酶
一、选择题
1．酶促反应的初速度不受哪一因素影响（）
A．[S] B．[E] C．[pH]
D．时间E．温度
2．对于一个符合米氏方程的酶来说：当[S]=K m；[I]=k1时，I为竞争性抑制剂，则υ为（）A．V max×2/3 B．V max×1/3 C．V max×1/2
D．V max×1/4 E．V max×1/6
3．下列有关某一种酶的几个同工酶的陈述哪个是正确的?（）
A．由不同亚基组成的寡聚体B．对同一底物具有不同专一性
C．对同一底物具有相同的K m值D．电泳迁移率往往相同
E．结构相同来源不同
4．别构酶与不同浓度的底物发生作用，常呈S形曲线，这说明（）A．别构酶是寡聚体
B．别构酶催化几个独立的反应并最后得到终产物
C．与单条肽链的酶相比，别构酶催化反应的速度较慢
D．别构酶结合一个底物后，将促进它与下一个底物的结合，并增强酶活力
E．产物的量在不断增加
5．关于米氏常数K m的说法，哪个是正确的（）
A．饱和底物浓度时的速度B．在一定酶浓度下，最大速度的一半
C．饱和底物浓度的一半D．速度达最大速度半数时的底物浓度
E．降低一半速度时的抑制剂浓度
6．如果要求酶促反应υ=V max×90%，则[S]应为K m的倍数是（）
A．4．5 B．9 C．8
D．5 E．90
7．在下面酶促反应中的V max为（）
A．K3[Et] B．K2/K3C．K2/K1
D．（K2+K3）/K1E．都不对
8．酶的纯粹竞争性抑制剂具有下列哪种动力学效应?（）
A．V max不变，K m增大B．V max不变，K m减少C．V max增大，K m不变
D．V max减少，K m不变E．V max和K m都不变
9．作为催化剂的酶分子，具有下列哪一种能量效应?（）
A．增高反应活化能B．降低反应活化能C．增高产物能量不平
D．降低产物能量不平E．降低反应自由能
10．酶分子经磷酸化作用进行的化学修饰主要发生在哪个氨基酸上?（）A．Phe B．Cys C．Lys
D．Trp E．Ser
11．下列哪种酶能使水加到碳-碳双键上，而又不使键断裂?（）
A．水化酶B．酯酶C．水解酶
D．羟化酶E．脱氢酶
12．下列哪种肠胃道消化酶不是以无活性的酶原方式分泌的?（）
A．核糖核酸酶B．胰蛋白酶C．糜蛋白酶
D．羧肽酶E．胃蛋白酶
13．下面关于酶的描述，哪一项不正确?（）
A．所有的蛋白质都是酶
B．酶是生物催化剂
C．酶是在细胞内合成的，但是可以在细胞外发挥催化功能
D．酶具有专一性
E．酶在强碱、强酸条件下会失活
14．下列关于牛胰蛋白酶的解释，哪一项是错误的?（）
A．它是一种蛋白质B．它可以催化蛋白质氧化分解
C．它来自牛的胰脏D．它发挥作用时，对底物具有选择性E．不需要辅酶
15．测定酶活力时，下列条件哪个不对（）
A．[S]>>[E] B．[S]=[Et] C．P→O
D．测初速度E．最适pH
16．在测定酶活力时，用下列哪种方法处理酶和底物才合理?（）A．其中一种用缓冲液配制即可
B．分别用缓冲液配制，然后混合进行反应
C．先混合，然后保温进行反应
D．其中一种先保温，然后再进行反应
E．分别用缓冲液配制，再预保温两者，最后混合进行反应
17．下列哪一种酶是简单蛋白质?（）
A．牛胰核糖核酸酶B．丙酮酸激酶C．乳酸脱氢酶
D．烯醇化酶E．醛缩酶
18．下列哪一项不是辅酶的功能?（）
A．转移基团B．传递氢
C．传递电子D．某些物质分解代谢时的载体
E．决定酶的专一性
19．下列关于酶活性部位的描述，哪一项是错误的?（）
A．活性部位是酶分子中直接与底物结合，并发挥催化功能的部位
B．活性部位的基团按功能可分为两类：一类是结合基团，一类是催化基团C．酶活性部位的基团可以是同一条肽链但在一级结构上相距很远的基团D．不同肽链上的有关基团不能构成该酶的活性部位
E．酶的活性部位决定酶的专一性
20．下列关于乳酸脱氢酶的描述，哪一项是错误的?（）
A．乳酸脱氢酶可用LDH表示B．它是单体酶
C．它的辅基是NAD+D．它有六种结构形式
E．乳酸脱氢酶同工酶之间的电泳行为不尽相同
21．下列哪一项不是酶具有高催化效率的因素?（）
A．加热B．酸碱催化C．“张力”和“形变”
D．共价催化E．邻近定位效应
22．当[S]=4K m时，υ=（）
A．V max B．V max×4/3 C．V max×3/4
D．V max×4/5 E．V max×6/5
23．能够与DIEP结合的氨基酸残基是以下哪一种?（）
A．Cys B．Ser C．Pro
D．Lys E．Glu
24．下列哪一种抑制剂不是琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制剂?（）
A．乙二酸B．丙二酸C．丁二酸
D．α-酮戊二酸E．碘乙酸
25．下列关于别构酶的叙述，哪一项是错误的?（）
A．所有别构酶都是多聚体，而且亚基数目往往是偶数
B．别构酶除了活性部位外，还含有调节部位
C．亚基与底物结合的亲和力因亚基构象不同而变化
D．亚基构象改变时，要发生肽键断裂的反应
E．酶构象改变后，酶活力可以升高也可以降低
26．下列哪一项不是K m值的功能（）
A．K m值是酶的特征物理常数，可用于鉴定不同的酶
B．K m值可以表示酶与底物之间的亲和力，K m值越小、亲和力越大
C．K m值可以预见系列反应中哪一步是限速反应
D．用K m值可以选择酶的最适底物
E．比较K m值可以估计不同酶促反应速度
27．磺胺药物治病原理是（）
A．直接杀死细菌
B．细菌生长某必需酶的竞争性抑制性剂
C．细菌生长某必需酶的非竞争性抑制剂
D．细菌生长某必需酶的不可逆抑制剂
E．分解细菌的分泌物
28．有机磷农药作为酶的抑制剂是作用于酶活性中心的（）A．巯基B．羟基C．羧基
D．咪唑基E．氨基
29．丙二酸对琥珀酸脱氢酶的影响是属于（）
A．产物反馈抑制B．产物阻遏抑制C．非竞争性抑制D．竞争性抑制E．不可逆抑制
30．酶的不可逆抑制的机制是由于抑制剂（）
A．使酶蛋白变性B．与酶的催化中心以共价键结合
C．与酶的必需基团结合D．与活性中心的次级键结合
E．与酶表面的极性基团结合
31．谷丙转氨酶的辅酶是（）
A．NAD+B．NADP+ C．磷酸吡哆醛D．烟酸E．核黄素
32．酶的活性中心是指（）
A．酶分子上的几个必需基团
B．酶分子与底物结合的部位
C．酶分子结合底物并发挥催化作用的关键性三维结构区
D．酶分子中心部位的一种特殊结构
E．酶分子催化底物变成产物的部位
33．酶原激活的实质是（）
A．激活剂与酶结合使酶激活
B．酶蛋白质的变构效应
C．酶原分子一级结构发生改变从而形成或暴露出酶的活性中心
D．酶原分子的空间构象发生了变化而一级结构不变
E．以上都不对
34．同工酶的特点是（）
A．催化作用相同，但分子组成和理化性质不同的一类酶
B．催化相反应，分子组成相同，但辅酶不同的一类酶
C．催化同一底物起不同反应的酶的总称
D．多酶体系中酶组分的统称
E．催化作用，分子组成及理化性质相同，但组织分布不同的酶
35．变构酶的底物浓度曲线呈S形，它说明（）
A．此变构酶为具负性同效应的酶
B．此变构酶中，底物分与其中一亚基结合后能促进其他亚基与底物的结合
C．变构酶是米氏酶的一种特例
D．变构酶所催化的反应包括一系列步骤
E．此变构酶的多个底物分子同时与酶快速结合
36．酶的高效率在于（）
A．增加活化能B．降低反应物的能量水平
C．增加反应物的能量水平D．降低活化能
E．以上都不对
37．酶促反应的初速度（）
A．与[S]成正比B．与[S无关] C．与Km成正比
D．与[I]成正比E．与温度成正比
38．米氏常数在推导过程中引入了哪项假设?（）
A．酶浓度为底物浓度的一半
B．由于ES在存在使底物初始浓度降低
C．由于酶浓度很大，所以[E]基本不变
D．忽略反应ES→E+S的存在
E．由于P→O，所以不考虑反应E+P→ES的存在
39．将米氏方程改为双倒数方程后（）
A．1/υ与1/[S]成反比B．以1/υ对1/[S]作图，其横轴为1/[S]
C．υ与[S]成正比D．K m值在纵轴上
E．V max值在纵轴上
40．竞争性抑制作用特点是指抑制剂（）
A．与酶的底物竞争酶的活性中心B．与酶的产物竞争酶的活性
C．与酶的底物竞争非必需基团D．与酶的底物竞争辅酶
E．与其他抑制竞争酶的活性中心
二、填空题
1．测定酶活力的主要原则是在特定的、条件下，测定酶促反应的速度。
2．使酶具有高催化效应的因素是、、、和。
3．全酶由和组成。
4．酶对的性称为酶的专一性，一般可分为、和。5．L-精氨酸只作用于L-精氨酸，而对D-精氨酸无作用，因为此酶具有专一性。6．同工酶是一类相同、不同的一类酶。
7．醛缩酶属于第大类的酶。
8．磺胺类药物能抑制细菌生长，因为它是的结构类似物，能性地抑制酶活性。
9．pH对酶活力的影响原因有和。
10．在某一酶溶液中加入GSH能提高此酶活力，那么可以推测基可能是酶活性中心的必需基团。
11．乳酸脱氢酶是以辅酶的，它的酶蛋白由个亚基构成，其亚基可分
型和型，根据不同类型亚基的组合，乳酸脱氢酶可分为种同工酶。12．目前认为酶促反应的机制是。
13．如果一个酶对A、B、C三种底的米氏常数分别为K m a、K m b和K m c，且K m a>K m b>K m c，则此酶的最适底物是，与酶亲和力最小的底物是。
14．欲使酶促反应速度达到最大速度的90%，此时底物浓度应是此酶K m值的倍。15．调节酶类一般分为(主要)两大类和。
16．激酶是一类催化的酶。
17．影响酶促反应速度的因素有。18．依酶促反应类型，酶可以分为六大类为。19．pH对酶活力的关系是一种曲线，其原因是。20．酶经分离提纯后保存方法是。
21．酶的专一性分为两大类。
22．根据调节物分子不同，别构效应分为和。根据调节物使别构酶反应速度对[S]敏感性不同分为和。
三、是非判断题
1．一般酶和底物大小差不多。
2．酶的分类是依据其催化反应类型。
3．酶影响它所催化反应的平衡。
4．酶影响它所催化反应的平衡的到达时间。
5．如果有一个合适的酶的存在，达到化学能阈所需的活化能就减少。
6．在酶已被饱和的情况下，底物浓度地增加能使酶促反应初速度增加。
7．当[ES]复合物的量增加时，酶促反应速度也增加。
8．酶促反应的米氏常数与所用的底物无关。
9．在极低底物浓度时，酶促反应初速度与底物浓度成正比。
10．如果已知在给定酶浓度时的K m和V max，则可计算在任何底物浓主度时的酶促反应初速度。
11．对于酶的催化活性来说，酶蛋白的一级结构是必需的，而与酶蛋白的构象关系很大。12．在酶的活性部位，仅仅只有侧链带电荷的氨基酸残基直接参与酶的催化反应。
13．测定酶活时，一般测定+ΔP比测定-ΔS更为准确。
14．在酶催化过程中，[ES]复合物的形成是可逆的。
15．1/K m愈大，表明酶与底物的亲和力越小。
16．辅酶、辅基在酶催化作用中，主要是协助酶蛋白的识别底物。
17．变构剂与酶的催化部位结合后使酶的构象改变，从而改变酶的活性，称为酶为变构作用。18．酶原激活过程实际就是酶活性中心形成或暴露的过程。
19．酶经固定化后，一般稳定性增加。
20．作为辅因子的金属离子，一般并不参与酶活性中心的形成。
四、名词解释题
1．全酶
2．酶的辅助因子
3．辅酶的辅基
4．酶活力
5．酶的活力单位(U)
6．酶的比活力
7．酶的转换数：K cat
8．米氏常数K m
9．激活剂
10．抑制剂
11．不可逆抑制作用与可逆抑制作用
12．竞争性抑制作用
13．非竞争性抑制作用
14．酶的专一性
15．酶的活性中心
16．多酶体系
17．调节酶
18．别构效应
19．别构酶
20．酶原激活
21．寡聚酶
22．同工酶
23．诱导酶
五、问答及计算题
1．在酶的纯化过程中通常会丢失一些活力，但偶尔亦可能在某一纯化步骤中酶活力可超过100%，产生这种活力增高的原因是什么？
2．试述使用酶作催化剂的优缺点。
3．如果你从刀豆中得到了一种物质，很可能是脲酶，你怎样确定它是蛋白质，如何判断它是否是酶？
4．试简述K m的意义及应用。
5．当[S]=0.5K m；[S]=4K m；[S]=9K m；[S]=99K m时，计算υ占V max的百分比。
6．某酶制剂2mL内含脂肪10mg，糖20mg，蛋白质25mg，其酶活力与市售酶商品（每克含2000酶活力单位）10mg相当，问酶制剂的比活力是多少？
7．酶定量测定中要控制哪些条件？为什么？
8．何谓米氏常数，它的意义是什么？
9．米氏方程的实际意义和用途是什么？它有什么局限性？
10．别构酶有何特性？
参考答案：
一、选择题
1、D
2、B
3、A
4、D
5、D
6、B
7、A
8、A
9、B 10、E 11、A 12、A 13、A 14、B 15、B 16、E 17、A 18、E 19、D 20、B 21、A 22、D 23、B 24、E 25、D 26、E 27、B 28、B 29、D 30、B 31、C 32、C 33、C 34、A 35、B 36、D 37、A 38、E 39、B 40、A
二、填空题
1．温度；pH；初
2．酸碱催化；共价催化；邻近定向效应；分子张力的形成；低介电区的形成
3．酶蛋白；辅助因子
4．底物；选择性；立体异构专一性；绝对专一性；相对专性
5．立体异构
6．功能；组成或结构
7．四
8．对氨基苯甲酸；竞争；二氢叶酸合成酶
9．影响酶和底物的基团解离；使酶变性
10．巯基(-SH)
11．NAD；四；M；H；五
12．通过诱导契合过程来降低反应的活化能
13．C；A
14．9
15．别构酶；共价调节酶
16．磷酸基团转移并伴随能量转移反应
17．[S]，[E]，pH，温度，激活剂，抑制剂
18．氧化还原酶类；移换酶类；水解酶类；裂合酶类；异构酶类；合成酶类
19．钟罩形；酶在最适pH条件下活力最大，高于或低于最适pH时，酶活力均下降20．浓缩低温保存；冰冻干燥保存
21．结构专一性和立体异构专一性
22. 同促效应；异促效应；正协同效应；负协同效应
三、是非判断题
1．错2．对3．错4．对5．对6．错7．对8．错9．对10．对11．错12．错13．对14．对15．错16．错17．错18．对19．对20．错
四、名词解释题
1．全酶
是酶的一种，由酶蛋白和辅助因子构成的复合物称为全酶。
2．酶的辅助因子
构成全酶的一个组分，主要包括金属离子及水分子有机化合物，主要作用是在酶促反应中运输转移电子、原子或某些功能基的作用。
3．辅酶的辅基
大多数情况下，可通过透析或其他物理方法从全酶中除去，与酶蛋白结合松弛的辅助因子叫辅酶。以共价健和酶蛋白牢固结合，不易用透析等方法除去的辅助因子叫辅基。二者的区别只在于与酶蛋白结合的牢固程度不同，无严格绝对的界限。
4．酶活力
也称酶活性，指酶催化一定化学反应的能力，可用在一定条件下，它所催化的某一化学反应的速度表示。单位：浓度/单位时间。
5．酶的活力单位(U)
酶活力的度量单位。1961年国际酶学委员会规定：1个酶活力单位是指特定条件下，在1min 内能转化1μmol底物的酶量，特定条件：温度25℃，其他条件采用最适，另外也存在人们普通采用的其他酶活力单位。
6．酶的比活力
即酶含量的多少，定为每毫克酶蛋白所具有的酶的活力单位，一般用U/mg蛋白表示。7．酶的转换数：K cat
K cat指每秒钟每个酶分子转换底物的微摩尔数，代表酶的催化效率。
8．米氏常数K m
米氏常数K m:是米氏酶的特征常数之一。在反应中K m=(K2+K3)/K1，K m值的物理意义在于它是当酶促反应速度达到最大反应速度一半时的底物浓度。单位是：mol/L等。
9．激活剂
凡能提高酶活性的物质均称为激活剂。其中大部分为离子或简单的有机化合物，另外还有对酶原起激活作用的具有蛋白质性质的大分子物质。
10．抑制剂
能使酶分子上的某些必需基团(主要指酶活性中心上的一些基团)发生变化，从而引起酶活力下降，甚至丧失，致使酶反应速度降低的物质。
11．不可逆抑制作用与可逆抑制作用
前者是某些抑制剂通常以共价键与酶蛋白中的基结合，而使酶失活，不能用透析、超滤等物理方法除去的抑制作用。后者则指抑制剂以非共价键与酶蛋白中的基团结合，可用透析等物理方法除去而使酶重新恢复活性。
12．竞争性抑制作用
竞争性抑制剂因具有与底物相似的结构所以与底物竞争酶的活性中心，与酶形成可逆的EI 复合物，而使EI不能与S结合，从而降低酶反应速度的可逆抑制作用。这种抑制作用可通过增加底物浓度来解除。
13．非竞争性抑制作用
非竞争性抑制剂与酶活性中心以外的基团结合，形成EI或ESI复合物，从而不能进一步形成E和P，因此使酶反应速度降低的可逆抑制作用，不能通过增加底物浓度的方法解除。14．酶的专一性
即特异性，是指酶催化特定的底物发生一定的化学反应生成特定产物的特性。
15．酶的活性中心
指在一级结构上可能相距甚远，甚至位于不同肽链上的少数几个氨基酸残基或这些残基上的基团通过肽链的盘绕折叠而在三维结构上相互靠近，形成一个能与底物结合并催化其形成产物的位于酶蛋白表面的特化的空间区域。对需要辅酶的酶来说，辅酶分子或其上的某一部分结构常是活性中心的组成部分。
16．多酶体系
在细胞内的某一代谢过程中，由几个酶形成的反应链体系，称为多酶体系。一般分为可溶性的、结构化的和在细胞结构上有定位关系的三种类型。
17．调节酶
在多酶体系中某些酶因其本身活性受到严格的调节控制从而对代谢反应起调节作用，此类酶统称为调节酶。
18．别构效应
调节物(或效应物)与别构酶酶分子的别构中心结合后，诱导出或稳定住酶分子的某种构象，使酶活性中心对底物的结合与催化作用受到影响，从而调节酶的反应速度及代谢过程，此效应称为酶的别构效应。
19．别构酶
一种一般具多个亚基，在结构上除具有酶的活性中心外，还具有可结合调节物的别构中心的酶，活性中心负责酶对底物的结合与催化，别构中心负责调节酶反应速度。
20．酶原激活
某些酶先以无活性的酶原形式合成及分泌，然后在到达作用部位时由另外的物质作用，使其失去部分肽段从而形成或暴露活性中心形成有活性的酶分子的过程。如胃蛋白酶原是无活性的，它在胃液中经胃酸的作用或有活性的胃蛋白酶的作用变成有活性的胃蛋白酶分子。21．寡聚酶
由两个或两个以上亚基组成的酶分子，相对分子质量一般从35000到几百万以上的酶。22．同工酶
指催化同一种化学反应，而其酶蛋白本身的分子结构组成及理化性质有所不同的一组酶。23．诱导酶
指当生物体或细胞中加入特定诱导物后，而诱导产生的酶，称为诱导酶。它的含量要诱导物诱导下显著增高，这种诱导物往往是该酶的底物或底物类似物。
五、问答及计算题
1．在酶的纯化过程中通常会丢失一些活力，但偶尔亦可能在某一纯化步骤中酶活力可超过100%，产生这种活力增高的原因是什么？
答：在酶的纯化过程中，如果某一纯化步骤中酶活力超过了100%，则很有可能是由于此酶的激活剂(包括别构激活剂)的加入或抑制剂的丢失所造成的。这些激活剂或抑制剂你可能原先并不知道。
2．试述使用酶作催化剂的优缺点。
答：优点：①专一性高，副反应很少，后处理容易。
②催化效率高，酶用量少。
③反应条件温和，可以在近中性的水溶液中进行反应，不需要高温、高压。
④酶的催化活性可以进行人工控制
缺点：①酶易失活，酶反应的温度、pH、离子强度等要很好控制。
②酶不易得到，价格昂贵。
③酶不易保存。
3．如果你从刀豆中得到了一种物质，很可能是脲酶，你怎样确定它是蛋白质，如何判断它是否是酶？
答：第一步：首先判断此物质是否是蛋白质，如用双缩脲反应或其他蛋白质显色反应来进行鉴定。另外也可以用酸或碱水解，同时用甲醛滴定法来检测水解程度(此物质若是蛋白质则应有蛋白质的显色反应，酸碱水解时游离氨基酸的含量随时间而升高)。
第二步：将此蛋白质加入到含有尿素的缓冲体系中进行催化反应，用奈氏试剂检测是否有氨的生成。将此蛋白质加热后再作此反应，检测是否还有氨的生成(此蛋白质若是脲酶则应有氨的生成。将此蛋白质加热后再作此反应，检测是否还有氨的生成(此蛋白质若是脲酶则应有氨的生成，而蛋白质加热后则不再有氨的生成)。
4．试简述K m的意义及应用。
答：K m值是当酶促反应速度达到最大反应速度一半时的底物浓度。首先当K m值近似等于
K2/K1时，它代表了酶与底物的亲和力的大小；利用酶对不同底物的不同K m值，我们可以找出酶的最适底物。其次，K m值是酶的一种特征性常数；利用它我们可以判断区分酶的种类。最后，利用K m值可以换算[S]与υ的关系。
5．当[S]=0.5K m；[S]=4K m；[S]=9K m；[S]=99K m时，计算υ占V max的百分比。
答：33.3% V max；80% V max；90% V max；99．01% V max。
6．某酶制剂2mL内含脂肪10mg，糖20mg，蛋白质25mg，其酶活力与市售酶商品（每克含2000酶活力单位）10mg相当，问酶制剂的比活力是多少？
答：比活力=总活力/mg蛋白
市售商品比活力为2000U/1000mg=2U/mg
商品酶总活力为10mg×2(U/mg)=20U
其比活力为：20U/25mg=0．8U/mg蛋白
7．酶定量测定中要控制哪些条件？为什么？
答：酶量不能用重量或浓度表示，而用酶活力(单位)来表示。酶活力单位的定义是在一定条件下，一定时间内将一定量的底物转为产物的酶量定为一个单位。酶活力测定可以测定底物的单位时间消耗量，更常用的是产物的单位时间的产量，测定结果是否真实反映酶活力与测定时的酶促反应条件是否适宜有关。
①对pH的要求，同一种酶在不同的pH下测得的反应速度不同，最适pH时酶的活力最大。pH之所以影响酶活力是因为酶是蛋白质，过酸过碱都会使酶变性，pH既影响酶活性中心基团的解离状态，又影响底物的解离，从而影响催化活性，最适pH能保证酶本身的稳定性及催化活性。但酶的最适pH不是一个特征常数，它因不同的的酶、底物、反应类型及缓冲液成分而不同。
②对温度的要求。酶对温度最敏感，但一般不在酶活性最大的最适温度下进行，这是因为测定酶活力需要一定时间，而在最适温度下，酶的稳定性差，很短时间内就会变性，因此，通常在20～50℃测定，且因酶的Q10在1～2，每改变1，反应速度就差10%，所以应把温度控制在正负0．1℃的范围内。
③对底物浓度的要求，要求底物浓度大大超过酶浓度，使酶达到饱和从而达到最大速度。
④对酶浓度的要求，在测定酶活力时，要求酶浓度远小于底物浓度，从而保证酶促反应速度与酶浓度成正比，这是测定酶活力的依据。
⑤对反应时间则要求测定反应初速度，测定酶活力要求时间越短越好，一般反应恰当的程度是指底物浓度消耗不超过5%，以保证酶活力与速度成正比的直线关系。这是因为随时间的延长产物积累，加速了逆反应，酶活性稳定下降，底物浓度降低。
8．何谓米氏常数，它的意义是什么？
答：①米氏常数(K m值)是酶促反应动力学中间产物理论中的一个常数，根据中间产物酶促反应动力学原理，酶促反应过程可作如下表达，1961年国际酶学委员会规定：修改后的米氏常数为上式三个解离常数的复合函数，即K m=(K2+K3)/K1。
因此K m可看作是ES形成和解离趋势的代表。在特殊情况下，K m在数值上等于酶促反应速度达到V max/2时的[S]，单位mol/L。K m值在K3< ②K m的意义：K m是酶的特征常数，即当底物一定，pH温度和离子强度等因素不变时，K m 具常数意义，其值一般在10-6至10-2的数量级范围内，K m是一种酶针对一种底物及化学反应而言的，K m在酶学及化谢中具重要意义，可利用实验数据对下列方面进行探讨。a．在测酶活力时，如果要使测得的初速度基本接近V max，可根据已知K m求出应加入的底物的合理浓度，一般[S]至少为K m值的10倍以上，反过来，根据[S]与K m的倍数关系，可以计算出在某一底物浓度时的反应速度，如[S]=3K m时υ=0．75V max。 b．K m值在特殊情况下υ=V max/2时，等于[S]，单位也同[S]一样，这反映了K m的物理意义，又因酶的催化活性与酶的活性中心相一致，所以K m可视为酶的活性中心被底物占据一半时所需的[S]，当K m已知时，任何[S]时酶活性中心被底物饱和的分数 f ES=υ/V max=[S]/(K m+[S])。 c．K m(或1/K m)大小，能反应酶与底物和亲和关系，1/K m愈小，酶与底物亲和力愈小，反之愈大。在一些专一性较差的酶中，常有几个底物，也就有几个K m，根据1/K m的大小，可判断1/K m最大的那个底物是此酶的天然最适底物，而酶即根据天然底物命名。同理，根据K m值反映出的酶与底物的亲和力，可以鉴别不同来源的同工酶是原级还是次级同工酶。次级同工酶对同一底物的K m往往是不同的，而原级同工酶对同一底物的K m常是相同的。 d．了解酶的K m及其底物在细胞内的浓度可推知该酶在细胞内是否受到底物浓度的调节，如K m值远低于胞内[S]（10倍以上），说明该细胞常处于底物饱和状态，稍变化的[S]不会引起反应速度有意义的改变，反之，K m＞[S]则酶促反应速度对[S]十分敏感。e．催化可逆反应的酶，对正逆反应底物的K m往往不同，K m测定差别可以推测主要催化方向及其生理意义。 f．当一系列不同酶催化一个连锁反应时，如已确定K m值及相应底物浓度，可有助于了解限速步骤。 g．测定不同抑制剂对某个酶的K m及V max的影响，可区别抑制剂是竞争性的还是非竞争性的抑制剂。 9．米氏方程的实际意义和用途是什么？它有什么局限性？ 答：①米氏方程是根据中间产物学说推导出酶促反应中的[S]与υ关系的数学式，它反应了[S]与υ之间的定量关系，可以根据其中的K m对酶进行一系列研究（参阅上题）， 另外将米氏方程的1/υ对1/[S]作图，可直接从图中求出V max及K m；将米氏方程 变为了（υ-V max）=-υK m时，与（χ-α）(y + b)=K的典型双曲线方程一致，因此公 式推导和实验得到的[S]对υ的曲线完全相同，给中间复合物理论一个有力的证 据。 ②局限性：米氏方程假定形成一个中间复合物因而其动力学只适合单底物反应， 对实际存在的多底物、多产物的酶促反应均不适用；对体内的多酶体系催化的 反应过程也不能很好解释；在一些变构酶催化的反应中表现出的协同效应也与 米氏方程表示的[S]与υ的关系不大相符。 10．别构酶有何特性？ 答：①变构酶一般都含2个以上亚基，亚基在结构上及功能上可相同或不同。 ②变构酶的分子中一般有两种与功能相关的部位，即调节部队位和催化部位，二者在空间上分开，可在同一亚基或不同亚基上。 ③每个酶分子可结合一个以上的配体（包括底物，效应剂，激活剂，抑制剂），理论上结合底物和效应剂的最大数目同分别与催化部位的调节部位数目一致。 ④配体和酶蛋白的不同部位相结合时，可在底物-底物，效应剂-底物和效应剂-效应剂之间发生协同效应，此效应可是正协同也可是负协同，其中同促效应以正协同居多。 ⑤协同效应可用动力学图来鉴别，可用协同系数大于1、小于1或等于1表示。 ⑥别构酶因其协同效应，因而动力学曲线为S线（正协同效应），而非双曲线或是表观双曲线（负协同效应）不符合米氏方程。 ⑦别构酶出现协同效应的机制，可以是酶的配体结合引起酶分子空间构象的改变，从而增加或降低了酶和下一分子配体的亲和力。 LDH同工酶 定义1：具有相同底物，但电泳迁移率不同的酶。可来简介 用电泳方法将LDH同工酶分离，分析其酶谱，发现脊椎动物各组织中有五条酶带。每条酶带的酶蛋白都是由四条肽链组成的四聚体，LDH有两类肽链，A（M）或B（H），各有不同同工酶 的免疫性质，按排列组合可形成符合于电泳酶带数的五种同工酶。LDH1及LDH5分别由纯粹的4条B链（B4）和4条A链（A4）形成，称为纯聚体；而LDH2、LDH3和LDH4都是由两类肽链杂交而成的，分别可写成AB3、A2B2、A3B，称为杂交体。 编辑本段分类 基因性同工酶或原级同工酶 由不同基因产生的肽链而衍生的同工酶。这里所指的不同基因可以在不同染色体或在同一染色体的不同位点上，例如LDH中A、B两条肽链的基因分别在第11及第12对染色体上，唾液淀粉酶和胰淀粉酶的基因在第1对染色体的不同位点上。这类同工酶因分子结构差异较大，彼此间无交叉免疫。但同工酶的不同基因也可以是同源染色体的等位基因，这种成对的等位基因上两个基因结构不同的情况，在遗传学上称为杂合子。杂合子在同一个体中可合成同一种酶的两种不同 肽链，或亚基，这两种亚基尚可杂交，形成同工酶。在生物群体的不同个体中，有时同一基因位点上的一个（对杂合子来说）或一对（对纯合子来说）基因也可发生遗传变异，从而产生变异的酶，出现群体中的遗传多态。不同个体中这些遗传变异的酶也属于基因性同工酶。其在免疫学上常有交叉反应。由同一基因转录出前体核糖核酸（前体RNA），经过不同的加工剪接过程而生成多种不同的mRNA，再转译出多种肽链，从而组成同工酶。这类同工酶因发现较晚，在国际上尚无统一命名，彼此间也有交叉免疫。 次生同工酶或转译后同工酶 由同一基因、同一mRNA转译生成原始的酶蛋白，再经过不同的化学修同工酶试剂 饰，如酰胺基水解、磷酸化、肽链断裂、糖链上的糖基增减等形成不同结构的酶蛋白，它们的免疫性往往相同。国际生化协会命名委员会（CBN）建议只将原级同工酶列为同工酶，而将次生同工酶称为共合酶，但不少生化学家还是把上述各类酶的不同结构形式都包括在广义的同工酶概念中。 编辑本段功能 在动、植物中，一种酶的同工酶在各组织、器官中的分布和含量不同，形成各组织特异的同工酶谱，叫做组织的多态性，体现各组织的特异功能。大多数基因性同工酶由于对底物亲和力不同和受不同因素的调节，常表现不同的生理功能，例如动物肝脏的碱性磷酸酯酶和肝脏的排泄功能有关，而肠粘膜的碱性磷酸酯酶却参与脂肪和钙、磷 温度离析现象的成因及处理(纯字) 2006-9-27 14:28:10 点击数:152 评论共:0条收藏此页推荐阅读 1 温度离析现象 所谓沥青混凝土的温度离析是指原来经充分搅拌、温度均匀的沥青混合料，经过某一过程后，温度出现较大差异的现象。 沥青摊铺作业中，为保证路面的摊铺质量，要求沥青混凝土具有一定的温度。沥青混凝土搅拌站按规定对物料进行级配、加热和搅拌，成品沥青混合料由自卸卡车运到摊铺现场。应该说，搅拌站供给卡车的混合料是符合质量要求的，既不存在级配的离析，也没有温度的离析。然而，在沥青路面的施工中，却普遍存在沥青混合料的温度离析，而且还相当严重。 发达国家对沥青混凝土的温度离析已作了大量的研究。如美国的爱斯太克（Astec）公司使用高精度的红外线摄像机对摊铺作业进行拍摄，发现温度离析的程度比人们所估计的要大得多：143 ℃的沥青混合料装入自卸卡车，运距仅为16~24 km，抵达摊铺现场时，沥青混合料的温度差别竟达到44 ℃之多，摊铺面上有些区域的温度竟低到99 ℃。1997年，澳大利亚一个建筑承包商从278 km远的地方运料，到达施工现场时，卡车车厢两边的料温只有80℃，车厢顶部的料温为96℃，而车厢中间的料温仍然有152℃。 我国在公路施工中，沥青混合料的运输工具大都为载重量不大于10 t的自卸卡车，载重量不及发达国家的一半。司机为了方便省事，对斗中的物料基本上不做覆盖。这一切均会加剧车内局部区域物料的冷却，造成严重的温度离析。因此，尽管我国在这方面未有人作过专门研究，但可以肯定地说，我国在路面施工中沥青混合料的温度离析现象比发达国家要严重得多。 2 温度离析的原因 自卸卡车的运输和卸料过程是造成沥青混合料温度离析的主要原因。 众所周知，修筑高速公路时，除了非常靠近沥青混凝土搅拌站的路段外，铺筑其它路段路面所需沥青混合料总有一定长度的运输距离，需要一定的运输时间。即使在炎热的夏天，气温比沥青混合料的温度也低得多，势必会通过车厢壁进行热量的交换，且热交换的三种方式同时存在，造成混合料的热量损失，从而引起温度的下降。毫无疑问，热量的损失与温度的下降主要出现在靠近车厢壁的混合料中。如果车厢不加覆盖，车厢顶部的沥青混合料则与相对运动的空气直接接触，顶层物料的热量损失和温度的下降将严重得多。随着运输距离的加大，运输过程造成的热量损失也相应加大。混合料温度愈高，气温愈低，则热量损失愈大，造成的温度差异越严重。混合料中沥青和骨料的导热性能都比较低。在行驶过程中，卡车周边的混合料温度大幅降低，但由于导热性能低的缘故，热量从混合料堆的中心向四面传导的速度相当缓慢。当卡车抵达摊铺现场时，卡车周边物料的温度就会大大低于物料中部的温度，出现温度差别。 卡车到达摊铺现场向摊铺机卸料时，车厢中部的物料因温度高、粘性低首先被卸到摊铺机的料斗中，而靠近车厢壁的物料因相反的原因总是最后落在料斗的两侧和顶部。因此，又是高温物料最先经刮板输送器传输到摊铺机的后部，由螺旋摊铺器摊铺到基层上，而低温混合料却被延时到最后才被摊铺。这一过程进一步加剧了沥青混合料温度的不均匀性，即温度的离析更加严重。由于这种现象出现在每车运输和卸料过程中，故离析也周期性地出现。 1、集落刺激因子（G-CSF ） 组成结构：是一种含有二硫键的单链糖蛋白，由175个氨基酸残基组成的单链非 糖基化多肽链 理化性质：①性状：无色澄明液体 ②分子量：20000，等电点为5.8～6.6 ③溶解度： ④稳定性： 生理作用与临床适应症：作用于造血祖细胞，促进其增殖和分化，其重要作用是 刺激粒、单核巨噬细胞成熟，促进成熟细胞向外周血释放，并能促进巨噬细胞及 噬酸性细胞的多种功能 ，主要用于预防和治疗肿瘤放疗或化疗后引起的白细胞 减少症， 分离纯化工艺： G-CSF 为无菌冻干粉剂，由含有10mM 醋酸钠pH 为4的蛋白溶液经0.2um 过滤后 分装冻干。 由含有高效表达人G-CSF 的原核表达系统（E.coli ）经发酵、分离和高度纯化后 经冻干制成。 纯化液聚乙二醇浓缩洗脱液柱层析透析液透析缓冲液溶解沉淀沉淀蛋白质盐析洗脱液纤维素柱层析透析液透析 缓冲液溶解沉淀饱和度至加入硫酸铵透析液透析滤液超滤浓缩正常成人尿液150 ephadexG -%8020000 S DEAE 2、超氧化物歧化酶（SOD ）： 组成结构： 理化性质：①性状：淡蓝色冻干粉结晶体 ②分子量：32000左右 ③溶解度： ④稳定性：耐热性强，90℃ 环境120分钟酶活几乎没有损失，100℃环境60分 钟酶活保持90%以上；稳定性高，在pH4.0—11.0范围内酶活稳定。 生理作用与临床适应症：是一种能够催化超氧化物通过歧化反应转化为氧气和过 氧化氢的酶，是一种重要的抗氧化剂，保护暴露于氧气中的细胞 分离纯化工艺： 血液预处理,洗涤红细胞和溶血;去除大部分杂蛋白得SOD 粗品;再经柱层析分离 得到精品。猪血经血液预处理、洗涤红细胞、溶血、乙醇一氯仿混合液除去血红 蛋白，然后用坟柳043HZO 萃取、丙酮沉淀、55一65℃热变性得到粗酶液。粗酶 液上阴离子DEAE 一Cellulose52交换层析柱、分子筛SephadexG-75柱,最终获 得了纯化的铜锌超氧化物歧化酶。 酸性蛋白酶与碱性蛋白酶生产工艺的不同之处？ 酸性蛋白酶是一种在酸性环境下（pH 2.5-4.0）催化蛋白酶水解的酶制剂，适用于酸性介质中水解动植物蛋白质。可用于毛皮软化，酒精发酵，啤酒、果酒澄清，动植物蛋白质水解营养液，羊毛染色，废胶片回收，饲料添加剂等等。本品在酸性条件下有利于皮纤维松散，且软化液可连续使用，是当前理想的毛皮软化酶制剂；在酒精发酵中，添加酸性蛋白酶，能有效水解原料中的蛋白质，破坏原料颗粒粒间细胞壁的结构，有利于糖化酶的作用，使原料中可利用碳源增加，从而可提高原料出酒率；另一方面，蛋白质的水解提高了醪液中α-氨基态氮的含量，促进酵母菌的生长与繁殖，提高发酵速度，从而缩短发酵周期和提高发酵设备的生产能力。 碱性蛋白酶碱性蛋白酶是在碱性条件下水解蛋白质肽键的酶类,是一类非常重要的工业用酶,最早发现于猪胰脏。碱性蛋白酶广泛存在于动、植物及微生物中。微生物蛋白酶均为胞外酶,不仅具有动植物蛋白酶所具有的全部特性,还有下游技术处理相对简单、价格低廉、来源广、菌体易于培养、产量高、高产菌株选育简单、快速、易于实现工业化生产等诸多优点。1945年瑞士M等在地衣芽孢杆菌中发现了微生物碱性蛋白酶。 碱性蛋白酶是由细菌原生质体诱变选育出的地衣芽孢杆菌2709，经深层发酵、提取及精制而成的一种蛋白水解酶，其主要酶成分为地衣芽孢杆菌蛋白酶，是一种丝氨酸型的内切蛋白酶，它能水解蛋白质分子肽链生成多肽或氨基酸，具有较强的分解蛋白质的能力，广泛应用 于食品、医疗、酿造、洗涤、丝绸、制革等行业。 1、碱性蛋白酶是一种无毒、无副作用的蛋白质，属于丝氨酸型内切蛋白酶，应用在食品行业可水解蛋白质分子肽链生成多肽或氨基酸，形成具有独特风味的蛋白质水解液。 2、碱性蛋白酶成功应用于洗涤剂用酶工业，可添加在普通洗衣粉、浓缩洗衣粉和液体洗涤剂当中，既可用于家庭洗衣，也可用于工业洗衣，可以有效的去除血渍、蛋类、乳制品、或肉汁、菜汁等蛋白类的污渍，另外也可作为医用试剂酶清洗生化仪器等。 3、在生物技术领域，碱性蛋白酶可作为工具酶用于核酸纯化过程中的蛋白质（包括核酸酶类）去除，而对DNA无降解作用，避免对DNA 完整性的破坏。 酸性蛋白酶如何灭活第一种方法几乎所有酶都适用，就是加热。第二种，既然是酸性酶，加入强碱应该也是可以的。 酸性蛋白酶产生菌的筛选方法？酸性蛋白酶是一种能在酸性环境下水解蛋白质的酶类，其最适作用pH值为2.5-5.0。由于酸性蛋白酶具有较好的耐酸性，因此被广泛地应用于食品、医药、轻工、皮革工艺以及饲料加工工业中。目前用于工业化生产的酸性蛋白酶大多为霉菌酸性蛋白酶，此类酶的最适作用pH值为3.0左右，当pH值升高时，酸性蛋白酶的酶活会明显降低，且此类酶不耐热，当温度达到50℃以上时很不稳定，从而限制了酸性蛋白酶的应用范围。因此，本研究以开发耐温偏酸性蛋白酶为目标，进行了以下几方面的研究：(1)偏酸性蛋白酶产生菌的分离筛选。(2)偏酸性蛋白酶粗酶酶学性质的 水稻原生质体分离及转化 作者：植物逆境与光合实验室|发表日期：2014-04-11 实验目的：用于做荧光定位、BIFC、Co-IP实验 实验材料和试剂： 生长8-10 d的水稻组培幼苗、酶解液、mmg溶液、PEG-CaCl2溶液、W5溶液、5 mL移液枪、5 mL枪头、12 mL BD管、1.5 mL EP管、100 mL锥形瓶、圆形培养皿、滤网（20 mm×20 mm）、离心机、摇床等。 溶液的配制： 母液的配制： 1、0.2 M MES(pH 5.7) 2、0.8 M Mannitol(甘露醇) 3、1 M CaCl2 4、2 M KCl 5、2 M MgCl2 6、10% BSA [Fluka PEG 4000 81240] 以下如有上述母液，则都是使用的母液 酶解液：20 mL ×2 MES 0.5 mL 1 mL Mannitol 7.5 mL 15 mL Cellucose（纤维素酶）0.15 g 0.3 g Macerozyme（离析酶）0.075 g 0.15 g ddH2O 1.8 mL 3.6 mL 55℃10 min 冷却至RT后加入200 uL CaCl2 加入200 uL 10% BSA Mmg: 20 mL ×2 MES 0.2 mL 0.4 mL Mannitol 5 mL 10 mL MgCl2 0.075 mL 0.15 mL ddH2O 4.725 mL 9.45 mL PEG-CaCl2: 20 mL ×2 Mannitol 2.5 mL 5 mL CaCl2 1 mL 2 mL PEG4000 4 g 8 g ddH2O 3 mL 6 mL W5: 200 mL MES 2 mL NaCl 1.8 g CaCl2?2H2O 3.67525 g KCl 0.5 mL ddH2O 197.5 mL 具体实验步骤： 1、从培养基上切取培养8-10 d的水稻幼苗，去除幼苗外层包裹的叶子。 2、用干净的刀片将幼苗切成很细的粉末状碎片（越细越好，有利于酶解），大概切到水稻幼苗茎秆的中间段即可（剩余未切割的部分可以扔掉）。 水泥稳定碎石基层广泛地应用于城市道路的路面结构中，它具有良好的板体性和水稳性，对于保证城市道路的使用功能，具有很重要的作用，在我国目前城市道路乃至公路的路面基层中，其正将继续发挥主导作用，因此如何保证水泥稳定碎石基层的施工质量，对于保证城市道路的使用品质将是举足轻重的。 ???? 水泥稳定碎石基层是半刚性材料基层，可以用作高速公路、一级公路以及城市主干路和快速路的基层，它是沥青面层的下承层，是连接沥青面层与路基的纽带，是车辆荷载的主要承担者，其主要承担沥青面层传递而来的行车垂直荷载，并将荷载均匀地分散在路基中。沥青面层所发生的许多病害，都与其有直接的关系，下面分别介绍水泥稳定碎石基层的常见病害及防治措施。 ???? 1、开裂现象及防治措施 ???? 1)水泥稳定碎石基层经常发生开裂现象，其裂缝形状一般沿道路纵向呈规则分布的横向裂缝，间距一般为5m～10m，裂缝宽度一般为3mm～5mm左右。 ???? 2)究其原因，其一是温度裂缝，即基层施工完毕后，随着温度的降低，水稳基层会产生收缩应力，当水稳基层的抗拉强度不足以抵抗收缩应力时，即发生拉裂现象。其二是湿度裂缝，即基层施工完毕后，随着水分的蒸发，基层的湿度将明显降低，就会产生干缩应力，从而导致干缩裂缝。 ???? 3)防治措施。控制水稳基层的水泥剂量，一般控制在4％～7％之间，因为水泥剂量偏大时，水泥的水化热会使基层内外产生温差，从而导致开裂现象。严格选择水泥品种及水泥强度等级，一般选用普通水泥、矿渣水泥和火山灰水泥，水泥强度等级一般为32.5MPa，因为水泥活性成分过多或强度等级过高，会产生大量的水化热，从而导致开裂现象。加强基层的养护，使基层的养护期不少于7d，在养护期内，一定要保证水稳基层表面始终处于湿润状态，切忌或干或湿，从而避免干缩裂缝的产生。可以采取对水稳基层表面进行缩缝切割的办法，以消除温缩和干缩裂缝的形成。方法是用切割机沿道路纵向每隔5m切割一道缩缝，缝宽3mm，缝深5mm～8mm，然后在缝内灌以乳化沥青，采取这种办法的机理是，人工提前消除基层所产生的收缩应力，从而使基层的收缩应力提前释放。 ???? 2、离析现象及防治措施 ???? 1)水稳基层经常发生离析现象，所谓离析即粗细料集中现象，也即级配变异现象，离析还造成水稳基层的强度不均匀，表面不平整等病害。 ???? 2)究其原因，水稳混合料在搅拌过程中发生的放料离析，在运输过程中发生的颠簸离析，在卸料过程中发生的卸料离析，在摊铺过程中发生的摊铺离析，在找平过程中发生的找平离析等。 ???? 3)防治措施。水稳混合料在搅拌站输出时，应尽量降低出料高度，成品仓应设置搅拌装置，并能间歇放料。成品仓放料口距运料车厢的垂直距离不宜大于2m，运料车应及时移动前后位置，保证均匀装料，以降低每次装料的堆体高度。运料车辆在运输过程中，应匀速行驶，起步刹车要平稳，路况差时应慢行，避免强烈的颠簸振动。运料车辆在向摊铺机受料 酯酶同工酶的醋酸萘酯-铁氰化钾染色法的研究 摘要：酯酶可将＠-醋酸萘酯和?-醋酸萘酯水解生成醋酸和萘酚，利用萘酚能与铁氰化钾反应生成有色物质萘醌的性质可对电泳凝胶上的酯酶同工酶进行染色。 关键词：酯酶同工酶；醋酸萘酯；铁氰化钾；染色法 经典的酯酶同工酶的染色方法的原理是，酯酶催化醋酸萘酯水解产生萘酚，而萘酚可与坚牢蓝反应生成蓝紫色物质，因而在电泳后的凝胶上含有酯酶同工酶的地方可以染出蓝紫色的酶带。 经过摸索，本文介绍一种新的酯酶同工酶的染色方法———醋酸萘酯N 铁氰化钾染色法，其原理是酯酶催化醋酸萘酯水解产生萘酚，而萘酚可被铁氰化钾氧化成萘醌，因而在电泳后的凝胶上含有酯酶同工酶的地方可以染出酶带。 一 材料与方法 1.1实验材料 以新鲜的肉鸡肝脏为材料。 1.2试剂 Acr 为广东省汕头化学试剂厂产品，Bis 、坚牢蓝RR 盐为上海化学试剂公司产品，TEMED 为上海前进试剂厂产品，溴酚蓝为上海试剂三厂产品，＠-醋酸萘酯为上海青浦合成试剂厂产品，?-醋酸萘酯为上海试剂一厂产品， Tris,HCL,NaCL,2Na HP 4o ,磷酸二氢钠，三氯醋酸，乙醇，甘油，丙酮，丙酮、铁氰化钾、过硫酸铵等均为国产分析纯。 1.3仪器设备 研钵、电泳仪与电泳槽、冰箱、离心机、微量加样器、恒温水浴锅、染色盒、67$紫外光栅分光光度计等。 1.4实验方法 （1）样品制备：取一定量的新鲜鸡肝，按一定比例加入8*9:1的磷酸缓冲液后进行研磨，经4000r/min,15min 离心后取上清液，置于1?冰箱中保存备用。 （2）酯酶活力的测定：参照禹邦超等人的方法进行。 （3）聚丙烯酰胺凝胶电泳：参照赵永芳的方法进行。 （4）酯酶同工酶的染色方法有： 经典法：（即醋酸萘酯-固蓝RR 盐染色法）染色液：称取?-醋酸萘酯与＠-醋酸萘酯、坚牢蓝RR 各200mg ，分别用10mL 丙酮溶解后，混合，再用磷酸缓冲液定容至200mL 。 电泳后，将凝胶条浸入染色液中，于37摄氏度保温直至酶带出现。 染色新法（即醋酸萘酯B 铁氰化钾染色法）染色液G ：仅将经典法染色液中的坚牢蓝RR 除去；染色液B ：4%的铁氰化钾溶液。电泳后将凝胶条浸入染色液A 中，于37摄氏度保温2min 后弃去染色液A ，用蒸馏水稍加漂洗，再用染色液B 染色，直至显出酶带。 二 结果与讨论 电泳前，将完整的一块凝胶按计划等分为$部份，每部份都按相同的酶活力梯度进行点样。电泳结束后，将该凝胶按计划等分切为2块凝胶。1块用经典法进行染色，1块用染色新法进行染色 通过观察实验现象，我们发现这2种染色方法所得的酶谱是相同的。前文已再次证实鸡 混凝土离析原因及危害 令狐采学 混凝土的离析是混凝土拌合物组成资料之间的粘聚力缺乏抵当粗集料下沉，混凝土拌合物成分相互别离，造成内部组成和结构不均匀的现象。通常表示为粗集料与砂浆相互别离，例如密度年夜的颗粒聚积至拌合物的底部，或者粗集料从拌合物中整体别离出来。 造成离析的原因可能是浇筑，振捣不当，集料最年夜粒径过年夜，粗集料比例过高，胶凝资料和细骨料的含量偏低，与细集料比粗集料的密度过年夜，或者拌合物过干或者过湿等。使用矿物掺合料或引气剂可降低离析倾向。 1.离析的危害 1.1 影响混凝土的泵送施工性能，造成粘罐、堵管、影响工期等，降低经济效益。 1.2影响混凝土结果表观效果，混凝土概略呈现砂纹、骨料外露、钢筋外露等现象。 1.3混凝土强度年夜幅度下降，严重影响混凝土结构承载笼力，破坏结构的平安性能，严重的将造成返工，造成巨年夜的经济损失。 1.4混凝土的均匀性差，致使混凝土各部位的收缩不一致，容易产生混凝土收缩裂缝。特别是在施工混凝土楼板时，由于混凝土离析使表层的水泥浆层增厚，收缩急剧增年夜，呈现严重龟裂现象。 1.5极年夜地降低了混凝土抗渗、抗冻等混凝土的耐久性能。2．混凝土离析的原因及应对办法众所周知，普通混凝土主要由水泥、水、砂石粗细骨料、外加剂等资料混合而成；泵送混凝土是在普通混凝土的基础上调整砂石粗细骨料级配、砂率和掺入一定量的粉煤灰而成。混凝土离析除于搅拌办法、搅拌时间长短有关外，一般的来讲，于混凝土拌合物的胶凝资料的优劣、用水量过年夜、碎石级配较差、减水剂掺量过年夜等关系更密切。 2.1 水泥 水泥是混凝土中最主要的胶凝资料，水泥质量的稳定直接影响着混凝土质量的稳定。水泥质量的变更将会招致混凝土呈现离析的现象，并且水泥中有多种因素影响混凝土拌合物性能。 2.1.1 水泥的细度的变更。众所周知，水泥的细度越高，其活性越高，水泥的需水量也越年夜，同时水泥细度更年夜，其水泥颗粒对混凝土减水剂的吸附能力也越强，极年夜的减弱了减水剂的减水效果。因此，在实际生产中，当水泥的细度年夜幅度降低时，混凝土外加剂的减水效果将获得增强，在外加剂掺量不变的情况下，混凝土的用水量将年夜幅减少。水泥细度的下降，容易造成混凝土外加剂的过量，引起混凝土产生离析现象。并且这种离析通常产生在减水剂掺量较高的高强度品级混凝土中。 2.1.2水泥中含碱量变更。含碱量对水泥与外加剂的适应性影响很年夜，水泥含碱量降低，减水剂的减水效果增强，所以当水泥的含碱量产生明显的变更时，有可能招致混凝土在黏度、流动度方面产生较年夜的影响。 重组人胰蛋白酶 Cat. No.: RHT03 CAS: 9002-07-7 EC:3.4.21.4 来源：人胰蛋白酶，基因工程生产，大肠杆菌表达 1. 重组生产，无动物源性 重组人胰蛋白酶，氨基酸序列及性质与人胰蛋白酶完全相同。无动物源性，无病毒污染。可用于干细胞治疗、肿瘤的细胞治疗等过程中，无抗原性。 2. 优势 安全性高 重组生产，无动物源性的病毒污染，如猪流感病毒、猪细小病毒等； 特殊工艺，无内源性病毒污染，无细菌、真菌、支原体污染； 冻干粉，运输及储存安全，活性不易损失； 不含任何蛋白酶抑制剂，如PMSF等。 ?纯度高 HPLC纯化； 活性特异，无其它蛋白酶活性。 ?活性高 比活性不低于2500 USP u/mg。 3.用途范围 胰蛋白酶是一种内肽酶，可用于赖氨酸及精氨酸C末端剪切肽键，从而将大分子蛋白裂解为小肽。 胰蛋白酶广泛用于各种生物技术过程中，如：细胞培养各种组织的细胞分离；变性蛋白质的降解；蛋白质的酶解、测序；干细胞、肿瘤的细胞治疗等。 4.特性 来源重组大肠杆菌 纯化HPLC 产品性状白色或类白色冻干粉 纯度（HPLC）≥95% 比活不低于2500 USP u/mg 其他酶含量无糜蛋白酶、羧肽酶A等污染及活性 不含任何蛋白酶抑制剂无PMSF、EDTA等任何蛋白酶抑制剂 5.信息 产品名称比活包装产地 重组人胰蛋白酶≥2500 USP u/mg10mg,100mg,1g上海雅心 活力单位：25℃，pH7.6，反应体系3.0ml (1cm 光路)，每分钟酶解BAEE使253nm下的吸收值增加0.003定义为一个USP单位。 6.相关产品 重组猪胰蛋白酶； 重组胰蛋白酶细胞消化液。 蛋白酶的论述 摘要：蛋白酶（英语：Protease）是生物体内的一类酵素（酶），它们能够分解蛋白质。分解方法是打断那些将氨基酸连结成多肽链的肽键。抑制蛋白酶活性的小分子化合物被称蛋白酶抑制剂。许多病毒蛋白酶的抑制剂是很有效的抗病毒药。 1．木瓜蛋白酶 1.1木瓜蛋白酶简介 木瓜蛋白酶，是一种蛋白水解酶，可将抗体分子水解为3个片段。是番木瓜中含有的一种低特异性蛋白水解酶，活性中心含半胱氨酸，属巯基蛋白酶，应用于啤酒及食品工业。 1.2木瓜蛋白酶的特点 木瓜蛋白酶（Papain）简称木瓜酶，又称为木瓜酵素。是利用未成熟的番木瓜（Carica papaya）果实中的乳汁，采用现代生物工程技术提炼而成的纯天然生物酶制品。它是一种含巯基(-SH)肽链内切酶，具有蛋白酶和酯酶的活性，有较广泛的特异性，对动植物蛋白、多肽、酯、酰胺等有较强的水解能力，同时，还具有合成功能，能把蛋白水解物合成为类蛋白质。溶于水和甘油，水溶液无色或淡黄色，有时呈乳白色；几乎不溶于乙醇、氯仿和乙醚等有机溶剂。最适合PH值6～7(一般3～9.5皆可)，在中性或偏酸性时亦有作用，等电点（pI)为8.75；最适合温度55～65℃(一般10～85℃皆可)，耐热性强，在90℃时也不会完全失活；受氧化剂抑制，还原性物质激活。木瓜蛋白酶由212个氨基酸残基组成，当用氨基肽酶从N末端水解掉分子中的2/3肽链后，剩下的1/3肽链仍保持99%的活性，说明木瓜蛋白酶的生物活性集中表现在C末端的少数氨基酸残基及其所构成的空间结构区域。 木瓜蛋白酶papain属巯基蛋白酶，具有较宽的底物特异性，作用于蛋白质中L-精氨酸、L-赖氨酸、甘氨酸和L-瓜氨酸残基羧基参与形成的肽键。此酶属内肽酶，能切开全蛋蛋白质分子内部肽链—CO—NH—生成分子量较小的多肽类。存在于木瓜胚乳中的蛋白酶。EC3．4．22．2。作为植物来源的蛋白酶来说，此酶研究进展的最快。此酶主要是以内肽酶的形态起作用。活性的产生，而半胱氨酸残基是不可缺少的，所以是硫基蛋白酶的一种，底物的特异性不太严格，分子量为23400，氨基酸残基数212。 木瓜蛋白酶是一种在酸性、中性、碱性环境下均能分解蛋白质的蛋白酶。它的外观为白色至浅黄色的粉末，微有吸湿性。 酪蛋白被木瓜蛋白酶降解生成的酪氨酸在紫外光区 275nm 处有吸收峰。1.3木瓜蛋白酶物理化学性质 本品为乳白色至微黄色粉末，具有木瓜特有的气味,稍具有吸湿性。水解蛋白质能力强,但几乎不能分解蛋白胨，易溶于水,甘油,不溶于一般的有机溶剂,耐热性强。由木瓜制得的商品酶制剂中，含有如下三种酶：(1)木瓜蛋白酶，分 第27卷第4期 西 南 农 业 大 学 学 报(自然科学版)V o.l27,No.4 2005年8月J ou r na l o f South w est Ag ricult u r a l University(N atural Science)Aug.2005文章编号:1000-2642(2005)04-0500-05 不同条件对食用菌酯酶同工酶谱 多态性的影响① 梁建光,杨立红,王晓洁,黄清荣,冯培勇,蔡德华,邹志辉 (烟台师范学院生命科学学院,山东烟台 264025) 摘要:采用聚丙烯酰胺凝胶电泳,以食用菌为材料,分析了不同培养时间和不同培养基种类及不同提取条件对酯酶同工酶酶谱的影响,结果表明:培养时间和培养基组成及提取条件的不同,酯酶同工酶酶谱的酶带呈现不同的多态性。 提示:同工酶在食用菌菌种选育的应用上,应固定分析菌丝的最佳培养时间及固定最适培养基种类和选取适宜的提取方法,才能获得稳定的结果。 关 键 词:酯酶同工酶;培养时间;培养基;提取条件;聚丙烯酰胺凝胶电泳 中图分类号:Q516 文献标识码:A EFFECTS OF D I FFERENT COND ITI O NS ON ESTERASE ISOENZY M E OF T HE ED I BLE FUNGUS PL EUROT US OSTREAT US L I ANG Jian-guang,YANG L i-hong,W ANG X i ao-jie, HUANG Q i ng-ron g,FENG P ei-yon g,CA I De-hua,ZO U Z h i-hu i (Co ll ege o f L ife Science,Y an t a i No r m al U niversit y,Y antai,Shandong,264025,Chi na) Ab strac t:Po lyacry la m i de ge l e lectropho resis(PAG E)w as perfor m ed t o ana l y ze the effects of culture ti m e,cult ure mediu m and extracti on cond itions on the e ste rase is oenzy m e of P l eurotus ostr ea t us my ce lia.The resu lts sho w ed t hat t he nu mber and sta i nab ilit y o f the enz ym e bands varied w it h t he cult ure conditi ons,suggesting t ha t fixed cult ure ti me and cu lture mediu m should be app lied i n t he proce ss of breed-ing prog ram s of edible f ung.i K ey word s:e sterase isoenzym e;cult ure ti m e;m ed i u m;ex tracti on conditions;PAG E 同工酶分析作为分子遗传标记技术之一,被应用于真菌的分类鉴定中。它是在属内种间及品种之间的分类鉴定中有效的方法[1]之一。同工酶酶谱的差异一方面是由编码同工酶的基因所决定的,但酶谱不能直接反映DNA水平上的差异,另一方面还受试验条件和生物生长发育时期等影响表达水平的因素的影响。所以,不同的提取方法也直接影响酶谱的多态型,因而,在食用菌菌种选育的应用上固定最佳培养时间及固定最适培养基种类和选取适宜的提取方法,对于保证同工酶作为较稳定的遗传标记是非常必要的。本文以食用菌为材料研究不同条件对其酯酶同工酶多态型的影响。 1 材料与方法 1.1 材 料 1.1.1 平菇72(P leurotus ostre a t u s)由烟台师范学院食用菌研究所提供。 不同培养时间的平菇营养菌丝,分别编号如表1。 1.1.2 4种培养基的配方 ①收稿日期:2004-10-24 基金项目:山东省科技厅资助项目《食用菌优良品种选育与产业化开发》鲁家澳门字[2001]500号作者简介:梁建光(1966-),男,山东省莱阳人,烟台师范学院讲师,从事微生物学教学与研究。 龙源期刊网 https://www.wendangku.net/doc/6a3610664.html, 碎石基层离析成因及解决措施 作者：王寒松 来源：《中国新技术新产品》2013年第16期 摘要：离析现象促使路面基层的密实度降低，与此同时也会降低路面的整体强度以及稳 定性。为了确保路面基层的施工质量，只有了解清楚水泥稳定碎石基层出现离析现象的原因，才能制定出科学合理的防治离析现象的方案，这对于公路工程来说非常重要。 关键词：碎石基层；离析问题的形成；施工质量 中图分类号：TU74 文献标识码：A 水泥稳定碎石属于沥青路面的半刚性基层，它的整体强度比较高，其拌体性以及耐久性比较强，此外采用这种碎石进行施工会降低施工成本，而且施工比较便利，因而被广泛的应用到公路工程中。但是水泥稳定碎石在设计、生产、拌合以及运输与摊铺过程中，会受多种因素的影响，产生许多病害问题，引起这些问题的最主要原因是混合料出现离析现象。离析现象会降低路面的基层密实度，相应的也会降低整体强度以及稳定性。因而为了确保路面基层的质量，一定要明晓水泥稳定碎石出现离析现象的原因，只有这样才能采取更恰当的措施解决好离析问题。 1 公路常见几种离析现象分析 水泥稳定碎石基层施工过程中比较常见的病害问题是离析现象，这也是沥青路面施工过程中需要衡量的重要指标之一。理论上讲骨料离析现象常出现在混合料的堆放、运输、拌合和摊铺中，因为受外界因素的影响，加上它们的受力大小以及方向不一样，便促使离析现象产生。本文作者通过近几年能对公路案例的研究和探索，将骨料离析现象归纳为以下几种。 1.1 拌合时出现离析现象 当把混合料放入搅拌机搅拌时，很容易因为骨料的级配不科学、配合比控制的不准确、搅拌不够均匀和拌和机自身存在的缺陷，使得拌合料产生粗、细料过于集中的现象。 1.2 拉料车在运输混合料时出现离析现象 施工人员采取载重自卸混合料的拉料车来完成混合料的接料、运料和卸料等工作，然而拉料车施工操作不准确加上受外界因素的影响，很容易造成混合料的骨料出现滚动使得粗、细料集中产生。 1.3 摊铺机在摊铺混合料时出现离析现象 蛋白酶的种类 1．木瓜蛋白酶 木瓜蛋白酶，是一种蛋白水解酶，可将抗体分子水解为3个片段。是番木瓜中含有的一种低特异性蛋白水解酶，活性中心含半胱氨酸，属巯基蛋白酶，应用于啤酒及食品工业。 木瓜蛋白酶papain属巯基蛋白酶，具有较宽的底物特异性，作用于蛋白质中L-精氨酸、L-赖氨酸、甘氨酸和L-瓜氨酸残基羧基参与形成的肽键。此酶属内肽酶，能切开全蛋蛋白质分子内部肽链—CO—NH—生成分子量较小的多肽类。 木瓜蛋白酶是一种在酸性、中性、碱性环境下均能分解蛋白质的蛋白酶。它的外观为白色至浅黄色的粉末，微有吸湿性。 木瓜蛋白酶（Papain）简称木瓜酶，又称为木瓜酵素。是利用未成熟的番木瓜（Carica papaya）果实中的乳汁，采用现代生物工程技术提炼而成的纯天然生物酶制品。它是一种含疏基(-SH)肽链内切酶，具有蛋白酶和酯酶的活性，有较广泛的特异性，对动植物蛋白、多肽、酯、酰胺等有较强的水解能力，同时，还具有合成功能，能把蛋白水解物合成为类蛋白质。溶于水和甘油，水溶液无色或淡黄色，有时呈乳白色；几乎不溶于乙醇、氯仿和乙醚等有机溶剂。最适合PH值6～7(一般3～9.5皆可)，在中性或偏酸性时亦有作用，等电点（pI)为8.75；最适合温度55～65℃(一般10～85℃皆可)，耐热性强，在90℃时也不会完全失活；受氧化剂抑制，还原性物质激活。 2．胃蛋白酶 胃蛋白酶（英文名称：Pepsin）是一种消化性蛋白酶，由胃部中的胃粘膜主细胞所分泌，功能是将食物中的蛋白质分解为小的肽片段。胃蛋白酶原由胃底主细胞分泌，在pH1.5～5.0条件下，被活化成胃蛋白酶，将蛋白质分解为胨，而且一部分被分解为酪氨酸、苯丙氨酸等氨基酸。可分解蛋白质中苯丙氨酸或酪氨酸与其他氨基酸形成的肽键，产物为蛋白胨及少量的多肽和氨基酸，该酶的最适pH为2左右。 3．中性蛋白酶 中性蛋白酶是由枯草芽孢杆菌经发酵提取而得的，属于一种内切酶，可用于各种蛋白质水解处理。在一定温度、PH值下，本品能将大分子蛋白质水解为氨基酸等产物。可广泛应用于动植物蛋白的水解，制取生产高级调味品和食品营养强化剂的HAP和HVP，此外还可用于皮革脱毛、软化、羊毛丝绸脱胶等加工。 利用中性蛋白酶的酶促反应，可把动植物的大分子蛋白质水解成小分子肽或氨基酸，以利于蛋白质的有效吸收和利用，其水解液AN%高，水解度高，风味佳，已广泛用于生产高级调味品和食品营养强化剂，各种动物来源性抽提物生产功能性骨、肉提取物（骨素）、水产提取物、蛋白胨、肽等及研究开发一些高附加值的功能食品。 第十一章原生质体的分离和培养 1 引言 植物原生质体培养和细胞融合是植物细胞工程的核心技术，它是20世纪60年代初，人们为了克服植物远缘杂交的不亲和性，利用远缘遗传基因资源改良品种而开发完善起来的一门技术。植物原生质体是遗传转化的理想受体，能够比较容易地摄取外来遗传物质，如外源DNA、染色体、病毒、细胞器等，为高等植物在细胞水平或分子水平上的遗传操作提供了理想的实验体系。 原生质体是指用特殊方法脱去植物细胞壁的、裸露的、有生活力的原生质团。就单个细胞而言，除了没有细胞壁外，它具有活细胞的一切特征。1960年英国植物生理学家Cocking首次利用纤维素酶等从番茄根细胞分离原生质体获得成功。1971年Takebe等培养烟草叶片原生质体获得再生植株，首次证实了原生质体的全能性。1972年美国科学家Carl．son等利用细胞融合技术，首次获得两种不同烟草原生质体融合的体细胞杂种。1974年高国楠等开发出了PEG（聚乙二醇）融合方法。1978年德国科学家Melchers等把马铃薯和番茄的原生质体进行融合，获得了体细胞杂种——马铃薯番茄。1981年Zimmermann开发出了高压脉冲法，即电融合技术。 植物原生质体培养和细胞融合技术已经成熟，并成为品种改良和创造育种亲本资源的重要途径。迄今已在多种作物上获得了原生质体植株和种、属间杂种植株，也为细胞生物学、植物生理学及体细胞遗传学的研究做出了重要贡献。 第一节植物原生质体分离 一、原生质体分离 (一)植物细胞膜电特性和膜电位 植物细胞膜是一个由脂类和蛋白质等构成的双层分子层膜，其物理性质类似于一个双电层，细胞的内外层带的是同种电荷。不同植物的细胞膜电位不同，同种植物细胞倍性不同以及在不同外界离子环境下，其细胞膜的膜电位也不同(表7-1、表7-2)。了解植物细胞膜的电特性对细胞融合的研究很有-必要。 原核生物遗传饰变过去几十年取得了很大进展，转导和转化现已成为对微生物进行遗传操作的标准方法。利用微生物进行遗传操作研究的优点是：①这些单细胞和单染色体系统既简单又容易控制；②它们的复制周期很短。在真核生物中将遗传物质由一个个体转移给另一个个体的传统方法是有性杂交，它所能进行的范围极为有限，尤其在动物中是这样。就是在植物中，虽然远缘杂交并非不可能，但由于有性不亲合性的障碍，有时在选定的亲本之间也难以获得完全的杂种(见第9章和第10章)，这是通过杂交进行作物改良的一个严重障碍。在这点上细胞融合为远缘杂交提供了一个很有潜力的新途径(体细胞杂交)。无论是在植物中还是在动物中，细胞融合必须穿越质膜才能完成。植物与动物不同，在质膜之外还有一层坚硬的纤维素壁，相邻的细胞被一层主要由果胶质构成的基质粘连在一起。主要由于这个原因，体细胞遗传学在动物中的发展远远超过了在植物中的发展。只是自1960年以来，由于Cocking证实了通过酶解细胞壁可以获得大量 稀土元素对三种平菇的酯酶同工酶谱的影响 王正庆 （山西师范大学生命科学学院0103班山西临汾041004） 摘要：本实验采用聚丙烯酰氨凝胶电泳的方法分别对培养在正常、300ppm、600ppm、900ppm的稀土元素处理的培养基上的三种平菇菌丝体中的酯酶同工酶酶谱进行分析，结果表明：经600ppm的稀土元素处理的A2106、平2一二级酶带总数多于其它对照组，光密度值（OD）值也大于其它处理组。经300ppm稀土元素处理的C.9.0一二级酶带总数多于其它对照组，光密度值（OD）值也大于其它对照组。 关键词：稀土元素平菇酯酶同工酶光密度值迁移率 The effect of rare-erath to three strains of Pleurotus Ostreator'Estreator isozyme Wangzhengqing (Biology Department Shanxi Teacher's university Class 0103 Linfen Shanxi 041004) Abstract: This study use the method of PAGE analyse the effect of rare-earth to three strains of Pleurotus ostreator's estrase isozme (A2106、Ping2 、C.9.0) The Pleurotus ostreators is cultured in normal 、300ppm、600ppm、900ppm rare-earth interbreed. The result show that estrase isozme bands Rf OD of three strains which cultured in different rare-earth interbreed are different. Key words: Rare-earth leurotus Ostereators sterase isozyme The light density value Migration rate 混凝土离析问题原因与解决措施 1 前言 泵送混凝土的施工同普通混凝土的施工相比具有很多的优点(比如可节约人力、物力、缩短工期等)，近年来我国的泵送混凝土发展非常迅猛，泵送混凝土的配制及施工技术已相当普及。但泵送混凝土普遍具有坍落度大的特点，这在一定程度上增加了混凝土的质量控制的难度，特别是混凝土的离析、抓底现象非常常见，严重影响了混凝土表现性能和结构功能。因此，如何很好的抑制混凝土的离析问题及解决混凝土的离析问题是当前泵送混凝土发展所需研究的重要问题。针对以上问题本文主要从混凝土使用的原材料着手分析造成混凝土离析的原因，并提出应对措施。 混凝土的离析是混凝土拌合物组成材料之间的粘聚力不足以抵抗粗集料下沉，混凝土拌合物成分相互分离，造成内部组成和结构不均匀的现象。通常表现为粗集料与砂浆相互分离，例如密度大的颗粒沉积大拌工合物的底部，或者粗集料从拌合物中整体分离出来。 造成离析的原因可能是浇筑，振捣不当，集料最大粒径过大，粗集料比例过高，胶凝材料和细骨料的含量偏低，与细集料比粗集料的密度过大，或者拌合物过干或者过湿等。使用矿物掺合料或引气剂可降低离析倾向。 2 离析及其危害 离析是指混凝土拌合物组成材料之间的粘聚力不足以抵抗粗集料下沉的一种现象。主要表现为混凝土骨料分离和分层、抓底，和易性差等。混凝土离析将严重影响混凝土的各方面性能，混凝土离析所造成的危害主要表现在以下几个方面： (1)影响混凝土的泵送施工性能，造成粘罐、堵管、影响工期等，降低经济效益。 (2)致使混凝土结构部位出现砂纹、骨料外露、钢筋外露等现象，破坏混凝土钢筋保护层，影响混凝土的表现效果。 (3)混凝土的匀质性差，致使混凝土各部位的收缩不一致，易产生混凝土收缩裂缝。特别是在施工混凝土楼板时，由于混凝土离析使表层的水泥浆层增厚，收缩急剧增大，出现严重龟裂现象。 (4)使混凝土强度大幅度下降，严重影响混凝土结构承载能力，破坏结构的安全性能，严重的将造成返工，造成巨大的经济损失。也极大地降低了混凝土抗渗、抗冻等混凝土的耐久性能。 3 混凝土离析的影响因素及应对措施 一般的混凝土拌合物用水量过大、碎石级配较差、减水剂掺量过大等都容易造成混凝土离析。但造成混凝土离析的原因远不止这些，其原因是多方面的，事实上如果不加强控制，所有混凝土的原材料变化都可能导致混凝士出现离析现象。下面将逐项分析原材料对混凝土离析现象的影响。 3．1水泥 水泥是混凝土中最主要的胶凝材料，水泥质量的稳定直接影响混凝土质量的稳定。水泥质量的变化将会导致混凝土出现离析现象，而且水泥中有多种因素影响混凝土拌合物性能。 3.1.1水泥细度的变化 众所周知，水泥的细度越高，其活性越高，水泥的需水量也越大，同时水泥细度越大，其水泥颗粒对混凝土减水剂的吸附能力也越强，极大的减弱了减水剂的减水效果。因此，在实际生产中，当水泥的 细度大幅度降低时，混凝土外加剂的用水量将大幅度减少。水泥细度的下降，容易造成混凝土外加剂的过量，引起混凝土产生离析现象。而且这种离析通常发生在减水剂掺量较高的高强度等级混凝土中。 实验胰蛋白酶活力测定 一、原理 福林—酚试剂中的磷钨酸和磷钼酸，在碱性条件下极不稳定，易被酚类化合物还原为蓝色化合物（钨蓝和钼蓝）。 蛋白质中含具酚基的氨基酸（酪氨酸、色氨酸、苯丙氨酸），用胰蛋白酶水解蛋白底物，生成含酚基的氨基酸与福林—酚试剂反应，生成蓝色化合物，在一定的范围内，蓝色化合物颜色的深浅与酶活力的大小成正比。 二、实验仪器 试管 7220分光光度计 恒温水浴锅 三、实验试剂 福林试剂B：见福林(Folin)-酚试剂法测定蛋白质的浓度部分(冰箱中) 0.55mol/L碳酸钠溶液：58.3g无水碳酸钠溶于蒸馏水，稀释并定容至1000ml 10%三氯乙酸溶液 0. 2mol/L磷酸缓冲液(pH7.5)： 0.5% 酪素溶液：称取0.5g酪素，以0.5mol/L氢氧化钠1ml湿润，再 加少量0. 2mol/L 磷酸缓冲液稀释。在水浴中煮沸溶解，冷却，稀释并容至100ml ，冷藏在(冰箱)里。 500ug/L 酪氨酸溶液 胰蛋白酶溶液(冰箱中) 四、实验步骤 标准曲线的制作：按下表加入试剂： 0.20.40.60.81.0蒸馏水 1.0 0.80.60.40.20500ug/L 酪氨酸溶液6 54321管号 各管中加0.5%酪素2ml ，于37℃水浴中反应15分钟，然后加入10%三氯乙酸3ml ，过滤除去沉淀，取清液1ml ，加入0.55mol/L 碳酸钠5ml ，再加入福林试剂1ml ，于37 ℃水浴中显色15分钟，测OD 680。 以光密度为纵坐标，酪氨酸的微克数为横坐标绘制标准曲线。 样品测定：取干燥的试管2支，按下表加入试剂 0 OD6801 1福林试剂B 5.0 5.0 0.55mol/L碳酸钠溶液 37水浴中显色15分钟1 1上清液 过滤3.0 3.0 10%三氯乙酸溶液1.0 0 2mg/ml胰酶溶液0 1.0 0. 2mol/L磷酸缓冲液 37水浴中酶解15分钟2.0 2.0 0.5%酪素溶液 备注2 1 管号 五、结果计算 酶活力：在37℃下每分钟水解酪素产生lug酪氨酸为一个活力单位。样品中含酶活力单位=A/15 ╳F A—样品测定光密度查曲线得相当酪氨酸ug数 F—酶液稀释倍数 原始数据：（注：7号为待测液） 液体编 号 0 1 2 3 4 5 7 分光光 度计值 0 0.057 0.172 0.201 0.255 0.373 0.919 分光光 度计值 0 0.057 0.173 0.194 0.263 0.386 0.928 分光光 度计值 0 0.068 0.174 0.194 0.271 0.391 0.934LDH同工酶
温度离析现象的成因及处理
胰蛋白酶分离工艺
酸性蛋白酶的作用机理
水稻原生质体分离及转化
水稳离析
酯酶同工酶
混凝土离析原因及危害
重组人胰蛋白酶
蛋白酶的种类
不同条件对食用菌酯酶同工酶谱多态性的影响_梁建光
碎石基层离析成因及解决措施
蛋白酶的种类
原生质体的分离和培养
稀土元素对三种平菇的酯酶同工酶谱的影响论文综述
混凝土离析问题原因与解决措施
胰蛋白酶活力测定