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Ta cloning

?Taq polymerase has a nontemplate-dependent activity that adds a single deoxyadenosine (A) to the 3′ends of PCR products.

?The linearized vector supplied in special kit has single 3′deoxythymidine (T) residues. This allows PCR inserts to ligate efficiently with the vector.

Taq DNA聚合酶具有非模板依赖的活动，增加了一个单脱氧腺苷（A）的3'末端的PCR产物。提供的线性化载体在特殊的试剂盒有单3'脱氧胸苷（T）残基。这使得PCR插入结扎有效地用该载体。

Thermostable polymerases containing extensive 3′ to 5′ exonuclease activity, such as Platinum? Pfx, do not leave 3′A-overhangs. PCR products generated with Taq polymerase have a high efficiency of cloning in the TA Cloning? system as the 3′Aoverhangs are not removed. However, if you use a proofreading polymerase or wish to clone blunt-ended fragments, you can add 3′ A-overhangs by incubation with Taq at the end of your cycling program.

热稳定的聚合酶含有广泛的3'至5'外切核酸酶活性，例如作为白金?PFX，不留下3'A-突出。PCR产物与Taq聚合酶具有高效率的克隆TA克隆?系统，作为3“Aoverhangs的不会被删除。不过，如果你使用一个校对聚合酶或希望克隆平端的片段，您可以添加3'A-突出培养Taq酶在循环程序结束。

TA克隆方法（Original TA Cloning Kit）把PCR片断与一个具有3’-T突出的载体DNA连接起来的方法。因为PCR反应中所适用的聚合酶具有末端转移的活性，通常在3'加上A。例如：Taq聚合酶同时具有的末端连接酶的功能，PCR反应时在每条PCR扩增产物的3`端自动添加一个3`-A突出端。只有用经过特殊处理的具有3’-T突出末端的DNA片断才能通过T/A配对进行连接。

所以TA克隆不需使用含限制酶序列的引物，不需将PCR 产物进行优化，不需把PCR产物做平端处理（Invitrogen另有平端载体供高确限度酶克隆）。不需在PCR扩增产物上加接头，即可直接进行克隆。

PCR产物的T载体克隆

（一）重组T质粒的构建

一．原理

外源DNA与载体分子的连接就是DNA重组，这样重新组合的DNA叫做重组体或重组子。重组的DNA分子是在DNA连接酶的作用下，有Mg2+、ATP存在的连接缓冲系统中，将分别经酶切的载体分子与外源DNA分子进行连接。DNA连接酶有两种：T4噬菌体DNA

连接酶和大肠杆菌DNA连接酶。两种DNA连接酶都有将两个带有相同粘性末端的DNA分子连在一起的功能，而且T4噬菌体DNA连接酶还有一种大肠杆菌DNA连接酶没有的特性，即能使两个平末端的双链DNA分子连接起来。但这种连接的效率比粘性末端的连接率低，一般可通过提高T4噬菌体DNA连接酶浓度或增加DNA浓度来提高平末端的连接效率。T4噬菌体DNA 连接酶催化DNA 连接反应分为3 步：首先，T4 DNA 连接酶与辅因子ATP形成酶-ATP复合物；然后，酶-ATP复合物再结合到具有5’磷酸基和3’羟基切口的DNA上，使DNA腺苷化；最后产生一个新的磷酸二酯键，把切口封起来。连接反应通常将两个不同大小的片断相连。因为DNA片断有两个端点，所以切割时出现两种可能，一种是单酶切，另一种是双酶切，这两种酶切方法在基因工程操作中都经常用到。对于单酶切来说，载体与供体的末端都相同，连接可以在任何末端之间进行，这样就导致了大量的自连接产物。为了减少自环的高本底，可对载体进行5’除磷酸处理，原理是连接酶只能连接DNA片断的3’OH末端与5’端，所以除磷后载体不会自环。一旦有外源片断插入时，由外源片断提供5’端就能与载体进行连接。通过这种方法可大大减少由载体的自

环造成的高本底。对于双酶切来说，无论载体与供体同一片段上都有不同的末端，这样就避免了载体与供体的自环，能使有效连接产物大大增加。双酶切的另一个特点是能将供体分子定向连接到载体上。

连接反应的温度在37℃时有利于连接酶的活性。但是在这个温度下粘末端的氢键结合是不稳定的。因此采取折中的温度，即12-16℃，连接12-16h（过夜），这样既可最大限度地发挥连接酶的活性，又兼顾到短暂配对结构的稳定。Taq DNA酶扩增的PCR产物，其DNA双链前后末端都有一个游离的A碱基，可以与pGEM-T Easy Vector 末端游离的T碱基互补形成环状重组T质粒。

二．材料与方法

1 材料

外源DNA片断

2 仪器、用具

移液枪、碎冰

3 试剂

pMD 18-T Vector；Ligation buffer；T4 ligatease；rATP

4 方法

连接体系如下：

16℃连接过夜。

（二）重组质粒的转化及阳性克隆的鉴定

1 材料

E.coli JM109菌株

2 仪器、用具

超净工作台、离心机、恒温摇床、恒温培养箱、培养皿、试管、1.5ml 离心管、电泳仪、电泳槽、凝胶样品梳、移液器

3 试剂

(1) CaCl2、LB平板（见附录）；SOC培养基（见附录）；SOB 培养基

(2) RNase A1；Buffer S1；Buffer S2；Buffer S3；Buffer W1；无水乙醇的Buffer W2a

(3) 1×电泳缓冲液（TAE）；溴化乙锭溶液（EB）[有毒，小心]；琼脂糖；6×加样缓冲液

(4) 酚；氯仿；异戊醇

(5) ddH2O；10×PCR Buffer (Mg2+ plus)；dNTP；M13+；M13-；TaKaRa rTaq酶

4 方法

1. 大肠杆菌感受态细胞的制备

(1) 取大肠杆菌JM109保存液50μl，接种于4ml LB（或SOB）液体培养基中，37℃，300rpm振荡培养过夜，第二天取50μl 转接到新的4ml LB（或SOB）液体培养基中扩大培养3h至OD600=0.35～0.4，在无菌操作台上取1ml菌液于1.5ml离心管中，冰浴10min。

(2) 4℃，5000rpm离心2min，去上清液。

(3) 加入750μl预冷的0.1M CaCl2重悬菌体，冰浴30min。

(4) 4℃，5000rpm离心2min，弃上清液。

(5) 加入100μl 冰冷的0.1M CaCl2轻轻重悬菌体，冰浴2h后，4℃保存备用。

2. 重组DNA的转化

(1) 将含Amp、X-Gal、IPTG的LB平板37℃预热。

(2) 于100μl感受态细胞中加入10μl连接产物，冰浴30min。

(3) 将离心管转入42℃水浴，热冲击90秒，然后不要摇动离心管，迅速将其放在冰上2min。

(4) 在离心管中加入SOC培养基300μl，枪头混匀，37℃、150rpm温和摇振60min。

(5) 将200μl 转化菌液均匀地涂布于含50mg/ml Amp、20mg/ml X-gal、200mg/ml IPTG 的LB平板上，37℃倒臵培养过夜，挑选白色菌落进行鉴定。

注意事项：

①制备感受态细胞的全部操作均须于冰浴操作，同时注意近火无菌操作，防止感受态细胞受杂菌污染。

②42℃热处理时很关键，转移速度要快，且温度要准确。

③菌液涂皿操作时，应避免反复来回涂布，因为感受态细菌的细胞壁有了变化，过多的机械挤压涂布会使细胞破裂，影响转化率。

3．重组质粒的鉴定

方案一菌落PCR

(1) 制备PCR混合液：

(2) 用经灭菌的10μl枪头（不用牙签）挑去白色菌落，迅速地使挑取物溶在上述混合液中

(3) 盖上离心管得盖子，在沸水上温育10 min。

(4) 将步骤⑶的样品冷却至室温，离心数秒，然后于管中加入TaKaRa rTaq酶0.25ul。

(5) 按以下条件进行PCR反应：94℃预变性3min；然后进行30个循环反应，其温度循环条

件为：94℃变性1min，57℃退火1min，72 ℃延伸1min；循环结束后72℃再延伸5min。

(6) 取5μl PCR产物在1%琼脂糖凝胶上进行电泳检测。

方案二质粒PCR

1. 碱裂解法少量制备质粒DNA

(1) 用离心管收集4ml在LB培养基（含Amp）中培养过夜的菌液，14000rpm离心30秒，弃尽上清。

(2) 用250μl已加入RNase A1的Buffer S1充分悬浮细菌沉淀。

(3) 加入250μl Buffer S2，温和但充分地上下翻转混合4-6次，此步骤不宜超过5min。

*Buffer S2使用后应立即盖紧瓶盖，以免空气中的CO2中和Buffer S2中的NaOH，降低溶菌效率。

(4) 加入400μl Buffer S3，温和地上下翻转8-10次，室温静臵2min，14000rpm离心10min。

*若离心后凝结块未沉淀到离心管底部，应再上下翻转数次，12000g离心3min。

(5) 将DNA-prep Tube臵于2-ml Microfuge Tube中，将步⑷中的混合液移入DNA-prep Tube中，5500rpm离心1min。

(6) 弃滤液，将DNA-prep Tube臵回到原2-ml Microfuge Tube 中，加入500μl Buffer W1，5500rpm离心1min。

(7) 弃滤液，将DNA-prep Tube臵回到原2-ml Microfuge Tube 中，加入700μl已加无水乙醇的Buffer W2，5500rpm离心1min，

以同样的方法再用700μl已加无水乙醇的Buffer

W2洗涤一次。

(8) 弃滤液，将DNA-prep Tube臵回到原2-ml Microfuge Tube 中，14000rpm离心1min。

(9) 连滤液一并弃掉收集管，将DNA-prep Tube 臵于一新的1.5ml 离心管中，在silica 膜

中央加入25-30μl Eluent或去离子水。

(10) 室温静臵2 min，14000rpm离心1min洗脱DNA。

(11) 取5μL样品，1%琼脂糖凝胶电泳初步筛选重组转化子。

2. 抽提纯化质粒DNA酚、氯仿抽提可以去除碱裂解法制备的质粒DNA中残留的蛋白质。

(1) 加TE稀释质粒DNA溶液至300μL。

(2) 加等体积的酚:氯仿:异戊醇（25:24:1），震荡混匀，静臵3min。

(3) 14000rpm 离心5min，吸上清液，加等体积的酚:氯仿:异戊醇（25:24:1），混匀，静臵3min。

(4) 14000rpm离心5min，吸上清液，加等体积的氯仿:异戊醇（24:1），混匀，静臵3min。

(5) 14000rpm离心5min，吸上清液，加2.5倍体积预冷的无水乙醇，混匀后-20℃放臵15min，沉淀质粒DNA。

(6) 14000rpm离心13min，弃上清液，沉淀加入200μL 70%乙醇洗涤一次，室温干燥，用20μL去离子双蒸水溶解质粒DNA沉淀，-20℃保存待用。

(7) 取5μl样品，1%琼脂糖凝胶电泳检测纯化结果。

3. 质粒PCR

(1) PCR反应体系如下：

(2) PCR 扩增反应条件：94℃预变性3min；然后进行30 个循环反应，其温度循环条件为：

94℃变性1min，57℃退火1min，72 ℃延伸1min；循环结束后72℃再延伸5min。

(3) 取5μl PCR产物于1%琼脂糖凝胶进行电泳检测，方法与试验二相同。

稍微简洁的回答PCR产物的克隆

PCR产物克隆大致分为两类，即平头连接和粘头连接。

平头连接是将制备好的平头载体和补平或削平的PCR产物直接进行连接。载体可用EcoR V或Sma I切成平头；PCR产物纯化后，可以在22℃用DNA聚合酶I作用30min（利用该酶所具有的3’→5’外切酶活性和5’→3’的聚合酶活性）。如果要求不高，PCR产物也可不加处理。如果使用Stratagene公司的pfu DNA聚合

酶或New England Biolabs公司的Vent DNA聚合酶，这两种酶有5’→3’校对能力，扩增出来的PCR产物已经是平头，可以不作平端处理。平端连接的一个显而易见的缺陷是连接效率低下，即使使用很高单位的连接酶，或在反应体系中加入PEG 8000，也只能很有限地提高效率。

粘头连接也可以大致分为两类，一类粘头连接是用某种方法，在载体和PCR产物上产生长的可互补的粘性末端。最普遍的方法是在引物的5’端加入一段某种限制酶的识别序列。如果两个引物选用不同的限制性内切酶识别序列，就可以做到定向连接。另一类利用部分PCR产物3’端带有一个凸出的dAMP的特性，构建3’端带有凸出的dTMP的载体。一般采用的方法是先把载体用某种限制性内切酶消化成平头，在70℃或72℃下在只加入一种dNTP、即dTTP的反应体系中用Taq DNA聚合酶处理半小时（也有人报道处理1～2小时能提高克隆效率，这样加T反应会更彻底）。也可以用末端转移酶来完成加T反应。载体自连、PCR产物串连可以忽略。如果使用ddTTP，效果会更好。这种方法一般称为加T/A法克隆，比平头连接效率高50～100倍。

一、PCR产物的TA克隆

1. TA克隆构建原理：TA克隆系统由Invitrogen公司（San Diego，CA）发展而来的商业性试剂盒，它用于PCR产物的克隆和测序。其原理是利用Taq酶能够在PCR产物的3’末端加上一个非模板依赖的A，而T载体是一种带有3’T突出端的载体，在连接酶作用下，可以快速地、一步到位地把PCR产物直接插入到质粒载体的多克隆位点（MCS）中。

2.操作步骤

⑴连接反应一般在灭菌的0.5ml离心管中进行。

⑵10μl体积反应体系如下：

①取T载体1μl (50ng)，加入等摩尔数PCR产物。

②加入含ATP的10×Buffer 1μl，T4 DNA连接酶合适单位，用ddH2O 补足至10μl 。

⑶稍加离心，通常为14-16℃水浴连接8-14hr，或4℃过夜。

⑷转染，蓝白斑筛选同前。

二、注意事项

1.要获得目的基因的TA克隆，PCR产物的特异性要好。

2.PCR产物在TA克隆前要通过纯化。

3.在PCR产物回收、纯化过程中防止外来DNA污染。

PCR产物的TA克隆

通过PCR的方法扩增目的基因片断的过程中，由于往往不清楚

目的基因的DNA序列，获得的目的片断通常需要通过TA克隆的方法，重组到T-载体中，通过序列测定清楚DNA序列。由于在PCR 过程中，使用的DNA聚合酶不同，往往分为2种情况：（1）使用不同的Taq酶，在PCR扩增循环结束后，加上72℃10分钟一个过程，Taq酶可以在扩增产物的3末端加上A，因此PCR产物回收纯化后可以和T载体直接连接。（2）使用高保真的DNA聚合酶，如pfu酶，由于其不能在扩增产物的3末端加上A，得到的DNA序列为钝端，因此，需要在回收纯化后进行加A的过程，通常是以PCR 回收产物为模板，加上一定量的普通Taq酶和反应液，加入dATP（或dNTP），72℃10分钟，然后将加A产物直接用于TA连接。

pMD 18-T Vector是一种高效克隆PCR产物(TA Cloning)的专用载体。它是TaKaRa独自研究开发，由pUC18载体改建而成的。在pUC18载体的多克隆位点处的Xba I 和Sal I识别位点之间插入了EcoR V 识别位点，用EcoR V进行酶切反应后，再在两侧的3'端添加“T”而成。因大部分耐热性DNA聚合酶反应时都有在PCR 产物的3'末端添加一个“A”的特性,所以使用本制品可大大提高PCR 产物的连接、克隆效率。本制品是以最为常用的pUC18载体为基础研制而成，所以它具有同pUC18载体完全相同的功能。此外，本制品中的高效连接液Ligation Solution I 可以在极短的时间内(30分钟-1小时)完成连接反应，大大地方便了实验操作。另外，本制品中还含有Control Insert (500 bp)，可用于Control反应。

用途：克隆PCR产物。对克隆后的PCR产物用M13 Primers 进行DNA测序。

α互补和蓝白筛选的原理：许多载体（包括pMD18-T）都具有一段大肠杆菌β半乳糖苷酶的启动子和编码其N端氨基酸（α肽链）的片断基因。宿主具有编码β半乳糖苷酶的C端基因。当二者产物组合在一起，就具有活性酶的产生，此现象称为α互补。由α互补形成的具有功能活性的β半乳糖苷酶,可以用X-gal显色测定出来，它能将无色的化合物Xgal切割成半乳糖和蓝色底物。当外源DNA片断插入到多克隆位点后，就会破坏α肽链的阅读框，从而不能合成与受体菌内的β半乳糖苷酶相互补的活性α肽链，而导致不能形成功能活性的β半乳糖苷酶，因此含有重组质粒载体的克隆往往是白色的，而没有插入外源片断的则是蓝色的。

实验内容：

试剂

pMD 18-T Vector试剂盒，或自己PCR扩增回收纯化的片段，T4DNA链接酶。IPTG，X-gal，LB培养基等。

200mg/ml的IPTG 过滤除菌

20mg/ml的X—gal 溶于二甲基甲酰胺，避光保存。

操作步骤

1. 在微型离心管中制备下述连接反应液，全量为10 ml。

pMD 18-T Vector 1ml*

control insert DNA 1ml*

H20 3ml

ligation solution I 5ul

* 取0.5 ?l进行实验也可得到满意的结果。实际操作时，可按实验需要使用适量的T载体。

2. 16℃反应30分钟(过夜反应也不影响连接效率)。

3. 全量(10ml) 转化至JM109感受态细胞(100 ?l)中。

4. 在含有40ml 20mg/ml的X-Gal、4ml 200mg/ml 的IPTG、50-100mg/ml Amp的L-琼脂平板培养基上培养，形成单菌落。计数白色、蓝色菌落。

5. 挑选白色菌落，使用PCR法确认T载体中插入片段的长度大小。

注意事项：

1. Ligation Solution I 请于冰中融解。

2. 在进行克隆时，Vector DNA和Insert DNA的摩尔比一般为：1: 2 ~ 10。在本制品中，pMD18-T Vector1 ml (50 ng) 的摩尔数约为0.03 pmol，Control Insert DNA 1ml (50 ng) 的摩尔数约为0.15pmol。

3. 克隆时使用的Insert DNA片段(PCR 产物) 尽量进行切胶回收纯化，PCR产物中的短片段DNA(甚至是电泳也无法确认的非特异性小片段)、残存引物等杂质都会影响TA克隆的效率。

4. 按照本实验操作进行连接后，直接进行转化时的连接液不要超过20 ml。当进行转化的DNA用量较大或准备进行电转化时，需对连接液进行乙醇沉淀，纯化DNA后再进行转化。

5. 连接反应请在16℃下进行，温度升高(>26℃) 较难形成环状DNA。

6. 连接效率偏低时，可适当延长连接时间至数小时。

7. 感受态细胞可使用适合于pUC系列载体的感受态细胞，如：JM109，DH5a等。

九年级英语下册 Lesson 11 Cloning People教案冀教版

冀教版九年级下册英语Lesson 11 Cloning People?教案Lesson 11 Cloning People? Teaching Content: Mastery words and expressions: exactly, divide, crazy Oral words and expressions: human being, original, adult, Dolly, insect Teaching Aims: 1. Know more about cloning. 2. Create the students' spirit of cooperation. Teaching Important Points: 1. The advantages and disadvantages of cloning. 2. The expression of ability and disability. 3. The use of coordinating conjunctions. Teaching Difficult Points: The advantages and disadvantages of cloning. Teaching Preparation: pictures Teaching Aids: flashcards, audiotape, pictures Type of lesson: new lesson Teaching Procedure: Step1: Show a picture of Dolly. Then let the students discuss what our life will be if we make a clone of ourselves. Divide the class into groups of three or four. Discuss for five minutes. Then present their results to the class. Step2. Listening task: Listen to the tape and fill in the blanks with the correct words you hear. 1. The clones are the ______ height. 2. There are ______ ways to clone people. Finish the task in class in oral. Step3. Reading task: Read the text and decide whether the following statements are true （T）or false（F）。 1. We can make clones from dead animals. 2. Each clone would be a different person. 3. We can combine the DNA of pigs and dogs. Finish the task in class in oral. Step4. Pair work:

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my dream 英语作文篇一：my dream 英语作文 Last night,I became a small didn't see I am Invisible. I flying in the sky .I was very happy and free .I could see many houses ,mountains and rives .Then , I'm tird so I had landed in the beautiful prairie . There was very cool .And there were many hours and cattles .They looked very happy. I am pleased to talk with them. They asked me if I come from .I told them I was from distant countries to travel here and their parents. They asked where my parents . Oh my god ! I'm lost .I'm sad . Next,I once heard someone calling my name .I woke up at was only a dream .It is my mother told me to get up .

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Module 5 Cloing Period One Step 1．Introduction 1．Leading-in Show some pictures of Dolly and let Ss say something about her． (If Ss feel hard to say about Dolly，teacher can give some help．) For your reference： Dolly is the first cloned sheep in the world．She was born in July 1996 in England．Although she is young，she has four babies already．Unfortunately，she died in 2003． 2．Practice (1)Ask Ss to turn to page 57 and look at the picture from the film Frankenstein and then answer the questions in Activity 1． SuggestedAnswers： ①In 1931． ②&③Various auswers are acceptable． (2)Ask Ss to read the passage and catch the information． Step 2．Reading and Vocabulary 1．Skimming (1)Ask Ss to read the passage and try to answer the following questions．

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my dream英语作文带翻译 Everyone has their own dreams, so do I. But my dream is not a lawyer, not a doctor, not actors, not even an industry. Perhaps my dream big people will find it ridiculous, but this is I have been looking for! My dream is to want to have a folk life! I want it to become a beautiful painting, it not only should have bright color, also want to have dark color, I do not rule out the painting is part of the black, I will treasure these bleak colors! Isn't it, how about, a colorful painting, if not bleak, add color, how can it more prominent American? Life is like painting, painting the bright color represents life beautiful happy moments. Painting a bleak color represents life difficult, unpleasant time. Maybe you will think of having a beautiful road is not very smooth, but I don't think so. If a person lives flat then what is the meaning? Life is only decades, when I asked him to go to the last, every memories about fulfilling! 每个人都有自己的梦想，我也一样。但是我的梦想不是律师，不是医生，不是演员，甚至不是一种行业!我的梦想也许大人们会觉得可笑，但是，这是我一直追寻的!

BoCloning教学设计方案

Book8 Unit2 Cloning教学设计方案保定市唐县第一中学王会献一、教学内容分析本单元的中心话题是“克隆”。Pre-reading部分要求学生讨论有关克隆的问题，要求学生回答有关是否能区分自然与人工无性繁殖克隆的问题，调动学生讨论的积极性，激发学生对克隆话题的兴趣，所以能达到热身的效果。Reading部分涉及植物与动物克隆的区别、多丽羊的诞生与死亡及由此引发的争论。通过阅读，在训练学生的阅读方法和技能同时，帮助学生进一步认识克隆的意义在于为人类服务。本单元的语法是掌握并运用同位语从句及同位语从句与that引导的定语从句的区别。Using Language部分中包括了读、讨论和写、听三个部分的内容，通过学习“恐龙回归”的阅读材料，了解是否能克隆已经绝种的动物和讨论哪一种动物是最值得克隆及其理由。听说部分是听一段关于克隆是否对动物残忍的对话并进行讨论，该部分可以激发学生的想象力和语言运用能力。本节课是这篇阅读的第一节课，目的旨在让学生读懂文章的意思、了解文章的内容、把握文章的中心。通过阅读，让学生学习文章的内容、把握文章的中心。从而提升自己的阅读能力和高考做题技巧，要让学生学习了解克隆这门技术以及有关的争议。二、教学目标这节课的主要目的是培养学生跳读和细读的阅读技巧，使学生学会准确分析阅读问题，懂得从文章中找到关键句子摄取必要的信息，找出正确的答案。我运用多媒体和学生搜索材料主动参与学习相结合，设计了表格、问答题、判断题和信息整理题。这不仅提高学生的阅读技巧，也教会学生怎样处理不同的阅读问题。 1. 语言目标 A）使学生会使用本单元的相关词汇讲述克隆的概念，以及克隆带来的问题，及表达自己对克隆的认识。 B）初步掌握本单元重点单词：exact, undertake, pay off, breakthrough, object, obtain, moral, in favor of等。 2. 技能目标 A）使学生在听和读的过程中学会模仿朗读，把握长句中的语音语调。 B）使学生学会克服生词障碍，通过略读，寻找文章的主题句，理清文章的总体框架与脉络；通过细读，捕捉文章的重要细节，理解作者的写作意图。 C）使学生在完成任务的过程中掌握高考做题技巧，更好为高考服务。 3. 情感态度目标通过本文激发学生勇于求知，探索科学奥秘的积极学习态度。使学生形成积极的情感态度，主动思维，大胆表述，提高语言实际运用能力，同时，又使他们拓展视野，开发思维能力，发展个性，提高人文素养，形成正确的价值观和人生观。三、重点与难点： 1. 重点： A) 了解科技说明文的文体特点并以此指导阅读；训练skimming, scanning, careful reading等阅读技能和相关任务的做题技巧； B) 对文章深层次的理解及细节的欣赏，认识及了解克隆技术。 2. 难点： A) 阅读技能的训练； B) 对科技说明文的鉴赏能力及事物的客观评价。四、学习者特征分析高中年龄段的学生对周围的事物较为敏感，有自己的观点和看法，他们不满足

七年级简单英语作文带翻译：My dream

七年级简单英语作文带翻译：My dream Everybody have a dream, because we’re dreamers. In our heart, there is a colorful dream. Sometimes the dream is perfect, sometimes it’s special, sometimes it’s sweet, sometimes it’s yummy. In my dream, there are some children. I always play games with them and enjoy ourselves. There are so many candies, too. Blue candies, pink candies, orange candies, apple candies…How delicious! In my dream, there is a special sky. In our world, the sky is blue, but the sky of my dream is pink, some angels are having fun there. In my dream, white bird can fly high, flowers can sing songs, frogs have a jump race, tomatoes are blue, potatoes are yellow, all the things are different. In my dream, Chinese people, Korean people, Japanese people, Italian people, Spanish people, American people and Russian people are hand in hand. All the people smile for ever. It is a balanced world. . In my dream, everything is wonderful, but our world isn’t like it. So we m ust like my dream, to let our world get more beautiful! 每个人都有一个梦想，因为我们是梦想家。在我们心中，有一个彩色的梦。有时梦想是完美的，有时它是特殊的，有时是甜的，有时它是好吃的。在我的梦里，有一些孩子。我总是和他们玩游戏，玩游戏。有这么多的糖果，太。蓝色的糖果，粉红色的糖果，桔子的糖果，苹果的糖果……有多好吃！在我的梦里，有一个特别的天空。在我们的世界

《克隆技术》教案

第二节克隆技术一、【教材分析】前面学习了动植物的生殖和生物的遗传和变异的特征。本课是以此为基础，在学生已有的认知和经验基础上，进一步引领学生感悟生命过程的复杂多样，讨论克隆技术给人类带来的影响，思考科学技术的双面性。二、【教学目标】（一）知识目标： 1、能通过讨论等方式探究克隆技术带来的影响；能将所收集的资料进行整理，设计成有条理的讲演稿向其他人介绍；能有一定根据地提出自己的观点，并能对其他同学的观点进行评价。 2、能体会到科学技术的“双刃剑”含义。（难点） 3、能用自己的话解释克隆技术。 4、能从正反两个方面说出克隆技术给人类带来的影响。（重点）（二）能力目标： 1.学会收集资料，能通过各种方法和途径收集到有关克隆技术的发展的资料。 2.学会交流和汇报，能够将自己的收获展示给大家，并能够在交流活动中获得他人的信息。（三）情感目标： 1.通过收集有关克隆人方面的信息，增强关注社会热点问题的意识； 2.通过分工合作，培养团结互助的协作精神； 3.激发对生物技术发展研究的兴趣和探究的欲望。四、【教学准备】教师准备：收集相关的资料和图片作成多媒体课件；学生准备： 1、准备“假设我会克隆”小作文；

2、收集有关克隆人方面的信息和资料，为“关于是否应该禁止克隆人的辩论”做准备。五、【教学过程】教学环节及时间安排教师活动学生活动设计意图一、创设情景，激发兴趣：（3分钟）1、【展示】孙悟空图片或视频： 2、【提问】你喜欢孙悟空吗？他有哪些本领？ 3、【过渡】孙悟空拔出一根毫毛能变出千万个一样的自己来。这个神话引发人类复制自身的幻想，用现代的眼光看就是“克隆”。今天我们学习第二节克隆技术。回答孙悟空会：①七十二变；②腾云驾雾；③有一双火眼金睛，能看穿妖魔鬼怪的伪装；④一个筋斗能翻十万八千里；⑤ 拔一根毫毛变出一样的自己等。孙悟空形象和故事，家喻户晓。易于激发学生学习兴趣。二、知识回顾: （4分钟）1、【展示图片过渡】植物的“克隆”，老百姓可能每天都在做。扦插嫁接 2、【提问】植物的扦插、嫁接、压条、组织培养和用种子繁殖相比，有什么特点？ 3、【过渡】无性生殖在生物学上就叫“克隆”。植物的克隆我们每天都可以做，高等动物的克隆看图片回顾植物的扦插、嫁接、压条、组织培养的知识。思考回答：扦插、嫁接、压条、组织培养都是无性生殖，没有两性生殖细胞的结合而直接由母体产生新个体。学生对无性生殖很熟悉，但不知道无性生殖就是克隆。教师利用原有的知识做基础，引导学生回顾、复习。使课堂能够顺利过渡到克隆技术。

mydream英语作文150字

mydream英语作文150字 The high unemployment rate of college students is said to more than 10 %. Many college students plain about the difficulty of looking for a job. In this case, I hold the opinion that one should have a dream in childhood, and keep struggling for dream. On the other hand, one is not supposed to expect too much of himself, and start everything from the most basic. I have my own dream. Not to be a scientist or a doctor, but to be a teacher. I’m sure of this dream. Teacher is a great career in my eyes, and play an important part in the society. I know it is not easy to realize my dream. But I am willing to study hard from now on. I’m sure my dream will e true. 1\150字的英语作文：My family Hello everyone. My name is li Yihan. I am from China. I like playing football. My mother likes playing tennis.Oh,yes. This is My father. He likes playing puter games." Hello,good morning." This is My sister . She dones't like playing sports and playing puter games. Do you know what she likes? Oh,yes. She likes reading books. This is my family. I love it very much. 2\初一英语作文150字：我的同学.

高中英语 Unit 2 Cloning教学设计1 新人教版选修8(1)

Unit 2 Cloning Ｉ．单元教学目标技能目标Goals Talk about cloning Practice expressing and supporting an opinion Use the appositive clause Write a composition about cloning Ⅱ.目标语言功能句式Expressing and supporting an opinion I’m happy to accept …. But…. I would never accept…. I’m not bothered about….. I don’t mind but…. I hope you’ll carry on…. Are you sure you want to…. I agree with you that…. Is it fair to….? Do you think it is wise to….? I think you should…. Well done to you for…. I don’t understand why you don’t…. I can’t help thinking…. I could never agree to…. 词汇1. 四会词汇 Strawberry，differ，exact，straightforward，breakthrough，disturbing，cast，altogether，objection，media，moral，ceiling，shortly，retire，assumption，merely，decoration，zebra，aloud 2. 认读词汇 identical，nucleus，gene，somatic，embryo，fate，impact，extinct，popularity，

Cloning教学设计

Unit2 Cloning Reading: CLONING: WHERE IS IT LEADING US? 教学设计西安市第十九中学张媚一、教材分析本单元以Cloning为话题，旨在通过单元教学，使学生了解克隆技术的优缺点，学会表达和支持个人观点，能用所学的有关Cloning的词汇去表述自己对这一新技术的观点和看法。 ”阅读”（Reading）部分提供的材料CLONING: WHERE IS IT LEADING US?是一篇介绍克隆技术的说明文, 具体介绍了植物与动物克隆的区别，多利羊的诞生与死亡及由此引发的争论。帮助学生进一步认识克隆的意义在于解决医学上的难题，为人类服务。从话题内容上分析，Warming Up 与Reading相一致，从教材份量来说，可将Warming Up和Reading整合在一起，设计成一节任务型“阅读课（精读课）”。二、学情分析我所带的两个班级的学生英语基础一般，平时较少阅读科学题材的文章, 知识面相对狭窄，阅读理解这篇文章还是有一定难度。但学生的好奇心和学习接受能力比较强，可以布置学生课前上网或去图书馆找出一些有关克隆的资料，并与多媒体相结合简单介绍克隆及克隆技术的一些知识，让学生有了一定的知识准备以利于很好的理解课文。三、设计理念及教学目标这节课的主要目的是培养学生跳读和细读的阅读技巧，使学生学会准确分析阅读问题，懂得从文章中找到关键句子摄取必要的信息，找出正确的答案。我运用多媒体和学生搜索材料主动参与学习相结合，设计了表格、问答题、判断题和信息整理题。这不仅提高学生的阅读技巧，也教会学生怎样处理不同的阅读问题。四.教学目标Teaching goals 1. Target language目标语言 a. 重点词汇和短语 clone，commercial，producer，undertake，arbitrary，object，forbid，ac cumulate，cast down，object to，the media，in favor of b. 重点句子 It is a way of…. The fact is that…. The question that concerned all scientists were: ….

英语作文mydream初中版英语作文mydream

英语作文mydream初中版英语作文 mydream 梦想，在心中埋藏，发觉它已经在慢慢走来，给人们带来希望、光明和心灵的洗涤。你知道初中我的梦想的英语作文要范文吗?下面是WTT给大家整理的英语作文mydream初中版，供你参考! 英语作文mydream初中版篇1 If there is no ideal, just as it had been the motivation. Everyone has his own ideal. When I was a child, I wanted to be a doctor to heal the wounded and rescue the dying, then, I have wanted to be to help the police of the people, again big point, I want to be an actor. And now, my ideal is to be a teacher. Why do I want to be a teacher? When I went to visit distant relative, passing a small look very poor, remote mountainous area. I stood at the top of the mountain, roughly scan a week, found that there doesn't even have a decent cus. Peer uncle had a child, ask answer is because no one willing to teach this poor place, so there no one to go to school, but they have to go to school.

Unit 2 Cloning Reading 教学设计

Unit 2 Reading 教学案核心单词 1. differ v. 不同；相异；使…相异常用结构： A differs from B in ...A与B在…方面不同 A differs with B about/on/over... A与B就...意见相左他们的房子与我的不同，区别在于他们的没有车库。 ______________________________________________________. 双方在报酬的问题上仍各持己见。 ______________________________________________________. 联想拓展 difference n. 不同之处 tell the difference between A and B 辨别A与B之间的不同 make no difference 没影响，不起作用 make a difference to 对…产生变化；对什么有影响 different adj. 不同的 be different from sb. in … 在某方面不同与某人 differently adv. 高手过招用适当的介词填空 ①The two squares differ color but not size. ②The husband differs the wife who is to take charge of the money. ③It doesn’t make a difference me whether you are going to stay. ④This is a different car the one I drove yesterday. 活学巧用考题：1. The two sides in the dispute still differ _____ each other _____ the question of pay. A. on；with B. with；in C. at；with D. from；on 2. Australian English__________ pronunciation from British English. A. different B. difference C. differ D. differs in 2. exact adj. 精确的；准确的 exactly adv. 精确地活学巧用考题--- You hate Jim，don’t you？

mydream英语作文参考范文

mydream英语作文参考范文导读：本文mydream英语作文参考范文，仅供参考，如果觉得很不错，欢迎点评和分享。【篇一】 Everyonehasadream，Everyone'sdreamsaregreat, happyanddistant，Mydreamisthatmyfamilyandfriendscan behappy.Althoughthisisnotrealistic.Wenevitably experiencesufferingandfailureinthereallife.Butbecauseof this,Webecomestrongandcourageous.althoughsomedream isunrealistic,wehavedream,welivesignificative!whetheror notthedreamcometure,weshouldhardwork,Letthislife withoutanyregrets. 谁都有梦想。每一个人的梦想都是伟大的,幸福的,遥远的.我的梦想是身边的每一个人都能够开心幸福的生活。尽管这不太现实。毕竟在现实的生活里难免会经历坎坷与心酸，但正因为这样，我们才变得更加坚强和勇敢。虽然有些梦想是不切实际的，但因为心中有梦想，我们才生活得更有意义!不管梦想能不能够实现，我们都要努力奋斗，让今生无悔! 【篇二】 Everyonehashisowndream.Somewanttobe doctors.Othershopetobescientists.Mydreamistobecomea

teacher.Teacherscannotteachusmanythingsat school,buttheydotheirbesttoteachushowtolearn.Thanks tothem,welearnknowledge.Andatthesametime,welearn howtoliveahappylife.Theyspendmosttimeontheir students.Theyaregreatinmyeyes. IhopetobeateacherbecauseIadmireteachers.Iknowit isnoteasytomakemydreamcometrue.ButIdecidetostudy harderfromnowon.Iamsuremydreamwillcometrue. 每个人都有他自己的梦想.一些人想成为医生.一些人希望成为科学家.我的梦想是成为一名老师. 老师不仅能在学校教给我们许多事情,而且他们尽力教会我们如何去学习.我们学到了知识.并且在同时,我们知道怎么幸福地生活.他们花费他们大多数时间在他们的学生身上.他们在我的眼里是伟大的. 我希望成为一名教师因为我钦佩老师.我知道实现我的梦想并不容易.但是我决定从现在开始更加努力地学习.我确信我的梦想一定能实现. 【篇三】 Yesterday,wehadadiscussion.Thetopicis.Whatismy dream?Everyonehashisdream.Somewanttobe teachers,otherswanttobescientists.Mydreamistobecomea doctor. Myfriendsaskedmewhy.Itoldthemmystory.WhenI

高中英语精品同步教案第课时：UnitCloning人教新课标选修_4

2014-2015学年高中英语（精品）同步教案第5课时：Unit 2 Cloning 人教新课标选修8） The Fifth Period Extensive reading and writing Teaching goals 教学目标 Integrating skills and writing. 1.Target language 目标语言 a. 重点词汇 debate, issue, competition, in charge, topic, argument, reply to, summarize, profitable, donate, existence, embryo, justified, transfer, ethically. b. 重点句子 I suggest that medical cloning is very important of curing serious illnesses that at present have no cure. I would like to suggest that medical cloning is not as simple as issue as my colleague claims. 2. Ability goals能力目标 Activate the students to show their opinions about the cloning. Enable the students to write an article on this debate. 3. Learning ability goals学能目标 Help the students learn how to organize a debate and how to write a short composition of the debate. Teaching important and difficult points教学重难点 How to organize the debating materials. How to write a short composition of the debate. How to write a report. Teaching methods教学方法 Task-based teaching method. Teaching aids教学准备 A computer and a projector. Teaching procedures & ways教学过程与方式 Step Ⅰ Revision Check the homework and ask the students to speak out their opinion about the medical cloning. Step Ⅱ Reading task T: Homework check is over. Please turn to page 58. Today we will make a debate. To begin with, I want to ask you what your opinion about debate is, have you seen any TV debates? S: Yeah, we have seen college students’ debate on TV. S2: I know in a debate there is one chairperson some-times two, four members each group, two leading debaters.

my dream英语作文参考范文

my dream英语作文参考范文导读：本文my dream英语作文参考范文，仅供参考，如果觉得很不错，欢迎点评和分享。【篇一】 Everyone has a dream，Everyone's dreams are great, happy and distant，My dream is that my family and friends can be happy .Although this is not realistic.We nevitably experience suffering and failure in the real life.But because of this,We become strong and courageous.although some dream is unrealistic,we have dream,we live significative!whether or not the dream come ture,we should hard work,Let this life without any regrets. 谁都有梦想。每一个人的梦想都是伟大的,幸福的,遥远的.我的梦想是身边的每一个人都能够开心幸福的生活。尽管这不太现实。毕竟在现实的生活里难免会经历坎坷与心酸，但正因为这样，我们才变得更加坚强和勇敢。虽然有些梦想是不切实际的，但因为心中有梦想，我们才生活得更有意义!不管梦想能不能够实现，我们都要努力奋斗，让今生无悔! 【篇二】 Everyone has his own dream.Some want to be doctors.Others hope to be scientists.My dream is to become a

高中英语人教版选修8Unit2CloningLanguagepoints教案(系列一)

选修八Unit2 Cloning Period2 Language points 词汇详解： 1. differ v. 不同；相异；使...相异常用结构： A differs from B in ...A与B在...方面不同 A differs with B about/on/over... A与B就...意见相左 Their house differs from mine in having no garage. 他们的房子与我的不同，区别在于他们的没有车库。 The two sides still differ with each other over the question of pay.双方在报酬的问题上仍各持己见。联想拓展 difference n. 不同之处 different adj. 不同的 make a difference to 对...产生变化；对什么有…影响 different from 与...不同，不同于练习：用适当的介词填空（原创） 1.The two squares differ colour but not size. 2.The husband differs the wife who is to take charge of the money. 3.It doesn’t make a difference me whether you are going to stay. 4.This is a different car the one I drove yesterday. 答案：1.in; in 2.with; on/about/over 3.to 4.from 2. undertake vt.（undertook;undertaken）着手;从事;承担；保证，答应常用结构： undertake sth. 着手/从事/承担某事

初中英语作文：My dream(我的梦想)

初中英语作文：My dream（我的梦想） A dream is to a man what wings are to a bird. With a dream in the deep heart's core， a man is spontaneously driven to hitch his wagon to a star. A dream is an inexhaustible source of energy that keeps our enthusiasm burning， and kindles our desire to enhance our spiritual cultivation，refine our character， and upgrade our quality of life. A life without a dream is like a bird with broken wings， confined to a cage and oblivious of what lies beyond the range of its vision. On the contrary， a man with a dream is like a warrior armed with ambition， foresight and gallantry，daring to step into an unknown domain to make a journey of adventure. It is dream that adds fullness， variety， and spice to our life and makes it worth living. I have a dream. It is a dream that is deeply rooted in human nature. I dream that one day people of all origins can live in harmony and peace without being discriminated against or persecuted. The bounty of the earth can be shared by every single human being. Mutual respect will guarantee the existence and continuation of the diversity of customs and cultures. Love， sympathy， and cooperation will alleviate the sufferings and disasters inflicted upon our fellow men. Respect for basic human rights will put an end to social injustices and evils. When my dream comes true，all men will be truly equal， happy， and free.