原花青素含量检测的概述

原花青素含量检测的概述

【摘要】对目前原花青素常用的检测方法进行了对比并阐述了各种方法的优缺点，为探索更好的原花青素的测定方法奠定基础。

【关键词】原花青素；检测；含量

原花青素是一类广泛存在于植物中的黄烷醇单体及其聚合体的多酚类混合物，具有抗氧化和自由基清除能力等生物活性。自20世纪60年代以来，在保健品、医药和化妆品领域获得了广泛应用。研究表明[1]，儿茶素和表儿茶素是构成原花青素的结构基础，继而形成缩合成二聚体、三聚体至高聚体。且单体具有旋光性，因此要想测定每一种成分的含量非常困难。目前国内外对原花青素含量的测定方法尚未统一，现介绍几种常用的方法。

1.可见分光光度法[2]

原花青素最常用的测定方法是可见分光光度法，它分为KMnO4法[3]、正丁醇-盐酸法、香草醛-强酸法、铁盐催化比色法、和pH示差法等。正丁醇-盐酸法、香草醛-强酸法两种方法是目前普遍采用的相对专一、灵敏的、简单迅速测定原花青素的方法。

1.1 Porter法（Bate-smith法）

又叫盐酸-正丁醇法，是依据原花青素在无机酸和加热的条件下被降解，产生红色花青素，在546nm处有最大吸收，原花青素的含量与吸光度值符合朗伯-比尔定律[4]。

在强酸作用下，聚合原花青素单元间的连接键易被打开，上部单元生成黄烷-3-醇，下部单元生成花色素。而对于黄烷3，4-二醇单体原花青素来说，C-4位有极强的亲电性，其醇羟基与C-5，C-7上的酚羟基形成了一个苄醇系统，使得4位碳易于生成正离子。在强酸作用下，正碳离子失去质子，生成花色素[5]。对于黄烷-3-醇单体，不会有正离子形成，因此与儿茶素和表儿茶素的单体不发生显色反应。此法对原花青素具有专一选择性，儿茶素、黄酮类、棓酸类及水解单宁类化合物皆不具备此反应，不适宜于低聚原花青素的测定，它与原花青素的高聚体反应也不完全。

随后，Porter等对该法的反应条件进行了探索，并认为Fe3+、Co2+、Cu2+等金属离子可催化加速自氧化过程，提高转化率，其中以Fe3+的催化效果最好。

1.2香草醛-强酸法

常用的酸有盐酸和硫酸，目前的观点认为浓H2SO4更合适，可以提高吸光度值和灵敏性，褪色也较慢[6]。

红米原花青素的测定方法

红米原花青素的提取及测定方法 1、标准曲线的配置 标准溶液的配制，用甲醇配制原花青素母液2mg/mL 标准液配制： 母液：2ml 3ml 4ml 5ml 6ml 7ml 8ml 甲醇：8ml 7ml 6ml 5ml 4ml 3ml 2ml 2、试剂 试剂a：10g/L香草醛甲醇溶液，10g香草醛溶于1L甲醇溶液 试剂b：245ml浓硫酸（18.4mol/L）溶于500ml甲醇溶液，并用甲醇定容直1L。 3、提取方法 将红米磨粉后称0.5g，放入15ml试管中，加入8ml的80%甲醇溶液，至于黑暗的地方，每隔2h左右振荡一次，一直浸泡提取8小时。 4、测定方法 吸取1ml提取液或标准液，加入10ml离心管中，然后依次加入2.5ml试剂a和2.5ml试剂b，混匀后35℃下水浴20min，水浴结束后

8000rm离心10min，用移液器取上清液测定其在500nm下的吸光值。 5、参考文献： 1、Sun B, Ricardo-da-Silva JM, Spranger I Critical Factors of Vanillin Assay for Catechins and Proanthocyanidins. Journal of Agricultural and Food Chemistry, 1998, 46: 4267-4274 2、Gunaratne A, Wu K, Li D, et al. Antioxidant activity and nutritional quality of traditional red-grained rice varieties containing proanthocyanidins. Food Chemistry, 2013, 138: 1153-1161

原花青素检测方法注意细则

原花青素检测方法注意细则 原花青素（20190518） 1、原理 原花青素是含有儿茶素和表儿茶素单元的聚合物。原花青素本身无色，但经过用热酸 处理后，可以生成深红色的花青素离子。本方法用分光光度法测定原花青素在水解过程中 生成的花青素离子。计算试样中原花青素含量。 2、试剂 2.1 甲醇分析纯 2.2 正丁醇分析纯 2.3 盐酸分析纯 2.4 硫酸铁铵NH4Fe(SO4)2?12H2O溶液：用浓度2mmol/l盐酸配成2%（w/v）的溶液。（ 1.67ml盐酸，加水至10ml） 2.5 原花青素标准品葡萄籽提取物，纯度95% 2.6 正丁醇盐酸混合液：正丁醇：盐酸=95：5（v：v） 3、仪器 3.1 分光光度计 4、分析步骤 4.1试样的制备 4.1.1 片剂取20片试样，研磨成粉状。 4.1.2 胶囊挤出20粒胶囊内容物，研磨或搅拌均匀，如内容物含油，应将内容物尽 可能挤出。 4.1.3 口服液摇匀后取样。 4.2 提取 4.2.1 粉状试样称取70mg试样置于50ml容量瓶中，加入30ml甲醇，超声处理30min，放冷至室温后，加甲醇至刻度，摇匀，静置30min，取上清液过滤备用。 4.2.2 含油试样称取50mg试样置于小烧杯中，用20ml甲醇分数次搅拌，将原花青素 洗入50ml容量瓶中，直至甲醇提取液无色，加甲醇至刻度，摇匀。

5.2.3 口服液吸取适量试样（取样量不超过1ml）置于50ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀。 4.3 测定 4.3.1 标准曲线称取原花青素标准品10.0mg溶于10ml甲醇中，吸取该溶液0、0.1、0.3、0.5、1.0、1.5ml（用2ml刻度吸管量取）置于10ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀。各取1ml测定。与试样测定方法相同。 4.3.2 试样测定取1ml试样溶液于10mL比色管中，加入6ml正丁醇盐酸混合液，再 加入0.2ml硫酸铁铵溶液，混匀，用封口膜封紧比色管口，置沸水浴精确加热40min后 （氺浴锅调至100度，将装有比色管的烧杯放入氺浴锅中），立即置冰水中冷却3—5min 后，取出放置约15min使供试液至室温，于546nm波长处测吸光度，由标准曲线计算试样 中原花青素的含量。显色在1小时内稳定。 5、分析结果表述 试样中原花青素测定结果按（1）式计算 5.1 计算： M1 ×V2×1000×100 X(g/100g) = ____________________________ _ m× 1000× 1000 式中：X—试样中原花青素的百分含量，g/100g；

花青素含量测定

花青素含量测定 实验目的：掌握花青素含量测定的简单方法。 实验原理：花青素又称花色素，是苯并吡喃衍生物，属于多酚类化合物，常与一个或多个葡萄糖、鼠李糖、半乳糖、阿拉伯糖等通过糖苷键形成花色苷，是自然界一类广泛存在于植物中的水溶性天然色素，也是树木叶片中的主要呈色物质，在植物细胞液泡不同的pH 条件下，呈现不同的颜色。大量研究表明：花色苷具有很强的抗氧化作用，可以清除体内的自由基；降低氧化酶的活性；可以降低高血脂大鼠的甘油脂水平，改善高甘油脂脂蛋白的分解代谢；抑制胆固醇吸收，降低低密度脂蛋白胆固醇含量；抗变异、抗肿瘤、抗过敏、保护胃粘膜等多种功能J。苹果花青素主要存在于果皮中，是果皮颜色形成的重要物质。苹果中的花青素由植物次生代谢重要途径一苯丙烷类代谢形成，同位素示踪揭示花青素的碳原子分别来自苯丙氨酸和乙。苹果中的花青素由矢车菊素的三种糖苷组成，分别是矢车菊素-3一半乳糖苷、矢车菊素-3-阿拉伯糖苷和矢车菊素一7·阿拉伯糖苷J。苹果中花青素的含量主要受温度、日照等因素影响，特别是紫外光可以明显提高花青素的合成效率，因此苹果的向阳面较背阳面红L4J。Jerneja等研究表明富士苹果成熟前期是其花青素形成的重要阶段，其中矢车菊素一3一半乳糖苷占总花青素92 ％～98％J。 器材与试剂： 实验仪器:分光光度计，电子天平，恒温箱，剪刀，烧杯，量筒，移液管 实验试剂：0.1mol/L HCL, 矢车菊素一3一半乳糖苷,甲醇，蒸馏水 实验材料：苹果 实验内容： 1、作标准曲线：采用l ％盐酸甲醇配置矢车菊素-3-半乳糖苷标准系列溶液，浓度分别为100、20．0、10．0、5．0、2．5、1．0 ~g／m L 。用分光光度计测出OD值（波长530nm），计算出标准曲线。 2、选2个苹果，把苹果皮削出，称取5g的果皮加入10m L l ％盐酸甲醇溶液匀浆，在40 ℃下提取1h，离心后取上清液在波长530nm测出OD值。 3、计算出苹果中花青素的含量。

原花青素的含量正丁醇测定方法

原花青素含量 1.材料和仪器 主要试剂：提取液，原花青素标样，盐酸正丁醇溶液、NH4Fe(SO4)2、95% 乙醇。 主要仪器：UV2100 型紫外分光光度计、恒温水浴锅。 溶液配制： 2％NH4Fe(SO4)2 称取3.66g七水合硫酸亚铁固体，溶于100ml水中后即得 95%乙醇移取5ml的蒸馏水至100ml容量瓶中用无水乙醇定容 盐酸正丁醇移5ml浓HCL 至100ml容量瓶正丁醇定容 2.实验步骤 a.标准曲线的制备:准确称取原花青素标准样品0.010g，用95% 乙醇溶 解并定容于10mL 容量瓶中，所得浓度为1mg/mL 作标样。吸取标样溶液0mL、0.5mL、1.0mL、1.5mL、2.0mL、2.5mL、3mL分别于25mL 具塞试管中，加95%乙醇定容为3mL, 然后分别加入0.2mL 2％NH4Fe(SO4)2 溶液和6mL盐酸正丁醇（5:95）溶液，盖塞，摇匀，于微沸的水浴中加热反应40min 取出，于冷水中迅速冷却，溶液显红色，以0mL 溶液作为空白对照，于546nm 处测定其吸光度。采用最小二乘法作原花青素浓度(C)与吸光度( A ) 线性回归方程。 结果见表 取得标样体 0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 积（/ml） 对应标样浓 度（mg/ml) 测的吸光度 值A b.样品测定 分别精确吸取10mL 样品，用95%乙醇定容于50mL 容量瓶。吸取上述样品待测液3mL 于25mL 具塞试管中，按标准曲线制作项下的操作步骤，依次分别加入0.2mL 2％NH4Fe(SO4)2 溶液、6mL 盐酸正丁醇溶液。根据标准曲线计算出结果，按其稀释倍数求得各样品中原花青素含量。

葡萄籽原花青素液相检测方法

原花青素原花青素原花青素原花青素HPLC初步方案初步方案初步方案初步方案 一．实验目的：分析样品原花青素纯度，了解其中杂质成分。 二．实验方案： 1. 方案一：Waters 公司高效液相色谱，C18柱(4.6 ×250 mm) , 检测波长为280 nm，进样量10μL ,柱温为室温。待测液均经0.45μm 孔径的滤膜过滤。流动相及流速见下表(A —10 %乙酸,B —重蒸水)： 2. 方案二：（间接法定量）（原理类似铁盐催化比色法） (1) 标准曲线：称取前花青素标准品10mg 溶于10ml甲醇中,吸取该溶液0、0.1、0.25、0.5、 1.0、1.5ml 置于10ml 容量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀。各取1ml 测定。 (2) 试样测定: 将正丁醇与盐酸按95 ：5的体积比混合后,取出6.0ml 置于具塞锥瓶中,再加入0.2ml硫酸铁铵[NH4Fe(SO4) 2·12H2O]溶液（用浓度为2mol/L 盐酸配成2%(w/v)的溶液）和1.0ml 经0.45μm滤膜过滤的试样溶液,混匀,置沸水浴回流,精确加热40min后,立即置冰水中冷却,待进行高效液相色谱分析。 (3)液相色谱参考分析条件: 色谱柱Shimadzu Shim –pak CLC –ODS 4.6 ×150mm;柱温35 ℃; 检测器:紫外检测器,检测波长525nm 流动相: 水:甲醇:异丙醇:10 %甲酸= 73 :13 :6 :8 流速0.9ml/min。注：该方法使用的水解方法与我们当前使用的铁盐催化水解原花青素方法稍有差异，哪种效果更好，可进行预实验加以比较。 3．方案三：（反相高效液相色谱）标样：原花青素标准品 色谱柱：Hypersi ODS-2 ，150 × 4.6mm 5μm； 流动相：A：0 . 2%(V/V) 乙酸；B：乙腈； 流量：1ml /min； 进样量：5μl; 柱温：30℃； 检测波长：280nm. 洗脱梯度：以乙腈的百分比浓度表示(B液溶于A液) 0 ～5 % ，10min； 5%～20%，10～20min； 20%～40%，20～40min； 40%～50%，40～50min； 50%～5%，45～50min； 5%～0，50～60min。 稳定液配制：取0.5g 抗坏血酸置于1L 容量瓶中，加约500mL 双蒸水，混合，溶解 抗坏血酸。加入100mL 乙腈，用双蒸水稀释至刻度。标准品溶液液的配制与稀释均使 用稳定液做溶剂。

测定原花青素含量(硫酸香草醛法)1

香草醛法测定原花青素的含量 说明：原花青素的抗氧化性受到聚合物的影响，以乙酸为溶剂，香草只与原花青素中的末端的黄烷-3-醇发生缩合生成红色产物，由红色产物吸光度测定原花青素含量。通过正交实验和单因素实验考查了硫酸香草醛法测定原花青素含量的合适条件，比色条件为硫酸浓度30%，香草醛浓度1%，反应T为30℃，反应时间为30分钟。以儿茶素为标准品绘制标准曲线测定原花青素含量。 一、器材/试剂 紫外分光光度计恒温水浴锅电子天平 儿茶素标准品（浓度＞＝98%）；香草醛 ( 分析纯) ；硫酸 ( 分析纯) ；冰乙酸 ( 分析纯) ；实验用水为二级反渗透去离子水。 二、实验步骤 1.配制试剂 ( 1 )配制儿茶素标准品溶液：称取一定量的儿茶素标准品，分别用去离子水定容至一定体积，配制成物质的量浓度为0.025~0.25 mm o l · mL 的儿茶素标准品溶液； ( 2 )配制香草醛乙酸溶液：称取一定量的香草醛，分别用乙酸定容至一定体积，配制成浓度为1 ％； ( 3 )配制硫酸乙酸溶液：量取一定体积的浓硫酸，分别用乙酸定容至一定体积，配制成浓度为3 0 ％的硫酸乙酸溶液。 （4）样品溶液：原花青素溶液

以火棘果为原料，按液固比 6：1加入 4 0 ％乙醇溶液，4 5 ℃下浸提 1.5 h，问歇搅拌，连提3次，过滤，滤液旋蒸，回收溶剂。浓缩液经过预处理好的AB一8树脂吸附，用去离子水洗涤、6 0％乙醇溶液洗脱，收集洗脱液，6 0％乙醇洗脱液即为样品溶液。 2、扫描最大吸收波长 取0．5mL儿茶素标准品溶液，加入2．5mL30％的硫酸乙酸溶液，2.5mL 1％的香草醛乙酸溶液，混合均匀，30℃水浴中避光反应15min。以无水乙酸做参比，在可见光区(400～800nm)进行光谱扫描。确定最大吸收波长，以后在此波长下测定样品的含量。 3、绘制标准曲线（在最大波长吸收处测得吸光度） 浓度0.025 0.035 0.045 0.055 0.065 0.075 0.085 0.095 A（儿茶 素） 0.105 0.115 0.125 0.135 0.145 0.155 0.165 0.175 A（儿茶 素） 0.185 0.195 0.205 0.215 0.225 0.235 0.245 A（儿茶 素） 测原花青素样品的吸光度，通过以上标准曲线所得的标准曲线回归线方程计算得样品浓度。 注：实验须重复4次，

原花青素含量检测的概述

原花青素含量检测的概述 【摘要】对目前原花青素常用的检测方法进行了对比并阐述了各种方法的优缺点，为探索更好的原花青素的测定方法奠定基础。 【关键词】原花青素；检测；含量 原花青素是一类广泛存在于植物中的黄烷醇单体及其聚合体的多酚类混合物，具有抗氧化和自由基清除能力等生物活性。自20世纪60年代以来，在保健品、医药和化妆品领域获得了广泛应用。研究表明[1]，儿茶素和表儿茶素是构成原花青素的结构基础，继而形成缩合成二聚体、三聚体至高聚体。且单体具有旋光性，因此要想测定每一种成分的含量非常困难。目前国内外对原花青素含量的测定方法尚未统一，现介绍几种常用的方法。 1.可见分光光度法[2] 原花青素最常用的测定方法是可见分光光度法，它分为KMnO4法[3]、正丁醇-盐酸法、香草醛-强酸法、铁盐催化比色法、和pH示差法等。正丁醇-盐酸法、香草醛-强酸法两种方法是目前普遍采用的相对专一、灵敏的、简单迅速测定原花青素的方法。 1.1 Porter法（Bate-smith法） 又叫盐酸-正丁醇法，是依据原花青素在无机酸和加热的条件下被降解，产生红色花青素，在546nm处有最大吸收，原花青素的含量与吸光度值符合朗伯-比尔定律[4]。 在强酸作用下，聚合原花青素单元间的连接键易被打开，上部单元生成黄烷-3-醇，下部单元生成花色素。而对于黄烷3，4-二醇单体原花青素来说，C-4位有极强的亲电性，其醇羟基与C-5，C-7上的酚羟基形成了一个苄醇系统，使得4位碳易于生成正离子。在强酸作用下，正碳离子失去质子，生成花色素[5]。对于黄烷-3-醇单体，不会有正离子形成，因此与儿茶素和表儿茶素的单体不发生显色反应。此法对原花青素具有专一选择性，儿茶素、黄酮类、棓酸类及水解单宁类化合物皆不具备此反应，不适宜于低聚原花青素的测定，它与原花青素的高聚体反应也不完全。 随后，Porter等对该法的反应条件进行了探索，并认为Fe3+、Co2+、Cu2+等金属离子可催化加速自氧化过程，提高转化率，其中以Fe3+的催化效果最好。 1.2香草醛-强酸法 常用的酸有盐酸和硫酸，目前的观点认为浓H2SO4更合适，可以提高吸光度值和灵敏性，褪色也较慢[6]。

植物原花青素(OPC)含量检测试剂盒说明书 微量法

植物原花青素（OPC）含量检测试剂盒说明书微量法 注意：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定。 货号：BC1355 规格：100T/48S 产品内容： 提取液：60%乙醇，自备，4℃保存。 试剂一：11%盐酸8mL，自备,4℃保存。即2.4mL盐酸溶于5.6mL蒸馏水 试剂二：粉剂×1瓶，4℃避光保存，临用前加8mL提取液溶解。 工作液：临用前按照用量将试剂一和试剂二按照1:1混合。 标准品：粉剂×1支，10mg原花青素。 产品说明： 原花色素（Oligomeric Proantho Cyanidins，OPC）是一类黄烷醇单体及其聚合体的多酚化合物，广泛存在于植物的各种器官中，具有极强的抗氧化性和清除自由基的作用，广泛的应用于医药，食品，化妆品，保健品行业。 在酸性条件下，植物原花青素A环上的间苯二酚和间苯三酚与香草醛发生缩合反应，产生有色化合物，在500nm处有特征吸收峰，测定500nm光吸收值，可计算植物中原花青素的含量。 自备实验用品及仪器： 天平、常温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、蒸馏水、11%盐酸和60%乙醇。操作步骤： 一、OPC提取: 将样本烘干至恒重，粉碎，过40目筛之后，称取约0.1g，加入1mL提取液，用超声提取法进行提取，超声功率300W，破碎5s，间歇8s，提取，30min，12000rpm，25℃，离心10min，取上清，用提取液定容至1mL，待测。 二、测定操作表:

1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至500nm，蒸馏水调零。 2、用提取液将原花青素配制成10mg/mL标准液，用提取液梯度稀释为5、2.5、1.25、0.625、0.3125、0.156、 0.078、0.039、0.02、0.01mg/mL的标准溶液。 3、操作表 对照管测定管标准管空白管样本（μL）4040 标准溶液（mg/mL）40 工作液（μL）160160160 H O（μL）16040 2 混匀，30℃水浴30min，立即于微量石英比色皿/96孔板中检测500nm处吸光值，计算?A测定=A测定管-A对照管，?A标准=A标准管-A空白管。空白管只需做一管 三、OPC计算公式: 1、标准曲线的绘制 以?A标准为y轴，标准溶液浓度为x轴，绘制标准曲线，得到方程y=kx+b。 2、OPC的计算 将?A测定带入方程，得到x（mg/mL） （1）按样本鲜重计算 OPC含量（mg/g鲜重）=x×V提取÷W=x÷W。 （2）按样本蛋白浓度计算 OPC含量（mg/mg prot）=x×V提取÷（Cpr×V提取）=x÷Cpr V提取：加入提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样品质量，g。 注意事项： 1、配制好的试剂二应尽快使用，4℃保存时间不超过一个月。 2、吸光度变化应该控制在0.006-1.2之间。否则加大样品量或稀释样品，注意计算公式中参与计算的稀释 倍数要相应改变。

保健食品检验与评价技术规范》2003版中“保健食品中原花青素的测定

花青素的测定 保健食品检验与评价技术规范》 2003 版中“保健食品中原花青素的测定 原花青素含量测定方法 1、 原理 原花青素是含有儿茶素和表儿茶素单元的聚合物。原花青素本身无色，但经过 用 热酸处理后，可以生成深红色的花青素离子。本方法用分光光度法测定原花青素 在水解过程中生成的花青素离子。计算试样中原花青素含量。 硫酸铁铵 NH4Fe(S04)2?12HO 溶液：用浓度2mmol/l 盐酸配成2%(w/v)的 溶液。 4.1.1 片剂 取 20 片试样，研磨成粉状。 4.1.2 胶囊 挤出 20 粒胶囊内容物，研磨或搅拌均匀，如内容物含油，应将内 容物尽可能挤出。 4.1.3 口服液 摇匀后取样。 4.2 提取 保健食品检验与评价技术规范》 2003 版中 保健食品中原 2.1 甲醇 分析纯 2.2 正丁醇 分析纯 2.3 盐酸 分析纯 2 、 试剂 2.4 2.5 原花青素标准品 葡萄籽提取物，纯度 95% 3、 仪器 3.1 分光光度计 3.2 回流装置 4、 分析步骤 4.1 试样的制备

421粉状试样称取50-100mg试样置于50ml容量瓶中，加入30ml甲醇，超声处理20min,放冷至室温后，加甲醇至刻度，摇匀，离心或放置至澄清后取上清液备用。 4.2.2含油试样称取50mg试样置于小烧杯中，用20ml甲醇分数次搅拌，将 原花青素洗入50ml 容量瓶中，直至甲醇提取液无色，加甲醇至刻度，摇匀。 5.2.3 口服液吸取适量试样(取样量不超过1ml)置于50ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀。 4.3 测定 4.3.1标准曲线称取原花青素标准品10.0mg溶于10ml甲醇中，吸取该溶液 0、0.1、0.25、0.5、1.0、1.5ml置于10ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀。各 取1ml 测定。与试样测定方法相同。 4.3.2 试样测定将正丁醇与盐酸按95:5 的体积比混合后，取出6ml 置于具塞 锥瓶中，再加入0.2ml硫酸铁铵溶液和1ml试样溶液，混匀，置沸水浴回流, 精确加热40min后，立即置冰水中冷却，在加热完毕15min后，于546nm波长处测 吸光度，由标准曲线计算试样中原花青素的含量。显色在 1 小时内稳定。5、分析结果表述 试样中原花青素测定结果按(1) 式计算 5.1 计算: m1x v x 1000 m x 1000x 1000 式中:X —试样中原花青素的百分含量，g/100g; m1—反应混合物中原花青素的量，ug; v—待测样液的总体积，ml; m—试样的质量，mg 5.2 结果表示

葡萄籽提取物中原花青素含量的最佳测定方法

葡萄籽提取物中原花青素含量的最佳测定方法 葡萄籽提取物-原花青素被誉为“最强效的自由基清除剂”，其抗氧化能力是VC的20倍，VE的50倍。也是唯一能透过血脑屏障的抗氧化剂，因此在促进皮肤新陈代谢，分解黑色素，以及提高机体免疫力，延缓衰老方面的应用极为广泛。 葡萄籽提取物由原花青素、儿茶素、表儿茶素、没食子酸等多酚类物质组成的，由于原花青素的成分极其复杂，目前的研究实验中还无法提供原花青素的标准品，因此Bate-Smith 和Porter法只能测定葡萄籽提取物中原花青素的相对含量。 一、Bate-Smith法、Porter法测定葡萄籽原花青素含量 西安源森生物实验室对Bate-Smith法和Porter法测定原花青素相对含量实验进行了研究：（一）Bate-Smith法测定葡萄籽原花青素含量 【实验目的】由于目前没有原花青素的标准品，因此此方法测定的只是葡萄籽提取物中原花青素的相对值，其含量用原花青素指数(procyanidolic index)来表示。 【Bate-Smith法原理】原花青素在酸性条件下加热转化为红色的花青素(图1)。 【实验步骤】称取适量的葡萄籽提取物(约15～40mg)用甲醇溶解，最后定溶于100ml。从中取1ml样品溶液加到10ml比色管中，然后再加入6ml盐酸-正丁醇溶液(5/95,V/V)，在97℃±1下反应40min后，取出迅速冷却，在550nm处测定其吸光度，以甲醇代替提取物溶液作为空白。 原花青素指数=A×7.0/W W:样品质量(g)； A:吸光度 【实验结果】由于用Bate-Smith法测得的葡萄籽提取物中原花青素指数一般在80～100之间，有时也可能大于100。因此，目前很多植物提取物生产厂家使用原花青素指数来表示葡萄籽提取物中原花青素的百分含量，是不正确的。 （二）Porter法测定葡萄籽原花青素含量 【实验概述】由于Bate-Smith法测定的结果重现性很差,并且原花青素在此条件下反应不是很彻底。因此Porter等人对Bate-Smith法进行了改进。Porter法改进之处主要是在试剂中添加了Fe3+，以提高反应的程度和颜色的稳定性。此方法测定的也是原花青素的相对含量，结果用PVU(porter value unit)表示。 【实验步骤】称取适量的葡萄籽提取物(约10～30mg)用甲醇溶解，最后定溶于100ml。从中取1ml样品溶液加到10ml比色管中，然后依次加入6ml盐酸-正丁醇(5/95,V/V)，0.2ml 2.0%硫酸铁铵溶液(用2mol.L-1的盐酸溶解),在97℃±1下反应40min后,取出迅速冷却,在550nm 处测定其吸光度,以甲醇代替提取物溶液作为空白。

原花青素(OPC)知识解析讲解(一)

原花青素（OPC）知识解析讲解（一） 1956年，英国的哈曼博士（Denham Harmam M.D.，Ph.D）提出了著名的《自由基衰老理论》。理论中，哈曼博士详细介绍了人类衰老和生病的原因：人体内氧化过程会释放一种活泼的有害物质--自由基，它带有一个不成对电子，在体内肆意掠夺其它分子的电子，破坏了细胞、DNA、RNA和蛋白质的结构，使体内细胞、组织、脏器的功能降低、而且不能被再修复，人体免疫系统功能下降，导致各种疾病的发生、甚至死亡。 自由基理论在国际上享有盛誉。细菌、病毒通过侵入感染人体而导致疾病，自由基是通过对各种细胞的氧化损伤导致人体器官和组织功能下降，进而引起疾病与衰老。医学界和抗衰老领域称自由基是“百病之源”，人类衰、老、亡的“元凶”。因此从根源上寻找清除人体自由基的物质--抗氧化剂，是目前医学界和抗衰老研究领域的研究的重要问题，也是人类长命百岁愿望实现的关键。 随着人们对自由基认识的不断深入，具有清除自由基功能的抗氧化产品越来越受到人们的重视，各种各样的抗氧化产品相继问世，如维生素C、维生素E、β-胡萝卜素、超氧化物歧化酶（SOD）、以及微量元素产品如硒、锗等。经过多年的市场检验、比较以及科学家们的反复论证，从安全性、质量稳定性、抗氧化活性能力、资源、食品要求等因素综合分析，结论是原花青素(OPC)是最值得推广应用的产品。 在欧美等发达国家，以原花青素(OPC)为主要原料的化妆品、膳食补充剂已经被广泛应用多年，人们每天补充或者使用原花青素 (OPC)产品已经形成一种良好的生活习惯，就如同每天补充维生素一样。与注重疾病预防为主的西方健康观念相比较，其实从古代我国就有‘是故圣人不治已病治未病，不治已乱治未乱，此之谓也’的名言。注意加强日常身体锻炼和养护，提前预防衰老以及各种慢性病变的发生，对于降低疾病造成的身心痛苦、家庭负担、提高生活质量有着重要的现实意义。 原花青素（原花青素(OPC):Oligomeric Proanthocyanidins，）属于植物多酚类物质，是一种强力抗氧化剂，能够清除我们身体内部的氧自由基。原花青素(OPC)只存在于自然界部分植物中，而且

葡萄籽原花青素含量检测方法

杭州尼诺生物科技有限公司 葡萄籽原花青素 一目的：建立葡萄籽原花青素含量测定法。 二仪器：紫外可见分光光度UV—UNIC7200。 三责任者：QC检验员。 四原理： 原花青素在酸性条件下加热水解产生色素，产生色素的过程是定量反应。通过检测水解产物的最大吸收波长下的吸光度对原花青素进行定量。在吸光度0.2-0.7纳米范围内浓度和吸光度呈线性关系。 五试剂和对照品： 甲醇（分析纯）正丁醇（分析纯） 盐酸（分析纯）硫酸铁铵（分析纯） 葡萄籽对照品（公司自制） 六试剂配制及溶液配制： 1 试剂配制： 50%甲醇溶液：量取50毫升甲醇溶于50毫升纯化水中。 盐酸正丁醇溶液：量取5毫升盐酸溶于95毫升正丁醇，置阴凉处避光保存。 硫酸铁铵盐酸溶液：称取2克，NH4F e (SO4)212H2O溶于100毫升2摩尔/升的盐酸水溶液中。 2 溶液配制： 对照品溶液：称取10毫克葡萄籽对照品，精密称定，用50%甲醇溶解并定容到100毫升容量瓶中。 供试品溶液：称取10毫克葡萄籽供试品，精密称定，用50%甲醇溶解并定容到100毫升容量瓶中。七测定步骤： 在一系列10毫升具塞硼硅酸玻璃刻度试管中，各加0.2毫升硫酸铁铵盐酸溶液，6毫升正丁醇盐酸溶液，再逐个加1毫升待测样品溶液，1毫升对照品溶液，1毫升甲醇（空白），记录试管体积V A。加塞，振荡混匀。于98。C沸水浴中反应45分钟，取出试管于冰水中迅速冷却，记录试管的体积V B。 在546纳米处用紫外分光光度计检测相对于空白的吸光度。 八计算： 此方法受环境因素影响，操作中用对照品来定量待测样，其计算公式如下： 原花青素%=K×A1×M2×V1/（A2×M1×V2） 式中： A1 为供试品吸收度 A2 为对照液吸收度 M1 为供试品称样量 M2 为对照品称样量 V1 为供试品最终体积V A-V B V2 为对照品液最终体积 K 为对照品的含量

原花青素：我不是花青素

原花青素是葡萄籽中的主要成分之一，是一种强效抗氧化剂，不过对于原花青素的认识，不少人会将其与花青素混淆，事实上，花青素与原花青素并不是同一种 物质，二者存在多方面的差异。 原花青素也叫前花青素，英文名是Oligomeric Proantho Cyanidins 简称OPC，是一种在热酸处理下能产生花色素的多酚化合物，是目前国际上公认的清除人体 内自由基有效的天然抗氧化剂。一般为红棕色粉末，气微、味涩，溶于水和大多 有机溶剂。原花青素属于植物多酚类物质，分子由儿茶素，表儿茶素(没食子酸) 分子相互缩合而成，根据缩合数量及连接的位置而构成不同类型的聚合物，如二聚体、三聚体、四聚体十聚体等，其中二到四聚体称为低聚体原花青素(Oligomeric Proanthocyanidins ，缩写为OPC) ，五以上聚体称为高聚体。在各聚合体原花青素中功能活性最强的部分是低聚体原花青素(OPC) 。部分二聚体、三聚体、四聚体的结构式。通常把聚合度小于 6 的组分称为低聚原花青素,如儿茶素、表儿茶素、原花青素B1 和B2 等,而把聚合度大于 6 的组分称为多聚体。一般认为,药用植物提取物中存在的低聚原花青素是有效成分,它们具有抗氧化、捕捉自由基等多种生物活性。

花青素(Anthocyanidin) ，又称花色素，是自然界一类广泛存在于植物中的水溶性 天然色素，属黄酮类化合物。也是植物花瓣中的主要呈色物质，水果、蔬菜、花 卉等颜色大部分与之有关。在植物细胞液泡不同的pH 值条件下，使花瓣呈现五彩缤纷的颜色。在酸性条件下呈红色，其颜色的深浅与花青素的含量呈正相关性， 可用分光光度计快速测定，在碱性条件下呈蓝色。花青素的基本结构单元是 2 一苯基苯并吡喃型阳离子，即花色基元。现已知的花青素有20 多种，主要存在于植物中的有：天竺葵色素(Pelargonidin) 、矢车菊色素或芙蓉花色素(Cyanidin) 、翠雀素或飞燕草色(Delphindin) 、芍药色素(Peonidin) 、牵牛花色素(Petunidin) 及锦葵色素(Malvidin) 。自然条件下游离状态的花青素极少见，主要以糖苷形式 存在，花青素常与一个或多个葡萄糖、鼠李糖、半乳糖、阿拉伯糖等通过糖苷键 形成花色苷。已知天然存在的花色苷有250 多种。 花青素与原花青素的区别，首先从化学结构来看，花青素与原花青素是两种完全 不同的物质，原花青素属多酚类物质，花青素属类黄酮类物质。原花青素也叫前花青素，在酸性介质中加热均可产生花青素，故将这类多酚类物质命名为原花青素。

原花青素值的测定

3．1 原花青素值的测定 原花青素值的测定采用Bates—smith法和Poaer 法。原理：原花青素在酸性条件下加热转化为红色的花青素，而儿茶素、表儿茶素等黄烷一3一醇单体没有此反应(图2)。它们测出的结果是原花青素的相对含量，分别用原花青素指数和PVU表示，是根据经验公式求得的。葡萄籽提取物中的原花青素指数一般在80～100之间，PVU一般在250～350之间。 原花青素值只是相对含量，并非原花青素的真实含量。据调查，同为原花青素值95的产品，多酚含量相差15％，质量大相径庭四。很多生产厂家使用原花青素指数来表示葡萄籽提取物中原花青素的百分含量是错误的。 3．2 原花青素含量的测定 原花青素的含量测定方法很多，也比较混乱。常用的有以下几种方法。 3．2．1 铁盐催化法 此方法的反应原理与原花青素值测定原理相同，在计算原花青素的含量时使用了原花青素标准品。Fe¨、盐酸为常用的催化剂和酸解剂。由于水、乙醇为反应介质时吸光值很低，一般采用正丁醇为反应介质【15-161。通常的具体操作：取1．0 mL 样液(或原花青素溶液)于10 mL刻度试管中，加入6．0 mL正丁醇一浓盐酸(95：5)与2％硫酸铁铵溶液(溶解于2 mol／L 盐酸)0．2mL，混匀，置于沸水浴中加热40min后，立即取出用冰水快速冷却至室温，在550 Nm处测定吸光值。 此方法较简便，而且对原花青素的选择性反应较好。铁盐催化法对反应体系中的含水量和Fe 浓度要求比较严格，一般要求含水量6％，Fe 浓度4．5x10 ％，而且过高的Fe¨浓度对反应没有影响【l51。傅武胜【l61 研究表明3％～4％为合适的含水量，Fe 浓度选择在9．OxlO ％左右。但是也有学者总结分析2％～6％含水量对花青素的形成有抑制作用，稍高的Fe¨浓度(>15 g／L)也抑制花青素的生成. 在铁盐催化反应的基础上，杨大进【l I等人利用高效液相色谱法检测了原花青素含量。该方法将原花青素在上述铁盐催化条件下生成的深红色花青素离子进行高效液相色谱分析，从而确定原花青素的含量。此方法能够排除部分杂质的影响，具有定性定量准确的优点。 3．2．2 香草醛法 测定原理：原花青素和儿茶素类单体的A环的化学活性较高，在酸性条件下，其上的问苯二酚或间苯三酚与香草醛发生缩和，产物在浓酸作用下形成红色的正碳离子，样品的浓度与产生的颜色呈正相关，在500 llm波长下测定其吸收光值

花青素测定

花青素的测定 目的花青素是类黄酮类色素中最重要的一种，广泛存在于植物花、果实、茎叶中，对这些器官的观赏价值和商品形状有重要价值。本实验学习花青素的提取及测定方法。 一、实验原理 花青素在酸性溶液中呈红色，其颜色的深浅与花青素的浓度成正比。花青素酸性溶液的吸收高峰波长是530nm，摩尔消光系数为4.62×104，故可用分光光度法测定其含量。但是一些提取液中常有叶绿素存在，干扰测定。因此，需同时测定提取液在620nm（可溶性糖）和650nm（叶绿素的吸收值）波长下的光密度值，并用Greey公式准确计算出花青素的光密度值，才能计算花青素的含量。 二、材料、设备及试剂 1.材料茶叶 2.2. 设备分光光度计、电子天平、水果刀、50ml具塞三角瓶、25ml容量瓶。 3. 试剂0.1 mol·L-1的盐酸乙醇溶液（8.3ml浓盐酸用95%乙醇稀释成1L）。 三、操作方法 1. 花青素的提取取0.100g一串红和0.116g红花继木分别放在编号为1、2的三角瓶中，加10ml盐酸乙醇溶液，在60℃水浴中加10ml提取液浸提30min，把溶液倒入25ml容量瓶中，再加5ml提取液浸提15min, 把溶液倒入25ml容量瓶中，再加5ml提取液浸提15min, 把溶液倒入25ml容量瓶中，共浸提1h，最后定溶到25ml。 2. 测定以0.1mol·L-1的盐酸乙醇溶液做参比液，在分光光度计测定提取液在530nm、620nm、650nm波长下的光密度值。 四、实验结果 实验结果如下表 依据公式 1．计算花青素的光密度值 ODλ=(OD530-OD620)-0.1(OD650-OD620) 2.计算花青素含量 =ODλ ε × V ×1000000 m 花青素含量（nmol/g） ODλ:花青素在530nm波长下的光密度 ε：花青素摩尔消光系数4.62×106 v:提取液总体积（ml） m:取样质量（g） 1000000: 计算结果换算成nmol的倍数 由一串红测得结果则有：ODλ=(1.360-0.024)-0.1(0.043-0.024)=1.3341 所以，花青素含量（nmol/g）=1.3341/4.62/104×25/0.100×106=7219.156 由红花继木测得结果则有：ODλ=(0.370-0.062)-0.1(0.183-0.062)=0.2959 所以，花青素含量（nmol/g）=0.2959/4.62/104×25/0.116×106=1380.337 五、结果分析与讨论

原花青素

原花青素(Procyanidins,PC)是植物王国中广泛存在的一大类多酚类化合物的总称，起初统归于缩合鞣质或黄烷醇类，随着分离鉴定技术的提高和对此类物质的深入研究与深刻认识，现已成为独树一帜的一大类物质并称之为原花青素。原花青素主要分布在葡萄、银杏、大黄、山楂、小连翘、花旗松、日本罗汉柏、白桦树、野草莓、海岸松、甘薯等植物中，但研究发现葡萄籽提取物中原花青素的含量最高。20世纪80年代以来，人们对数十种植物的原花青素低聚体和高聚体进行了生物、药理活性的研究，发现原花青素是一种很强的抗氧化剂，具有抗氧化、抗肿瘤、保护心血管等多种生物学活性。 1原花青素抗氧化性与结构的关系 原花青素呈粉末状，易溶于水、乙酸、乙醇、丙酮等溶剂。原花青素由不同数量的儿茶素或表儿茶素结合而成，最简单的是儿茶素、表儿茶素或儿茶素与表儿茶素形成的二聚体，此外还有三聚体、四聚体等直至十聚体。按聚合度的大小，通常将二～四聚体称为低聚体，将五聚体以上的称为高聚体。在各类原花青素中，二聚体分布最广，研究最多，是最重要的一类原花青素。 原花青素之所以表现很强的抗氧化作用，由于B环上具有相邻二酚羟基广泛的电子非定域化，使得相应的氧化形式另外获得稳定状态。另外，在其高分子结构中，几个与O原子邻位的二羟酚基使得原花青素充分与金属离子(Fe(III)，Cu(II)，Al(III)及蛋白结合，络合作用的贡献在于阻止了催化自由基反应的金属离子的活性，这是原花青素具有营养和生物学价值的主要特征[1]。 黄烷间的连接类型(C4与C6结合，C4与C8结合)对原花青素捕获自由基抗氧化有很大影响，提示原花青素在水溶液中所采取的构象不同影响了它们的亲水特性，因而影响了它们与水相和脂质相中过氧化氢的相互作用[2]。二聚体中，因两个单体的构象或键结合位置的不同，可有多种异构体，已分离鉴定的8种结构形式分别命名为B1～B8，其中，B1～B4是由C4→C8键合，B5～B8由C4→C6键合。Faria等[3]通过监测耗氧量和测量共轭双烯的形成评价原花青素5种不同结构成分(单体，直到五聚体)的抗氧化能力，被实验的成分都能通过增加氧化作用的诱导时间来保护细胞膜对抗过氧化氢自由基的损害。这种作用效果呈增加趋势，直到二聚体作用最强，之后可能由于空间位阻现象的存在，随着结构复杂性的增加抗氧化作用降低。而Silva等[2]通过研究低聚原花青素抗氧化性能与结构的关系显示，随着由单体构成的二聚体、三聚体等聚合度的增加，抗氧化活性也随之增加。可能是自由羟基和氢原子数量的增加，提高了水相中抗氧化剂的功效；随着聚合度的增加，这些化合物对脂质相的分配系数也增加。 2原花青素在体内的吸收代谢 原花青素在营养学中备受关注，尤其在西方饮食中，因为它占人们摄入酮类中的一大部分，对人体健康很有帮助。然而人们仍不是很清楚在体内发挥有益作用的究竟是原花青素的单体、低聚体，还是肠道微生物的芳香族酸的衍生物。围绕这个争论，Garcia等[4]用一种合成的低聚原花青素(包含由乙基桥联的表儿茶素单位)喂养雄性Wistar大鼠(200 mg/kg体重)，这种合成的原花青素(synthetic PC ，SPC)还包括二聚体、三聚体、四聚体。食入1h 后，在血浆中检测出四甲基化二聚体原花青素(TDPC)，食用2h后，血浆中达最高浓度(14

PH示差法测量花青素含量

PH示差法测定火棘果花青素含量 原理：花青素是具有2-苯基苯并吡喃阳离子结构的衍生物，广泛存在于植物中的水溶性天然色素。花青素在自然状态下常与各种单糖形成糖苷，称为花色苷。溶液PH不同，花色苷的存在形式也不同。对于一个给定的PH值，在花色苷的4种结构之间存在着平衡：蓝色的醌式（脱水）碱，红色的花烊正离子，无色的甲醇假碱和查尔酮。花色苷在PH值很低时，其溶液呈现最强的红色。随着PH值的增大，花色苷的颜色将褪至无色，最后在高PH值时变成紫色或蓝色。PH示差法测定花色苷含量的依据是花色苷发色团的结构转换是PH的函数，起干扰作用的褐色降解物的特性不随PH变化。因此在花青素最大吸收波长下确定两个对花青苷吸光度差别最大但是对花色苷稳定的PH值。 原料与仪器 原料：火棘果花青素提取液，乙醇95%（AR），盐酸 仪器：PHs-3B型酸度计，紫外分光光度计 实验步骤： 1，火棘果的定性分析 取提取液稀释至一定的体积，用稀氢氧化钠和稀盐酸调节PH，观察提取液在不同PH下的颜色变化。对提取液进行200~800nm全波长扫描，绘制光谱图 PH 1.0 2.0 原液 4.5 9.5 溶液颜色

2，测定波长的选择 取火棘果花青素提取液用5%HCL-EtOH（15:85）溶液稀释至一定体积，进行光谱扫描，确定最大吸收波长。 紫外可见吸收光谱 3，PH示差法中PH的选择 在选定PH时应考虑以下因素：在此两个PH处测定的花青素的吸收值差异应是最显著的；单一PH的轻微变动，对花青素吸光值的影响是极小的；花青素在所处的两个PH下，应是相当稳定的。由于花青素只有在酸性介质中是稳定的，因此只测定PH小于7条件下花青素吸光值的变化。PH为1.0时，花青素以红色的2-苯基苯并吡喃的形式存在PH为4.5时，花青素以无色的甲醇假碱的形式存在。因此选择PH为1.0和4.5。 4，平衡时间的确定 因为花青素在溶液介质中存在4种结构形式，这4种结构形式在某一PH下处于动态平衡，当PH改变时，动态平衡发生转移，总的趋势是PH降低时，平衡向红色的2-苯基苯并吡喃阳离子移动；PH 升高时平衡向蓝色醌式移动。一定时间后达到一个新的平衡。因此提取液用缓冲液稀释后，必须静置一段时间，等动态平衡处于稳定后，才能测定吸光值。

葡萄籽原花青素综述报告

葡萄籽原花青素混合物抗氧化能力综述报告 汇报人：江凯一、葡萄籽原花青素与几个重要组分 ●葡萄籽原花青素是多酚类化合物的集合体，这些酚类化合物是由四种单体聚合而成的，分 别为儿茶素、表儿茶素、没食子酸和表儿茶素没食子酸酯，其中主要是儿茶素和表儿茶素。 ●上述单体的二、三、四聚合体被称作低聚原花青素（opc）；五聚体以上被称作高聚体原花 青素（ppc） ●二聚体由于两个单体构象即缩合键位的不同，有多重异构体，现已鉴定的有8种，分别是

原花青素B1~B8。而在这八个异构体中原花青素B2是活性最强的一个二聚体，由两个单体（儿茶素或表儿茶素）聚合而成 单体也是酚类化合物但它不属于原花青素，用原花青素来标定葡萄籽提取物的有效成分不能包含单体含量。所以国际目前通用的做法是，提取物原花青素含量为总多酚减去单体的含量 二、葡萄籽原花青素不同聚合度抗氧化能力比较及机理分析： 1、葡萄籽原花青素组分抗氧化能力对比前提： 葡萄籽原花青素是不同聚合度的聚合体组成的复杂化合物，每个聚合体都存在着繁多的异构体形式，而且聚合体之间还会交叉重叠。因此，以现代纯化分离工艺，除单体及几种含量较高的二、三聚体外，还无法针对单一多聚体进行抗氧化活性的定性研究。所以，目前我们比较不同聚合度抗氧化能力，主要是针对以下几个对象：单体、原花青素B2、低聚原花青素（opc）与高聚原花青素（ppc）。 2、原花青素B2与低聚原花青素DPPH抗氧化能力比较： 参考文献：《葡萄籽低聚原花青素化学成分及抗氧化研究》辛立波等小结：在清除DPPH自由基能力上，原花青素B2表现出比低聚体OPCs更强的抗氧化能力

3、单体、二聚体与多聚体原花青素混合物抗脂质过氧化能力的比较： 参考文献：《葡萄籽原花青素的聚合度与抗氧化活性关系》孙芸等上图：FM为儿茶素与表儿茶素单体混合物 FD 为二聚体各异构体混合物 FT 为聚合度大于2的原花青素混合物 三个组分抗氧化能力为FD ＞FT ＞FM，原花青素二聚体对脂质体体系的抗氧化效果优于单体。 小结：在单体与聚合体的比较中，儿茶素与表儿茶素单体抗氧化能力比聚合体低，聚合体当中二聚体的抗氧化能力较高 4、不同聚合度原花青素混合物对氧自由基清除能力比较：