Goldview I核酸染料----EB替代品
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GoldView(GV)是一种可代替溴化乙锭(EB)的新型核酸染料,其灵敏度与EB相当,使用方法与之完全相同,在100ml琼脂糖胶溶液中加入5μl GoldView?即可。在紫外透射光下双链DNA呈现绿色荧光,也可用于染RNA.由于未发现GoldView?有致癌作用,且灵敏度与EB相当,将有可能逐渐取代EB而得以广泛应用。
概述
GoldView?是一种可代替溴化乙锭(EB)的新型核酸染料,采用琼脂糖电泳检测DNA时,GoldView?与核酸结合后能产生很强的荧光信号,其灵敏度与EB相当,使用方法与之完全相同。在紫外透射光下双链DNA呈现绿色荧光,而且也可用于染RNA。
通过Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠睾丸精母细胞染色体畸变试验,致突变性结果均为阴性;而溴化乙锭(EB)是一种强致癌剂。因此用Goldview?代替EB不失为一种明智的选择。
使用方法
1. 将100ml琼脂糖凝胶溶液(浓度一般为0.8%~2%)在微波炉中融化。
2. 加入5μl GoldView,轻轻摇匀,避免产生气泡。
3. 冷却至不烫手时倒胶,待琼脂糖凝胶完全凝固后上样电泳。
4. 电泳完毕在紫外灯下观察。若使用数码相机照相记录,则关闭相机的闪光灯,放在自动档即可;若使用凝胶成像系统照相,通过调节光圈、曝光时间,选择合适的滤光片,可得到成像清晰、背景较低的照片。
注意事项
1. 胶厚度不宜超过0.5cm,胶太厚会影响检测的灵敏度。
2. 加入GoldView的琼脂糖凝胶反复融化可能会对核酸检测的灵敏度产生一定影响,但不明显。
3. 通过凝胶电泳回收DNA片段时,建议使用GoldView染色,在自然光下切割DNA条带,避免紫外线与EB对目的DNA产生的损伤,可明显提高克隆、转化、转录等分子生物学下游操作的效率。
4. 虽然未发现GoldView有致癌作用,但对皮肤、眼睛会有一定的刺激,操作时应戴上手套。
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EB(Ethidium bromide)长期用作PCR产物电泳检测中的核酸染料,由于其可
以牢固得与双链DNA分子结合,万一操作不当,可能对人体健康造成不良影响。
根据现有的网上资料,我们总结了几种EB替代染料。
一. AtlasSight DNA Stain
无致癌性,Ames艾姆斯氏试验(致突变试验)显示比EB引起更少的突变,骨髓
嗜多染红细胞微核试验结果和对小鼠精母细胞的染色体畸变分析结果阴性。AtlasSight DNA Stain适合于核酸电泳应用。可加入预制胶后待电泳后染色,同EB一样灵敏,使用方式同EB相同。同DNA结合后发出绿色荧光。
AtlasSight DNA Stain染色的凝胶
EB染色的凝胶
二. RedGel
Ames艾姆斯氏试验结果表明,比EB引起更少的突变。可加入预制胶后待电泳后染色,灵敏度高。
三. 花菁染料
分子量远大于EB(EB分子量394),如果手接触到花菁染料,也不用担心染料会马上进入细胞和DNA结合。
GeneFinder,属于花菁类染料,毒性很低,其检测核酸的灵敏度比EB染色法平均高10倍左右,与SYBR Green I染料的灵敏度相当。
GeneFinder?染料最大吸收峰为470nm,与该染料结合的核酸呈现绿色荧光。产品描述:
GelRed 是一种高灵敏、低毒性和超安全的荧光核酸凝胶染色试剂。它可替代溴化乙锭(EB),并且远高于EB的灵敏度,同时不需要脱色。由于GelRed和EB有相同的光谱特性,因此用它替代EB时不需要更换成像系统。
GelRed既可用于预制凝胶也可用于电泳后染色。通常电泳后染色的灵敏度更高,并能排除染料对DNA迁移的干扰。使用GelRed进行电泳后染色,操作简单,不需要脱色和特殊溶液。只要将染料稀释在0.1M NaCl 中,并将凝胶置于染色液中,30 分钟后就可以观察。染色液在室温下极为稳定,可以多次反复使用。相比而言,预制凝胶由于不需要额外染色过程,因此染料用量更少,更为简单经济。
其水溶染色剂通过美国环保局安全认定,废弃物可直接倒入下水道,而不会造成任何环境污染。
重要提示:
1、无毒性:GelRed独特的油性和大分子量特点使其不能穿透细胞膜进入细胞内,艾姆斯氏试验结果也表明,该染料的诱变性远小于EB。其水溶染色剂通过美国环保局安全认定,废弃物可直接倒入下水道,而不会造成任何环境污染。
2、灵敏度高:适用于各种大小片段的电泳染色,对核酸迁移的影响小于SYBR Green I。
3、稳定性高:可以使用微波炉加热,可以在室温下保存。
4、信噪比高:样品荧光信号强,背景信号低。
5、操作简单:与EB 一样,在预制胶和电泳过程中不必担心染料降解;而电泳后染色过程也只需30 分钟且无需脱色或冲洗,即可直接用紫外凝胶透射仪观察。
6、适用范围广:适用于预制凝胶(胶染法)和凝胶电泳后染色(泡染法)。
7、与标准凝胶成像系统完美兼容:使用312nm 激发的UV 凝胶成像系统时,GelRed 可以完美的替代EB