川大学-生物技术-综合实验报告-学生版
生物技术综合实验
甘薯γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)基因的克隆和原核表达
学生：学号：
同实验者：
<研究背景>
谷胱甘肽(glutathione, GSH) GSH具有多种重要生理功能, 抗自由基和抗氧化应激作用, 保护细胞膜的完整性等。γ-GCS是植物细胞中GSH生物合成的限速酶, 可以调控GSH的生物合成量。GSH在生物体抵御冷害、干旱、重金属、真菌等胁迫过程中起着重要作用, 说明γ-GCS也与植物抗逆过程密切相关。
实验一甘薯叶片RNA提取
一、实验目的
1. 了解真核生物RNA提取的原理；
2. 掌握Trizol提取的方法和步骤。
二、实验原理
Trizol?试剂是由苯酚和硫氰酸胍配制而成的单相的快速抽提总RNA的试剂，在匀浆和裂解过程中，能在破碎细胞、降解细胞其它成分的同时保持RNA
的完整性。TRIzol的主要成分是苯酚。苯酚的主要作用是裂解细胞，使细胞中的蛋白，核酸物质解聚得到释放。苯酚虽可有效地变性蛋白质，但不能完全抑制RNA酶活性，因此TRIzol中还加入了8－羟基喹啉、异硫氰酸胍、β-巯基乙醇等来抑制内源和外源RNase（RNA酶）。%的8－羟基喹啉可以抑制RNase，与氯仿联合使用可增强抑制作用。异硫氰酸胍属于解偶剂，是一类强力的蛋白质变性剂，可溶解蛋白质并使蛋白质二级结构消失，导致细胞结构降解，核蛋白迅速与核酸分离。β-巯基乙醇的主要作用是破坏RNase蛋白质中的二硫键。在氯仿抽提、离心分离后，RNA处于水相中，将水相转管后用异丙醇沉淀RNA。用这种方法得到的总 RNA中蛋白质和DNA污染很少。
1.材料
甘薯（Ipomoea batatas Lam）叶片，品种为徐薯18
2. 试剂
① 无RNA酶灭菌水：加入%的DEPC，处理过夜后高压灭菌；
② Trizol试剂；
③ 氯仿；
④ 异丙醇、75％乙醇；
⑤ TBE缓冲液；
⑥ 上样缓冲液（6×）
3. 仪器
高压灭菌锅、微量移液器、台式离心机、超净工作台、电泳仪、电泳槽、凝胶成像系统、塑料离心管、枪头和EP管架
四、实验方法
1. 将叶片取出放入研钵中，加入适量液氮，迅速研磨成粉末，每50-100 mg植物叶片加入1 mL Trizol试剂，室温放置5 min，使样品充分裂解；
2. 每1 mL Trizol试剂加入200 μL氯仿，用手剧烈振荡混匀后室温放置3-5 min 使其自然分相；
3. 4℃ 12,000 rpm 离心15 min，吸取上层水相转移到新管中；在上清中加入等体积冰冷的异丙醇，室温放置15 min；
4. 4℃ 12,000 rpm 离心10 min，弃上清，RNA沉淀于管底；
5. RNA沉淀中加入1 mL 75%的乙醇（用RNase-free水配制），温和震荡离心管，悬浮沉淀；4℃ 8,000 rpm离心2 min，弃上清；
6. 室温放置10 min晾干沉淀；
7. 沉淀中加入20μL RNase-free ddH2O，轻弹管壁，以充分溶解RNA，-70℃保存；
8. 用1%的琼脂糖凝胶电泳进行检测，用EB染色并照相。
1.RNA提取结果
依照Trizol?试剂盒方法，提出的RNA较少，此部分未以图或数据显示。
2. RNA后电泳结果
如图1. 其中9a为本组实验结果。由图可知RNA条带非常模糊，拖尾现象严重，几乎无法分清具体条带，亮度较大。点样孔附近的红色部分为杂质，在提取过程中并未很好除去。
图1. RNA提取跑胶结果。其中1泳道为样品Marker，9a泳道为本小组RNA样品。与标准对照可见条带模糊，拖尾现象严重。
六、分析与讨论
1. RNA的提取
产量并不多，可能是因裂解样品不充分或RNA沉淀未完全溶解所致。在实验过程中，由于对操作时间的掌握不熟练、操作技巧不完善，留上清与弃上清时令RNA损失了部分，使最终RNA产量不理想。
2. RNA电泳结果
有EB存在时，电泳后28S rRNA和18S rRNA在紫外灯下应看得很清楚，另
出现条由tRNA， rRNA和5S rRNA组成的较模糊、迁移较快的带。如果RNA没有降解，则28S rRNA的亮度应为18S rRNA的2倍，且这两条带都无弥散现象发生。由图1. 9a可知，RNA拖尾现象严重，说明RNA已大部分被降解；此外点样孔附近出现红色部分杂质，分析可能有并未除尽的蛋白质，同样影响RNA电泳结果。
在进行实验时，本小组成员未严格戴上口罩并勤换手套，这可能使外源RNAase进入样品，导致其降解严重。另外，提取出RNA后本小组未立即将样品放入-70℃保存，也为导致结果不理想的重要原因之一。在最初用氯仿萃取分层的过程中，由于水相吸取过多，掺杂入部分蛋白质杂质而未于后续纯化步骤除尽，RNA条带拖尾严重可能还受该蛋白质影响。
七、总结：
本次试验RNA提取非常失败，从跑胶结果可见其降解严重。虽然大实验无法避免试剂交叉污染的可能性，且电泳用胶的质量也会影响实验结果，但从图1. 2a，3a，2b等条带较为清晰的小组实验结果可知，琼脂糖凝胶质量以及试剂对结果干扰不大。那么本小组成员在提取过程中的操作一定出现了很大失误。首先口罩、手套应该严格按规定佩戴，提取过程对移液枪等仪器使用需谨慎仔细，尽量避免混入杂质。其次为排除部分杂质影响可对RNA样品用紫外线分光光度计测定吸光值检验，将有助于结果分析。最后，细节决定成败，我们应汲取教训避免接下来的实验出现类似问题。
实验二第1链cDNA的合成和模板的验证
一、实验目的
1.掌握第1链cDNA的合成方法和步骤
二、实验原理
真核生物基因多为断裂基因，编码区不连续，需经转录后加工才能成为成熟mRNA。以真核成熟mRNA为模板合成cDNA，进而获得有连续氨基酸编码的DNA序列，无需转录后加工，即可在原核细胞中表达。
真核生物的mRNA都有PolyA尾巴。引物：Oligo dT（12-18个T）。莫洛尼
氏鼠白血病毒逆转录酶（M-MLV ）以单链RNA为模板，在引物的引发下合成与模板互补的DNA链（cDNA）。
mRNA 反转录生成的cDNA可作为PCR的模板进行扩增称为RT-PCR，RT-PCR 比Northern杂交更灵敏，对RNA的质量要求较低，操作简便，它是在转录水平上检测基因时空表达的常用方法。
三、实验材料
1. 材料
徐薯18叶片RNA样品
2. 试剂
① dNTP mixture（10 mM each）；
② Oligo (dT) Primer (10 μM)；
③ Total RNA；
④ RNase free ddH2O；
⑤ M-MLV 反转录酶；
⑥ 5×F irst-strand Buffer；
⑦ M DTT；
⑧ Ribonuclease Inhibitor (40 U/μL)
3. 仪器
10μL 和100μL 的移液枪、的EP管、PCR仪等
四、实验方法
1. 在RNase free Microtube 管中配制下列混合液：
dNTP mixture（10 mM each） 1 μL
*Oligo (dT) Primer (10 μM) 4 μL
Total RNA 2 μL
RNase free ddH
O up to 12 μL
2
2.将混合物65 °C加热5 min，迅速在冰上冷却2 min，快速离心，然后加入下列成分：
5×First-strand Buffer 4 μL
M DTT 2 μL
Ribonuclease Inhibitor (40 U/μL) 1 μL
3. 将混合物轻轻混匀，37℃温浴2 min；
4. 加入M-MLV反转录酶（200U/μL）1 μL，用枪头轻轻吹打混匀；
5. 37℃温浴50 min；
6. 70 ℃加热15 min，使反转录酶失活，所得反转录产物可直接用于PCR反应。附反转录模板的看家基因的验证（β-actin）
引物
以第一链cDNA为模板，β-actin-F和β-actin-R为引物，使用Taq酶进行PCR。
表1 β-actin PCR 反应体系（25μL体系）
DNA模板1μL(约50 ng)
10×PCR缓冲液(Mg2+ plus)μL
Mg2+μL
10 mol/L TPS -F 1 μL
10 mol/L TPS -R1μL
mmol/L dNTPμL
Taq 酶μL
灭菌去离子水μL
合计25 μL
* PCR反应条件94℃ 2min
95℃ 30sec
62℃ 30sec
68℃30sec
最后，1%琼脂糖凝胶上电泳检测扩增产物。
五、实验结果
1.β-actin验证
如图1. 其中编号1为Marker，3为本小组RNA样品β-actin验证结果。由图可知，使用RNA模板通过RT-PCR得到了长度为198bp类似条带，但因产物浓度较低，该条带不甚清晰，并有部分弥散现象发生。
图1. β-actin验证电泳结果。其中编号1为Marker，编号3为本小组RNA样品经RT-PCR 在加入引物IbActinF 、IbActinR后扩增出的β-actin产物。
六、分析与讨论
1. RNA提取
因实验一本小组RNA提取失败，故此实验采用老师准备的RNA进行验证。2.β-actin验证结果
如图1. 第3组为本小组验证结果。其中β-actin能被cDNA模板扩增出，但条带模糊并有拖尾现象出现。首先，因所得产物量较少，故电泳条带模糊，推测可能是在进行RT-PCR前，RNA有部分降解或于操作过程中损失部分所致。其次，本实验在对β-actin产物进行电泳后结果出现拖带，可能原因主要有：1）30个循环
cDNA第一链产物的含量过高；2）DNase降解DNA产生的寡核苷酸有非特异性扩增；3）PCR反应中引物过多；4）循环次数过多；5）退火温度过低；6）Taq酶过多；7）Mg2+浓度不合适。综合本次试验分析，因实验条件已预先经过尝试，故导致拖带的最可能因素应为cDNA降解产生了寡核苷酸非特异性扩增片段。由于照片清晰度欠佳，非特异性扩增片段无法清晰显示，但若与图2. 进行对比则可发现第2组β-actin验证图出现了非特异性扩增片段。
图2. 第2组β-actin验证图。其中1为Marker，编号2、6可见清晰的两条带。
若要进行改进，则需尽量提取高质量RNA，防止其被DNA污染。另外进一步优化PCR反应条件也是必不可少的环节，提高退火温度可防止非特异性起始与延伸。
七、总结
本次实验虽只进行了模板验证，但让我们理解了RT-PCR的原理与其在真核生物基因克隆方面的运用。
整个过程中本小组成员较严格按照操作规范进行，所得β-actin产物验证也较成功。今后实验需更加注意细节，不断完善自己的操作技巧，积累经验。
实验三甘薯γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)基因克隆
一、实验目的
1. 掌握PCR的方法和步骤。
二、实验原理
聚合酶链反应(PCR)是80年代中期发展起来的体外核酸扩增技术。它具有特异、敏感、产率高、快速、简便、重复性好、易自动化等突出优点；目的基因或
某一DNA片段于数小时内扩增至十万乃至百万倍。其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成：
①模板DNA的变性：模板DNA经加热至一定温度后，使模板DNA双链解离，成为单链，与引物结合，为以下的反应作准备；
②模板DNA与引物的退火(复性)：模板DNA经加热变性成单链后，温度降至55℃左右，引物与模板DNA单链的互补序列配对结合。
③引物的延伸：DNA模板--引物结合物在TaqDNA聚合酶的作用下，以dNTP为反应原料，靶序列为模板，按碱基配对与半保留复制原理，合成一条新的与模板DNA 链互补的半保留复制链。
重复循环变性--退火--延伸三过程，就可获得更多的“半保留复制链”，而且这种新链又可成为下次循环的模板。每完成一个循环需 2-4分钟，2-3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。
三、实验材料
1.材料
反转录产物DNA样品
2. 试剂
① dNTP mixture（10 mM each）；
② 第一cDNA ；
③ β-actin的引物（IbActinF和IbActinR ）；
④ γ-GCS的引物（γ-GCS-F 和γ-GCS-R ）；
⑤ 10×PCR缓冲液(Mg2+ plus) ；
⑥ Taq酶；
3. 仪器
PCR仪、μL、10μL 和100μL 的移液枪、的EP管、电泳仪。
四、实验方法
1. 扩增甘薯γ-GCS基因的引物
2. 甘薯γ-GCS 基因的PCR 扩增
甘薯γ-GCS 基因的PCR 扩增体系（表2）（25μL 体系）
以第一链cDNA 为模板， F 和R 为引物，使用Taq 酶高保真酶进行PCR ；
表2 γ-GCS PCR 反应体系 DNA 模板
1μL(约50 ng)
10×PCR 缓冲液(Mg 2+ plus)
μL Mg 2+
μL 10 mol/L γ-GCS -F 1 μL 10 mol/L γ-GCS -R
1μL mmol/L dNTP
μL Taq 酶 μL 灭菌去离子水
14 μL 合计
25 μL
. PCR 反应条件 94℃4min 94℃ 40sec
65℃ 30sec
35个循环 72℃ 2min
1%琼脂糖凝胶上电泳检测扩增产物，并进行胶回收纯化；
3. 甘薯γ-GCS 基因PCR 产物胶回收——按照胶回收试剂盒的说明书进行： 1）将PCR 产物在1%琼脂糖凝胶中电泳，5V/cm 电泳1 h 后，溴乙锭（或者Goldview ）染色，在紫外灯下切下2500 bp 左右大小片段的凝胶；
2）称凝胶重量，按1 g/mL体系加Binding buffer，在55°C水浴中孵5 min，直到凝胶完全溶解；
3）将凝胶溶液到DNA spin-column中，室温放置 2min，1,2000 rpm离心1 min，弃废液；
4）用700 μL washing buffer洗涤柱子，1,2000 rpm离心1 min；
5）弃废液后再1,2000 rpm离心2min，以除去残存的washing buffer；
6）把column放到另一干净的 mL离心管，加50μL elution buffer，室温放置2 min后，1,2000 rpm离心1 min以洗脱DNA；
4. pET-32a质粒的Bam HI和XHO I双酶切
酶切体系（10μL体系）：
buffer (Bam HI) 1 μL
Bam HI μL
Xho I μL
质粒μL
酶切反应：37℃水浴中孵化1h；
5.甘薯γ-GCS合成酶基因胶回收产物的Bam HI和XHO I双酶切
酶切体系（10μL体系）：
buffer (Bam HI) 1 μL
Bam HI μL
Xho I μL
PCR胶回收产物μL
酶切反应：37℃水浴中孵化 1h。
五、实验结果
1.甘薯γ-GCS基因PCR电泳图
如图1. 其中1为Marker（最大片段2kb），4a为本小组甘薯γ-GCS基因PCR扩增产物。由图可知该组各条带均较明亮清晰，模板经引物R、F扩增后得大小在1575bp左右的目标产物，即约，跟Marker对比并进行了标注（图1. 红色框）。另图中除标注部分以外还出现多余条带，但因后续实验采取割胶回收方
式获得γ-GCS基因片段，故其余片段不会对实验结果造成影响。
γ-GCS基因左右右
图1. 甘薯γ-GCS基因PCR电泳图。其中编号1为Marker，4a为本小组γ-GCS基因电泳结果。红框已圈出γ-GCS所在条带位置，大小在左右。
六、分析与讨论
1. 甘薯γ-GCS基因PCR电泳结果
由图1. 4a可知，本次甘薯γ-GCS基因PCR较为成功。该产物条带比较明亮，边缘整齐，但除目的条带外仍扩增出了不少多余条带，说明DNA模板存在小部分降解。实验过程中应尽量避免DNAase污染以及机械剪切力损伤样品，而操作时更应注意加样时间，经分析电泳结果出现非目的基因小片段可能是加样时间过长引起的。
另外，本实验在电泳时还可设计阴性对照（灭菌去离子水、缓冲液），以使结果更加完善。
2. 胶回收与双酶切
由于严格按照实验步骤进行，胶回收与双酶切均完成较好。此处未以数据、图片表示。
七、总结
本次实验包括PCR γ-GCS基因片段（目的基因）并作电泳检测、胶回收纯化目的基因以及Bam HI、Xho I双酶切质粒与目的基因三个步骤。由实验结果可知目的基因扩增较为成功，虽有多余杂质出现但条带仍然清晰、整齐。胶回收时，溶液放置2min是为使buffer与产物溶液混合均匀并稳定以减少杂质影响，最后双酶切的孵化时间与温度是关键，故于操作过程中我们应注重细节，多体会才能理解、掌握成功要领。
实验四原核表达质粒构建
一、实验目的
1. 掌握连接和转化步骤。
二、实验原理
DNA体外连接即在一定条件下，由DNA连接酶催化两个双链DNA片段相邻5’端磷酸、3’端羟基间形成磷酸二酯键的过程，DNA分子的连接是在酶切反应获得同种酶互补序列基础上进行的。连接反应成功与否，最后的检测要转化宿主菌、阳性克隆的筛选来确定。质粒转化不同细菌有不同的转化效率，转化效率的高低与实验的成败直接相关，通常转化效率可达105-107转化子/μg DNA，获得高转化效率的关键是感受态细菌的制备。
体外通过基因工程手段所构建含目的基因的重组质粒，通过转化和筛选技术，可获得含重组子的阳性克隆。在此阳性克隆中，DNA可在生物体系内大量扩增、繁殖、保存及表达目的基因产物，这是PCR体外扩增DNA所不能替代的。配合DNA重组技术所获得的阳性菌株已广泛应用于科研，医药生产和生物发酵等领域。
三、实验材料
1.材料
甘薯γ-GCS基因酶切片段、载体片段
2. 试剂
① 10×T4 DNA ligase buffer；
② T4 DNA ligase；
③ ddH2O；
④ SOC培养液；
⑤ buffer BamHI；
⑥ DMSO；
⑦ TFB溶液(100 mmol/L KCl, 45 mmol/L MnCl
2，10 mmol/L CaCl
2
,10 mmol/L
K-MES ；
⑧β-巯基乙醇；
3.仪器：
10μL 和200μL 移液枪、的EP管、离心机、培养皿、电泳仪、37 ℃培养箱、4 ℃冷藏室
四、实验方法
1. 甘薯γ-GCS基因酶切产物与pET-32a酶切产物的连接
连接体系（10μL体系）：
10×T4 DNA ligase buffer 1μL
载体片段4μL
PCR酶切片段3μL
T4 DNA ligase μL
ddH2O μL
连接条件：16℃连接过夜；
2. 大肠杆菌感受态细胞的制备
1）接种JM109于2 mL SOB培养基中，37℃振荡培养过夜；
2）取 mL菌液转种于50 mL SOB培养基中，37℃振荡培养 h (OD
550
值约为后，
冰浴10 min，4, 000 r/min离心5 min，弃上清液；
，10 mmol/L 3）加入17mL预冷的TFB溶液(100 mmol/L KCl, 45 mmol/L MnCl
2 ,10 mmol/L K-MES 洗涤菌体1次，离心收集菌体；
CaCl
2
4）加入4 mL TFB制成悬液，冰浴10 min，加入140μL二甲基亚砜(DMSO)，冰浴上轻轻转动10 min，加入140 μL β-巯基乙醇，于冰浴上轻轻转动10 min，再加入140 μL DMSO，轻轻混匀后在冰浴上静置5 min，即得感受态细胞；
3. 连接产物的转化
1）在预冷的EP管中加入1-10 μL质粒DNA，加入200 μL上述感受态细胞，混匀后在冰浴上静置30 min；
2）42℃水浴热冲击30 s，冰浴上放置10 min，加入 mL SOC培养液。置于37 ℃振荡培养1 h；
3）取 mL涂布于加有抗生素的LB培养基平板上，37 ℃培养过夜。若转化子很少，特别是连接DNA的转化，可将转化细胞离心3 min (4,000 r/min)，弃上清液，把所有的菌体涂布在含相应抗生素的平板上；
4）正放于37℃培养箱内约1h使接种物完全被吸收，然后将平板倒置于37℃培养箱中培养，12～16h后，将平板移入4℃(冰箱冷藏室)放置数小时；
4. 质粒的小量提取：采用试剂盒（ Plasmid Mini Kit I）方法进行提取
实验前准备：
1）使用前，将RNase A全部加入Solution I中并于4度保存；
2）按下表用无水乙醇稀释DNA Wash Buffer，并于室温保存；
D6942-00, 3：加入ml无水乙醇
D6942-01,D6943-01：加入80ml无水乙醇
D6842-02,D6943-02：每瓶中加入80ml无水乙醇
离心操作方案：
1）将带有质粒的接种于5ml LB/抗生素培养液中，37°C摇床培养12~16 h；2）取~的菌液，室温下10,000xg离心1min收集细菌；
3）倒弃培养基。加入250ul Solution I/RNaseA混和液，漩涡振荡使细胞完全悬浮；
4）往重悬混和液中加入250ul Solution II，轻轻颠倒混匀4-6 次。此操作避免
剧烈混匀裂解液且裂解反应不要超过5 min；
5）加入350ul Solution III，温和颠倒数次至形成白色絮状沉淀；
6）室温下，≥10, 000xg离心10min；
7）转移上清液至套有2ml收集管的HiBind DNA结合柱中，室温下10,000xg离心1 min，倒去收集管中的滤液；
8）把柱子重新装回收集管，加入500ul HB Buffer，按上述条件离心，弃去滤液；9）把柱子重新装回收集管，加入700ul DNA Wash Buffer，按上述条件离心，弃去滤液。注浓缩的DNA Wash Buffer在使用之前必须按标签的提示用无水乙醇稀释；
10）弃去滤液，重复第9步骤一次；
11）弃去滤液，把柱子重新装回收集管， 10,000xg离心空柱2min以甩干柱子基质。注不要忽略此步――这对去除柱子中残留的乙醇至关重要；
12）把柱子装在干净的离心管上，加入30-50ul Elution Buffer(10mM Tris-HCl, 或无菌水到柱子基质中，静置1- 2min，10,000xg离心1min洗脱出DNA；
5. 重组子的PCR鉴定。
五、实验结果：
1.重组质粒粗提检测
如图1. 粗提后均出现了大小不同的质粒，较小者应为pET-32a质粒载体以及原有质粒，较大者为重组质粒，而重组阳性质粒则需后续实验鉴定。其中4a 为本小组提取结果，由于拍照条件不佳，最大条带较模糊（图中红色方框圈出），但仍能辨别出3条带。原有质粒与pET-32a质粒空载体条带最亮，而成功转化的重组质粒条带相对暗淡，很难分辨清楚。
图1. 重组质粒粗提电泳检测图。其中4a为本小组样品条带，红框圈出部分为重组质粒，量较少。
2.重组质粒PCR检测
如图2. 所示，2b即本小组实验条带，9为Marker条带（同实验三）。以大质粒为模板，γ-GCS -F、R为引物进行PCR，得左右条带十分清晰，已由图中标出。
图2. 重组质粒PCR电泳检测图。其中9为Marker条带，2b由红箭头所指为本小组重组质粒PCR条带，大小在左右。
六、分析与讨论
1. 重组质粒粗提电泳结果
如图1. 可大致观察到重组质粒的形成，但由于产量较少，重组质粒的转化率不好，分析可能是在进行目的基因与载体连接时成功率较低所致。另因图中无Marker显示，对重组质粒的条带确认增加了难度，单一完整pET-32a质粒与E. Coli受体菌自身已携带质粒的电泳条带可起辅助分析作用，以使电泳结果更完整。
2. 重组质粒PCR电泳结果
图2. 2b条带较为清晰整齐，说明有阳性重组质粒形成，转化成功。但条带稍有拖尾现象产生，分析可能是由PCR过程中升温所导致的质粒不规则变性、断裂而引起，并形成了些大小不一的片段，电泳时呈弥散状分布于主条带后，分子量较大。
七、总结
本次试验过程中，因酶切鉴定结果不理想而改用PCR鉴定。对质粒进行提取时的机械力损伤、PCR升温步骤均可导致质粒片段受损，这些失误在操作或实验设计方面都需尽量避免，虽然重组质粒量较少但其能成功转化受体菌，这也为随后IPTG诱导目的基因表达γ-GCS产物打下了一定基础。多做、多思考、多总结，才能于每个环节中学习到更多知识。
实验五甘薯γ-GCS基因的原核表达
一、实验目的
1. 使用IPTG诱导外源基因表达，了解筛选原理；
2. 掌握SDS-PAGE检测表达蛋白质的原理与方法。
二、实验原理
1. 表达系统
是重要的原核表达体系。在重组基因转化入菌株以后，通过温度的控制，诱导其在宿主菌内表达目的蛋白质，将表达样品进行SDS-PAGE 以检测表达蛋白质。本实验采用异丙基硫代-β-D-半乳糖昔（IPTG）诱导外源基因表达。
lacI是大肠杆菌中lac 操纵子（Operon）的调节基因，它所表达的阻遏蛋白是lac 操纵基因（Operator）的抑制因子，抑制转录启动。当有乳糖存在时，这种阻遏蛋白能与过量的乳糖结合而失去对操纵基因的抑制，使lac 操纵子上的结构基因lacZ（β-半乳糖苷酶)、lacY（透性酶)、lacA(乙酰基转移酶）得以正常表达，启动转录。IPTG（异丙基-β-D-1-硫代半乳糖苷) 作为乳糖的类似物与lacI阻遏蛋白结合而使操纵基因不被抑制，因此IPTG经常作为lac操纵子的诱导剂运用于筛选。
2. SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）
使用含有十二烷基硫酸钠（ SDS）和还原剂（通常为巯基乙醇）的样品处理液对蛋白质样品进行处理（一般煮沸3-5分钟），通过加热和SDS可以使蛋白质变性，多亚基的蛋白质也将解离为单亚基。
SDS是变性剂，它能破裂蛋白质分子中的氢键和疏水作用。巯基乙醇打开二硫键以使蛋白质分子处于伸展状态。蛋白质在电场中的迁移率取决于它所带的净电荷以及分子大小和形状等因素。加入SDS（十二烷基磺酸钠）和少量巯基乙醇，则蛋白质分子的迁移率主要取决于它的分子量，而与原来所带电荷、分子形状无关。电泳过程中分子迁移的规律为：小分子走在前头，大分子滞后。电泳凝胶相当于凝胶过滤中的一个带孔胶粒。
四、实验材料
1.材料
已得甘薯γ-GCS基因阳性重组子
2. 试剂
诱导表达
① LB培养基；
② SOC培养液；
③ 50 μg/mL Amp；
④ IPTG；
SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳
① 30%丙烯酰胺凝胶贮液：丙烯酰胺30 g， N, N-亚甲双丙烯酰胺 g；
② 4×Tris·Cl/SDS pH ： g Tris碱溶解于40 mL水中，用1 mol/L的盐酸调pH为后，定容到100 mL，再加 g SDS；
③ 4×Tris·Cl/SDS pH ： g Tris碱溶解于40 mL水中，用1 mol/L的盐酸调pH为后，定容到100 mL，再加 g SDS；
④ 样品缓冲液：1 mL 4×Tris·Cl/SDS(pH ，1 g SDS，2 mL β-巯基乙醇，1 mL %溴酚兰，5 mL 甘油，加蒸馏水定容到50 mL；
⑤ 电极缓冲液： g Tris碱， g甘氨酸， g SDS；
⑥ 固定液：50%甲醇，10%冰醋酸；
⑦染色液：%(w/v)考马斯亮蓝R-250，50%甲醇，10%冰醋酸；
⑧脱色液：7%冰醋酸，5%甲醇；
⑨ SDS-PAGE Loading Buffer；
3、仪器
电泳仪、染液缸
五、实验方法
1.E. coli BL21 (DE3) 感受态的制备；
2.重组子转化BL21；
3.原核表达
1）挑取上述方法得到的单菌落于2 mL LB液体培养基(氨苄青霉素50 μg/mL)中。同时，BL21作为对照（不加抗生素）。于37℃培养至OD600为；
生物化学实验报告
一、实验目的： 1、熟悉工作曲线的制作方法及注意事项； 2、掌握3, 5-二硝基水杨酸（DNS）比色定糖的原理和方法； 3、掌握Folin-酚法测定蛋白质含量的原理和方法； 4、掌握酶蛋白分离提纯的原理； 5、掌握酶的比活力测定及其计算方法； 6、掌握酶促反应动力学中用双倒数法测定Km的方法； 7、运用正交试验法确定温度、pH值、离子浓度的最适条件。 称量技术： 1、了解电子天平的用途 2、了解电子天平的工作原理 3、掌握电子天平的使用方法 4、掌握电子天平使用前后的注意事项 离心技术： 1、了解离心机的基本原理和用途 2、了解离心机的类型和用途 3、了解离心机的型号和控制版面 4、掌握离心机的使用方法 5、掌握离心机使用的注意事项 层析技术： 1、了解层析技术的基本原理 2、了解层析技术的分类情况 3、了解各种层析技术的原理 4、掌握凝胶层析技术 光谱分析技术： 1、学习掌握紫外可见、荧光、红外光谱分析技术原理 2、了解仪器结构和分类 3、熟练掌握常用仪器的使用方法和注意事项 电泳技术： 1、了解电泳的基本原理 2、了解电泳的类型
3、学习SDS-PAGE测定蛋白质分子量的原理 4、掌握垂直板电泳的操作技术 5、掌握琼脂糖凝胶电泳的操作技术 6、了解转移电泳的基本原理和操作方法 7、了解双向电泳的基本原理和操作方法 二、实验原理： 1、蔗糖酶的提取： ①酵母菌的基本特征： 单细胞，椭圆形、圆形或柱形。长5-30μm，宽1-5μm。 ②生物材料破碎方法： （1）机械（匀浆）法 ①研钵 ②玻璃或Teflon研棒匀浆器（50mL）Teflon：聚四氟乙烯 先将剪碎的组织置于管中，再套入研杆来回研磨，上下移动，即可将细胞研碎，此法细胞破碎程度比高速组织捣碎机高，适用于少量组织和脏器。 ③高速组织捣碎机（0.5-1L） 将材料配成稀糊状液，放置于筒内约1/3 体积，盖紧筒盖，将调速器先拨至最慢处，开动开关后，逐步加速至所需速度。此法适用于动物内脏组织、植物肉质种子等。 ④高压匀质机（XL） 高压下的细胞通过阀门流出时，细胞内外压力同时降低，但由于细胞膜的作用，胞外压力瞬间降至常压，而胞内压力相比之下降低较慢，从而在细胞内外形成压力差，使细胞膜破裂。 优点：快速，产热小，对蛋白损伤小，破碎效率高。一次破碎效率可达90%以上 （2）超声波处理法 用一定功率的超声波处理细胞悬液，使细胞急剧震荡破裂，此法多适用于微生物材料，常在30 至60Hz 频率下处理10-15 分钟，此法的缺点是在处理过程会产生大量的热，应采取相应降温措施。（3）反复冻融法 将细胞在-20度以下冰冻，室温融解，反复几次，由于细胞内的水形成冰粒而剩余的细胞液中盐浓度增高引起溶胀，使细胞结构破碎。设备简单、效率不高，时间长，注意蛋白酶！ （4）化学处理法 有些动物细胞可采用十二烷基磺酸钠(SDS)、去氧胆酸钠等细胞膜破坏。
高一生物实验报告大全
高一生物实验报告大全 实验一观察DNA和RNA在细胞中的分布 实验原理：DNA 绿色，RNA 红色 分布：真核生物DNA主要分布在细胞核中，线粒体和叶绿体内也含有少量的DNA;RNA主要分布在细胞质中。 实验结果：细胞核呈绿色，细胞质呈红色。 实验二物质鉴定 还原糖+ 斐林试剂砖红色沉淀 脂肪+ 苏丹III 橘黄色 脂肪+ 苏丹IV红色 蛋白质+ 双缩脲试剂紫色反应 1、还原糖的检测 (1)材料的选取：还原糖含量高，白色或近于白色，如苹果，梨，白萝卜。 (2)试剂：斐林试剂(甲液：0.1g/mL的NaOH溶液，乙液：0.05g/mL的CuSO4溶液)，现配现用。 (3)步骤：取样液2mL于试管中→加入刚配的斐林试剂1mL(斐林试剂甲液和乙液等量混合均匀后再加入)→水浴加热2min左右→观察颜色变化(白色→浅蓝色→砖红色) ★模拟尿糖的检测 1、取样：正常人的尿液和糖尿病患者的尿液 2、检测方法：斐林试剂(水浴加热)或班氏试剂或尿糖试纸 3、结果：(用斐林试剂检测)试管内发生出现砖红色沉淀的是糖尿病患者的尿液，未出现砖红色沉淀的是正常人的尿液。 4、分析：因为糖尿病患者的尿液中含有还原糖，与斐林试剂发生反应产生砖
红色沉淀，而正常人尿液中无还原糖，所以没有发生反应。 2、脂肪的检测 (1)材料的选取：含脂肪量越高的组织越好，如花生的子叶。 (2)步骤：制作切片(切片越薄越好)将最薄的花生切片放在载玻片中央 染色(滴苏丹Ⅲ染液2～3滴切片上→2～3min后吸去染液→滴体积分数50%的酒精洗去浮色→吸去多余的酒精) 制作装片(滴1～2滴清水于材料切片上→盖上盖玻片) 镜检鉴定(显微镜对光→低倍镜观察→高倍镜观察染成橘黄色的脂肪颗粒) 3、蛋白质的检测 (1)试剂：双缩脲试剂(A液：0.1g/mL的NaOH溶液，B液：0.01g/mL的CuSO4溶液) (2)步骤：试管中加样液2mL→加双缩脲试剂A液1mL，摇匀→加双缩尿试剂B液4滴，摇匀→观察颜色变化(紫色) 考点提示： (1)常见还原性糖与非还原性糖有哪些? 葡萄糖、果糖、麦芽糖都是还原性糖;淀粉、蔗糖、纤维素都是非还原性糖。 (2)还原性糖植物组织取材条件? 含糖量较高、颜色为白色或近于白色，如：苹果、梨、白色甘蓝叶、白萝卜等。 (3)研磨中为何要加石英砂?不加石英砂对实验有何影响? 加石英砂是为了使研磨更充分。不加石英砂会使组织样液中还原性糖减少，使鉴定时溶液颜色变化不明显。 (4)斐林试剂甲、乙两液的使用方法?混合的目的?为何要现混现用? 混合后使用;产生氢氧化铜;氢氧化铜不稳定。
生物社会实践报告
生物社会实践报告 实践者：宋继达 所属学校：武汉理工大学 专业班级：生物技术0901班 实践单位：广东省惠州市惠东县平海镇港口国家级海龟自然保护区 实践日期：XX年7月21日——XX年7月27日 实践时间：7天 实践原因：保护区位于家乡港口，地理位置适宜；海龟是港口所特有的海洋动物，身为港口人对之有着特殊的情感；个人的成长经历及兴趣爱好涉及海洋生物和海洋生态方面。 实践目的：增进对海龟保育工作的认识，增强爱护海洋生态环境的观念，加强学习和动手能力，增加社会实践的经验以及完成这次暑期社会实践的作业。 实践内容：到海龟保护区的海龟馆里体验海龟管理员的日常工作：给海龟投喂食物，清洗海龟池，维护海龟馆的清洁卫生，维持游客在海龟馆里的参观秩序，劝阻游客一些不文明的、对海龟有伤害性的不良行为，以及协助海龟管理员完成其他一些工作。 实践结果：虽然此次社会实践为期只有7天，其深入程度也仅仅是体验保护区内海龟管理员工作生活的浅层水平，但
这一个星期的实践的确让我了解了不少关于海龟生活习性和保育方面的知识，以及保护区在建设发展方面面临的问题和艰辛。感谢他们为我提供的实践机会，让我拓展了知识和视野，对海龟这一海洋爬行动物以及海洋生态保育有了更深一步的了解，为以后的学习与就业留下难得的经验与启发。 体会总结：生态环境和物种是这个地球上一旦失去后就难以复得的宝贵财富。港口人民一直以来与海龟为邻，见证了从发现海龟湾、盗挖海龟蛋、捕杀海龟到共同携手保护海龟，与海龟和谐共处的百年历史。作为一个从小认识海龟的港口人，中国大陆乃至亚洲大陆漫长海岸线上唯一的海龟产床的独特之处让我既自豪又担忧。全球的海龟数量在下降，而港口海龟自然保护区近年海龟上岸产卵的情况不容乐观，我国海域的海龟生境和数量形势严峻。海龟保护需要不断努力下去，希望有更多有志于这方面的年轻人投身于这方面，同时向正在为海龟保护付出努力的工作者致敬！ 导语：广东省惠东县港口国家级海龟自然保护区是今天中国大陆18000公里海岸线上最后的一个海龟产床，也是亚洲大陆唯一的海龟自然保护区。1985年6月，广东省渔业行政主管部门批准成立海龟自然保护区。1986年12月，广东省人民政府批准海龟自然保护区晋升为省级保护区。1992年10月经国务院批准晋升为国家级自然保护区，主要保护对象为以国际濒危、国家二级保护动物海龟，及其产卵繁殖栖息
浙江大学生物化学丙实验报告1
实验报告 课程名称： 生物化学实验（丙） 指导老师： 方祥年 成绩：__________________ 实验名称： 蔗糖酶的提取 同组学生姓名： 金宇尊、鲍其琛 一、实验目的和要求（必填） 二、实验内容和原理（必填） 三、实验材料与试剂（必填） 四、实验器材与仪器（必填） 五、操作方法和实验步骤（必填） 六、实验数据记录和处理 七、实验结果与分析（必填） 八、讨论、心得 一、实验目的和要求 1、学习掌握蔗糖酶的提取、分离纯化的基本原理和方法； 2、巩固理论知识，学会学以致用并发现新问题。 二、实验内容和原理 1、实验内容： 蔗糖酶的提取、分离纯化 2、实验原理： ①酵母细胞破碎 细胞破碎的常用方法 液体剪切法固体剪切法压力和研磨 物理法、化学渗透法、酶溶 本实验采用研磨的方法。通过固体剪切法（研磨）将酵母细胞破碎，把蔗糖酶从酵母细胞中提取出来。 ②蔗糖酶的初步分离纯化 蛋白酶常用的初步分离纯化方法有：盐析、选择性变性、有机溶剂沉淀等。 本实验采用选择性变性（加热）、有机溶剂（乙醇）沉淀等方法对蔗糖酶进行初步的提纯以及收集样品。 由于一般酶蛋白在常温下分离纯化过程中易变性失活，为了能获得尽可能高的产率和纯度，在提纯 操作中要始终保持酶的活性，如在低温下操作等，这样才能得到较好地分离提纯效果。 三、实验材料与试剂
1、实验材料 市售干酵母粉10g/组(3～4人） 2、实验试剂 石英砂，95%乙醇(-20℃），20mmol/L Tris-HCl pH7.3 缓冲液。 四、实验器材与仪器 电子天平（称量干酵母粉）；研砵（每组一套）；50ml高速离心管（4支/组、4孔50ml离心管架一个/组）；托盘天平（离心管平衡用）；高速冷冻离心机；恒温水浴箱（50℃）；量筒（50ml）、微量移液枪（1000ul)及枪头或移液管（1ml)、玻棒、滴管等;1.5ml离心管（留样品Ⅰ、Ⅱ用）及离心管架；制冰机；－20℃冰箱。 五、操作方法和实验步骤 1、酵母细胞破粹（干磨法） ①称量：称取市售干酵母粉10g+约3-5 g石英砂放入研钵 ②研磨(干磨)：至尽可能成细粉末状（约15min） ③加液+研磨：量取总体积40 ml的20mmol/L Tris-HCl pH7.3 缓冲液，分2次加研磨10min， 使呈糊状液体； ④离心：将糊状液体转移到2支50ml离心管中，两支离心管平衡后(托盘天平上)，离心10min （条件：4℃、12000r/min） ⑤收集+测量：收集上清液并量出体积V1（样品I），另留1ml上清液（样品I ）放置－20℃冰箱保存用于蔗糖酶蛋白含量测定、蔗糖酶活力测定和SDS-PAGE分析 2、热处理 ①水浴热处理：将上步抽提液（样品I），迅速放入50℃恒温水浴，保温30min， 并每隔5min用玻璃棒温和搅拌提取液。 ②冰浴冷却：保温后迅速用冰浴冷却5min ③离心：将热处理后的样品I转移至两支50ml离心管中，平衡后，离心10min。 （条件：4℃，12000r/min） ④收集+测量：收集上清液并量出体积V2（样品Ⅱ），另留1ml上清液（样品Ⅱ）放置－20℃冰箱保存（用于蔗糖酶蛋白含量测定、测定蔗糖酶活力和SDS-PAGE分析。 3、有机溶剂（乙醇）沉淀 ①冰浴：将热处理后的上清液加入相同体积的－20℃的95%乙醇，冰浴中温和搅动混匀，
高中生物调查报告(精选多篇)
高中生物调查报告(精选多篇) 第一篇：高中生物实验报告纯净水实验报告【实验目的】 证明氮元素为黄瓜苗的必备元素。 【实验原理】 植物所吸收的氮素主要是硝酸盐（no3-）和铵（nh4+），也可以利用某 些可溶性的含氮有机物，如尿素等。氮是构成蛋白质的主要成分。此外，氮存在于核酸、磷脂、叶绿素、辅酶、植物激素和多种维生素（如b1，b2，b6，pp等）中。由于氮作为组成植物体中许多基本结构物质的组分，对植 物的生命活动有举足轻重的作用，故氮又称为生命元素。氮素在植物体内可以自由移动。缺氮时幼叶向老叶吸收氮素，老叶出现缺绿病。严重的情况下老叶完全变黄枯死，但幼叶可较长时间保持绿色。植物缺氮时植株矮小，叶小色淡或发红，分枝少，花少，籽实不饱和，产量低。 【材料用具】 1.两株生长健康的黄瓜苗； 2.两种植物生长所需的肥料，其中a种肥料含有氮元素，b种肥料不含有氮元素，a、b两种肥料其他性质相同。 【方法步骤】 1.在相同正常自然生长条件下，向两株黄瓜苗分别长期施
用上述a、b两种肥料； 2.观察一段时间后两株植物的生长情况。 【实验结果预测】 施用b种肥料的黄瓜苗的黄瓜叶片发黄，植株矮小，而施用a种肥料的黄瓜苗无此症状。 【实验结论】 氮元素为黄瓜苗的必备元素。 【思考质疑】 氮元素在植物生长中的主要作用是什么？ 陈奕君高一（6）班 第二篇：生物调查报告我们身边有许许多多的生物，它们与我们朝夕相处、息息相关，为我们的生活增光添彩。今天，我们跟随着老师在学校中调查了校园里的生物。调查校园生物种类调查目的：(我们一定会做的更好：) 1、了解学校及周围环境中的生物，记录所看到的生物和它们的生活环境。 2、尝试对所知道的生物进行归类，初步认识生物的多样性和生物与环境的关系。 3、初步学会调查笔记。调查方法：在老师带领下实地调查。材料用具：调查表、笔、放大镜、照相机、摄像机等方法步骤： 1、设计调查表：设计合理的调查表 2、分组：以5为人为一组，确定一个人为组长 3、选择路线:由学校大门前开始，经东边绕过办公楼、教学楼进入操场，边观察边记录，最后由学校西边回到大门口。调查记录：沿着事先设计好的路线边观察边记录，记录不同的
浙江大学生物化学丙实验报告3,4
,. 实验报告 课程名称： 生物化学实验（丙） 指导老师： 方祥年 成绩：__________________ 实验名称： 蔗糖酶蛋白含量的测定、蔗糖酶活力测定及其分离纯化效果的评价 同组学生姓名： 金宇尊、鲍其琛、袁平、朱耀仁、蔡玉林 一、实验目的和要求（必填） 二、实验内容和原理（必填） 三、实验材料与试剂（必填） 四、实验器材与仪器（必填） 五、操作方法和实验步骤（必填） 六、实验数据记录和处理 七、实验结果与分析（必填） 八、讨论、心得 一、实验目的和要求 1、蔗糖酶蛋白含量的测定——Folin-酚法 ①学习Folin-酚法测定蛋白质含量的原理和方法； ②掌握分光光度法制作标准曲线，准确测定未知样品的蛋白质含量； ③掌握分光光度计的使用方法。 2、蔗糖酶活力测定——3.5－二硝基水杨酸法 ①掌握酶活力测定的基本原理和方法； ②学习酶的比活力的计算。 二、实验内容和原理 1、Folin-酚测定法 Folin-酚试剂是由甲、乙两种试剂组成的。甲试剂由碳酸钠、氢氧化钠、硫酸铜和酒石酸钾钠组成，在碱性条件下蛋白质中的肽键与酒石酸钾钠铜盐起作用，生成紫红色络合物；乙试剂是由磷钼酸和磷钨酸、硫酸、溴等组成，在碱性条件下，铜-蛋白质络合物以及蛋白质中的酪氨酸残基（酚基）和色氨酸还原磷钼酸-磷钨酸试剂（乙试剂）产生深蓝色（钼蓝和钨蓝的混合物），其色泽深浅与蛋白质含量成正比。可用500nm 波长比色测定，适于测定蛋白质含量0.05～0.5g/L 。 优点： 简单、迅速、灵敏度高；反应较稳定。 缺点： 该反应受多种因素的干扰。 2、蔗糖酶活力测定 蔗糖酶（β-D-呋喃型果糖苷-果糖水解酶EC 3.2.1.26），是一种水解酶。它能催化非还原性双糖（蔗糖）的1,2－糖苷键裂解，将蔗糖水解为等量的葡萄糖和果糖（还原糖）。因此，每水解1mol 蔗糖，就能生成2mol 还原糖。还原糖的测定有多种方法，例如：纳尔逊－索模吉试剂比色法，斐林试剂法等。 专业： 农业资源与环境 姓名： 李佳怡 学号： 3130100246 日期： 2015.5. 26 地点： 生物实验中心310 装 订 线
生物化学实验六——酵母RNA的提取与含量测定 山东大学实验报告
实验六——酵母RNA的提取与含量测定 13生物基地 201300140059 刘洋 2015-05-10 同组者：张奕 一、实验目的 1.掌握稀碱法提取酵母RNA的原理和方法。 2.掌握紫外分光光度计的使用。 3.了解和掌握紫外吸收法测定RNA浓度的原理。 二、实验原理 酵母核酸中RNA含量较多，DNA则少于2%。RNA可溶于碱性溶液，当碱被中和后，可加乙醇使其沉淀，由此即可得到RNA制品。但是用碱液提取的RNA有不同的降解。 核酸及其衍生物，核苷酸、核苷、嘌呤和嘧啶有吸收紫外光的性质，其吸收高峰在260nm 左右，且一定浓度范围内其浓度与吸光度成正比（浓度为5μg/ml—45μg/ml吸光度与浓度成正比），利用此性质，可用RNA标准液绘制RNA吸光标准曲线(标准曲线的斜率为0.022-0.024左右)，测定样品RNA浓度。由于蛋白质在280nm的光吸收，对核酸测定有一定的干扰作用，最大吸收峰在280nm处，原因是蛋白质组成中常含有酪氨酸和色氨酸等芳香族氨基酸。所以如果有蛋白质的干扰必须得先测260nm处的吸光度，再测280nm处的吸光度，通过计算消除其对核酸的影响。 三、实验器材 干酵母粉 电子天平 量筒 容量瓶100ml 磁力搅拌器 试管 100℃水浴锅pH试纸（pH1-14）烧杯 离心机 722型分光光度计锥形瓶 离心管 四、实验试剂 0.2%氢氧化钠溶液95%乙醇 无水乙醚酸性乙醇（5ml浓Hcl加入到500ml95%乙醇中混匀）RNA标准蛋白溶液（200μg/ml）
1.RNA的提取 （1）称取4g干酵母粉，放入200ml锥形瓶中，加入40ml0.2%的氢氧化钠溶液混匀，在沸水浴中煮沸30min中并冷却； （2）冷却后，把液体倒入离心管中，在4000r/min的条件下离心15min； （3）离心后留上清液加入95%的酸性乙醇40ml，边加边搅拌，静置5min左右，再4000r/min的条件下离心5min； （4）离心后保留沉淀，用20ml 95%乙醇分两次洗涤沉淀，每次洗后在3000r/min的条件下离心5min； （5）离心后的沉淀再用无水乙醇10ml洗涤两次，每次用3000r/min离心5min； （6）离心结束后，收集沉淀与滤纸上，称重备用。 2.RNA样液的配制 （1）取粗RNA0.2-0.25g与烧杯中，加入5mlNaOH溶液，搅拌，溶解，调成糊状。 （2）再加入蒸馏水40ml，搅拌混匀，调PH至7.0后，放入100ml容量瓶中定容。 （3）再分3-4次分别取2ml定容后溶液于100ml容量瓶中继续定容待测,并且把容量瓶依次编号为A、B、C。 3.RNA标准曲线的绘制 （1）取洁净的试管，依次标号为1-10、A、B、C后，按照下表分别往各试管中加所需液体，并用磁力搅拌器混匀。 （2）混匀后以0号试管为参比液，在260nm下测各试管的吸光度A，并根据0-9试管的吸光值绘制出RNA标准曲线，并最终得出样品的浓度。 六、注意事项 1.离心机的使用，使用前一定要将两离心液（包括外壳）在天平上调平，对称放置在离 心机上，防止力臂不对称而损坏离心机。 2.紫外分光光度计的使用，要先预热10分钟，往比色皿中到液体只需到三分之二即可， 防止液体溢出腐蚀仪器，爱护仪器。
浙江大学本科实验报告规范(暂行)
关于印发《浙江大学本科实验报告规范（暂行）》的通知 各学院： 现将《浙江大学本科实验报告规范（暂行）》印发给你们，请遵照执行。 教务处 二OO六年十一月十 六日 浙江大学本科实验报告规范（暂行） 实验报告是学生实验研究结果的文字记录和总结，是培养学生动手能力、写作能力、分析能力等综合能力的重要手段。为进一步提高本科实验教学质量，规范我校本科实验报告的格式、评阅、收集及保管等方面的工作，特制定本规范。 一、实验报告的管理规范 （一）对学生的基本要求 1．按照实验课程教学计划的要求，原则上每个实验项目提 交一份实验报告。 2．按照规定的时间和要求，完成实验报告并交实验教师批改。 3．实验报告第一页用学校统一的实验报告纸书写（可用A4纸下载打印学校统一规定的实验报告格式），附页可用A4纸书写，要求字迹工整，实验数据必须真实、有效，曲线要画在座标纸上，线路图要整齐、清楚（不得徒手画）。电子版的实验报告也要统一
采用学校规定的实验报告格式。 （二）对实验教师的要求 1．实验报告批改要有签名，打分，原则上要求有评语。 2．对学生完成的实验报告数量和质量要作书面记录，每个实验项目的实验报告成绩登记在实验报告成绩登记表（见附件1）中，并按一定比例（独立设课的实验报告一般为10-15%），作为平时成绩的一部分计入实验课总评成绩内。每学期装订成册时附在封面后第一页。 3．对迟交实验报告的学生要酌情扣分，对缺交和抄袭实验报告的学生应及时批评教育，并对该次实验报告的分数以零分处理。对单独设课的实验课程，如学生抄袭或缺交实验报告达该课程全学期实验报告总次数三分之一以上，不得同意其参加本课程的考核。 4．实验教师每学期负责对拟存档的学生实验报告按课程、学生收齐并装订成册（装订顺序由实验教师自行决定）。装订线在左侧，第一页加订实验报告封皮（封皮按学生装订见附件2，按课程装订见附件3）。实验报告可根据课程性质提交电子版，但需要有教师的批改记录，并将电子版汇总后刻录在一张光盘上，加上封面。 （三）对管理部门的要求 1．课程结束后，由各学院负责本科教学管理的科室负责督促收齐各门实验课程的实验报告。 2．由各学院确定具体实验室负责保管相应实验课程的实验报告。 3．教务处负责组织人员对实验报告进行不定期抽
大学生物化学实验
生物化学实验安排 实验一蛋白质及氨基酸的呈色反应 一、实验目的 1、了解构成蛋白质的基本结构单位及主要联接方式 2、了解蛋白质和某些氨基酸的呈色反应原理 3、学习几种常用的鉴定蛋白质和氨基酸的方法 二、实验原理 1. 双缩脲反应(biuret reaction) 蛋白质和多肽分子中肽键在稀碱溶液中与硫酸铜共热，呈现紫色或红色，此反应称为双缩脲反应，双缩脲反应可用来检测蛋白质水解程度。 2. 茚三酮反应(ninhydrin reaction) 蛋白质经水解后产生的氨基酸也可发生茚三酮反应。 3.苯环的黄色反应 Tyr + 浓硝酸黄色 Trp Phe+少量浓硫酸+浓硝酸黄色 4. 乙醛酸的反应： 检测Trp或含Trp蛋白质的反应。当Trp与乙醛酸和浓硫酸在试管中滴加时，产生分层现象，界面出现紫色环。主要是由于蛋白质中的吲哚环作用。 5. 偶氮反应
偶氮化合物都含有-N=N-这样结构，通常作为染料。 6. 醋酸铅反应 ()↓ --→+--+Pb COO NH Pb COOH N H 2222Pr Pr 三、实验步骤 1. 双缩脲反应(biuret reaction) 取1支试管，加乳蛋白溶液（蛋清：水= 1：9）约1ml 和10%NaOH 约2ml ，摇匀，再加1%CuSO4溶液2滴，随加随摇。观察现象，记录。 2. 茚三酮反应(ninhydrin reaction) （1）取2支试管分别加入蛋白质溶液（蛋清：水= 1：9）和甘氨酸溶液1ml ，再各加0.5ml0.1%茚三酮，混匀，沸水浴中加热1-2分钟，观察颜色是否由粉红色变紫红色再变蓝色。 （2）在一块小滤纸上滴1滴0.5%的甘氨酸溶液，风干后再在原处滴1滴0.1%茚三酮乙醇溶液，在微火旁烘干显色，观察是否有紫红色斑点的出现。 3. 苯环的黄色反应 向6个试管中按下表加试剂，观察现象并记录。鸡蛋清溶液（蛋清：水= 1：9） 4. 乙醛酸的反应： 向3个试管中按下表加试剂，观察现象并记录。蛋白质溶液（蛋清：水= 1：20）
生物技术实验报告
生物技术实验报告 篇一：生物技术实验报告 组别：第六组 组员：苏琳伟、陈治、陈家和、陈硅 报告人：陈硅 学号：10349069 词汇&释义： Parafilm 封口膜 Chloroform 氯仿（三氯甲烷） Isopropanol 异丙醇 DEPC 焦碳酸二乙酯 TRIZOLa mono-phasic solution of phenol and guanidine isothiocyanate Phenol苯酚 isthiocyanate 异硫氰酸胍 MCS multiple cloning site （polycloning site） 注：MSC是DNA载体序列上人工合成的一段序列，含有
多个限制内切酶识别位点。能为外源DNA提供多种可插入的位置或插入方案。 实验任务： 1. 从猪肌肉纤维中提取RNA; 2. 2对RNA上EGFP基因密码子片段进行RT-PCR扩增; 3. 将经RT-PCR技术扩增的cDNA与插入载体质粒，并将其转化入大肠杆菌进行克隆； 4. 从大肠杆菌中提取含目的基因的载体质粒。 实验目的: 1.掌握提取纯化总RNA的原理和技术； 2.掌握RT-PCR原理和技术； 3.掌握TA克隆原理和技术。 实验原理： A．总RNA提取和纯化 RNA 分离的最关键因素是尽量减少RNA 酶的污染。但RNA 酶活性非常稳定，分布广泛，除细胞内源性RNA 酶外，环境中也存在大量RNA 酶。因此在提取RNA 时，应尽量创造一个无RNA 酶的环境，包括去除外源性RNA 酶污染和抑制内源性RNA 酶活性，主要是采用焦碳酸二乙酯（DEPC）去
除外源性RNA 酶，通过RNA 酶的阻抑蛋白Rnasin 和强力的蛋白质变性剂如异硫氰酸胍抑制内源性RNA 酶。 Trizol试剂是直接从细胞或组织中提取总RNA的试剂，是一种由苯酚和异硫氰酸胍组成的单相溶液它在破碎和溶解细胞时能保持RNA的完整性，裂解细胞并释放出RNA,酸性条件使RNA与DNA分离,加入氯仿后离心，样品分成水样层和有机层。RNA存在于水样层中。收集上面的的水样层后，RNA可以通过异丙醇沉淀来还原。在除去水样层后，样品中的DNA和蛋白也能相继以沉淀的方式还原。乙醇沉淀能析出中间层的DNA，在有机层中加入异丙醇能沉淀出蛋白。共纯化DNA对于样品间标准化RNA的产量十分有用。 无论是人、动物、植物还是细菌组织，各种样品最大使用量（1ml Trizol），动物组织( 50mg)，植物组织(100 mg)，丝状真菌( 100mg)，动物细胞(5×106～1×107)，酵母(1×107) 。 TRIZOL试剂能促进不同种属不同分子量大小的多种RNA 的析出。例如，从大鼠肝脏抽提的RNA琼脂糖凝胶电泳并用溴化乙啶染色，可见许多介于7 kb和15 kb之间不连续的高分子量条带，（mRNA和hnRNA成分）两条优势核糖体RNA 条带位于~5 kb (28S)和~2 kb (18S)，低分子量RNA介于0.1 和 0.3 kb之间 (tRNA, 5S)。当抽提的RNA用TE稀释时其
浙江大学实验报告模板
课程名称：材料科学与工程基础实验指导老师：李雷成绩：__________________ 实验名称：介电材料电学性能实验类型：同组学生姓名：13组 一、实验目的和要求（必填）二、实验内容和原理（必填） 三、主要仪器设备（必填）四、操作方法和实验步骤 五、实验数据记录和处理六、实验结果与分析（必填） 七、讨论、心得 一、实验目的 1、了解低损耗介电材料在微波通讯技术中的应用； 2、了解介质谐振法的测试原理； 3、掌握利用介质谐振法测试低损耗材料微波介电性能的技术。 二、实验原理 微波指频率介于300MHz和300GHz之间的电磁波，在通讯领域有着非常广泛的应用。而微波介质材料指适用于微波频段的低损耗（通常在10-3数量级以下）、温度稳定型电介质材料（通常为陶瓷材料），被广泛应用于微波介质谐振器、振荡器、滤波器、双工器、微波电容器及微波基板等，是移动通讯、卫星通讯、全球卫星定位系统（GPS）、蓝牙技术以及无线局域网（WLAN）等现代微波通讯技术的关键材料之一。 对于工作于较低频率下的介电材料，一般用介电常数?r、介电损耗tanδ及介电性能的温度依赖性表征其介电性能。而对工作于微波频段的损耗介质材料，相对应的三个基本参数及其要求则为：合适的介电常数?r、高Qf值及近零谐振频率温度系数τf。其中。当微波介质材料作为谐振单元使用时，应具有较高的介电常数，以 满足器件小型化的需要；而当其作为微波基板使用时，由于微波在基板中传播的速
度,为了减小微波电路中的延迟，介质材料应具有尽可能低的介电常数?r。Qf值定义为品质因子Q（介电损耗tanδ的倒数）与频率的f的乘积，单位为GHz。高Qf值对应微波介质材料作为谐振单元使用时的良好频率选择性及作为微波基板使用时的低信号衰减。一般认为，低损耗材料在微波频段的Qf值为不随频率变化的常数。低损耗微波介质材料作为谐振单元使用时，其谐振频率f 通常随温度线性变化，故用谐振频率温度系数τf表征其温度稳定性，定义为,单位为ppm/, 其中T 2和T 1 表示两个测试温度。本实验课中只涉及介电常数?r及Qf值的测试。 在测试频率较低、试样尺寸远小于电磁波波长时（如1MHz以下），可以把片状 介质材料两端面镀上金属电极、构成平板电容器，直接用LCR仪或阻抗分析仪测试其介电性能。但当频率升至微波频段时，试样尺寸已可与电磁波波长相比拟，以上方法不再适用。 对于低损耗介质材料，其微波介电性能需用网络分析仪及介质谐振法进行测试。网络分析仪通常有两个端口，均可发射和接受微波信号，其测试参数为S参数，定义为接收与发射信号电压的比值，为模在0-1间的复数。S参数常用对数形式表示，定义为20loge∣S∣，取值在-∞ ~0之间，单位为dB。由S参数的定义知：两端口网络分析仪中共有四个S参数：S11，S21，S12，S22，其中第一、二个下标分别表示接收及发射端口。圆柱形金属空腔即为最简单的微波谐振器，其谐振频率f 及品质因子Qu由空腔的尺寸及金属内壁的表面电导率决定。用低损耗介质材料部分填充 金属腔，即构成介质谐振器，其谐振频率f 及品质因子Qu由试样的尺寸、介电性能（?r、Qf值）及金属腔的性质（尺寸及表面电导率）共同决定。因此，通过测试介 质谐振器谢振峰的性质（谐振频率f 及品质因子Qu），即可通过数值方法求解出待测试样的?r及Qf值。 三、测试步骤 1）将试样尺寸及估计的介电常数输入至程序，计算介质谐振器大致的谐振频率范围。 2）在估计的频率范围内找到谐振峰（对应于S21）参数的最大值。 3）将谐振频率处的S21参数调至-40dB以下，记录谐振频率f 及3dB带宽△f。
生物化学实验报告
生物化学实验报告 动物营养研究所 张树润 2015.10.12 猪血中超氧化物歧化酶（SOD）的分离纯化及活性测定一．实验目地 1.通过实验了解活性物质的分离提取。 2.了解超氧化物歧化酶的基本功能与应用。 二．实验原理 超氧化物歧化酶是一种酸性蛋白，是唯一以自由基为底物 的酶，具有清除自由基的功能酶，在酶分子上共价连接金属辅 基，因此它对热、PH、以及某些理化性质表现出异常的稳定性。 该酶首次从牛红细胞中分离得到，是一种蓝色含铜蛋白，之后， 研究发现该蛋白酶具有催化氧发生歧化反应的能力，因此将其 命名为超氧化物歧化酶1-2。超氧化物歧化酶是一种能专一地清 除超氧离子自由基（O2-）的金属酶，它具有抗衰老、抗辐射、 抗炎抗癌等作用，因而在医药（如关节炎、红斑狼疮等疾病的 治疗3）、化妆品(有防晒抗炎效果4)、食品工业（SOD灵芝菌5 等）等方面具有了广泛的应用前景。 超氧化物歧化酶是广泛存在于生物体内的一种金属酶, 可 催化超氧阴离子自由基(O2-)与H+发生歧化反应, 生成H2O2和 O2。SOD催化下述反应：2H++2O2-→H2O2+O2。
超氧化物歧化酶按照它所含金属离子的不同，可分为 Cu-Zn-SOD、Mn-SOD、Fe-SOD等三种。Cu-Zn-SOD为二聚体， 呈蓝绿色；Mn-SOD呈紫红色；Fe-SOD呈黄褐色。 SOD提取、纯化制备方法各异, 常用方法有经典的溶剂沉淀法、盐析法、超滤法和层析法等6-7。本实验采用有机溶剂沉淀法8以新鲜猪血为原料，从中提取SOD并进行纯化。酶活力测定可用以下方法：邻苯三酚自氧化法9、黄嘌呤氧化酶法、NBT光还原法、化学发光法、肾上腺素自氧化法、亚硝酸法等。 该实验SOD酶活性采用邻苯三酚自氧化法测定，酶活性单 位定义为：每毫升反应液中，每分钟抑制邻苯三酚自氧化速率 达50%的酶量定义为一个酶单位。 样品中蛋白质含量用考马斯亮蓝G-250法测定。考马斯亮 蓝G-250在游离状态下呈红色，与蛋白质结合呈现蓝色。在一 定范围内，溶液在595nm波长下的光密度与蛋白质含量成正比， 可用比色法测定，测定范围1-1000μg。 三．实验试剂与器材 1.实验试剂 ACD抗凝剂、0.9%Nacl、丙酮、95%乙醇、氯仿、考马斯亮蓝 G-250、50mmol/L pH8.3磷酸缓冲液、10mmol/L EDTA钠盐溶 液、3mmol/L邻苯三酚溶液等 2.实验器材
南方科技大学生物小鼠解剖英文实验报告
姓名班级学号实验日期2014.5.21 科目实验名称Mouse Dissection 合作者指导教师成绩 LAB 10: Mouse Dissection Introduction: In biomedical research, animal models are always regarded as indispensable tools. They contribute to the scientific discovery in biology and our understanding of the functions of individual genes, even the mechanism of different diseases. Typically, although mice are different from humankind in size and appearance, they have a distinct genetic similarity. At the same time, mice have an efficient ability to reproduce, so they are important research tools for experiments in the lab. In this experiment, we will exercise to dissect a mouse, so that we can observe the inside of a mammalian body to identify the female and male mice. Learning and recognizing the anatomical structure of mice, including. Materials and Methods: Materials: Operation plate, Scissor, Forceps, Alcohol cotton, Mouse. Methods: [we get a male mouse] Part 1: Observations of external features. Make a table T-1. 1．Having an overhead view, identify the mouse’s head, neck, truck, and tail; observe the dorsal and ventral surfaces. Roughly record what is seen. 2．Observe the thorax which is supported by the rib cage, and the abdomen, and the details of appendages attached to the abdomen. 3．Find the mouth, two external nostrils, two external auditory canals, and anus, which are on the body surface. 4．Have a simply look at the surface of reproductive organ, prepuce, urethral and penis including. And locate the saclike scrotum; feel for the paired testes in the scrotum. Note the rough features. Part 2: Observation of organs and structures inside the mouse. [Open the Ventral Body Cavities, Thoracic Cavity, and Abdominopelvic Cavity in order. We must break the ribs near the attachment to the vertebral column to fold back the upper flaps.] Make a table T-2. 1.Ventral Body Cavities. a. Make a longitudinal incision through the skin with a dissecting scissor, from the neck to the preputial opening. Pierce the body wall below the ribs, with the blades angled upward, so that it won’t damage the internal organs. b. Pull the sides of the longitudinal incision, and look for the diaphragm. Then make two
浙江大学Linux程序设计实验报告
Linux程序设计实验报告1 ——操作系统基本命令使用 一、实验目的 1．通过对Emacs、vi、vim、gedit文本编辑器的使用，掌握在Linux环境下文本文件的编辑方法； 2．通过对常用命令mkdir、cp、cd、ls、mv、chmod、rm等文件命令的操作，掌握Linux操作系统中文件命令的用法。 二、实验任务与要求 1．emacs的使用，要求能新建、编辑、保存一个文本文件 2．vi或vim的使用，要求能新建、编辑、保存一个文本文件 3．gedit的使用，要求能新建、编辑、保存一个文本文件 4．掌握mkdir、cd命令的操作，要求能建立目录、进入与退出目录 5．掌握cp、ls、mv、chmod、rm命令的操作，要求能拷贝文件、新建文件、查看文件、文件重命名、删除文件等操作。 三、实验工具与准备 计算机PC机，Linux Redhat Fedora Core6操作系统 四、实验步骤与操作指导 任务1．学习emacs的使用，要求能新建、编辑、保存一个文本文件 （1）启动emacs （2）输入以下C程序 （3）保存文件为kk.c （4）用emacs打开文件kk.c （5）修改程序 （6）另存为文件aa.txt并退出。 任务2．vi或vim的使用，要求能新建、编辑、保存一个文本文件 （1）点击”应用程序”→“附件”→“终端”，打开终端，在终端输入命令： [rootlocalhost root]#vi kk.c 按i键，进入插入状态。 （2）输入以下C程序 #include
int main( ) { printf(“Hello world!\n”); return 0; } 此时可以用Backspace、→、←、↑、↓键编辑文本。 （3）保存文件为kk.c 按Esc键，进入最后行状态，在最后行状态输入：wq保存文件，退出vi。 （4）用vi打开文件kk.c，输入命令： [rootlocalhost root]#vi kk.c （5）修改程序为： #include
浙江大学生物化学丙实验报告.
. 实验报告 课程名称： 生物化学实验（丙） 指导老师： 方祥年 成绩：__________________ 实验名称： 质粒DNA 的微量制备及电泳检测 同组学生姓名： 金宇尊、鲍其琛 一、实验目的和要求（必填） 二、实验内容和原理（必填） 三、实验材料与试剂（必填） 四、实验器材与仪器（必填） 五、操作方法和实验步骤（必填） 六、实验数据记录和处理 七、实验结果与分析（必填） 八、讨论、心得 一、实验目的和要求 1、学习并掌握质粒DNA 的提取原理和方法； 2、了解琼脂糖凝胶电泳检测核酸的原理和操作； 3、学习并掌握对电泳检测结果的初步分析。 二、实验内容和原理 1、实验内容 ①质粒DNA 的提取 ②DNA 的琼脂糖凝胶电泳鉴定 2、实验原理 ①质粒： 质粒是一种染色体（核质体）外的寄生性的自主复制子，存在于细菌等细胞中，为双链闭环的DNA 分子，大小在1-200kb 之间，具有自主复制和转录功能, 能表达例如抗性、菌毒素等细胞非必需的遗传信息，但其复制和转录必须要利用依赖宿主细胞（细菌）基因组DNA 编码的一些酶和蛋白质。质粒能够自发的或人为的在细胞间转移，因此是基因工程技术中将外源基因导入受体细胞的重要载体。 ②从细菌细胞中抽提质粒DNA 的步骤： a 细菌培养使质粒大量扩增； b 收集和裂解细胞,并去掉细菌碎片和核质体DNA ； c 进一步除去蛋白、脂类、RNA 等杂质，分离和纯化质粒DNA 。 ③碱裂解法来分离纯化质粒DNA ： 在EDTA 存在下，经过SDS 处理使细胞膜裂解，从而使菌体充分裂解，利用在碱性条件下（NaOH ）， 使核质体DNA 与质粒DNA 的变性；加入乙酸钾，在中性条件下，核质体DNA 与质粒DNA 又存在复性的差异，质粒DNA 很快得以复性，而细菌核质体DNA 分子难以复性，核质体DNA 会缠绕附着在细胞膜碎片上专业： 农业资源与环境 姓名： 李佳怡 学号： 3130100246 日期： 2015.6.9 地点： 生物实验中心310 装 订 线
高中生物学生实验报告
班级：学号：姓名：时间： 使用高倍显微镜观察几种细胞 一、实验目的： 1、学会如何使用显微镜观察细胞； 2、了解细胞的结构； 3、学会制作临时装片。 二、实验材料：（实验材料可换）松针、动物血液、动物神经细胞永久装片 三、实验用具：载玻片、盖玻片、蒸馏水、滴管、镊子、土豆、刀片、显微镜（物镜5X、10X、40X） 四、方法步骤： 1、制作松针的临时切片： （1）取干净的载玻片一个平置于试验台上，用滴管在载玻片中央滴一滴蒸馏水。 （2）将土豆切成条状（截面约：0.5X0.5cm)取两条，将一根松针夹在两个土豆条之间，用刀片削成尽量薄的薄片，削时，手腕不动，靠大臂带动小臂移动刀片。切片数次。从中选取较薄的切片，置于载玻片的水滴上。 （3）从一侧轻轻盖上盖玻片，不要产生气泡。用吸水纸轻轻吸去盖玻片周围的水滴，即完成临时切片的制作。 2、观察切片： （1）取出显微镜，置于试验台上靠左的位置，打开光源。 （2) 将上步制作好的切片置于显微镜的载物台上，调整载物台位置，使盖玻片对准光源。（3）使用5X物镜观察切片，使松针切片在视野中心，换成10X物镜，观察松针叶面横切结构。 （4）换成40X物镜观察，注意细胞及细胞内物质结构，画图。 3、动物血液临时装片的制作及观察（除了不用切片，其他类似） 4、动物神经细胞永久装片的观察。 五、反思： 1、松针的叶面结构是什么样的？ 2、动物细胞的结构是什么样的？与植物细胞又什么不同？ 3、显微镜的物镜倍数愈大，视野的亮度如何？物体的大小如何？ 4、如何调节焦距？ 5、如何才能使切片尽量的薄？切片的厚薄对显微镜下观察的效果有什么影响。
班级：学号：姓名：时间： 观察DNA和RNA在细胞中的分布 一、实验原理： 1、真核细胞的DNA主要分布在内，RNA主要分布在中。 2、甲基绿和吡罗红两种染色剂对DNA和RNA的亲和力不同，甲基绿对DNA亲和力强，使DNA 显现出绿色，而吡罗红对RNA的亲和力强，使RNA呈现出红色。用甲基绿、吡罗红的混合染色剂将细胞染色，可同时显示DNA和RNA在细胞中的分布。 3、盐酸的作用 ①盐酸能改变细胞膜的通透性，加速染色剂的； ② 盐酸使染色体中的DNA与蛋白质分离，便于DNA与染色剂的结合 二、实验材料：人的口腔上皮细胞、洋葱鳞片叶表皮细胞 三、实验用具：大小烧杯、温度计、滴管、消毒牙签、载玻片、盖玻片、铁架台、 石棉网、火柴、酒精灯、吸水纸、显微镜 四、方法步骤： 1、取材 ①滴：在洁净的载玻片上滴一滴质量分数为的NaCl溶液； ②刮：用消毒牙签在口腔内侧壁上轻轻地刮几下； ③涂：将牙签上的碎屑涂抹在载玻片的中； ④烘：将涂有口腔上皮细胞的载玻片在酒精灯的火焰上烘干。 2、水解 ①解：将烘干的载玻片放入装有30ml质量分数为的盐酸的小烧杯中，进行材料的水解； ②保：将小烧杯放入装有温水的大烧杯中保温5分钟。 3、冲洗涂片 ①冲：用缓缓的蒸馏水冲洗载玻片10秒钟； ②吸：用吸水纸吸去载玻片上的水分。 4、染色 ①染：用2滴滴在载玻片上，染色5分钟； ②吸：吸去多余染色剂； ③盖：盖上盖玻片。 5、观察 ①低：在低倍物镜下，寻找染色均匀，色泽浅的区域，移至视野中央，将物像调节清晰； ② 高：转到高倍物镜，调节细准焦螺旋，观察细胞核和细胞质的染色情况。 五、考点提示： 1、取口腔上皮细胞之前，应先漱口，以避免装片中出现太多的杂质； 2、取洋葱表皮细胞时，尽量避免材料上带有叶肉组织细胞； 3、冲洗载玻片时水的流速要尽量慢，切忌直接用水龙头冲洗； 4、用酒精灯烘烤载玻片时，不要只集中于材料处，而应将载玻片在火焰上来回移动，使载玻片均匀受热，以免破裂； 5、烘烤后的载玻片不要马上放入盛有稀盐酸的烧杯中，最好先自然冷却1分钟。