文]-中国消毒学杂志 2012(1) 4.方美娟.林启存.陆红法花(鱼骨)细菌性败血症病原分离鉴定及抑菌试验[期刊论文]-水产科学 2009(12) 5.张荣先.黄雪飞.先大强.游国辉西伯利亚鲟细菌性败血症病原菌的分离鉴定和药敏试验[期刊论文]-江苏农业科学 2012(5) 6.彭措扎西禽霍乱病原菌的分离鉴定及药敏试验[期刊论文]-养殖与饲料 2010(8) 7.吴雅欣.莫泽珣.张鑫.佘丹.李华无机盐及葡萄糖对广州管圆线虫三期幼虫的体外趋化作用[期刊论文]-热带医学杂志 2013(7) 8.傅力.任娟.李瑾瑜.牛淑萍新疆某猪场的几株沙门氏菌及大肠杆菌对16种抗生素药敏性研究[期刊论文]-新疆农业科学 2008(4) 9.徐海军.周科伟某养鸡场禽霍乱分离菌对常用抗菌药物的敏感性研究[期刊论文]-家畜生态学报 2006(3) 10.王瑞旋.王江勇.徐力文.冯娟军曹鱼养殖水体及其肠道弧菌的耐药性研究[期刊论文]-南方水产 2007(5) 11.王瑞旋.徐力文.王江勇.刘秀明.冯娟军曹鱼养殖水体及其肠道异养细菌的耐药性研究[期刊论文]-海洋环境科学 2008(6) 引用本文格式：黄志坚纸片扩散法在药敏试验中的应用[期刊论文]-福建畜牧兽医 2004(6)

纸片扩散法测大肠杆菌对几种抗生素的敏感性

纸片扩散法测大肠杆菌对几种抗生素的敏感性 1 实验原理 将含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测定菌的琼脂平板上，纸片中所含的药物吸取琼脂中的水分，溶解后便不断的向纸片周围区域扩散形成递减的梯度浓度。在纸片周围抑菌浓度范围内测试菌的生长被抑制，从而形成透明的抑菌圈。该抑菌圈表示药物对该种细菌的生长繁殖具有抑制作用。通过测定抑菌圈的直径大小，可以判定药物的抑菌强弱，抑菌圈直径越大表示药物抑菌作用越强，抑菌圈直径越小表示药物抑菌作用弱，没有抑菌圈表示该药物没有抑菌作用。并且，经稀释法测得的MIC的对数和用纸片测定相应的菌株得到的抑菌直径之间大致呈直线相关，因此将两种方法相对应地测试各种据菌株所得数据，进行统计学的相关回归分析处理，可得到一条回归线，依此可推断该菌株的MIC，两者呈负相关关系，即MIC 愈小，抑菌圈直径愈大。 2 实验材料 2.1 菌液 江山大农庄拉稀的猪仔肠道黏膜物中提取的大肠杆菌。 2.2药品 链霉素、四环素、多粘菌素B、万古霉素、庆大霉素、红霉素、氨苄青霉素、新霉素、利福平、青霉素、菌必治、羧苄青霉素。 3 实验步骤 3.1药敏纸片的准备 纸片内抗菌药物含量

3.2细菌的制备 从琼脂平板挑取新鲜分离的菌落数个或从保存的斜面上移种至3～5mLMH肉汤培养液中37℃培养2～8h，以待生长至轻微或中等浊度。为保证药敏试验的准确度和精度，必须对接种菌液的浓度做相应的控制。因此，将菌液稀释并校正浊度至0.5麦氏标准浓度，稀释时使用无菌肉汤或生理盐水，此时菌液的浓度约为1.5×108个/L。 3.3 接种平板 制备好的接种菌液必须在15min内使用。用灭菌好的棉试子蘸取菌液，在管壁上旋转挤压几次，去掉过多的菌液。然后用试子涂布整个培养基表面，反复几次，每次将平板旋转60°，最后沿平皿周边绕两圈，保证涂布均匀。 3.4 粘贴药敏试纸 待平板上的水分被琼脂完全吸收后开始贴纸片。用镊子取纸片一张，贴在琼脂平板表面，用镊子尖轻压，使其贴平，纸片一旦贴上就不能再拿起，因为纸片中的药物已经扩散到琼脂中。纸片间距离不小于24mm，纸片中心距平皿边缘不小于15mm。直径为90mm的平板最好贴6张。贴好纸片后，需在15min内置35℃培养箱内培养。培养时，平板需在培养箱内单独摆放，否则中间的平板达不到培养箱内的温度而产生预扩散作用，平板培养18～24h后，读取结果。 4 结果判定 培养后取出平板，测量抑菌圈的直径。抑菌圈的边缘以肉眼看不到细菌明显生长为限。有的菌株可出现蔓延生长进入抑菌圈，磺胺类药的抑菌圈内会出现轻微生长，这些均不作为抑菌圈边缘。按抑菌圈直径判断细菌的敏感性。 5 实验结果

(推荐)纸片扩散法药敏试验

纸片扩散法药敏试验 纸片扩散法（K-B法）药物敏感试验是在涂有细菌的琼脂平板培养基上按照一定要求贴浸有抗菌药的纸片，培养一段时间后测量抑菌圈大小，并根据相关解释标准进行结果分析，从而得出受试菌株药物敏感性的结论。 中文名 纸片扩散法药敏试验 临床意义 得出受试菌株药物敏感性的结论 目录 .1试验原理 .2试验步骤 .3结果分析 .4注意事项 基本信息 中文名 纸片扩散法药敏试验 临床意义 得出受试菌株药物敏感性的结论 试验原理 纸片扩散药敏试验的原理：将含有定量的抗菌药物的纸片贴在接种有待测菌的固体培养基上，通过抗菌药物在培养基上的扩散，观察是否出现抑菌环，推断是否抑制细菌的生长。药物扩散的距离越远，药物浓度越低抑菌能力越强，因此可根据抑菌环的大小，判定药物对细菌的抑制作用强弱。 试验步骤

1. 待测菌株接种物制备 （1）通用情况：从过夜孵育的平板，优先选择哥伦比亚血琼脂平板上的菌落上挑取数个单个菌落，直接接种4.5%生理盐水制成菌悬液，使用比浊仪调整悬液的浊度使其达到0.5麦氏单位，使菌悬液中含有相当于ATCC 25922大肠埃希菌（1-2）*1012CFU/mL浓度。 （2）特殊情况：嗜血杆菌属（本程序中所指的嗜血杆菌仅包括流感嗜血杆菌、副流感嗜血杆菌）：从过夜孵育的HTM平板，直接接种4.5%生理盐水制成菌悬液，使用比浊仪调整悬液的浊度使其达到0.5麦氏单位，使菌悬液中含有相当于ATCC 25922大肠埃希菌（1-2）*1012CFU/mL浓度。 2.接种平板 （1）调整好悬液的浊度后，用无菌棉签浸入悬液内，紧贴试管内壁在液体上方旋转拭子数次，除去棉签上多余的液体，但也应适度。 （2）用拭子划线整个琼脂表面，从平板顶部到底部，均匀涂布，重复两次此过程（一共三次）每次旋转平板约60度，确保每次接种菌液均匀分布，最后在琼脂平板的边缘涂抹一圈，防止有流动的菌悬液，并使菌液涂布于整块平板的每个角落。 （3）涂布菌液完成的平板，可在室温放置一会（3-5分钟），以便在放置含有药物的纸片前使琼脂吸收表面多余的水分，但放置时间不应超过15分钟。 3.放置测试药敏纸片 根据测试菌的不同，按照预先设定的分组，将抗菌药物纸片贴于已接种细菌的琼脂表面，每个纸片必须压下以确保与琼脂表面完全接触无论是单独放置的纸片或有纸片分配设备纸片必须分布均匀，两纸片之间圆心的距离不少于24mm，纸片边缘距离琼脂边缘不少于15mm。我室使用的MH平板直径为90mm，放置不超过5块纸片。由于一些药物几乎是瞬间扩散的，因此，一旦纸片与琼脂表面接触就不能再移动位置，若位置不佳可在琼脂的另一个位置重新放置一个纸片。 4.孵育 （1）通用情况：在放置好纸片后，15分钟内，将MH琼脂倒置于号孵箱（35℃）中，孵育16～18小时（除外下面列出的需要延长孵育时间的情况）。嗜血杆菌属、淋病奈瑟菌、脑膜炎奈瑟菌和链球菌KB纸片法测试平板应放置于含有5% CO2的环境进行孵育。 （2）延长时间培养：①测试苯唑西林、头孢西丁对葡萄球菌的敏感性时，孵育时间必须达到24h，才能满足对结果判断的要求。②测试万古霉素对金黄色葡萄球菌及肠球菌属的敏感性，孵育时间必须达到24小时。 5.抑菌环直径测量 （1）通用情况：35℃，经过16～18小时的孵育后，将贴有纸片的MH平板置于黑色不反光的背景上，采用游标卡尺，来测量抑菌环的直径（完全抑制区的直径），可以从平板的背面，利用反射光，用肉眼观测，读取最接近的毫米数（读取一个整数）。没有肉眼可见的明显的生长的部位即是抑菌环的边缘。一般情况下，在抑菌环边缘出现只能在放大镜下观察到的微小菌落，可以忽略不计。 MH平板上的抑菌环呈均匀的圆形，测试菌株在平板上呈现融合生长菌苔，若出现单个菌落稀疏生长的情况，则说明接种时调制的菌液浓度过稀，需要寻找可能的原因，并重新再一次进行测试。 （2）特殊情况：①苯唑西林对葡萄球菌的抑菌环：抬起平皿，对向光源，利用透射光观察苯唑西林纸片周围的抑菌环中是否有任何细微的菌落生长，若是出现任何可以辨别的生长，均应判定苯唑西林耐药。②利奈唑胺对葡萄球菌的抑菌环：利用透射光，用游标卡尺读取抑菌环的数值。③复方新诺明的抑菌环：MH平板中存在一定量叶酸抑制剂的拮抗剂，会导致测试菌轻微的生长，因此，在测量复方新诺明的抑菌环直径时应当忽略细微的生长情况（约20%），而将明显出现生长的地方作为抑菌环的边界进行测量。 结果分析

链球菌属纸片扩散法药物敏感试验标准操作规程

链球菌属纸片扩散法药物敏感试验标准操作规程 1．目的 规范链球菌属纸片扩散法药物敏感试验标准操作规程，确保药敏结果的准确。 2．适用范围 本操作规程适用于链球菌属的细菌。 3．选药原则 在本规程所列受试抗菌药物主要根据以下因素选择。 3.1现行版本的CLSI M02和M100对链球菌属纸片扩散法药物敏感试验的要求。 3.2本单位处方手册中的抗菌药物名册。 3.3本单位上一年度链球菌属细菌耐药监控数据。 4．质控 纸片药敏试验应使用肺炎链球菌ATCC49619进行质量控制，质控菌株可接受的抑菌圈范围参见现行版本的CLSI M100-A19。 5．材料和仪器 加5%羊血的MHA培养基、无菌生理盐水、药敏纸片、无菌棉签、35℃孵育箱、测量尺、标准比浊管或比浊仪。 6．操作步骤 参见《药物敏感性试验标准操作规程》。 7．判断标准 见表5-52. 表5-52 葡萄球菌属细菌纸片扩散试验判断标准

判断标准（mm） 药敏纸片备注 敏感（S）中介（I）耐药（R） 青霉素（10U）≥24 参见结果解释9.1 头孢曲松（30μg）≥24 红霉素（15μg）≥21 16~20 ≤15 参见结果解释9.2 9.3 克林霉素（2μg）≥19 16~18≤15 参见结果 解 释 9.2 9.3 万古霉素（30μg）≥17 左氧氟沙星（5μg）≥17 14~16 ≤13 8．注意事项 抑菌圈直径量取的范围为包括药敏纸片在内的被药物完全抑制的区域（肉眼 判断）。量取时应打开药敏平板盖子，用反射光源，用肉眼观测，从上侧测量抑 菌圈直径。测量区域应为肉眼观察无明显可见菌落生长的区域，忽略只有用放大

K-B 纸片扩散法测定抗生素敏感试验

平板霉素类似物生物活性评价 平板霉素对耐甲氧西林金葡菌(MRSA)和耐万古霉素肠球菌(VREF)等耐药菌具有很好的抑制活性。抗菌活性的测试主要针对MRSA和VREF进行测定和相比。最小抑制浓度（MIC）被确定抑制细菌生长的最低浓度。 通过生物活性数据的反馈，进一步指导平板霉素类似物的合成方向，希望获得活性更高、药效活性更好的抗耐药菌抗生素和药物先导化合物。 纸片扩散法测定抗生素敏感试验及MIC： 1.原理： 将含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测试菌的琼脂平板上。纸片中所含的药物吸取琼脂中的水分溶解后不断地向纸片周围区域扩散形成递减的梯度浓度。在纸片周围抑菌浓度范围内测试菌的生长被抑制,从而形成透明的抑菌圈。 抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的敏感程度,并与该药对测试菌的最低抑菌浓度(MIC)呈负相关关系,即抑菌圈愈大,MIC愈小。 2.仪器及试剂 仪器：纸片、试管、移液枪、烘箱、培养皿、培养箱、镊子、pH试纸、量筒、天平、高压灭菌锅、三角瓶、打孔器、超净工作台 试剂：样品溶液、培养基 3.菌液的配置 从琼脂平板挑取新鲜分离的菌落数个或从保存的斜面上移种至3～5mL LB肉汤培养液中37℃培养2～8h，以待生长至轻微或中等浊度。也可直接从孵育18～24h的琼脂平板上挑去纯菌落制成肉汤。为保证药敏试验的准确度和精度，必须对接种菌液的浓度做相应的控制。因此，将菌液稀释并校正浊度至0.5麦氏标准浓度，稀释时使用无菌肉汤或生理盐水，此时菌液的浓度约为1.5×108CFU/mL。 4.接种平板 在超净工作台中，用量筒量取15mL配置好的灭菌培养基，倒在平板中，冷却凝固。吸取稀释好的菌液500μL于洁净的灭菌试管中，加入4500μL的培养基，冷却到不烫手，摇匀，均匀倾倒置已凝固的平板表面，放置冷却至凝

纸片扩散法资料

抗生素敏感实验——纸片扩散 原理：纸片扩散法是将含有定量抗菌药物的滤纸片贴在已接种了测试菌的琼脂表面上，纸片中的药物在琼脂中扩散，随着扩散距离的增加抗菌药物的浓度呈对数减少，从而在纸片的周围形成一种浓度梯度。在药物扩散的同时，纸片周围抑菌浓度范围内的测试菌不能生长，而抑菌浓度范围外的菌株则继续生长，从而在纸片的周围形成透明的抑菌圈。不同抗菌药物抑菌圈的直径因受药物在琼脂中的扩散速率的影响而可能不同，抑菌圈的大小可反映测试菌对测定药物的敏感程度，并与该药对测试菌的最低抑菌浓度（MIC）呈负相关，即抑菌圈越大，MIC越小 原理通俗说法：将含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测定菌的琼脂平板上，纸片中所含的药物吸取琼脂中的水分，溶解后便不断的向纸片周围区域扩散形成递减的梯度浓度。在纸片周围抑菌浓度范围内测试菌的生长被抑制，从而形成透明的抑菌圈。该抑菌圈表示药物对该种细菌的生长繁殖具有抑制作用。通过测定抑菌圈的直径大小，可以判定药物的抑菌强弱，抑菌圈直径越大表示药物抑菌作用越强，抑菌圈直径越小表示药物抑菌作用弱，没有抑菌圈表示该药物没有抑菌作用。并且，经稀释法测得的MIC的对数和用纸片测定相应的菌株得到的抑菌直径之间大致呈直线相关，因此将两种方法相对应地测试各种据菌株所得数据，进行统计学的相关回归分析处理，可得到一条回归线，依此可推断该菌株的MIC，两者呈负相关关系，即MIC愈小，抑菌圈直径愈大。 材料（以大肠杆菌为例）： 1.药品及细菌——诺氟沙星、新霉素、硫酸链霉素、氟苯尼考、卡那霉素、泰乐菌素、生理盐水、磷酸盐缓冲液、MH营养肉汤、MH琼脂培养基、大肠杆菌。 2.器材——纸片、试管、移液器、烘箱、培养皿、培养箱、镊子、1000ml烧杯、PH试纸、量筒、天平、高压灭菌锅、三角瓶、打孔器 方法 1.培养基的制备： 2.药敏纸片的制备 2.1纸片制备：选择优质新华1号滤纸，用打孔器制成直径6mm的圆形滤纸片。每200张一管，经120℃2h灭菌后备用 2.2药物稀释 每张以吸入20μL药液为标准，如纸片薄，药物原液需作调整。根据纸片内各种抗菌药物的不同浓度配制药物原液，其浓度需比纸片浓度大200倍，如青霉素G的纸片为10U/片，青霉素G的原液浓度为2000U/mL，200张纸片内即加入1mL青霉素G原液。药液浓度见下表。

药敏纸片的制备完整版

药敏纸片的制备 HEN system office room 【HEN16H-HENS2AHENS8Q8-HENH1688】

药敏纸片的制备及药敏试验方法 抗菌药物对预防或治疗动物疾病发挥了巨大的作用，但随着抗菌药物在兽医临床的广泛使用，尤其为了防治疾病，常常以亚剂量水平的药物添加于饲料中，以致长期使用后病原微生物产生了耐药性，使本来对治疗病原微生物感染有效的抗菌药物失去作用，给兽医临床上有效地预防和治疗疾病的发生带来一定的困难。通过制作自家药敏纸片进行试验,可快速进行药物的筛选,获得对病原微生物敏感的药物, 对指导临床合理用药，提高治疗效果，节约养殖过程的用药费用，有着重要的意义。 一. 药敏纸片的制备 1.材料 抗菌药物、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、冰醋酸、新华1号定性滤纸、50mL容量瓶、无菌过滤器或一次性过滤器等 2．方法 PBS的配制 A.制备L储备液 LNa 2HPO 4 ： +1000 mL蒸馏水 或 +1000 mL蒸馏水 L NaH 2PO 4 : +1000 mL蒸馏水 或 +1000 mL蒸馏水 B.将两种储备液按下表比例，配制成不同pH值的PBS,室温保存备用 L磷酸缓冲液的配制

抗菌药物原液的配制和保存期限 －20℃4℃抗菌药物溶剂浓度 （?g/mL） 青霉素 PBS 1280 3个月1周半合成青霉素类 PBS 1280 3个月1周头孢菌素类 PBS 1280 3个月1周氨基糖苷类 PBS 1280 3个月4周四环素类 PBS 12803个月1周 PBS 12803个月2周多粘菌素B硫酸 盐 PBS 12803个月2周林可或氯林可霉 素 12803个月2周红霉素先用少量乙醇溶解，再 用 PBS 1280长期长期氯霉素先用少量乙醇溶解，再 用 PBS 12803个月1周利福平先用甲醇溶解，再用 PBS 万古霉素蒸馏水12803个月2周两性霉素B 蒸馏水12803个月1周 12803个月2周5－氟胞嘧啶先用少量二甲基甲酰胺 溶解，再用蒸馏水 1280长期长期甲氧苄氨嘧啶先用L乳酸溶解再用蒸 馏水稀释 各种磺胺药先用NaoH溶解再用蒸2560长期长期

纸片扩散法药物敏感试验

纸片扩散法药物敏感试验 若只根据是否出现抑菌环而不考虑抑菌环的直径大小来判断细菌是否对抗菌药物敏感的实验方法，其结果是不正确的。而纸片扩散法试验是应用标准的方法学原理，根据抑菌环直径大小与最低抑菌浓度的相关性，结合临床上已知敏感或耐药菌株的状态，其结果是可靠的。WHO推荐K-B法，其目的在于技术的简单和可重复性。本法特别适用于肠杆菌科细菌，也可用于快速生长的致病菌，但不适用于其他细菌，如嗜血杆菌、奈瑟菌、专性厌氧菌及酵母样菌等。 无论用哪种方法接种，只要质控菌株的抑菌环在预期范围内，均可按同一解释标准报告结果。但并非从感染患者分离到的微生物都必须做敏感试验，对于污染、机体共生的正常细菌群和那些与感染无关的细菌，可不必做敏感试验，只有那些被认为引起感染的微生物，应先分离提纯、鉴定菌种后再做敏感试验。 试验方法： 一、试验材料： (一)培养基： Kirby-Bauer法指定用Mueller-Hinton琼脂。多年大量的有关敏感试验的方法学研究，均采用该培养基；维持细菌正常发育，绝大多数细菌在此培养基上生长良好。此培养基不拮抗抗菌药物活性以及商品的批次间差异等方面均优于其他培养基。若检测肺炎链球菌的敏感性

时，须在培养基中加5％的脱纤维羊血，制成血平板。测嗜血杆菌及淋病奈瑟菌的敏感性时，在培养基中须加入1％血红素和 2.5mg/ml 辅酶I后应校正pH 7.2～7.4。 制备MH琼脂平板应用直径90cm平皿。在水平的实验台上倾制。琼脂厚为4mm，允许误差为土1mm。琼脂凝固后，应测一下pH。琼脂于板应放4℃保存，在7日内用完。若当天不用，用塑料袋密封包装贮藏于冰箱（2-8℃）。 每批平板都应抽样，在30-50℃下培养24h或更长时间检查是否被感染。 MH琼脂培养基配方(1L)： Beef Extract 2.0g Acid Hydrolysis of Casein 17.5g Starch 1.5g Agar 17.0g Final PH 7.3 at 25℃ 高压灭菌后立即水浴冷却至45-50℃。 (二)药物纸片 抗菌药物纸片直径约为6.00～6.35mm，每片的吸水量约20μl。采用K-B法，纸片的药物含量必须与该法规定的一致，不得任意更改。药物纸片可以购买，也可自制，用前必须做质量鉴定。用以下两个指标判定纸片的质量： 1、片间差：是衡量不同纸片含药是否均一的指标。 测定方法：以质控菌株接种M-H琼脂平板，一块平板上贴6张相同的纸片。35C过夜培养后，记录6个抑菌环直径，其最大和最小之

肠杆菌科纸片扩散法药物敏感试验标准操作规程

肠杆菌科纸片扩散法药物敏感试验标准操作规程 1．目的 规范肠杆菌科细菌纸片扩散法药物敏感试验标准操作规程，确保药敏结果的准确。 2．适用范围 本操作规程适用于肠杆菌科细菌。 3．选药原则 在本规程所列受试抗菌药物主要根据以下因素选择。 3.1现行版本的CLSI M02和M100对肠杆菌科细菌纸片扩散法药物敏感试验的要求。 3.2细菌耐药监控网每年发布的监控要求。 3.3本单位上一年度假单胞菌属细菌耐药监控数据。 4．质控 用大肠埃希菌ATCC25922、大肠埃希菌ATCC35218（用于β-内酰胺/β-内酰胺抑制剂合剂）进行质量控制，质控菌株可接受的抑菌圈范围参见现行版本的CLSIM100-A19。质控频率参见《药物敏感性试验标准操作规程》。 5．材料和仪器 M-H培养基，无菌生理盐水，药敏纸片，无菌棉签，35℃孵育箱，测量尺，标准比浊管或比浊仪。 6．操作步骤 参见《药物敏感性试验标准操作规程》。 7．判断标准 见表5-45.

表5-45 肠杆菌科细菌纸片扩散试验判断标准 判断标准（mm） 药敏纸片备注 敏感中介耐药 氨苄西林（10μg）≥17 14~16 ≤13 参见结果解释 哌拉西林（100μg）≥21 18~20 ≤17 氨苄西林/舒巴坦（10/10μg）≥15 12~14 ≤11 哌拉西林/他唑巴坦（100/10μg）≥21 18~20 ≤17 头孢唑林（30μg）≥18 15~17 ≤14 头孢克洛（30μg）≥18 15~17 ≤14 头孢呋辛（30μg）≥18 15~17 ≤14 头孢噻肟（30μg）≥23 15~22 ≤14 参见结果解释 头孢他啶（30μg）≥18 15~17 ≤14 参见结果解释 头孢吡肟（30μg）≥18 15~17 ≤14 头孢他啶/克拉维酸（30/10μg）参见结果解释 头孢噻肟/克拉维酸（30/10μg）参见结

葡萄球菌属纸片扩散法药物敏感试验标准操作规程

葡萄球菌属纸片扩散法药物敏感试验标准操作规程 1．目的 规范葡萄球菌属纸片扩散法药物敏感试验标准操作规程，确保药敏结果的准确。 2．适用范围 本操作规程适用于葡萄球菌属的细菌。 3．选药原则 在本规程所列受试抗菌药物主要根据以下因素选择。 3.1现行版本的CLSI M02和M100对葡萄球菌属纸片扩散法药物敏感试验的要求。 3.2本单位处方手册中的抗菌药物名册。 3.3本单位上一年度葡萄球菌属细菌耐药监控数据。 4．质控 纸片药敏试验应使用金黄色葡萄球菌ATCC25923和大肠埃希菌ATCC35218（用于β-内酰胺/β-内酰胺抑制剂合剂）进行质量控制，质控菌株可接受的抑菌圈范围参见现行版本的CLSI M100-A19。 5．材料和仪器 M-H培养基，无菌生理盐水，药敏纸片，无菌棉签，35℃孵育箱，测量尺。 6．操作步骤 根据CLSI M2-A10和M100-S19制定本操作步骤。 6.1菌液制备从孵育了18~24小时的非选择性培养基（如血琼脂）平板上，挑取单个菌落，直接用无菌生理盐水制成悬液作为接种物，将浊度调整至0.5麦氏标准。

应在接种物制备后15分钟内接种M-H琼脂平板。用无菌棉拭蘸取菌液， 在管内壁液面上方旋转紧压，将多余菌液挤去，然后在琼脂表面均匀涂布接种3 次，每次旋转平板60°以确保接种菌的均匀分布，最后沿平板内缘涂抹一周。 6.2接种好的平板可敞开盖子在室温下干燥3~5分钟（不要超过15分钟）， 然后用纸片分配器将纸片放入琼脂表面并轻压，使纸片与琼脂表面完全接触。各 纸片中心相距应大于24mm，通常150mm平板至多放置12个纸片，90~100mm 平板至多放置6个纸片。由于某些药物在纸片放入琼脂平板后几乎立即扩散，所 以一旦纸片放入后就不能再移动，若要重新放置，可用一个新的纸片放在平板的 另一个位置。 6.3应在纸片贴好后15分钟内将平板倒置放入35℃孵箱，若超过15分钟 将使纸片中的抗菌药物提早扩散。非苛养菌的药敏解释性标准是建立在这些菌株 在空气中孵育的基础上，一些药物（如氨基糖苷类、大环内酯类和四环素）的抑 菌圈直径受CO2的影响有较大的改变，所以本菌属细菌不能孵育在CO2孵箱。 7．判断标准 见表5-50. 表5-50 葡萄球菌属细菌纸片扩散试验判断标准 判断标准（mm） 药敏纸片备注 敏感中介耐药

纸片法KB药敏实验原理及实际操作方法

纸片法K B药敏实验原 理及实际操作方法 Document number【980KGB-6898YT-769T8CB-246UT-18GG08】

纸片扩散药敏试验的原理：将含药物的纸片贴在接种有待测菌的固体培养基上，通过药物在培养基上的扩散，观察是否出现抑菌环，推断是否抑制细菌的生长。药物扩散的距离越远，药物浓度越低抑菌能力越强，因此可根据抑菌环的大小，判定药物对细菌的抑制作用强弱。药敏试验根据美国临床标准委员会(NCCLS) 推荐的 K–B 琼脂法进行。本实验通过纸片药敏试验法观察多酸化合物对细菌有无抑制作用，为试管二倍稀释法提供有效基础数据。 用无菌棉拭子蘸取已经校正的麦氏比浊浓度的菌液，挤掉多余菌液。用棉拭子涂布整个 MH 培养基表面，每次将平板旋转60°，涂抹三次，最后沿周边擦绕两圈，以保证菌液涂抹均匀。待平板上的水分被琼脂完全吸收后贴含药纸片。用无菌镊子取药敏纸片贴在平板表面，纸片一贴后不可再拿起。每个平板贴 5 张纸片，纸片间距不少于 24 mm，纸片中心距平皿边缘不少于 15 mm。在菌接种后 15 min内贴完纸片。将平板反转，37℃恒温孵育 18~24 h 后取出，用游标卡尺测量抑菌圈直径，由平板背面测量最接近的整数毫米数并记录，每个平板各设三个平行组平板，测量抑菌直径时，应取三个平板的平均值为最终结果。抑菌环边缘以肉眼见不到细菌明显生长为限。 每次药敏试验用大肠杆菌 ATCC25922 和金黄色葡萄球菌 ATCC25923 做质控。药敏判读标准根据 CLSI 标准 (2009 年) 所载受试药对质控菌的抑菌环直径范围作为实验质控标准（判读标准见表 5-2）[84]。 表5-2 纸片扩散法－用质控菌株抑菌环直径(mm)允许范围监测抗菌药物敏感性试验准确性Table 5-2 Disc diffusion test － according the admissible range of quality-control strain’s inhibition zone diameter to monitor the accuracy of antibiotics susceptibility test (mm) 抗菌药物纸片含药量 （μg） 抑菌环直径(mm) S I R 大肠埃希菌 ATCC25922 金黄色葡萄球菌 ATCC25923 KF30≥1815–17≤1416–2227–35 AMP10≥1714–16≤1328–3527–28 CIP5≥2116–20≤1530–4022–30 NOR5≥1713–16≤1215–2129–37

纸片法(KB)药敏实验原理及实际操作方法

纸片扩散药敏试验的原理：将含药物的纸片贴在接种有待测菌的固体培养基上，通过药物在培养基上的扩散，观察是否出现抑菌环，推断是否抑制细菌的生长。药物扩散的距离越远，药物浓度越低抑菌能力越强，因此可根据抑菌环的大小，判定药物对细菌的抑制作用强弱。药敏试验根据美国临床标准委员会 (NCCLS) 推荐的 K–B 琼脂法进行。本实验通过纸片药敏试验法观察多酸化合物对细菌有无抑制作用，为试管二倍稀释法提供有效基础数据。 用无菌棉拭子蘸取已经校正的 0.5 麦氏比浊浓度的菌液，挤掉多余菌液。用棉拭子涂布整个 MH 培养基表面，每次将平板旋转 60°，涂抹三次，最后沿周边擦绕两圈，以保证菌液涂抹均匀。待平板上的水分被琼脂完全吸收后贴含药纸片。用无菌镊子取药敏纸片贴在平板表面，纸片一贴后不可再拿起。每个平板贴 5 张纸片，纸片间距不少于 24 mm，纸片中心距平皿边缘不少于 15 mm。在菌接种后 15 min内贴完纸片。将平板反转，37℃恒温孵育 18~24 h 后取出，用游标卡尺测量抑菌圈直径，由平板背面测量最接近的整数毫米数并记录，每个平板各设三个平行组平板，测量抑菌直径时，应取三个平板的平均值为最终结果。抑菌环边缘以肉眼见不到细菌明显生长为限。 每次药敏试验用大肠杆菌ATCC25922 和金黄色葡萄球菌ATCC25923 做质控。药敏判读标准根据 CLSI 标准 (2009 年) 所载受试药对质控菌的抑菌环直径范围作为实验质控标准（判读标准见表 5-2）[84]。 表5-2 纸片扩散法－用质控菌株抑菌环直径(mm)允许范围监测抗菌药物敏感性试验准确 性 Table 5-2 Disc diffusion test － according the admissible range of quality-control strain’s inhibition zone diameter to monitor the accuracy of antibiotics

纸片法(KB)药敏实验原理及实际操作方法

. .. 纸片扩散药敏试验的原理：将含药物的纸片贴在接种有待测菌的固体培养基上，通过药物在培养基上的扩散，观察是否出现抑菌环，推断是否抑制细菌的生长。药物扩散的距离越远，药物浓度越低抑菌能力越强，因此可根据抑菌环的大小，判定药物对细菌的抑制作用强弱。药敏试验根据美国临床标准委员会 (NCCLS) 推荐的 K –B 琼脂法进行。本实验通过纸片药敏试验法观察多酸化合物对细菌有无抑制作用，为试管二倍稀释法提供有效基础数据。 用无菌棉拭子蘸取已经校正的 0.5 麦氏比浊浓度的菌液，挤掉多余菌液。用棉拭子涂布整个 MH 培养基表面，每次将平板旋转 60°，涂抹三次，最后沿周边擦绕两圈，以保证菌液涂抹均匀。待平板上的水分被琼脂完全吸收后贴含药纸片。用无菌镊子取药敏纸片贴在平板表面，纸片一贴后不可再拿起。每个平板贴 5 张纸片，纸片间距不少于 24 mm ，纸片中心距平皿边缘不少于 15 mm 。在菌接种后 15 min 内贴完纸片。将平板反转，37℃ 恒温孵育 18~24 h 后取出，用游标卡尺测量抑菌圈直径，由平板背面测量最接近的整数毫米数并记录，每个平板各设三个平行组平板，测量抑菌直径时，应取三个平板的平均值为最终结果。抑菌环边缘以肉眼见不到细菌明显生长为限。 每次药敏试验用大肠杆菌 ATCC25922 和金黄色葡萄球菌 ATCC25923 做质控。药敏判读标准根据 CLSI 标准 (2009 年) 所载受试药对质控菌的抑菌环直径范围作为实验质控标准（判读标准见表 5-2）[84]。 表5-2 纸片扩散法－用质控菌株抑菌环直径(mm)允许范围监测抗菌药物敏感性试验准确 性 Table 5-2 Disc diffusion test － according the admissible range of quality-control strain’s inhibition zone diameter to monitor the accuracy of antibiotics susceptibility test (mm) 抗菌 药物 纸片含药量（μg ） 抑菌环直径(mm) S I R 大肠埃希菌ATCC25922 金黄色葡萄球菌ATCC25923 KF 30 ≥18 15–17 ≤14 16–22 27–35 AMP 10 ≥17 14–16 ≤13 28–35 27–28 CIP 5 ≥21 16–20 ≤15 30–40 22–30 NOR 5 ≥17 13–16 ≤12 15–21 29–37 KF: 头孢噻吩；AMP: 氨苄西林；CIP: 环丙沙星；NOR: 诺氟沙星；S: 敏感；I: 中介；R: 耐药