CRISPR(Cas9) System斑马鱼基因敲除-实验流程3
1、gRNA模板扩增：（以gRNA质粒为模板，扩增片段大小为100bp多）
40ul体系，利用保真性>= Extaq的酶扩增4管；
可以通过胶回收纯化扩增模板（四管过同一个回收柱子），或通过沉淀纯化（附件1）;
沉淀回收模板前，要进行利用5ul电泳检测是否扩增出目的条带；
以上模板皆用20ul DEPC水回溶(,反复洗柱子两次)。
2、gRNA合成：
10ul
反应温度37
3、gRNA纯化
a.加入1ul DNase I，37℃处理15min；
b.加入1ul 0.5 M EDTA 8.0，65℃处理10min；
c.加入57.5ul DEPC water 和 7.5ul 3M sodium Acetate solution(pH 5.2);
d.加入等体积（即77ul）酚氯仿（1:1 mix）；12000rpm，15min；
e.吸取上部水相到新的PCR-tube，加入等体积氯仿，12000rpm，15min；
f.重复操作e；
g.收集水相到new-PCR-tube，加入2倍体积无水乙醇；-20℃沉淀至少30min；
h.12000rpm，15min，去除液体，留下白色gRNA沉淀；
i.70%乙醇洗3次（每次12000rpm，6min）；
j.去除70%，自然干燥，10-20ul DEPC water溶解；-80℃保存。
注意：以上为RNA操作，请使用灭菌未开封的tips and tubes，尽量不说话，避免RNA酶污染。以上合成与纯化过程为KIT说明书翻译得到，如使用与本实验室不同KIT，请阅读相关说明书。
4、Cas9 template 准备（酶切4h，40ul体系）
将zf-cas9-vector 线性化，即XbaI 单酶切；酶切2 tube，2.3或2.5ug/tube；过同一个胶回收柱子；20ul DEPC water 回溶，洗涤柱子两边，-20℃保存。
5、cas9-mRNA 合成
20ul
反应温度37℃，时间4.5h。
纯化：
A．加入1ul DNase I，37℃处理15min；
B．20ul反应体系，加入30ul LiCl；
C．冰浴或-20℃沉淀至少30min；
D．4℃,12000rpm,15min;
E．100ul 70%乙醇洗2次（每次12000rpm，6min）；
F．10ul DEPC water溶解；-80℃保存。
注意：RNA样品根据每次用量的多少分装保存，避免反复冻融，降解。一般1ul/tube保存。
6、 斑马鱼注射：
利用混合好的cas9与gRNA 样品注射（混合后终浓度分别为300ng/ul 和 20ng/ul, 如果注射效果不佳，可自行提高混合比例再次注射，最好不要超过500ng/ul 和80ng/ul ） 7、 F0注射胚胎检测
准备：50mM NaOH 、1 M Tris-HCl PH8.0；30% PAGE ；5XTBE ；10%APS ； 5X TBE
12% PAGE-gel ：（两块）
说明：其他所需溶液请自行查询《分子克隆》的配方。 8、 基因组提取及PCR
a. 8 embryos/Tube ，加入80ul 50mM NaOH ，95℃，40min ；（可取3-5tubes ）
b. 加入1/10体积 1 M Tris-HCl PH8.0；mix well ，3000rpm ，5min ；
c. 取1ul 作为template ，PCR 扩增包含靶位点的基因片段；
d. 加6xloading buffer ，run 12% PAGE-gel ；、
e. EB 染色，凝胶成像仪拍照看条带结果；
f. 如果条带与WT 存在差异，则说明敲除有效果； 9、 养鱼
将test 有效果的靶位点对应的F0代斑马鱼饲养起来； 10、筛鱼
a.将成熟的F0代斑马鱼与WT mate ，取其发育24h 的胚胎test ，方法同8；
b.将test 有效果的靶位点对应的F1代斑马鱼饲养起来； c ．1个月大的幼鱼，剪尾鳍提基因组逐条test ；（如图）
11、测序
PCR 产物(胶块)直接测序；T-clone 直接菌液测序；前者读峰图获得结果后者与标准序列blast 获得；具体如下例：（在标准序列上找到套峰之前的序列，读出套峰处的碱基，重叠套峰上下写，最后将套峰处标准序列（序列1）找到，其他碱基组合即为序列2；比较后得出碱基缺失情况。）T-clone sequence 获得单一序列（有野生型sequence 及mutant sequence ，与网上序列blast 后，有碱基缺失的即为突变情况）
12、后续筛鱼及传代（标准程序）
A:F0 X WT F1 B: F1 X WT F2
C:F2 X WT F3 D:F3 X F3 观察表型
注：step 12的传代都是要通过剪尾鳍test传代的。
斑马鱼动物模型的应用介绍
斑马鱼动物模型的应用 斑马鱼（Danio rerio）属于辐鳍亚纲（Actinopterygii）鲤科（Cyprinidae）短担尼鱼属（Danio）的一种硬骨鱼，原产于南亚，是一种常见的热带观赏鱼，因其体侧具有斑马一样暗蓝与银色相间的纹条而得名。 斑马鱼个体小，易于饲养，成体长4-5cm，雄鱼体修长，雌鱼体肥大。可在有限空间里养殖相当大的群体，可满足样本需求量大的研究。斑马鱼发育迅速，在28.5℃培养条件下受精后约40min完成第一次有丝分裂，之后大约每隔15min分裂一次，24h后主要器官原基形成，相当于28d的人类胚胎，幼鱼孵出后约3个月达到性成熟。雌雄鱼通过调控光周期控制14:10（光照:黑暗）产卵时间，成熟鱼每周可产卵一次，一尾雌鱼每次可产卵100-300枚。胚胎体外受精，体外发育，胚体透明，易于观察。受精卵直径约1mm，易于进行显微注射和细胞移植等操作。 一、斑马鱼的品系 经过30多年的研究应用和系统发展，已有约20个斑马鱼品系，斑马鱼基因数据库-ZFIN （http://zfin/org）里有相关的资料可供查询和下载。目前研究中常用的斑马鱼野生型品系主要为AB 品系、Tuebingen（Tu）品系、WIK 品系，斑马鱼基因组计划所用品系是Tu。AB 品系是实验室常用的斑马鱼品系，由单倍体细胞经早期加压法获得。Tu品系斑马鱼具有胚胎致死突变基因，用于基因组测序前敲除该致死突变基因。WIK品系较Tu品系具有更多的形态多样性。此外，还保存有3000多个突变品系和100多个转基因品系。这些品系资源对于利用斑马鱼开展各种科学研究起着很大的推动作用。 二、斑马鱼突变品系的筛选 斑马鱼突变的方法主要有三种：已基亚硝脲（ENU）化学诱导、γ或χ射线照射和插入诱变。ENU是一种DNA烃基化试剂，在生殖细胞减数分裂前诱导碱基对的替换，诱导产生的突变率为0.1%-0.2%，涉及单个基因的突变。射线照射导致染色体大片段的缺失或染色体重排，产生突变率达1%。插入诱变是以逆转录病毒为载体，用显微注射法将目的基因片段导入斑马鱼受精卵，整合到基因组中，干扰正常基因表达。射线照射产生的突变率是ENU 化学诱导的10倍，但由于突变涉及多个基因，突变的表型是受若干基因调控的结果，不利于基因功能的分析，因此，ENU化学诱导法是斑马鱼突变的主要方法。研究含有纯合致死
实验绿色荧光蛋白
生物技术实验报告 姓名：张龙龙 学号：2011506066 班级：11级生技02班
前言：绿色荧光蛋白（green fluorescent protein，GFP）是一类存在于包括水 母、水螅和珊瑚等腔肠动物体内的生物发光蛋白。当受到紫外或蓝光激发时，GFP 发射绿色荧光。它产生荧光无需底物或辅因子发色团是其蛋白质一级序列固有的。GFP 由3 个外显子组成，长2.6kb；GFP 是由238 个氨基酸所组成的单体蛋白,相对分子质量为27. 0kMr，其蛋白性质十分稳定，能耐受60℃处理。1996 年GFP 的晶体结构被解出，蛋白质中央是一个圆柱形水桶样结构，长420 nm，宽240 nm，由11 个围绕中心α螺旋的反平行β折叠组成，荧光基团的形成就是从这个螺旋开始的，桶的顶部由 3 个短的垂直片段覆盖，底部由一个短的垂直片段覆盖，对荧光活性很重要的生色团则位于大空腔内。发色团是由其蛋白质内部第65-67位的Ser-Tyr-Gly自身环化和氧化形成. 一.实验目的 1、了解表达用基因克隆引物设计的原理和方法。 2、了解利用原核表达系统表达外源基因的原理、流程及方法。 3、掌握PCR、DNA片段的酶切与连接、细菌转化、阳性克隆筛选、质粒提取、DNA样品的纯化、核酸电泳等分子生物学基本技术。 二．实验原理 基因工程一般包括四个步骤：一是取得符合人们要求的DNA片段，这种DNA片段被称为“目的基因”；二是将目的基因与质粒或病毒DNA连接成重组DNA；三是把重组DNA引入某种细胞；四是把目的基因能表达的受体细胞挑选出来。 本实验根据绿色荧光蛋白（GFP）的基因序列设计一对引物，用该引物将GFP基因从含GFP基因的质粒中扩增出来。再利用双酶切切开表达载体pET23b 和目的基因的两端接头，通过T4连接酶GFP基因与表达载体重组。将含GFP 基因的重组表达载体导入宿主菌BL21(DE3),在IPTG的诱导下，使GFP基因表达 三.实验材料及仪器 1、实验材料：含有GFP的质粒；DNA Marker；DH5α；BL21； 2、仪器：恒温培养箱、超净工作台、恒温摇床、制冰机、台式离心机、涡旋振荡器、冰箱、电泳仪、透射仪、PCR仪、PCR管、刀片、玻璃涂棒、酒精灯、无菌牙签、吸水纸、微型离心管、台式冷冻离心机、塑料手套、1.5ml离心管。 四.实验内容 4.1 质粒的提取、酶切及电泳鉴定： 1)实验试剂：LB培养基；溶液Ⅰ；Tris-HCl（pH=8）；溶液Ⅱ；溶液Ⅲ； 酚/氯仿抽提液；无水乙醇；电泳缓冲液；加样缓冲液；GoldView核酸 DNA 染色剂；1%的琼脂糖凝胶；XhoⅠ(10U/μl)；NdeⅠ（10U/μl）；T 4 lisase。 2)实验步骤： 质粒的提取与鉴定
斑马鱼的内分泌系统研究进展(王华飞)
毕业论文 论文题目：斑马鱼的内分泌系统的研究 学生姓名：王华飞 学号：1113030228 所在院系：生物工程学院 专业名称：生物技术 届别：2015届 指导教师：陈锦云 淮南师范学院教务处
目录 前言： (4) 1、作为模式生物斑马鱼的优点 (4) 2、斑马鱼内分泌系统研究在医学方面的发展 (4) 2.1斑马鱼模型能在医学上的应用原因 (5) 2.2 用斑马鱼突变体构来建疾病模型 (5) 2.3.神经学研究的模式生物 (5) 3、斑马鱼内分泌系统研究在环境检测中的应用 (7) 3.1斑马鱼能用与环境检测的原理 (7) 3.2筛选环境中的内分泌干扰物 (7) 4、斑马鱼内分泌系统研究在新药研究方向的应用 (8) 4.1斑马鱼内分泌系统模型在新药筛选中的应用 (8) 4.2在动物生殖内分泌学中的应用 (9) 5、人工内分泌统的基础 (10) 5.1人工内分泌系统的原理 (10) 5.2人工内分泌系统在未来研究中的展望 (11) 参考文献： (11)
斑马鱼内分泌系统的研究进展 学生：王华飞 （指导老师：陈锦云） （淮南师范学院生物工程学院） 摘要：本文综述了模式生物斑马鱼内分泌系统的研究进展。研究人员把斑马鱼的研究主要归纳为以下几个方面：1.突变体做为模型来研究人类的内分泌疾病;2.了解了其发病机制并且研制出了新药;3.斑马鱼内分泌系统的研究还在环境检测及毒理学方面有着重要的应用;4.最后展望在未来科技中人工内分泌系统。 关键词：斑马鱼；人工内分泌系统；医学；环境；药物 Study on the endocrine system in zebrafish Abstract:This paper reviews the research progress of zebrafish endocrine system. Researchers to zebrafish studies are summarized as the following aspects: 1. The mutant do as a model to study human endocrine disease; 2. Understanding the pathogenesis and the development of a new drug; 3. Zebrafish endocrine system research is still in the environment detection and toxicological aspects of has a important application. 4. Finally, the prospect in the future science and technology artificial endocrine system Keywords: zebrafish; artificial endocrine system; medical environment; drug;
饲养斑马鱼
饲养斑马鱼幼鱼的正确方法 刚出声的小斑马鱼都很容易生病，所以饲养斑马鱼的饲主要加强管理，从而防病治病。刚孵出的小斑马鱼呈淡黄色，在解剖镜下可见到跳动的心脏，流动的血液，腹部有一很大的、未吸收的卵黄囊。头2～3天仔鱼静卧于水底，此时不需要饲喂。注意及时将卵膜和白色的死卵捞出，每天更换新水，将鱼苗置于温室内，温度为25℃（可放在空调房间内）。3～4日龄时仔鱼可自由游泳（平游）并开始觅食，此时可用绢网取少许蛋黄在水中轻轻地搅动，至水微呈淡黄色。适当加喂钙素母片、复方vb液、土霉素等，以提高鱼苗的成活率。喂要少量多餐，日喂3～4次。7～10日龄时加喂草履虫，啤酒酵母等，3周龄投喂卤虫的无节幼体，并逐渐添喂配合饲料。在饲喂过程中要注意水质的变化，勤换水，少喂勤添，以确保鱼苗健康生长。 斑马鱼孵化期间病害较少。不干净水质可引起纤毛虫等原生动物侵袭孵化卵，降低孵化率。导致死亡的主要因素还是高温和畸形卵引起的发育失败，只有通过合理控制孵化温度并及时清除畸形卵，才能有效提高孵化率。 斑马鱼很容易养，随便什么观赏鱼的干饲料都可以，颗粒小点，适口就行。 但如果你的斑马鱼是用来繁殖的亲本，就要弄点活的红线虫（饲喂前要用清水洗干净）或冷冻丰年虫了。营养好才能促进他们的性腺成熟，雄鱼性腺成熟后，体征上表现为腹部淡黄色，腹鳍根部也是淡黄色；雌鱼腹部膨胀，体色鲜艳。 养殖斑马鱼最重要的就是温度，虽然斑马鱼适应能力很强20~30度都能生存，但它最适宜的温度是26.5~28.5度，在冬季把水温可以适当调高点。光照平时不是很重要，但在孵卵前后很重要，要保持14：10，及光照14，无光照10。食物不用喂太勤，根据食物的种类来定饲喂次数，普通干饲料可以一日多次，活线虫一日一次，投喂量以3分钟能吃完为宜，如果是孵卵前后要增加投喂次数。换水不用太勤，如果有滤水装置，可以3天或5天换一次曝气自来水，换水量不超过总水量的1/2或1/3为宜。公母搭配比例，以2:1至4:1为宜，因为雌鱼一次产卵量很大，而且都是水中受精，所以雄鱼要足够才能保证卵在水中受精率较高，雄鱼太多也不行，为争取配偶互相打架太厉害。 哈，没想到隔了这么长时间，我的养殖经还是随口就来！ 斑马鱼是低温低氧鱼可以在10度的水中生活比孔雀鱼都好养是新手入门最好养的一个品种换水要看饲养密度养的鱼越多喂的多水脏的越快如果养的少半个月换一次没问题一般大家都是一星期左右换一次换水也不能整缸都换会死鱼看水的浑浊度可以换三分之一或三分之二不管哪个阶段都可以喂红线虫水蚤丰年虾人工饲料等没有具体要求都可以长的很好的养鱼主要是水水才是鱼生存的根本因为水是鱼生存的必要条件和环境即使5天不喂也未必会死可是水脏了鱼就容易生病除非是有些饲料是可以增加体色和抗病的也不知道含不含化学药品我觉得喂活饵长得快（这是经验）人工饲料慢一些但是夏天热鱼虫很容易死如果喂了不新鲜的会对鱼不好你也可以人工饲料和鱼虫换着喂营养会均衡些如果你指的是刚出生的小鱼所有的热带鱼不管大型还是小型的刚出生都可以喂蛋黄水水蚤丰年虾幼虫人工饲料等人工饲料要磨碎磨的很细小稍微长大一些后还是这些食物绝对没有特定要求 是你的养鱼用水出了问题，养斑马鱼很简单，只要你平时常观察，鱼很少会因鱼病导致死亡，何况你已经养了一年多了，养这种鱼，注意不要彻底换水，换不好就会死鱼，最好是攒水，三天攒一次就可以，一般攒四分之一为好，不过定期也要换水，注意我说的，所谓的换水，是把整缸的水换掉三分之二，要留三分之一的老水。在就是斑马鱼的寿命一般在2-3年，你养了一年多你养的已经很好了，不要伤心或心疼，养鱼是让我们在闲余时间，来放松心情，陶冶情操的。不要气馁，继续养好它，它会给你带来无穷无尽快乐，最后祝你养鱼成功。 没有器材也没关系，其实小型科的热带鱼，很好养的。只要你每天捞捞鱼的粪便，两天攒一次水就好了，跟硝化细菌每关系。一天要为鱼两次，早上一次，下午4点前一次，记住最好不要再下午4点以后喂食，因为4点以后气压会变低，喂完鱼后会导致水中溶氧减少，使鱼儿缺氧，一定要注意。鱼食吗，最好买微小颗粒的，喂食量在3分钟内吃完为好。以上是给你的建议，你养的很好了，不要在心疼了，在买些继续养好它，慢慢来你会养好的，实际上你已经养的很好了。
《基因工程》课程综合实验转基因斑马鱼的构建
《基因工程》课程综合实验转基因斑马鱼的构建 实施方案 《基因工程》课程综合实验教学在专业培养目标中的定位与目标 《基因工程》是生命科学学院等各专业的专业主干课，在这些专业的本科生教学打算中占有极为重要的地位。《基因工程》也是我们学校基地班和生技专业的专业必修课，差不多有10余年的开课历史。全国其他高等综合院校都十分重视《基因工程》课程建设，绝大多数院校都将《基因工程》作为学校精品课程进行建设。湖南师范大学大学在《基因工程》教学和研究方面具有坚实的基础，2008年《基因工程》建设成为了湖南省精品课程，从而为我校《基因工程》的教学改革提供了契机。 基因工程是以遗传学为理论基础的一门实践性专门强的学科，是生物学科中一门体系还欠完整却进展十分迅速的学科，对探究生命的本质、推动整个生物学科的进展起着庞大的作用；同时又是一门紧密联系生产实际的实验科学，对新品种选育和良种繁育、遗传疾病防治等都具有重要的应用价值。通过《基因工程》的学习，使学生把握基因工程的差不多原理、差不多方法和最新进展动态；通过《基因工程》课程综合实验教学，使学生熟悉基因工程的差不多操作方法，注重对学生的实验操作技能的培养。 基因工程课程综合实验---转基因斑马鱼的构建教学大纲 课程名称：基因工程（实践课程部分） 课程编号： 面向专业：生物技术、生物科学、基地班
课程总学时：理论51学时，实验34学时_ 实验学时：34_ 课程学分：理论3学分，实践2学分 一、实验目的 本课程的教学目的是让学生对基因工程技术所涉及的要紧环节的差不多原理和差不多技术进行系统地学习和把握，培养学生基因工程差不多实验操作、实验设计、实验结果分析和创新实验能力，通过基因工程综合实验的开设，注重学生综合素养和实践能力的培养。 二、实验内容、学时分配与组织
质粒DNA的提取和纯化实验报告
质粒DNA的提取和纯化实验报告
实验一、质粒DNA的提取和纯化 一、实验目的： 1、学习并掌握碱裂解法小量制备质粒DNA的方法。 2、初步了解DNA纯化的原理。 二、实验原理 1、细菌质粒是一类双链、闭环的DNA，大小范围从1kb至200kb以上不等。各种质粒都是存在于细胞质中、独立于细胞染色体之外的自主复制的遗传成份，通常情况下可持续稳定地处于染色体外的游离状态，但在一定条件下也会可逆地整合到寄主染色体上，随着染色体的复制而复制，并通过细胞分裂传递到后代。 2、质粒已成为目前最常用的基因克隆的载体分子，重要的条件是可获得大量纯化的质粒DNA分子。目前已有许多方法可用于质粒DNA的提取，本实验采用碱裂解法提取质粒DNA。 3、碱裂解法是一种应用最为广泛的制备质粒DNA的方法，其基本原理为：当菌体在NaOH和SDS溶液中裂解时，蛋白质与DNA发生变性，当加入中和液后，质粒DNA分子能够迅速复性，呈溶解状态，离心时留在上清中；蛋白质与染色体DNA不变性而呈絮状，离心时可沉淀下来。 4、纯化质粒DNA的方法通常是利用了质粒DNA相对较小及共价闭环两个性质。例如，氯化铯-溴化乙锭梯度平衡离心、离子交换层析、凝胶过滤层析、聚乙二醇分级沉淀等方法，但这些方法相对昂贵或费时。对于小量制备的质粒DNA，经过苯酚、氯仿抽提，RNA酶消化和乙醇沉淀等简单步骤去除残余蛋白质和RNA，所得纯化的质粒DNA已可满足细菌转化、DNA片段的分离和酶切、常规亚克隆及探针标记等要求，故在分子生物学实验室中常用。 三、实验步骤 1、挑取单菌落接种到含Amp的LB液体培养基试管内（3.5ml/管） 2、将试管放入恒温震荡培养箱中，37℃，200r/min培养12-16h。 3、将菌落转入1.5ml离心管中（尽量倒满）1200r/min，离心30s（沉淀菌体） 4、重复一次第三步的过程 5、弃掉上清液并扣干，加入预冷的Solution1 100微升，剧烈震荡打散菌体
斑马鱼雌雄鉴别与饲养
斑马鱼雌雄鉴别与饲养 斑马鱼又名蓝条鱼、花条鱼、蓝斑马鱼、印度鱼、印度斑马鱼，鲤科属，原产南亚印度，分布于缅甸、孟加拉、新加坡等地。 斑马鱼长4—6cm，体呈纺锤形，稍侧扁。斑马鱼头稍尖身上有斑马样的条纹，故得名斑马鱼。其背部为橄榄色，体侧从头至尾布满多条蓝色条纹，雄鱼为深蓝间柠檬色条纹，雌鱼为蓝色间银灰色条纹。斑马鱼眼眶虹膜黄色，泛红光。 斑马鱼的臀鳍宽大。与背鳍相对应，胸鳍较小。斑马鱼的品种约有10多种，主要区别在条纹和色彩上，也有鳍行上的变化。如有长鳍斑马鱼、金丝斑马鱼、闪电斑马鱼、大斑马鱼等。 饲养要求 斑马鱼性情温和，活泼好动，几乎一刻不停的游动。其对饲水水质要求不苛刻，喜在酸碱度中性的水中生活，喜新水，适宜水温21—26摄氏度。但斑马鱼既耐寒又耐热，水温在15—40摄氏度之间仍可生活。 斑马鱼喜在上层水域活动觅食，对饵料不挑剔，各种鱼虫及人工饲料均棵投喂。饲养斑马鱼最好在缸底铺些较大的卵石，便于沉淀物聚集，不使水浑浊。它不进攻杀害其他鱼，适宜混养。斑马鱼色彩美丽，饲养条件粗放，因而是人们最喜欢养的热带鱼之一。 雌雄鉴别与繁殖
斑马鱼的雌雄不难区分：雄斑马鱼鱼体修长，鳍大，体色偏黄，臀鳍呈棕黄色，条纹显着；雌鱼鱼体较肥大，体色较淡，偏蓝，臀鳍呈淡黄色，怀卵期鱼腹膨大明显。 斑马鱼属卵生鱼类，4月龄进入性成熟期，一般用5月龄鱼繁殖较好。斑马鱼的繁殖周期约7天左右，一年可连续繁殖6—7次，而且产卵量高。 斑马鱼的繁殖比较容易。繁殖用水要求pH6.5-7.5，硬度6-8，水温25-26摄氏度。由于斑马的卵为无粘性的沉性卵，并且斑马鱼和其他鲤科鱼一样会吃掉自己的卵。所以大家应该在繁殖缸底铺设一些可以将卵隐蔽起来的物品。笔者以前是将玻璃弹球（也就是小孩子玩的玻璃球）密密的在缸底铺上一层，这样卵会从玻璃球的空隙落到繁殖缸底部，玻璃球可以将亲鱼和卵分开以免亲鱼吃掉卵。另外，还可以用玻璃作出一个一个格子，放到繁殖缸里，每一格约10×10cm，这样就可以将多对亲鱼放到一起产卵。然后同时孵化，幼鱼也可以同时喂养和管理了。 繁殖时可按雌雄鱼1:2的比例防入繁殖缸内，一般头天晚上防入，第二天上午或中午就可以产卵受精。排完卵要将种鱼捞出另养。一条雌鱼每次可排卵300-1000粒不等。受精卵经2-3天可孵出仔鱼，再经2天仔鱼开始游动觅食，开始先以“洄水”喂之，10天后可改喂其他小型鱼虫。
植物基因克隆实验指导
植物基因克隆实验规则 一、植物基因克隆实验课的目标 根据基因克隆实验操作的整体性和连贯性特点, 将该实验设计为综合性实验课程，实验内容设计上完全抛弃了原来分散的、孤立的单纯学习某一实验技术的缺陷, 将单个实验综合为系统的、连贯的系列型大实验，注重科研成果在教学中的应用，我们从以往的科研项目中选取了部分研究内容用于学生的综合性实验教学，这是基于教学实验与实际科学研究实验之间的新的实验教学模式。 整套实验围绕洋甘菊倍半萜生物合成途径中关键酶基因HMGR的克隆这一研究课题进 行操作, 设计的实验内容具有极强的连续性和综合性，让学生在独立实践操作中学习基因克隆的基本研究方法和体会科学研究的严密逻辑和培养科研理念。 我们将实验内容设置为8个部分, 实验内容前后衔接紧密, 环环相扣, 不可分割, 前一个实验的结果是下一个实验的材料。该课程使学生获得了整个类似科研实践过程的训练和体验, 学习了从事科研工作的基本功, 对完成自己的毕业论文及将来从事生命科学研究奠定了科 研基础。 二、实验的进行程序和要求 1、预习学生在课前应认真预习实验指导以及教材有关章节，必须对该次实验的目的要求、实验内容、基本原理和操作方法有一定的了解。 2、讲解教师对该实验内容的安排及注意事项进行讲解，让学生有充分的时间按实验指导的要求进行独立操作与观察。 3、独立操作与观察除个别实验分组进行外，一般由学生个人独立进行操作和观察。在实验中要按实验指导认真操作，仔细观察，作好记录。有关基本技能的训练，要按操作程序反复练习，以达到一定的熟练程度。
4、演示每次的实验都备有演示内容，其目的是帮助学生了解某些实验中的难点，扩大在实验课有限时间内获得更多感性知识的机会。 5、作业实验报告参照硕士毕业论文的格式写，必须强调科学性，实事求是地记录、分析、综合。在实验结束时呈交。 6、小结每次实验结束后，由师生共同小结本次实验的主要收获及今后应注意的问题。 三、实验规则和注意事项 1、每次上课前，必须认真阅读实验指导，明确本次实验的目的要求、实验原理和注意事项，熟悉实验内容、方法和步骤。 2、上实验课时必须携带实验指导、记录本及文具等。进入实验室要按规定座位入座。 3、实验时要遵守纪律，听从教师指导，保持肃静。有问题时举手提问，严禁彼此谈笑喧或随意走动，也不得私自进行其他活动。 4、实验时要遵守实验操作规程，严格按照教师的安排和实验指导的要求进行。操作观察要认真仔细，边做、边看、边想，认真做好实验记录。 5、要爱护仪器和器材设备，注意节约实验材料、药品和水电。如有损坏器材应立即报告并主动登记、说明情况。 6、实验结束后，应清理实验台面，认真清理好仪器、药品及其他用品，放回原处，放好凳子，方可离开实验室。值日生要负责清扫地面，收拾实验用品，处理垃圾，关好水、电、门窗后再离开。
人教版八年级下册生物实验指导
八年级下册（人教版）实验教学 目录 第七单元生物圈中生命的延续和发展 第一章生物的生殖和发育 第一节植物的生殖 探究实验十四扦插材料的处理 (89) 第四节昆虫的生殖和发育 课外探究家蚕的生殖与发育 (91) 第四节鸟的生殖 探究实验十五探究鸟卵的结构 (92) 第二章生物的遗传和变异 第五节生物的变异 探究实验十六花生果实大小的变异 (94) 第三章生物的进化 第三节生物进化的原因 模拟探究模拟保护色的形成过程 (97) 第八单元健康地生活 第三章动物在生物圈中的作用 第二节动物与人类生活的关系 探究实验十七酒精或烟草浸出液对水蚤心率的影响 (100)
探究实验十四扦插材料的处理 ■实验预习 1．下列不属于无性生殖方式的是（） A.试管婴儿 B.克隆 C. 组织培养 D.出芽生殖 2．下列不属于无性生殖的优点的是（） A.保持亲本的优良性状 B.繁殖速度快 C.培育新品种 D.以上都是3．有性生殖有生物个体生命起点是（） A.生殖细胞 B.受精卵 C.卵细胞 D.幼体出生 4．某同学在橙树枝上做了多次嫁接柑桔枝条，就是没有成功。可能的原因是（） A.形成层对齐 B.温度不适宜 C.水分适宜 D.接穗和砧木属同科植物5．下列哪项为无性生殖和有性生殖的最大区别? （） A．是否产生生殖细胞B．是否需要两性生殖细胞结合 C．后代是否有性别之分D．亲代是否有性别之分 6．克隆羊“多莉”，是将白面绵羊的乳腺细胞核移植到黑面绵羊的去核卵细胞中后，经一系列培育而成。试根据遗传学原理，分析“多莉”的面部毛色应是 （） A．黑色B．白色C．黑白相间D．不能确定 ■实验指导 1．材料选取：用茎繁殖成活率高的植物，如柳枝、玫瑰枝、葡萄枝、枳壳枝等一年生新枝。 2．对枝条的处理： （1）上下两端至少各有一个芽。上芽利于长茎叶；下芽利于长根。 （2）上端切口角度是45度，而下端切口是斜向的 3．扦插的要求： 茎插入角度为45度，保证上端切口与地面呈90度角。 ■实验报告 目的要求： 1．进一步掌握对照实验的设计 2．运用生物知识解决实际问题 材料用具：
斑马鱼繁殖时需要注意的地方
斑马鱼成熟期短，繁殖能力强，在养殖过程中经常会遇到自然繁殖和人工繁殖等情况，这时饲养者就需要格外注意一些问题，以保障卵子受精率和幼苗的成活率。 斑马鱼是一种常见的热带鱼。体型纤细，成体长3～4cm，对水质要求不高。孵出后约4个月达到性成斑马鱼熟，成熟鱼每隔几天可产卵一次。卵子体外受精，体外发育，胚胎发育同步且速度快，胚体透明，发育温度要求在25～31摄氏度之间。斑马鱼由于个体小，养殖花费少，能大规模繁育。饲养者在养殖过程中遇到繁殖情况，就需要格外注意。 首先，斑马鱼在繁殖期对水质水温有所要求。一般而言，斑马鱼繁殖期需要用到软性水，水质偏硬，水温维持在25-26摄氏度即可。不少养殖设备厂家生产制造的养殖单元配有恒温设备，可以根据不同研究需要调节水温。对于水质问题，则需饲养者勤观察，勤换水，以调整到适宜的水质。 另外，需要注意的是斑马鱼在产卵后会有吸食鱼卵的习惯。因此，饲养者需要提前在养殖单元底部铺上一层网板或者小的鹅卵石。这样一来，在斑马鱼产卵后，其鱼卵会散落到网板下面或散落在小卵石的空隙中，可有效防止亲鱼蚕食鱼卵，保证斑马鱼卵成活率。在亲鱼产卵一段时间后，即会有一些没有受精的鱼卵开始发白时，就可以用吸管将鱼卵吸出，放置到培养皿中进行孵化。
在鱼卵孵化期间，需要格外注意其水温。斑马鱼鱼卵的孵出水温需要保持在24摄氏度左右，两三天后受精卵会孵出仔鱼。如果在水温28摄氏度时，受精卵经36小时会孵出仔鱼。雌鱼每次产卵300余枚，多时能有上千枚。繁殖仔鱼的水温约为25摄氏度左右，仔鱼孵出后7~8天，才会开始主动摄取食物，此时，饲养者需要投喂蛋黄灰水，以后再投喂小鱼虫，以帮助幼鱼进食。 上海海圣生物实验设备有限公司成立于1997年，是一家从事水生物养殖设备制造的专业生产型企业，专为各高等院校、研究院所度身设计、制造水生物实验养殖系统，如中国水产科学研究生院东海水产研究所、黄海水产研究所、北京大学等。近年来，海圣在斑马鱼养殖设备研发上取得新进展，开发出二代新品，既提升了性能又降低了运行成本。海圣拥有完善的售后服务体系，保修期内免费上门维修，48小时内到达现场。定期回访及维护设备，积极听取和处理反馈意见，提供终身技术支持及配件。它不断吸收国内外先进技术，积极完善生产工艺，获得多项专利，已通过了ISO9001:2015质量管理体系认证、ISO14001:2015环境管理体系认证和ISO 45001:2018职业健康安全管理体系认证，养殖设备达FDA检测标准，无毒无害，质量有保证！
基因克隆、假病毒操作步骤
实验名称：基因克隆 实验器材:荧光定量PCR仪、摇床、离心机、生工PCR产物纯化试剂盒、恒温加热器、 NEB连接体系、灭菌纯水、JM109感受态、冰、LB培养基、酒精灯、涂棒、氨苄、氨苄抗性平板、甘油等； 操作步骤： 1、可通过PCR进行拼接获得目的基因的，过柱纯化（生工试剂盒根据说明书进行纯化， 在最后一步的洗脱可以用预热的灭菌纯水洗脱，在加灭菌纯水洗脱的时候一定要加在纯化柱子的膜中间）； 2、选择合适的载体（EZ-T）用连接酶进行连接，NEB体系，16℃过夜连接 T4lages 1.0 10×T4buffer 2.0 EZ-T 1.0 目的基因8.0 DdH2O 8.0 ＿＿＿＿＿＿＿＿＿ 20ul 3、取100μl摇匀后的JM109感受态细胞悬浮液（如是冷冻保存液，则需化冻后马上进行下 面的操作），加入10μl连接产物，轻轻摇匀，冰上放置30min后，于42度水浴中保温90s，然后迅速在冰上冷却2min； 4、加入500μl LB液体培养基，混匀于37℃振荡培养45min使受体菌恢复正常生长状态并 使转化体产生抗药性； 5、将恢复培养的菌体5000rpm离心3min，移去上层LB培养基，用余下的200μl重悬菌体， 并用灭菌玻璃推子(酒精灯上烧后冷却)，均匀涂布于琼脂凝胶表面（氨苄抗性），37℃倒置培养12~16小时； 6、挑取多个单克隆菌落分别接种到1ml含有抗生素（氨苄）的LB液体培养基中，37℃振 荡培养3h； 7、培养1-2小时即可以利用PCR（定量或定性）进行鉴定； 8、选取初步鉴定阳性的菌液送测序，测序正确后甘油保存（甘油的浓度为30%-50%），充 分混匀，-80℃保存；
RNA提取,RT-PCR实验报告
RNA制备及其鉴定 实验目的初步掌握组织总RNA制备的原理及其基本方法，掌握RNA纯度鉴 定的基本方法。 实验原理 细胞内的RNA通常与蛋白质结合，以核蛋白（RNP）的形式存在。分离制备RNA时，首先必须破碎细胞，使RNP释放到溶液中并与蛋白质分离，然后将RNA同其他的细胞成分分离开并保证RNA的完整性。本次实验我们选用了Trizol法分离提取小鼠肝组织的总RNA，Trizol法分离提取的RNA产率高、纯度好且不易降解。 评价RNA质量的标准是RNA的均一性和完整性。均一的RNA取决于有效的去除RNA提取物中的DNA、蛋白质和其他杂质；完整的RNA取决于最大限度地避免纯化过程中内源性及外源性RNA酶对RNA的降解。通常采用紫外分光光度法测定RNA的浓度和纯度，纯RNA的A260/A280=2.0，但由于所用的标本不同，此比值有一定的变化，一般在1.8~2.0之间，低于改值表明有蛋白污染，需进一步用酚/氯仿抽提。RNA的完整性可通过琼脂糖电泳法进行鉴定。完整的RNA电泳时，28S和18SrRNA经EB染色后，两条电泳条带的显色强度近似为2比1。 本实验中几个重要试剂的作用： Trizol试剂：Trizol的主要成分是苯酚、异硫氰酸胍、十二烷基肌氨酸钠、β-巯基乙醇、醋酸钠、柠檬酸钠。它的主要作用是1、裂解细胞，使细胞中的蛋白、核酸物质解聚得到释放。2、使蛋白质变性，有利于DNA和RNA与蛋白质的分离。3、抑制内源和外源RNase。 氯仿：氯仿的作用有多个方面，一、作为有机溶剂变性蛋白，使其沉淀并通过离心除去。二、通过变性作用抑制RNase活性；三、通过氯仿把水相里参与的苯酚抽提掉；四、作为溶剂抽提样品中的一些脂溶性杂质（比如油脂、脂溶性色素等），起到一定除杂作用。 异丙醇：异丙醇是沉淀核酸用的，作用和乙醇一样。只不过用量要比乙醇少。异丙醇是等体积，而乙醇一般需要2.5倍体积。在水相很多，离心管容积有限，加不下太多乙醇的时候一般会用异丙醇沉淀。 75%乙醇：应用无水乙醇+DEPC水制备。用乙醇洗涤沉淀，可去除所有残留的蛋白质和无机盐.RNA样品中如果含有无机盐,有可能对后续实验操作中的一些酶促反应产生抑制作用。 实验步骤按规定的操作步骤进行操作，特别注意创造一个无RNA酶的环境。实验结果 经RNA琼脂糖电泳后，紫外灯下观察RNA分离情况如下图：
斑马鱼饲养方法
斑马鱼作为一种模式生物，与人类的基因有着较高的相似性，这表明对其所做的实验结果大多情况也同样适用于人类，因此受到科学实验的重视，被广泛应用在高校以及各大科研场所。实验室中是如何进行斑马鱼饲养的呢？相信这是很多人比较好奇的一点。 为不影响实验效果，需要保障斑马鱼的健康体质，这就需要在饲养过程中注意水温水质、饵料、养殖设备以及病鱼处理等方面格外注意。 一、水温水质要求 无论是用作日常观赏，还是科研实验，斑马鱼对水质的要求都不高。一般而言，饲养水温要保持在26～28℃即可，但是水温低于这一范围，甚至达到11～15℃时，也不影响斑马鱼的正常生存。在水质方面，斑马鱼饲养的水质保持在中性即可，但若为偏软性水，斑马鱼也是比较喜欢的。当然，在斑马鱼繁殖下一代期间，水质需要用软水，软水可以提高受精和孵化率。这时选择的水族箱和养殖缸应该具有完整且独立的循环系统以提供良好的水质，可使用于淡海水养殖均，同时配有恒温设备，能够根据不同科研需要调节到适宜的水温。 二、饵料要求 其实，斑马鱼很好饲养，因为不仅对水温水质的要求不高，还不挑饵料。不论是天然饵料，还是人工配合饲料都可以满足它的生长需要，斑马鱼都会摄食。为了能够满足实验需求，一些养殖设备厂家还特别针对斑马鱼配置了相应的饵料，能够满足不同数量及成长阶段的斑马鱼饲养要求。在投喂次数上，每天投喂2-3次就能够满足斑马鱼一天的食物量需求，而繁殖期的斑马鱼需要增加一次投喂。
三、设备要求 实验室的斑马鱼饲养量比较大，所需的斑马鱼饲养设备也就比较大。市面上的斑马鱼饲养设备规格全，质优良、参数性能过关，可满足实验室饲养需求。此外，还需要注意，斑马鱼成长过程中对氧气的需求量会越来越大，饲养设备的选择也应该注意到这一点。 四、病鱼处理 斑马鱼很少生病，但在饲养过程中，难免会遇到斑马鱼生病的情况。遇到这种情况不要着急，需要先把病鱼及时捞出，进行隔离。同时对病鱼及时进行药物治疗，当然，对于治疗无效的病鱼，要及时淘汰，以防止造成大面积感染。 上海海圣生物实验设备有限公司成立于1997年，是一家从事水生物养殖设备制造的专业生产型企业，专为各高等院校、研究院所度身设计、制造水生物实验养殖系统，如中国水产科学研究生院东海水产研究所、黄海水产研究所、北京大学等。近年来，海圣在斑马鱼养殖设备研发上取得新进展，开发出二代新品，既提升了性能又降低了运行成本。海圣拥有完善的售后服务体系，保修期内免费上门维修，48小时内到达现场。定期回访及维护设备，积极听取和处理反馈意见，提供终身技术支持及配件。它不断吸收国内外先进技术，积极完善生产工艺，获得多项专利，已通过了ISO9001:2015质量管理体系认证、ISO14001:2015环境管理体系认证和ISO 45001:2018职业健康安全管理体系认证，养殖设备达FDA检测标准，无毒无害，质量有保证！
《生物实验“奇兵”---斑马鱼》说课稿(全国实验说课大赛获奖案例)
《生物实验“奇兵”---斑马鱼》说课稿 一、实验教学目标 （一）教材分析： 苏教版七年级下册 第十章第二节《人体血液循环》 第十三章第一节《保护生物圈---环境在恶化》 八年级上册 第十四章第二节《千姿百态的动物世界》 八年级下册 第二十六章第一节《远离烟酒》 培养学生实事求是的科学态度，体验科学探究的过程，增强关爱生命、保护环境的社会责任。 （二）课标分析：概述血液循环；发展科学探究能力；建立保护生物圈的意识；说明酗酒对人体健康的危害。 （三）学情分析：我校为每位生物老师配备生物学科生物实验教室，日常的生物课堂教学在生物实验教室进行，学生接触实验机会多，参与实验的积极性高，乐于探究和钻研，小组实验协作和操作能力强，不拘泥于课本实验，课后主动探索。 （四）制定目标： （一）学生发现现实中的生物学问题，针对特定的生物学现象，提出问题，做出假设，实验设计并实施方案，增强科学探究能力。 （二）《观察斑马鱼尾鳍血液流动》实验后，学生能够基于生物学事实和证据，阐述毛细血管、动脉、静脉及血管内血液流动情况，并作图，树立生命观念。 （三）学生利用结构与功能观，完成《探究鱼鳍与运动的关系》实验。了解鱼鳍在运动中的作用，提升了科学探究的能力。 （四）《探究模拟酸雨对斑马鱼生命活动的影响》，通过实验，学生学会定性定量分析实验数据，提升科学思维的能力，增强关爱生命，保护环境的社会责任。 （五）《探究酒精对斑马鱼幼鱼心率的影响》实验，培养实事求是的科学态度，树立健康的生活观、珍爱生命的意识。
（一）实验设计创新 图1一种实验材料完成课本中不同章节的多个实验 原实验中使用金鱼、植物种子、鲫鱼及水蚤，实验改进后使用斑马鱼这一种实验材料，就可以完成课本中不同章节的多个实验，做到了实验材料的循环利用，节约成本。 （二） 实验设计思路 图2 实验设计思路-思维导图
实验六 基因克隆及序列分析
实验六、基因克隆及序列分析 1.目的片段回收 取5 μl PCR产物在1.2%琼脂糖凝胶上检测，如果扩增产物大小与原来一致，在紫外灯管下用刀片切下目标带，然后用UNIQ-10 Column DNA Collection Kit 试剂盒（上海生工）进行回收。具体回收过程如下：从琼脂糖凝胶中精确切下包含有目标片段的胶块，放入到1.5 ml离心管中，加入500 μl Binding Buffer II，50℃~60℃水浴锅中放置10 min，使胶彻底熔化，然后将熔化的胶溶液转移到套放于2 ml收集管的UNIQ-10柱中，室温放置2 min，8000 r/min离心1 min，倒去收集管中的废液，在UNIQ-10柱中加入500 μl Washing Solution，室温8000 r/min离心1 min，加入新鲜的Washing Solution重复一次，倒去收集管中的废液，室温12000 r/min离心15 s。在UNIQ-10柱中加入Elution Buffer 30 μl（直接滴到过滤膜上），37℃放置2 min，放到一个新的1.5 ml离心管后离心收集（12000 r/min，1 min），所得溶液用于连接反应。 2 片段连接反应 采用pGEM? -T Easy Vector试剂盒（Promega，A1360）进行目标片段的克隆。取1.5 μl PCR产物，加入0.5 μl T4 DNA ligase，0.5μl T Easy Vector，2.5 μl ligation buffer，短暂离心收集，轻轻混匀，置于室温连接1-2 h后，放于4?C冰箱过夜。 3大肠杆菌感受态细胞的制备及转化 取保存于-70℃的大肠杆菌菌株DH5α菌液，首先在LB固体培养基上分离单克隆，然后挑一个单克隆进行液体培养过夜。从中取1.0 ml菌液转接于装有100 ml LB液体培养基的250 ml三角瓶中，于摇床培养1.5~2 h（37℃，240 r/min），后转移至预冷的50 ml离心管中，冰浴10 min，低温离心10 min（4℃，4000 r/min）收集菌体，加入25 ml预冷的0.1 mol/L CaCl2重悬培养物，冰浴20-30 min，4℃4000r/min离心10 min，去上清液，倒立晾干，再加2 ml预冷的0.1 mol/L CaCl2（含15%的甘油）重悬细胞，分装于冰浴的0.5 ml无菌离心管中，放入-70℃冰箱保存。 取2 μl连接反应物转到1.5 ml离心管中，冰上保存待用。从-70℃冰箱中取出感受态细胞置于冰上，待其刚好融化时（约5 min）小心吸取30-50 μl转入到离心管中，冰上静置20 min。42℃水浴中热激90 s（不要摇动）。迅速放回冰上2 min，然后加入LB培养基（室温）400 μl，37℃摇床培养1.5 h（150 r/min）。
目的基因的克隆转化及重组子筛选
实验报告 题目:单元二:目的基因的克隆、转化及重组子筛选 指导老师:丛佩清 日期:2013/10/24-2013/10/26 一．实验目的： (1)学习和掌握DNA片段胶回收的方法。 (2)学习DNA连接的有关技术。 (3)掌握用CaCl2 法制备感受态细胞的原理和方法。 (4)学习和掌握质粒DNA的转化和重组质粒的筛选方法。 (5)掌握质粒提取的基本方法。
(6)学习和掌握限制性内切酶的使用方法。 二．实验原理： (1)cDNA的TA克隆:Taq酶能够在PCR产物的3’末端加上一个非模板依赖的A，而T载体是一种带有 3’T突出端的载体，在连接酶作用下，通过粘性末端连接，把PCR产物插入到质粒载体的多克隆位点，称为 T-A克隆。可用于PCR产物的克隆和测序。 (2)感受态细胞制备原理：细菌处于容易吸收外源DNA的状态叫感受态,细菌处于0℃，CaCl2的低渗溶液中，细胞膨胀，细胞壁通透性增强,在冷热变化刺激下细胞膜表面产生裂隙，使外源DNA进入。 (3)蓝白斑筛选:载体带有一个LacZ基因的调控序列和头146个氨基酸的编码信息，编码α-互补肽；宿主细胞编码C端部分序列。诱导物IPTG 和乳糖的结构相似，可以与乳糖操纵元的阻遏蛋白结合，从而解除阻遏蛋白的作用，使载体得以合成α-互补肽，与宿主细胞编码的C端部分结合形成β-半乳糖苷酶，而X-Gal是β-半乳糖苷酶的显色底物，在β-半乳糖苷酶的催化下会产生蓝色产物。可用于重组克隆的筛选，重组克隆无法产生α-互补肽，因而无法使X-Gal显色，培养基上表现为白色菌落。 三．实验材料： 大肠杆菌DH5a、LB培养基、0.1mol/L CaCl2溶液、Binding Buffer、spin-column、SPW 溶液、1μl pMD19-T Vector、5μlSolution Ⅰ、250μlSolution Ⅰ、250μlSolution Ⅱ、350μlSolution Ⅲ、HiBind ? Mini Columns (I)、500 μlBuffer HB、1400 μlDNA Wash Buffer等 四．实验步骤、现象、结果及分析： Ⅰ10月24号 (1)cDNA电泳及胶回收 1. 取上周制备的置于-20℃冰箱保存的目的基因产物1、2、3组DNA样品，选取其中2号组及3号组进行琼脂糖电泳，因1号组RT-PCR琼脂糖凝胶电泳有杂带故弃而不用，1、3号组DNA样品（已加入loading buffer）分别加入SYBR Gold2μl，1%琼脂糖电泳，紫外灯下切胶。 2.把所割胶放入1.5 ml EP管，称重如下表一。 表一：cDNA琼脂糖凝胶重量 空管2管3管 重量（g）0.9045 1.2280 1.2961 净重（g）0.3235 0.3916 3.按1g/1ml 的量，大致各加入400μl Binding Buffer，65℃水浴7min；（每隔2－3 min，摇一下）； 4.把溶液转移至spin-column，10000g 离心1 min ，倒出套管内残液； 5.在柱子中加入300μl Binding buffer，10000g 离心1min，倒出套管内残液； 6.在柱子中加入700ul 的SPW 溶液，放置3min，10000g 离心1min ，去残液； 7.10000g 离心1min（去乙醇）； 8.把柱子放入干净的1.5ml EP 管。加Elution Buffer 20μl。室温放置1min，10000g 离心1min。 9.检测DNA的纯度和浓度，如下表二所示。选取质量好的2号组进行接下来的连接转化。 表二：cDNA吸光度测定 2组3组
上海海圣生物-斑马鱼养殖系统
斑马鱼是国际标准组织推荐的毒性实验的标准用鱼之一,一直被广泛的应用于环境监测领域。为了满足科研机构对斑马鱼的大量需求，需要对斑马鱼进行人工繁殖，下面一起来看一下吧。 简单来看，斑马鱼是属于比较小型的淡水鱼类，成年的个体体长一般在20-40毫米之间，其食性较复杂, 比较容易饲养和管理。即使在小容器内进行人工饲养，它们也能正常生长、繁殖，丝毫不会产生影响。目前，斑马鱼的生存情况堪忧，是一种濒临绝种的鱼类，很少有比较自然的水域能够满足它的栖息，主要原因是外来种鱼类、农药和水土保持不当，严重破坏了斑马鱼鱼的生存空间。 简单了解了斑马鱼后，我们可以再来看看它的繁殖情况。斑马鱼繁殖力强，几乎一年四季都可繁殖，每次产卵约10至20粒，产卵量依雌鱼体型大小不同，在食物充足的水域，2至3天产卵一次，仔鱼孵化约8至14日，快慢跟水温有关。体外受精，出生卵直径约0.1公分，仔鱼孵化出来约为0.3公分，一星期可达0.5公分，一个月长到1公分，约半年就成熟达3公分，大的约4公分左右，寿命约3至4年。 雄鱼发情时腹鳍会明显变黑，头顶两眼中有明显黑线，会占地盘，怀卵之雌鱼进入会立即上前交配，未怀卵雌鱼或其他雄鱼进入时会立即上前驱赶。青鳉鱼若有适当环境非常容易繁殖，不过授精卵应迅速移开到其他环境，否则会被成鱼吃掉。
上海海圣生物实验设备有限公司成立于1997年，是一家从事水生物养殖设备制造的专业生产型企业，专为各高等院校、研究院所度身设计、制造水生物实验养殖系统，如中国水产科学研究生院东海水产研究所、黄海水产研究所、北京大学等。近年来，海圣在斑马鱼养殖设备研发上取得新进展，开发出二代新品，既提升了性能又降低了运行成本。海圣拥有完善的售后服务体系，保修期内免费上门维修，48小时内到达现场。定期回访及维护设备，积极听取和处理反馈意见，提供终身技术支持及配件。它不断吸收国内外先进技术，积极完善生产工艺，获得多项专利，已通过了ISO9001:2015质量管理体系认证、ISO14001:2015环境管理体系认证和ISO 45001:2018职业健康安全管理体系认证，养殖设备达FDA检测标准，无毒无害，质量有保证！