circRNAs在肿瘤中的研究进展_郭佳妮

doi:10.3971/j.issn.1000-8578.2016.08.016

circRNAs在肿瘤中的研究进展

郭佳妮综述，何敬东审校

Research Progress of circRNAs in Cancer

GUO?Jia’ni,?HE?Jingdong

Huai’an First People’s Hospital, Nanjing Medical University, Huai’an 223300, China Abstract:?Circular?RNAs(circRNAs)?are?a?large?class?of?RNAs?that?form?covalently?closed?continuous?loops.?They?are?the?members?of?the?non-coding?RNAs.?circRNAs?are?characterized?by?evolutionally?conserved,?relatively stable, highly specific and enormously abundant. They can regulate miRNA activity as “miRNA sponges”?and?have?an?effect?on?gene?transcription?and?the?generation?of?proteins.?circRNAs?are?gradually?becoming?a?new?star?of?the?ncRNA?regulatory?network.?They?are?involved?in?the?development?of?numerous?diseases?and?have?great?potential?in?the?diagnosis,?treatment?and?prognosis?of?tumors.?circRNAs?are?expected?to?become?new?tumor?biomarkers?or?molecular?therapeutic?targets.?

Key words: circRNA;?Gene?expression?regulation;?Tumor?markers;?Therapeutic?targets

摘?要：环状RNA（circular?RNA,?circRNA）是一种共价闭合的单股环状分子，属于非编码RNA家族成员。circRNA以保守、稳定、特异、高含量为特点，可作为microRNA海绵调控靶miRNA的活性，并参与基因转录和蛋白生成的调控，逐渐成为非编码RNA调控网络的新星。circRNA在多种疾病的发生发展中发挥重要作用，并且在肿瘤诊断、治疗和预后等方面具有巨大的潜能，有望成为新的肿瘤生物标志物或分子靶向治疗靶点。

关键词：环状RNA；基因表达调控；肿瘤标志物；靶向治疗

中图分类号：R730.231 文献标识码：A

收稿日期：2015-11-09；修回日期：2015-12-23

基金项目：江苏省卫生厅科研立项项目（H201358）；

淮安市科技立项项目（HAS2015001）

作者单位：223300?淮安，南京医科大学附属淮安第一

医院

作者简介：郭佳妮（1991-），女，硕士在读，主要从

事肿瘤内科学的研究·综?述·

0?引言

环状RNA（circular?RNA,?circRNA）不同于典型的线性RNA分子，没有5’，3’末端和多聚腺苷酸尾结构，而是形成共价闭合的连续环[1]。研究表明circRNA在基因表达调控中发挥microRNA 海绵、结合RNA相关蛋白、调控剪接和转录、修饰亲本基因的表达等重要功能[2]。circRNA可通过调控Wnt信号通路、上皮-间质转化（epithelial-mesenchymal?transition,?EMT）等影响肿瘤的发生发展、侵袭转移及耐药性等。circRNA已成为RNA 研究领域的新热点，其在肿瘤诊断、治疗及预后中的潜在临床价值已受到密切关注。

1 circRNA概述

circRNA主要来源于蛋白编码基因的外显子，也可由内含子、基因间区、UTR区、非编码RNA 位点和已知转录物的反义位点产生[3]。目前的研究表明，circRNA可以作为miRNA海绵或竞争性内源RNA（competing?endogenous?RNA,?ceRNA）参与多种疾病（如动脉粥样硬化疾病、朊病毒疾病、肌强直性营养不良等）的发生发展，并且与神经系统疾病（如帕金森病、阿尔兹海默症等）密切相关[4]。此外，circRNA在肿瘤的发生发展、侵袭转移及耐药等方面具有重要的作用，并有望成为肿瘤诊断的新型分子标志物和治疗靶点。

2 circRNA与肿瘤

2.1?circRNA与肿瘤相关miRNA

2011年，Hansen等[5]在人类和小鼠的大脑组织中发现了一种编码于人类CDR1基因位点反向基因组的天然环状转录物CDR1as，可作为miR-7海绵即ciRS-7。作为一种ceRNA，ciRS-7可抑制miR-7活性并与miR-7竞争结合其他RNA（如mRNA和long?non-coding?RNA），从而调控靶基因的表达[3,6]。比如，HeLa细胞中ciRS-7的稳定表达会导致SNCA、EGFR和IRS2的mRNA水平明显下调，提示其可能与宫颈癌的发生发展密切相关[6]。另有报道，ciRS-7可作为“mRNA圈套”，通过封闭翻译起始位点减少蛋白质的表达水平[7]

。此

外，ciRS-7还可以作为RNA结合蛋白（RNA?bind-ing?protein，RBP）结合多种蛋白质亚基的“支架”，增强circRNA转录物的稳定性[8]。已有研究表明，ciRS-7在成神经细胞瘤中广泛表达，在星形细胞瘤、肾细胞癌和肺癌中频繁表达[9]。通过RNA荧光原位杂交和免疫荧光杂交发现，HeLa细胞中ciRS-7和miR-7间存在很大程度上的亚细胞共定位[6]。并且，ciRS-7对miR-671敏感，miR-671可以诱导ciRS-7的降解和核酸内切分裂。因此可推测，ciRS-7结合miR-7并转移到特定的亚细胞定位点，随后miR-671通过降解ciRS-7促进miR-7的释放[3,10]，miR-7/miR-671/ciRS-7轴可能在肿瘤的发生发展、侵袭转移等过程中发挥重要作用。

此外，Li等[11]通过生物信息学分析发现了一种含有E3泛素蛋白连接酶（ITCH）外显子的circRNA—cir-ITCH。作为Wnt/β-catenin通路中的重要分子，ITCH可调节蛋白质稳定、免疫应答及肿瘤进展[12]，其激活可在多种肿瘤（如肝细胞癌[13]、前列腺癌[14]、卵巢癌[15]等）中产生致癌作用，并且其靶标（包括p63、p73、Dvl2及Notch1等）与肿瘤耐药性密切相关[16]。研究者们运用Taq-Man?rt-PCR对684例食管鳞状细胞癌和癌旁组织检测发现，相比于癌旁组织，cir-ITCH在癌组织中的表达明显下调。cir-ITCH可作为肿瘤相关miRNA （miR-7、miR-17、miR-214、miR-128以及miR-216b[6]）海绵，从而上调ITCH水平，促进磷酸化Dvl2的泛素化和降解，抑制Wnt/β-catenin通路。随后，Huang等[17]在结直肠癌中验证了cir-ITCH的海绵作用，并发现cir-ITCH可抑制c-myc和cyclinD1的表达。c-myc和cyclinD1可触发和调控细胞增殖相关基因的转录，其在包括结直肠癌在内的多种肿瘤中过表达[18]。cir-ITCH对其的抑制作用可导致细胞周期停滞并抑制恶性肿瘤细胞的生长。这些结果均表明，cir-ITCH可通过调节miRNA活性、上调ITCH水平、抑制Wnt通路和调控细胞增殖，从而发挥抑癌作用[11]。

最近，Caiment等[19]首次提出了circRNA在异生物质暴露下的表达模式。他们通过高通量测序（HTS）检测HepG2细胞暴露于苯并芘（BaP）后的完整基因转录组。在6个时间点中只有一种miRNA是持续过表达的，即miR-181a-1_3p。他们提出假说：首先，BaP暴露诱导的miR-181a-1_3p 过表达抑制了MGMT（一种DNA损伤修复酶）翻译并显著降低其mRNA水平。24?h后miR-181a-1_3p表达下调，而捕获这一miRNA的circRNA表达上调，从而上调MGMT水平，这一机制可能增加DNA的突变率并最终导致肝癌。

2.2?circRNA与肿瘤相关途径

尽管circRNA可通过与miRNA相互作用间接地参与肿瘤的多种生物学进程，但这一“海绵”作用可能只是circRNA功能的一部分。Conn等[20]在EMT中发现，上百种circRNA的表达受TGF-β的影响，而与其同源的mRNA转录物无关。他们用circScreen同时定量线性RNA和circRNA，发现RNA 结合蛋白Quaking（QKI）是EMT中circRNA生成的主要调节因子。EMT中大多数circRNA水平是上调的，表明某些circRNA具有间质表型相关功能，并因此影响间质细胞性能（比如迁移、侵袭以及肿瘤转移倾向）。小部分circRNA则相反，这与它们具有上皮特异性功能一致。比如，DOCK1是一种鸟苷酸交换因子（GEF），可激活Rac以提高细胞活性[21]。使用TGF-β诱导EMT过程后，上皮细胞中含量最为丰富的DOCK1?circRNA水平下降了30倍，而DOCK1?mRNA水平则上升了2倍，提示这一circRNA的功能之一可能是引起上皮细胞中mRNA 的下调，从而保持细胞的稳定性。然而，鉴于上皮细胞中含有大量的DOCK1?circRNA，其很可能还有其他方面的功能。总而言之，EMT过程中circRNA 的生成受QKI的调节，并且某些circRNA可能在EMT中具有重要作用，从而调控肿瘤细胞的侵袭性和转移能力[20]。然而，circRNA在EMT中的确切作用及相关机制仍有待进一步明确。

2.3?circRNA与肿瘤的诊断与治疗

最近，Li等[22]在胃癌组织中的研究发现，Hsa_circ_002059的表达显著下调，且其血浆水平在胃癌术前和术后患者中有明显差异，其低水平表达与远处转移、TNM分期、性别和年龄明显相关，提示Hsa_circ_002059可能成为胃癌诊断的一种新型分子标志，并且circRNA的血浆水平检测使得其应用于临床成为可能。另有研究表明，外泌体中含有大量的circRNA。RNA序列分析显示，circRNA在外泌体中的含量明显高于分泌细胞，且这一分泌可被miRNA调控。人类血清外泌体中检测出超过1000种circRNA，并且血清外泌体cir-cRNA在结肠癌中具有特异性，提示circRNA可作为外泌体中的肿瘤标志物，并且外泌体circRNA可能具有潜在的生物学功能[23]。

相比于典型的线性RNA海绵，环状RNA海绵可能对miRNA的致癌活性具有更强的抑制作用，并因此产生更强的抗肿瘤效应。Tay等[24]探讨了恶

性黑色素瘤细胞系中不同mRNA海绵表达载体的设计及其效果，他们发现相比于线性载体，环状载体能使mRNA海绵具有更加持久而稳定的作用。环状RNA海绵可以添加更多的特异性miRNA结合位点，从而无限地增强其抗miRNA能力[25]，并且特定的circRNA含有许多特定的miRNA结合位点，其具有比典型的miRNA抑制剂更有效和更特异的抑制功能。相信在不久的将来，miRNA环化海绵有望成为一种基于RNA的肿瘤基因治疗新策略。

3?结语

circRNA是丰富、稳定、保守、特异的一类RNA分子，反义互补序列和RBP可在circRNA的生物合成中产生重要的作用[26]，但大多数circRNA 的降解和定位仍需深入研究，circRNA在肿瘤发生发展中的作用及分子机制有待进一步阐明。虽然circRNA具有高度的特异性、保守性和稳定性，但目前检测和定性circRNA的方法仍有局限性，不同的生物信息学方法或测序数据造成circRNA的识别出现偏倚，circRNA的全长序列检测技术也有待进一步发展。研究表明，circRNA在肿瘤组织中、血浆及唾液中的表达具有特异性[23,27]，提示circRNA 在疾病诊断和治疗中具有很好的临床应用价值，并有望成为肿瘤早期诊断、预后判断的分子标志物及肿瘤治疗靶点。

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［编辑：刘红武；校对：周永红］

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肿瘤细胞的研究进展 关键词：循环肿瘤细胞、研究进展、治疗 学号:24520132204189 姓名：蔡茂宇 摘要：循环肿瘤细胞(circulating tumor cells, CTCs)是指进入人体外周血的肿瘤细胞。是恶性肿瘤患者出现术后复发和远处转移的重要原因. 近些年, 随着技术的不断改进, CTCs检测作为一种新型的非侵入性诊断工具, 在早期发现患者术后复发与远处转移、评估疗效与预后等方面的应用价值已成为临床研究的热点. 本文简要综述近年CTCs检测的研究进展及其临床应用状况早在1869年, Ashworth发现血液中的一种血细胞同尸检发现的肿瘤细胞相似, 首次提出CTCs的概念. 目前CTCs定义为自发或因诊疗操作由实体瘤或转移灶释放进入外周血循环的肿瘤细胞. 进入循环未被清除的肿瘤细胞通过迁移、黏附、相互聚集形成微小癌栓, 并在一定条件下发展为转移灶. 近年来, 随着人们对肿瘤转移机制研究的深入, 以及检测技术的不断改进, CTCs的检测已取得了 一些突破性的进展, 部分检测方法在稳定性、敏感性及特异性等方面均已较理想, CTCs的临床应用研究也已取得明显进展. 目前CTCs的检测方法众多,根据检测原理可分两大类: 细胞计数法(cytometric methods)和核酸检测法(nucleic-acid based methods). 前者主 要包括各种免疫细胞化学技术、流式细胞术等; 后者主要包括聚合酶链反应、逆转录聚合酶链反应及其各种改进的技术等. 免疫细胞化学法(immunocytochemistry, ICC) ICC是指以显色剂标记的特 异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反应和细胞化学的呈色反应, 对相应抗 原进行定位、定性和定量测定的技术. 其检测的肿瘤标志物主要分3类: (1)上皮细胞角蛋白(CK), 如CK19、CK20; (2)上皮细胞膜特异性抗原, 如黏蛋白 类, 包括EMA、HMFG、HEA-125等; (3)肿瘤相关糖蛋白(TAG). ICC检测的主要 优点是可进行细胞大小和形态学的分析, 缺点是敏感性低, 只能从(1-10)×105个正常细胞中发现1个肿瘤细胞, 且应用免疫细胞化学法检测循环血中肿瘤细 胞时, 每个载玻片上所能检测的细胞样本量仅为5×105个细胞, 难以从外周血中大量的单核细胞中检测出极少量的肿瘤细胞, 因此单纯应用免疫细胞化学法 敏感性低,难以满足临床诊断需要. 为了能大范围检测外周血中稀少的肿瘤细胞,近年来又相继研发出光纤阵列扫描术 (fiber array scanning technology, FAST), 激光扫描细胞计量仪(laserscanning cytometry, LSC)等, 能够在传统的显微镜技术基础上高速扫 描并快速、准确的定位免疫荧光标记的肿瘤细胞, 使检测的敏感性和实效性显著提高. 流式细胞术(flow cytometry, FCM) FCM是一项集激光、电子物理、光电测量、计算机、细胞荧光化学及单克隆抗体技术为一体的新型技术. 其优点是可以定量计数肿瘤细胞数量, 检测数据较精确, 还可对细胞进行多参数分析. 何成 全等应用流式细胞术检测66例胃癌患者外周血中CK19、CK20的表达. 结果66 例胃癌患者CK19、CK20、CK19+CK20阳性表达率分别为53.1%(35/66)、 56.1%(37/66)、46.9%(31/66), 检测的阳性率与患者的TNM分期及转移程度相关, 且检测胃癌远处转移的敏感度高达90.0%. 认为应用FCM检测CK19、CK20 的表达对胃癌微转移的诊断具有一定临床意义. 但由于FCM检测靶细胞的敏感

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肿瘤干细胞的研究进展 摘要：肿瘤干细胞是肿瘤中具有自我更新能力和分化潜能，能产生异质性细胞的细胞。本文简要阐述了肿瘤干细胞的来源、分离技术及鉴定，并对以肿瘤干细胞分化、临床应用前景和问题进行了综述。 关键词：肿瘤、干细胞、应用 肿瘤干细胞(cancer stem cells，CSC)理论认为，肿瘤组织中绝大多数细胞增殖能力有限，不能自我更新，不会导致肿瘤的复发、转移；CSC只占肿瘤细胞中的极少部分，却是肿瘤发生、发展的关键。CSC研究有可能阐明肿瘤的发生机制，使肿瘤治愈，从而引发肿瘤学领域的革命性变革，意义重大。本文拟就CSC 的起源和鉴定等作一简要综述。 一、肿瘤干细胞的来源 肿瘤干细胞起源目前有两种学说：(1)由于正常干细胞突变形成肿瘤干细胞；(2)一些已经开始分化的原始细胞或成熟细胞去分化变为幼稚细胞并具有分裂能力。Sell 认为恶性肿瘤的产生和发展是由于干细胞的分化受阻，而不是成熟细胞的去分化；干细胞是起始事件或“第一次打击”(即获得永生性)突变的靶标，干细胞本身具有永生性，只需获得异常增殖的突变即可；体细胞的突变不会形成肿瘤，是因为成熟细胞的半衰期短，一个正常细胞形成转化细胞至少需要几年至几十年，在促进事件或”第二次打击”(即获得异常增殖能力)，细胞通常早已死亡。尽管缺乏直接的实验证据，但也有研究人员认为CSC是正常SC同其他细胞融合的结果。因为骨髓细胞容易与其他类型的细胞发生融合，Marx等_6认为，Houghton等在胃上皮细胞观察到的骨髓细胞是骨髓细胞与上皮细胞融合所形成的。细胞融合因子CD 是乳腺癌干细胞的阳性标记，暗示CSC可能具有与其它细胞融合的能力。Bjerkvij等观察到在病理条件下，SC和已经出现肿瘤相关基因突变的细胞发生融合，这种融合后的细胞具有sC的特性。胚胎干细胞是指胚胎内细胞团或原始生殖细胞，具有发育全能性，在理论上可以诱导分化为机体内所有类型的细胞，在体外可以大量扩增、筛选、冻存和复苏而不会丧失其原有的特性。有研究人员认为肿瘤中存在一些具有增殖和分化潜能的细胞，该细胞与正常组织细胞有着相似的自我更新途径，可能是正常SC分化停滞的结果。Karoubi[8 研究证实肺腺癌与正常肺组织均表达共同的胚胎SC标记物OCT4A和OCT4B，提示CSC是胚胎SC起源的可能。 二、肿瘤干细胞的分离与培养 肿瘤干细胞的分离及体外培养是进行肿瘤干细胞生物特性研究的首要步骤。目前还没有很成熟或经典的分离方法，不少实验室通过各种不同的途径完成了这一工作，归纳起来主要是利用肿瘤干细胞表面分子标记物和生物特性实现

肿瘤细胞免疫治疗技术进展及药物研发现状

1.1肿瘤免疫治疗的概念及分类 肿瘤免疫治疗是通过激活体内的免疫细胞，特异性地清除肿瘤微小残留病灶或明显抑制肿瘤细胞增殖。这种治疗方法具有作用期长和副作用小等优点，被称为现代肿瘤治疗的第4种模式。最近几年，肿瘤免疫治疗获得了不少进展，《science》杂志把肿瘤免疫治疗列为2013年的重大科学突破。 1.1.1肿瘤就是免疫逃逸的结果 肿瘤细胞是一种不正常的细胞，表现为基因突变和致癌基因的过表达。这些突变或异常表达的蛋白是免疫细胞赖以识别癌细胞的基础。理论上，免疫细胞可以随时清除不正常的细胞，从而把肿瘤消灭于萌芽状态，即所谓的“免疫监视”。但免疫监视作用并不能完全地避免恶性肿瘤的发生，而且肿瘤一旦产生就会隨病情的发展，其恶性程度惭进增加，并最终发生广泛转移。2002年，美国肿瘤生物学家希雷伯（R.DSchreiber）博士提出了“肿瘤免疫编辑”理论。根据免疫编辑理论，免疫系统不但具有排除肿瘤细胞的能力，而且还具有促进肿瘤生长的作用。癌细胞在机体内发生、发展是一个免疫系统与癌细胞一系列动态复杂的相互作用过程。在这个过程中，免疫系统在清除一些肿瘤细胞的同时，也对另一些肿瘤细胞的生物学特性（如肿瘤的抗原性）进行重塑（Reshape），也即所谓的“免疫编辑”。被免疫辑过的肿瘤细胞恶性程度越来越高，对免疫攻击的抵抗力越来越强，直至最终摧毁机体的免疫系统，造成肿瘤细胞的恶性生长并扩散。

肿瘤的免疫编辑理论认为，免疫系统与肿瘤的相互关系可以分为三种不同的状态（Phase）：清除（Elimilation）、平衡（Equilibration）和逃逸（Escape）。引用转载:https://www.wendangku.net/doc/6b5838343.html, “清除”状态：新生的肿瘤具有较强的抗原性，较易被免疫系统识别并将其清除。非特异的天然免疫机制（如吞噬细胞，天然杀伤细胞等）和特异的获得性免疫机制（如CD4+T细胞，CD8+T细胞）都参与这个肿瘤细胞的清除过程。免疫系统清除肿瘤细胞的这个过程具有经典的免疫监视理论的特点。如果清除过程彻底，肿瘤细胞被完全排除，免疫编辑过程就此结束。如果一些变异的肿瘤细胞逃过了免疫编辑的“清除”作用而存活下来，它们与免疫系统的关系就进入了第二种状态，即“平衡”状态。 “平衡”状态：在这种状态下，肿瘤细胞的抗原性减弱，因而不会轻易被免疫系统识别和清除，但又时时处在免疫系统的清除压力下，因而不能过度生长，表现为检查不到可见的肿瘤。特异的获得性免疫是维持这种平衡状态的主要机制，一般认为天然免疫机制不参与这个过程。免疫系统和肿瘤细胞的这种平衡状态可以维持几年、十几年甚至终身都不发生变化。因此，免疫编辑的平衡状态实际上就是一种带瘤生存状态。但这种平衡状态是动态的，肿瘤细胞在免疫系统的压力下，其基因有可能会发生变化，这种基因突变产生的“积累效应”达到一定程度时，就可能打破平稳，使免疫系统与肿瘤的关系进入“逃逸”（Escape）阶段。 “逃逸”阶段：在这个阶段的肿瘤细胞可以产生一系列恶性

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肿瘤干细胞的研究进展 Researchprogressintumorstemcells 摘要： 肿瘤干细胞具有高度增殖和分化能力，但又不同于普通干细胞，此类干细胞还具有发展成为肿瘤的特性，已经成为抗肿瘤研究的靶细胞,肿瘤干细胞研究进展迅速,深入研究肿瘤干细胞的特性,对恶性肿瘤的诊断,治疗和预后评估具有重要意义。本文对肿瘤干细胞的起源、表面标志、肿瘤干细胞生长的微环境及其临床意义进行了阐述。 关键词：肿瘤干细胞干细胞肿瘤综述文献 Abstract: Cancer stem cells have the ability to proliferate and differentiate, but they are also different from common stem cells. This kind of stem cells also have the characteristics of tumor development. In this paper, we describe the origin of tumor stem cells, the surface markers, the micro environment of tumor stem cells and their clinical significance . Keywords:Tumor stem cellsStem cellsTumorOverview 一、前言 肿瘤干细胞是肿瘤中具有干细胞特性的一类细胞，既具备高度增殖能力与自我更新能力，也具备多向分化潜能的细胞，这部分细胞虽只占少部分，但却是肿瘤发生、发展的关键。肿瘤干细胞增殖过程中，通过不均一分裂，一个肿瘤干细胞分裂形成一个新的肿瘤干细胞和另一个可最终分化为包括肿瘤细胞在内的各种细胞的子细胞，其结果是维持肿瘤干细胞数目稳定并产生肿瘤。近几年来，肿瘤干细胞的研究已经成为热点，在多种肿瘤组织中发现并鉴定了肿瘤干细胞。目前国内肿瘤干细胞还处于基础研究阶段，国外肿瘤干细胞在实验研究方面已经取得了一定的进展，而且也在临床应用研究方面有一定的突破[1]。文章对肿瘤干细胞的起源、表面标志、与干细胞及肿瘤的关系及其临床意义进行了阐述。 二、肿瘤干细胞的起源

循环肿瘤细胞研究进展_任文君

循环肿瘤细胞研究进展 任文君，孙国平 (安徽医科大学第一附属医院肿瘤内科，安徽合肥230022) 摘要：循环肿瘤细胞（CTCs）存在于患者外周血中，是造成肿瘤转移和复发的主要原因。外周血中的CTC是非常罕见的，要求检测方法具有高敏感性及高特异性，成为临床常规检测的巨大挑战，但是检测CTC在协助诊断、早期发现肿瘤的微转移、指导个体化治疗、评价治疗效果及预后方面上具有重要的临床意义。该文将对其检测方法及临床应用进行探讨。 关键词：循环肿瘤细胞；检测；治疗 Ashworth曾在1986年首次发现并提出循环肿瘤细胞（CTCs）的概念［1］。CTC定义为自发或因诊疗操作由实体瘤或转移灶释放进入外周血循环的肿瘤细胞［2］。肿瘤转移是一个涉及多步骤多因素的复杂过程，肿瘤细胞由原发灶脱落，侵入循环系统，大部分由于机体的免疫识别、机械杀伤及自身凋亡在短期内死亡，只有极少数存活下来，在远隔脏器或原发脏器中定居，发展为转移灶［3-4］。有些播散的肿瘤细胞和微小转移灶在切除原发灶后可以保持休眠状态并在若干年后形成转移灶［5］。因此，在外周血中检测到CTC提示可能有早期转移存在，尤其是临床尚未发现的微转移病灶。 CTC的检测包括以下2个步骤：（1）富集，方法包括形态学或免疫学为基础的技术。（2）检测，方法包括细胞计数和核酸检测技术。因为CTC在外周血中是非常罕见的（1个CTC/106 107个单核细胞），富集细胞可提高检测的敏感性，富集之后则通过细胞计数或核酸检测技术利用肿瘤特异性标志物对CTC进行检测及分析。 1富集 1．1以形态学为基础的富集膜滤过分离肿瘤细胞技术（ISET）通过肿瘤细胞体积大小进行富集［6］，就像一个微孔过滤器根据CTC的大小差异使其分离，其隔离灵敏度阈值接近每毫升全血一个癌细胞［7］，其优势在于不破坏CTC的形态，利于后续对单个CTC进行形态学、免疫细胞学及遗传学特征的研究，但只适合部分肿瘤，不适合那些体积小于2倍粒细胞大小的肿瘤细胞。 基于密度梯度分离，单核细胞较其他血液成分密度低，因此可依据密度梯度差异将肿瘤细胞和单核细胞从其他血液细胞中分离出来，如Ficoll-Hypaque和Oncoquick。与传统的Ficoll 通信作者：孙国平，男，主任医师，博士生导师，研究方向：消化系统肿瘤，E-mail：sunguoping@anhmu．edu．cn 程序相比较，Oncoquick增加了多孔屏障，使得分离出的细胞更加纯化，检出率更高［8］。 由于这两种富集方法是借助细胞的物理特性，因此缺乏特异性，易导致缺乏相应体积大小及密度梯度的肿瘤细胞的丢失，同时所富集的细胞不仅含有肿瘤细胞，还存在不同种类的其他细胞（特别是单核细胞），在后续检测过程中可能会因为肿瘤细胞的异质性和基因标志物的非特异性，造成假阳性结果。 1．2以免疫学为基础的富集免疫磁性分离技术（IMS），基于特异性免疫识别原理的富集技术，是目前应用最广泛的方法，通过特异性抗体包被的磁珠与细胞表面抗原特异性结合，形成细胞抗原-抗体-磁珠免疫复合物，在外加磁场作用下，将CTC从血细胞中分离出来。免疫磁性分离方式有2种：阳性分选和阴性分选。阳性筛选获得目的细胞，阴性筛选去除无关细胞使目的细胞得以纯化，也可将两种模式结合，提高富集效率。这项技术最大的优势在于可保证分离靶细胞的形态和功能的完整，有利于下一步CTC的计数、免疫细胞化学、PCR 等检测。目前，免疫磁珠可达纳米级，结合时间短，灵敏度高10－7 10－6。 CellSearch系统是目前FDA唯一批准用于临床富集及检测分析的技术，是一种半自动技术，集合了免疫磁分选技术和免疫细胞化学法的分离检测技术。涂有抗EpCAM抗体的磁珠与靶细胞结合，在外加磁场作用下被保留下来，接着采用荧光标记（CK8/18/19，DAPI，CD45）来区别CTC与血细胞，CTC 标记为CK8/18/19、DAPI（+），CD45（－），随后采用半自动荧光显微镜Cell-Spotter Analyzer检测分析细胞大小和形态，最终确定CTC，只需要7．5mL血液样本，即可从400多亿血细胞中检测到一个CTC。这种半自动系统能快速分析样本，并有良好的重复性。一个多中心研究，有学者提出Cell Search系统有82%的高富集率，且在乳腺癌CTC检测上有极 ［34］Ikeda T．Stem cells and neonatal brain injury［J］．Cell Tissue Res，2008，331（1）：263－269． ［35］尹国才，张长征，张淼涛，等．人胎脑神经干细胞在年幼大鼠脑内的成神经元分化［J］．中国组织工程研究与临床康复，2008，12（12）：2281－2284． ［36］Toda H，Takahashi J，Iwakami N，et al．Grafting neural stem cells improved the impaired spatial recognition in ischemic rats［J］．Neu- rosci Lett，2001，316（1）：9－12． ［37］吴芳，杨佳勇，张敏，等．脐血间充质干细胞移植对脑性瘫 痪儿童神经系统功能的影响：20例分析［J］．中国组织工程研究 与临床康复，2008，12（16）：3198－3200． ［38］张敏，杨万章，吴芳，等．神经生长因子配合脐血源神经干细胞移植对脑瘫患儿运动功能的影响［J］．中国误诊学杂志，2008，8（23）：5596－5597． ［39］杨万章，吴芳，张敏，等．脐血源神经干细胞移植治疗神经系统疾病临床总结和分析［J］．中西医结合心脑血管病杂志，2009，7（3）：287－290． （收稿日期：2012－05－25，修回日期：2012－10－26） · 9 · 安徽医药Anhui Medical and Pharmaceutical Journal2013Jan;17(1)

肿瘤免疫治疗近5年研究进展

CHINA HEALTH INDUSTRY 肿瘤的免疫治疗目的是激发或调动机体的免疫系统,增强肿瘤微环境的抗肿瘤免疫力,从而控制和杀伤肿瘤细胞。本文就肺癌和胃癌近五年来免疫治疗的进展进行综述。 1 肺癌的免疫治疗 1.1 肿瘤免疫 肿瘤细胞表面粘蛋白分子1(M u c i n,MUC1)是一种黏膜糖蛋白,L-BLP25是MU C1的脂质体疫苗。对L-BLP25的研究目前进入L-BLP25 Ⅲ期临床试验-多中心临床试验(START,Stimulating Targeted Antigen Responses to NSCLC)。这项研究最新的统计数据表明,随访至第53个月时,疫苗治疗组中患者总生存期为30.6个月,而对照组为13.3个月(P=0.09)。 MAGE-A3表达于35%-50%NSCLC 表面,而在正常组织中不存在。研究发现MAGE-A3蛋白是一种真正的肿瘤抗原,针对其研制的疫苗不仅疗效好,而且带来的副反应也少。当前,MAGE-A3疫苗对NSCLC疗效的研究已进入三期试验-MAGRIT[1]。MAGRIT试验是调查在MAGE-A3阳性的ⅠB、Ⅱ和ⅢA 期NSCLC患者中MAGE-A3 ASCI对预防术后癌症复发的功效(同时评估MAGE-A3 ASCIs的副作用)。 1.2 过继细胞免疫 过继细胞治疗是通过体外扩增特异或非特异的效应细胞,然后将这些细胞回输到患者体内以达到治疗目的。Jie Lin[2]等将人外周血单核细胞在体外用CD3、白细胞介素2(interferon,IF-2)、干扰素γ(interferon-γ,INF-γ)和白细胞介素1(IF-1)共同培养一段时间后获得CIK,兼具T淋巴细胞的抗瘤活性和NK细胞的非MHC限制性杀瘤的等优点。该细胞治疗后,肺癌保持稳定,没有发现恶化或复发,而且没有发现明显的副反应。 2 胃癌的免疫治疗 2.1 过继细胞免疫 Voskens等对扩增效率、扩增先后的N K受体库、N K特异受体的表达、对自体和异体肿瘤的杀伤活性在与或不与EGFR单克隆抗体联合应用时的情况进行研究。NK细胞的扩增即在体外上调DNAM-1、NKG20、NKp46、NKp30受体等。研究结果显示,扩增后的NK细胞对肿瘤的杀伤力比扩增前强。 2.2 抗体治疗 Catumaxomab是一种三功能抗体,它的抗肿瘤效应依赖T-细胞介导的裂解,抗体依赖性细胞介导的细胞毒作用和通过FccR阳性辅助细胞的激活和吞噬作用。 Zhou[3]等对Anti-p185HER-2-RTA 免疫毒素在单独或与5-氟尿嘧啶联合对抗胃癌SGC7901-HER-2+细胞的抗肿瘤效应进行研究。研究结果表明,在体外,Anti-p185HER-2-RTA不仅抑制胃癌SGC7901-HER-2+细胞的生长而且诱导该细胞凋亡。研究数据表 肿瘤免疫治疗近5年研究进展① 郭唯一 王一北 单风平 (中国医科大学免疫教研室 沈阳 110001) 【摘要】肿瘤的免疫治疗机制是通过调动机体的天然防卫机制或给予靶向性很强的物质来取得抗肿瘤效应。在肺癌的免疫治疗 中,肿瘤疫苗具有很好前景,如E GFR疫苗、MAG E-A3疫苗和针对肿瘤细胞表面表达的MUC1生产的L-BL P25等。Catumaxomab三 功能抗体和Anti-p185HE R-2-RTA等在对抗胃癌中的治疗过程中也取得一定疗效。 【关键词】恶性肿瘤 免疫治疗 疫苗 抗体 【中图分类号】R246.5 【文献标识码】A 【文章编号】1672-5654(2011)08(c)-0105-01 明,在体外,Anti-p185HER-2-RTA显著 抑制SGC7901-HER-2+细胞移植瘤 (SGC7901-HER-2+cells-transplanted tumors)的生长。Anti-p185HER-2-RTA和 5-氟尿嘧啶联合增强了抗肿瘤活性,为 HER-2阳性胃癌治疗的研究提供了重要 线索。 参考文献 [1] Preeta T,Beloo M.MAGRIT:The Largest- Ever Phase III Lung Cancer Trial Aims to Establish a Novel Tumor-Specific Approach to Therapy[J].Clinical Lung Cancer,2009,10:371～374. [2] Jie L,Hong LZ,Xue CL,et al. Autologous Cytokine-Induced Killer Cells in the Treatment of Multiple Myeloma Concomitant with Lung Cancer and Paraneoplastic Dermatoses[J].Inter Med,2010,49:2341～2346. [3] Zhou XX,Feng J.Anti-cancer activity of anti-p185*HER-2 ricin A chain immunotoxin on gastric cancer cells[J]. Journal of Gastroenterology and Hepatology,2010,25:1266～1275. 【收稿日期】2011-07-28①通讯作者:单风平。 中国卫生产业·第八卷·第八期·下 105

肿瘤干细胞的研究进展200904.

[18]Herbst RS,Mullani NA,Davis DW ,et al .Devel opment of bi ol ogic markers of res ponse and assess ment of antiangi ogenic activity in a clinical trial of human recombinant endostatin [J ].Clin Oncol,2002,20:3804. [19]Batchel or TT,Sorencen AG,Tomas o E,et al .AZ D2171,a Pan - VEGF recep t or tyr osine kinase inhibit or,nor malizes tumor vascula 2ture and alleviates ede ma in gli oblast oma patients [J ].Cancer Cell,2007,11:83-95. (编校:张志明 肿瘤干细胞的研究进展 时岚,赵玫,黄常志 Advances of cancer stem cells SH ILan,Z HAO Mei,HUANG Chang -zhi D epart m ent of

E tiology and Carcinogenesis,Cancer Institute /Hospital,Chinese A cade m y of M edical Science,B eijing 100021,China . 【Abstract 】More and more evidences show the cl ose relati onshi p bet w een tu mor genesis and abnor mal devel opment of stem cell .This ne w model f or cancer will have significant revelati on f or the way we study and treat cancer .Thr ough targeting the cancer ste m cell,the therap ies f or treating cancer are likely t o i m p r ove .【Key words 】cancer;ste m cell;therapy Modern Oncol ogy 2009,17(04:0785-0787【指示性摘要】近年来随着对肿瘤研究的不断深入,以及对干细胞了解的日益加深,越来越多的证据显示肿瘤与干细胞有着密切的关系,肿瘤可能是干细胞在异常微环境中差异分化的结果,并提出了肿瘤干细胞(tu mor stem cell,TSC 的学说。本文综述了肿瘤干细胞的发现、特点,以及在肿瘤的诊断、治疗和预后判断中的作用,旨在为肿瘤发生发展研究及干细胞在肿瘤治疗方面的应用提供理论依据。【关键词】肿瘤;干细胞;治疗【中图分类号】 R730.231【文献标识码】A 【文章编号】1672-4992-(200904-0785-03 20世纪后半叶,分子生物学的飞速发展大大深化了人们 对生命本质的理解,也把对肿瘤的认识推进到了前所未有的高度。尽管如此,人们对癌症的本质以及如何控制这一恶疾的认识却仍未产生质的飞跃,若干推论仍属假想。在肿瘤研究的历史中,肿瘤细胞的起源问题已经成为一个争论激烈的话题。越来越多的研究表明肿瘤可能通常起源于正常干细胞的转化,因此,近年来一种“肿瘤干细胞(tu m or ste m cell,TSC ”或“肿瘤起始细胞(tu mor -initiating cell,TI C ”的全新概念被提出,并引起人们的广泛关注。对肿瘤干细胞的研究将会对肿瘤的研究领域和肿瘤的治疗产生深远的影响,本文对近年来肿瘤干细胞的研究情况做一综述。1肿瘤干细胞的概念 对于肿瘤干细胞的名称现在有许多不同的说法,如肿瘤干细胞、致瘤细胞、致瘤癌细胞、肿瘤起源细胞等,不过随着

抗肿瘤药物的研究进展

中山大学研究生学刊(自然科学、医学版) 第29卷第4期　JOURNAL OF T HE GRADUATES　VOL129№4 2008　S UN Y AT2SE N UN I V ERSI TY(NAT URAL SC I E NCES、M E D I C I N E)　2008 抗肿瘤药物的研究进展3 郑晓克 (中山大学中山医学院,广州510080) 摘　要:综述分析了抗肿瘤药物近年来的新进展,包括细胞毒性抗肿瘤药物、 以细胞信号传导分子为靶点的抗肿瘤药物、新生血管生成抑制剂、分化诱导剂、细胞周期依赖性蛋白激酶抑制剂等。 关键词:抗肿瘤药物 癌症是严重威胁人类生命的常见病和多发病,其死亡率仅次于心血管病而位居第 二。随着分子肿瘤学的发展,人们发现细胞周期失控是癌变的重要原因。细胞内促增殖系统成分的过度表达与抑增殖系统成分的缺失均可引起细胞增殖失控而导致癌变。随着生命科学研究的飞速进展,恶性肿瘤细胞内的信号转导、细胞周期的调控、细胞凋亡的诱导、血管生成以及细胞与胞外基质的相互作用等各种基本过程正在被逐步阐明。以一 ,发现选择性作用于特定靶点的高效、低毒、特异性强的新型抗癌药物已成为当今抗肿瘤药物研究开发的重要方向。目前抗肿瘤药物研发的焦点正在从传统细胞毒类药物转移到针对肿瘤细胞内信号转导通路的新型抗肿瘤药物。导致这一转变的本质根源在于:传统细胞毒类药物由于主要作用于DNA、RNA和微管蛋白等与细胞生死攸关的共有组分,致使其选择性低、毒性大。相反,多种信号转导通路的关键组分在正常细胞与肿瘤细胞及不同类型肿瘤细胞之间存在巨大差异,这一差异的存在及阐明使高选择性、高效、低毒的新型抗肿瘤药物的研发面临历史性的重大机遇。正是上述差异使肿瘤细胞区别于正常细胞,不同肿瘤相互区别。靶向这些组分的抗肿瘤药物不但可望降低毒性,而且可实现个体化治疗,使治疗效益最大化。 3收稿日期:2008-10-08 作者简介:郑晓克,女,1982年生,汉族,河南人,中山大学中山医学院2008级药理学博士研究生,主要研究方向为肿瘤细胞的细胞骨架研究,电子邮箱ki2 ki118576@s ohu1com。

肿瘤免疫治疗的研究进展

肿瘤免疫治疗的研究进展 摘要】近几年，对于癌症的研究不断增多，将免疫治疗应用在抗肿瘤治疗过程 中受到了广泛关注，要结合免疫治疗的应用机制以及机体免疫反应调节通路等特点合理性提升治疗效果。本文简要分析了免疫治疗的内涵，并对目前肿瘤免疫治疗的研究新进展予以讨论，仅供参考。 【关键词】肿瘤免疫治疗；研究进展；单克隆抗体；新生抗原 蔡尚,田野,徐波[1]等在研究中指出，肿瘤免疫治疗目前已经成为了癌症研 究的热点，如何有效进行疗效的评价需要结合临床试验等进行多元化分析，从而搭建更加系统化的研究平台。 1肿瘤免疫治疗的内涵 肿瘤免疫治疗是基于肿瘤免疫学的治疗机制，在激发并且调动人体免疫系统的基础上，强化肿瘤微环境抗肿瘤免疫力水平，一定程度上控制并且杀死肿瘤细胞。需要注意的是，肿瘤免疫学治疗方法不断增多，和现代生物科技技术的融合也是必然趋势，尽管在近代医学研究中对免疫系统的研究机制进行了全面深入的分析，但是依旧存在一些应用问题，其中，免疫治疗存在无法预测治疗结果以及患者反应的问题。特别是一些新的生物标志物，对疗效的评估以及耐药研究都将成为未来医学研究的重点。 2肿瘤免疫治疗的研究进展 为了进一步推动肿瘤免疫治疗的发展，相关学者也在不断研究和创新，旨在建立更加系统化的新型治疗机制，提高患者的治愈水平。 2.1单克隆抗体 宋征,马璟[2]在研究中指出，近几年单克隆抗体成为了癌症治疗中重要的组成部分，尤其是在研究人员全面开展癌细胞和正常细胞差异化分析工作的基础上，新型单克隆抗体附加到药物中能有效提升作用疗效，发挥单克隆抗体安全性治疗优势。值得一提的是，单克隆抗体本身组成成分是蛋白质，为了避免治疗效果不良，研发新型药物处理方式较为关键。其中，将不同抗体进行部分组合，形成双特异性抗体，使得一部分附着在癌细胞上，另一部分则附着在免疫细胞上，建立免疫应答，从而提升单克隆抗体的治疗效果。 2.2新生抗原 针对恶性肿瘤的免疫治疗方式主要集中在细胞因子、疫苗接种以及免疫检查点抑制剂等方面，而新生抗原能借助检查点抑制剂疗法提高治疗效果。陈弟,唐超,姚瑜[3]等在研究中指出，美国食品药品监督管理局在2011年批准了靶向程序性细胞死亡受体的单抗，并且对免疫检查点抑制剂进行了科学化规范，但是这种药品的实际治疗效果仅为10%到30%，加之药品价格较为昂贵，受众面存在一定的局限性。基于此，对于相应药品的研究进程也在不断深入，新生抗原能作为预测免疫检查点抑制剂的重要指标，借助分析新生抗原数量以及质量就能对CD8+T细胞的肿瘤浸润时间进行分析，从而合理性完善对应的治疗方案。另外，高克隆性新生抗原负荷也能作为分析免疫相关基因的标准，一般而言，肿瘤突变负荷较高的患者体内新生抗原负荷会随之增加，进而就会造成特异性CD8+T细胞和CD4+T 细胞发生细胞免疫反应，关注基因组层面有效对免疫环境进行分析，从而合理性预测免疫治疗效果，提升用药的针对性和实效性。 除此之外，过继细胞疗法也是目前较为常见的治疗方案，主要是将肿瘤特异

检测肿瘤标志物在胃癌诊治中的研究进展

检测肿瘤标志物在胃癌诊治中的研究进 展 （作者：__________ 单位： ___________ 邮编： ___________ ） 【关键词】肿瘤标志物胃癌研究进展 胃癌是对人类构成严重威胁的疾病之一，其死亡率居世界癌症死亡率的第2位。对胃癌实施科学有效的发病学预防，实施胃癌筛查、早期诊断及早期治疗是降低胃癌发病率及死亡率最有效的策略。目前胃癌确诊主要依靠胃镜、病理、X线等技术，这三种检查手段都具有侵入性，给患者身心带来一定的损伤。为寻找简便、快捷、无损伤、无痛苦的检查方法，近年来，通过检测血清或其他体液中的肿瘤标志物，根据其质或量的变化，可辅助胃癌诊治。 1肿瘤标志物的概述 肿瘤标志物（Tumor markers，TM）是表示肿瘤存在并反映其一定的生物特性的化学物质。早在1846年，Be nee Jon es首先从尿中发现并检测多发性骨髓瘤的特异性蛋白（一种免疫球蛋白的轻链）。到二十世纪初，学者们又先后提出了与肿瘤有关的异位激素促肾上腺皮质激

素（ACTH）、绒毛膜促性腺激素（HCG）等，随后，在1933年和 1959年陆续发现了与前列腺肿瘤有关的前列腺酸性磷酸酶(PAP)及组织分化同功酶等。以上这些成果可视为TM研究的第一阶段。1963 年苏联学者Abelev发现了原发性肝癌的标志性甲胎蛋白(AFP)，1965 年加拿大学者Gold和Freedman又发现了另一个重要的直肠癌标志物癌胚抗原(CEA)，AFP和CEA的发现是TM研究的第二阶段［1］。此后，TM的概念才与肿瘤细胞的分泌产物联系在一起，1975年Kobler与Milstein首次制备成功单克隆抗体(McAb)，开辟了TM研究第三阶段的起点。CA19-9是由Koprowski等在1979年发现的，糖链抗原72-4(CA72-4)属粘蛋白类癌胚胎抗原，是1981年Colcher 等［2］用乳腺癌肝转移的癌细胞膜成分免疫小鼠，所得单抗B72.3所识别的肿瘤糖蛋白抗原，将其命名为CA72-4。肿瘤标志物是1979 年在英国正式命名使用，并确定它的概念。继之，糖类肿瘤抗原的研究突飞猛进地发展了起来。 2肿瘤标志物的概念 肿瘤标志物(TM)是指肿瘤组织和肿瘤细胞由于癌基因或抗癌基因和其他肿瘤相关基因及其产物异常表达所产生的抗原和生物活性物质，而在正常组织或良性疾病时有一定程度表达或产量甚微，它反映了癌的发生和发展过程及肿瘤相关基因的激活或失活程度，可在肿瘤患者组织体液和排泄物中检出。此外，在患者机体中，由于肿瘤组织浸润正常组织，引起机体免疫功能和代谢异常，产生一些生物活性物

肿瘤免疫治疗进展

肿瘤免疫治疗CAR-T技术商业研发的进展 纽约辉瑞公司和巴黎Cellectis公司日前宣布，在肿瘤领域针对某些选择性肿瘤目标，进行全球战略性合作，开发嵌合性抗原受体的T细胞（CAR-T）免疫疗法。Cellectis公司的CAR-T技术平台提供了一个专利的，异基因途径的（利用单一供者来源的T细胞，经基因工程改造后产生的CAR-T，可用于多个病人）CAR-T疗法，这种方法不同于其他的自体来源的CAR-T方法（改造患者自身的T细胞针对肿瘤靶细胞进行治疗）。 根据协议条款，辉瑞公司在肿瘤治疗领域中，针对由辉瑞选定的15种肿瘤具有开发和商业化CAR-T疗法的独家权利。两家公司共同合作负责进行临床前研究，辉瑞公司将负责对于辉瑞选定肿瘤目标中的任何CAR-T疗法进行开发和商业化。此外，该协议也提出了Cellectis公司选定的总共12种肿瘤CAR-T目标。两家公司将共同对4种Cellectis选定的肿瘤CAR-T疗法进行临床前研究，Cellectis 公司对于其余8种肿瘤CAR-T进行独立的研发工作。Cellectis公司将负责对自己选定的肿瘤CAR-T疗法进行临床开发和商业化。辉瑞对Cellectis选定的4项肿瘤CAR-T有优先取舍权。 在合作协议范围内，Cellectis将接收8千万美元的预付款，

并接收用于辉瑞公司选定的CAR-Ts和Cellectis选定的4种CAR-Ts 的研究和开发成本资金。Cellectis有资格获得每项辉瑞产品开发，监管和里程碑性商业进展中的高达1.8亿美元的支付款。Cellectis 也有资格在任何辉瑞商品化产品的净销售额中提成。此外，辉瑞将通过一项股市协议，经由新发行的每股9.25欧元的股票，购买约10%的Cellectis资本，目前协议正待Cellectis股东批准。 Cellectis公司希望将在美国开放一个据点以便能与辉瑞公司的科研人员更加密切的合作。两家公司的结盟，提供了辉瑞所具有的最先进疗法的开发能力，也提供了一个仅有的机会来促进开发最好的CAR-T疗法这一创新性工作。这种CAR-T疗法将可能改变癌症治疗的现有方式。 Cellectis的CEO认为Cellectis的CAR-T技术平台，比其它T 细胞受体基因工程途径更具有真正的优势，而Cellectis与辉瑞的合作，为利用人自体免疫系统对抗癌症，实现该技术全部潜力迈出了重要的一步。辉瑞公司研发总裁认为，这项着眼于肿瘤免疫治疗领域的重要合作，是建立在Cellectis公司先进的基因编辑与细胞工程能力和辉瑞最前沿的癌症生物治疗平台基础上的合作。结合Cellectis的技术创新和科学潜力，加上辉瑞在肿瘤免疫治疗领域的深厚经验，这种强强联合的操作，创建了一个世界级的伙伴关系，

2020肿瘤标志物检测方法研究进展

2020肿瘤标志物检测方法研究进展 肿瘤具有高死亡率、高转移率和高复发率, 是危害人类健康的重大疾病。诊断肿瘤的传统方法有病理组织活检、核磁共振成像（magnetic resonance imaging , MRI）、电子计算机断层扫描（computed tomography , CT）、B超、X线胸片、内镜检查等。这些检查对于肿瘤早期的检测效果十分有限, 部分检测方法不仅价格昂贵, 且会给患者带来痛苦。因此, 在肿瘤早期阶段开展快速、有效的检测十分必要, 不仅可以达到早发现、早治疗的目的, 还可以改善患者就医体验。肿瘤标志物的筛检对于肿瘤早期检测具有重要意义[1]。 肿瘤标志物是指由肿瘤组织或宿主与肿瘤相互作用所产生的一类活性物质, 能够提示肿瘤存在与生长变化。肿瘤标志物常常存在于血清、细胞、尿液、体液或组织中, 常见的有癌胚蛋白、肿瘤抗原、酶类标志物、激素、糖类抗原等。肿瘤标志物检测具有操作便捷、标本易获取、非侵入性、价格低廉、易于动态监测疾病等优点。肿瘤标志物的检测对于肿瘤的预防、早期诊断与鉴别诊断、辅助肿瘤分类、疾病监测、指导治疗和预后判断有重要作用, 可有效弥补其他医学技术对肿瘤诊断、治疗及预后判断的不足[2]。肿瘤标志物种类繁多, 检测方法也各异, 本文将几种常见肿瘤标志物检测方法的研究进展作一综述。 1 放射免疫分析 放射免疫分析是一种传统的检测肿瘤标志物的方法, 是将放射性核素检测技术与抗原抗体结合特异性的特点相结合, 以定量微量物质。放射免疫分析多

使用放射性核素125I, 因其具有放射性高、易标记、衰变过程中释放的射线易于被检测等优势, 逐渐替代了3H和14C而被广泛使用。放射性核素标记具有高灵敏度、易于商品化等优势, 曾被广泛应用, 但与其他方法[3]相比, 存在试剂盒使用寿命短、有放射性污染风险等缺点, 目前已逐渐被其他检测方法取代。 2 化学发光免疫分析 化学发光免疫分析是目前常用和较为成熟的肿瘤标志物检测技术, 其利用化学发光物质作为标记物, 根据发光信号的强度来判断待测物质的量。自1928年德国化学家Albrecht 发现鲁米诺的化学发光特性后, 该检测技术由于灵敏度高、快速、线性范围广、仪器结构简单、适合小型化、无放射性危害等优点得到不断发展[4, 5]。化学发光免疫分析为化学发光法, 使用直接发光物质（如吖啶酯）标记抗体, 或使用酶类催化剂（如辣根过氧化物酶）[6]标记抗原抗体。将化学发光技术与微芯片电泳化学发光 （microchip-electrophoresis chemiluminescence, MCE-CL）等技术联合使用, 具有效率高、分析快、自动化程度高、需要更少样品和试剂的优点[7, 8]。 传统化学免疫分析采用酶标技术, 用辣根过氧化物酶催化鲁米诺的免疫测定技术曾被广泛使用, 目前的免疫测定系统通常使用信号探针标记抗体并进一步测量目标分析物浓度。但这类天然酶具有稳定性差、来源有限、对环境变化敏感、易受环境影响而变性等缺点, 且标记过程通常会损害抗体分子的生物活性, 因而基于金属及金属复合物[9, 10]、磁性纳米颗粒[11]、量子点[12]

肿瘤干细胞研究进展 (1)

中国生物工程杂志 Ch i n a Biotechnology ,2010,30(1):80284 肿瘤干细胞研究进展 于 欣 乔守怡 * (复旦大学生命科学学院遗传学研究所遗传工程国家重点实验室 上海200433) 摘要 肿瘤干细胞(cancer ste m ce l,l CS C)假说是近年来提出的关于肿瘤发生的新理论,在所有的肿瘤细胞中,可能只有一小部分细胞具有产生肿瘤并维持肿瘤生长和异质性的能力,目前已经在白血病、乳腺癌、脑癌等肿瘤组织中成功分离出了肿瘤干细胞,深入了解肿瘤干细胞的生物学特性、发展相应的鉴别方法以及特殊的治疗手段对癌症的临床治疗有着重要的意义。主要从肿瘤干细胞的概念、起源、鉴定分离方法、与正常干细胞的比较、比率以及与肿瘤转移的关系等方面进行了综述。关键词 肿瘤干细胞 干细胞 起源 比率 肿瘤转移 中图分类号 Q813 收稿日期:2009209214 修回日期:2009210229*通讯作者,电子信箱:s yqiao @fudan .edu .c n 治疗癌症的传统方法是通过手术切除、化疗、放疗等方法尽量去除已经存在的肿瘤细胞,但是在常规治疗后癌症的复发与转移仍然是在现今需要面对的严峻问题。肿瘤干细胞假说是近年来提出的一种新理论,为癌症的治疗方法提供了新的思路。肿瘤干细胞假说认为只有很小一部分细胞具有引起肿瘤发生、维持肿瘤生长、保持肿瘤异质性的能力。如果传统治疗忽略了这部分细胞,即使其他大部分肿瘤细胞都被消灭,但肿瘤仍然会面临着复发的可能。目前在这方面的研究还很少,深入了解肿瘤干细胞的生物学特性,发展出针对肿瘤干细胞的特殊治疗方法,对于癌症的治愈具有重大的临床意义。 1 肿瘤干细胞假说 肿瘤发生的原因普遍被认为是内在遗传物质与外在环境相互作用的结果,细胞生长的过程中,DNA 发生突变,可能会造成原癌基因激活,抑癌基因沉默,与凋亡相关的基因异常表达或沉默,导致细胞的生长、增殖或凋亡失去调控,从而生成肿瘤,进一步恶化后会发生癌变 [1] 。传统的观点认为所有的细胞都有可能积累这 样的突变,形成肿瘤细胞,这种可能性发生的概率是相同的。但近几年关于此问题研究人员提出了肿瘤干细胞假说:在所有的细胞中,只有很小一部分细胞具有形 成并维持肿瘤生长和异质性的能力,这一小部分细胞被称作肿瘤干细胞。 肿瘤干细胞假说最先是由M ac k ill op [2] 于1983年提出,他认为在所有的肿瘤中都可能存在着一小部分细胞具有类似干细胞的特殊功能。1997年Bonnet [3] 第一次在急性髓性白血病(acute myel oi d l eukae m ia ,A ML)中分离出了一类细胞表面抗原标记是C D34 +CD382 的细胞,数量约占AML 总细胞数量的0.2%,将这部分细胞移植至非肥胖型糖尿病/重症联合免疫缺陷小鼠(NOD /S CI D)后,会引起A ML 的发生,而将其他的A ML 细胞以更大的数量移植入NOD /S C I D 小鼠体内却不能引起A ML 的发生。以上结果表明这部分拥有CD34+CD382细胞表面抗原标记的AML 细胞可能是肿瘤干细胞,它们的细胞表面抗原标记与正常的造血干细胞类似,也暗示了A ML 中的肿瘤干细胞可能是来源于正常的造血干细胞。在此之后,研究人员使用了类似的实验方法,在乳腺癌[4] 、中枢神经系统癌 症[5] 、结肠癌 [627] 、前列腺癌 [8] 、胰腺癌[9] 、肝癌[10] 等实 体瘤中也鉴定出了肿瘤干细胞的存在,进一步证实了肿瘤干细胞假说。 2 正常干细胞同肿瘤干细胞的比较 2.1 正常干细胞 正常的干细胞是一类具有自我更新能力,并可以分化成为多种子代细胞的一类具有较长生命周期的特