核酸适体

核酸适体(Aptamer)是一段寡核苷酸，通过体外人工进化程序(Systematic evolution of ligands by ex—ponential enrichment，SELEX)筛选得到．它能高效、特异性地结合各种配体，具有易合成、易储存和易修饰等优点，在医学诊断治疗、药物分子设计以及分析

检测等方面具有广泛的应用前景]1[．目前基于核酸适体的蛋白质检测方法主要有比色法]2[、混合夹心法]3[、电化学法]5,4[和荧光检测法]9~6[等，其中利用信号核酸适体(Signaling Aptamer)的荧光检测法因其无需分离洗脱样品，操作简便快速，从而得到了广泛的研究]10~7[．

目前利用信号核酸适体均相检测蛋白质的方法通常是直接在核酸适体上标记荧

光基团，利用它与靶分子结合时荧光信号的变化实现对靶分子的检测]7~5[．但对核酸适

体的标记有可能影响它与配体的结合，且标记位点往往难以确定．近年来发展了一些不需直接标记核酸适体的蛋白质检测方法．如利用DNA光开关化合物[Ru(phen) dppz]

+(RU)与核酸识体复合物作为信号核酸识体的方法对蛋白质进行检测]11~9[，然而这种方法对核酸适体的构象要求较高；采用接近循环延伸核酸适体(Pro—ximity extension of circular DNA aptamers)的方法检测具有二聚体靶位点的蛋白]12[；本实验室发展的基于空间位阻效应的方法虽无需直接标记核酸适体，但须以分子信标为报告分子进行信号的转换]13[．

本文建立了一种基于聚合酶反应的发夹型核酸适体均相检测蛋白质的方法．将发夹核酸适体设计成蛋白质配体和聚合反应模板，当蛋白质与核酸适体特异性结合后，发夹构象转变为线性，成为聚合反应的模板而启动聚合反应，聚合反应的进程被荧光染料实时转换为荧光信号，实现了在未直接标记核酸适体的情况下检测蛋白质．与已有的研究

方法]12~6[相比，本方法无须直接标记，对核酸适体的空间结构无特殊要求，且只需

要一个核酸适体靶位点进行蛋白质检测．对人凝血酶的检测线性范围为0．5～8 nmol ／L，检测下限为0．5 nmol／L．

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生物化学3-核酸作业参考答案

Chapter 4 Nucleic acids 专业________ 学号_________ 姓名________ 成绩________ 一、填空题（20分，每空0.5分） 1. 核酸可分为和两大类，前者主要存在于真核细胞的和原核细胞的部位，后者主要存在细胞的部位。(DNA,RNA,细胞核,拟核区，细胞质) 2. 构成核酸的基本单位是，由，和连接而成。(核苷酸， 碱基，戊糖，磷酸) 3. 在各种RNA中，含量最多，含稀有碱基最多，半寿期最短。 (rRNA,tRNA,mRNA) 4. 维持DNA的双螺旋结构稳定的作用力有，，。(碱基堆积力，氢 键，离子键) 5. 组成DNA的两条多核苷酸链是的，两链的碱基序列，其中与 配对，形成两对氢键，与配对，形成三对氢键。（反向平行，互补配对，A,T，C,G） 6. 当温度逐渐升高到一定的高度时，DNA双链，称为。当“退火”时，DNA的 两条链，称为。（打开，变性，重新配对，复性） 7. 核酸在复性后260nm波长的紫外吸收，这种现象称为效应。（变性， 减小，减色） 8. tRNA的二级结构呈形，三级结构的形状象。（三叶草。倒“L”） 9. 富含的DNA比富含的DNA具有更高的溶解温度。（GC，AT） 10.DNA的双螺旋结构模型是和于1953年提出的。（Watson，Crick） 11.DNA的T m值大小与三个因素有关，它们是，，。（GC对， DNA均一性，溶液离子强度） 12.PCR是通过、和三个步骤循环进行DNA扩增的。（变性， 退火，延伸） 二、选择题（20分） 1. 细胞内游离核苷酸分子的磷酸基团通常连接在糖的什么位置上？（）a a. C5’ b. C3’ c. C2’ d. C1’ 2. 关于双链DNA碱基含量的关系哪个是错误的？( )b a. A=T b. A+T=G+C c. C=G d. A+G=C+T 3. 下列关于DNA的叙述哪项是错误的？( )b a. 两条链反向平行 b. 所有生物中DNA均为双链结构 c. 自然界存在3股螺旋DNA d. 分子中稀有碱基很少 4. Southern印记法是利用DNA与下列何种物质之间进行分子杂交的原理？（）d a. RNA b. 蛋白质 c. 氨基酸 d. DNA 5. RNA分子中常见的结构成分是（）b a. AMP、CMP和脱氧核糖 b. GMP、UMP和核糖 c. TMP、AMP和核糖 d. UMP、CMP和脱氧核糖 6. 热变性的DNA（）a

DNA核酸适配体合作协议书【模板】

DNA核酸适配体合作协议书 甲方：我方 乙方：合作方 本协议甲方和乙方就靶标名称？？？？ DNA核酸适配体的相关合作达成共识，双方本着平等自愿、互惠互利原则，就结成长期合作关系，经友好协商达成以下合作意向。 一、合作总则 为特异性结合靶标名称？的单链DNA核酸适配体更好的进行应用，双方同意建立合作关系，甲方负责提供特异性结合靶标名称？的核酸适配体序列，乙方在此基础上开展应用方面的实验研究。 二、责任和义务 1.甲方责任和义务 1.1甲方承诺提供给乙方的数据以及实验条件真实可靠。提供的数据包含OX40?? 特异 性核酸适配体筛选方法和亲和力测试方法，亲和力数据，核酸适配体序列信息等（附 件一）。 1.2根据乙方的实际情况和要求，乙方在研究过程中，如果遇到了需要甲方提供该适配 体相关信息的地方，甲方应积极配合乙方，共同制定具体实施方案和安排，以促进 项目的顺利进行。 1.3在项目进行过程，未经乙方同意，甲方不得自行公开本合同中乙方基于甲方的核酸 适配体序列取得的研究进展，但不包括双方合作前甲方已得到该核酸适配体的信息。 1.4甲方应当保证其交付给乙方的研究开发成果和样品不侵犯任何第三人的合法权益， 如因甲方提供的研发成果及样品等导致乙方遭受任何索赔、指控时，甲方应承担相 应法律责任并承担乙方由此受到的损失。 1.5甲方不得限制乙方就甲方提供的核酸适配体所获得的研究成果发表研究论文或申 请专利。 2.乙方责任和义务 2.1乙方应尽力推进课题的实施，实验过程中应与甲方及时沟通研究进展。 2.2未经甲方同意，乙方不得公开本合同中甲方使用的实验方法和数据，不得公开甲方 提供的核酸适配体序列。乙方在以甲方提供的核酸适配体为基础，获得的研究成果 发表第一篇论文或申请第一项专利前，应征得甲方许可。

粘附素核酸适配体及其筛选方法和应用的制作技术

本技术公开了一种黏附素适配体及筛选该黏附素适配体的方法，本技术以幽门螺杆菌基因组DNA为模板，扩增得到其黏附素基因，将得到的基因与表达载体连接获得筛选靶标，再将筛选靶标与随机单链ssDNA文库孵育，SELEX筛选，PCR扩增文库，然后经多轮筛选得到黏附素核酸适配体。本技术还公开了该黏附素适配体在制备幽门螺杆菌的检测试剂盒以及制备幽门螺杆菌免疫药物中的应用。本技术的黏附素核酸适配体具有较高的亲和力与特异性，分子量小、渗透性强，相对现有技术能够更直观的反应机体感染Hp的状况。 技术要求 1.一种黏附素核酸适配体，其特征在于，所述核酸适配体的核苷酸序列含有SEQ IDNO.1所示的核苷酸序列；或含有以下任意一种核苷酸序列：与SEQ ID NO.1限定的核苷酸序列同源性在60％以上、与SEQ ID NO.1限定的核苷酸序列进行杂交的序列、SEQ ID NO.1限定的核苷酸序列转录的RNA序列。 2.根据权利要求1所述的黏附素核酸适配体，其特征在于，所述核酸适配体的核苷酸序列被甲基化、巯基化、磷酸化、氨基化或同位素化。 3.根据权利要求1或2所述的黏附素核酸适配体，其特征在于，所述核酸适配体的核苷酸序列上连接有荧光物质、治疗性物质、放射性物质、生物素、地高辛、纳米发光材料或酶标记。 4.一种权利要求1所述的核酸适配体的的筛选方法，其特征在于，包括以下步骤： (1)以幽门螺杆菌基因组DNA为模板，PCR扩增得到幽门螺杆菌黏附素(Hpa A)基因； (2)将得到的基因与表达载体Pet28a质粒经酶切后连接，连接产物转入大肠杆菌E.coli BL21菌株并诱导表达，裂解细菌，纯化，获得的重组粘附素Hpa A即为筛选靶标； (3)将步骤(2)得到的黏附素Hpa A与ssDNA文库进行孵育，收集与筛选靶标结合的ssDNA； (4)将得到的ssDNA进行PCR扩增，得到dsDNA； (5)得到的dsDNA与pUC19质粒经酶切后连接，并转入大肠杆菌E.coli DH5α菌株； (6)选取阳性克隆测序，并验证阳性克隆扩增得到的ssDNA与Hpa A的结合力，得到核酸适配体。 5.如权利要求4所述的筛选方法，其特征在于，步骤(1)中Hpa A引物序列为： F:5’-CGGATCCTGCAGCCCGCATATTATTG-3’； R:5’-CAAGCTTTCGGTTTCTTTTGCCTTTT-3’。 6.如权利要求4所述的筛选方法，其特征在于，步骤(3)中，ssDNA文库包括序列： 5’-CGGATCCATCCAGAGTGACGCAGCA-N45-TGGACACGGTGGCTTAGT-3’； 引物P1：5’-CGGATCCATCCAGAGTGACGCAGCA-3’； 引物P2：5’-GAAGCTTACTAAGCCACCGTGTCCA-3’。 7.如权利要求4所述的筛选方法，其特征在于，步骤(3)中，将纯化的粘附素Hpa A包被于聚苯乙烯微孔中，然后将合成的ssDNA文库溶于筛选缓冲液投入其中，洗下结合的ssDNA作为下一轮的模板；第五轮后以空白孔为负向筛选介质。 8.权利要求1-3任意一项所述的黏附素核酸适配体或其衍生物在制备检测幽门螺杆菌的试剂盒、分子探针或靶向介质中的应用。

核酸习题及答案1-7

选择题 2.自然界游离核苷酸的磷酸多连接于戊糖的( B ) A.C-3' B.C-5' C.C-2' D.C-4' E.C-1' 3.RNA和DNA彻底水解后的产物是( E ) A.部分碱基不同，核糖相同 B.碱基相同，核糖不同 C.碱基不同，核糖不同 D.碱基不同，核糖相同 E.部分碱基不同，核糖不同 4.下列碱基只存在于mRNA中，而不存在于DNA中的是( D ) A.鸟嘌呤 B.腺嘌呤 C.胞嘧啶 D.尿嘧啶 E.胸腺嘧啶 5.通常不存在于RNA中，也不存在于DNA中的碱基是( B ) A.腺嘌呤 B.黄嘌呤 C.鸟嘌呤 D.胸腺嘧啶 E.尿嘧啶 6.核酸的基本组成单位是( E ) A.磷酸和戊糖 B.核糖和脱氧核糖 C.含氮碱基 D.多聚核苷酸 E.核苷酸 7.参与构成DNA分子的单糖是( A ) A.D-2'-脱氧核糖 B.核糖 C.葡萄糖 D.磷酸核糖 E.戊糖 8.作为第二信使的核苷酸是( C ) A.UMP B.AMP C.cAMP D.cTMP https://www.wendangku.net/doc/694630611.html,mp 9.真核细胞中DNA主要分布在( C ) A.细胞膜 B.细胞质 C.细胞核 D.线粒体 E.微粒体 10.在核酸中，核苷酸之间的连接方式是( B ) A.2',3'-磷酸二酯键 B.3',5'-磷酸二酯键 C.2',5'-磷酸二酯键 D.1',5'-糖苷键 E.氢键

11.DNA的一级结构是指( B ) A.各核苷酸中核苷与磷酸的连接键性质 B.核苷酸的排列顺序 C.DNA的双螺旋结构 D.核糖与含氮碱基的连接键性质 E.核苷酸的组成 12.细胞内含量最稳定的成分是( C ) A.核糖体 B.氨基酸 C.DNA D.ATP E.TRNA 16.按照Chargaff规则，下列关于DNA碱基组成的叙述，正确的是( D ) A.A与C的含量相等 B.A+T=G+C C.同一生物体,不同组织的DNA碱基组成不同 D.不同生物体来源的DNA碱基组成不同 E.DNA的碱基组成受营养状况的影响 22.核酸分子中储存、传递遗传信息的关键部分是( B ) A.磷酸戊糖 B.碱基序列 C.核苷 D.戊糖磷酸骨架 E.磷酸二酯键 13.DNA的二级结构是( A ) A.双螺旋结构 B.α-螺旋 C.β-转角 D.超螺旋结构 E.β-折叠 14.DNA分子中的碱基配对主要依赖( A ) A.氢键 B.范德华力 C.盐键 D.二硫键 E.疏水键 17.B型-DNA双螺旋结构每旋转一周，沿轴上升的高度是( E ) A.0.34nm B.0.15nm C.6.8nm D.5.4nm E.3.54nm 18.下列关于B型-DNA双螺旋结构的叙述,正确的是( E ) A.一条链是左手螺旋，另一条链是右手螺旋 B.双螺旋结构的稳定纵向靠氢键维系 C.A+T与G+C比值为1 D.两条链的碱基间以共价键相连 E.磷酸和脱氧核糖构成螺旋的骨架 19.具有左手螺旋DNA结构的是( D )

核酸作业-答案

核酸作业 一、名词解释： ⑴碱基堆积力：DNA分子中堆积的上百万的碱基对之间存在范德化力，这种堆积相互作用称为碱基堆积力。 ⑵DNA的一级结构：组成DNA的核苷酸的种类、数量、排列顺序及连接方式称DNA的 一级结构。 ⑶基因及基因组：基因的现代分子生物学概念是指能编码有功能的蛋白质多肽链或合成 RNA所必需的全部核酸序列，是核酸分子的功能单位。 基因组是指一个细胞或病毒所有基因及间隔序列，储存了一个物种所有的遗传信息。在病毒中通常是一个核酸分子的碱基序列，单细胞原核生物是它仅有的一条染色体的碱基序列，而多细胞真核生物是一个单倍体细胞内所有的染色体。 ⑷核酸变性：在某些理化因素作用下，核酸分子中氢键断裂，双螺旋结构松散分开，理化 性质改变、失去原有的生物活性称为核酸变性。 ⑸Chargatt定律：所有的DNA中腺嘌呤与胸腺嘧啶的摩尔数相等（A=T），鸟嘌呤和胞嘧 啶的摩尔数相等（G=C），即嘌呤的总摩尔数与嘧啶的总摩尔数相等（A+G=T+C）。DNA 的碱基组成具有种的特异性，但没有组织和器官的特异性。另外，生长发育阶段、营养状态和环境的改变都不影响DNA的碱基组成。 ⑹DNA复性：DNA变性后分开的两条单链在一定条件下由于互补可以重新形成双螺旋 DNA，这是变性的可逆过程，称为DNA的复性。 ⑺减色效应：随着核酸复性，紫外吸收降低的现象。 ⑻DNA溶解温度：双链DNA熔解彻底变成单链DNA的温度范围的中点温度。 ⑼DNA退火：DNA由单链复性变成双链结构的过程。来源相同的DNA单链经退火后完全 恢复双链结构，同源DNA之间、DNA与RNA之间，退火后形成杂交分子。 填空： 1根据OD260/OD280 的比值可判断核酸样品的纯度，纯双链DNA 的OD260/OD280 约___________，纯RNA的OD260/OD280约为________________。 ①1.8 （2分）②2.0 2. 在核酸研究中，常用的两种电泳方法是_______________和_________。 ①琼脂糖凝胶电泳②聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE) （2分） 3. 科学家______________和_____________在1953年提出了DNA的双螺旋结构模型，为现代分子生物学的建立奠定了基础。 ①J.D.Watson(华生)②F.H.C.Crick(克里克) （2分） 4. 核酸分子中含有________ 和________ ，所以对波长______的光有强烈吸收。 ①嘌呤碱②嘧啶碱③260nm（3分）

基于核酸适配体的蛋白质研究新技术和新方法

项目名称：基于核酸适配体的蛋白质研究新技术和新方法首席科学家：谭蔚泓湖南大学 起止年限：2011.1至2015.8 依托部门：教育部 二、预期目标 总体目标: 本项目针对当前蛋白质研究中存在的瓶颈问题，发展基于核酸适配体的蛋白质研究新技术新方法；以肝癌和食管癌为研究对象，面向我国社会发展中提高人类健康的重大需求，通过建立肝癌和食管癌相关蛋白的发现、分离分析、检测表征等新技术，探索肝癌和食管癌发生发展的分子机制，为恶性肿瘤等重大疾病早期诊断提供新技术和新方法。通过开展多学科交叉与综合研究，形成具有原始创新的方法学突破及自主知识产权的蛋白质研究支撑平台，获得具有国际影响的重要研究成果，培养造就一支具有多学科知识和创新研究能力的研究队伍，促进我国在蛋白质研究领域达到国际领先水平。 五年预期目标： 1. 阐明核酸适配体筛选过程的进化规律，建立针对蛋白质、细胞、组织等不同层次蛋白质靶标体系的高效率核酸适配体筛选技术平台，并筛选出针对肝癌和食管癌特异性标志物的核酸适配体15-30种。 2．揭示核酸适配体与蛋白质相互作用的分子机制，发展2-4种具有自主知识产权的系统研究核酸适配体分子识别的方法，为核酸适配体分子探针的设计、筛选、构/效关系和性能评价提供理论指导。 3. 发展高灵敏、高通量、高准确度的蛋白质定量检测的新原理、新方法，

提出高效率、高重现性的蛋白质分离富集的新方法、新技术，研制出相应高通量、自动化的蛋白质分离及检测系统，对低丰度蛋白检测的灵敏度达到1 pg/mL及更低水平，为肿瘤的蛋白质生物标志物的发现、重大疾病的分子机制研究与早期诊断提供研究工具。 4. 建立肝癌、食管癌等恶性肿瘤体系的特征核酸适配体分子识别指纹图谱，发现4-5种特异性高的癌症标志物，并完成核酸适配体分子识别体系在癌症早期诊断中的临床意义评估, 开发具有自主知识产权的诊断系统。 5. 取得有国际影响的重要基础研究成果，提出有自主知识产权的新理论和新方法。发表一批高水平、具有重要国际影响的学术论文。申请并获得一批具有产业化前景的发明专利。 6. 在蛋白质研究领域培养一批具有化学与生物医学交叉学科综合知识的优秀人才队伍与中青年研究骨干。通过项目协作，促进形成一支在核酸适配体相关领域具有国际领先水平的学术团队。 三、研究方案 （一）总体思路 （1）以肿瘤为研究模型，发展基于核酸适配体的蛋白质研究技术本项目从“国家中长期科学和技术发展规划纲要”中“人口与健康”等国家重 大战略需求出发，以2008年度起蛋白质研究重大计划重要支持方向“蛋白质研究的新技术和新方法”——“核酸适配体识别等新技术新方法”为依据，发挥核酸适配体所具备的高特异性、高亲和力、高稳定性、便于化学修饰与功能化、易于大量低成本与可重复性合成等优势，以及可通过核酸适配体筛选发现未知蛋白标志物并获得病变体系特征分子图谱的优越性，开展核酸适配体分子识别基础研究，指导蛋白质分离与检测方法的设计与发展，建立高通量、高灵敏、高准确度的蛋白质研究新方法和新技术，为癌症早期诊断提供特异性蛋白质标志物、分子探针、分子识别传感器件，满足提升我国人民健康水平的需求。

【CN110111849A】一种基于高性能计算平台的核酸适配体计算机辅助筛选方法及核酸适配体【专利】

(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910379241.4 (22)申请日 2019.05.08 (71)申请人 北京市计算中心 地址 100094 北京市东城区东四南大街249 号 申请人 北京理工大学 (72)发明人 刘彤　屈锋　裴智勇　刘书霞　 陆晓娟　刘满姣　袁寒玉　杨杰　 (51)Int.Cl. G16B 50/00(2019.01) G16B 30/00(2019.01) (54)发明名称一种基于高性能计算平台的核酸适配体计算机辅助筛选方法及核酸适配体(57)摘要本发明提供了一种基于高性能计算平台的核酸适配体计算机辅助筛选方法，涉及分子生物学检测技术领域，根据匹配原则查询筛选平台集成的数据库系统中是否有与目标蛋白匹配的蛋白结构，如果有则作为受体模板，如果没有则进行同源构建，通过分子动力学模拟和分子对接筛选得到初选的核酸适配体，最为核酸适配体候选物，具有高效、快捷、准确率高的特点。该筛选方法可与“湿法”实验结合，减少“湿法”实验次数，节省实验成本，提高筛选成功率。通过计算机辅助模拟分析得到适配过程中蛋白质与核酸分子间化学反应机理等信息，并将数据在终端进行展示，并在揭示相应生物材料与核酸分子间可能的相互作用机理方面提供数据支撑，因此具有重要 的研究意义和使用价值。权利要求书2页 说明书11页 附图2页CN 110111849 A 2019.08.09 C N 110111849 A

权　利　要　求　书1/2页CN 110111849 A 1.一种基于高性能计算平台的核酸适配体计算机辅助筛选方法，其特征在于，包括： 步骤一，对数据库进行筛选，筛选出具有蛋白A相应结构的蛋白质数据库和核酸数据库，蛋白A为目标蛋白； 步骤二，对经过第一步筛选后的数据库进行下载，并对所述经过第一步筛选后的所述数据库中的数据进行数据处理，所述经过第一步筛选后的数据库和经过第一步筛选后的所述数据库中的数据存储录入筛选平台数据库系统中； 步骤三，搭建核酸适配体计算生物学筛选平台进行核酸适配体筛选； 包括：蛋白体系的构建： 所述蛋白体系的构建包括： S01：根据匹配原则查询所述筛选平台数据库系统中是否有与所述蛋白A匹配的蛋白结构： 如果所述筛选平台数据库系统中具有与所述蛋白A匹配的蛋白结构，则下载所述蛋白结构作为受体模板； 如果所述筛选平台数据库系统中没有与所述蛋白A匹配的蛋白结构，则进行同源构建； S02：根据所述受体模板或所述同源构建方法构建A蛋白三维结构； S03：对所述蛋白A进行分子动力学模拟，获得A蛋白稳定结构； S04：将所述蛋白A稳定结构与所述筛选平台数据库系统中的核酸分子进行对接；判断所述蛋白A稳定结构与所述核酸分子是否对接成功： 如果对接成功，则所述核酸分子为初选核酸适配体。 2.根据权利要求1所述的基于高性能计算平台的核酸适配体计算机辅助筛选方法，其特征在于，步骤二中所述数据处理包括：对经过所述第一步筛选后的所述数据库需求数据，从后台下载，对所述需求数据进行统一整合形成存储数据，存储录入筛选平台中数据库系统中。 3.根据权利要求2所述的基于高性能计算平台的核酸适配体计算机辅助筛选方法，其特征在于，所述存储数据包含蛋白的三维晶体结构序列信息、名称信息，将所述存储数据录入相应的后台数据库表格中，用以后续的存取、调用和删减操作。 4.根据权利要求1所述的基于高性能计算平台的核酸适配体计算机辅助筛选方法，其特征在于，所述S01步骤中是在所述筛选平台数据库系统中的所述蛋白质数据库进行查询；所述S04步骤中是与所述筛选平台数据库系统中的所述核酸数据库中的核酸分子进行对接。 5.根据权利要求1所述的基于高性能计算平台的核酸适配体计算机辅助筛选方法，其特征在于，所述S03步骤中所述分子动力学模拟过程包括： S0301：构建所述蛋白A格式文件； S0302：选择与所述蛋白A格式文件合适的力场文件； S0303：提交所述蛋白A格式文件与所述力场文件，进行计算。 6.根据权利要求1所述的基于高性能计算平台的核酸适配体计算机辅助筛选方法，其特征在于，所述S04步骤中所述核酸分子对接过程包括：安装分子对接软件； 还包括： S0401：构建与所述蛋白A进行分子对接的格式文件； 2

生物化学 核酸习题及答案

核酸：是一类重要的生物大分子，担负着生命信息的储存与传递。 DNA一级结构：构成DNA的脱氧核苷酸按照一定的排列顺序而形成的线性结构 Tm：通常把DNA热变性过程中A260达到最大值一半时的温度。 DNA变性：在物理化学因素影响下，DNA碱基对间的氢键断裂，双螺旋解开，DNA功能丧失 增色效应：由于核酸变性引起的对紫外线吸收增加的现象。 减色效应：DNA复性后对紫外线吸收减少的现象。 1简述DNA双螺旋结构模型要点？ ○1DNA由两条脱氧多核苷酸链构成，两条链围绕一个中心轴，反向平行缠绕 ○2嘌呤核嘧啶碱基处于双螺旋结构的内侧，碱基平面与螺旋轴垂直，脱氧核糖平面与中心轴平行○3碱基互补A-T,G-C ○4在双螺旋的表面形成大小两个凹槽，分别为大沟和小沟，交替出现○5双螺旋直径2nm每个螺旋包括10bp螺距3.4nm, 2请从分子组成、分子结构、细胞分布以及生物功能的角度，比较DNA和RNA的区别？○1组成单位不同：DNA的组成单位是脱氧核苷酸，RNA的组成单位是核糖核苷酸， ○2组成碱基不同：DNA的组成碱基是ATGC，RNA的组成碱基是AUGC ○3组成五碳糖不同：DNA的组成五碳糖是脱氧核糖，RNA的组成五碳糖是核糖， ○4空间结构不同：DNA是双螺旋结构，RNA一般是单链。 ○5功能不同：DNA是遗传物质，RNA一般在细胞中不作为遗传物质。 3试比较原核生物DNA和RNA转录的主要区别？ 相同点：都是利用碱基互补配对原则；都发生在细胞质内（无细胞核）；都需要能量和酶。都是生物生长繁殖所必须的。 不同：a DNA复制结过是产生两个DNA分子；RNA转录是以DNA为模板，进行合成，只形成一条链；b DNA复制的目的与RNA转录的目的不同，DNA复制是为了分裂，产生子代；RNA转录是为了合成蛋白质（mRNA）c DNA是半保留复制，新生链各有一半来自母链；RNA只是以DNA为模板合成一条链。d DNA合成需要引物，RNA合成不需要引物f DNA 复制和RNA转录所用的反应底物不同，DNA是脱氧核糖核苷酸RNA是核糖核苷酸；g DNA 复制和RNA转录需要的酶体系不同 4简述真核生物mRNA的成熟加工过程？ ⑴在5'端形成帽子结构⑵在3'端形成多聚A尾巴⑶剪接：去除初级转录产物上的内含子，把外显子连接为成熟的RNA 脂：是由脂肪酸与醇作用生成的酯及其衍生物。磷脂：含有磷酸的复合脂质。生物膜：围绕细胞或细胞器的脂双层膜，细胞内的膜系统与质膜的统称。 外周蛋白：在细胞膜的细胞外侧或细胞质与细胞膜表面松散连接的膜蛋白， 内在蛋白：整合进入到细胞膜结构中的一类蛋白，它们可部分地穿过膜磷脂双层1简述生物膜的主要生物学功能？ 保护功能，物质转运，信息传递，能量交换，运动功能 2简述生物膜的流体镶嵌模型结构要点？ ○1强调了膜的流动性，膜中脂类分子既有固体分子排列的有序性又有液体分子的流动性 ○2强调了膜的不对称性和脂类与蛋白质分子的非极性部分嵌入脂类双分子层的疏水尾部，极性部分露于膜表面.

核酸适体

核酸适体(Aptamer)是一段寡核苷酸，通过体外人工进化程序(Systematic evolution of ligands by ex—ponential enrichment，SELEX)筛选得到．它能高效、特异性地结合各种配体，具有易合成、易储存和易修饰等优点，在医学诊断治疗、药物分子设计以及分析 检测等方面具有广泛的应用前景]1[．目前基于核酸适体的蛋白质检测方法主要有比色法]2[、混合夹心法]3[、电化学法]5,4[和荧光检测法]9~6[等，其中利用信号核酸适体(Signaling Aptamer)的荧光检测法因其无需分离洗脱样品，操作简便快速，从而得到了广泛的研究]10~7[． 目前利用信号核酸适体均相检测蛋白质的方法通常是直接在核酸适体上标记荧 光基团，利用它与靶分子结合时荧光信号的变化实现对靶分子的检测]7~5[．但对核酸适 体的标记有可能影响它与配体的结合，且标记位点往往难以确定．近年来发展了一些不需直接标记核酸适体的蛋白质检测方法．如利用DNA光开关化合物[Ru(phen) dppz] +(RU)与核酸识体复合物作为信号核酸识体的方法对蛋白质进行检测]11~9[，然而这种方法对核酸适体的构象要求较高；采用接近循环延伸核酸适体(Pro—ximity extension of circular DNA aptamers)的方法检测具有二聚体靶位点的蛋白]12[；本实验室发展的基于空间位阻效应的方法虽无需直接标记核酸适体，但须以分子信标为报告分子进行信号的转换]13[． 本文建立了一种基于聚合酶反应的发夹型核酸适体均相检测蛋白质的方法．将发夹核酸适体设计成蛋白质配体和聚合反应模板，当蛋白质与核酸适体特异性结合后，发夹构象转变为线性，成为聚合反应的模板而启动聚合反应，聚合反应的进程被荧光染料实时转换为荧光信号，实现了在未直接标记核酸适体的情况下检测蛋白质．与已有的研究 方法]12~6[相比，本方法无须直接标记，对核酸适体的空间结构无特殊要求，且只需 要一个核酸适体靶位点进行蛋白质检测．对人凝血酶的检测线性范围为0．5～8 nmol ／L，检测下限为0．5 nmol／L． 参考文献 [1] Hermann T．，Patel D．J．．Sciencef J]，2000，287：820—825 [2] Stojanovic M．N．，Landry D．W．．J．Am．Chem．Soc．[J]，2002，124：9678---9679 [3] ZHEN Bei(甄蓓)，ZHANG Min—Li(张敏丽)，SONG Ya—Jun(宋亚军)，et a1．．Letters in Biotechnology(生物技术通讯)[J]，2002 l3(2)：l23一l25 [4] xu D．，Yu X．，Liu z．，et a1．．Ana1．Chem．[J]，2005，77：5l07—5ll3 [5] ZHENG Jing(郑静)，LIN Li(林莉)，CHENG Gui—Fang(程圭芳)，et a1．．Science in China，Series B(中国科学，B辑)[J]，2006 36：485—492 [6] Nobuko H．，Andrew E．，Martin S．，et a1．．Ana1．Biochem_[J]，2001，294： l26一l3l [7] U W．，Wang K．M．，Tan W．H．，et a1．．Analyst[J]，2007，132：l07一ll3

生物化学习题(核酸答案)

生物化学习题(核酸答案) 一、名词解释: 单核苷酸:核苷与磷酸缩合生成的磷酸酯 磷酸二酯键:单核苷酸中,核苷的戊糖与磷酸的枪击之间形成的磷酸酯键 碱基互补规律:在形成双螺旋结构的过程中,由于各种碱基的大小与结构的不同,使得碱基之间的互补配对只能在G-C(或C-G)与A-T(或T-A)之间进行,这种碱基配对的规律称为碱基配对规律(互补规律) 核酸的变性与复性:当双螺旋结构的DNA溶液缓慢加热时,氢键断开,双链DNA解离为单链,称为核酸的“熔解”或变性;在适宜的温度下,分散开的两条DNA链可以完全重新结合成与原来一样的双股螺旋(DNA螺旋的重组过程称为复性) 退火:当将变性(双链呈分散状态)的DNA溶液缓慢冷却时,它们可以发生不同程度的重新结合而形成双螺旋结构的现象 增色效应、减色效应:DNA双螺旋结构变为单链的无规则卷曲状态时,紫外吸收增加的现象——增色效应;变性DNA在退火条件下复性时,DNA在260nm的光密度比DNA分子中的各个碱基在260nm处吸收的光密度的总与小得多(35%-40%)的现象DNA的熔解温度:DNA双螺旋解开一半时的温度(Tm) 分子杂交:不同的DNA片段之间、DNA片段与RNA片段之间,如果彼此间的核苷酸排列顺序互补,也可以复性,形成新的双螺旋结构。按照互补碱基配对而使不完全互补的两条多核苷酸相互结合的过程 环化核苷酸:单核苷酸中的磷酸基分别于戊糖的3’-OH及5’-OH形成酯键,这种磷酸内酯的结构成为环化核苷酸 核小体:用于包装染色质的结构单位,由DNA链缠绕一个组蛋白核构成 cAMP:3’,5’-环腺苷酸,就是细胞内的第二信使,由于某些激素或其它分子信号刺激激活腺苷酸环化酶催化ATP环化而成 二、填空题: 1、核酸变性后,其摩尔磷吸光系数ε(P) 。 2、维持DNA双螺旋结构稳定性主要就是靠。 3、核酸的基本结构单位就是。 4、脱氧核糖核酸在糖环位置不带羟基。

基于核酸适配体化学发光检测新技术(精)

基于核酸适配体化学发光检测新技术 核酸适配体是近年来发展起来的一类经体外人工合成筛选出的单链寡核苷酸,能高效、特异性地结合各种生物目标分子,故它的出现为化学生物学界和生物医学界提供了一种新的高效快速识别的研究平台。目前生物分子检测通常采用抗原抗体特异相互作用识别模式,但由于受到抗体易失活、制备时间较长等因素的影响,在一定程度上限制了抗体检测技术的广泛应用。相比之下,核酸适配体自身稳定性好、制备合成相对简单、快速、易获得、易功能化修饰与标记,且在生物传感器设计中应用灵活等优点,近几年在生物分析检测方面备受关注。目前已经成为临床诊断、环境监测、药学研究等许多领域中的研究热点。化学发光(CL)分析法具有不需光源,避免了杂散光的干扰,仪器设备简单、操作简便,具有极高的灵敏度,较宽的检测范围,可实现全自动化等特点,正逐渐成为分析检测中极为有用的工具,随着与众多学科交叉研究和应用领域的扩展,目前已成功地应用在药学、生物学、分子生物学、临床医学和环境学等诸多领域。在本论文中,我们采用化学发光分析法,利用核酸适配体对目标分子的高分辨识别,发展了多种具有创新意义的化学发光适配体生物传感器,也实现了同一份样品中双组分的同时检测。整个论文由以下五部分构成:第一章:绪论本绪论由两节构成,第一节介绍了核酸适配体技术检测生物分子的研究进展,包括了三部分。第一部分中简单介绍了核酸适配体的制备、特点、优势以及在分析领域中的应用;第二部分中介绍了基于核酸适配体识别模式的单组分检测技术的研究进展及其意义,主要内容包括:光检测、电化学检测以及其他检测方法,并列举了近年来分析领域中的部分典型示例;第三部分中介绍了基于核酸适配体识别模式的多组分检测技术的研究进展及其意义,也列举了近年来它们在该分析领域中的部分典型示例。第二节阐述了化学发光多组分酶检测研究进展以及本课题研究的目的、意义、主要研究内容以及创新之处,即核酸适配体在化学发光领域中应用与展望。第二章:基于核酸适配体的化学发光无标记检测腺苷的新技术由于目标分子在适配体上精确的结合位点与构象变化通常并不十分清楚,直接导致合适标记核酸适配体存在一定的难度,因此,适配体的无标记型检测技术已成为近年来的研究热点,尤其在生物检测、环境监控等领域无标记简单快速检测具有非常重要的意义。本章以腺苷为研究对象,采用羧基修饰的磁性微球作为分离载体,基于3,4,5-三甲氧基苯甲酰甲醛(TMPG)与鸟嘌呤(G)碱基之间的瞬时化学发光衍生反应,实现了生物小分子腺苷的无标记检测。本章包括以下两种腺苷检测原理的设计,具体实验步骤如下:(1)活化磁性微球,固定捕获探针序列;(2)方法A:一定量的适配体先与不同量的腺苷特异性结合,随后剩余的自由腺苷适配体与捕获探针序列在磁性微球表面进行杂交反应,从而连接在磁性微球上;方法B:适配体先与捕获探针序列进行杂交反应,随后加入不同量的腺苷,导致部分适配体序列脱离磁性微球表面,与溶液中腺苷形成复合物;(3)磁性分离后,TMPG直接检测结合在磁性微球表面的适配体中G碱基产生的CL信号,进行腺苷间接定量。结果表明:该两种方法均具有准确可靠、重现性和选择性好的特点。第一种方法的最低腺苷检测限为8×10~(-8)M,腺苷浓度在4×10~(-7)-1×10_(-5)M范围内,CL 信号呈线性增加(R~2=0.9852);第二种方法的腺苷浓度在4×10~(- 2)5×10(_5)M范围内,CL信号呈线性增加(R~=0.9764)。综合而言:本章发展的无标记检测生物小分子腺苷的CL新技术,具有简单,快速,灵敏度高等特点,有望在临床诊断、药学研究以及环境监测等领域发挥作用。第三章:基于核酸适配体

生物化学习题及答案 核酸

核酸 (一)名词解释 1．单核苷酸(mononucleotide) 2．磷酸二酯键（phosphodiester bonds） 3．不对称比率（dissymmetry ratio） 4．碱基互补规律(complementary base pairing) 5．反密码子（anticodon） 6．顺反子（cistron） 7．核酸的变性与复性（denaturation、renaturation） 8．退火（annealing） 9．增色效应（hyper chromic effect） 10．减色效应（hypo chromic effect） 11．噬菌体（phage） 12．发夹结构（hairpin structure） 13．DNA的熔解温度（melting temperature T）m14．分子杂交（molecular hybridization） 15．环化核苷酸(cyclic nucleotide) （二）填空题 1．DNA双螺旋结构模型是_________于____年提出的。 2．核酸的基本结构单位是_____。 3．脱氧核糖核酸在糖环______位置不带羟基。 4．两类核酸在细胞中的分布不同，DNA主要位于____中，RNA主要位于____中。5．核酸分子中的糖苷键均为_____型糖苷键。糖环与碱基之间的连键为_____键。核苷与核苷之间通过_____键连接成多聚体。 6．核酸的特征元素____。 7．碱基与戊糖间是C-C连接的是______核苷。 8．DNA中的____嘧啶碱与RNA中的_____嘧啶碱的氢键结合性质是相似的。 嘧啶碱的氢键结合性质是相似的。_____中的RNA嘧啶碱与____中的DNA．9．10．DNA双螺旋的两股链的顺序是______关系。 3H标记的_______，可使DNA带有放射性，而RNA11．给动物食用不带放射性。12．B型DNA双螺旋的螺距为___，每匝螺旋有___对碱基，每对碱基的转角是___。13．在DNA分子中，一般来说G-C含量高时，比重___，T（熔解温度）则___，m 分子比较稳定。 14．在_ __条件下，互补的单股核苷酸序列将缔结成双链分子。 15．____RNA分子指导蛋白质合成，_____RNA分子用作蛋白质合成中活化氨基酸的载体。 16．DNA分子的沉降系数决定于_____、_____。 17．DNA变性后，紫外吸收__ _，粘度_ __、浮力密度_ __，生物活性将__ _。18．因为核酸分子具有_ __、__ _，所以在___nm处有吸收峰，可用紫外

核酸适配体

SELEX适体选择的过程 RNA或DNA的核酸片段，与蛋白质，多肽或小分子结合，使三维结构互补。蛋白质，多肽或小分子。“适”来自拉丁词Aptus匹配。可应用于各种领域包括传感器探针，用于医疗诊断和环境毒性检测，分子成像，病毒治疗如疫苗和抗病毒药物，靶向药物送的发展与开拓新兴心态注定改变范式病人的护理。这个有前途的适体可在体外用。这个过程被称为“SELEX（系统的演变通过指数enrechiment 配体）”，在体外进化，库的单链DNA或RNA包含40-60基地随机序列区在~ 20基本常数序列引物地区有利于放大产生。SELEX过程继续，直到收敛于一个收集池序列为目标的亲和力和通常得到的周期后8-15选择。由于他们的高亲和力和选择性，适配体已经成功地分离出目标包括范围广泛小分子，肽，蛋白质，甚至整个cells5-8。在这里，在技术回顾系列，我们将在评价的适体技术更集中毒性。特别是，在这个问题上，不同的技术为获得适体，包括“技术”要讨论。传统的适体的选择技术的“技术”采用SELEX最成功的适体代表1 109 1013的分子在1从library9。通常选择过程的开始与低比例的核酸蛋白质为检查是否所有的分子结合的target10。选择第一轮需要长时间的培养时间和不严格的条件，而后来的周期通常需要严格的条件，如改变缓冲液条件下，反应体积和时间的潜伏期。 之间的核苷酸结合后的反应图书馆与靶分子，绑定物种分离通过各种分离技术。然后，该放大的分子被用于下一轮选择过程。目标结合的分离未结合的适配体在筛选的过程是成功的适体的选择是至关重要的一步。适体的选择是通过连续重复丰富目标绑定和未绑定的寡核苷酸去除步骤，其次洗脱，放大，和所选择的寡核苷酸净化。由于蒂尔克和黄金的第一次尝试使用硝酸纤维素过滤方法，其他几个适体被选定，它仍然被认为是一种有效的分离的方法。硝化纤维素过滤器的结合用于广泛调查的平衡结合和蛋白质oligonucleitides络合物的动力学性质由于硝基优先保留蛋白质和蛋白质的DNA或RNA复杂但不是免费的寡核苷酸。完成整个选择的过程，通常需要12个周期，之后选定的分子可以被克隆到一个合适的载体并测序。SELEX方法，而过滤策略已用于隔离适体对各种靶蛋白，这种技术仍然是一个繁琐，耗时的过程。此外，一些DNA核酸适配体已选择使用硝酸纤维素大肠杆菌RecA protein11）。同时，由于分离过滤效率，大量的选择轮是必需的。传统的各种改进技术1990中描述的方法已被报道在近十年来，如毛细管电泳（CE）- SELEX，量身定制的SELEX，切换技术，照片—研究开发新的技术应用简单，容易和廉价的方法，如非SELEX，NP（纳米）- SELEX（例如，磁珠，胶体金粒子），细胞SELEX，溶胶-凝胶技术和微流控技术。在本审查，几个隔离高亲和力的先进的分离方法和特异性核酸适配体的提供。这些新的变异大大缩短时间的选择和改进适体的亲和性和特异性。基于核酸适体的选择neccem；非SELEX毛细管电泳的应用（CE）为SELEX造成了巨大的改进

核酸练习题答案

核酸练习题 一、填充题 1,核糖核酸RNA主要分为 tRNA 、 mRNA 和 rRNA 三种类型。 2,脱氧核糖核酸（DNA）的基本结构单位是脱氧核糖核苷酸。 3，脱氧核糖核酸DNA双链中若 G+C% 含量高，则 Tm 值高。 4，转移核糖核酸tRNA的二级结构为三叶草形状，三级结构为倒L 形状 5，DNA和RNA中的碱基不同的是 T 和 U 。 二、是非题 ( ? )1,tRNA分子的3’末端具有聚腺苷酸的“尾”结构。 ( ?)2,若DNA一条链的碱基顺序是pCpTpGpGpApC,则另一条链的碱基顺序是pGpApCpCpTpG. ( ? )3,DNA的二级结构由两条平行的多核苷酸链构成。 ( ? )4,碱溶液水解RNA产生5’-核苷酸。 ( ? )5，稀碱溶液可以水解DNA，但不可以水解RNA。 ( √ )6，在变性后，DNA的紫外吸收增加。 三、选择题（单选题） ( b )1，热变性的DNA在适当条件可以复性，条件之一是： [a] 骤然冷却 [b] 缓慢冷却 [c] 能缩 [d] 加入浓的盐 ( a )2.如果反密码子是UGA，它可识别下列哪个密码子？ [a] ACU [b] CUA [c] UCA [d] UAC ( c )3,DNA中含有18.4%的A时，其碱基C+G%总含量为多少？ [a]36.8 [b]37.2 [c] 63.2 [d] 55.2; ( d )4,热变性的DNA具有下列哪种特征？ [a]核苷酸间的磷酸二酯键断裂 [b]形成三股螺旋 [c]260nm处的光吸收下降 [d] GC对的含量直接影响Tm值 四、问答题 1,请简单叙述DNA的组成和结构的特点。 答：DNA是由2-脱氧核苷酸聚合而成的线性高分子，DNA中存在的碱基是：腺嘌呤（A）、鸟嘌呤(G)、胞嘧啶(C)和胸腺嘧啶(T)。DNA双螺旋结构的要点如下： （1）DNA分子由两条多聚脱氧核糖核苷酸链(简称DNA单链)组成。两条链沿着同一根轴平行盘绕，形成右手双螺旋结构。螺旋中的两条链方向相反，即其中一条链的方向为5′→3′，而另一条链的方向为3′→5′。（2）嘌呤碱和嘧啶碱基位于螺旋的内侧，磷酸和脱氧核糖基位于螺旋外侧。碱基环平面与螺旋轴垂直，糖基环平面与碱基环平面成90°角。（3）螺旋横截面的直径约为2nm，每条链相邻两个碱基平面之间的距离为0.34nm，每10

核酸练习题及答案

核酸专题练习 1．下列有关核酸的叙述正确的是( ) A. 核酸的分类是依据所含的含氮碱基是T还是U B. 核酸的基本单位是脱氧核苷酸 C. 鱼体内的遗传物质彻底水解后可得到脱氧核糖、磷酸和含氮碱基 D. 除病毒外，一切生物都具有核酸 2．(济宁市2011)2009年春夏之交，甲型H1N1流感病毒大流行引起世界各国的关注。甲学者将甲型HlNl流感病毒的遗传物质彻底水解后得到了A、B、C三种化合物，乙学者将T2噬菌体的遗传物质彻底水解后得到了A、B、D三种化合物。你认为C、D两种化合物分别指的是() A．尿嘧啶、胸腺嘧啶B．胸腺嘧啶、尿嘧啶 C．核糖、脱氧核糖D．尿嘧啶、腺嘌呤 3. 已知某核酸的碱基构成是A+G/T+C=1.5，则该核酸分子是( ) A、双链DNA B、单链DNA C、双链RNA D单链RNA 4.下列关于核酸的叙述中，正确的是( ) A.DNA和RNA中的五碳糖相同 B.组成DNA与ATP的元素种类不同 C. T2噬苗体的遗传信息贮存在RNA中 D.双链DNA分子中嘌呤数等于嘧啶数 5.在实验室培养蛙受精卵时，在培养液中加入一种小分子“3H化合物”。一段时间后，用放射自显影技术检测发现放射发现放射性物质集中于蛙胚细胞的细胞核和线粒体中。由此判断“3H化合物”可能是( ) A．DNA B．RNA C．胞嘧啶脱氧核苷酸D．尿嘧啶核苷酸 6. 1981年底，我国科学家人工合成了酵母丙氨酸转移核糖核酸，标志着我国具有人工合成核酸的能力。下列各试管通过人工合成产物，叙述不正确的是( ) A．①④，②③产物分别相同 B．①④，②③生理过程不同 C．①②③④的进行都需要模版、原料、能量和酶 D．每个生物都必须要进行①②③④所有生理过程 7. 对下列图式，正确的说法有 ( ) ①图式中的过程可能需要逆转录酶②图式中的过程可能需要RNA聚合酶③图式中共

核酸适体筛选方法的研究进展_徐龙峰

1990年，Ellington等［1］和Tuerk等［2］创建了一种能制备高特异性、高亲和力结合靶分子的寡核苷酸技术，称为指数富集的配体系统进化（systematic evolution of ligands by exponential enrichment，SELEX）技术。用这种技术制备的寡核苷酸分子称为适体（aptamer），一般由几十个核苷酸组成，可以是RNA 或单链DNA。理论上几乎所有自然界中存在的靶分子均可通过SELEX技术筛选得到相应的适体。20多年来，核酸适体作为新型的仿生识别元素，在疾病诊断治疗、药物筛选、分子识别、分析检测等众多领域得到了广泛的应用，国内外众多科学工作者通过SELEX技术筛选得到了多种靶分子的适体，核酸适体筛选技术本身也得到了不断地完善和发展。1SELEX技术的原理及流程 SELEX技术是体外筛选核酸适体的基本方法，是一种以组合化学技术、PCR技术以及基因克隆测序技术等为基础的现代分子进化工程技术，该技术的操作流程类似于达尔文的生物进化论中所包含的3个过程：自发突变、自然选择和大量增殖［3］。采用SELEX技术筛选适体包括以下几个基本步骤：①人工合成随机的寡核苷酸序列文库，文库的容量一般在1014～1018之间，文库中随机寡核苷酸序列一般为20～60个碱基文库；②在特定的筛选缓冲体系中将寡核苷酸库与靶分子孵育；③用离心法、柱层析法、膜过滤法、毛细管电泳法、磁珠法等特定的方法，将与靶分子结合的寡核苷酸序列从体系中分离；④对分离的特异性结合的核酸序列进行PCR扩增；⑤将PCR扩增获得双链DNA利用磁珠法、核酸外切酶 核酸适体筛选方法的研究进展 徐龙峰综述，王丽审校 安徽科技学院食品药品学院，安徽凤阳233100 摘要：核酸适体是能以极高的亲和力和特异性与靶分子结合的寡核苷酸序列，可识别的靶分子范围非常广，理论上自然界存在的任何物质均可通过指数富集的配体系统进化（systematic evolution of ligands by exponential enrichment，SELEX）技术，筛选到其相应的核酸适体。近年来，在传统SELEX技术的基础上，新的SELEX技术不断出现，如毛细管电泳SELEX（capillary electrophoresis SELEX，CE-SELEX）、荧光磁珠SELEX（FluMag SELEX）、自动化SELEX（auto－mated SELEX）、细胞-SELEX（cell-SELEX）、消减SELEX（subtractive SELEX）技术等。这些新技术的出现，在不断完善SELEX技术的同时，也极大地推动了适体技术在各学科领域中的发展及应用。本文对核酸适体的筛选方法进行了总结和展望，为核酸适体的筛选提供了参考。 关键词：核酸适体；筛选方法；指数富集的配体系统进化技术 中图分类号：Q789R927文献标识码：A文章编号：1004-5503（2015）04-0429-05 Advance in research on method for screening of aptamers XU Long-feng,WANG Li College of Food and Drug,Anhui Science and Technology University,Fengyang233100,Anhui Province,China Corresponding author：WANG Li,E-mail：wangli@https://www.wendangku.net/doc/694630611.html, Abstract：Aptamers are oligonucleotides that can bind to a wide range of target molecules with high affinity and speci－ficity.The aptamers to all target molecules in nature may be theoretically screened by systematic evolution of ligands by exponential enrichment（SELEX）.In recent years,on the basis of traditional SELEX technology,new SELEX technologies are emerging such as capillary electrophoresis SELEX（CE-SELEX）,fluorescent magnetic beads SELEX（FluMag SELEX）, automated SELEX and cell-SELEX,subtractive SELEX.The new technologies improved the SELEX process gradually and promoted their application in various fields.This paper summarized and prospected the methods for screening of aptamers and provided a reference for aptamers screening. Key words：Aptamers;Screening methods;Systematic evolution of ligands by exponential enrichment（SELEX） ·综述· 基金项目：国家自然科学基金（31201369）；安徽科技学院自然科学 研究项目（ZRC2014395）. 通讯作者：王丽，E-mail：wangli@https://www.wendangku.net/doc/694630611.html, DOI:10.13200/https://www.wendangku.net/doc/694630611.html,ki.cjb.000864