酵母双杂交技术的应用及进展
安徽农业科学，Ｊ咖Ｔｄ０ｆＡｎｈ试Ａ画．Ｓｄ．２ＩＤ瞻。３６（１９ｌ：８吆ｌ一∞贬责任编辑王淼责任校对马君叶酵母双杂交技术的应用及进展
刘骥１，张秀娟１，范建平２，张子义１＊
（１．内蒙古农业大学生物工程学院，内蒙古呼和浩特Ｏｌ∞１８；２．内蒙古乌海市治沙站，内蒙古乌海０１６０∞）
、
摘要酵母双杂交技术能有效检测蛋白与蛋白之间的作用，已成为检测蛋白重要手段之一。笔者在酵母双杂交技术的建立、工作原理、优点和局限性４个方面作了叙述，并介绍其进一步的发展及展望。
关键词酵母双杂交技术；蛋白之间的作用；酵母单杂交；酵母三杂交；逆向双杂交系统
中图分类号ｓｌ鹃文献标识码Ａ文章编号晒１７—６６ｌｌ（加吣）１９一∞０２１一眈
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ｌ酵母双杂交技术的建立
随着生命科学的不断发展，各种生物技术研究手段层出
不穷，酵母双杂交系统就是在这样的条件下建立的川。Ｆｉｄｄ和
Ｓ０唱首先提出酵母双杂交系统，这是一种直接于酵母细胞内
检测蛋白质之间互相作用的新方法，可有效地用来分离能与
一种已知的靶蛋白相互作用的蛋白质的编码基因Ｌ２Ｊ。该技
术以其简便、灵敏、高效以及能反映不同蛋白质之间在活细
胞内的相互作用等特点得到广泛应用。它们证明了任何可
以互相配对的蛋白质都可以通过结合将互相分开的曲和
ＡＤ拉近，并从而形成一个转录激活复合物。在一个典型的
酵母双杂交系统中，通常包括２个融合蛋白，一个由已知的
蛋白Ｘ与ＢＤ组成，另一个由未知蛋白Ｙ与ＡＤ组成，前者通
常被称为诱饵（ｂＢｉｔ），而后者通常被称为猎物（ｐ呵）。此外，
还包括一个人工构建的，具有ＢＤ结合位点以及报告基因
（ＩｅＩ肼嘧黟ｍ）的质粒。如果诱饵和猎物能够在宿主细胞内
同时表达，那么由于两者的互相作用，ＢＤ和ＡＤ形成转录激
活复合物，从而激活报告基因的表达【３Ｊ。
２酵母双杂交技术的工作原理
酵母双杂交系统最初是根据真核转录调控的特点建立
的。真核生长转录因子含有两个相对独立的功能区域（ＤＮＡ
ｂｉＩｌｄｉ珲ｄｏｆｌｌａｉｎ）和转录激活结构域（ａｃｔ‰蛐，ＡＤ）。
ＤＮＡ．ＢＤ能够识别效应基因的上游激活序（Ｉ牺呦Ａ商谢曜
Ｓｅ嗍ＵＡＳ），并与之结合。ｍｉＡ－ＡＤ则是通过同转机
（强嘴ｃｒｉ嘶∞Ｍ∞ｈｉ－哪）中的其他成分之间的结合作用，以启
动ｕＡｓ下游的基因进行转录。ＢＤ和ＡＤ可以人为的分离，
分离的ＤＮＡ—ＢＤ和ＡＤ单独分别作用，并不能激活转录反应，
但当两者在空间上较为接近时，则呈现完整的转录因子的转
录激活活性，将ＤＮ舢肋序列与一已知的蛋白质ｘ（常成为诱
饵）的基因结合，构建出ＢｎＸ融合表达载体，将ＡＤ序列与
拟研究的另蛋白Ｙ．靶蛋白（孵）的基因结合，构建出肛ＬＹ
表达载体。将这２个表达载体共转化至酵母细胞内表达，此
基金项目作者简介
收稿日期中国农业大学一内蒙古农业大学合作项目。
刘骥（１９８２一），男，黑龙江齐齐哈尔人，硕士研究生，研究
方向：植物分子生物学。＊通讯作者。
２００８埘—２３
种酵母菌株既含有特定报告基因，并且已是去掉相应转录因
子的编码基因，因此本身无报告基因的转录活性。如果蛋白
质Ｘ和Ｙ可以互相作用，则即导致ＢＤ和ＡＤ在空间上的接
近，从而激活ＵＡＳ下游启动子调节的报告基因的表达，反之，
ＢＤ与ＡＤ就不能结合，报告基因也不能被启动表达［４１（图１）。
圈ｌ酵母双杂交体系的原理
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３酵母双杂交系统应用的优点
。酵母双杂交系统具有以下优点：①敏感性。主要是由于
系统能使融合蛋白过量表达。激活结构域和结合结构域形
成转录起始复合物，之后又与启动子结合，此三元复合体使
融合蛋白各组分间结合更趋于稳定。检测结果是基因表达
产物的积累效应，如酵母的表形，因而可检测存在于蛋白之
间微弱或暂时的互相作用。②真实性。检测在活细胞内进
行，作用条件与作用力无需模拟，在一定程度上代表了细胞
内的真实情况。③简洁性。融合蛋白互相作用后，减少了纯
化蛋白质的繁琐步骤。④广泛性。酵母双杂交系统可采用
不同组织器官细胞类型和分化期的材料构建ｃＤＩ姐文库ｂＪ，
能分析不同亚细胞部位和功能的蛋白质，适用于部分细胞
质，细胞核及膜结合蛋白。
４酵母双杂交系统的局限性
酵母双杂交系统在研究蛋白一蛋白、蛋白一核酸间互相
作用方面快速有效，有广泛的应用，但也存在一些局限性。
它有些弊端是不容忽视的，“假阳性［６］”是酵母双杂交的一
个重要问题。由于某些蛋白质本身具有激活转录功能或在
酵母双杂交技术的应用及进展
作者：刘骥， 张秀娟， 范建平， 张子义
作者单位：刘骥,张秀娟,张子义(内蒙古农业大学生物工程学院,内蒙古呼和浩特,010018)， 范建平(内蒙古乌海市治沙站,内蒙古乌海,016000)
刊名：
安徽农业科学
英文刊名：JOURNAL OF ANHUI AGRICULTURAL SCIENCES
年，卷(期)：2008,36(19)
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本文链接：https://www.wendangku.net/doc/6411107068.html,/Periodical_ahnykx200819032.aspx