生物等效性研究指导原则(英文版)

Technique Guideline for Human Bioavailability and Bioequivalence

Studies on Chemical Drug Products

Contents

(Ⅰ) Establishment and Validation for Biological Sample Analysis Methods (2)

1. Common Analysis Methods (2)

2. Method Validation (2)

2.1 Specificity (2)

2.2 Calibration Curve and Quantitative Scale (3)

2.3 Lower Limit of Quantitation (LLOQ) (3)

2.4 Precision and Accuracy (4)

2.5 Sample Stability (4)

2.6 Percent recovery of Extraction (4)

2.7 Method Validation with microbiology and immunology (4)

3. Methodology Quality Control (5)

(Ⅱ) Design and Conduct of Studies (5)

1. Cross-over Design (5)

2. Selection of Subjects (6)

2.1 Inclusion Criteria of Subjects: (6)

2.2 Cases of Subjects (7)

2.3 Division into Groups of the Subjects (7)

3. Test and Reference Product, T and R (8)

4. Sampling (8)

(Ⅲ) Result Evaluation (9)

(Ⅳ) Submission of the Contents of Clinical Study Reports (9)

Technique Guideline for Human Bioavailability and Bioequivalence

Studies on Chemical Drug Products

Specific Requirements for BA and BE Studies

(Ⅰ) Establishment and Validation for Biological Sample Analysis Methods

Biological samples generally come from the whole blood, serum, plasma, urine or other tissues. These samples have the characteristics such as little quantity for sampling, low drug concentration, much interference from endogenous substances, and great discrepancies between individuals. Therefore, according to the structure, biological medium and prospective concentration scale of the analytes, it is necessary to establish the proper quantitative assay methods for biological samples and to validate such methods.

1. Common Analysis Methods

Commonly used analysis methods at present are as follows: (1) Chromatography: Gas Chromatography(GS), High Performance Liquid Chromatography (HPLC), Chromatography－mass Spectrometry (LC-MS, LC-MS-MS, GC-MS, GC-MS-MS), and so on. All the methods above can be used in detecting most of drugs; (2) Immunology methods: radiate immune analysis, enzyme immune analysis, fluorescent immune analysis and so on, all these can detect protein and polypeptide; (3) Microbiological methods: used in detecting antibiotic drug.

Feasible and sensitive methods should be selected for biologic sample analysis as far as possible.

2. Method Validation

Establishment of reliable and reproducible quantitative assay methods is one of the keys to bioequivalence study. In order to ensure the method reliable, it is necessary to validate the method entirely and the following aspects should be generally inspected:

2.1 Specificity

It is the ability that the analysis method has to detect the analytes exactly and exclusively, when interference ingredient exists in the sample. Evidences should be provided that the analytes are the primary forms or specific active metabolites of the test drugs. Endogenous instances, the relevant metabolites and degradation products in biologic samples should not interfere with the detection of samples. If there are several analytes, each should be ensured not to be interfered, and the optimal detecting conditions of the analysis method should be maintained. As for chromatography, at least 6 samples from different subjects, which include chromatogram of blank biological samples, chromatogram of blank biologic samples added control substance (concentration labeled) and chromatogram of biologic samples after the administration should be

examined to reflect the specificity of the analytical procedure. As for mass spectra (LC-MS and

LC-MS-MS) based on soft ionization, the medium effect such as ion suppression should be considered during analytic process.

2.2 Calibration Curve and Quantitative Scale

Calibration curve reflects the relationship between the analyte concentration and the equipment response value and it is usually evaluated by the regression equation obtained from regression analysis (such as the weighted least squares method). The linear equation and correlation coefficient of the calibration curve should be provided to illustrate the degree of their linear correlation. The concentration scale of calibration curves is the quantitative scale. The examined results of concentration in the quantitative scale should reach the required precision and accuracy in the experiment.

Dispensing calibration samples should use the same biological medium as that for analyte, and the respective calibration curve should be prepared for different biological samples. The number of calibration concentration points for establishing calibration curve lies on the possible concentration scale of the analyte and on the properties of relationship of analyte/response value. At least 6 concentration points should be used to establish calibration curve, more concentration points are needed as for non-linear correlation. The quantitative scale should cover the whole concentration scale of biological samples and should not use extrapolation out of the quantitative scale to calculate concentrations of the analyte. Calibration curve establishment should be accompanied with blank biologic samples. But this point is only for evaluating interference and not used for calculating. When the warp* between the measured value and the labeled value of each concentration point on the calibration curve is within the acceptable scale, the curve is determined to be eligible. The acceptable scale is usually prescribed that the warp of minimum concentration point is within ±20% while others within ±15%. Only the eligible calibration curve can be carried out for the quantitative calculation of clinical samples. When linear scale is somewhat broad, the weighted method is recommended to calculate the calibration curve in order to obtain a more exact value for low concentration points. ( *: warp=[(measured value － labeled value)/labeled value]×100%)

2.3 Lower Limit of Quantitation (LLOQ)

Lower limit of quntitation is the lowest concentration point on the calibration curve, indicating the lowest drug concentration in the tested sample, which meets the requirements of accuracy and precision. LLOQ should be able to detect drug concentrations of samples in 3~5 elimination

half-life or detect the drug concentration which is 1/10~/20 of the C max. The accuracy of the detection should be within 80~120% of the real concentration and its RSD should be less than 20%. The conclusions should be validated by the results from at least 5 standard samples.

2.4 Precision and Accuracy

Precision is, under the specific analysis conditions, the dispersive degree of a series of the detection data from the samples with the same concentration and in the same medium. Usually, the RSD from inter- or intra- batches of the quality control samples is applied to examine the precision of the method. Generally speaking, the RSD should be less than 15% and that around LLOQ should be less than 20%. Accuracy is the contiguous degree between the tested and the real concentrations of the biological samples (namely, the warp between the tested and the real concentrations of the quality-controlled samples). The accuracy can be obtained by repeatedly detecting the analysis samples of known concentration which should be within 85~115% and which around LLOQ should be within 80~120%.

Generally, 3 quality-control samples with high, middle and low concentrations are selected for validating the precision and accuracy of the method. The low concentration is chosen within three times of LLOQ, the high one is close to the upper limit of the calibration curve, and the middle concentration is within the low and the high ones. When the precision of the intra-batches is detected, each concentration should be prepared and detected at least 5 samples. In order to obtain the precision of inter-batches, at least 3 qualified analytical batches, 45 samples should be consecutively prepared and detected in different days.

2.5 Sample Stability

According to specific instances, as for biological samples containing drugs, their stabilities should be examined under different conditions such as the room temperature, freezing, thaw and at different preservation time, in order to ensure the suitable store conditions and preservation times. Another thing that should be paid attention to is that the stabilities of the stock solution and the analyte in the solution after being treated with, should also be examined to ensure the accuracy and reproducibility of the test results.

2.6 Percent recovery of Extraction

The recovery of extraction is the ratio between the responsive value of the analytes recovered from the biological samples and that of the standard, which has the same meaning as the ratio of the analytes extracted from the biologic samples to be analyzed. The recovery of extraction of the 3 concentrations at high, middle and low should be examined and their results should be precise and reproduceable.

2.7 Method Validation with microbiology and immunology

The analysis method validation above mainly aims at chromatography, with many parameters and principles also applicable for microbiological and immunological analysis. However, some special aspects should be considered in the method validation. The calibration curve of the microbiological and immunological analysis is non-linear essentially, so more concentration points

should be used to construct the calibration curve than the chemical analysis. The accuracy of the results is the key factor and if repetitive detection can improve the accuracy, the same procedures should be taken in the method validation and the unknown sample detection.

3. Methodology Quality Control

The unknown samples are detected only after the method validation for analysis of biological samples has been completed. The quality control should be carried out during the concentration detection of the biological samples in order to ensure the reliability of the method in the practical application. It is recommended to assess the method by preparing quality-control samples of different concentrations by isolated individuals.

Each unknown sample is usually detected for only one time and redetected if necessary. In the bioequivalence experiments, biological samples from the same individual had better to be detected in the same batch. The new calibration curve should be established when detecting biological samples of each analysis batch and high, middle and low concentrations of the quality-control samples should be detected at the same time. Each concentration should at least have two samples and should be equally distributed in the detection sequence of the unknown samples. When there are a large number of unknown samples in one analysis batch, the number of the quality-control samples at different concentrations should be increased to make the quality-control samples exceed 5% of the unknown sample population. The warp of detection result from the quality-control samples should usually be less than 15%, while the warp of the low concentration point should be less than 20% and at most 1/3 results of the quality-control samples at different concentrations are allowed to exceed the limit. If the detection results of the quality-control samples do not accord with the above requirements, the detection results of the samples in this analysis batch should be blanked out.

The samples with concentrations higher than the upper quantitation limit should be detected once more using corresponding diluted blank medium. As for those samples with concentrations lower than the lower quantitation limit, during pharmacokinetics analysis, those sampled before reaching C max should be calculated as zero while those after C max should be calculated as ND (Not detectable), so as to decrease the effect of the zero value on the AUG calculation.

(Ⅱ) Design and Conduct of Studies

1. Cross-over Design

Currently, the crossover design is the most wildly applied method in the BE study. As for the drug absorption and clearance, there is a transparent variation among individuals. Therefore, the coefficient of variability among individuals is far greater than that of the individual himself. That is why the bioequivalence study is generally required to be designed on the principle of self crossover control. Subjects are randomly divided into several groups and treated in sequence, of which

subjects in one group take the test products first and then the reference product, while subjects in the other take the reference products first and then the test products. A long enough interval is essential between the two sequences, which is called Wash-out period. In this way, every subject has been treated twice or more times sequentially, which is equal to self-control. Therefore, the influence of drug products on drug absorption can be discriminated from the others, and the effect of various test periods and individual difference on the results can be eliminated.

Two-sequence crossover design, three-sequence crossover design are adopted respectively according to the amount of the test product. If two varieties of drug products are to be compared, the two-treatment, two-period or two-sequence crossover design will be a preferable choice. When three varieties of products (two test products and one reference product) are included, the

three-formulation, three-period and double 3×3 Latin square design will be the suitable choice. And a long enough wash-out period is required among respective periods.

Wash-out period is set on purpose to eliminate the mutual disturbance of the two varieties of drug products and avoid the treatment in the prior period from affecting that of the next period. And the wash-out period is generally longer than or equal to 7 elimination half lives.

While the half-lives of some drugs or their active metabolites are too long, it is not suitable to apply the crossover design. Under this circumstance, parallel design is adopted, but the sample size should be enlarged.

However, as for some highly variable drugs, except for increase of the subjects, repetitive cross-over design can be applied, to test possibly existing difference in individual when receive the same preparation twice.

2. Selection of Subjects

2.1 Inclusion Criteria of Subjects:

The difference among individuals of the subjects should be minimized so that the difference of the drug products can be detected. The inclusion criteria and exclusion criteria should be noted in the trial scheme.

Male healthy subjects are recruited generally. And as to the drugs of special purpose, proper subjects are recruited according to specific conditions. If female healthy subjects are recruited, the possibility of gestation should be avoided. If the drugs to be tested have some known adverse effects, which may do harm to the subjects, patients can also be included as the subjects.

Age: 18~ 40 years old generally. The difference in age of the subjects in one batch should not be more than 10 years.

Body weight: not less than 50kg as to normal subjects. Body Mass Index (BMI), which is equal to body weight (kg)/ body height 2 (m2), is generally required to be in the range of standard body weight. For the subjects in one batch, the taken dosage is the same, the range of the body

weight, therefore, should not have great disparity.

The subjects should receive the overall physical examination and be proved healthy. There is not medical history of heart, kidney, digestive tract, nervous system, mental anomaly, metabolism dysfunction, and so on. The physical examination has revealed normal blood pressure, heart rate, electrocardiogram, and respiratory rate. Laboratory data have revealed normal hepatic function, renal function and blood function. Those examinations are essential to prevent the metabolism of drugs in vivo from being interfered by the diseases. According to the classification and safety of drugs, special items examinations are required before, during and after the test, such as the blood glucose examination, which is required in the drug trial of hypoglyceimic agents.

In order to avoid the interference by other drugs, no administration of other drugs is allowed from two weeks before and till the end of the test. Moreover, the cigarette, wine,beverage with caffeine, or some fruit juice that may affect the metabolism of the drug, is forbidden during the trial period also. The subjects had better have no appetite of cigarette and wine. Possible effects of the cigarette-addicted history should not be neglected in the discussion of results.

Due to the metabolism variance resulted by known genetic polymorphism of drugs, the safety factor which may be effected by the slow metabolism speed of drugs should be considered.

2.2 Cases of Subjects

The cases of the subjects should meet the statistic requirement. And according to the current statistical methods, 18~24 cases are enough for most drugs to meet the requirement of sample size. But as to some drugs of high variability, more cases may be required correspondingly.

The cases of a clinic trial are determined by three fundamental factors: （1）Significance level: namely, the value of α, for which value 0.05 or 5% is often adopted;（2）Power of a test: namely, the value of 1-β. β is the index that represents the probability of the type error, which is also the

Ⅱ

probability of misjudging the actually efficacy drugs as inefficient drugs, and value not less than 80% is commonly stated; （3）Coefficient of variance（CV%）and Difference（θ）: In the equivalence test of two drugs, the greater CV% and θ of the test indexes are, the more cases are required. The CV% and θ are unknown before the trial and can only be estimated by the above parameters of the owned reference products or running the preliminary test. Moreover, when a BA test has been finished, the value of N can be calculated according to the parameters such as θ, CV% and 1-β and then compared with the cases adopted in the finished BA test to determine whether the cases are reasonable or not.

2.3 Division into Groups of the Subjects

The subjects should be randomly divided into different comparable groups. The cases of the two groups should guarantee the best comparability.

3. Test and Reference Product, T and R

The quality of the reference products directly affect the results reliability of BE trial. Generally, the domestic innovator products of the same dosage form which has been approval to be on sale are commonly selected. If it failed in acquiring the innovator products, the key product on the market can also be chosen as the reference product and the related quality certifications (such as the test results of the assay and dissolution) and the reasons for option should be provided. When it comes to the drug study of specific purpose, other on-sale dosage forms which are of the same kind and similar with pharmaceutics properties are selected as the reference products and those reference products should be already on sale and qualified in quality. The difference in assay between the test product and reference product should not exceed 5%.

The test product should be the scale-up product or manufacture scale product, which is consistent with the quality standards for clinical application. And the indexes such as the in vitro dissolution, stability, content or valence assay, consistency reports between batches should be provided to the test unit for reference. As for some drugs, the data of polymorphs and optical isomers should be offered additionally. The test and reference product should be noted with the advanced development unit, batch number, specification, storage conditions and expiry date.

For future reference, the test and reference product should be kept long enough after the trial

till the product is approved to be on sale.

4. Sampling

There is a significant sense in designing the sampling point to guarantee both the reliability of the trial results and the rationality of calculating the pharmacokinetics parameters. Commonly, there should be preliminary tests or the pharmacokinetics literatures at home and abroad served as the evidences of designing the reasonable sampling points. When the blood-drug concentration assay is performed, the absorption phase, balance phase and clearance phase should be considered overall. There must be enough sampling points in every phase of the C-T curve and around the T max. The concentration curve, therefore, can fully reflect the entire procedure of the drugs distribution in vivo. And the blank blood samples are taken before the administration. Then at least 2~3 points are sampled in the absorption phase, at least 3points are sampled near the C max and 3-5 points in the clearance phase. Try to avoid that the first point gets the C max, and running the preliminary test may avoid this. When the continuously-sampling results show that the drugs’ primary forms or the active metabolites are at the point of 3～5 half- lives or the blood drug concentration is 1/10～1/20 of

C max, the values of AUC0-t/AUC0-∞are generally bigger than 80% .For the terminal clearance item doesn’t affect the evaluation of the products’ absorption process much, as to the long half-life drugs, the sampling periods should be continued long enough, so that the whole absorption process can be compared and analyzed. In the multiple administration study, the BA of some drugs is known to be

affected by the circadian rhythm, samples of which should be taken 24 hours continuously if possible.

When the BA of the test drugs can’t be determined by detecting the blood-drug concentration, if the primary forms and the active metabolites of the test drugs are mainly be excreted in urine (more than 70% of the dosage), the BA assay may be performed by detecting the urine drug concentration, which is the test of the accumulated excretion quantity of drugs in urine to reflect the intake of drugs. The test products and trial scheme should accord with the demands of BA assay. The urine samples should be collected at intervals, and the collection frequency and intervals of which should meet the demands of evaluating the excretion degree of the primary forms and the active metabolites of the test products in urine. However this method cannot reflect the absorption speed of the drugs and gets many error factors, it is not recommended generally.

Some drugs metabolize so rapidly in vivo that it is impossible to detect the primary forms in biological samples. Under these circumstances, the method determining the concentration of corresponding active metabolites in biological samples is adopted to perform the BA and BE studies.

(Ⅲ) Result Evaluation

At present, the weighting function of AUC on drug absorption degree is comparatively affirmed, while C max and T max sometimes are not sensitive and seemly enough for weighting the absorption speed due to their dependence on the arrangement of sampling time, and they are therefore not suitable for drug products with multi-peak phenomena and for experiments with large individual variation. During the evaluation, if there are some special instances of inequivalence, a specific analysis should be performed for specific problems.

As for AUC，the 90% confidence interval is generally required within the scope of 80%~125%. As for the drugs with narrow treatment spectrum, the above scope should likely be appropriately reduced. While in a few instances, having been validated to be reasonable, the scope can also be increased. So does C max. And as for T max, statistical evaluation is required only when its release speed is closely correlated to clinical therapeutic effects and safety, the equivalence scope of which can be ascertained according to the clinical requirements.

When bioavailability ratio of test products is higher than that of reference products, which is called suprabioavailability, the following two instances can be considered: 1). Whether the reference product itself is a product with low bioavailability, which results in the improvement of the test drug's bioavailability; 2). The quality of the reference product meets the requirement, and the test drug really has higher bioavailability.

(Ⅳ) Submission of the Contents of Clinical Study Reports

In order to satisfy the demand of evaluation, a clinical report of bioequivalence study should

include the following contents: (1)Experiment subjective;(2) Establishment of analysis methods for bioavailability samples and data of inspection, as well as provision of the essential chromatograms;(3) Detailed experiment design and operation methods , including data of all the subjects，sample cases，reference products，given dosage，usage and arrangement of sampling time;(4) All data about original measurement of unknown sample concentrations，pharmacokinetics parameters and drug-time curve of each subjects;(5) Data handling procedure and statistical analysis methods as well as detailed procedure and results of statistics;(6) Observation results of clinical adverse reactions after taking medicine，midway exit and out of record of subjects and the reasons;(7) Result analysis and necessary discussion on bioavailability or bioequivalence; (8) References. A brief abstract is required before the main body; at the end of the main body, names of the experiment unit, chief persons of the study and experiment personnel should be signed to take the responsibility for the results of the study.

生物对照实验中一些重要的概念

生物对照实验中一些重要的概念 经常有学生和老师想弄清楚"实验变量","反应变量","实验组","对照组","单一变量原则"等概念的含义.现归纳如下: 关于高中生物实验 实验是验证假说和解决问题的最终途径，指在人为控制的条件下研究事物的变化的一种方法。这是科学方法的最大特色，也是科学方法中最困难的一步。在科学实验中，要掌握以下几点。 1、变量，是指实验过程中所操作的特定因素或条件。按性质不同分，通常可分为两类。 （1）实验变量和反应变量 实验变量，也称自变量，指实验中由操作者所控制的因素或条件。反应变量，也称因变量，实验过程中由于实验变量而引起的变化或结果，二者具有因果关系。实验目的在于获得和解释这种前因后果。例如2004年高考42题中25℃、10℃就是实验变量，而由于温度条件的变化，小鼠的能量代谢强弱也随之变化，这就是反应变量，该实验即在于获得和解释温度变化（实验变量）和能量代谢（反应变量）的因果关系。 （2）无关变量与额外变量 无关变量也称控制变量，指在实验中除实验变量以外的能影响实验现象或结果的因素和条件。额外变量，也称干扰变量，指实验中由于无关变量所引起的变化和结果。例如，该题中小鼠呼吸作用释放的二氧化碳、密封程度等都属于无关变量。而二氧化碳的释放会影响水检压计测量的不正确，这就是一种额外变量。因此在装置中加入氢氧化碳以消除二氧化碳。所以实验的关键之一在于控制无关变量以减少额外变量。 2、单一变量原则 单一变量原则是处理实验中的复杂关系的准则之一。它有两层意思：一是确保“单一变量”的实验观测，即不论一个实验的几个实验变量，都应做到一个实验变量对应观测一个反应变量是确保“单一变量”的操作规范，即实验中要尽可能避免无关变量及额外变量的干扰。例如，该题中遵遁单一变量原则，第一，在观测上要做到：低温观测记录低温下的变化和结果，高温处理观测记录高温下的变化的结果，反应变量不能混淆；第二，在操作上要做到用冰袋先将温度下降后再充入氧气，以防止无关变量的干扰。 3、控制无关变量 控制无关变量保证实验不受干扰或将干扰因素降低到最低，以消除实验误差，取得较为精确的实验结果。常用的方法有： （1）单组实验法对一组（或一个）对象，既用A法，又用B法，顺序随机或轮流循环，这是生物实验常用的方法。如该题中先测定25℃下的能量代谢的强弱，再测定10℃条件下的能量代谢强弱。 （2）等组实验法将状况相同的对象，分成两组或多组，一组用A法，一组用B法，这也是生物实验常用的方法。 4、对照 对照是实验控制的手段之一，目的还是消除无关变量对实验结果的影响。实验对照原则是设计和实施实验的准则之一。通过设置实验对照对比，既可排队无关变量的影响，又可增加实验结果的可信度和说服力。 通常，一个实验总分为实验组和对照组。一般来说，实验组是接受实验变量处理的对象组；对照组对实验假设而言，是不接受实验变量处理的对象组。两者不是绝对的，实验组和对照组是相对而言的。通过设置实验组和对照组，从理论上说，由于实验组和对照组的无关变量的影响是相等的，被平衡了，所以实验组和对照组两者的差异，则可认定是来自实验变

1.生物等效性研究的统计学指导原则 2018年第103号 2018-10-17

附件1 生物等效性研究的统计学指导原则 一、概述 生物等效性（Bioequivalence, BE）研究是比较受试制剂（T）与参比制剂（R）的吸收速度和吸收程度差异是否在可接受范围内的研究，可用于化学药物仿制药的上市申请，也可用于已上市药物的变更（如新增规格、新增剂型、新的给药途径）申请。 目前生物等效性研究通常推荐使用平均生物等效性（Average Bioequivalence, ABE）方法。平均生物等效性方法只比较药代动力学参数的平均水平，未考虑个体内变异及个体与制剂的交互作用引起的变异。在某些情况下，可能需要考虑其他分析方法。例如气雾剂的体外BE研究可采用群体生物等效性（Population Bioequivalence，PBE）方法，以评价制剂间药代动力学参数的平均水平及个体内变异是否等效。 本指导原则旨在为以药代动力学参数为终点评价指标的生物等效性研究的研究设计、数据分析和结果报告提供技术指导，是对生物等效性研究数据资料进行统计分析的一般原则。在开展生物等效性研究时，除参考本指导原则的内容外，尚应综合参考《以药动学参数为终点评价指标的化学药物仿制药人体生物等效性研究技术指导原则》和《药物临床试验的生物统计学指导原则》等相关指导原则。 二、研究设计 （一）总体设计考虑 生物等效性研究可采用交叉设计或者平行组设计。 —1 —

1.交叉设计 生物等效性研究一般建议采用交叉设计的方法。交叉设计的优势包括：可以有效减少个体间变异给试验评价带来的偏倚；在样本量相等的情况下，使用交叉设计比平行组设计具有更高的检验效能。 两制剂、两周期、两序列交叉设计是一种常见的交叉设计，见表1。 表1 两制剂、两周期、两序列交叉设计 序列 周期 1 2 1 T R 2 R T 如果需要准确估计某一制剂的个体内变异，可采用重复交叉设计。重复交叉设计包括部分重复（如两制剂、三周期、三序列）或者完全重复（如两制剂、四周期、两序列），见表2和表3。 表2 两制剂、三周期、三序列重复交叉设计 序列 周期 1 2 3 1 T R R 2 R T R 3 R R T —2 —

(完整版)高中生物验证性实验和探究性实验专题

高一生物探究性实验专题 一、背景叙述 高中生物实验分两种类型，验证性实验和探究性实验，由于后者更能体现探究能力、实验设计能力和运用生物学知识和方法分析和解决实际问题能力；更能体现科学态度、科学精神和创新意识，每次考试都有相当比重。由于探究实验知识教材中并没有系统的整理，使同学们在做这方面题时感到无所是从。为解决这一问题，现将有关实验设计的基本理论、实验设计的思路方法和常见的类型作一介绍，以期增加理论知识，提高分析问题和解决问题的能力之目的。 二、高一生物必修一分子与细胞中所涉及的实验 实验1使用高倍显微镜观察几种细胞 实验2检测生物组织中的还原糖、脂肪和蛋白质 实验3观察DNA和RNA在细胞中的分布 实验4体验制备细胞膜的方法 实验5用高倍显微镜观察叶绿体和线粒体 实验6比较过氧化氢在不同条件下的分解 实验7绿叶中色素的提取和分离 实验8细胞大小与物质运输的关系 探究1植物细胞的吸水和失水 探究2影响酶活性的条件 探究3探究酵母菌细胞呼吸的方式 探究4环境因素对光合作用强度的影响 三、探究实验的基本内容 探究性实验一般包括：提出问题、作出假设、设计实验、进行实验并观察并记录结果（有时需收集数据）、分析结果得出结论和表达和交流六个基本内容。 （一）提出问题 人们对事物作缜密观察以后，常常由于好奇心或想作进一步的了解而提出问题，虽然任何人都能提出问题，但只有意义的问题才值得探讨，问题即为实验的题目，是实验要达到的具体目标，例如“探究植物细胞在什么条件下吸水和失水”“探究影响酶活性的条件”“酵母菌在有氧还是无氧条件下产生酒精”“光照强度对光合作用的影响” （二）作出假设 根据已有的知识和经验，对提出的问题作出尝试性的回答，也就是作出假设。假设一般分为两个步骤：第一步，提出假设；第二步，做出预期(推断)。一个问题常有多个可能的答案，但通常只有一个是正确的。因此，假设是对还是错，还需要加以验证，即依据假设或预期，设计实验方案，进行实验验证。 （三）设计实验 A、实验原则： 1、单一变量原则 实验过程中可以变化的因素称为变量。按性质不同，通常可分为三类：自变量、因变量和无关变量 自变量，指实验中人为改变的变量。因变量，指实验中随着自变量的变化而引起的变化和结果。通常，自变量是原因，因变量是结果，二者具有因果关系。实验的目的在于获得和解释这种前因后果。例如，在“温度对酶活性”的实验中，所给定的低温(冰块)、适温(37℃)、高温(沸水浴)就是实验变量。而由于低温、适温、高温条件变化，唾液淀粉酶水解淀粉的活

生物等效性试验备案的流程

为了避免大家在生物等效性试验备案的过程中少走弯路，帮助大家更顺利的通过，今天就为大家详细的讲解一下生物等效性试验备案的流程吧： （一）注册申请人向具有资质的药物临床试验机构提出申请，获得该机构伦理委员会的批准，并签署BE试验研究合同。 （二）注册申请人开展生物等效性试验前30天，应当在国家食品药品监督管理总局指定的化学药BE试验备案信息平台进行化学药BE试验备案，按要求提交备案资料。 提前30天申请，但未明确说30天未收到异议即可开展BE研究，这点很重大！ （三）备案资料主要包括注册申请人信息、产品基本信息、处方工艺、质量研究和质量标准、参比制剂基本信息、稳定性研究、原料药、试验方案设计、伦理委员会批准证明文件等。 此条对讨论稿中的“合法原料”做了终版解释，无“合法原料”说法，所以可解读为新3+5，老3+6都是可以备案的啦。 （四）注册申请人BE试验的参比制剂及各参与方的基本信息等向社会公开。 （五）注册申请人在获得备案号后，应在第1例受试者入组前在国家食品药品监督管理总局药物临床试验登记与信息公示平台完成开展试验前的所有信息登记，并由国家食品药品监督管理总局向社会公示；1年内未提交受试者入组试验信息的，注册申请人须说明情况；2年内未提交受试者入组试验信息的，所获得备案号自行失效。 （六）注册申请人应严格执行《药物临床试验质量管理规范》（GCP），按照试验方案开展BE试验。BE试验过程中，参比制剂、原料药、制剂处方、工艺等发生变更，注册申请人应停止试验，通过备案平台提交试验中止的申请，国家食品药品监督管理总局将公示其中止试验。注册申请人根据变更情况，向国家食品药品监督管理总局提交备案变更资料，生成新的备案号后重新开展BE试验。 这条写的很好，BE试验过程中的终止与变更必须引起大家的关注，BE试验在国外的一次性通过几率有多少？偷偷做人体预试验这个事儿，靠谱不？ （七）注册申请人应当在BE试验完成或因故终止一年内，在备案平台提交BE试验的总结报告或情况说明。 （八）注册申请人完成BE试验后，应将试验数据申报资料、备案信息及变更情况提交国家食品药品监督管理总局，在此基础上提出相应药品注册申请。注册申请人要承诺其注册申请资料及数据的真实、完整、规范。 BE结束后，才是正式的“药品注册申请”啦，在此之前都是企业自行验证药品质量的过程。而真实性的关注将化作永恒。 （九）未按本公告规定备案而开展的BE试验，国家食品药品监督管理总局不受理其注册申请。

总局关于发布人体生物等效性试验豁免指导原则的通告(2016

总局关于发布人体生物等效性试验豁免指导原则的通告（2016 年第87号） 2016年05月19日发布为规范仿制药质量和疗效一致性评价工作，根据《国务院办公厅关于开展仿制药质量和疗效一致性评价的意见》（国办发〔2016〕8号）的有关要求，国家食品药品监督管理总局组织制定了《人体生物等效性试验豁免指导原则》，现予发布。 特此通告。 附件：人体生物等效性试验豁免指导原则 食品药品监管总局 2016年5月18日附件 人体生物等效性试验豁免指导原则 本指导原则适用于仿制药质量和疗效一致性评价中口服固体常释制剂申请生物等效性（Bioequivalence）豁免。该指导原则是基于国际公认的生物药剂学分类系统（Biopharmaceutics Classification System，以下简称BCS）起草。

一、药物BCS分类 BCS系统是按照药物的水溶性和肠道渗透性对其进行分类的一个科学架构。当涉及到口服固体常释制剂中活性药物成分（Active Pharmaceutical Ingredient，以下简称API）在体内吸收速度和程度时，BCS系统主要考虑以下三个关键因素，即：药物溶解性（Solubility）、肠道渗透性（Intestinal permeability）和制剂溶出度（Dissolution）。 （一）溶解性 溶解性分类根据申请生物等效豁免制剂的最高剂量而界定。当单次给药的最高剂量对应的API在体积为250ml（或更少）、pH值在1.0—6.8范围内的水溶性介质中完全溶解，则可认为该药物为高溶解性。250ml的量来源于标准的生物等效性研究中受试者用于服药的一杯水的量。 （二）渗透性 渗透性分类与API在人体内的吸收程度间接相关（指吸收剂量的分数，而不是全身的生物利用度），与API在人体肠道膜间质量转移速率直接相关，或者也可以考虑其他可以用来预测药物在体内吸收程度的非人体系统（如使用原位动物、体外上皮细胞培养等方法）对渗透性进行分类。当一个口服药物采用质量平衡测定的结果或是相对于静脉注射的参照剂量，显示在体内的吸收程度≥85%以上（并且有证据证明药物在胃肠道稳定性良好），则可说明该药物具有高渗透性。 （三）溶出度

浅谈生物学实验中对照实验的类型(有例题,高中所有种类对照都有)

浅谈生物学实验中对照实验的类型 广东省揭东县登岗中学曾鹏光 摘要大多生物学实验中都需设置对照实验，在实验设计过程中，首先要区分实验组和对照组，对照实验的类型又有很多，因此要根据不同的实验，设计对照实验。本文以高中生物课本的相关实验为例，对对照实验的类型进行逐一分析。 关键词生物学实验对照原则 “对照原则”是中学生物实验设计中最常用的原则，通过设置对照实验，既可排除无关变量的影响，又可增加实验结果的可信度和说服力。 一个实验可包括实验组和对照组，实验组，是接受实验变量处理的对象组，所处理的变量就是我们要研究的内容；对照组，也称控制组，是不接受实验变量处理的对象组。按对照的内容和形式上的不同，常用的对照类型有空白对照、自身对照、相互对照、条件对照、配对对照、标准对照、阳性对照、阴性对照、安慰剂对照等9种类型。 1 空白对照 空白对照指不做任何实验实验的对照组或不给对照组以任何处理因素。值得注意的是，不给对照组任何处理因素是相对实验组而言的，实际上对照组还是要做一定的处理，只是不加实验组的处理因素，或者说相对于实验组而言，除实验变量外，别的处理与实验组完全相同。空白对照能明白地对比和衬托实验组的变化和结果，增加说服力。通常未经实验因素处理的对象组为对照组，经实验因素处理的对象组为实验组；或处于正常情况下的对象组为对照组，未处于正常情况下的对象组为实验组。例如，在“生物组织中可溶性还原糖的鉴定”的实验中，向甲试管溶液加入试剂，而乙试管溶液不加试剂（零剂量），一起进行温水浴加热，比较它们的变化。这样，甲为实验组，乙为对照组，且乙为典型的空白对照。空白对照能明白地对比和衬托出实验组的变化和结果，增强了说服力。 例题剖析：有人设计实验探究有机肥是否能提高土壤肥力并优于化肥。实验分为两组，一组农田施有机肥，一组农田施化肥。该实验设计缺少（） A．施用有机肥和适量化肥的对照田 B．既不施用有机肥也不施用化肥的对照田 C．施用大量化肥和少量有机肥的对照田 D．施用少量化肥和大量有机肥的对照田 解析：本题考查是否具有对一些生物学问题进行初步探究的能力。本题的实验目的有两个，一是探究有机肥是否能提高土壤肥力，二是探究有机肥的肥力是否优于化肥。就实验目

emea生物利用度和生物等效性研究指导原则问答

e m e a生物利用度和生物等效性研究指导原则问答 This model paper was revised by the Standardization Office on December 10, 2020

审评四部审评七室陈俊春高晨燕 EMEA自2002年对《生物利用度和生物等效性研究指导原则》（以下简称EMEA指导原则）修订后，于2006年7月发布了《生物利用度和生物等效性研究指导原则问答》（以下简称EMEA指导原则问答）对该原则的一些重要部分作出解释。以下就其问答全文结合我国的《化学人体生物利用度和生物等效性研究技术指导原则》（以下简称我国指导原则）与EMEA指导原则做一简介。 1.、生物等效判定时对Cmax的要求 EMEA指导原则的生物利用度等效评价要求Cmax比值的90％置信区间在–范围内。特殊情况下，如药物治疗窗窄，则可接受的区间范围应更窄。仅在特定情况下，才可接受更宽的区间范围，如－；而且该区间应事先确定，即在试验设计时应考虑到接受大于常规区间范围的情况，事后扩大原方案中确定的可接受区间的做法不可取；并应证明该范围对于病人更换时在安全和有效性方面的合理性。 EMEA指导原则在此提及的增加Cmax比值（非AUC）可接受区间范围的情况并不多见，并且仅扩大了一点，仍窄于我国指导原则中规定的范围－。扩大时仅限于以下情况：1）该药物安全性和有效性的PK/PD相关性资料足以显示Cmax可接受区间的扩大不会显着影响其临床药效。 2）如PK/PD资料不充分，临床安全性和有效性资料可以作为替代，但这些资料仅限于该研究药物。 3）药物在个体内的生物利用度具有高变异性。EMEA和我国的指导原则都对高变异性药物做了定义（即：个体内变异系数大于30%），但是要评价其个体内变异性需要设计重复试验。

对照实验的原则

知识改变命运, 知识改变命运,学习成就未来对照实验的一般原则教学内容: 教学内容阐述对照实验的五大原则:对照原则,单一变量原则,平行重复原则,科学性原则,平衡与平衡控制原则. 阐明自变量,因变量,无关变量等基本概念. 结合教材对实验原则进行分析. 教学目的: 培养学生的科学思维, 教学目的帮助学生理解对照实验的基本原则和基本概念, 使之对生物科学实验的方法,思路有基本认识. 教学重点:对照实验的原则. 教学重点教学难点: 教学难点:对照实验的原则. 突破策略: 突破策略:结合生活中的常见场景及科学惯例展开,积极促进学生的主动参与. 教学步骤: 教学步骤: 导入: 导入:在报纸上,我们常常可以见到减肥药的广告:一张是减肥前,一张是减肥后,两张照片有明显的身材差异,以吸引读者的注意力.这里两张照片的对比就包含着一个最基本的实验思想:对照原则——通过设置一个对照组,来使实验结果更具说服力. 如我们所知,这类广告通常有大量虚假信息,其实验并无严格的操控,因而实验结果不够准确.如果是要我们来设计并完成实验,可以从哪些方面入手. (板书) :探究服用某药物是否会减肥. 分析:对实验组(服用药物)和对照组(不服用药物)的不同处理是是否服药, 这个要严格控制的因素我们称为自变量,也叫实验变量.我们

要观察的结果是减肥的效果,是体重的变化.我们将之称为因变量,又叫反应变量. (板书) :自变量:是否服药;因变量:体重变化. 延伸: 延伸:接下来,我们需要找到实验对象.如果有两个肥胖者,那么应对他们做怎样的处理(学生回答)一个服药,一个不服药.这两名实验对象,应该满足哪些条件由学生讨论,归纳得出结论: 体重,年龄相当,健康状况接近,工作强度相同,饮食习惯相近等. 在实验过程中,年龄,体质,工作强度,饮食,生活环境都可能影响到实验结果.但却是自变量以外的因素,我们称之为无关变量.为保证体重变化只能由是否服药这一自变量引起,则实验组与对照组的无关变量应保持一致.即实验组与对照组只能有一种处理因素不同:自变量不同.这一原则称为单一变量原则. 同时,在实验中,还要注意操控无关变量.比如两组都应有较为舒适的工作与生活环境,都应有正常的适宜的饮食等.不能使无关变量对实验结果造成影响.就是说,若实验对象体重减轻,不能是因为饮食不足,工作强度过大或心理郁闷引起的.除了自变量以外,其他无关变量不光要相同,还要处于最适宜的水平,这一原则叫控制与平衡控制原则. 在上述实验中,总共只有两个实验对象.考虑到人体生命活动的复杂程度,这是不在合适的.举个例子,在实验进行中,某名实验对象突然生病,患上了严重腹泻, 很短时间内体重迅速减轻. 这将使前期的实验毫无意义. 因而在上述实验中, 应尽可能多地观察较多的实验对象, 使实验结果不是由于偶然的原因而呈现的特例.选择较多的实验对象,排除偶然误差,这是实验过程中应遵循的平行重复原则. 让我们来看看真正的科学实验.为了验证一

以松材线虫为靶标生物防治技术研究

第４７卷一第１期２０１８年２月 湖北林业科技 H u b e i F o r e s t r y S c i e n c e a n dT e c h n o l o g y V o l ．４７,N o ．１ F e b ．,２０１８ ?收稿日期:２０１７－１２－０５ 基金项目:２０１７年中央财政林业科技推广示范资金项目 松材线虫病新型生防菌剂推广示范 (鄂 ２０１７ T G １１号) .作者简介:徐红梅(１９７８~) ,女,副研究员,主要从事森林保护等科学研究.以松材线虫为靶标生物防治技术研究 徐红梅(１) 一赵一青(２)一殷一涛(２ )(１．湖北省林业科学研究院一武汉一４３００７５;２．湖北省森林病虫害防治检疫总站一武汉一４３００７９ )摘一要:一松材线虫病是林业上一种毁灭性病害,在中国仍呈蔓延趋势.松材线虫病生物防治研究的目标可以是媒介昆虫(松墨天牛),也可以是松材线虫.本文综述了以松材线虫为靶标的生物防治技术研究进展. 关键词:一松材线虫病; 松材线虫;生物防治中图分类号:S ７６３．１６一一一文献标识码:A一一一文章编号:１００４－３０２０(２０１８)０１－００５１－０５ A d v a n c e s i n B i o l o g i c a l C o n t r o l T a r g e t i n g o n B u r s a p h e l e n c h u s x y l o p h i l u s X uH o n g m e i (１) 一Z h a oQ i n g (２) 一Y i nT a o (２) (１．H u b e iA c a d e m y o f F o r e s t r y 一W u h a n 一４３００７５;２．H u b e i F o r e s t P e s tC o n t r o l a n dQ u a r a n t i n e S t a t i o n 一W u h a n 一４３００７９)A b s t r a c t :一A s ad e s t r u c t i v ed i s e a s e ,p i n ew i l t d i s e a s e r e m a i n e d p r o p a g a t i n g t r e n d i nC h i n a ．B i o l o g i c a l c o n t r o l c o u l d t a r Ｇg e t o n i n s e c t v e c t o r (M o n s c h a m u s a l t e r n a t u s )o r p a t h o g e n i c n e m a t o d e s (B ．x y l o p h i l u s )．A d v a n c e s i nb i o l o g i c a l c o n t r o l t a r Ｇg e t i n g o n B ．x y l o p h i l u s w a s r e v i e w e d i n t h i s p a p e r ．K e y w o r d s :一P i n ew i l t d i s e a s e ;B ．x y l o p h i l u s ;b i o l o g i c a l c o n t r o l 一一松材线虫病是林业上一种毁灭性病害,属国际重要检疫对象,主要分布于美国二加拿大二墨西哥二 日本二中国二韩国二朝鲜二法国二尼日利亚和葡萄牙等多个国家.目前,中国松材线虫病仍呈发展蔓延趋 势,直接经济损失数亿元[ １] .国内外一直重视松材线虫病防治技术研究,并 提出了许多有效的防治措施,主要有营林技术二物理防治二化学防治几大类.总体说来,松材线虫病的防治仍然面临着诸多困难.例如,防治成本高,部分地区松材线虫防治经费甚至高于松树经济价值;大量使用化学药剂易产生３ R 问题,即残留(r e s i d u e )二抗性(r e s i s i t a n c e )二再猖獗(r e s u r Ｇg e n c e ),尤其是杀线药剂毒性很强,隐患多.近年来,人们注重利用具有杀线活性的动物二植物二微生物对松材线虫病开展生物防治研究. 松材线虫由媒介昆虫 松墨天牛从患病木中携带而出,松墨天牛补充营养或产卵时侵染到健康 树中.松材线虫(病原线虫)二松墨天牛(传播媒介) 和松树(寄主)三者之间的生物学联系构成了松材线虫病的侵染循环.松材线虫病生物防治的目标可以是传播媒介松墨天牛,也可以是松材线虫(或其携带的致病细菌) .目前有关松墨天牛的生物防治研究和利用报道较多,直接以松材线虫或其携带的致病细菌为靶标的生物防治研究相对薄弱. １一松材线虫生防真菌 对于松材线虫具有生防潜力真菌可分为捕食真菌二内寄生真菌和产毒真菌几大类.１．１一捕食松材线虫真菌 捕食线虫真菌是自然界中广为分布的线虫天 敌,能产生捕食器官捕食线虫.捕食性真菌捕捉线虫的方式一是收缩环捕捉器套住松材线虫,从而杀死线虫并在虫体内繁殖;另一方式是三维菌网粘缠线虫,从而致死线虫,吸收其营养并在其体内繁殖.S a i k i 等从松树汁液中分离到一种捕食性真菌 －节丛孢属真菌(A r t h r o b o t r y s s p ．),对松材线虫病

人体生物等效性研究技术经验指导原则

精心整理附件3 以药动学参数为终点评价指标的 化学药物仿制药人体生物等效性研究 技术指导原则 体循环的过程，通常将受试制剂在机体内的暴露情况与参比制剂进行比较。 在上述定义的基础上，以药动学参数为终点评价指标的生物等效性研究又可表述为：通过测定可获得的生物基质（如血液、血浆、血清）中的药物浓度，取得药代动力学参数作为终点指标，藉此反映药物释放并被吸

收进入循环系统的速度和程度。通常采用药代动力学终点指标C max和AUC 进行评价。 如果血液、血浆、血清等生物基质中的目标物质难以测定，也可通过测定尿液中的药物浓度进行生物等效性研究。 药效动力学研究： 2）两 每位受试者依照随机顺序接受受试制剂和参比制剂。对于半衰期较长的药物，可选择第2种试验设计，即每个制剂分别在具有相似人口学特征的两组受试者中进行试验。第3种试验设计（重复试验设计）是前两种的备选方案，是指将同一制剂重复给予同一受试者，可设计为部分重复（单制剂重复，即三周期）或完全重复（两制剂均重复，即四周期）。重复试验设

计适用于部分高变异药物（个体内变异≥30%），优势在于可以入选较少数量的受试者进行试验。 对于高变异药物，可根据参比制剂的个体内变异，将等效性评价标准作适当比例的调整，但调整应有充分的依据。 （二）受试者选择 18 60岁 通常推荐采用单次给药药代动力学研究方法评价生物等效性，因为单次给药在评价药物释放的速度和程度方面比多次给药稳态药代研究的方法更敏感，更易发现制剂释药行为的差异。 （五）稳态研究 若出于安全性考虑，需入选正在进行药物治疗，且治疗不可间断的患

者时，可在多次给药达稳态后进行生物等效性研究。 （六）餐后生物等效性研究 食物与药物同服，可能影响药物的生物利用度，因此通常需进行餐后生物等效性研究来评价进食对受试制剂和参比制剂生物利用度影响的差异。 2小 推荐采用实测药物峰浓度C max评价吸收速度。药物浓度达峰时间T max 也是评价吸收速度的重要参考信息。 2.吸收程度/总暴露量 对于单次给药研究，建议采用如下两个参数评价吸收程度： （1）从0时到最后一个浓度可准确测定的样品采集时间t的药物浓

高中生物所有对照试验类型解说

对照实验 大多生物学实验中都需设置对照实验，在实验设计过程中，首先要区分实验组和对照组，对照实验的类型又有很多，因此要根据不同的实验，设计对照实验。本文以高中生物课本的相关实验为例，对对照实验的类型进行逐一分析。 “对照原则”是中学生物实验设计中最常用的原则，通过设置对照实验，既可排除无关变量的影响，又可增加实验结果的可信度和说服力。 一个实验可包括实验组和对照组，实验组，是接受实验变量处理的对象组，所处理的变量就是我们要研究的内容；对照组，也称控制组，是不接受实验变量处理的对象组。按对照的内容和形式上的不同，常用的对照类型有空白对照、自身对照、相互对照、条件对照等类型。 1、空白对照 空白对照指不做任何实验实验的对照组或不给对照组以任何处理因素。值得注意的是，不给对照组任何处理因素是相对实验组而言的，实际上对照组还是要做一定的处理，只是不加实验组的处理因素，或者说相对于实验组而言，除实验变量外，别的处理与实验组完全相同。空白对照能明白地对比和衬托实验组的变化和结果，增加说服力。通常未经实验因素处理的对象组为对照组，经实验因素处理的对象组为实验组；或处于正常情况下的对象组为对照组，未处于正常情况下的对象组为实验组。例如，在“生物组织中可溶性还原糖的鉴定”的实验中，向甲试管溶液加入试剂，而乙试管溶液不加试剂（零剂量），一起进行温水浴加热，比较它们的变化。这样，甲为实验组，乙为对照组，且乙为典型的空白对照。空白对照能明白地对比和衬托出实验组的变化和结果，增强了说服力。 例题剖析：有人设计实验探究有机肥是否能提高土壤肥力并优于化肥。实验分为两组，一组农田施有机肥，一组农田施化肥。该实验设计缺少（） A．施用有机肥和适量化肥的对照田 B．既不施用有机肥也不施用化肥的对照田 C．施用大量化肥和少量有机肥的对照田 D．施用少量化肥和大量有机肥的对照田 解析：本题考查是否具有对一些生物学问题进行初步探究的能力。本题的实验目的有两个，一是探究有机肥是否能提高土壤肥力，二是探究有机肥的肥力是否优于化肥。就实验目的一而言，施用有机肥的农田只有与既不施用有机肥也不施用化肥的农田作对照，才能说明有机肥是否能提高土壤肥力。答案：B 2、自身对照 自身对照指对照组和实验组都在同一研究对象上进行，不另设对照。自身对照方法简便，关键是看清实验处理前后现象变化的差异。实验处理前的对象状况为对照组，实验处理后的对象变化则为实验组。如“观察植物细胞的质壁分离和复原”实验，就出现了两次对照，其中第一次对照是在高浓度溶液处理下，质壁分离状态与自然状态形成对照；第二次对照是在低浓度溶液处理下，复原后状态与质壁分离状态形成对照。又如：要研究植物根具有向重力性，茎具有背重力性，可把某一植株横放于培养基上，让其自然生长，经过一段时间后，便可观察到根向重力生长，茎背重力生长。这里，对照和实验都在同一个体上进行，属于自身对照。

生物等效性临床试验方案医学设计模板

化学药品分类第XXXXXX类（未上市品种） 批准文号国药准字XXXXXX（已上市品种） 注：以上批准文号根据项目实际情况确定后，删除不适用内容。 研究药物名称: XXXXXX 临床研究名称: XXXXXX 研究单位名称： 地址： 主要研究者： 联系人： 联系电话/ E-mail： 检测单位名称： 地址： 实验室负责人： 联系人： 联系电话/ E-mail： 药品注册申请单位： 地址： 项目负责人： 联系人： 联系电话/传真： 原始资料保存处： CRO: 统计分析单位：

保密声明 本文所含信息均属秘密，并为XXXXXX（申办方）所有。本方案提供有关信息的目的在于为药物临床试验机构提供XXXXXX（研究药物名称）生物等效性临床试验方案。研究者可以在符合下列条件的基础上将方案中的内容透露给试验的参加人员或研究者机构审查委员、伦理委员会或药事管理委员会。本方案的内容不能用在其他临床试验中，也不能在事先未经XXXXXX（申办方）书面许可的情况下擅自将本方案内容透露给其他任何个人或集体。另外，对本方案进行增补的任何信息也属秘密，并为XXXXXX（申办方）所有，其保密原则同方案内容。 本方案仅用于经XXXXXX（申办方）授权的事项，未经事先书面许可不得向任何他人公开。若事先未获得授权而持有本方案，请及时与XXXXXX（申办方）联系，并将方案和其复印件交还XXXXXX（申办方）。 注：括号斜体显示为需填写内容，具体根据项目信息确认后删除。

本研究方案版本信息及修订记录 注：括号斜体显示信息根据实际情况进行填写，若未发生，需删除。

申请单位方案签名页 申请单位项目负责人声明： 我和研究者共同制定，并仔细阅读过该研究方案（版本号：XXXX，版本日期：XXXX年XX月XX日），并且同意按照该方案来执行。我将根据《药物临床试验质量管理规范》（GCP）规定，负责发起、申请、组织、资助、监查和稽查本项临床研究，任命监查员，并为研究者所接受，监查临床试验的进行，特别对临床研究中发生与研究相关的损害的受试者提供治疗的经济补偿，向研究者提供法律上与经济上的担保。 我向研究者提供具有易于识别、贴有特殊标签的受试制剂和参比制剂，并保证提供的试验用药质量合格。试验药品按试验方案的需要进行适当包装。 申请单位： 项目负责人：（签名）签名日期：年月日

转抗虫基因作物对非靶标生物生态安全评价研究进展

转抗虫基因作物对非靶标生物生态安全评价研究进展 【摘要】本文对当前转抗虫基因作物对非靶标生物生态安全评价的研究进展做了全面回顾。并对转抗虫基因作物对非靶标生物生态安全评价的研究方向和技术做出了探讨。 【关键词】转抗虫基因作物；非靶标生物；生态安全评价 一、前言 转基因抗虫作物被称为继“合成杀虫剂”之后在害虫治理方面最重要的技术革命。尽管转基因抗虫作物可以带来巨大效益，但关于转基因作物的生态安全性评价倍受政府和学术界的重视。许多学者对Bt作物对非靶标生物，特别是对害虫天敌的潜在影响研究较多（Romeis et al. 2006；Marvier et al. 2007；Marn et al. 2010；Han et al. 2011；李丽莉等，2004）。然而，现今就转基因抗虫作物对农田生态系统中非靶标生物如天敌胁迫作用的评价，以及如何将其与其他害虫防治措施，如发挥天敌自然控制作用等相协调而真正纳入整个作物害虫治理体系的研究相对较少。其实，这对于保证延缓靶标害虫对其产生抗性，使其得以持续利用是至关重要的。目前，转Bt基因作物对非靶标生物潜在的负面影响倍受关注，也成为了生态安全评价的重要内容。现就转基因作物对非靶标生物，尤其对天敌胁迫作用及其相互关系方面的影响综述如下： 二、国内外研究进展 在国外，转Bt基因作物对非靶标生物潜在的负面影响的研究较多。如Harwood et al（2005）和Obrist et al. （2006）研究发现转Bt基因玉米中的Bt 蛋白可通过食物链的传递转移到捕食性天敌体内；Franklin et al.（2012）结果发现Bt蛋白能干扰天敌Podisus nigrispinus对草地贪夜蛾Spodoptera frugiperda 的捕食能力；在Bt水稻研究方面，Bai et al.（2005）用Bt水稻花粉饲养龟纹瓢虫Propylaea Japonica，其雄性成虫的寿命明显短于对照，新孵化的雄性幼虫存活率也明显少于对照；Chen et al. （2009）研究发现发现以Bt水稻田中的稻纵卷叶螟Cnaphalocrocis medinalis为食的拟水狼蛛的发育时间明显增长；Marrier et al.（2007）发现转Bt基因玉米田和棉田中的非靶标节肢动物丰富度比不应用化学农药管理的作物田低。也有一些研究指出转Bt基因作物对非靶标生物并无明显负面影响。如Jorge et al.（2008）研究认为Bt棉表达的抗虫蛋白不会通过非靶标害虫对天敌产生不利影响。相反有利于自然天敌生存和繁殖；Wolfenbarger et al.（2008）研究结果发现转Bt基因棉田的捕食性天敌的丰富度低于不施用农药的非转基因棉田；Esteves et al.（2010）研究结果发现Bt棉对捕食性天敌Phytoseiulus macropilis的发育与繁殖没有显著影响；Marn et al.（2010）研究发现Chrysoperla spp.等7种害虫捕食性天敌的种群密度在转Bt棉和非转Bt棉田中均没有显著差异；Han et al.（2011）研究发现3个转不同Bt基因的水稻品种对田间稻飞虱种群动态及其捕食性天敌的种群动态均没有显著影响；Schroder et al.（2007）发现该Bt蛋白对老鼠的行为和重量增长没有任何影响，但对其血液参数有一定影响。

生物等效性样品的管理指导原则

1、简介： 本指导原则用于指导临床研究主办单位、药物生产商、CRO公司、现场管理组织、临床监察机构和第三方独立组织管理生物利用度试验和生物等效性试验的样品。本指导原则的重点内容有：⑴BE和BA试验的测试样品和对照品是如何分发给试验机构的。⑵试验机构如何随机挑选测试样品和预留样品。⑶预留样品如何保管。（本指南参考法规21CFR 320.38 and 320.63，320.38 and 320.63） 2、背景： 由于80年代的通用药物丑闻，FDA在1990年11月8号发布了临时法规限制BE和BA样品的保存。颁布这项临时法规的目的是制止实验赞助商或药品生产机构在临床实验中进行可能的欺骗行为。1993年4月28日正式法规颁布。 在法规的序言中说明研究赞助商或药物生产机构不能在将产品分发到实验机构之前分出测试样品和对照品的保存样品。这样是为了保证保留样品能够代表申报批产品。生产商应该多寄几批测试样品和对照样品，以便研究机构可以随机挑选试验样品和保留样品。产品应该保存在生产商提供的包装内。 在法规的序言中还提到，对保留样品的保存是进行临床试验的组织的责任。目的是避免生产商将样品替换以欺骗FDA。 FDA的科学调查部门和ORA的领域研究者为生产商提供检查临床 试验地点和分析样品场所的服务。这些检察人员经常发现临床试验机构中保留样品的缺失。在很多案件中，检察人员发现临床机构将样品

退回生产商。在其他的案件中，生产商指定实验样品和对照品阻止研究机构从生产商从提供的样品中进行随机选样。检察人员还发现在等效性实验中临床端点经常与临床安全性研究和功效性研究相混淆。药效学或临床的等效性研究的端点通常很多，由内科医生或临床监察员使用它们的诊所或办公地点根据合同进行盲目的研究。更过分的事，一些临床研究者相信他们不是CRO公司所以不用保存样品。本原则明确了保留样品的责任方。 3、保留样品的技术： 我们要求临床试验机构从生产商提供的多批样品中随机挑选实验样品和对照品以保证样品具有代表性并且样品要存放在生产商提供的包装内。因为生产商可能会提供多个包装规格。FDA对于这个样品的代表性问题有着灵活的观点。例如，以下任何一种样品的保管技术都可以被研究机构应用。 单包装——如果生产商只提供了样品和对照品的单个包装，研究机构应该取出足够进行实验的样品和对照品，剩余的在原来的包装内进行保留。 多包装——如果生产商提供了样品和对照品的多个包装，研究机构可以随机挑选出足够进行实验的样品和对照品的包装形式，剩余的在原来的包装内进行保留。 一般来说，不赞同打开很多包装。我们希望研究机构限制作为研究留样的打开包装的数量。 剂量单位——如果生产商按照剂量单位提供了样品和对照品，研究机

高中生物实验设计的三个原则

高中生物实验设计的三个原则 实验设计的三个原则 1.对照性原则：科学合理的设置对照可以使实验方案简洁、明了，且使实验结论更有说服力。 “实验组”与“对照组”确认 一个实验通常分为实验组和对照组（控制组）。实验组是施加实验变量处理的被试组；对照组是不施加实验变量处理的对象组，两者对无关变量的影响是相等的，两组之间的差别，被认为是来自实验变量的结果，如2005年春季高考 3题中为研究光对幼苗生长的影响时实验变量应为撤掉光照，因而暗处生长的小麦幼苗应为实验组，而自然状态（即来接受实验变量处理）的小麦幼苗应为对照组，通过对照组能增强实验的信度。 按照对照方式的不同可分为4种： ①空白对照：即不作任何实验处理的对照组。例如，在还原糖鉴定实验中留一部分样液不加入斐林试剂，以作对照。 ②相互对照：即不设控制组，只在几个实验组之间相互对比。例如，在植物激素与向性的设计实验中，5个实验组的相互比较。在实验中要找出一个最佳效果点，就要采取相互对照进行实验。 ③条件对照：即给对象施加某种实验处理，虽不是检验假设需要的，但更能充分说明实验变量的对照。例如，动物激素饲喂小动物的实验方案中：饲喂甲状腺激素的为实验组；饲喂甲状腺抑制剂的是条件对照组；不饲喂药剂的是空白对照组。 ④自身对照：即实验与对照在同一对象上进行。例如，将过氧化氢酶加入过氧化氢溶液中证明酶是生物催化剂可催化过氧化氢水解，即自身对照，处理前的对象状况为对照组，处理后的对象变化为实验组。 再如: 在探究温度(或pH)对酶催化活性影响实验中温度(或pH)(0度、50度,100度) 为条件对照。清水(软水) 、河水(硬水) 对加酶洗衣粉影响中，清水(软水) 、河水(硬水) 为相互对照。用缺素营养液培养的出现缺素症状的植株加入某元素后恢复正常为自身对照。 2.等量性原则——每次实验所加试剂的量要相等。 3.单因子变量的原则。 实验变量剖析：在实验过程中变量是指可被操纵控制的在性质和数量上可以变化的特定因素或条件，具体分析如下 ①实验变量与反应变量： a．实验变量是研究者主动操纵的条件和因子，是作用于实验对象的刺激变量（也称自变量），自变量须以实验目的和假设为依据，应具有可变性和可操作性。b．反应变量（又称因变量），是随自变量变化而产生反应或发生变化的变量，反应变量是研究是否成功的证据，应具可测性和客观性。 c.二者关系：实验变量是原因，反应变量是结果，即具因果关系。 ②无关变量（控制变量）是指与研究目标无关，但却影响研究结果的变量，实验者应严格控制无关变量，否则实验结果的真实性无法得到认定、我们常在实验过程中强调“选取生长状况相同的幼苗”“数量大小相同的种子”“置于相同并适宜条件下培养”“加入等量的清水”等均是为了控制无关变量对实验结果的干扰。

转cry1Abcry2Aj和G10evo-epsps基因玉米双抗12-5的抗虫性评估及对三种非靶标生物的安全性评价研究

转cry1Ab/cry2Aj和G10evo-epsps基因玉米双抗12-5的抗虫性评估及对三种非靶标生物的安全性评价研究转cry1Ab/cry2Aj和G10evo-epsps基因抗虫耐除草剂玉米双抗12-5是浙江大学自主研发的新一代复合性状转基因玉米新品种,是我国具有商业化前景的重要转基因玉米品种之一,目前已被批准进入生产性试验阶段。在转基因玉米商业化过程中,对其进行功能鉴定及对非靶标生物的影响评价是转基因植物安全性评价的重要组成部分。 本研究采用室内生测与田间接虫相结合的方式对转基因玉米双抗12-5的抗虫性能进行了评价,并采用花粉、叶片等植物材料饲喂的方式评价了其对非靶标经济昆虫蜜蜂、家蚕和土壤生物蚯蚓的生态安全性。1.转基因玉米12-5各组织中叶片中Bt蛋白含量最高,其余从大到小依次为花粉,雄蕊,根部,花丝。 虽然表达的蛋白含量不同,但在室内生测中都表现出很好的抗玉米螟性能。2.采用转基因玉米冻干叶片对赤子爱胜蚯蚓(Eisenia foetida)进行饲喂,不会 对于蚯蚓的存活、体重和繁殖方面产生负面的影响,也不会引起蚯蚓体内总蛋白、SOD、POD、CAT活性的异常。 3.采用转基因玉米花粉和CryAb纯蛋白的蔗糖混合物饲喂意大利蜜蜂(Apis mellifera ligustica),结果表明转基因玉米花粉和CryAb蛋白与对照处理相比不会引起蜜蜂的死亡,但是会引起蜜蜂的取食量的降低。 4.采用不同浓度的转基因玉米花粉饲喂家蚕(Bombyx mori Linnaeu),结果表明在最高实验浓度T-40处理中,能够引起一龄家蚕的死亡,其他处理并没有出现死亡现象。 转基因花粉处理能够引起家蚕发育历期和体重的减轻,并引起家蚕体内SOD、POD、CAT酶活性的增加。但对于结茧率、羽化率、茧重等生理指标没有影响。