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A549细胞中TCID50的测定

PR8病毒感染A549细胞后TCID50(组织半数感染量)的测定方法

TCID50与MOI的换算

(20150416最终版)

1.消化培养瓶中的细胞吹散混匀,接种于96孔板中约10000个细胞,

用细胞培养基100ul过夜培养至贴壁生长丰度达到80%左右。 2.次日,将培养基移走,用200ul/孔的PBS清洗1次洗去残留的血

清,避免血清对病毒吸附的干扰。

3.用预冷的无血清的DMEM(病毒稀释液/病毒吸附液)1.5mlEP管

中稀释病毒至10-­‐1 10-­‐2 …10-­‐8后(稀释十倍150ul病毒液+1350ulDMEM;稀释百倍,吸取前一组150ul+1350ulDMEM……)吸取100ul加入指定孔排孔中,每组10个复孔,另外2孔作为空白对照(无病毒的DMEM培养基)。100ul/孔加入各组中,37℃吸附1h弃去吸附液

4.可选择,200ulPBS洗涤一次,换成含有0.2%血清的DMEM(病毒

维持液)继续培养,每天观察细胞病变CPE直到病变直到不再病变为止,一般需要观察5-­‐7天

5.统计结果,Reed-­‐Muench两氏法,按照以下公式计算TCID50:

距离比例 = 高于!"%病变百分率!!"%

高于!"%病变百分率!低于!"%病变百分率

TCID50=高于50%病变的病毒最高稀释度的对数 + 距离比例

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